SDS-PAGE操作方法要点
SDS-PAGE教程
1 SDS-PAGE原理
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，是在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进SDS（十二烷基硫酸钠），SDS会与变性的多肽，并使蛋白带负电荷，由于多肽结合SDS的量几乎总是与多肽的分子量成正比而与其序列无关，因此SDS多肽复合物在丙稀酰胺凝胶电泳中的迁移率只与多肽的大小有关，在达到饱和的状态下，每克多肽可与1.4 g去污剂结合。当分子量在15 KDa 到200 KDa之间时，蛋白质的迁移率和分子量的对数呈线性关系，符合下式：log MW = K –bX，式中：MW为分子量，X为迁移率，k、b均为常数，若将已知分子量的标准蛋白质的迁移率对分子量对数作图，可获得一条标准曲线，未知蛋白质在相同条件下进行电泳，根据它的电泳迁移率即可在标准曲线上求得分子量。
SDS-PAGE [Laemmli法]
这种方法帖出来，大家是不是感觉非常的陌生呢？其实这种发方法很普遍，现在大部分的实验室都是用Laemmli法跑电泳的。如今实验室中用的最多的蛋白电泳是源于Laemmli于1970年发表在nature上的一篇文章中的方法，这篇文章很特别,不仅被引用的次数较多，而且该篇并不是专门阐述蛋白电泳方法上的提出和改进问题，而是对噬菌体头部包装过程中的蛋白进行分析过程中用到电泳分析方法而已，所以阐述如何操作的文字只有那么一小段（但相当经典），这是SDS-PAGE（不连续系统）的首次成功应用。现在我们在实验室进行的SDS-PAGE 试剂的配方仍然是沿用了它的数据,许多论文在描述其SDS-PAGE时引用Laemmli方法，目前常用的具有浓缩胶和分离胶的不连续SDS-PAGE的基础的确来自Laemmli方法，但也略有差别例如一些缓冲液的具体组成。你也许会恍然大悟：原来我们用的就是Laemmli！
SDS-PAGE各试剂配制方法
30%聚丙烯酰胺溶液-----30%（w/v）Acrylamide
各种组分名称体积(mL)或质量(g) 备注
30%Acr-Bis(29:1) 100 mL 实验室配制时用量(100 mL)
29% Acrylamide(丙烯酰胺) 29 g 29.2 g
1% BIS(N,N’-亚甲丙烯酰胺) 1 g 0.8 g
将29克丙烯酰胺和1克N,N’-亚甲丙烯酰胺溶于总体积为60ml温热（37℃左右）的去离子水中，充分搅拌溶解，补加水至终体积为100ml。0.45μm微孔滤膜过滤除菌和杂质，储于棕色瓶，4℃避光（用铝箔纸包扎起来）保存。严格核实pH不得超过7.0，因可以发生脱氨基反应是光催化或碱催化的。使用期不得超过两个月，隔几个月须重新配制。如有沉淀，可以过滤。
【保存条件】
4℃避光（用铝箔纸包扎起来）保存
【注意事项】
丙烯酰胺具有很强的神经毒性并可通过皮肤吸收，其作用具有累积性。称量丙烯酰胺和N,N’-亚甲丙烯酰胺时应戴手套和面具。可认为聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为它还可能含有少量未聚合材料。
1 M Tris-HCl（pH6.8）(浓缩胶buffer)
名称用量备注
称量12.1 g Tris碱溶于80 mL的去离子水，充分搅拌溶解，加约9 mL的浓HCl调节至所需要的pH 值，将溶液定容至100 mL，高温高压灭菌后，室温保存。应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris 溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。
【保存条件】
室温保存。
【注意事项】
对人体有刺激性，请注意适当防护。
1.5 M Tris-HCl（pH 8.8）(分离胶buffer)
称量18.17 g Tris碱溶于80 mL的去离子水中，充分搅拌溶解，加约3 mL浓HCl调节至所需要的pH 值，将溶液定容至100 mL，高温高压灭菌后，室温保存。
【保存条件】
室温保存
【注意事项】
应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。
10% 十二烷基硫酸钠SDS溶液-----10%(w/v)SDS
称取2 g高纯度的SDS置于100~200 mL烧杯中，加入约16 mL的去离子水，于68 ℃加热溶解，滴加浓盐酸调节pH至7.2，定容至20mL后，室温保存。
【保存条件】
室温保存
【注意事项】
对人体有害，请注意防护。
10% 过硫酸铵溶液-----10% (w/v) APS
【组分浓度】10% (w/v) 过硫酸铵(APS)
称取0.1 g过硫酸铵置于1.5 mL离心管，加1 mL去离子水吹打溶解，亦可以加倍，即称取1 g过硫酸铵，加入10 mL的去离子水后搅拌溶解。4 ℃保存。
【保存条件】
4℃保存
【注意事项】
10%过硫酸铵溶液在4℃保存时，可使用2周左右，超过期限会失去催化作用。
5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液----- 5×Tris-Glycine buffer （SDS-PAGE电泳缓冲液）
称取15.1 g Tris，94.0g甘氨酸（glycine），5.0gSDS，用800mL蒸馏水或去离子水溶解，充分搅拌溶解，定容至1000 mL，室温保存。得0.125 mol/L Tris-1.25 mol/L甘氨酸电极缓冲液。临用前稀释5倍。【保存条件】
室温保存，两年有效。
【注意事项】
配制好的电泳液使用时间不宜超过两周。
电泳缓冲液可以回收，回收后可再使用1-2次，但为了取得最佳的电泳效果，应使用新电泳液。
5×SDS-PAGE加样缓冲液----- 5×SDS-PAGE Loading Buffer
【组分浓度】0.25 M Tris-HCl (pH 6.8)；
10% (W/V)SDS；
0.5% (W/V) BPB(溴酚蓝)；
50% (V/V) 甘油；
5% (W/V) β-巯基乙醇(2-ME)或0.5 M DTT(二硫苏糖醇)
量取1.25 mL 1 M Tris-HCl（pH 6.8），0.5 g SDS，25 mg BPB，2.5 mL甘油，置于10 mL塑料离
心管中，加去离子水溶解后，定容至5 mL，小份（0.5 mL/份）分装，于室温保存。使用前将25 μL的2-ME 加入到每小份中。加入2-ME的Loading Buffer可在室温下保存一个月左右。
【保存条件】
-20℃保存，至少一年有效。
【注意事项】
SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(5X)中含少量DTT或β-巯基乙醇，有轻微刺激性气味，必须完全溶解后再使用。二者作用相似，但DTT 的刺激性和毒性都低于β-巯基乙醇，且粉末的稳定性也高于β-巯基乙醇。DTT 的最佳工作pH范围为7.1-8.0，但DTT价格略高一些。蛋白巯基还原实验DTT的常用工作浓度是1-10 mM。摘自Takara 商品目录--实验室常规试剂配制方法
TEMED原液直接使用
考马斯亮蓝R-250染色液
使用，可保存很长时间，但一般不超过6个月；（2）染色时间过长难以脱色，过短染色效果不佳；）
