嗜肺军团菌致病诊断的研究进展

布鲁氏菌病

摘要】布鲁氏菌病是一种人畜共患病，生物分型较多，寄生宿主广泛，传播途径多种。进入2000年后，我国患病人数逐年增多，波及28个省市区，给社会和家庭带来沉重负担。发病原因较多，主要是人群布病知识缺乏，防范意识不足，防护措施不当，检疫、免疫力度不够。本文综述是有关布鲁氏菌病流行现状、发病原因及防治对策的最新进展。 【关键词】布鲁氏菌病;流行现况;发病原因;防治对策 The Research Progress in Terms of Prevalence, Incidence Reasonand Control Strategies of BrucellosisZHOU Yanbin, LIU Xiaolin(Department of Preventive Medicine of Liaoning Medical University, Jinzhou 121001 China)Abstract: The Brucella is one kind of disease which can be got by human and animals together. There are many biological subtypes and the parasitic hosts widespread with so many dissemination ways. After 2000, the population of getting Brucella increases year by year, which affects 28 provinces, cities and areas. It has brought the tremendous burden for the society and the family. The incidence reasons which can spread Brucella are various. The main reason is the lacking of knowledge, and people s protection consciousness is insufficiency. The protective measures are improper, and we lack effective quarantine and immunity. This article concerns present situation of Brucella, the incidence reason and the progress in prevention. Key words:Brucellosis; present situation; incidence reason; prevent-and-curable strategies 布鲁氏菌病(Brucellosis)简称布病，是由布鲁氏菌(Brucella)引起的一种人畜共患的传染变态反应性疾病。此病在世界170多个国家和地区存在人畜间布病流行，约占世界1/5～1/6的人受布病威胁，全世界布病患者约有500～600万人，每年造成的经济损失高达数十亿美元[1]。而且此病还对人类健康造成严重威胁。年新发病人数为50万[2]。 1886年英国军医Bruce在马尔他岛，从死于马尔他热的士兵脾脏中用显微镜看到了一种微小的细菌，1887年又进一步对死亡士兵的脾脏进行细菌培养，分离培养到一种微小细菌，证明在士兵中传播的这种不明热疾病是由该细菌引起，当时称为马尔他微球菌(Micrococcuss melitensis)[3]。自分离出第一株布鲁氏菌以来，在百余年过程中人们对布鲁氏菌的认识也逐渐深入，尤其近十年，由于现代免疫学和分子生物学等学科的发展，对布氏菌属内的奥秘也不断被揭示。我国在建国前对这种疾病几乎处于一无所知的状态。从20世纪50年代中期，我国才开始了有计划有组织地对人畜布病进行了调查及防治[4]。目前我国人畜间布病也波及28个省市，自治区，直辖市[5]。每个省市区的人畜中都有不同程度的存在和流行。 1 布鲁氏菌的病原学特点 1.1 布氏菌生物学特点布鲁氏菌分布不仅地区广，而且寄生的宿主也相当广泛。它们既可感染人和多种家畜，又可感染和寄生于60多种野生动物，布氏菌属细菌有6个种19

细胞内抗嗜肺军团菌药物有效浓度测定讲解

细胞内抗嗜肺军团菌药物有效浓度测定 【摘要】目的：探讨红霉素。环丙沙星。左氧氟沙星。莫西沙星4种抗菌药物对细胞内嗜肺军团菌的抗菌活性。方法：分别采用E-test法和有限稀释法 测定上述4种药物对嗜肺军团菌ATCC 33152的细胞外抗菌活性,再用噻唑蓝比 色法(MTT法)测定上述药物对嗜肺军团菌ATCC 33152的细胞内抗菌活性。结果：细胞外抗菌活性E-test法:红霉素0.047 μg/mL。环丙沙星0.38 μg/mL。左 氧氟沙星0.125 μg/mL。莫西沙星0.125 μg/mL;有限稀释法:红霉素0.125 μg/mL。环丙沙星0.03 μg/mL。左氧氟沙星0.016 μg/mL。莫西沙星0.016 μg/mL。4种药物的细胞内抗菌活性分别为:红霉素0.25 μg/mL。环丙沙星 0.016 μg/mL。左氧氟沙星0.016 μg/mL。莫西沙星0.004 μg/mL。结论： 氟喹诺酮类药物在U937细胞模型中对嗜肺军团菌ATCC 33152具有很强的细胞 内抗菌活性。其中莫西沙星的细胞内抗菌活性最强。MTT法是一种行之有效的 用于检测药物对细胞内嗜肺军团菌抗菌活性的方法,可同时检测并对比各种药物样本的细胞内抗菌活性。 【关键词】嗜肺军团菌; U937细胞; 抗菌活性 Abstract: Objective： To explore the intracellular antimicrobial activities of erythromycin, ciprofloxacin, levofloxacin, moxifloxacin against Legionella pneumophila. Methods： The minimum inhibition concentration (MIC) of each antibiotic was evaluated by E-test method and microdilution method respectively. The minimal extracellular concentration inhibiting intracellular multiplication (MIEC) of each antibiotic was evaluated by the MTT colorimetric assay system. Results： The MIC concentration for each drug by E-test method were: erythromycin, 0.047 μg/mL; ciprofloxacin, 0.38 μg/mL; levofloxacin, 0.125 μg/mL; moxifloxacin, 0.125 μg/mL, the MIC concentrations for each drug by microdilution method were: erythromycin, 0.125 μg/mL; ciprofloxacin, 0.03 μg/mL; levofloxacin, 0.016 μg/mL; moxifloxacin, 0.016 μg/mL. The MIEC concentration for each drug were: erythromycin, 0.25 μg/mL; ciprofloxacin, 0.016 μg/mL; levofloxacin, 0.016 μg/mL; moxifloxacin, 0.004 μg/mL. Conclusions： Fluoroquinolones have superior activity than erythromycin in U937 cells infected with L. pneumophila. Moxifloxacin is the most potent drug among the four tested antimicrobials. Our results indicated that the MTT assay system allows comparative and quantitative evaluations of the intracellular activities of antibiotics against L. pneumophila and efficient processing of a large number of samples. Key words: Legionella pneumophila; U937 cells; antimicrobial activities

