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中国藏猪ESR基因Pvu_位点多态性分析

中国藏猪ESR基因Pvu_位点多态性分析
中国藏猪ESR基因Pvu_位点多态性分析

收稿日期:2004212228

3国家重点基础研究发展规划项目(GZ000016103)/国家863计划(2001AA222241,2001AA213061)/国家杰出青年基金项目(3992502)资助33通讯作者

熊统安,男,1958年生,硕士,高级工程师.工作单位:华中农业大学动物科技学院,武汉430070

中国藏猪ESR 基因Pvu Ⅱ位点多态性分析3

熊统安1)朱猛进1)郭 宏1)

樊 斌1)

刘 榜1)余 梅1)赵书红1)强巴央宗2)

王志刚3)李 奎1)33

(1)华中农业大学动物科技学院,武汉430070;

2)

西藏大学农牧学院,林芝860000;

3)

农业部全国畜牧兽医总站畜禽牧草种质资源保存利用中心,北京100094)

摘要 采用PCR 2RFL P S 方法,对中国藏猪ESR 基因多态性进行了研究,并与太湖猪、金华猪、成华猪、内江猪、长白猪、大白猪等中外猪种的ESR 基因频率、基因型频率作了对比分析。结果表明藏猪有3种ESR 基因型,

ESR 等位基因之间的频率较其它猪种均衡,从而证明西藏猪选择压力较小,ESR 基因的分布处于原始的自然状

态。

关键词 藏猪;雌性激素受体(ESR )基因;多态性中图法分类号 S 828.2

中国养猪业自上世纪80年代以来,主要由于遗传改良的加速而得到较快发展。遗传改良的基本措施是以本地猪作母本,外来猪作父本,由此育成的新品种既保留了本地猪的适应性、抗病性、肉质鲜美等地方品种特点,又在体形外貌、背膘、肌肉等数量性状上得到了较大的遗传改良。但是,产仔数遗传进展不大。这可能是因为一方面产仔数遗传力低,一般只有0.1左右,另一方面产仔数作为数量性状是由许多微效基因及若干主效基因控制的缘故。以前人们对这些数量性状基因座(Q TL s )了解较少,因此只能沿用传统方法对家畜进行遗传改良。近年

来,猪的基因作图取得了较大进展,利用DNA 标记

识别数量性状基因座(Q TL s ),以及对主效Q TL s 进行定位都很方便。一些分子遗传实验技术的应用

使某些控制数量性状的主效基因的基因型之间的差异清晰地展现在研究者眼前,为控制生产性状的有利基因,特别是有利产仔数的基因的选择与组合开创了新的途径[1]。1994年,Rot hschild 等发现了梅

山猪ESR 基因是影响产仔数的主效基因或与主效基因紧密链锁的基因,并用Pv u Ⅱ限制性内切酶将

该基因分为AA 、BB 和AB 3种基因型,分析发现BB 基因型为产仔数有利基因型,分别比AA 型母猪总产仔数多产仔猪1.5头/胎,比AB 型总产仔数多产仔猪0.1头/胎[2]。至此,国内外学者纷纷就本国

猪种展开ESR 基因的调查与研究[3~7]。我国地方猪资源丰富,ESR 基因研究的报道陆续出现在相关刊物上,但关于中国藏猪的ESR 基因的研究却鲜为报道。笔者选用中国西藏猪进行研究,目的旨在初步探测ESR 基因A 与B 在这个几乎处于原始状态的藏猪群体中的分布情况,并与国内外猪种的ESR

基因频率、

基因型频率加以比较,了解其基本规律,为藏猪规模化生产开发制定繁殖计划,增加产仔数,进行分子标记辅助选择育种提供科学依据。1材料与方法1.1 

试验材料随机从西藏林芝地区藏民自养猪中抽取60头,从前腔静脉中采取血样,血样现场裂解[1]

,回实验室提取基因组DNA 。

1.2 

试验方法1)DNA 提取。采用苯酚—氯仿抽提法[1],TE 溶解,-20℃保存。

2)引物的合成。PCR 引物序列参照文献[3],引物由辽宁宝生物工程(大连)有限公司合成,引物序列为:ESR Forward Primer :

第24卷第5期2005年 10月华 中 农 业 大 学 学 报

Journal of Huazhong Agricultural University Vol.24 No.5Oct.2005,485~488

5’-CCT GT T T T TACA GT GACT T T TACA GA G -3’

ESR Reverse p rimer :

5’-CACT TCGA GGGTCA GTCCAA T TA G -3’

3)ESR 基因的扩增。PCR 反应体系总量为10

μL ,其中1μL 10×PCR Buffer ,每种浓度为10p mol/μL 的引物0.3μL ,0.3μL dN TP mix 10mmol/L ,0.1μL Taq DNA 聚合酶(5U/μL ),0.25μL DNA (50ng )/μL ,加dd H 2O 至10μL 。

PCR 反应条件:第1步95℃预变性5min ,第2

步94℃变性40s ,第3步退火57℃30s ,第4步72℃延伸30s ,重复第2至第4步34个循环,之后再72℃延伸8min ,最后降温至4℃保持3min 。PCR 扩增产物用2%的琼脂糖凝胶电泳检测,紫外检测仪观察分析并照像。

4)Pv u Ⅱ酶切与电泳检测。取3μL PCR 产物于EP 管中加入0.20μL Pv u Ⅱ(10U/μL ),酶切反应(缓冲液)Buffer 2.0μL ,dd H 2O 酶切4h 后即可上样检测。检测有2种方法,一是用4%的琼脂糖凝胶电泳,二是用8%聚丙烯酰胺凝胶电泳。前者用溴化乙锭(EB )显色,紫外检测仪观察并照像,后者银染显色,扫描或数码相机拍照,转入电脑、分析、判断基因型。

2

结果与分析

2.1

血样基因组DNA 的提取

经贝克曼DNA 检测仪测定血样DNA 含量,并用1%琼脂糖凝胶电泳检测,由图1可见—排光滑整齐的DNA 基因组条带

图1 模板DNA 的电泳结果

Fig.1 E lectrophore sis of the template DNA

2.2ESR 的PCR 扩增

以血样提取的DNA 为模板,PCR 扩增,用2%琼脂糖凝胶电泳分离到120bp 的ESR 基因的目的片段(见图2),与预测结果一致。2.3ESR 基因的PCR -PF LP

PCR -RFL P (polymorease chain reaction -re 2strictive f ragment lengt h polymorp hism )结果如图3和图4所示,经限制性内切酶Pv u Ⅱ识别与酶切位点(CA G C T G )酶切后出现多态性,基因型有3种,分别为BB 基因型(65bp +55bp/65bp +55

bp ),AA 基因型(120bp/120bp )和杂合基因型AB (120bp/65bp +55bp )

图2 藏猪ESR 基因PCR 产物的电泳结果

Fig.2 E lectrophoresis of the PCR product of

ESR gene in T ibet pigs

Marker :Gene Ruler 100bp DNA

ladders

图3藏猪ESR 基因的PCR 2RF LPs 琼脂糖凝胶电泳

Fig.3

PCR 2RF LPs detection of ESR gene of T ibet pigs in agaro se gel

泳道1、3、8为BB 纯合体Lane 1、3、8Homozygote BB 泳道2、11、12为AA 纯合体Lane 2、11、12Homozygote AA

泳道4、5、6、7、9、10、13、14为AB 杂合体

Lane 4、5、6、7、9、10、13、14Heterozygote AB

图4

藏猪ESR 基因的PCR -RF LPs 聚丙烯酰胺凝胶电泳

Fig.4

PCR -PF LPs detection of ESR gene of T ibet pigs in PAGE gel

M :marker lane

泳道2、3、12为AA 纯合体

Lane 2、3、12、Homozygote AA

泳道1、4、5、6、16、17、18、19为BB 纯合体

Lane 1、4、5、6、16、17、18、19Homozygote BB

泳道7、8、9、10、11、13、14、15为AB 杂合体

Lane 7、8、9、10、11、13、14、15Heterozygote AB

684 华中农业大学学报第24卷 

2.4 藏猪ESR基因频率与基因型频率

根据文献[2]中判断基因型的标准对电泳结果进行基因型判定,结果见表1。

表1藏猪ESR基因的基因频率和基因型频率分布1)