考马斯亮蓝染色脱色液
脱色（三个小时后应换次脱色液，再重新加入脱色液且约需脱色24小时，直到背景清晰为止）
（1）蒸馏水中冲洗2-3次
（2）7％冰乙酸固定
（3）7％冰乙酸10％乙醇83ml蒸馏水脱色
（4）7％冰乙酸保存（要检测脱色后的胶，则需保存于7％冰乙酸中）
蒸馏水冲洗→7％冰乙酸（关键步骤），10％乙醇脱色
脱色液：7％冰乙酸，10％乙醇，83ml蒸馏水
7％冰乙酸保存（蒸馏水冲洗后用7％冰乙酸保存且约二～四天后再照胶，条带更为清晰）。银氨染色用凝胶固定液（质谱用）
银氨染色用凝胶处理液
银氨染色用凝胶染色液
取上述试剂加入100 ~ 200 mL的试剂瓶中，均匀混合。该溶液应为无色透明状。如果氨水浓度过低时溶液会呈混浊状，此时应补加浓氨水直至透明。本染色液应现用现配，不宜保存。
银氨染色用显影液
SDS-PAGE凝胶配方
1)根据目的蛋白的分子量大小选择合适的凝胶浓度，再按照下面的表格配制SDS-PAGE的
分离胶(即下层胶)：
来源于《蛋白质技术手册》汪家政
每种浓度的变性胶的分离范围不是指能跑出哪个范围分子量的蛋白质，而是指在这个区间
内，蛋白质迁移率基本和分子量成正比，也就是线性关系，为了数据的可靠性，大家尽量根据这个来选择自己配胶的浓度。
注：如果配制非变性胶，参考上述配方，不加10%SDS即可配制成非变性PAGE胶。
1)按照如下表格配制SDS-PAGE的浓缩胶(也称堆积胶、积层胶或上层胶)：
TBST 缓冲液
每2L体积中含：
Western blot用的缓冲溶液。
1)抗体去除液
每50mL抗体去除液中含：
SDS-PAGE操作方法
1、20uL 收集液，加入5×样品缓冲液5ul，在80℃水浴锅中煮5min。按照上面配方制SDS-PAGE 凝胶，安装好电泳仪，在槽中加入电极缓冲液。
3、按一定顺序在加样孔中加入样品，根据SDS-PAGE 电泳玻璃板间隙厚度不同，选择加入样品量，一般0.75mm 间隙15 孔的上样量<10uL/孔,1mm 间隙10 孔的上样量<20ul/孔。上样量根据实际经验自己掌握。
4、打开电源将电压调到80v（一般15min 左右），待样品跑过压缩胶后将电压调到120v 至样品电泳到胶底部为止。
5、将凝胶小心取下放入容器中，加入染色液，用摇床摇2－3h
6、待条带清晰后倒出染色液，加入脱色液过夜
7、将脱色液倒掉，可以用Quality One，或者相应的成像系统拍照、分析、估算蛋白浓度。
SDS-PAGE胶的凝结速度受温度影响很大，随着温度的升高，凝结速度越来越快，温度降低则反之。所以，夏天时胶凝结的比较快，而冬天胶的凝结速度则变慢，甚至不能凝结，解决此类问题较可行的方法是：冬天在原配方的基础上加倍过硫酸铵和TEMED的使用量，可很好的解决胶凝结速度过慢的问题。
借鉴Tricine-SDS-PAGE中添加甘油或者尿素来提高分辨率的成功经验，在普通的SDS-PAGE 中加入约13%的甘油，同样可以提高分辨率，有效防止小分子量蛋白的弥散。只要把原来配方中的水换成60%的甘油，就可以了。
在分离胶中加尿素和甘油都可以，加上尿素和甘油改变胶的孔径！特别是对分离糖蛋白的时候很有用处！一方面可以把条带压窄，减少拖尾现象的产生,另一方面对分离小分子量的蛋白有好处!一般加的量在0.5－3g尿素/12ml分离胶！自己可以跑来实验一下你跑9KD分子量的蛋白，建议用tricine-sds-page电泳来跑！也可以在分离胶中加尿素！以我经验来看，加尿素会好于甘油！
电泳在二液槽中安放铂金丝电极；正极在下，负极在上。接通电源进行电泳，电场强度10伏/厘米左右，视室温高低而定。室温较高时宜用较低的电压以免发热过度影响分离。蛋白质向正极移动。待染料前沿移动至管底近处，停止电流。电泳时间为1-2小时。
加入染色液后，先放入微波炉里加热5-10秒，使染色液微热即可（千万不要加热太久，否则冰醋酸就挥发了）。然后放水平摇床上摇20分钟，最多半小时就染好了。脱色也很简单，不用脱色液，直接用去离子水，放微波炉里煮沸5分钟左右，然后将水倒掉，再换上新的去离子水煮，这样反复几次，就可以了。效果可能比正常的脱色稍差一点点，不如那样清楚，只要电泳时比平时多上1/5的样品就可以了，关键是这样省时省材料（用不着含甲醇和冰醋酸的脱色液）。方便快捷！放心，反复煮胶不会把胶煮坏的。
拍胶时的“黑十字”聚焦法！
很多人用相机的微距聚焦都无法使识别框变绿，其实你只需要在胶所在的平面划一个黑十字就可以很好的聚焦，尤其是western blot的图，直接在膜的边上划就可以聚焦SDSPAGE的话可以找个颜色深东西放在胶的边上就可以了，把镜头对准它。
SDS-PAGE注意事项
1、胶凝的快慢不在于TEMED多少，在于APS的量，APS提供自由基，TEMED帮助自由
基作用，是催化剂，对凝固速度影响不是太大，可以试试加大APS的量。
2、下层也就是阳极缓冲液的作用当然是导电，用普通TRIS缓冲液做阳极缓冲液，一样跑得好，阴极就不一样了，需要提供离子强度和SDS环境，而在电泳过程中，阴极缓冲液的一些离子损失，而且与样品接触，不适合再次使用。至于有些时候跑太大浓度的胶，因为药品，BUFFER配制过程的一些问题，导致会出现蛋白带无法电泳到分离胶的最下方，胶跑得难看情况比较多，一般来说，15%的胶已经能够跑出大约15 KDa左右的蛋白，对于普通SDS-PAGE已经几乎到了极限，还跑不出来的MARK带，就不必去追究商品的问题了。
3、做SDS-PAGE的时候，除了蛋白量上样一致，最好体积也一致，这样跑出来的胶各个泳道之间的band能做到一样宽，方便后面的比较，特别是WB。做法就是拿1X的上样缓冲液补全要加的样做到体积一致，否则跑出来会有的宽有的窄，特别是上样体积相差较大的。
SDS-PAGE问题汇总
Q：蛋白质条带为什么走到下面逐渐变宽发散？
回答：多数情况是因为小分子在胶里的运动不规律，这种情况常发生在高浓度胶或凝固不一致的胶里，你可以加大阴极的缓冲液浓度，可能会有点改善。
Q：在做蛋白表达的时候，包涵体的出现常常令大家头疼不已，现在给大家推荐盐离子染SDS-PAGE的方法，这种方法简单快速还干净，适合于切胶免疫的同学，具体操作就是把配好的0.5M的氯化钾放在冰箱预冷，然后加在胶上慢慢晃动，大约5分钟就可以看见你的蛋白条带，切胶回收后直接乳化免疫，不会有什么影响。如果无法识别，还可以再用实验室传统的方法染色！
Q：配胶缓冲液系统对电泳的影响？
A：在SDS－PAGE不连续电泳中，制胶缓冲液使用的是Tris－HCl缓冲系统，浓缩胶是pH6.7，分离胶pH8.9；而电泳缓冲液使用的Tris－甘氨酸缓冲系统。在浓缩胶中，其pH环境呈弱酸性，因此甘氨酸解离很少，其在电场的作用下，泳动效率低；而Cl离子却很高，两者之间形成导电性较低的区带，蛋白分子就介于二者之间泳动。由于导电性与电场强度成反比，这一区带便形成了较高的电压剃度，压着蛋白质分子聚集到一起，浓缩为一狭窄的区带。当样品进入分离胶后，由于胶中pH的增加，呈碱性，甘氨酸大量解离，泳动速率增加，直接紧随氯离子之后，同时由于分离胶孔径的缩小，在电场的作用下，蛋白分子根据其固有的带电性和分子大小进行分离。所以，pH对整个反应体系的影响是至关重要的，实验中在排除其他因素之后仍不能很好解决问题的情况，应首要考虑该因素。
Q：样品如何处理？