布鲁氏菌病研究进展

布鲁氏菌病研究进展 【关键词】布鲁氏菌病，研究进展综述 布鲁氏菌病（Brucellosis，以下简称布病）是由布氏杆菌引起的一种人畜共患传染病，布氏杆菌侵入人体后可引起以长期发热、关节疼痛、肝脾肿大和慢性化为主要特征的机体变态反应性疾病。由于布病对人群健康、经济发展和国家安全都构成了严重的威胁，因此世界动物卫生组织将其列为B类法定传染病[1]中华人民共和国传染病防治法将其归为一类传染病[2]。尽管在许多发展中国家是一种地方病[3.4]，但是布病仍存在漏诊和漏报[5]。此外，由于布病是兽医发病率和死亡率的重要因素，这种疾病在发展中国家也可以引起经济损失[6]。随着分子生物学及免疫学技术的不断创新，使得人们对于布病及布鲁氏菌有了进一步的认识，并且在布鲁氏杆菌致病机制、诊断技术、治疗药物和疫苗的研究及流行病学的调查研究等方面进行了一些有意义的尝试和探索。现将布鲁氏菌病的研究现况综述如下。 1.布鲁氏菌病的病原生物学研究 布鲁氏杆菌是革兰氏阴性、无芽孢、不运动、不形成荚膜的球杆菌。微生物分类学家将布氏菌归为布鲁氏菌属，根据布鲁氏菌的致病性和宿主嗜性, 布鲁氏菌属分成8 个种: 羊种、牛种、猪种、犬种、海豚种、海豹种、沙林鼠种和绵羊种布鲁氏菌[7]。人类能被羊种、牛种、猪种布鲁氏菌感染, 偶尔被犬种、海豚种、海豹种布鲁氏菌感染. 在

不同种布鲁氏菌中, 羊种布鲁氏菌毒力最强。我国流行的主要是马尔他布氏杆菌、流产布氏杆菌、猪布氏杆菌三种布氏杆菌，其中马尔他布氏杆菌病最为多见。崔步云等人应用细菌基因组重复序列PCR(Rep- PCR)方法通过分析基因组间的差异来鉴定分型[ 8]。结果证明此方法不仅可以对布鲁菌株进行分型, 还可将典型和非典型布鲁菌进行鉴定和分型,弥补传统分类方法的不足。布鲁氏杆菌没有菌毛、质粒、粘附素和特定的分泌系统等经典的细菌独立致病因子，但其外层细胞膜中的脂多糖（LPS）和外膜蛋白（OMPs）与布病的毒力相关[9]。根据脂多糖是否含有O链，可将布鲁氏菌病分为光滑型和粗糙型，光滑型布鲁氏杆菌的O链含有多个抗原位点，目前认为是布鲁氏杆菌的重要的保护性抗原。有研究表明光滑型脂多糖在信号传导、基因调控、跨膜运输过程中所涉及的蛋白质及细菌可能是布鲁氏菌的致病因子[10]。目前国内外研究较多的外膜蛋白有OMP31、OMP25、OMP10和OMP36等[11.12]。 2.流行病学研究 50年代中期, 我国开始了有组织有计划的人畜布鲁氏菌病调查。布鲁氏菌病疫情大致可分为两个阶段: 90年代以前, 经过50~ 60年代末严重流行阶段后, 70~ 90年代初稳定下降。1993年后我国布鲁氏菌病疫情呈逐年上升趋势, 布鲁氏菌病爆发点从1993年的2个上升为1999年的145个, 新发病人数从329例到1996年的3366例, 1998以来一直维持3000例以上。2000~2004年我国布鲁菌发病率分别为0. 1713/10万、0. 2296/10万、0. 4111/10万、0. 4782/10万、0. 9043/10

军团菌肺炎诊断标准

军团菌肺炎诊断标准 军团菌肺炎是一种革兰阴性菌所致的、以肺炎为主要表现并涉及全身多种器官受损的疾病，它在非典型肺炎中是病情最重的一种，未经有效治疗者的病死率高达45%。如此之高的病死率确实让人害怕，所以在发现有这个病的“苗头”时要及时医治才行。那么，军团菌肺炎有哪些诊断标准呢？ 1、可有爆发性流行病史，也可散发 症状有乏力、头痛、肌痛，24~48小时后可出现高热(呈稽留热型)、寒战，咳嗽，咳脓性痰或血痰，并有胸痛，部分患者早期可有腹泻症状。严重病例有嗜睡、谵妄、昏迷和精神错乱，甚至呼吸衰竭、肾功衰竭或休克。 2、体征 呼吸增快、相对缓脉，肺部有湿啰音，病情进展后可有肺部实变体征。 3、胸部X线检查 多为单侧下叶斑片状阴影，逐渐发展为肺叶实变，偶有肺内空洞，可有胸腔积液征象。4、呼吸道分泌物、痰、血或胸水 经活性碳酵母浸液琼脂培养基(BCYE)或其他特殊培养基培养有嗜肺性军团杆菌生长。 5、呼吸道分泌物用直接免疫荧光法(DFA)检测 军团菌抗原阳性(用高度敏感的荧光抗血清或抗嗜肺军团杆菌单克隆抗体直接染色镜检，可见有25条以上发强烈荧光的细菌)。 6、血清抗体滴定度测定 （1）间接免疫荧光法(IFA)，如恢复期比急性期血清标本滴定度上升4倍并达l:128或滴定度在l:128以上； （2）试管凝集试验(TAT)，两份血清标本前后抗体滴定度上升4倍并达1:160或滴定度在1:160以上； （3）微量凝集试验，两份标本前后抗体滴定度上升4倍并达1:64或滴定度在l:64以上。凡具备以上1、2这两项，同时又具有4、5项，达到6项中任何一种血清抗体滴定度者，可确定诊断。 另外，要注意的是对IFA、TAT效价仅一次增高(IFA＞1:256，TAT＞1:300)，同时有临床及胸部X线炎症表现的病例，可考虑为可疑军团菌肺炎。

