拾荒工杰克X攻略 Junk Jack X培养动物心得分享
拾荒工杰克X攻略 Junk Jack X培养动物心得分享
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先做个项圈，拿着项圈去套一个猪、鸡、牛或羊
再做些栅栏，别忘了，要不然养的动物会跑掉，把围栏放在牧场周围
然后把你抓的动物拿在手上点一下牧场，就装进入了，再打开牧场放饲料
每种动物吃的东西都不同
如果在牧场里放一只公一直母，过一段时间它们会有小宝宝。还有拿着桶点奶牛你会获得牛奶
顺便放张小麦种子的图，就是种了以后像扫把一样的东西。要破坏板条箱和宝箱获得。
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大规模细胞培养技术
大规模细胞培养技术简介 大规模培养技术应用简介通过大规模体外培养技术培养哺乳类动物细胞是生产生物制品的有效方法。上世纪60-70 年代，就已创立了可用于大规模培养动物细胞的微载体培养系统和中空纤维细胞培养技术。近十数年来，由于人类对生长激素、干扰素、单克隆抗体、疫苗及白细胞介素等生物制品的需求猛增，以传统的生物化学技术从动物组织获取生物制品已远远不能满足这一需求。随着细胞培养的原理与方法日臻完善，动物细胞大规模培养技术趋于成熟。 所谓动物细胞大规模培养技术( large-scale culture technology )是指在人工条件下(设定ph、温度、溶氧等) ，在细胞培养工厂 (Cosmo Cat.No. 1101-400 or 1101-800 )或生物反应器( bioreactor )中高密度大量培养动物细胞用于生产生物制品的技术。目前可大规模培养的动物细胞有鸡胚、猪肾、猴肾、地鼠肾等多种原代细胞及人二倍体细胞、cho(中华仓鼠卵巢) 细胞、BHK-21( 仓鼠肾细胞)、Vero 细胞(非洲绿猴肾传代细胞，是贴壁依赖的成纤维细胞)等，并已成功生产了包括狂犬病疫苗、口蹄疫疫苗、甲型肝炎疫苗、乙型肝炎疫苗、红细胞生成素、单克隆抗体等产品。 在过去几十年来，该技术经有了很大发展，从使用转瓶(roller bottle) 、CellCube 等贴壁细胞培养，发展为一次性细胞培养工厂( Made by Cosmo )或生物反应器 (Bioreactor )进行大规模细胞培养。第一代细胞培养技术核心问题是难以产业化或者说是规模化生产：一是在工艺生产时不能大规模制备产品；二是非批量生产容易导致产品质量的不均一性；三是难以对同批生产进行生产和质量控制。 随着生物技术的发展，迫切需要大规模的细胞培养，特别是培养表达特异性蛋白的哺乳动物细胞，以便获得大量有用的细胞表达产物。采用玻璃瓶静置或旋转瓶的培养方法，已不能满足所需细胞数量及其分泌产物。因而必须为工业化生产开创一种新的技术方法。自70 年代以来，细胞培养用生物
动物细胞培养基本操作
实验一动物细胞培养 细胞培养是用无菌操作的方法将动物体内的组织(或器官)取出，模拟动物体内的生理条件，在体外进行培养．使其不断地生长、繁殖，人们借以观察细胞的生长、繁殖、细胞分化以及细胞衰老等过程的生命现象。 细胞培养的突出优点，一是便于研究各种物理、化学等外界因素对细胞生长发育和分化等的影响；二是细胞培养便于人们对细胞内结构(如细胞骨架等)、细胞生长及发育等过程的观察。因而细胞培养是探索和指示细胞生命活动规律的—种简便易行的实验技术，同时我们也不可忽略的另一个因素，那就是它脱离乐生物机体后的—些变化。 细胞培养技术目前已广泛地被应用于生物学的各个领域。如分子生物学、细胞生物学、遗传学、免疫学、肿痛学及病毒学等 为此有必要使学生在细胞培养方面得到一些初步的感性知识，了解动物细胞培养的基本操作过程，观察体外培养细胞的生长特征，对原代细胞与传代细胞有一个基本概念。 本实验分两次进行．即清洗与消毒和传代细胞的培养与观察。 Ⅰ清洗与灭菌 一、实验目的 能独立地进行用于细胞培养的各种器皿的清洗与消毒，掌握干热灭菌法、湿热灭菌法和滤过除菌法的操作，了解化学消毒法的使用方法。 