A：根据样品分离目的不同，主要有三种处理方法：还原SDS处理、非还原SDS处理、带有烷基化作用的还原SDS处理。1、还原SDS处理：在上样buffer中加入SDS和DTT（或β-巯基乙醇）后，蛋白质构象被解离，电荷被中和，形成SDS与蛋白相结合的分子，在电泳中，只根据分子量来分离。一般电泳均按这种方式处理，样品稀释适当浓度，加入上样Buffer，离心，沸水煮5min，再离心加样。2、带有烷基化作用的还原SDS处理：碘乙酸胺的烷基化作用可以很好的并经久牢固的保护SH基团，得到较窄的谱带；另碘乙酸胺可捕集
过量的DTT，而防止银染时的纹理现象。100ul样品缓冲液中10ul 20％的碘乙酸胺，并在室温保温30min。3、非还原SDS处理：生理体液、血清、尿素等样品，一般只用1％SDS沸水中煮3min，未加还原剂，因而蛋白折叠未被破坏，不可作为测定分子量来使用。
Q：SDS-PAGE电泳凝胶中各主要成分的作用？
A：聚丙烯酰胺的作用：丙烯酰胺与为蛋白质电泳提供载体，其凝固的好坏直接关系到电泳成功与否，与促凝剂及环境密切相关；制胶缓冲液：浓缩胶选择pH6.7，分离胶选择pH8.9，选择tris－HCl系统，具体作用后面介绍；TEMED与APS：促凝作用，加速聚丙烯酰胺的凝固；十二烷基硫酸钠（SDS）：阴离子去污剂，作用有四：去蛋白质电荷、解离蛋白质之间的氢键、取消蛋白分子内的疏水作用、去多肽折叠。
Q：提高SDS-PAGE电泳分辨率的途径？
A：1、聚丙烯酰胺的充分聚合，可提高凝胶的分辨率。建议做法：待凝胶在室温凝固后，可在室温下放置一段时间使用。忌即配即用或 4 ℃冰箱放置，前者易导致凝固不充分，后者可导致SDS结晶。一般凝胶可在室温下保存4天，SDS可水解聚丙烯酰胺。2、一般常用的有氨基黑、考马斯亮蓝、银染色三种染料，不同染料又各自不同的染色方法，具体可参照郭尧君编著的《蛋白质电泳技术手册》P82-103。
Q：“微笑”（两边翘起中间凹下）形带原因？
A：主要是由于凝胶的中间部分凝固不均匀所致，多出现于较厚的凝胶中。处理办法：待其充分凝固再作后续实验。
Q：“皱眉”（两边向下中间鼓起）形带原因？
A：主要出现在蛋白质垂直电泳槽中，一般是两板之间的底部间隙气泡未排除干净。处理办法：可在两板间加入适量缓冲液，以排除气泡。
Q：为什么带出现拖尾现象？
A：主要是样品融解效果不佳或分离胶浓度过大引起的。处理办法：加样前离心；选择适当的样品缓冲液，加适量样品促溶剂；电泳缓冲液时间过长，重新配制；降低凝胶浓度。
Q：为什么带出现纹理现象？
A：主要是样品不溶性颗粒引起的。处理办法：加样前离心；加适量样品促溶剂。
Q：什么是“鬼带”，如何处理？
A：“鬼带”就是在跑大分子构象复杂的蛋白质分子时，常会出现在泳道顶端（有时在浓缩胶中）的一些大分子未知条带或加样孔底部有沉淀，主要由于还原剂在加热的过程中被氧化而失去活性，致使原来被解离的蛋白质分子重新折叠结合和和亚基重新缔合，聚合成大分子，其分子量要比目标条带大，有时不能进入分离胶。但它却与目标条带有相同的免疫学活性，在WB反应中可见其能与目标条带对应的抗体作用。处理办法：在加热煮沸后，再添加适量的DTT或β-巯基乙醇，以补充不足的还原剂；或可加适量EDTA来阻止还原剂的氧化。
Q：为什么溴酚蓝不能起到指示作用？
A：我们在实验中常会遇到溴酚蓝已跑出板底，但蛋白质却还未跑下来的现象。主要与缓冲液和分离胶的浓度有关。处理办法：更换正确pH值的Buffer；降低分离胶的浓度。
Q：为什么电泳的条带很粗？
A：电泳中条带很粗是常见的事，主要是未浓缩好的原因。处理办法：适当增加浓缩胶的长度；保证浓缩胶贮液的pH正确（6.7）；适当降低电压；
Q：为什么电泳电压很高而电流却很低呢？
A：这种现象一般初学者易出现。比如电压50v以上，可电流却在5mA以下。主要是由于电泳槽没有正确装配，电流未形成通路。包括：a.内外槽装反；b.外槽液过少；c.电泳槽底部的绝缘体未去掉（比如倒胶用的橡胶皮）。处理办法：电泳槽正确装配即可。
Q：浓缩胶与分离胶断裂、板间有气泡对电泳有影响吗？
A：这主要出现在初学者中，一般对电泳不会有太大的影响。前者主要原因是拔梳子用力不均匀或过猛所致；后者是由于在解除制胶的夹子后，板未压紧而致空气进入引起的。
Q：凝胶时间不对，或慢或快，怎么回事？
A：通常胶在30min – 1h内凝。如果凝的太慢，可能是TEMED，APS剂量不够或者失效。APS应该现配现用，TEMED不稳定，易被氧化成黄色。如果凝的太快，可能是APS和TEMED 用量过多，此时胶太硬易裂，电泳时易烧胶。
Q：电泳时间比正常要长？
A：可能由于凝胶缓冲系统和电级缓冲系统的pH值选择错误，即缓冲系统的pH值和被分离物质的等电点差别太小，或缓冲系统的离子强度太高。
Q：分离胶加上后为什么要立即加水？
A：加入分离胶后，立即覆一层双蒸水，一是为了使分离胶界面保持水平，用水就可以把它压平，使蛋白质分子跑时在同一水平线上；二是阻止空气中的氧气对凝胶聚合的抑制作用。
——主要参考百度百科“聚丙烯酰氨凝胶电泳”
栈的类型定义与基本操作
循环队链的出队 bool Dequeue( CSQueue &q, QElemType &e ) { int front; if( q.length == 0 ) return false; front = ( q.rear + 1 - q.length + MAXQSIZE ) % MAXQSIZE; e = q.elem[ front ]; q.length --; return true; } 循环队链的入队 bool Enqueue( CSQueue &q, QElemType e ) { if( q.length == MAXQSIZE ) return false; q.rear = ( q.rear + 1 ) % MAXQSIZE; q.elem[ q.rear ] = e; q.length ++; return true; } 链队的入队 void Enqueue( LQueue &q, QElemType e ) { LQueuePtr p; p = new QNode; p->data = e; p->next = q.rear->next; q.rear->next = p; q.rear = p; } 链队的出队 bool Dequeue( LQueue &q, QElemType &e ) { LQueuePtr p; if( q.rear->next == q.rear ) return false; p = q.rear->next; e = p->next->data; q.rear->next = p->next; delete p; return true; } 顺序栈的类型定义与基本操作：
彩钢板的施工技术及操作要点