公共场所环境样品中嗜肺军团菌定量检验方法

公共场所环境样品中嗜肺军团菌定量检验方法 1 范围 本标准规定了公共场所空气、水、土等不同类别环境样品中嗜肺军团菌的定量检测方法。 本标准适用于公共场所环境样品中嗜肺军团菌的定量检测，其他环境样品中嗜肺军团菌的定量检测可参照执行。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 18204.3 公共场所卫生检验方法第3部分：空气微生物 GB/T 18204.5 公共场所卫生检验方法第5部分：集中空调通风系统 3 空气中嗜肺军团菌定量检测 3.1 原理 采用液体冲击法采样、叠氮溴乙锭（EMA）前处理结合定量聚合酶链反应(qPCR)方法定量检测室内空气和集中空调送风中存活的嗜肺军团菌。 3.2 仪器和设备 3.2.1 微生物气溶胶浓缩器：采样流量≥100L/min，3.0μm以上粒子的捕集效率≥80%（或浓缩比≥8）。 3.2.2 液体冲击式微生物气溶胶采样器：采样流量7L/min～15L/min，0.5μm以上粒子的捕集效率≥90%。 3.2.3 便携式冷藏箱。 3.2.4 冷冻离心机：温度4?C。 3.2.5 恒温水浴锅或金属浴：温度范围50?C～99?C。 3.2.6 荧光定量PCR仪：非耦合6色激发光片和6色检测滤光片通道，4°C–100°C温度范围。 3.2.7 卤素灯：500W。 3.2.8 涡旋震荡器：调速范围0~3000 rpm。 3.3 材料和试剂 3.3.1 酵母浸出粉。

3.3.2 蒸馏水。 3.3.3 EMA固体粉：5mg/管。 3.3.4 无核酸酶去离子水。 3.3.5 矿物油，用于减少气溶胶采样时的吸收液蒸发。 3.3.6 核酸提取试剂盒：DNA产量15～30μg，A260/A280在1.7～1.9之间。 3.3.7 引物：上游引物5’-GAAAATAAAGTAAAAGGGGAAGCC-3’； 下游引物5’-ATCAATCAGACGACCAGTGTATTC-3’。 3.3.8 探针：5’-FAM-AGGCGTTGTTGTATTGCCAAGTGGTT-TAMRA-3’。 3.3.9 标准品质粒。 3.3.10 荧光定量PCR反应体系。 3.3.11 离心管：1.5mL透明离心管和1.5mL棕色离心管。 3.3.12 离心管：15mL，50mL。 3.4 样品的采集 3.4.1 采样吸收液成分： 酵母浸出粉12 g 蒸馏水1000 mL 3.4.2 采样吸收液制法：将酵母浸出粉（3.3.1）12g加蒸馏水至1000mL，121 ℃下高压灭菌15 min，每20mL采样吸收液分装于灭菌后的50mL离心管（3.3.12）中备用。 3.4.3 采样点：室内空气按GB/T18204.3中6.4.1规定，集中空调送风按GB/T18204.5 中9.5.1规定。 3.4.4 将装有采样吸收液的离心管置于便携式冷藏箱（3.2.3）中送到现场，开始采样前将采样吸收液（3.4.2）20mL倒入微生物气溶胶采样器（3.2.2）中，然后用吸管加入矿物油（3.3.5）1滴~2滴。 3.4.5 将微生物气溶胶浓缩器（3.2.1）与微生物气溶胶采样器（3.2.2）连接，按照微生物气溶胶浓缩器和微生物气溶胶采样器的流量要求调整主流量和浓缩流量。 3.4.6 按浓缩器和采样器说明书操作，每个气溶胶样品采集空气量1m3~2m3；并记录环境温度、大气压力和总采气体积或采样流量、采样时间。 3.4.7 采集的样品倒入离心管置于便携式冷藏箱中避光保存，4h内送实验室检验。 3.5 样品处理方法与条件 3.5.1 样品的离心浓缩：将采集的气溶胶样品（3. 4.7）于4℃下8000×g离心20min（3.2.4），小心吸取弃去上清，剩余1mL左右沉淀全部转移至1.5mL的透明离心管中，再次4℃下8000×g离心20min，弃去上清，剩余0.5mL沉淀。

军团菌

军团菌：空调和热水系统中隐藏的危机 Marco & Mario Doninelli---Caleffi S.p.A 1．1军团菌的历史起源 军团菌（Legionella)一词来源于1976年7月发生在美国费城的一次越战退役军人聚会：参加聚会的约2000名士兵中221人感染了肺炎，其中34人死亡。经过调查发现了病源的起因为空调系统中滋生的一种前所未有的细菌。1978年国际上正式将这种病命名为军团菌病（Legionaire’s Disease）(注:Legionaire 为‘军团’的俚称)。 研究表明，军团菌的病原有近40种：其中的嗜肺军团杆菌（legionella pneumophilia）是最危险的一种，它会引起以肺炎为主的全身性疾病。 图1 水系统中存在的军团菌 1.2 军团菌的临床表现 军团菌从临床表现上分为以下两种：