二、实验原理 清洗与消毒是组织培养实验的第一步，是组织培养中工作量最大，也是最基本的步骤。体外培养细胞所使用的各种玻璃或塑料器皿对清洁和无菌的要求程度很高。细胞养不好与清洗不彻底有很大关系。清洗后的玻璃器皿，不仅要求干净透明，无油迹，而且不能残留任何物质。如有毒的化学物质，哪怕残留0．1个，也可能影响细胞生长。灭菌手段的选择十分重要，对不同的物品需采用不同的灭菌方法。假如选用的方法不对，即使达到了无菌却使被灭菌药品丧失了营养价值、生物学特性或其他使用价值也不行。以下在每种灭菌步骤中都介绍其使用范围。 三、实验材料、用品
植物组织培养
1.植物组织培养（离体培养）：是指在无菌条件下，将植物体的任何一部分，培养在人工配制的培养基上，并给予合适的培养条件，使之发育形成完整植物体的过程。 2、植物组织培养的类型 （1）根据培养基的类型分为: 固体培养液体培养半液半固体培养 （2）根据培养材料（外植体类型）分为： 植株培养器官培养组织培养原生质体培养胚胎培养细胞培养 （3）按培养过程分： 初代培养继代培养生根培养 3、植物组织培养的一般工作流程 1.准备阶段：（1）查阅资料，制定培养方案；（2）清洗组培用器皿、工具； （3）配制所需试剂和培养基；（4）试剂、培养基及器皿、工具的灭菌。 2.外植体的选择与消毒； 3.初代培养； 4.继代培养； 5.生根培养； 6.炼苗移栽 4、植物细胞的全能性概念：指植物体的每个活细胞都携带有该物种的全套遗传信息，在适宜条件下，离体细胞都具有发育为一个完整植株的潜在能力。 注意：（1）活细胞（2）离体细胞（3）细胞全能性表达的难易程度取决于细胞的分化程度 5、细胞全能性的强弱表现： （1）植物细胞全能性根据细胞的性质不同由强到弱：营养生长中心＞形成层＞薄壁细胞＞厚壁细胞（木质化细胞）＞特化细胞（导管等） （2）植物细胞全能性根据所处的组织不同由强到弱：顶端分生组织＞侧生分生组织＞居间分生组织＞薄壁组织＞厚角组织＞输导组织＞厚壁组织 6、植物组织培养中全能性表达的条件： 1.无菌条件； 2.离体条件； 3.一定的营养物质； 4.植物生长调节物质； 5.适宜的外界条件。 7、胚性细胞的特点：未分化状态；细胞具有旺盛分裂能力；具有两极性 8、脱分化：指在一定条件下，已分化成熟的细胞、组织或器官恢复到未分化的分生状态，并进行细胞分裂形成未分化的细胞团，如愈伤组织的形成过程。 9、愈伤组织形成的三个时期： （1）诱导期又称启动期（最难）。（2）分裂期（3）分化期 10、优良愈伤组织的特征： （1）具有旺盛的增殖能力；（2）容易散碎；（3）具有高度的胚性或再分化能力，便于植株再生；（4）经过长期的继代保存而不丧失胚性。 11、再分化：指一定条件下，脱分化的细胞或组织转变为具有一定结构、执行一定功能的细胞团和组织，并进一步形成完整植株的过程，即由愈伤组织再生形成完整植株的过程。 12、植物形态建成的途径——全能性的实现途径——植物分化成苗的类型 （1）器官发生型（2）胚状体发生型（3）原球茎发生型（4）芽再生型 13、高压蒸汽灭菌锅——湿热灭菌灭菌要求：0.105 MPa的压力下，锅内温度达121℃，保持20~30min 干热灭菌：要求：160~170℃，1~2h，如有玻璃器皿则必须待温度降至50℃时，才能打开烘箱门，以防温度骤降玻璃破碎。 过滤灭菌：细菌过滤器、注射器，适用于高温高压下易分解的试剂，主要是植物生长调节物质，如IAA、GA3、ZT的灭菌。 14、培养基成分（1）.大量元素：包括：N、P、K、Ca、Mg、S、Cl等。 （2）微量元素：包括Fe，B，Mn，Cu，Zn，Mo，Co等。 15、植物生长调节剂： （1）生长素类：常用吲哚乙酸（IAA）、吲哚丁酸（IBA）、萘乙酸（NAA）、 2,4-二氯苯氧乙酸（2,4-D） （2）组培中的作用：①促进细胞伸长；②促进生根；③诱导愈伤组织的形成；
我的世界合成表 全