T able1The frequencies of genotype and allele of Tibet pig

ESR基因型ESR G enotype ESR等位基因ESR Allele

频率Frequency AA(13)

0.216

AB(32)

0.516

BB(17)

0.268

A

46.77

B

53.23

1)表中括号内数字为该基因型样本含量The figures in t he bracket s are t he number of t he sample

藏猪中出现3种基因型,其中AB型的频率最大,为0.516,BB型为0.268,AA型最小0.216,经基因平衡的适合性检验差异不显著(P>0.05)。

3讨 论

藏猪的ESR基因型AA、AB、BB频率分别为0.216、0.516和0.268,其等位基因A、B频率分别是0.4677和0.5323。与其它已发表的部分国内外猪种基因型及基因频率相比,藏猪的分布较为均衡(见表2)。

由表2可见,国外种猪B基因频率明显低于国内猪种,A基因频率则明显高于国内猪种。国内猪种除藏猪、民猪B基因频率分别为0.5323、0.3333以外,其它B基因频率均在0.60以上,而A基因频率藏猪为0.4677,较接近B基因频率0.5323,而民猪A基因频率高达0.6667远比B基因频率0.3333高,其它猪种的A基因频率均不足0.40。

藏猪ESR A、B基因频率如此接近,表明ESR A、B基因在群体中分布均匀,选择强度或压力较小,这与藏猪的饲养方式有关。西藏地处我国西南边陲,人称世界屋脊,特殊的地理环境使得这里的养猪经济落后于内地省份。据介绍[8],藏猪主要来自于藏民养殖户,养猪基本采用原始的放养方式,平时无人管理,一个星期或更长时间内在固定区域投一次饲料(目的是识别自己的猪)。藏猪是以四处采食野生植物和果实为生,活动范围没有限定,母猪发情时,交配完全是随机的,没有人为选配。长期自由交配导致遗传物质在群体内日趋平衡,这一点从ESR 基因A、B等位的频率与其它猪种的ESR基因A、B 等位的频率比较中可以看出。

藏猪肉质特别鲜美,适应高原气候,抗病力强,但由于养猪业落后,为市场提供的鲜猪肉数量有限。随着藏民生活水平日益提高,青藏铁路全线贯通,高

表2藏猪与其它猪种ESR基因的频率分布的比较T able2The comp arison of frequencies distributed of

ESR gene in Tibet pig and other pig breeds

品种

Breeds

ESR

基因型

Genotype

检出数

Number

频率

Frequency

基因

Allele

频率

Frequency

藏猪

Tibet

AA

BB

AB

13

17

32

0.216

0.268

0.516

A

B

0.4677

0.5323

成华猪[5]

Chenghua

AA

BB

AB

10

26

0.278

0.722

A

B

0.3611

0.6389

内江猪[5]

Neijiang

AA

BB

AB

3

23

36

0.048

0.371

0.581

A

B

0.3387

0.6613

太湖猪[5]

Taihu

AA

BB

AB

2

25

35

0.032

0.403

0.565

A

B

0.3145

0.6855

金华猪[6]

Jinhua

AA

BB

AB

4

85

56

0.0276

0.5862

0.3862

A

B

0.2207

0.7793

民猪[7]

Min

AA

BB

AB

16

4

16

0.444

0.112

0.444

A

B

0.6667

0.3333

杜洛克[8]

DuRoc

AA

BB

AB

25

2

9

0.6944

0.0556

0.2500

A

B

0.8194

0.1806

长白[8]

Landrace

AA

BB

AB

53

1

35

0.5955

0.0112

0.3933

A

B

0.7921

0.2079

大白猪[8]

Y orshire

AA

BB

AB

58

1

80

0.4173

0.0072

0.5755

A

B

0.7051

0.2949原特有风情为世人所认识,前去观光的国内外旅客必将日益增多,解决吃猪肉的问题是很迫切的。增加生猪数量最有效的途径之一是多产仔猪。ESR 基因是控制产仔数的主效基因之一,当然还有其它基因如FSHβ,PRL R等也是与产仔数等数量性状密切关联的基因。这些都有待于进一步研究。

参 考 文 献

1萨姆布鲁克丁,弗里奇E F,曼尼阿蒂斯T著.金冬雁.黎孟枫等译,分子克隆实验指南(第2版).北京:科学出版社,1992

2 Rot hschild M A X,J acobson C,Vaske D,et al.The estrogen receptor locus is associated wit h a major gene influencing litter size in pigs.Pro Natl Acad Sci USA,1994,93:201~205

3 Shot T H,Rot hschild M F,Sout hwood D G,et al.Effect of t he estrogen receptor locus on reproduction and production trait s in

784

 第5期熊统安等:中国西藏猪ESR基因PvuⅡ位点多态性分析 

four commercial pig lines.J Anim Sci,1997,75(12):3138~3142

4 李明渊,张 凯,李云伟等.中国地方猪种ESR基因Pv uⅡ多态性及其与产仔关系学的研究.四川农业大学学报,2003,21

(3):258~262

5 彭淑红,徐宁迎,孙万元等.金华猪雌激素受体基因的分布及其对头胎产仔数的影响.中国畜牧杂志,2004,40(3):30~31

6 Zhang X Z,Liu D,Pan Y C.Study on t he effect of ESR and

FSHβgenes on litter size in local Nort heast t hree pig breeds.

Journal of Nort heast Agricultural university(English version), 2003,10(1):49~54

7 兰旅涛,周利华,陈东军等.三个外种猪原始核心群ESR及FSHβ基因多态性检测.江西农业大学学报,2003,25(6):916~919

8 嘎 路.依托资源优势,大力保护开发藏猪资源.西藏畜牧兽医,2003,(1):52~55

Analysis of PvuⅡPolymorphisms on ESR Locus in Tibet Pigs

Xiong Tongan1)Zhu Mengjin1)Guo Hong1)Fan Bin1)Liu Bang1)Yu Mei1)

Zhao Shuhong1)Qiang Ba Yangzhong2)Wang Zhigang3)Li Kui1)

(1)College of A ni m al S cience and Technolog y,

H uaz hong A g ricult ural U ni versit y,W uhan430070,Chi na;

2)College of A g ricult ure an d A ni m al H usban d ry,Tibet Uni versit y,L i nz hi860000,Chi na;

3)Center of Preserv ation and Utili z ation of Germ pl asm Resource of A ni m al H usband ry an d

Forage Grass,N ational A ni m al H usband ry&V eteri nary S ervice,B ei j i ng100094,Chi na)

Abstract The Tibet pig breed is one of t he Chinese indigenous breeds,which mainly dist ributes a2 round on Tibet2Qing Plateau.In present st udy,t he pop ulation randomly from Tibet pig was genotyped for identification of t heir estrogen receptor locus(ESR)polymorp hisms wit h t he PCR2RFL Ps,and com2 parision of ESR polymorp hisms was made among Taihu,Jinhua,Chenghua,Neijiang,Landrace and Y orkshire pigs as well.The result s showed t hat t he dist ribution of genotypes in Tibet pig breed was more balanced t han t hat in ot her pig breeds,suggesting t hat t he Tibet pig breed has endured smaller se2 lection p ressure in t he wild nat ural environment.