?庞提亚克热（Pontiac Fever） 通常潜伏期在1-2天，临床表现为高烧、肌痛、头痛和肠胃不适（不经常）。 没有肺炎。这类军团菌的感染通常转化为普通感冒，可用抗生素药治疗，不用住院即可。 ?军团菌病 通常潜伏期在5-6天，临床表现为高烧、肌痛、头痛、胸痛、腹泻、干咳、肾衰竭、感觉迟钝、精神混乱、休克等。 这类感染与其它细菌性的或非典型的肺炎很难区别。 这种疾病如果发现太晚或治疗不及时，病死率高达45%。 1.3 军团菌的感染方式、发病机率等特征 军团菌通过呼吸道雾化吸入细菌水颗粒感染。饮用细菌感染的水或者人与人之间的接触不会感染。 中老年人以及有慢性心、肾、肺、血液病、吸烟、酗酒者易受感染，同样年龄和性别也是一大因素，图2为法国1998年调查的数据，表明男性年长者发病率更高。

军团菌病应急处置程序参考方案

军团菌病应急处置技术方案 1 总则 1.1 背景 军团菌病（Legionnaires's disease）是由军团病杆菌引起的以肺部感染为主，可合并肺外多个系统损害的一种呼吸道传染病。受感染的人和动物排出的军团杆菌污染环境、土壤和水源,成为本病的传染源,其中军团菌污染的各种水源为主要传染源。传染的主要途径是:经呼吸道传染，含军团杆菌的气溶胶通过空气由人直接吸入肺泡（空气传播），气溶胶是军团菌传播、传染的重要载体, 军团菌的另一个传播载体是原虫，它可在阿米巴原虫细胞内寄生、繁殖。各年龄段的人群普遍易感, 特别是患有慢性病的或有免疫功能低下的,以及长期吸烟者都是易感人群。军团菌病全年均可发生,而以6至10月份发病最多。流行主要因素：水温适当，静止的水源如大容积贮水器，空气水混合部分的水龙头及淋浴喷头处，温水游泳池，空调冷疑水，超声湿润器，呼吸医疗器械等，尤其空调的冷疑水中本菌的检出率最高, 空调系统的带菌是本病流行的主要原因。 该病首发于1976年美国的一次退伍军人聚会。此后，欧洲、澳洲等不同国家和地区相继发现军团菌病例。目前，多个国家已将军团菌肺炎为法定传染病，WHO也将其列入传染病报告范围。全球每年都有数起军团菌病暴发流行，其发病率约为12/10万，病死率约为20%。我国于1982年发现首例病人以来，在北京、天津、福建、、四川、广东、山东、哈尔滨、山西、河北、辽宁、新疆、上海等地都有病例发生的报告。作为全球国际化休闲城，目前，随着百姓生活水平的逐步提高，城中高层建筑的日益增多，空调广泛使用，热水管、喷水池、淋浴及加湿器等设备的普及，这些都有可能增加军团菌病的危险性。因而，军团菌病已作为一种“现代生活文明病”在不断威胁着人们的健康。 1.2 编制目的 通过实施本技术方案，构建预防为主、防治结合的军团菌病的应急处理机制，提高快速反应和应急处理能力，做到“早发现、早报告、早采样、早隔离、早治疗”，有效地控制疫情蔓延扩散，保障人民群众的身体健康和生命安全，确保社会稳定和经济发展。 1.3 编制依据 根据《中华人民共和国传染病防治法》、《突发公共卫生事件应急条例》、《省军团菌病应急处置技术方案》等法律法规，制定本方案。 1.4 适用范围 本方案适用于应对军团菌病暴发疫情的前期准备工作及暴发发生后的应急处理工作。 2 疫情分级标准及应急响应 2.1 疫情分级标准 根据军团菌病疫情波及的范围、危害程度、以及对社会、经济的影响，将疫情分为四级：Ⅰ级疫情（红色预警）、Ⅱ级疫情（橙色预警）、Ⅲ级疫情（黄色预警）、Ⅳ级疫情（蓝色预警），具体分级标准如下： Ⅰ级疫情（红色预警）：2周以内，一个社区、建筑工地、学校，商场，医院，宾馆等集体单位发生10例及以上军团菌病病例或死亡1 例及以上或多点同时暴发。 Ⅱ级疫情（橙色预警）：一个社区、建筑工地、学校，商场，医院，宾馆等集体单位发生5 例及以上军团菌病病例，无死亡病例。 Ⅲ级疫情（黄色预警）：一个社区、建筑工地、学校，商场，医院，宾馆等集体单位发生1例及以上军团菌病病例。 Ⅳ级疫情（蓝色预警）：省内其他城出现军团菌病病例。 2.2 分级应急响应 （1）依照疫情分类标准，确定疫情预警级别，采取不同的响应措施：