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或铁锭或金锭或钻石 铲木棍+木板或圆石 或铁锭或金锭或钻 石 用于挖泥土，草，沙，砾石，粘土块和雪比手快。只可以用 铲子来挖雪球。 锄木棍+木板或圆石 或铁锭或金锭或钻 石用于耕地，农场必用。 打火石铁锭+烁石制造火，发光 桶铁锭用来【存放和运输】水，熔岩和牛奶。 指南针铁锭+红石带玩家找到出生点。 空地图指南针+纸创建地区的卫星图片可以原来指引方向。 时钟金锭+红石显示太阳和月亮的位置，测定时间。 钓鱼杆木棍+线用于捕鱼。也可以用来拉小怪和其他实体。 剪刀铁锭用于收集树叶，草，藤蔓和羊毛。拿羊毛的速度比手还快。 火球火焰粉+煤/木炭+火药 剑木棍+木板或圆石或 铁或黄金或钻石????? 打怪的损害超过用手。?????????????????????? 弓木棍+线允许远程攻击使用的弓箭。箭??火石+木棍+羽毛配合弓一起允许远程攻击 头盔皮革或铁或金或钻石 或????????????火 皮革头盔，给你的保护黄金头盔，给你的保护铁头盔， 给你的保护钻石头盔，给你的保 护??????????????????链盔给你的保护? 胸甲皮革或铁或金或钻石 或???????????????? 火 皮革胸甲，给你的保护黄金胸甲，给你的保 护铁胸甲，给你的保护钻石胸甲，给你 的保护链甲，给你的保护 护腿皮革或铁或金或钻石 或???????????????? 火 皮革腿铠，给你的保护黄金腿铠，给你的保护铁腿 铠，给你的保护钻石腿铠，给你的保护链 腿铠，给你的保护 靴子皮革或铁或金或钻石 或???????????????? 火 皮革靴，给你的保护黄金靴，给你的保护铁靴，给你 的保护钻石靴，给你的保护链靴，给你的保护 矿车铁锭用于运输玩家或生物。???????????????????? 动力矿车熔炉+矿车用于推动其他的矿车。 运输矿车箱子+矿车用于运输货物沿着铁轨。 铁轨木棍+铁锭用于引导矿车的路线。
动物细胞大规模培养技术研究进展
仲恺农业技术学院学报,18(3):64~70,2005 Jou r na l o f Zhongkai University o f Agriculture an d Technology 文章编号:1006-0774(2005)03-0064-07 动物细胞大规模培养技术研究进展 吴方丽1,金伟波2,王保莉2,3,张涌3 (1.西北农林科技大学植物保护学院; 2.西北农林科技大学生命科学学院; 3.西北农林科技大学生物工程研究所,陕西杨凌712100) 摘要:利用动物细胞大规模培养技术可生产多种生物制品,为提高细胞活力和细胞生长密度,采用有多种添加成分的无血清培养基培养细胞,选择既有利于细胞生长又可提高培养细胞密度的微载体和条件温和、易操作、气体交换速度快的生物反应器,在线监控细胞生存环境和生理活动,减少培养过程中培养基的抑制因素,从而给细胞提供更好的生存环境;另外通过向细胞中导入抗凋亡基因,可减缓细胞凋亡的发生,提高细胞活性和蛋白产量;此外,在动物细胞大规模培养过程中,利用多孔微载体能高效、大量地增殖细胞,具有良好的应用前景. 关键词:动物细胞;培养环境;生物反应器;微载体 中图分类号:Q251文献标识码:A Research advance in large-scale culture of animal cells W U Fang-li1,JIN We-i bo2,W ANG Bao-li2.3,ZHANG Yong3 (1.College of Plant Protection; 2.College of Life Sciences; 3.Institute of Bio-Eng i neering, Northwest A&F University,Yangling712100,China) Abstract:Many biological products were manufactured by means of large-scale culture of animal cells.To increase cell-specific productivity