K ey w ords Tibet pig;ESR;polymorp hism

(责任编辑:边书京) 884 华中农业大学学报第24卷 

基因多态性分析

. 人基因多态性分析 一、实验目的 1. 了解基因多态性在阐明人体对疾病、毒物的易感性与耐受性、疾病临床表现的多样性以及对药物治疗的反应性中的重要作用。 2. 了解分析基因多态性的基本原理和研究方法。 二、实验原理 基因多态性(gene polymorphism)是指在一个生物群体中,同时存在两种及以上的变异型或基因型或等位基因,也称为遗传多态性(genetic polymorphism)。人类基因多态性对于阐明人体对疾病的易感性、毒物的耐受性、药物代谢差异及遗传性疾病的分子机制有重大意义;与致病基因连锁的多态性位点可作为遗传病的诊断标记,并为分离克隆致病基因提供依据;病因未知的疾病与候选基因多态性的相关性分析,可用于辅助筛选致病易感基因。 聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(polymerase chain reaction—Restriction Fragment Length Polymorphism,PCR-RFLP)分析是一种常用的DNA分子标记。原理是通过PCR扩增获得目的基因。若目的基因存在等位变异(多态性),且变异正好发生在某种限制性内切酶识别位点上,使酶切位点增加或者消失,则酶切结果就会产生大小不同的片段,即片段长度多态性,再利用琼脂糖凝胶电泳分离,可呈现出多态性电泳图谱。若将患者与正常的多态性图谱比较,可确定是否变异。应用PCR-RFLP,可检测某一致病基因已知的点突变,进行直接基因诊断,也可以此为遗传标记进行连锁分析进行间接基因诊断。 三、器材与试剂 1. 器材 ⑴离心机。 ⑵DNA扩增仪。 ⑶电泳仪。 ⑷水平电泳槽。 ⑸紫外检测仪。 ⑹移液器。 2. 试剂 . . ⑴口腔拭子DNA抽提试剂盒。 ⑵琼脂糖。 ⑶1×TAE电泳缓冲液:980ml蒸馏水中加入50×TAE母液20ml。 ⑷50×TAE母液:Tris 121g,0.5M EDTA(pH8.0)50ml,冰醋酸28.55ml,定容至500ml。

ALDH基因多态性检测

ALDH2基因多态性检测 项目简介:ALDH ( aldehyde dehydrogenase gene ) 人类乙醛脱氢酶,是一种四 联体蛋白,催化乙醛和其他脂肪族醛氧化。目前已发现ALDH 有19 种同工酶,主要有ALDH1~4 四种,其中ALDH2最为重要。在肝和胃中具有很高的表达量,是乙醇代谢途径中最重要的酶之一。ALDH2基因位于人类第12号染色体,由于ALDH2 基因存在G1510A 多态性,导致氨基酸序列第487位上的谷氨酸被赖氨酸所替换( Glu487 Lys),其中具有催化活性的野生型称为G等位基因(ALDH2*1),催化能力失活的变异型称为 A 等位基因(ALDH2*2)。在亚洲的黄种人群中, ALDH2*2是频率最高且最重要的突变型。 临床用药医生应考虑的因素: ALDH2基因突变致乙醛脱氢酶活性下降引起的临床表现: 1、ALDH2与硝酸甘油治疗:硝酸甘油是治疗心绞痛的经典药物,研究发现硝酸甘油的舒血管作用是通过释放一氧化氮(NO)所介导。但临床上部分病人舌下含服硝酸甘油不能迅速有效地缓解心绞痛,使心肌严重缺血加重。近来发现, ALDH2与硝酸甘油转化为NO密

切相关。有研究表明,ALDH2*1基因型的患者硝酸甘油治疗心绞痛的疗效明显优于ALDH2*2患者,且前者迅速起效率也明显高于后者。 2、ALDH2与酒精性疾病:乙醛脱氢酶( aldehyde dehydrogenase, ALDH)和乙醇脱氢酶( alcohol dehydrogenase, ADH) 在人体内共同组成了人乙醇脱氢酶系, 负责催化人体的乙醇分解代谢。ALDH2在肝和胃中具有很高的表达量,是乙醇代谢途径中最重要的酶之一。研究发现,突变型基因ALDH2*2的存在能导致ALDH2活力的严重缺失,并与过度饮酒导致的酒精依赖、酒精性中毒、酒精性肝病、消化道癌症等疾病之间存在深刻的联系。过度的饮酒行为,不仅使ALDH2*2 携带者对酒精产生依赖,还可能引起肝癌等的酒精性肝病(alcoholic liver disease,ALD)。ALD是长期、大量饮酒所引起的肝脏病变,已成为现代社会的主要健康隐忧之一。研究显示,携带ALDH2 变异基因型者大量饮酒将显著增加患肝癌的危险性。虽然摄入人体的乙醇有90 %以上是在肝脏内完成代谢过程的,但其在摄入过程中与消化道上皮细胞的直接接触也不容忽视。在饮酒人群中,尤其是重度饮酒者,由于其上消化道长期地与大量酒精直接接触,该区域出现癌变(食道癌、口咽癌等)的几率较高。研究发现,ALDH2*2突变与饮酒人群患消化道癌的风险之间具有明显的联系。此外,ALDH2*2显性突变与胃癌的易感性也存在一定的联系。由此可见,ALDH2*2突变是增加区域性癌化几率的重要因素之一。 ALDH2基因多态性检测标本采集及出报告时间:病人抽静脉血2ml(用 EDTA-K2抗凝)送检验科分子生物诊断室,4个工作日出报告。 电话:8801063 手机:余宗涛65327 高波 64444 ALDH2基因多态性检测临床意义: 1、指导临床硝酸甘油的个体化差异用药剂量:虽然硝酸甘油是心绞痛急性发作的常规首选药物,但该药的临床疗效常因人而异。中国汉族人群中,硝酸甘油含服无效的比例高达25%以上。复旦大学、瑞金医院、华山医院等的一项研究显示:部分国人服用硝酸甘油治疗心绞痛无效的原因为线粒体乙醛脱氢酶2(ALDH2)基因发生突变。ALDH2*2携带者服用硝酸甘油无效风险大幅增加;ALDH2*2携带者在中国约占30-50%,比重大;建议患者在使用硝酸甘油前进行ALDH2基因检测,ALDH2*2携带者建议慎用或不用硝酸甘油,改用其它药物。 2、ALDH2与酒精代谢:①ALDH2异常的饮酒者与正常人群相比,其发生肝癌的风险是正常人的3倍以上;②乙肝病毒携带者,如果又正好是ALDH2异常,其饮酒发生肝癌的危险性将升高52.17倍;③持续的过量饮酒导致肾的代谢压力过大,残留的酒精附着在肾细胞上,致使大量肾细胞处于休眠状态,会导致肾功能下降。 3、ALDH2与消化系统疾病:ALDH2异常的饮酒者与正常人群相比,其发生食道癌的风险是正常人的12.95倍,出现口腔癌的风险则为11.72倍。 4、ALDH2与心血管系统疾病:ALDH2异常的冠心病患者,发生心肌梗死的相对风险也为ALDH2正常的3.42倍。 5、ALDH2与内分泌系统疾病:ALDH2异常的人发生II型糖尿病的风险是正常人的6.08倍。