嗜肺军团菌的检测

深圳市空调冷却塔水军团菌污染状况调查 摘要:目的了解深圳市宾馆、大型写字楼、地铁等各类建筑物的空调冷却塔水军团菌污染状况。方法随机采集中央空调冷却塔水样品并进行细菌培养和鉴定，再以聚合酶链式反应（PCR）等方法加以验证。结果共采集水样28件，分离到1株军团菌，经鉴定为嗜肺军团菌Lp1型。结论深圳市中央空调冷却塔存在军团菌的污染，需引起重视，防止军团菌病发生。 关键词:军团菌;嗜肺军团菌;冷却塔;污染状况 Detection of Legionella pneumophila in cooling tower water of central air conditioning system in Shenzhen City.ZHANG Ran，CHEN Gui-bing，SHI Xiao-lu，et al.（Shenzhen Municipal Center for Disease Control and Prevention，Shenzhen518020，Guangdong，P.R.China） Abstract:Objective To investigate the contamination status of cooling water of central air conditioning syatem with Legionella pneumophila in in hotels，buildings and subways in Shenzhen City. Methods Cooling tower water samples from central air condi-tioning system were randomly taken，cultured and then Legionella pneumophilia was isolated.Pobymerase chain reaction（PCR）was used for confirmation of the differentiation. Results Twenty-eight cooling water samples were collected and a strain of Legionella pneumophilia serovar Lp1was isolated. Conclusion The water in cooling tower of central air conditioning system in Shenzhen City has been contaminated with Legionella pneumophilia and measures be taken for preventing infection with Legionella pneumophilia. Key words:Logionella;Leginella pneumophilia;Cooling tower;Contamination status 军团菌是引起军团菌病的一种急性呼吸道传染病的病原体，于1977年在美国首次发现并证实。现已分离到军团菌属（Legionella）共有42个种，64个血清型，其中与人类关系最为密切的是嗜肺军团菌，由它引起的肺炎，如未及时治疗，病死率很高［1］。空调机的冷却塔水、喷水池水、淋浴池和宾馆的养鱼池水，甚至游泳池水均是军团菌其生存定居的小环境，如果该小环境中的微型生物群落结构能与其构成共生关系，军团菌就可以大量繁殖，

公共场所嗜肺军团菌污染状况调查分析

公共场所嗜肺军团菌污染状况调查分析 ［摘要］目的应用PCR技术对奉贤地区部分公共场所空调冷却塔水及其他环境（淋浴设施等）进行军团菌污染状况调查。方法于2010年5月和10月，分别采集中央空调冷却塔水样品及环境样品用聚合酶链（PCR）对其进行嗜肺军团菌检测，同时用常规法进行分型鉴定。结果采集的125份样品中，PCR法检出嗜肺军团菌45份，阳性检出率为36%，水样检出率远高于环境（分别为67.19%和3.28%）。在检出的59株军团菌中共鉴定出6种不同菌型，其中LP1为重点菌型，占50.85%。且在同一样品中检出不同菌型有2株以上的占35.29%。结论奉贤地区中央空调冷却塔及环境中存在军团菌污染，需引起重视，以防止军团菌所致的疾病暴发或流行。 军团菌是一种革兰阴性杆菌，能引起急性呼吸道传染病[1]，军团菌已被发现存在40个种，60多个血清型。经流行病学调查研究，这种细菌存在于各种自然界水源以及空调水管道，供水系统等人工水源中，在引进空调冷却塔做冷却水时，随空调器把细菌散布于室内空气中，被人吸入而引发肺炎。 我国自1982年南京首次证实军团菌病例以来已有多起军团菌爆发流行［2］，上海在近几年内也从患者和环境中分离到军团菌［3］。而上海地区健康人血清抗体水平调查也证明军团菌早已存在，并对人群构成潜在威胁［4］。近年来从军团菌的流行可以看出军团菌对人类健康的威胁已达到不容忽视的程度，因此对该病的研究也越来越受到人们的重视。 目前用于军团菌检测的常规培养约7～10d，不仅花费大量时间和精力，还具有敏感性、特异性差的缺点，且操作复杂，易造成漏检和误检。分子生物学技术的发展为军团菌检测提供了新的契机，该课题应用聚合酶链（PCR）技术，检测环境中的军团菌，以分析奉贤地区军团菌的污染状况。 1．材料与方法 1.1 材料 1.1.1 实验菌株大肠埃希菌（A TCC25922）、肠炎沙门菌（ATCC13076）均购于美国典型微生物菌种中心保藏中心提供标准菌株。米克达德军团菌、杜莫夫军团菌由市疾控中心提供。 1.1.2 样品来源2010年分别在5月和10月以单纯随机抽样方式选取奉贤地区具有集中式中央空调设备的各大型超市，酒店共10家。以无菌方式采集空调冷却塔水于无菌广口瓶中，每件约200 ml（根据《公共场所集中空调通风系统卫生规范》），共采集64件。以沾湿生理盐水的棉签反复涂抹空调出风口以及酒店浴室莲蓬头出水口表面，剪去棉签接触手部位，将棉签置5 ml生理盐水中，共采集61件，采样后即送实验室检验。 1.1.3 培养基GVPC平板由柯玛嘉公司提供，血琼脂平板，各反应试剂由上海市疾病预防控制中心提供，均在有效期内使用。 1.1.4 诊断血清军团菌诊断血清由上海市疾病预防控制中心提供,均在有效期内使用。1.1.5 PCR扩增仪Techne Flexigene；全自动数码凝胶成像系统Tanon GIS-2010。 1.1.6 PCR试剂盒嗜肺军团菌（LP）PCR检测试剂由上海健益生物科技有限公司提供。 1.2 方法 1.2.1 分离培养鉴定样品经负压过滤后,剪碎放入蒸馏水中,混合振荡后吸取1毫升进行酸处理,静置5分钟后同时接种GVPC平板和血平板.36℃，5%CO2培养72 h后进行鉴定[5]。 1.2.2 PCR检测方法样品经负压过滤后,剪碎放入5 ml蒸馏水中，混合后取500 μl,12 000 rpm/min离心5 min,弃上清液，加100 μl DNA提取液入沉淀中，振荡混匀，置100℃水浴加热10 min,12 000 rpm/min离心5 min，保留上清液待用。取4 μl上清液加入26 μl PCR反应液中,同时做阳性对照。振荡混匀，将PCR反应管放入PCR扩增仪中。首先预变性94℃5 m