and cell density,serum-free media supplemented with several nutriments were used for cell culture,and microcarriers were chosen in favor of cell growth and high cell density.Biore-ac tors with simple manipulation,good qualification and aeration were adopted.More suitable conditions for cell gro wth could be given through on-line supervising the environment for cell gro wth and restraint factors in cell culturing.Furthermore,the anti-apoptosis genes using recombinant DNA technology can increase cell viability and productivity.Porous microcarriers was emphasized in large-scale culture of animal cells. Key words:animal cell;culture environment;bioreac tor;microcarrier 组织培养技术是19世纪末由胚胎学技术衍生而来.近一个世纪以来,从能维持组织存活到生长出新细胞,从少数组织到各种组织细胞的培养,从精细的实验室培养技术到大规模的生产工艺,组织培养技术已成为生物制品生产以及基因工程等领域必不可少的工具之一.目前,动物细胞大规模培养技术水平的提高主要集中在培养规模的进一步扩大、细胞培养环境的优化、生物反应器的改良、改变细胞特性、提高产品的产出率与保证其质量上. 在动物细胞大规模培养的过程中,最根本的是使细胞的培养条件达到最优化,尽可能消除或减轻环境对细胞的影响,维持细胞高存活力和高效表达.若以生产蛋白为目的的体外细胞培养,同时还要充分考虑细胞表达产物的后续纯化. 收稿日期:2005-04-18 基金项目:国家高技术研究发展计划(863)计划资助项目(2001AA21308);西北农林科技大学重点专题基金资助项目. 作者简介:吴方丽(1979-),女,河南睢县人,助教,博士.
(完整word版)2015 动物细胞培养技术实验报告
一、实验目的 1、学习并掌握动物细胞培养的无菌操作技术。 2、学习并掌握细胞传代培养的方法。 3、学习并掌握用倒置荧光显微镜观察细胞细胞形态。 二、实验原理 细胞培养（cell culture）：细胞在体外条件下生长，细胞不再形成组织。 动物细胞培养（animal cell culture）就是从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞（使用胰蛋白酶或胶原蛋白酶）然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。由于细胞具有生长和自我复制的能力，为细胞体外培养和研究提供可能。 动物细胞培养可分为原代培养和传代培养。 原代培养（primary culture）即直接从动物机体分离、获得组织细胞，在无菌条件下，用胰蛋白酶消化或机械分散等方法，将动物组织分散成单个细胞开始首次培养长出单层细胞的方法。 传代培养（subculture）当细胞生长增值达到一定密度，用胰蛋白酶将细胞消化分散成单细胞，将细胞转移到新的培养皿中扩大培养的方法。 高等生物是由多细胞构成的整体，在整体条件下要研究单个细胞或某一群细胞在体内的功能活动是十分困难的，但如果把或细胞拿到体外培养、增殖并进行观察和研究，则方便简单的多。