彩钢板的施工技术及操作要点 第一、彩钢板安装的固定方式有穿透式和暗扣隐蔽式两种。穿透式固定是屋面和墙面彩钢板安装的最常用方式，即用自攻螺钉或铆钉将彩板固定在支撑件（如檩条）上，穿透式固定分为波峰固定、波谷固定或他们的组合。暗扣隐蔽式固定是将与暗扣式彩板配套的特制暗扣先固定在支撑件（如檩条）上，彩板的母肋与暗扣的中心肋齿合的固定方法，一般用于屋面板的安装。 第二、彩板的侧向和端部搭接。安装每一块钢板时，应将其边搭接准确地放在前一块钢板上，并与前一块钢板夹紧，直到钢板的两端都固定为止。一种简单而有效的方法是用一对夹口钳分别夹住所搭接的钢板。钢板沿纵向就位时，其端部尤其是上端部需用钳子夹住搭边部分，这样可保证钢板一端的就位，并使一端的搭接也处于正确的位置，从而固定住钢板，在固定的过程中，夹钳始终应在纵向夹住钢板。在安装下一块钢板之前，每块钢板必须完全被固定住。固定必须始于钢板的中心，然后向两边伸展，最后固定钢板的搭接边。对于端部搭接，由于屋面和墙面外形板是用连续加工的方法制成的，因此可按运输条件所限制的长度供应钢板，通常不需要搭接，钢板长度就足以满足屋面铺设的需要。 出于对现场处理和运输考虑，必要时可用两块较短的钢板通过端部搭接来覆盖整个长度，每一列钢板的搭接顺序依次从底部到顶部，然后再放下一列。对使用穿透式固定法的屋面和墙面钢板端搭接需定位在支撑上。对坡度在 （ ） （ ）之间的屋面，钢板端部重迭长度至少为 ；坡度超过 （ ）时，重迭长度至少为 ，而且钢板端部重叠部分的中点应在支撑件的中心。墙面板最小重迭长度为 。
第三、自攻螺钉的选用。固定螺钉选用时应该按照结构的使用寿命选择固定件，而且特别注意外覆材料的寿命与指定的固定件寿命是否一致。同时注意钢檩条厚度不能超过螺钉的自钻能力。目前供应的螺丝可带有塑料头、不锈钢顶盖或涂有特殊的耐久保护层。另外，除暗扣固定用螺钉外，其他螺钉均带有防水垫圈，而且针对采光板和特殊风压下的情况均配有相应的专用垫圈。 第四、彩板的安装较易掌握，而一些细节的处理比较重要。对于屋面用彩板应该在屋顶及屋檐处将彩板进行相应的收边工作，其目的是为了更有效地阻止雨水进入屋面以内。 屋面外板在屋脊的地方，都可用收边工具将位于钢板终端肋条之间的底盘向上折。它用于所有坡度低于 （ ）屋面钢板的上端，以保证在泛水板或盖板下方由风吹入的水不会流入建筑之中。 收边操作可在钢板定位之前实施，也可在钢板安装之后实施，但后一种方法要在钢板的顶端留有足够的间隙（约 ），便于收边工具的操作。其具体操作方法是：把收边工具位于钢板终端底盘之上，尽快将工具滑于钢板之上，越里越好。用工具握住钢板终端，将底盘往上折，上折约 。如上所述，折弯每一底盘。当板被用在坡度低于 （ ）的屋面时，应将钢板下端的底盘端部稍微向下弯曲（呈唇状），可用同一收边工具来实现，这样可保证雨水顺着钢板终端被排出，并且不会因毛细或风力作用回流至平底盘的下边。 向下折边的操作必须在屋面钢板被固定以后才能进行，否则这项操作将会受到障碍。下折板的边端时，适当张开下撬工具的口，将工具夹住底盘端，尽量向里推。工
英雄联盟LOL新手教程攻略
1.首先明白游戏中的伤害类型 AP (魔法伤害)AD(物理伤害) 其他如真实伤害混合伤害等等。 2.当你开始玩一个英雄的时候首先仔细看看他的5个技能(包括被动)(其实需要加上召唤师技能) 在自己脑袋里面想想怎么组合技能能把效果最大化。举个简单例子火人( 被动是% 比掉伤害。理论上是 E Q(晕住)然后W 伤害比较大但你不必要最求极限不一定每次都能Q 中所以别连不上就不放技能了对吧。举火人例子不是教你怎么玩火人只是想告诉你仔细看你想玩英雄的技能然后自己组合技能把技能利益最大化 3.进游戏过后低端一般没有分路打野一说都是想走哪路走哪路但你得明白应该怎么分路合理最少大部分高端怎么分路 一般一个阵容应该包含 ADC辅助走下路(C;C ARRY)一般C是团队的灵魂物理远程持续输出比重大 APC走中路(和前面一样物理换成魔法)什么剑圣蛮子啥的别说C 了只能说AD别加C ! 上单(团队的主T) 打野(团队副T)为什么要这么分路因为下路两个保护小龙APC 一般需求等级和打野一起带动节奏上单一般需求很好的发育所以单线所以你拿到你想玩的英雄你就应该给他定一个位置觉得他合适打什么在去网站看看这英雄是打肉好还是打 C 好还是等等等当你按基本把大众套路打好了再自己调整自己的风格(我玩过AD 妖姬) 4. 你现在需要练习基本功也就是补刀走位意识 补刀(给自己定一个目标每场比赛都要让自己补刀最多(打野不考虑) 怎么补? 首先别一直去打一个小兵要等小兵快没血时你感觉你打一下他刚好死这样子你就可以打了多试下基本能掌握什么情况下能打死小兵别一直A 地板(一直打一个小兵) 要尽量做到补到没一个小兵这样子新手别人补10个刀你补40个刀钱的差距就出来了记住 S 是定住不动这样子你就不会一直A 小兵 A就是打你鼠标最近的那个英雄靠AS 加走位结合这样子你能补到更多兵所以一般30的人 ADC都会带上15的攻击符文这样子前期在塔下也可以补死小兵远程塔A 一下你A 一下近战塔A两下你A 一下 走位：当你多玩几把后慢慢适应其他英雄的技能这样子你能熟悉别人技能和自己技能这样子你就要算别人什么情况下会让你吃到他技能你什么情况能让别人吃到你技能多注
栈的基本操作与应用
实验报告 课程名称数据结构实验名称栈的基本操作与应用 姓名王灵慧专业班级软工18104 学号 201817040409 试验日期 2019-11-06试验地点E3-502指导老师邹汉斌成绩 一、实验目的 1．熟悉并能实现栈的定义和基本操作。 2．了解和掌握栈在递归和非递归算法的应用。 二、实验要求 1．进行栈的基本操作时要注意栈“后进先出”的特性。 2．编写完整程序完成下面的实验内容并上机运行。 3．整理并上交实验报告。 三、实验内容 1．编写程序任意输入栈长度和栈中的元素值，构造一个顺序栈，对其进行清空、销毁、入栈、出栈以及取栈顶元素操作。 2.已知函数t(n)=2*t(n/2)+n 其中t(0)=0，n为整数。编写程序实现： (1)计算t(n)的递归算法。 (2)分别用链式栈和顺序栈实现计算t(n)的非递归算法。 四、思考与提高 1．如果一个程序中要用到两个栈，为了不发生上溢错误，就必须给每个栈预先分配一个足够大的存储空间。若每个栈都预分配过大的存储空间，势必会造成系统空间紧张。如何解决这个问题？ 五、实验步骤（每个实验内容包含代码、输入、输出、错误分析）： 1、实验内容（1）： #include
手工锡焊的基本操作及技术要点
手工焊接培训教材
手工锡焊的基本操作及技术要点 ?锡焊基本条件 1?焊件可焊性 不是所有叫材料祁可以用锚焊实现连接的、只有一部分金属有犊好可輝性（严格的说应该是nr以错评的性炳?才能用锡焊连陽-般铜及其合金，金，银，锌，镍等具有较好可焊性，而铝，不锈钢，铸铁等可焊性很差，一般需采用特殊焊剂及方法才能锡焊。 2?焊料合格 曲镯挥料成分不舍规格戍朵朋趙林那会影响埠训喷Sb特别楚架屿菠成汗星*側如悴?他隔尊?叩使是°?001%的含量也会明显影响焊料润湿性和流动性，降低焊接质量。再高明的厨师也无法用劣质的原料加工岀美味佳肴，这个道理是显而易见的。 3?焊剂合适 却找不同的村昭要选用不同时炸剂*即使是同种村料.当漲用烬接工艺不同时也往往要用不同例如手匸烙拱烽接和谨e悍厉清洗与不清洗就需采用不同的焊剂。对手工锡焊而言，采用松香和活性松香能满足大部分电子产品装配要求。还要指出的是焊剂的量也是必须注意的， 过多，过少都不利于锡焊。 4?焊点设计合理 合理的那点JL何形狀，对保ilF锡却的啟彊节光世要.如图-（a）所示的接点由于铅锡料强度有限，很难保证焊点足够的强度，而图一（b）的接头设计则有很大改善。图二表示印制板上通孔安装元件引线与孔尺寸不同时对焊接质量的影响。 图?锡焊接点设计 4命雏 图二焊盘孔与引线间陳影响焊接质量 二.手工锡焊要点 1?掌握好加热时间 暢焊时可以采用不同的加热谨度，例如烙铁头形状不陞，用小烙铁焊大焊杵时我扪不轉不延长时间以满足锡料温度的要求.在大多数情况下