如何用PCR法检测基因的多态性

如何用PCR法检测基因的多态性 多态性(polymorphism)是指处于随机婚配的群体中,同一基因位点可存在2种以上的基因型。在人群中,个体间基因的核苷酸序列存在着差异性称为基因(DNA)的多态性(gene polymorphism)。这种多态性可以分为两类,即DNA 位点多态性(site polymorphism)和长度多态性(longth polymorphism)。 基因多态性的主要检测方法简述如下: 1.限制性片段长度多态性(Restriction Fragment Length Polymorphism,RFLP):由DNA 的多态性,致使DNA 分子的限制酶切位点及数目发生改变, 用限制酶切割基因组时, 钠 问 亢兔扛銎 蔚某ざ染筒煌 此 降南拗菩云 纬ざ榷嗵 裕 贾孪拗破 纬ざ确⑸ 谋涞拿盖形坏悖 殖莆 嗵 晕坏恪W钤缡怯肧outhern Blot/RFLP方法检测,后来采用聚合酶链反应(PCR)与限制酶酶切相结合的方法。现在多采用PCR-RFLP法进行研究基因的限制性片段长度多态性。 2.单链构象多态性(SSCP):是一种基于单链DNA构象差别的点突变检测方法。相同长度的单链DNA如果顺序不同,甚至单个碱基不同,就会形成不同的构象。在电泳时泳动的速度不同。将PCR产物经变性后,进行单链DNA凝胶电泳时,靶DNA中若发生单个碱基替换等改变时,就会出现泳动变位(mobility shift),多用于鉴定是否存在突变及诊断未知突变。 3.PCR-ASO探针法(PCR-allele specific oligonucleotide, ASO):即等位基因特异性寡核苷酸探针法。在PCR扩增DNA片段后,直接与相应的寡核苷酸探杂交,即可明确诊断是否有突变及突变是纯合子还是杂合子。其原理是:用PCR扩增后,产物进行斑点杂交或狭缝杂交,针对每种突变分别合成一对寡核苷酸片段作为探针,其中一个具有正常序列,另一个则具有突变碱基。突变碱基及对应的正常碱基匀位于寡核苷酸片段的中央,严格控制杂交及洗脱条件,使只有与探针序列完全互补的等位基因片段才显示杂交信号,而与探针中央碱基不同的等位基因片段不显示杂交信号,如果正常和突变探针都可杂交,说明突变基因是杂合子,如只有突变探针可以杂交,说明突变基因为纯合子,若不能与含有突变序列的寡核苷探针杂交,但能与相应的正常的寡核苷探针杂交,则表示受检者不存在这种突变基因。若与已知的突变基因的寡核苷探针匀不能杂交,提示可能为一种新的突变类型。 4. PCR-SSO法:SSO技术即是顺序特异寡核苷酸法(Sequence Specific Oligonucleotide, SSO)。原理是PCR基因片段扩增后利用序列特异性寡核苷酸探针,通过杂交的方法进行扩增片段的分析鉴定。探针与PCR产物在一定条件下杂交具有高度的特异性,严格遵循碱基互补的原则。探针可用放射性同位素

基因多态性的检测方法

基因多态性的检测方法 多态性(polymorphism)是指处于随机婚配的群体中,同一基因位点可存在2种以上的基因型。在人群中,个体间基因的核苷酸序列存在着差异性称为基因(DNA)的多态性(gene polymorphism)。这种多态性可以分为两类,即DNA位点多态性(site polymorphism)和长度多态性(longth polymorphism)。 基因多态性的主要检测方法简述如下: 1.限制性片段长度多态性(Restriction Fragment Length Polymorphism,RFLP):由DNA 的多态性,致使DNA 分子的限制酶切位点及数目发生改变,用限制酶切割基因组时,所产生的片段数目和每个片段的长度就不同,即所谓的限制性片段长度多态性,导致限制片段长度发生改变的酶切位点,又称为多态性位点。最早是用Southern Blot/RFLP方法检测,后来采用聚合酶链反应(PCR)与限制酶酶切相结合的方法。现在多采用PCR-RFLP法进行研究基因的限制性片段长度多态性。 2.单链构象多态性(SSCP):是一种基于单链DNA构象差别的点突变检测方法。相同长度的单链DNA如果顺序不同,甚至单个碱基不同,就会形成不同的构象。在电泳时泳动的速度不同。将PCR产物经变性后,进行单链DNA凝胶电泳时,靶DNA中若发生单个碱基替换等改变时,就会出现泳动变位(mobility shift),多用于鉴定是否存在突变及诊断未知突变。 3.PCR-ASO探针法(PCR-allele specific oligonucleotide, ASO):即等位基因特异性寡核苷酸探针法。在PCR扩增DNA片段后,直接与相应的寡核苷酸探杂交,即可明确诊断是否有突变及突变是纯合子还是杂合子。其原理是:用PCR扩增后,产物进行斑点杂交或狭缝杂交,针对每种突变分别合成一对寡核苷酸片段作为探针,其中一个具有正常序列,另一个则具有突变碱基。突变碱基及对应的正常碱基匀位于寡核苷酸片段的中央,严格控制杂交及洗脱条件,使只有与探针序列完全互补的等位基因片段才显示杂交信号,而与探针中央碱基不同的等位基因片段不显示杂交信号,如果正常和突变探针都可杂交,说明突变基因是杂合子,如只有突变探针可以杂交,说明突变基因为纯合子,若不能与含有突变序列的寡核苷探针杂交,但能与相应的正常的寡核苷探针杂交,则表示受检者不存在这种突变基因。若与已知的突变基因的寡核苷探针匀不能杂交,提示可能为一种新的突变类型。 4. PCR-SSO法:SSO技术即是顺序特异寡核苷酸法(Sequence Specific Oligonucleotide, SSO)。原理是PCR基因片段扩增后利用序列特异性寡核苷酸探针,通过杂交的方法进行

麻醉药物基因组学进展

麻醉药物基因组学进展 本文对药物基因组学的基本概念和常用麻醉药的药物基因组学研究进 展实行综述。 药物基因组学是伴随人类基因组学研究的迅猛发展而开辟的药物遗传 学研究的新领域,主要阐明药物代谢、药物转运和药物靶分子的基因 多态性及药物作用包括疗效和毒副作用之间关系的学科。 基因多态性是药物基因组学的研究基础。药物效应基因所编码的酶、 受体、离子通道作为药物作用的靶,是药物基因组学研究的关键所在。基因多态性可通过药物代谢动力学和药物效应动力学改变来影响麻醉 药物的作用。 基因多态性对药代动力学的影响主要是通过相对应编码的药物代谢酶 及药物转运蛋白等的改变而影响药物的吸收、分布、转运、代谢和生 物转化等方面。与麻醉药物代谢相关的酶有很多,其中对细胞色素- P450家族与丁酰胆碱酯酶的研究较多。基因多态性对药效动力学的影 响主要是受体蛋白编码基因的多态性使个体对药物敏感性发生差异。 苯二氮卓类药与基因多态性:咪唑安定由CYP3A代谢,不同个体对咪 唑安定的清除率可有五倍的差异。地西泮是由CYP2C19和CYP2D6代谢,基因的差异在临床上可表现为用药后镇静时间的延长。 吸入麻醉药与基因多态性:RYR1基因变异与MH密切相关,现在已知 至少有23种不同的RYR1基因多态性与MH相关。氟烷性肝炎可能源于 机体对在CYP2E1作用下产生的氟烷代谢产物的一种免疫反应。 神经肌肉阻滞药与基因多态性:丁酰胆碱酯酶是水解琥珀酰胆碱和美 维库铵的酶,已发现该酶超过40种的基因多态性,其中最常见的是被 称为非典型的(A)变异体,与用药后长时间窒息相关。 镇痛药物与基因多态性:μ-阿片受体是阿片类药的主要作用部位, 常见的基因多态性是A118G和G2172T。可待因和曲马多通过CYP2D6代

麻醉药物,个体化用药综述,协和医院,罗爱伦

中华麻醉在线 http://www.csaol.cn 2007年9月 麻醉药物基因组学研究进展 王颖林郭向阳罗爱伦 北京协和医院麻醉科 本文对药物基因组学的基本概念和常用麻醉药的药物基因组学研究进展进行综述。 药物基因组学是伴随人类基因组学研究的迅猛发展而开辟的药物遗传学研究的新领域,主要阐明药物代谢、药物转运和药物靶分子的基因多 态性及药物作用包括疗效和毒副作用之间关系的学科。 基因多态性是药物基因组学的研究基础。药物效应基因所编码的酶、受体、离子通道作为药物作用的靶,是药物基因组学研究的关键所在。基 因多态性可通过药物代谢动力学和药物效应动力学改变来影响麻醉药物的 作用。 基因多态性对药代动力学的影响主要是通过相应编码的药物代谢酶及药物转运蛋白等的改变而影响药物的吸收、分布、转运、代谢和生物转化等方面。与麻醉药物代谢有关的酶有很多,其中对细胞色素-P450家族与丁酰胆碱酯酶的研究较多。基因多态性对药效动力学的影响主要是受体蛋白编码基因的多态性使个体对药物敏感性发生差异。 苯二氮卓类药与基因多态性:咪唑安定由CYP3A代谢,不同个体对咪唑安定的清除率可有五倍的差异。地西泮是由CYP2C19和CYP2D6代谢,基因的差异在临床上可表现为用药后镇静时间的延长。 吸入麻醉药与基因多态性:RYR1基因变异与MH密切相关,现在已知至少有23种不同的RYR1基因多态性与MH有关。氟烷性肝炎可能源于机体对在