被培养的动物细胞是非常好的实验对象和实验研究材料，对体外培养的活细胞进行研究可以帮助人类探索防治各种疾病途径和机制，也可以人为地诱导和改变细胞的遗传性状和特性，因此，动物细胞体外培养技术是研究细胞分子机制非常重要的实验手段，被广泛应用于医学、生物技术、基因工程等研究领域。 三、细胞培养相关设施及材料 1、细胞培养室 无菌操作区：只限于细胞培养及其它无菌操作，与外界隔离。 孵育区：培养箱设定的条件为37℃，5%CO2。 制备区：培养液及有关培养用液体的制备，液体制备后应该在净化工作台进行过滤除菌。 储藏区：包括冰箱、干燥箱、液氮罐等。 清洗区和消毒灭菌区：清洗区为相对污染区，消毒灭菌区与清洗区分开。 2、细胞培养常用基本设施： 荧光显微镜、超净工作台、孵箱、电热鼓风干燥箱、冰箱、液氮罐、消毒器、恒温水浴槽、滤器等。 细胞培养常用器皿：培养瓶、培养板、培养皿，玻璃瓶、吸管，离心管、冻存管，注射器，烧杯、量筒等。 3、细胞培养用品的清洗、消毒 新玻璃器皿要用5%稀盐酸浸泡，以中和其表面碱性物质：刷洗： 硫酸清洁液浸泡：浓硫酸+重铬酸钾+蒸馏水； 冲洗：流水冲洗15-20次，蒸馏水冲洗3次，三蒸水漂洗1-3次。 所有需灭菌的器械、物品灭菌前均需包装，防止灭菌后污染。使用时放入超净工
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今天小编给大家带来我的世界合成表大全，本篇详细介绍了我的世界各个物件完整的合成配方列表，希望这篇minecraft合成配方列表能给帮助到大家。 游戏介绍：Minecraft我的世界是一款风靡全球的的3D第一人称沙盒建造游戏，在游戏中玩家可以自由的操作一个建筑工人通过各种方块的摆放和破坏，来建造一个属于自己的世界。游戏需要玩家充分发挥自己的想象力和创造力，像玩乐高积木一样组合与拼凑，建造出小木屋、城堡甚至城市。 我的世界合成表配方大全详细解析： 基础合成 名称材料（配方）合成示意图描述
木板Woo den? Pla nks 原木Wood 基本的建筑材料. 木棍Stick s 木板Wooden Plank s 用来合成火把,弓箭, 栅栏,木牌,工具和武 器. 火把Torc hes 煤碳和木棍Coal & Stick 提供照明,避免刷怪, 融化雪和冰块. 工作台Cr afting Ta ble 木板Wooden Plank s 右键点击展开一个3X 3的合成台. 熔炉Furn ace 圆石Cobblestone 用来烧制烹饪物品. 箱子Ches t 木板Wooden Plank s 存放物品、迷路时暂 存身上物品,两个箱 子并排放可以增加存 放空间. 梯子Ladd ers 木棍Sticks 用来爬墙.
栅栏Fenc e 木棍Sticks 不跨越栅栏,别墅内 的隔栏(装饰品)、防止 跌落. 船Boat 木板Wooden Plank s 在水中行驶. 木质台阶 Wooden Slabs 木板Wooden Plank s 用于建造台阶、屋檐、 窗台等. 石质台阶Stone Sla bs 石头,砖,石砖,砂石, 圆石,地狱砖,石英St one or Brick or St one Brick or Sands tone or Cobbleston e or Nether Brick or Quartz 用于建造台阶、屋檐、 窗台等. 告示牌Si gn 木板和木棍Wooden Planks & Stick 门牌、路标、告示牌、 贴在楼梯两侧可组成 沙发. 门Doors 木板或者铁锭Wood en Planks or Iron Ingots 木门能够用手打开或 者红石系统打开. 铁 门只能用红石系统打 开. 我的世界合成表配方大全详细解析： 方块合成
动物组培