延长加热时间对电子产品装配都是有害的，这是因为 1)焊点的结合层由于长时间加热而超过合适的厚度引起焊点性能劣化。 ：2)印制板，塑料等材料受热过多会变形变质。 :3)元器件受热后性能变化甚至失效。 4)焊点表面由于焊剂挥发，失去保护而氧化。 琳论匕也保谏坤料润湿坤件的前提下时间越短越軒。 2.保持合适的温度 如采为了堀竝師热时何血采川必温烙饿埠校悍点.期会帯来対一方面的问题土焊矚岐屮的焊剂没有足魅的时间在被璋面上咂注『口过甲揮发矢效；焊料熔化速度过快影响焊剂作用的发挥；由于温度过高虽加热时间短也造成过热现象。 峥iih保持烙铁头在介越的监度范—般经验捷烙轻头貼度比焊料熔化温啜搖5°匸牧为适立. 理患的状斎足较低前沼度下缩刼加热时间.尽世这是J-ffitrir但在实际操作中我们可以通过拠作孑陆获得令人漓总的解决方陆" 3.用烙铁头对焊点施力是有害的 诒铁头把热駅槎给焊点主要卑摩加接触面积，用烙铁对焊点加力对加热是徒劳的。很多情况下会造成被焊件的损伤，例如电位器，开关，接插件的焊接点往往都是固定在塑料构件上，加力的结果容易造成原件失效。 三.锡焊操作要领 1.焊接操作姿势与卫生 焊剂加热挥发岀的化学物质对人体是有害的，如果操作时鼻子距离烙铁头太近，则很容易将有害气体吸入。一般烙铁离开鼻子的距离应至 少不小于30cm,通常以40cm时为宜。 电烙铁拿袪有三种’如图一所示。反握袪动柞稳定，氏时间操作不宜婕劳，适「丈功率烙铁的按作。正握法适于中等功率烙铁或带円头电* 铁的操作。一般在操作台上焊印制板等焊件时多采用握笔法。
英雄联盟新手入手技巧
作为一名新手,除了了解各英雄的技能之外,如果想要完整的打好一盘游戏,至少要学到以下的基本功攻略,作为游戏基本技巧普及篇,希望能够带给大家帮助。 一、补刀 基本中的基本,此类竞技游戏的标志性机制。无论你是一个大神,还是一个新手,都同样该注意这个东西。对新手玩家来说是最容易拉大差距的一个数据。我打刀锋,基本上40分钟就六神装,平均每场都在260+补刀。我朋友杀人跟我差不多,不到60的补刀。平均按一个小兵30算吧。200*30 6000,差不多两个大件的钱,差距就是这样来的。 补刀既然被称为基本功,当然练习也没有捷径,其实你不用很刻意的去练它,只需要在每场比赛的时候多用下心,一点点积累起来就行了。 下面告诉大家一些小技巧。近战对远程的补刀,如果你一直在前排等着补刀,无疑会被远程的平A消耗,此时你需要的是蹲在对方英雄攻击范围之外,然后看好一个小兵的血量,计算好路程与血量,只在最后一刀再往前走位。 当然,此时注意对面英雄的动向,一般情况下他会后退,因为他不知道你究竟是上来补刀还是要消耗他,如果他后退,你可以安全的补到最后一刀,然后退到安全距离,最多被平A一下,还算比较划算。如果他打算继续消耗你,而且可能会配合技能对你进行比较伤的消耗,这时候就后退,放弃这个补刀。基本上就是你上他退你就补,你上他身体亮黄边你就退就行了。 一般控兵线比较好的话兵线会推到己方塔下,我就接着说下塔下补刀吧,近战小兵被塔打两下,你可以补刀,远程小兵被塔打一下你可以用消耗低的技能补刀,比如泰隆和刀妹的Q。 再谈下基本的对线消耗吧,既然都在一个节奏上。 二、对线 不论技能的话,比如你跟对面都是没有技能的小兵,同样的基础同样的装备下的消耗也算作基本功。一般情况下是两个方法,第一,在对方补刀的同时利用普通攻击消耗。大家都知道攻击是有间隙的,他这一刀去补兵,你在同时A他,他反过来A你的时候你已经走了。类似这样的卡
SDS-PAGE电泳标准操作流程
SDS-PAG电泳标准操作规程（网上） 3. 程序: 端平齐。放于制胶架上夹紧，下端紧贴密封条。 3.1.2分离胶的配置 3.122 灌胶混匀后用移液枪将凝胶溶液沿玻棒小心注入到长、短玻璃板间的狭缝内（胶高度距样品模板 梳齿下缘约1cm）。 3.1 . 2.3液封在凝胶表面沿短玻板边缘轻轻加一层水以隔绝空气，使胶面平整。静置约30min观察胶面 变化，当看到水与凝固的胶面有折射率不同的界限时，表明胶已完全凝固，倒掉上层水，并用滤纸 吸干残留的水液。 3.1.3浓缩胶的配置 混匀后用移液枪将凝胶溶液注入到长、短玻璃板间的狭缝内（分离胶上方），轻轻加入样品模板梳，小心避免气泡的出现。约30分钟，聚合完全。 3.2.1安装电泳槽将制备好的凝胶板取下，小心拔下梳子。两块10%勺凝胶板分别插到U形橡胶框的两边凹 形槽中，可往上提起使凝胶板紧贴橡胶。将装好玻璃板的胶模框平放在仰放的贮槽框上，其下缘与 贮槽框下缘对齐，放入电泳槽内。倒入1X tris-gly 电泳缓冲液。 3.2.2 样品处理对于蛋白样品直接取80 pl的样品，依次加上20Q 5x buffer （加了B-巯基乙醇），混匀。 对于菌体或组织等固体样品，取少量样品加100ul 2x buffer （加了B-巯基乙醇）煮沸10分钟。 3.2.3 加样用移液枪取处理过的样品溶液10 p l，小心地依次加入到各凝胶凹形样品槽内，marker加 入到其中一个槽内，为区别两块板，marker可加在不同的孔槽中。 3.2.4电泳将电泳槽放置电泳仪上，接通电源，正负极对好。电压调至约150v保持恒压。待溴酚蓝标记移 动到凝胶底部时，关电源，把电泳缓冲液倒回瓶中。 3.2.5剥离胶把电泳槽取出，两块板拿下来，用刮片从长短玻片中间翘起，再把浓缩胶刮掉，取下。 3.3. 染色放于加有R250染色液的染色皿中，染液漫过胶即可，置于摇床上，转速约为45r/min，时间约1小时, 完成后染液倒掉并用水洗掉染液。 3.4. 脱色取出染色过的胶放于加有脱色液的染缸里，脱色液漫过胶即可，置于摇床上，转速约为45r/min，时间 约1小时，本底色脱净，条带清晰可见即可，完成后倒掉脱色液。 3.5. 拍照将脱色后的胶置于透明文件夹中，把胶上面的气泡赶出（用前也可用酒精棉球擦干净文件夹），放到 扫描仪上，拍照。 4. 注意事项 4.1 根据目的蛋白的大小选择合适的胶片浓度。一般为100KD-50KD选用10%交；50KD-30KD选用12%胶； 30KD-10KD选用15%交。4.2 要根据样品浓度来加样品溶解液。每加一个样品后换一支吸头或清洗吸头后再点另一个样品。4.3 制备聚丙烯酰胺凝胶时，倒胶后常漏出胶液，那是因为二块玻璃板与塑料条之间没封紧，留有空隙，所以这步要特别留心操作.4.4 电泳完毕撬板取凝胶时要小心细致不能把胶弄破。 4.5 电泳缓冲液可重复利用，如果胶上出现不正常痕迹，就要及时更换新液。 4.6 分离胶高度控制得当，确保 有大约1cm左右的浓缩胶空间。过长或过短均不能得到理想的电泳结果。 4.7 电泳染色液注意进行回收再利用， 一般可重复使用2-3次。4.8 AP和TEMED是催化剂，加入的量要合适，过少则凝胶聚合很慢甚至不聚合，过多则聚合过
顺序栈的基本操作讲解
遼穿紳範大學上机实验报告 学院:计算机与信息技术学院 专 业 ： 计算机科学与技术（师 范） 课程名称：数据结构 实验题目：顺序栈的基本操作 班级序号：师范1班 学号:201421012731 学生姓名：邓雪 指导教师：杨红颖 完成时间：2015年12月25号 一、实验目的： 1 ?熟悉掌握栈的定义、结构及性质； 2. 能够实现创建一个顺序栈，熟练实现入栈、出栈等栈的基本操作； 3?了解和掌握栈的应用。 二、实验环境： Microsoft Visual C++ 6.0