CYP2E1作用下产生的氟烷代谢产物的一种免疫反应。 神经肌肉阻滞药与基因多态性:丁酰胆碱酯酶是水解琥珀酰胆碱和美维库铵的酶,已发现该酶超过40种的基因多态性,其中最常见的是被称为非典型的(A)变异体,与用药后长时间窒息有关。 镇痛药物与基因多态性:μ-阿片受体是阿片类药的主要作用部位,常见的基因多态性是A118G和G2172T。可待因和曲马多通过CYP2D6代谢。此外,美沙酮的代谢还受CYP3A4的作用。儿茶酚O-甲基转移酶(COMT)基因与痛觉的产生有关。 局部麻醉药与基因多态性:罗哌卡因主要由CYP1A2和CYP3A4代谢。CYP1A2的基因多态性主要是C734T和G2964A,可能影响药物代谢速度。 一直以来麻醉科医生较其它专业的医疗人员更能意识到不同个体对药物的反应存在差异。麻醉药的药物基因组学研究将不仅更加合理的解释药效与不良反应的个体差异,更重要的是在用药前就可以根据病人的遗传特征选择最有效而副作用最小的药物种类和剂型,达到真正的个体化用药。 能够准确预测病人对麻醉及镇痛药物的反应,一直是广大麻醉科医生追求的目标之一。若能了解药物基因组学的基本原理,掌握用药的个体化原则,就有可能根据病人的不同基因组学特性合理用药,达到提高药效,降低毒性,防止不良反应的目的。本文对药物基因组学的基本概念和常用麻醉药的药物基因组学研究进展进行综述。 一、概述

基因多态性分析

人基因多态性分析 一、实验目的 1. 了解基因多态性在阐明人体对疾病、毒物的易感性与耐受性、疾病临床表现的多样性以及对药物治疗的反应性中的重要作用。 2. 了解分析基因多态性的基本原理和研究方法。 二、实验原理 基因多态性(gene polymorphism)是指在一个生物群体中,同时存在两种及以上的变异型或基因型或等位基因,也称为遗传多态性(genetic polymorphism)。人类基因多态性对于阐明人体对疾病的易感性、毒物的耐受性、药物代谢差异及遗传性疾病的分子机制有重大意义;与致病基因连锁的多态性位点可作为遗传病的诊断标记,并为分离克隆致病基因提供依据;病因未知的疾病与候选基因多态性的相关性分析,可用于辅助筛选致病易感基因。 聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(polymerase chain reaction—Restriction Fragment Length Polymorphism,PCR-RFLP)分析是一种常用的DNA分子标记。原理是通过PCR扩增获得目的基因。若目的基因存在等位变异(多态性),且变异正好发生在某种限制性内切酶识别位点上,使酶切位点增加或者消失,则酶切结果就会产生大小不同的片段,即片段长度多态性,再利用琼脂糖凝胶电泳分离,可呈现出多态性电泳图谱。若将患者与正常的多态性图谱比较,可确定是否变异。应用PCR-RFLP,可检测某一致病基因已知的点突变,进行直接基因诊断,也可以此为遗传标记进行连锁分析进行间接基因诊断。 三、器材与试剂 1. 器材 ⑴离心机。 ⑵DNA扩增仪。 ⑶电泳仪。 ⑷水平电泳槽。 ⑸紫外检测仪。 ⑹移液器。 2. 试剂

CYP2C19基因多态性检测

CYP2C19基因多态性检测 项目简介:CYP2C19是CYP450酶第二亚家族中的重要成员,是人体重要的药物代谢 酶,在肝脏中有很多表达。CYP2C19基因座位于染色体区10q24.2上,由9个外显子构成。CYP2C19具有很多SNP位点,最常见的是CYP2C19*2和CYP2C19*3。CYP2C19*2会导致转录蛋白的剪切突变失活,而CYP2C19*3能构成一个终止子,破坏转录蛋白的活性。据统计,CYP2C19*2和CYP2C19*3两个突变位点能解释几乎100%的东亚人和85%的高加索人种的相关弱代谢遗传缺陷,而其他两种等位基因CYP2C19*4和CYP2C19*5主要在高加索人种中分布。大量证据证实,不同人种在CYP2C19的底物的代谢能力有很大差异;2–5%高加索人是弱代谢者,而13–23%的亚洲人是弱代谢者。这是由于在亚洲人口中CYP2C19*2和CYP2C19*3等位基因的高频率造成的。通过CYP2C19基因检测,判断患者对相关药物的代谢能力,可以指导临床用方案的制定,实现个体化用药治疗。 临床上常用的经由CYP2C19酶代谢的药物: 1、治疗胃酸相关性疾病:如质子泵抑制剂:奥美拉唑(omeprazole)、兰索拉唑(lansoprazole)、泮托拉唑(pantoprazole)、 雷贝拉唑(rabeprazole)、埃索美拉唑 (Esomeprazole)。 2、治疗心血管疾病:Clopidogrel、氯吡格雷、抗凝血药物。 3、抗真菌药物:Voriconazole、伏立康唑、广谱抗真菌药物。 4、神经类药物:①S-美芬妥英mephenytoin为乙内酰脲类抗癫痫药,在体内的羟化代谢主要由单基因CYP2C19编码表达的CYP2C19酶蛋白介导,由羟化酶CYP2C19氧化生成4’-羟基美芬妥英;②地西泮diazepam,一种长效的镇静、安眠药;③丙米嗪imipramine ,抗抑郁药,N-去甲基化和2-羟化;④苯巴比妥phenobarbital,传统的抗癫痫药;⑤抗心律失常药,抗抑郁药,抗精神病药,β受体阻断剂,抗高血压药和止痛剂。 5、抗肿瘤药:环磷酰胺。 6、抗结核药:利福平。 7、孕激素:黄体酮。 8、抗疟疾药:氯胍。 9、HIV蛋白酶抑制剂。 10、抗移植排斥药物:他克莫司、兰索拉唑。 CYP2C19基因多态性检测标本采集及出报告时间:病人抽静脉血2ml(用 EDTA-K2抗凝)送检验科分子生物诊断室,4个工作日出报告。 电话:8801063 手机:余宗涛65327 高波 64444 CYP2C19基因多态性检测临床意义: 1、基因剂量效应。 2、CYP2C19基因多态性,导致了个体间酶活性的多样性。等位基因的突变使酶活性降低,对药物代谢的能力随着等位基因的不同组合而呈现出一定的规律性,表现出正常基因纯合子>正常基因与突变基因杂合子> 突变基因纯合子或杂合子的变化趋势。 3、对于不同代谢能力的个体,运用不同的药物剂量等策略是非常必要的,可达到更好的治疗效果。 4、根据CYP2C19基因型给予个性化的药物和剂量可以降低副作用发生率-安全性;提高治

SNP单核苷酸多态性检测技术

1定义: 单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP),主要是指在基因组水平上由单个核苷酸的变异所引起的DNA序列多态性。它是人类可遗传的变异中最常见的一种。占所有已知多态性的90%以上。SNP在人类基因组中广泛存在,平均每500~1000个碱基对中就有1个,估计其总数可达300万个甚至更多。SNP所表现的多态性只涉及到单个碱基的变异,这种变异可由单个碱基的转换(transition)或颠换(transversion)所引起,也可由碱基的插入或缺失所致。但通常所说的SNP并不包括后两种情况。单核苷酸多态性(SNP)是指在基因组上单个核苷酸的变异,包括置换、颠换、缺失和插入。所谓转换是指同型碱基之间的转换,如嘌呤与嘌呤( G2A) 、嘧啶与嘧啶( T2C) 间的替换;所谓颠换是指发生在嘌呤与嘧啶(A2T、A2C、C2G、G2T) 之间的替换。从理论上来看每一个SNP 位点都可以有4 种不同的变异形式,但实际上发生的只有两种,即转换和颠换,二者之比为2:1。SNP 在CG序列上出现最为频繁,而且多是C转换为T ,原因是CG中的C 常为甲基化的,自发地脱氨后即成为胸腺嘧啶。一般而言,SNP 是指变异频率大于1 %的单核苷酸变异。在人类基因组中大概每1000 个碱基就有一个SNP ,人类基因组上的SNP 总量大概是3 ×106个。依据排列组合原理,SNP 一共可以有6种替换情况,即A/ G、A/ T、A/ C、C/ G、C/ T 和G/ T ,但事实上,转换的发生频率占多数,而且是C2T 转换为主,其原因是Cp G的C 是甲基化的,容易自发脱氨基形成胸腺嘧啶T , Cp G 也因此变为突变热点。理论