贴壁细胞的种类及其形态特点 成纤维细胞型：梭状 上皮细胞型：铺路石状、可形成膜片组织、有时“拉网”现象 游走细胞行：散在生长、胞质常形成突起、呈活跃游走或变形运动、最易从植块游离出来多形细胞型：形状不规则、胞质和突起两部分 原代培养：从开始接种到第一次传代以前（1-4周）。 传代培养：无论是否稀释，将细胞从一个培养瓶转移或移植到另一个培养瓶 细胞系：原代培养物经初次传代后即为细胞系 连续细胞系：具有无限生存能力的细胞系。也称永久细胞系、已建成的细胞系。转化细胞系和癌细胞系即为连续细胞系 细胞的克隆化操作：将单个细胞在一定支持物上增殖培养而产生细胞群落的过程，也称单个细胞分离 判断细胞是否需要传代的依据：一则细胞之间相互接触而发生接触性抑制，生长速度减慢甚至停止；另一方面也会因营养物不足和代谢物积累而不利于生长或发生中毒。 细胞的冻存： 将体外培养细胞悬浮在加或不加冷冻保护剂的溶液中，以一定的冷冻速率将至零下某一温度，并在此温度下对其长期保存的过程。 非玻璃化冻存：冷冻保护液在冻结后形成规则的晶体（冰晶），也称晶体化冻存法 玻璃化：冷冻保护液在冻结后不形成冰晶，而是玻璃化 细胞冻存与复苏原则及其理论依据 原则: 缓冻！原因: 避免冰晶损害细胞 细胞外渗现象：-5~ -15度时，细胞外液先结冰而细胞内未结冰，内部水分会发生外渗。可避免细胞内因形成冰晶而膨胀损害细胞 原则：速融！必须将冻存在-196度液氮中的细胞快速融化至37度，使细胞外冻存时的冰晶迅速融化，避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶，对细胞造成损害。 细胞不同运输情况如何选择合适的保存方法 短时贴身：倒出培养液，贴身运输；适合适合几小时内的短途 液氮/干冰保存法：麻烦；时间也不宜过长 充液法：生长1/3-1/2时，换成新培养液至颈部包装运输4-5天到达后弃培养液留正常量，次日传代 血清的灭能如何操作：使用前56℃灭能30min-20 ℃保存 培养基的种类：天然培养基 合成培养基：基本培养基、无血清培养基、无蛋白培养基 胰酶的使用注意事项 使用注意：?使用浓度0.1-0.25%?不可含有血清（可用来终止）?不可含有Ca2+、Mg2+离子?不可高压灭菌 细胞计数如何操作 生长晕的测量：使用投影描画仪，显微镜下把组织块轮廓与生长晕外周轮廓画在同一张纸上细胞浓度计数：公式：细胞数/ml = （四角4个大方格数目总和/4）*104 绘制生长曲线：横坐标：培养时间(天) 纵坐标：细胞密度 活细胞染色如何操作：体外条件下对组织或细胞进行染色而不影响其生命活动的方法。1）吸去培养液，洗涤 2）加入活体染料，在培养箱内静置染色半小时或者1-2小时 3）在显微镜下观察
《我的世界》合成表大全
基本合成 合成以后名称 合成物品名称 输入?输出 使用介绍 木材 木头 用作建筑材料，可以制作成许多东西物品。 任何形式的树块，都会拿到木头。 棍子 木材 可以合成火把，箭头，标志，梯子，围栏，处理工具和武器。 火把 棍子+煤（或木炭） 用于创建光。也可以融化雪和冰。 物品合成台 木材 创建3x3的合成台 炉 鹅卵石 可以冶炼矿物。
箱子 木材 用于存储。将两个箱子排在一起有双倍的 容量。 块合成 合成以后名称 合成物品名称 输入?输出 使用介绍 铁块 金块 钻石 块 青金石块 铁 金 钻石 青金石（染料） 使用铁，金，钻石，蓝宝石合成可以 。摆设也可以储存建造的时候也可以加入使用。 萤石 萤石粉 用于创建光明。可以融化 雪与冰，可在水下也可以使用。 羊毛 线 作为建筑材料，可以使用染料着色。这个合成是不建议的，因为羊毛，可以很容易地从羊获得。 TNT 炸药 火药+砂 用于引起爆炸。
板 石头 木材 鹅卵石 砂岩 砖 石砖 用于长的楼梯。在顶部放上同样的砖块，将创建一个正常大小的双板块，木头半砖也可以放火。 楼梯 木材 砖 鹅卵石 石砖 幽冥砖 用于紧凑型楼梯。 雪块 雪球 作为建筑材料使用。 粘土块 粘土 用于存储粘土球，或作为建筑材料使用。 砖（块） 粘土砖 作为建筑材料使用。 石砖 石头 作为建筑材料使用。
书柜木材+书作为装饰，或用于给结界 表知识。 砂岩沙子作为建筑材料使用。 南瓜灯南瓜+火把用于创建光明。融化雪与 冰，可在水下使用。 工具合成 合 成 以 后 名 称 合成物品名称输入?输出使用介绍 斧头棍子+木材或 鹅卵石或 铁 或 黄金 或 钻石 用于砍木材相关的块，比手工快。 除了【木头半砖】