军团菌病范文

第一篇军团菌病:关于军团菌病，每个医生应该知晓的十件事情 据估计，每年美国约有8000-18000例住院治疗的病例。但是由于诊断检测不可用以及没有报告，还没有准确反映疾病发病率的数据。 作者蒋荣猛 来源北京也云感染论坛 军团菌病的诊断 哪些人需要检测军团菌病？ 门诊病人抗生素治疗无效者； 重症肺炎，特别是需要ICU治疗的病人； 免疫力低下的肺炎病人； 有旅行史（发病前2周内离开家旅行）； 怀疑医院相关感染时。 如何检测军团菌病 尿抗原检测和呼吸道分泌物培养是有效的检测方法； 灵敏度取决于标本采集的时间和质量以及实验室检测技术水平。 灵敏度和特异性 对军团菌感染可能病例获取呼吸道标本的重要性 从呼吸道分泌物、肺组织、胸水或正常消毒点分离军团菌仍然是重要的诊断方法，尽管尿抗原检测的特异性好，而且方便。调查军团菌暴发时，依赖临床和环境病原的分离。临床和环境分离的病原菌可用单克隆抗体和分子学技术进行比对。由于军团菌在环境中较易发现，临床分离对环境调查的解释是必要的。 军团菌的优先治疗 如果病人为军团菌病，参照IDSA最新社区获得性肺炎的治疗指南。

可选用的抗生素有 Azithromycin （Zithromax） Rifampin （Rifadin） Doxycycline （Doryx, Vibramycin） Ciprofloxacin （Cipro） Levofloxacin （Levaquin） Trimethoprim and sulfamethoxazole, TMP-SMZ （Bactrim,Septra） 如果病人为庞蒂亚克热，则不必使用抗生素治疗，通常在一周内完全恢复。 要询问病人发病前14天的旅行史 超过20%的病人发病和近期旅行史有关。由于低的发病率，旅行者中军团菌的暴发很难被检测出来，而且病人从暴发源回来后分散在各地。及时报告旅行相关病例有助于早期确认和控制已知来源的感染。 军团菌病的发病情况 据估计，每年美国约有8000-18000例住院治疗的病例。但是由于诊断检测不可用以及没有报告，还没有准确反映疾病发病率的数据。大多数报告的为散发病例。常见的有旅行相关暴发、社区暴发和医院和职业相关暴发。 军团菌病的来源 军团菌存在于自然界、淡水环境中，但它们的数量不足以引起感染。管道（饮水）供水系统、回旋池和冷却塔提供了军团菌传播的3个条件温度、瘀滞和雾化作用，因此，这些地方常常是暴发的来源。 军团菌病流行病学危险因素 近期离开家的旅行超过一晚； 暴露于回旋池； 近期修理或维护家里的水泵； 肾脏或肝功能衰竭；

军团菌病该如何治疗呢

军团菌病该如何治疗呢 军团杆菌可能大家都不太了解，它是需氧革兰氏阴性杆菌,以嗜肺军团菌最易致病，一旦感染军团菌，将会严重威胁身体健康或者性命。因此一旦感染要注意及时治疗，那么军团菌病怎么治疗呢?一起来了解一下吧。 军团菌病怎样治疗 1、抗菌素治疗 红霉素首选,轻症0.5g1次/6h口服,重症1.5～2g/d静滴。或用新型青霉素0.5g4次/d,连服4天;多黏菌素0.25g1次/12h,以后0.2g1次/日,或0.1g2次/d。疗程7~14天,免疫抑制或病情严重者,氧氟沙星0.4g1次/12h,环丙沙星0.5g1次/12h口服或0.4g1次/12h静滴。抗生素应用,免疫功能低下者应不少于3周,有肺脓肿者应延长至3～4周。 2、利福平 最初3-5天0.6g,2次/d,或连用红霉素有良好疗效。 3、对症治疗 可给予止咳,化痰等药物,有低血压、呼吸衰竭应吸氧并给予呼吸支持,原应用免疫抑制剂者应停用或减量,有肾上腺功能减退,必要时应用激素。 如何预防感染军团菌

军团菌肺炎的预防:医院、旅馆、建筑工地的获得性军团菌肺炎是防治工作中一个重要环节。环境及水源的监控是控制本病发生流行性的关键。要注意定时开窗通风,保持室内空气新鲜,通风时注意病人的保暖,避免冷空气直吹或对流;进入房间或车内打开空调后,最好过一刻钟以后再关闭门窗,这样可以有利于空调中的各种有害物质散发,减少对健康的危害。 军团菌病有哪些临床表现 1、肺炎型 潜伏期一般为2～10天,前驱症状为乏力、头痛、全身肌肉酸痛,于1～2天内突然发热,可达40℃以上,多呈稽留热。病程早期即可出现多系统受累症状。绝大多数患者有咳嗽,起初为干咳,半数患者转成非脓性黏稠痰或略带脓性痰,痰中常含少量血丝,个别可咯血。 少数患者有胸痛,呼吸困难较为多见。肺部可闻及细湿啰音。继之可出现明显肺实变体征。约25%有恶心、呕吐及腹泻等消化道症状,有的腹泻为惟一首发症状。神经症状多见于急性期,包括不同程度意识障碍、肌张力增强或阵颤、步态不稳等,可有暂时性肢体软瘫,无神经系统定位体征。多数病例体温于8～10天下降,肺炎等全身症状随之好转。但重症病例可发生心、肝、肾功能损害,甚至功能衰竭致死,亦可迁延并发肺脓肿等。 2、非肺炎型(庞蒂亚克热) 此型为该病菌感染的轻型,潜伏期为5～66小时,半数为36小时左右。发冷、发热起病,体温一般不超过39.5℃,伴头痛、肌痛等。呼