三、实验内容及要求： 栈是一种特殊的线性表，逻辑结构和线性表相同，只是其运算规则有更多的限制，故又称为受限的线性表。 建立顺序栈，实现如下功能： 1. 建立一个顺序栈 2. 输出栈 3. 进栈 4. 退栈 5. 取栈顶元素 6. 清空栈 7. 判断栈是否为空 进行栈的基本操作时要注意栈”后进先出”的特性。 四、概要设计： 1、通过循环，由键盘输入一串数据。创建并初始化一个顺序栈。 2、编写实现相关功能函数，完成子函数模块如下。 3、调用子函数，实现菜单调用功能，完成顺序表的相关操作
五、代码： #include
LOL新手入门教程(最新)
LOL新手入门教程.......................................................................... 游戏必备： 鼠标 键盘 完整的主机 显示器 完整客户端 Q号 你的脸 游戏操作： 鼠标控制移动跟方向 默认键- Q-技能1 W-技能2 E-技能3 R-技能4 D-召唤师技能1 F-召唤师技能2 Y-解锁视角 alt+鼠标操作-控制召唤物 鼠标滚轮-视角远近 G-小地图印记 V-撤退印记 B-回家 123456-物品快捷键 英雄： 在游戏里你扮演的是一位召唤师，你必须召唤英雄来为你战斗 物理攻击： 影响普通攻击伤害，影响小部分技能的额外效果（技能橙字括号部分） 法术强度： 影响大部分技能的额外效果（技能绿字括号部分） 护甲/魔抗穿透： 按照百分比或特定数额，在攻击时无视对方的物防/魔防 AD/AP： 物理伤害/法术伤害
T： TANK，负责吸引输出，负责消耗对方的技能 真实伤害： 独立存在的输出，输出数字不受对方魔防物防的限制 护甲： 根据护甲数值会按照百分比减少你收到的物理伤害，堆得越高，效果增加得越低。 魔抗： 与护甲一样，这是减魔法伤害的 唯一被动： 也就是说你即使拥有多个同样的物品也只能触发一个物品的这个被动技能，不能重叠（大天使、女神眼屎、魔宗之刃也不能重叠） 草丛： 除非你与对方躲在同一个草丛里，不然从外面看来草丛里的敌人跟陷阱都是隐形的（窗帘那就是草丛了） 野怪： 消灭之后有经验加成，金币加成，部分有BUFF加成 补兵： 给小兵最后一击，获取金币 推线： 让自己队伍的小兵更能在对方的半场给对方施加压力、为自己队伍的推塔做准备的击杀敌方小兵行为 塔： 防御塔，初期可以给予勇于冒犯的敌人大量伤害，后期就是个木桩。一般塔会将小兵作为优先打击对象，可你在塔的攻击范围内攻击敌方英雄，塔就会优先爆你菊花。 水晶： 躲在敌方第三层防御塔后面的建筑，击倒对方水晶可召唤出强大的超级小兵，帮助击倒对方的水晶枢纽 水晶枢纽： 家，这游戏玩的就是烧他全家打他妈妈，打了人家的家就赢了 偷塔： 在敌方全体与我方（全体-1）个队员激烈火拼的时候偷偷拆掉对方防御塔、水晶、水晶枢纽
数据结构栈的定义及基本操作介绍
北京理工大学珠海学院实验报告 ZHUHAI CAMPAUS OF BEIJING INSTITUTE OF TECHNOLOGY 班级软件工程3班学号 150202102309姓名郭荣栋 指导教师余俊杰成绩 实验题目栈的实现与应用实验时间 一、实验目的、意义 （1）理解栈的特点，掌握栈的定义和基本操作。 （2）掌握进栈、出栈、清空栈运算的实现方法。 （3）熟练掌握顺序栈的操作及应用。 二、实验内容及要求 1.定义顺序栈，完成栈的基本操作：建空栈、入栈、出栈、取栈顶元素（参见教材45页）。 2. 调用栈的基本操作，将输入的十进制数转换成十六进制数。 3. 调用栈的基本操作，实现表达式求值，如输入3*（7-2）#，得到结果15。 三、实验结果及分析 （所输入的数据及相应的运行结果，运行结果要有提示信息，运行结果采用截图方式给出。）
四、程序清单(包含注释) 1、2. #include
typedef int SElemType; typedef int Status; typedef struct{ SElemType *base; SElemType *top; int stacksize; }Sqstack; void StackTraverse(Sqstack S) { while (S.top != S.base) { cout << *(S.top-1) << endl; S.top--; } } Status InitStack(Sqstack &S){ S.base=(SElemType *)malloc(STACK_INIT_SIZE*sizeof(SElemType)); if(!S.base){ exit(OVERFLOW); }
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)实验原理和操作步骤
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)实 验原理和操作步骤 实验原理： SDS-PAGE是对蛋白质进行量化，比较及特性鉴定的一种经济、快速、而且可重复的方法。该法是依据混合蛋白的分子量不同来进行分离的。 SDS是一种去垢剂，可与蛋白质的疏水部分相结合，破坏其折叠结构，并使其广泛存在于一个广泛均一的溶液中。SDS蛋白质复合物的长度与其分子量成正比。在样品介质和凝胶中加入强还原剂和去污剂后，电荷因素可被忽略。蛋白亚基的迁移率取决于亚基分子量。 试剂和器材： 试剂：1. 5x样品缓冲液（10ml）:0.6ml 1mol/L的Tris-HCl(pH6.8),5ml 50%甘油，2ml 10%的SDS，0.5ml巯基乙醇，1ml 1%溴酚蓝，0.9ml蒸馏水。可在4℃保存数周，或在－20℃保存数月。 2. 凝胶贮液：在通风橱中，称取丙烯酰胺30g，甲叉双丙烯酰胺0.8g，加重蒸水溶解后，定容到100ml。过滤后置棕色瓶中，4℃保存，一般可放置1个月。 3. pH8.9分离胶缓冲液：Tris 36.3g ，加1mol/L HCl 48ml，
加重蒸水80ml使其溶解，调pH8.9，定容至100ml，4℃保存。 4. pH6.7浓缩胶缓冲液：Tris 5.98g ，加1mol/L HCl 48ml，加重蒸水80ml使其溶解，调pH 6.7，定容至100ml，4℃保存。 5. TEMED（四乙基乙二胺）原液 6.10%过硫酸铵（用重蒸水新鲜配制） 7. pH8.3 Tris-甘氨酸电极缓冲液：称取Tris 6.0g，甘氨酸28.8g，加蒸馏水约900ml，调pH8.3后，用蒸馏水定容至1000ml。置4℃保存，临用前稀释10倍。 8. 考马斯亮蓝G250染色液：称100mg考马斯亮蓝G250，溶于200ml蒸馏水中，慢慢加入7.5ml 70%的过氯酸，最后补足水到250ml，搅拌1小时，小孔滤纸过滤。 器材：电泳仪，电泳槽，水浴锅，摇床。 实验操作
用顺序结构表示栈并实现栈地各种基本操作
栈的顺序表示和实现 2.2基础实验 2.2.1实验目的 （1）掌握栈的顺序表示和实现 （2）掌握栈的链式表示和实现 （3）掌握队列的顺序表示和实现 （4）掌握队列的链式表示和实现 2.2.2实验内容 实验一：栈的顺序表示和实现 【实验内容与要求】 编写一个程序实现顺序栈的各种基本运算，并在此基础上设计一个主程序，完成如下功能: （1）初始化顺序栈 （2 ）插入元素 （3）删除栈顶元素 （4）取栈顶元素 （5）遍历顺序栈 （6）置空顺序栈 【知识要点】 栈的顺序存储结构简称为顺序栈，它是运算受限的顺序表。 对于顺序栈，入栈时，首先判断栈是否为满，栈满的条件为：p->top= =MAXNUM-1 ，栈满时，不能入栈;否则岀现空间溢岀，引起错误，这种现象称为上溢。 岀栈和读栈顶元素操作，先判栈是否为空，为空时不能操作，否则产生错误。通常栈空作为一种控制转移的条件。 注意： （1）顺序栈中元素用向量存放 （2）栈底位置是固定不变的，可设置在向量两端的任意一个端点 （3）栈顶位置是随着进栈和退栈操作而变化的，用一个整型量top （通常称top为栈顶指针）来指示当前栈顶位置 【实现提示】 /*定义顺序栈的存储结构*/