临床药学习题

临床药学习题

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第二章 名词解释: 1、治疗药物检测 2、有效血药浓度范围 简答题:?1、治疗药物监测的定义是什么? 2、开展治疗药物监测的意义是什么??3、尽管血液中的药物浓度与靶位浓度并不相等,但为什么仍将检测血药浓度的大小作为调整剂量的依据??4、剂量与血药浓度之间相关性的影响因素有哪些??5、何为有效血药浓度范围?何为目标浓度?有效血药浓度范围与药物效应有何关系??6、体内药物分析的目标物有哪些?为什么说测定游离药物浓度更有指导意义? 7、目前治疗药物监测常用的体内药物分析方法有哪些??8、药物分析方法学确证包括哪些方面?各有何要求??9、体内药物分析的质量控制的目的意义是什么?质量控制分哪两大部分? 10、回顾性室内质量控制主要方法是什么?质量控制图绘制的目的和方法是什么? 11、何为室间质量控制?开展室间质量控制的目的和主要程序是什么??12、治疗药物监测的主要临床指征是什么?哪些情况不需要进行治疗药物监测? 13、治疗药物监测的主要流程是什么? 14、治疗药物监测的采样时间如何决定? 15、样本采集注意事项是什么? 16、如何做好治疗药物监测结果解释工作和向临床提供咨询服务? 17、血药浓度检测结果可能会出现哪些情况?如何处置? 18、调整给药方案主要从那几方面入手? 19、治疗药物监测的临床应用主要在哪些方面??20、常规的治疗药物监测的药物主要有哪 22、群体药动学在TDM中的应用有哪些方面? 些?? 21、给药方案的调整主要有哪些方法?? 24、群体药动学的应用特点和意义? 23、群体药动学的定义是什么?? 26、何为混合效应?何为混25、群体药动学分析方法中存在有几个主要参数群?各是什么?? 合效应模型法? 28、NONMEN法和Bayesian反馈法的意义及其实施步骤是什27、何为Bayesian反馈法?? 么??29、NONMEN软件有何特点? 第三章 名词解释:?1、临床试验?2、知情同意?3、检察员?4、病例报告表?5、多中心临床试验 6、临床试验标准操作规程 简答题:?1、我国的《药品注册管理办法》将临床试验分为几期?简述各期临床试验的概念的特点??2、简述哪些方面需要制定SOP? 第四章 名词解释:?1、遗传药理学?2、单核苷酸多态性?简答题: 1、等位基因的变异有哪几种类型? 2、计算题:某研究分析了人体血标本100份(男、女各50份),发现该基因的突变纯合子个体10个,突变杂合子个体30个,野生型个体60个,试计算该基因中各基因型的频率和等位基因频率(假设该基因单核苷酸多态性的野生型为GG,突变杂合子为GA,突变纯合子为AA)。 3、药物转运蛋白主要有哪些?

应用TaqMan探针技术检测MTHFR基因的C677T和A1298C多态性

应用TaqMan探针技术检测MTHFR基因的C677T和A1298C多态 性 目的探讨一种快速、准确运用于临床检测MTHFR基因多态性的方法。方法提取43例胃癌患者的外周血基因组DNA,用TaqMan探针技术对MTHFR 基因的C677T和A1298C两个多态性位点进行分型,并采用直接测序法对TaqMan探针分型结果进行验证。结果43例样本的MTHFR C677T基因型分别为14例CC、23例CT和6例TT;A1298C基因型为24例AA、18例AC、1例CC,两种分型方法结果一致。结论本研究选用的TaqMan探针分型方法结果准确可靠,能够用于MTHFR的C677T和A1298C两个多态性位点分析。 标签:TaqMan探针;MTHFR;多态性;DNA测序;胃癌 胃癌(Gastric cancer)是世界范围内的高发肿瘤之一[1]。近年研究表明,低叶酸水平可增加包括胃癌在内的许多肿瘤发生的危险性[2]。亚甲基四氢叶酸还原酶(methylene tetrahydrofolate reductase,MTHFR)是叶酸代谢途径中的一关键酶,MTHFR参与的体内同型半胱氨酸(Hcy)和甲硫氨酸之间的循环反应,反应中生成的S腺苷甲硫氨酸(SAM)是体内代谢唯一的甲基供体,涉及DNA 的修复与合成,影响DNA代谢,与许多肿瘤化疗药物的疗效相关。 MTHFR的活性很大程度上可能受基因多态性的影响,从而影响疾病的发生和药物的疗效。MTHFR基因C677T和A1298C为两个常见的多态性位点,有研究表明该位点的基因多态性会导致MTHFR酶活性的改变[3],可能导致患者之间出现较大的个体差异。因此,测定MTHFR的基因型对疾病的预防和合理用药有重要的意义。现已有的MTHFR基因多态性的研究,大多数采用限制性片段长度多态性聚合酶链反应(PCR-RFLP)技术,该技术不仅费时,且易污染造成假阳性。不适宜用于临床检测。本研究旨在探讨一种可用于临床快速准确检测MTHFR基因型的方法,故选用TaqMan探针技术对MTHFR的C677T和A1298C 两个多态性位点进行分型。 1资料与方法 1.1一般资料经CT、MRI或病理组织学活检确诊的胃癌患者43例,来源于昆明医科大学第一附属医院,收集样本人群的外周静脉血2 mL。采用Genomic DNA Purification Kit(PROMEGA公司)对基因组DNA进行提取,使用Nanodrop 2000测定DNA的浓度和纯度。 1.2 TaqMan探针技术检测MTHFR基因C677T和A1298C位点的多态性TaqMan探针试剂由ABI公司为MTHFR基因C677T(SNP ID:rs1801133),A1298C(SNP ID:rs1801131)多态性设计的TaqMan SNP分析试剂,每个位点的TaqMan SNP基因分型试剂中,含有两条MGB探针。MTHFR C677T一条以VIC荧光标记碱基G,对应样本基因突变位点C;一条以FAM荧光标记碱基A,