军团病的发生和预防

军团病的发生和预防军团病是什么？ 军团病（Legion Fever）听起来有点像电子游戏中的名字，却是现实生活中真实存在的疾病。它是由军团菌引起的一种以肺炎为主要表现的全身性疾病，经空气传播，由呼吸道进入人体后会出现上呼吸道感染及发热的症状，严重者可导致呼吸衰竭和肾衰竭。在1976年8月在美国费城召开的有5000多人参加的军团退伍军人会议上，与会者中突然流行起一种疾病，当时有221人发病，造成34人死亡，该疾病因而被命名为军团病，相应的病原菌也被称为军团菌。 尽管名字并不那么如雷贯耳，但军团病确实算得上是一种常见病，美国发现的病例最多，平均每年有逾2万例，我国于1982年在南京首次报告了军团病病例，随后各省市陆续有报告。目前全球五大洲数十个国家均有散发病例及暴发流行报告，许多国家已经把军团病列为国家法定传染病，制订了一系列相应的规定措施，我国将其列入14种新发传染病之一，世界卫生组织也已将其列入传染病报告范围。 军团菌是一类需氧革兰氏阴性杆菌，和沙门氏菌、志贺氏杆菌、致病大肠杆菌、金黄葡萄球菌等一样，是生活中较为常见的致病菌。军团菌广泛存在与天然淡水环境和人工水体中，目前人们已经发现了超过50种，3个亚群，70个血清型。其中会引起人类肺炎的约有20种，而最常见的一种是嗜肺军团菌（约占全部病例的80%）。

军团菌主要侵犯肺泡和细支气管。当其侵入体内后，首先与中性粒细胞和巨噬细胞黏附，并被吞噬。然而，进入胞质内的军团菌不仅不能被杀灭，反而增生繁殖，导致细胞破裂，细胞内的酶类及细胞毒因子被释放出来，损害肺组织。此外，军团菌还能产生和释放多种毒素引起肺的持续性损伤，并进入血流引起肺外器官和组织的病变。 军团病的症状主要分为三类：肺炎型军团菌病是以肺炎为主要临床表现的军团菌感染，大多数病患都是这一类，肺外综合征即感染从肺部播散至肺外其他系统，还有一种主要表现为急性发热的庞蒂亚克热。其中庞蒂亚克热通常症状较轻，在发展到一定程度后能自动停止、逐渐痊愈，无需特殊治疗。 虽然致死率不算低，但军团病并非无法治疗。治疗军团菌病首选大环内酯类或氟喹诺酮类，四环素类、利福平等也有效，青霉素类、氨基糖甙类、头孢菌素类对本病无明显疗效。同时，维持水和电解质的平衡、呼吸衰竭时人工呼吸器的应用、休克时血管活性药物和其他抗休克措施、急性肾功能衰竭时的透析疗法均为重要治疗措施。 而且军团菌通常不会在人与人之间传播，这对人类而言当然是一个好消息。军团菌通常是存在于空调冷却水等淡水中，以水雾、气溶胶的形式传播，人们是由于呼吸了被军团菌污染的水源散发的水雾而患病。只要做好环境卫生管理，就不必过度担心军团病的威胁。 如何控制军团病流行？

040嗜肺军团菌

HKCDC/JL-WJ-040 上海市虹口区疾病预防控制中心检验原始记录 （嗜肺军团菌） 样品编号：第页共页样品名称: 样号标记: 收样日期: 检验完成日期: 检验项目和检验依据： 嗜肺军团菌卫生部《公共场所集中空调通风系统检验卫生规范》2006.3（附录A） 设备：CO2培养箱（仪器编号：S/N 305529-461） 生物安全柜（仪器编号：S/N 102589-95） 环境温度（℃）: 环境湿度（%）: 检测结果及记录： 样品形状： 1 材料：GVPC选择性平板：有效期，BCYE平板：有效期， 血平板：有效期，军团菌分型血清：有效期 （法国生物梅里埃公司提供），血平板（科玛嘉制备）分型血清（SCDC制备） 2 方法与步骤： 2.1无菌方法将500ml水样全部通过μm滤膜，取下滤膜仔细剪碎，置入一 含15ml原水样的大试管中，涡旋震荡充分洗脱后，备用。 2.2酸处理：取5ml洗脱样品，用0.01mol/L HCL调PH至2.2，混匀后静置5分钟。 2.3热处理：取1ml洗脱样品置50℃水浴加热30min。 2.4取2.1洗脱样品，2.2酸处理样品，2.3热处理样品各0.1ml，置入GVPC平 板，用L型玻璃棒将其在琼脂表面推开。 2.5将上述接种好的GVPC平板置入36℃ 2.5% CO2含量的二氧化碳培养箱中（有 湿盘）培养，每日观察GVPC平板上有无可疑菌落生长。 3 培养结果： 3.1三天后GVPC平板若有表面光滑，整齐，灰白，灰蓝或紫色呈典型毛玻璃状， 在紫外光灯下，有荧光的可疑菌落，做革兰氏染色镜检。 3.2结果记录： 3.2.1平板培养每日可疑菌落观察记录（有无可疑菌落分别以“+”，“-”表示 测试人：复核人：审核人： 年月日年月日年月日