typedef struct { ElemType stack[MAXNUM]; int top; }SqStack; /*初始化顺序栈函数*/ void lnitStack(SqStack *p) {q=(SqStack*)malloc(sizeof(SqStack)/* 申请空间*/) /*入栈函数*/ void Push(SqStack *p,ElemType x) {if(p->top
机修钳工基本操作技能培训课件要点
机修钳工工艺 机修钳工基本操作技能 1划线 2錾削、锉削与锯削 3孔加工 4螺纹加工 5弯形与矫正 6铆接、粘接与锡 7刮削 8研磨 1划线 一、概述 划线是指在毛坯或工件上，用划线工具划出待加工部位的轮廓线或作为基准的点和线，这些点和线标明了工件某部分的形状、尺寸或特性，并确定了加工的尺寸界线。在机加工中，划线主要涉及下料、锉削、钻削及车削等加工工艺。 划线分平面划线和立体划线两种：只需要在工件一个表面上划线后即能明确表示加工界线的，称为平面划线(图3—1和图3—2)；需要在工件几个互成不同角度(通常是互相垂直)的表面上划线，才能明确表示加工界线的，称为立体划线(图3—3)。 划线的主要作用有： (1)确定工件的加工余量，使机械加工有明确的尺寸界线。 (2)便于复杂工件在机床上安装，可以按划线找正定位。
(3)能够及时发现和处理不合格的毛坯，避免加工后造成损失。 (4)采用借料划线可以使误差不大的毛坯得到补救，使加工后的零件仍能符合要求。划线是机械加工的重要工序之一，广泛用于单件和小批量生产。划线除要求划出线条清晰均匀外，最重要的是保证尺寸准确。划线精度一般为0．25～0.5 mm。 二、划线基准的选择 划线时，工件上用来确定其他点、线、面位置所依据的点、线、面称为划线基准。在零件图上，用来确定其他点、线、面位置的基准，称为设计基准。 划线应从划线基准开始。选择划线基准的基本原则是尽可能使划线基准和设计基准重合。 划线基准一般可选择以下3种类型： (1)以两个互相垂直的平面(或线)为基准(图3--4a)。 (2)以两条中心线为基准(图3--4b)。 (3)以一个平面和一条中心线为基准(图3--4c)。
英雄联盟教学之单排游戏手册第一章：一级战术 - 英雄联盟
英雄联盟教学之单排游戏手册第一章：一级战术 - 英雄联盟 单排游戏手册：一级战术 你曾经在输了一局游戏后反思“我哪里做错了”吗？很多时候你的错误是没能够做正确的事——没有导演你本可以导演的剧本制定你本可以制定的战术。依赖对手的失误往往是谨慎的选择，但大多数场次中必须铤而走险以确保胜利。做一名导演制定战术是打破僵局并滚雪球，或逆转局面赶超对手的关键因素。而一级战术则是使胜利天平向己方倾斜的绝佳方法——易于组织，单排使用风险相对较低(一旦你熟练以后)，并且效果拔群。 在我们讨论实战之前，我想提醒大家在一级所有人的伤害是差不多的，除了几个特例：例如一级学Q的琴瑟仙女娑娜，这个远程辅助能像ADC一样风筝你；你也应当关注靠近你的脆皮高伤害英雄(在双方其他因素等同时)；控制在以物理伤害为主的一级时可谓王牌，因为它会让你受到更多的普通攻击伤害，这在没有等级和装备作为保护时确实很痛。然而，组织程度是最重要的可变因素，如果一两个人被控制住，但他们的队友能迅速应对守护他们，控制效果就会被极大削弱且形势甚至能逆转。 无声息的入侵 无声息的入侵是指侵入并非敌方打野开局的buff并偷偷打掉。有两个理由会让你这么去做 ：(1)你想在buff数和经验值上领先对方打野以降低其存在感效果，(2)你想待在地图的某一边，以便在特定等级更容易地gank线上英雄。获得额外buff并且阻碍敌方打野发育是大有裨益的，在这里我只想说“去落井下石吧”。如果你能领先敌方打野好几级，你将很容易单挑获胜，所以继续给对面更多的反野吧。计划一次早期的gank相比而言较为微妙，从形势上来说这是可行的。但如果我是个需要到3级才能有效gank的打野，并且我希望早点gank特定线上的英雄(很可能由于我匹配局的本性使然)，我就没必要浪费时间在野区徘徊。这可能意味着我没法获得额外的buff而是被对面抢走，但这样gank风险非常低。
(完整版)SDS-PAGE蛋白电泳方法
SDS-PAGE 一. 实验原理 SDS 是一种阴离子表面活性剂，在蛋白质溶液里加入 SDS 和巯基乙醇后，巯基乙醇能使蛋白质分子中的二硫键还原， SDS 能使蛋白质的氢键、疏水键打开并结合到蛋白质分子上，形成蛋白质-SDS 复合物。在一定条件下，SDS 与大多数蛋白质的结合比例为 1.4:1。由于十二烷基磺酸根带负电，使各种蛋白质的SDS-复合物都带上相同密度的负电荷，它的量大大超过了蛋白质原有的电荷量，因而掩盖了不同种类蛋白质间原有的电荷差别。SDS与蛋白质结合后，还引起了蛋白质构象的改变。蛋白质-SDS复合物的流体力学和光学性质表明，它们在水溶液中的形状，近似于雪茄烟形的长椭圆棒，不同蛋白质的 SDS 复合物的短轴长度都一样，约为 1.8nm ，而长轴则随蛋白质的 Mr 成正比的变化。基于上述原因，蛋白质-SDS 复合物在凝胶电泳中的迁移率，不再受蛋白质原有电荷和形状的影响，而只与椭圆棒的长度有关，也就是蛋白质 Mr 的函数。 二. 试剂器材 30%凝胶贮液(100mL)：称取试剂Acr 29.2g和Bis 0.8g置于100mL烧杯中，向烧杯中加入约60mL双蒸水，充分搅拌溶解后加双蒸水定容至100mL，置于棕色瓶内4℃贮存，每过1-2个月应重新配制； 注意：丙稀酰胺具有很强的神经毒性，并可通过皮肤吸收，其作用有积累性，配制时应戴手套和口罩等。 分离胶缓冲液(1.5 mol/L Tris-HCl，pH 8.8，100mL)：称取Tris 18.2g 溶于约80mL 双蒸水，用6mol/L的HCl 调整pH值至8.8，加双蒸水定容到100mL，4℃ 贮存；堆积胶缓冲液(0.5 M Tris-HCl，pH 6.8，100mL)：称取Tris 6.0g溶于约80mL双蒸水，用1mol/L的HCl 调整pH值至6.8，加双蒸水定容到100mL，4℃ 贮存；
栈和队列的基本操作实现及其应用
实验二栈和队列的基本操作实现及其应用 一_一、实验目的 1、熟练掌握栈和队列的基本操作在两种存储结构上的实现。 一_二、实验内容 题目一、试写一个算法，判断依次读入的一个以@为结束符的字符序列，是否为回文。所谓“回文“是指正向读和反向读都一样的一字符串,如“321123”或“ableelba”。 相关常量及结构定义： #define STACK_INIT_SIZE 100 #define STACKINCREMENT 10 typedef int SElemType; typedef struct SqStack { SElemType *base; SElemType *top; int stacksize; }SqStack; 设计相关函数声明： 判断函数：int IsReverse() 栈：int InitStack(SqStack &S )