检测基因多态性的方法

检测基因多态性的方法 一种用于快速检测基因多态性的方法,具有如下特征:(a)根据所测样本靶序列设计两对引物,其中一对为锚定引物;(b)将上述两对引物及一个与锚定引物的锚定部分序列相同的引物加入到含有底物及其它PCR扩增反应试剂的溶液中,进行PCR扩增反应;(c)以适当的方法检测扩增产物中链长不同的DNA片断;(d)根据反应产物中DNA片断的多少及其长短判断基因多态性的类型。本发明涉及一种基因多态性检测方法,可用于单碱基多态性、基因突变、单碱基插入或缺失、微卫星分析等。本方法是首先设计两对引物,其中一对为通常PCR引物,用于扩增含有基因多态性位点的DNA片段;另一对为锚定引物,用于判断基因多态性的类型。再将上述两对引物及一个与锚定引物的锚定部分序列相同的引物加入到含有底物及其它PCR扩增反应试剂的溶液中,在单管中进行PCR扩增反应,并使扩增反应产生与基因多态性相对应的DNA扩增产物,然后以凝胶电泳法、或毛细管电泳法、或微流控芯片法,或高效液相色谱法等分离技术检测,根据扩增产物中DNA片段的多少及链长判断基因多态性的类型。为提高延伸反应的特异性,在锚定引物的3’端区域人为地引入一个与模板不互补的碱基。 用于检测遗传多态性的方法,包括:生成寡核苷酸探针和/或寡核苷酸引物,使得该寡核苷酸探针和/或引物包含在编码受体的基因或与其互补的序列中存在的多态位点,或者,当编码受体的所述基因和与其互补的所述序列至少其中之一得到扩增时,使得多态位点包含在扩增片段中;并使用由此生成的寡核苷酸探针和/或寡核苷酸引物检测编码靶受体的基因中的至少一种遗传多态性。 多态性是指处于随机婚配的群体中,同一基因位点可存在2种以上的基因型。在人群中,个体间基因的核苷酸序列存在着差异性称为基因的多态性。这种多态性可以分为两类,即DNA 位点多态性和长度多态性。 基因多态性的主要检测方法: 1,限制性片段长度多态性(Restriction Fragment Length Polymorphism):由DNA的多态性,致使DNA分子的限制酶切位点及数目发生改变,现在多采用PCR-RFLP法进行研究基因的限制性片段长度多态性。 2,单链构象多态性:是一种基于单链DNA构象差别的点突变检测方法。 3,PCR-ASO探针法:即等位基因特异性寡核苷酸探针法。 4,PCR-SSO法:原理是PCR基因片段扩增后利用序列特异性寡核苷酸探针,通过杂交的方法进行扩增片段的分析鉴定。 5,PCR-SSP法:SSP(序列特异性引物)只能与某一等位基因特异性片段的碱基序列互补性结合,通过PCR特异性地扩增该基因片段,从而达到分析基因多态性的目的。 6,PCR-荧光法: 7,PCR-DNA测序:是诊断未知突变基因最直接的方法。 8,PCR指纹图法:实用于快速的同种异性DR/DW配型。 9,基因芯片法:又称为DNA微探针阵列。它是集成了大量的密集排列的大量已知的序列探针,通过与被标记的若干靶核苷酸序列互不匹配,与芯片特定位点上的探针杂交,利用基因芯片杂交图像,确定杂交探针的位置,便可根据碱基互补匹配的,与芯片特定位点上的探针杂交,利用基因芯片杂交图像,确定杂交探针的位置,便可根据碱基互补匹

麻醉药物基因组学研究论文

麻醉药物基因组学研究论文 本文对药物基因组学的基本概念和常用麻醉药的药物基因组学研究进展进行综述。 药物基因组学是伴随人类基因组学研究的迅猛发展而开辟的药物遗传学研究的新领域,主要阐明药物代谢、药物转运和药物靶分子的基因多态性及药物作用包括疗效和毒副作用之间关系的学科。 基因多态性是药物基因组学的研究基础。药物效应基因所编码的酶、受体、离子通道作为药物作用的靶,是药物基因组学研究的关键所在。基因多态性可通过药物代谢动力学和药物效应动力学改变来影响麻醉药物的作用。 基因多态性对药代动力学的影响主要是通过相应编码的药物代谢酶及药物转运蛋白等的改变而影响药物的吸收、分布、转运、代谢和生物转化等方面。与麻醉药物代谢有关的酶有很多,其中对细胞色素-P450家族与丁酰胆碱酯酶的研究较多。基因多态性对药效动力学的影响主要是受体蛋白编码基因的多态性使个体对药物敏感性发生差异。 苯二氮卓类药与基因多态性:咪唑安定由CYP3A代谢,不同个体对咪唑安定的清除率可有五倍的差异。地西泮是由CYP2C19和CYP2D6代谢,基因的差异在临床上可表现为用药后镇静时间的延长。 吸入麻醉药与基因多态性:RYR1基因变异与MH密切相关,现在已知至少有23种不同的RYR1基因多态性与MH有关。氟烷性肝炎可能源于机体对在CYP2E1作用下产生的氟烷代谢产物的一种免疫反应。 神经肌肉阻滞药与基因多态性:丁酰胆碱酯酶是水解琥珀酰胆碱和美维库铵的酶,已发现该酶超过40种的基因多态性,其中最常见的是被称为非典型的(A)变异体,与用药后长时间窒息有关。 镇痛药物与基因多态性:μ-阿片受体是阿片类药的主要作用部位,常见的基因多态性是A118G和G2172T。可待因和曲马多通过CYP2D6代谢。此外,美沙酮的代谢还受CYP3A4的作用。儿茶酚O-甲基转移酶(COMT)基因与痛觉的产生有关。 局部麻醉药与基因多态性:罗哌卡因主要由CYP1A2和CYP3A4代谢。CYP1A2

环磷酰胺对雄性生殖系统的毒副作用的综述

环磷酰胺对雄性生殖系统的毒副作用的综述 02(医)七任怡2002207221 摘要:通过对1989年至2006年关于环磷酰胺对雄性生殖系统毒副作用资料的查阅,从环磷酰胺对生精细胞,干细胞因子,精原干细胞,精子的发生、形态,数量,以及睾丸染色体的毒副作用等方面分类进行综述,和大家共同探讨一下有关环磷酰胺的生殖毒副作用。 关键词:环磷酰胺生殖系统毒副作用 环磷酰胺(CTX)是一种烷化剂,1958年首次人工合成,主要用于肿瘤免疫,对多种肿瘤有明显的抑制作用,对增殖细胞群的各期均有杀伤作用。进入人体后肝脏或肿瘤组织内存在的过量磷酰胺酶或磷酸酶水解,释放出氮芥基而杀伤抑制肿瘤细胞生长的作用。主要的毒性反应有恶心、食欲减退、脱发、白细胞减少、中毒性膀胱炎、肝功能损伤。我通过对资料文献的查阅发现他对雄性生殖系统有一定的毒副作用,不可忽视,故查阅1989年至今文献现做综述如下: 1对不同发育时期睾丸生精细胞毒性损伤 岳丽琴等将环磷酰胺分别作用于处于不同发育时期的1周龄、3周龄、5周龄、9周龄雄性大鼠,应用HE染色法、TUNEI法和免疫组化法检测急性期生精细胞凋亡,bcl2蛋白表达,细胞增殖能力变化及远期组织学损害结果用药后24h,除1周龄组外,各实验组生精细胞显著凋亡(P<0.()1),bcl2蛋白表达显著下降(P0.05),膜型干细胞因子均有显著增加(P<0.05)。 (2)同一时期各实验组和对照组比较,分泌型干细胞因子表达无显著差异(P>0.05),但膜型干细胞因子表达均有显著降低(P<0.05);同一时期各实验组间比较,随环磷酰胺剂量增加,膜型干细胞因子表达有显著降低(P<0.05)。(3)同一剂量三个时期比较,各实验组分泌型干细胞因子无显著差异(P>0.05);膜型干细胞因子比较,大剂量组中无显著差异(P>0.05),中、小剂量组中24h较4w、8w均有显著降低(P<0.05),4w与8w比较无显著差异(P>0.05)。(4)增殖指数检测,4w时各实验组与对照组比较,均有显著降低(P<0.O1),并与剂量

临床药学习题

名词解释: 1、治疗药物检测 2、有效血药浓度范围 简答题: 1、治疗药物监测的定义是什么? 2、开展治疗药物监测的意义是什么? 3、尽管血液中的药物浓度与靶位浓度并不相等,但为什么仍将检测血药浓度的大小作为调整剂量的依据? 4、剂量与血药浓度之间相关性的影响因素有哪些? 5、何为有效血药浓度范围?何为目标浓度?有效血药浓度范围与药物效应有何关系? 6、体内药物分析的目标物有哪些?为什么说测定游离药物浓度更有指导意义? 7、目前治疗药物监测常用的体内药物分析方法有哪些? 8、药物分析方法学确证包括哪些方面?各有何要求? 9、体内药物分析的质量控制的目的意义是什么?质量控制分哪两大部分? 10、回顾性室内质量控制主要方法是什么?质量控制图绘制的目的和方法是什么? 11、何为室间质量控制?开展室间质量控制的目的和主要程序是什么? 12、治疗药物监测的主要临床指征是什么?哪些情况不需要进行治疗药物监测? 13、治疗药物监测的主要流程是什么? 14、治疗药物监测的采样时间如何决定? 15、样本采集注意事项是什么? 16、如何做好治疗药物监测结果解释工作和向临床提供咨询服务? 17、血药浓度检测结果可能会出现哪些情况?如何处置? 18、调整给药方案主要从那几方面入手? 19、治疗药物监测的临床应用主要在哪些方面? 20、常规的治疗药物监测的药物主要有哪些? 21、给药方案的调整主要有哪些方法? 22、群体药动学在TDM中的应用有哪些方面? 23、群体药动学的定义是什么? 24、群体药动学的应用特点和意义? 25、群体药动学分析方法中存在有几个主要参数群?各是什么? 26、何为混合效应?何为混合效应模型法? 27、何为Bayesian反馈法? 28、NONMEN法和Bayesian反馈法的意义及其实施步骤是什么? 29、NONMEN软件有何特点? 第三章 名词解释: 1、临床试验 2、知情同意 3、检察员 4、病例报告表 5、多中心临床试验 6、临床试验标准操作规程