军团菌病常用治疗药物的敏感性研究

? 文献综述 ? 437 使组织致密度减轻、通透性增加、微循环改善，可抑制炎性反应，溶解渗出和坏死组织及水肿[6]。 糜蛋白酶水溶液在常温下极易分解破坏，约1h 开始失效[7] ，试验组冲洗液均现配现用，糜蛋白酶5mg （1mg 相当于800u ）溶于5mL 生理盐水，此浓度使糜蛋白酶发挥最佳作用[8] 。糜蛋白酶肌内注射偶可致过敏入性休克,国内外常用于眼科用药，一般不引起全身反应[9] 。本文试验组200例未见变态反应。 临床常用3%过氧化氢溶液和0.9%的生理盐水冲洗，3%过氧化氢溶液能够产生大量气泡，有清创、止血、灭菌、除臭等作用，是一种不稳定的强氧化剂，当接触到脓液，或任何含有过氧化氢酶的有机物体，可迅速释放出其本身容量10~20倍的氧[10]。新生氧具有温和的消毒作用，产生的气泡具有机械清洗作用，有利于清除血块和坏死组织，但由于作用弱，持续时间短，且易受有机物质的影响，对皮肤和粘膜有刺激作用等因素的限制，影响其疗效。 糜蛋白酶在局部应用后，冠周组织炎症得以改善，主要是α-糜蛋白酶的肽链内切酶起主要作用，能分解肽链溶解蛋白质，溶化纤维沉着及坏死组织。本研究显示，糜蛋白酶水溶液是治疗急性智齿冠周炎安全、可靠、疗效显著的局部用药。参考文献 [1] 邱蔚六.口腔颌面外科学[M].5版.北京:人民卫生出版社,2004: 134. [2] Kobayashi T,Ozone H.Chymoral for in ? ammatory diseases in the orodental area[J].Dental Outlook,1984,64(4):813-818. [3] Smolianko LE.A temperature assessment of the treatment of exacerbated chronic periodontitis with the immobilized proteinase preparation profezim[J].Stomatologiia,1992,(1):18-19. [4] 邱蔚六.口腔颌面外科学[M].5版.北京:人民卫生出版社,2004: 134. [5] 张艺川.糜蛋白酶临床应用进展[J].亚太传统医药,2007,3(7):94.[6] 蒋晓蓉,王华,赵玉芬,等.α-糜蛋白酶治疗牙周脓肿的临床观 察[J].口腔医学,2004,24(1):27. [7] 李丽媛.α-糜蛋白酶治疗化脓性伤口.铁道貌岸然医学,1995,23 (3):181. [8] 潘学田.中国药品实用手册[M].北京:石油出版社,2000:505.[9] 国家药盟委员会.临床用药须知[M].北京:化学工业出版社, 2000:595. [10] HO 席德尔.周金贵,谭世杰,金有豫译.应用药理学[M].北京:人民 卫生出版社,1985:575. 军团菌病常用治疗药物的敏感性研究 刘洋敏 胡朝晖 朱庆义* （广州金域医学检验中心，广东 广州 510330） 【摘要】嗜肺军团菌是引起人类军团病的重要病原体，治疗军团病的首选药物是红霉素。近年来，新大环内酯类抗生素及喹诺酮类抗生素被推荐用于军团病的治疗。本文就嗜肺军团菌对大环内酯类和喹诺酮类药物的抗菌机制、药代动力学及其敏感性做一简要概述。【关键词】军团菌；大环内酯类；喹诺酮类；药物敏感性 中图分类号：R516.9 文献标识码：A 文章编号：1671-8194（2012）10-0437-03 基金项目：国家科技重大专项（编号：2008ZX10004-006）；国家标准化委员会（编号：20081021-T-361）*通讯作者 军团菌（Legionella ）是一种兼性细胞内寄生菌，可在阿米巴原虫，人类巨噬细胞和肺泡上皮细胞内存活并繁殖。嗜肺军团菌（Legionella pneumophila ，Lp ）是引起军团菌肺炎又称社区获得性肺炎和医院获得性肺炎的重要病原菌[1] 。由于军团菌是在细胞内寄生繁殖，因此，抗生素需到达肺泡细胞内才能更好的杀灭细菌。彻底治疗军团菌病，需选用脂溶性强的抗生素才有效，这也是青霉素、头孢菌素等抗生素不被选用的主要原因。 红霉素作为大环内酯类抗生素代表，曾被用作军团菌病治疗的首选药物[2]。然而随着新一代大环内酯类抗生素以及喹诺酮类抗生素的出现而逐渐被取代[3]。Tano 等报道新大环内酯类及喹诺酮类抗生素对于抑制和杀灭细胞内军团菌效果更佳，且副作用较少[1,4]。大环内酯类抗生素是多种放线菌属的次级代谢产物，红霉素作为代表药物在1951年应用于临床，其后相继有20余种大环内酯类抗生素问世[5] 。新一代大环内酯类（罗红霉素、克拉霉素和阿奇霉素等）具有高效、长效、生物利用度好等优点，引起了世界各国医药界的重视。氟喹诺酮类是一种具有超广谱抗菌活性的药物，因其良好的药物动力学及药效学而被广泛用于治疗由细菌引起的呼吸道感染性疾病。喹诺酮类抗生素约占有1/5的抗菌药物市场[6]。近年来，喹诺酮类抗生素被用于治疗军团菌病，并且与红霉素、新一代大环内酯类抗生素及喹诺酮类抗生素在细胞内及细胞外对军团菌的作用及药效进作了分析比较[4,7,8]。1 杀菌作用机制 抗生素杀菌作用机制主要有4种：抑制细菌细胞壁的合成、影响细胞膜的通透性、干扰蛋白质的合成以及抑制核酸的转录和复制。由于军团菌的细胞内寄生特性，抗生素需到达肺泡细胞内才能更好的杀灭细菌，彻底治疗军团菌病。因此需选用脂溶性强的抗生素如大环内酯类、喹诺酮类和利福平等抗生素。1.1 大环内酯类抗生素抗菌机制 细菌为原核细胞，其核蛋白体为70S ，由30S 和50S 亚基组成，哺乳动物是真核细胞，其核蛋白体为80S ，由40S 与60S 亚基构成，因而抗菌药物对细菌的核蛋白体有高度的选择性毒性，而不影响哺乳动物的核蛋白体和蛋白质合成。大环内酯类抗生素可透过细胞膜直接进入菌体内与细菌70S 核糖体的50S 亚基结合[10,11]，结合的部位在核蛋白体