int Push(SqStack &S, SElemType e ) int Pop(SqStack &S,SElemType &e) int StackEmpty(s) 一_三、数据结构与核心算法的设计描述 1、初始化栈 /* 函数功能：对栈进行初始化。参数：栈(SqStack S)。 成功初始化返回0,否则返回-1 */ int InitStack(SqStack &S) { S.base=(SElemType *)malloc(10*sizeof(SElemType)); if(!S.base) //判断有无申请到空间 return -1; //没有申请到内存,参数失败返回-1 S.top=S.base; S.stacksize=STACK_INIT_SIZE; S.base=new SElemType; return 0; } 2、判断栈是否是空 /*函数功能:判断栈是否为空。参数; 栈(SqStack S)。栈为空时返回-1,不为空返回0*/ int StackEmpty(SqStack S) { if(S.top==S.base) return -1; else return 0; } 3、入栈 /*函数功能:向栈中插入元素。参数; 栈(SqStack S),元素(SElemtype e)。成功插入返回0,否则返回-1 */ int Push(SqStack &S,SElemType e) { if(S.top-S.base>=S.stacksize) { S.base=(SElemType *)realloc(S.base,(S.stacksize+1) * sizeof(SElemType));
英雄联盟 - 攻略战术 打赢团战才是王道：团战的艺术 经典团战意识教学
英雄联盟 - 攻略战术打赢团战才是王道：团战的艺术经典 团战意识教学 一、什么时候开始抱团 最先开始的团战多半是在外一塔被推掉的时候开始的。因为外塔被推掉了，这时候兵线就会变得更长，如果把兵线推过去，并不适合带到二塔处，因为这样带线带太深了，这时候就可以选择去抱团了。 我们分情况来说： 上单：上单把对面的塔推掉以后，可以选择快速清一波兵线，然后去下路和小龙处，主动求团。这时候由于对面上单还被牵制上路，团战将会有很大的优势。 中单：中单把对面的塔推掉以后，就有很多选择。可以选择配合打野去上路游走一波，三人越塔强杀妥妥的，不过要注意对面打野的反蹲。也可以选择去下路Gank，推塔拿龙带节奏。 下单：下路是很小龙关联最大的一条路，如果下路打出优势，把对面的塔推掉以后，小龙是必须要拿的。节奏就可以选择配合中单三人去强推对面的中一塔，这时候对面中单一般是不太敢守的。 二、打团的时候该做什么？ 这个主要是视你的英雄定位而定。
对于兰博、发条、安妮这类大招流的影响，打团的时候最重要的就是找好位置施放一个完美的大招，造成大量的AOE伤害。这类英雄只要大招放的好，团战基本就赢了。 对于劫、男刀这样的刺客型英雄，打团的时候应该做的就是找准时机秒掉对面的C位，让对面的C位没有办法打出足够的输出，从而使己方赢得团战队的胜利。 对于剑圣、卡特、螳螂这样的收割型英雄，打团的时候最关键的就是找准切入时机。切入太早往往容易被对面针对秒掉。等对面技能的第一波技能放完，同时又差不多半血残血的时候，果断切入开始收割。 对于ADC来说，打团的时候最应该做的是就是找好输出环境，能打到谁就打谁，保证自己的生存，毕竟活着才能有输出。 对于德玛、大树、女坦这样的坦克英雄，自身比较肉，同时有一定的控制能力。打团的时候主要是承担前排抗伤害的任务。如果对方的AD发育的好，你可以试图粘着他不让他安心输出。如果己方ADC发育得的，你的任务就是保护己方的ADC，只要能保护它的输出环境，这波团基本就赢了。
实验三 栈的基本操作及应用
实验三栈的基本操作及应用 实验时间：第7周 实验目的：掌握栈的初始化、判空、出栈、入栈等基本操作 实验要求： 1．认真阅读和掌握教材上和本实验相关的算法。 2．上机将相关算法实现。 3．实现下面实验内容要求的功能，并输出程序的运行结果，结合程序进行分析。 实验内容： 利用栈的基本操作编程实现将任意一个十进制整数N转换为d进制整数。 算法提示： 1、定义栈的顺序存取结构（也可以用链栈） 2、分别定义栈的基本操作（初始化栈、判空、出栈、入栈等） 3、定义一个函数用来实现数制转换问题： 十进制整数N和d作为形参 初始化栈 只要N不为０重复做下列动作 将N％d入栈 N = N/d 只要栈不为空重复做下列动作 栈顶元素出栈 输出栈顶元素 注意：如果你完成上述任务还有时间，仔细分析、单步调试下面程序。目的有两个：一是消化、分析C++中的引用；二是练习使用VC中的调试器。 #include
{ a=8; } void main() { int x=1; //int &y=x; fun(x); //x=4; cout << x < S D S P A G E操作方法要点 IMB standardization office【IMB 5AB- IMBK 08- IMB 2C】 SDS-PAGE教程 1SDS-PAGE原理 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，是在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进SDS（十二烷基硫酸钠），SDS会与变性的多肽，并使蛋白带负电荷，由于多肽结合SDS的量几乎总是与多肽的分子量成正比而与其序列无关，因此SDS多肽复合物在丙稀酰胺凝胶电泳中的迁移率只与多肽的大小有关，在达到饱和的状态下，每克多肽可与去污剂结合。当分子量在15KDa到200KDa之间时，蛋白质的迁移率和分子量的对数呈线性关系，符合下式：logMW=K–bX，式中：MW为分子量，X为迁移率，k、b均为常数，若将已知分子量的标准蛋白质的迁移率对分子量对数作图，可获得一条标准曲线，未知蛋白质在相同条件下进行电泳，根据它的电泳迁移率即可在标准曲线上求得分子量。 SDS-PAGE[Laemmli法] 这种方法帖出来，大家是不是感觉非常的陌生呢？其实这种发方法很普遍，现在大部分的实验室都是用Laemmli法跑电泳的。如今实验室中用的最多的蛋白电泳是源于Laemmli于1970年发表在nature上的一篇文章中的方法，这篇文章很特别,不仅被引用的次数较多，而且该篇并不是专门阐述蛋白电泳方法上的提出和改进问题，而是对噬菌体头部包装过程中的蛋白进行分析过程中用到电泳分析方法而已，所以阐述如何操作的文字只有那么一小段（但相当经典），这是SDS-PAGE（不连续系统）的首次成功应用。现在我们在实验室进行的SDS-PAGE试剂的配方仍然是沿用了它的数据,许多论文在描述其SDS-PAGE时引用Laemmli方法，目前常用的具有浓缩胶和分离胶的不连续SDS-PAGE的基础的确来自Laemmli方法，但也略有差别例如一些缓冲液的具体组成。你也许会恍然大悟：原来我们用的就是Laemmli！ SDS-PAGE各试剂配制方法SDSPAGE操作方法要点
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