2020年浙江省执业药师继续教育试题答案24分

2020年浙江省执业药师继续教育试题答案 《识别和防范药品与食品相互作用中的各种风险》 1、进入体内的酒精接受由肾辅酶Ⅰ、肝醇脱氢酶、乙醇脱氢酶的作用在肝脏氧化,所代谢产物的是(单项选择)B A.甲醛 B.乙醛 C.丙烯醛 D.甲酸 2、服用华法林抗凝治疗期间,可拮抗或削弱其抗凝血作用的药品是D(单项选择) A.维生素A B.维生素B C.维生素C D.维生素K 3、葡萄柚汁为肝药酶CYP3A4中效抑制剂,可受其可影响使代谢抑制和出现肌肉毒性的药品是(单项选择)A A.辛伐他汀 B.氯吡格雷 C.苯巴比妥 D.尼尔雌醇 4、服用抗甲亢药期间应严格避免摄入的食物是(单项选择)C A.富含钾的食物 B.富含铁的食物 C.富含碘的食物 D.富含硒的食物 5、可抑制人体内的单胺氧化酶,导致酪胺食物代谢受阻,引起血压迅速升高的药品是(单项选择)B A.洛伐他汀 B.异烟肼 C.头孢哌酮 D.尼美舒利 6、应用后可能影响新生儿心脏、呼吸、血管功能,全身呈灰色,出现“灰婴综合征”的抗生素是(单项选择)C A.四环素 B.阿奇霉素 C.氯霉素 D.万古霉素 7、食醋可以降低体液的环境,抑制尿酸排泄,使疗效降低的药品是A (单项选择) A.抗痛风药 B.抗高血压药 C.抗心绞痛药 D.抗震颤麻痹药 8、抗血小板药氯吡格雷为前药,在体内须经脂酶(85%)和肝酶(15%)双重代谢,两步代谢均需经过的代谢酶是(单项选择)D A.CYP2C6 B.CYP2C9 C.CYP2C12 D.CYP2C19 9、3岁以下婴儿进食蚕豆,最快在2小时内发生溶血,或致新生儿黄疸的原因是儿童体内缺乏的酶是(单项选择)C A.乙醛脱氢酶 B.单胺氧化酶 C.葡萄糖6-磷酸脱氢酶 D.凝血酶 10、大量饮用葡萄釉汁可抑制洛伐他汀、阿托伐他汀和瑞舒伐他汀等在小肠的首关代谢和肝代谢,其共同竞争性抑制的肝药酶是(单项选择)B A.CYP1A2 B.CYP3A4 C.CYP2C9 D.CYP2D6

细胞色素CYP2C19基因多态性与药物相互作用_张平平

[10]Illouz S,Nakamura T,Webb M,et al1Comparison of University of Wisconsin and ET-Kyoto preservation solutions for t he cryopreservation of primary human hepatocytes1Transplant Proc,2008,40(5):1706~17091 [11]Colaco C,Sen S,Thangavelu M,et al1Extraordinary stability of enzymes dried in trehalose:simplified molecular biolo2 gy1Biotechnology(N Y),1992,10(9):1007~10111 [12]Mat suo T1Trehalose protect s corneal epit helial cells from deat h by drying1Br J Opht halmol,2001,85(5):610~6121 [13]Mat suo T,Tsuchida Y,Morimoto N1Trehalose eye drops in t he treat ment of dry eye syndrome1Opht halmology,2002,109(11): 2024~20291 [14]Mat suo T1Trehalose versus hyaluronan or cellulose in eyedrops for t he treat ment of dry eye1Jpn J Opht halmol,2004,48(4):321~3271 [15]胡宗利,夏玉先,陈国平,等1海藻糖的生产制备及其应用前景 1中国生物工程杂志,2004,24(4):44~481 [16]Takanobu H1Novel functions and applications of trehalose1Pure Appl Chem,2002,74(7):1263~12691 细胞色素CYP2C19基因多态性与药物相互作用 张平平,王明波,张鉴1,李军1 (山东万杰医学院,山东淄博255213;11山东大学附属省立医院临床药理中心,山东济南250012) 摘要:C YP2C19酶是一种重要的药物代谢酶,参与多种药物的体内代谢。本文综述了C YP2C19酶的基因多态性及临床应用方面的研究进展,讨论经C YP2C19代谢的药物在联合用药时药物之间的相互作用及可能出现的临床后果,为临床合理用药提供参考依据。 关键词:C YP2C19 代谢 抑制 诱导 药物相互作用 中图分类号:R968 文献标识码:A 文章编号:1672-7738(2009)06-0352-04 The gene polymorphism of CYP2C19and drug interaction ZHAN G Ping2ping,WAN G Ming2bo,ZHAN G Jian1,L I J un1 (Wanjie Medical College of Shangdong,Zibo255213;11The center of Clinical Pharmacology,Shandong Provincial Hospital Affiliated to Shandong University,Ji′nan250012) ABSTRACT:C YP2C19enzyme is an important drug-metabolizing enzyme involved in the metabolism of a variety of drugs in vivo1This article introduced the progress of the gene polymorphism of CYP2C19enzyme and its application in clinical1The interaction and possible clinical consequences of the drugs metabolized by C YP2C19in combination were also illustrated which provided the reference for the clinical rational administration1 KE Y WOR DS:C YP2C19;metabolism;inhibition;induction;drug interactions 细胞色素P450是由一组结构和功能相关的血红蛋白超家族基因编码的同工酶,是药物在体内的主要代谢酶系。在C YP450超家族中,C YP2是最大的家族,有15个亚家族,而C YP2C是其中最大的亚家族,该亚家族中C YP2C9、2C19与药物代谢关系密切。 1 C YP2C19与药物代谢 现已证实C YP2C19酶主要参与药物在体内的羟化反应。C YP2C19酶活性存在显著的个体差异和种族差异,表现为遗传多态性,导致酶变异,酶活性下降,代谢药物的能力下降,从而使多种药物在体内的代谢产生个体差异,导致血药浓度的个体差异,血药浓度升高,故常引起与血药浓度相关的药物不良反应。同时服用经C YP2C19代谢的药物,可能发生相互作用,从而影响临床治疗效果。 2 C YP2C19的基因突变与表型研究进展 C YP2C19酶又称为S-美芬妥英羟化酶,定位于10号染色体上(10q2411-10q2413),有9个外显子。现已发现其至少存在18种等位基因,较常见的2个等位基因多态性位点为C YP2C19m1和C YP2C19m2。其外显子5发生的单个碱基突变(G→A)称为M1突变,突变的基因称为m1等位基因。其外显子4发生的单个碱基突变(G→A)称为M2突变,突变的基因称为m2等位基因。这些突变导致酶活性下降,代谢能力减低,易引起药物不良反应。另外在研究白种人的C YP2C19基因时,发现了一例较罕见的新突变,即外显子9发生了单碱基突变(C→T),不过该突变频率极低(0125%),其是否会改变个体的酶蛋白含量,有待于进一步研究。 C YP2C19酶具遗传多态性,代谢速度快者为强代谢者(extensive metabolism EM),代谢速度慢者为弱代谢者(poor

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