动物细胞大规模培养生产蛋白的工艺选择
动物细胞大规模培养生产蛋白的工艺选择 3 米力陈志南 33 (第四军医大学细胞工程中心国家863西安细胞工程基地西安710032 摘要目前全世界蛋白治疗药物的迅速增长和市场需求已远远超过了现有生产能力。动物细胞 规模化生产重组蛋白和抗体的工艺选择可考虑使用当前较成熟的工业化支持技术平台,以缩短产品工艺研发的时间,加快工业化进程。当前被FDA 批准的生物技术产品以及公开发表的生产工艺占有主流优势的是搅拌式生物反应器悬浮培养,工艺设计是流加或灌流培养。其大规模细胞培养生产所面临的挑战是获得最大生产力的同时注重维持产品的质量;去除所有培养环境中外源因子的污染,更为精确有效的工艺控制手段,规模化培养中氧气的限定与溶解C O 2浓度累积的控制等。关键词动物细胞大规模培养生产蛋白收稿日期:2003204210 3国家重大科技专项(2002AA2Z 3441 33通讯作者,电子信箱:chcerc2@https://www.wendangku.net/doc/70563431.html, 动物细胞大规模培养已成为生物制药领域最重要的关键技术之一,并以其研究的深入和进展推动生物技术产业的迅速发展。专家预言:蛋白治疗药物如糖蛋白,抗体和多肽药物仅仅只是开始进入市场,预计在下一个10年或20年会有一个更为快速的发展。蛋白治疗药物的迅速增长和市场需求 已远远超过目前全世界的生产能力[1] 。
由于动物细胞表达产品需求的紧迫性和生产工艺的复杂性,大大促进了该技术的深入研究与发展。80年代初首先兴起了生物反应器研究,许多形式的生物反应器被用于哺乳动物细胞培养工艺的研究,如中置搅拌系统,固定单层培养和中空纤维系统等。近10年的研究在解决动物细胞大规模培养的关键屏障技术,如限制性氧气的提供,消耗产物的积累,成熟精确的过程控制,剪切力的敏感性,和贴壁细胞培养规模化放大等问题都取得可喜 的进展[2] 。目前动物细胞工业化生产中主要致力于提高单位细胞的生产力,确保产品质量和过程工艺设计的一致性,减少工业化生产中的污染与自动 化控制等[3] 。以转基因动物和转基因植物为载体的重组蛋白生产在生物制药领域仍具有重要的地位,特别对于每年100kg 的超大规模需求量生产。 目前被美国FDA 批准的生物技术产品和已公开发表的生产工艺,都是较为成熟的工艺,并不代表当前动物细胞研究发展的趋势。因此动物细胞大规模培养生产蛋白或抗体的工艺选择,应综合考虑产品特点、工艺难度与工艺研发时间,以加速其产品产业化的进程。 以下就目前动物细胞大规模培养成熟工艺与当前研究的问题、对策作一简述。 1目前美国FDA 批准的产品与生产工艺 1996年1月至2002年12月美国获得成功批 准的不同的治疗剂和诊断剂产品共31种,其中用哺乳动物细胞培养生产的就有21种(美国FDA 网页http :ΠΠw w w.fda.g ov 。蛋白治疗药物有单克隆抗体治疗乳腺癌的Herceptin ,免疫球蛋白肿瘤坏死因子(T NF 受体融合蛋白治疗类风湿性关节炎的Enbrel 和灭活的甲肝疫苗Vaqta 等。动物细胞培养技术已经成为一个受到普遍信任的产业化生产技术,并逐步形成商业化操作水平。按技术应用专利的分类,我
我的世界合成表大全 合成攻略详解
我的世界合成表?全 合成攻略详解 今天?袋巴??编xrump给?家带来我的世界中合成表?全！我的世界是?款?常好玩的?机游戏，游戏中我们有着?量需要合成道具和材料，下?xrump就来给?家详细介绍?下！ 由于本篇?章内容过多，?家可以从上?的导航栏进?对应模块，CTRL+F来寻找对应的材料！ 我的世界合成表?全 基础合成?块合成?具合成防具合成道具合成 ?物合成其他合成染料合成??合成炼?合成 基础合成 基本的建筑材料 右键点击展开?个 的合成台
箱?Chest ?板 Wooden Planks 存放物品、迷路时暂存 ?上物品,两个箱?并排 放可以增加存放空间. 梯?Ladders ?棍 Sticks ?来爬墙. 栅栏Fence ?棍 Sticks 不跨越栅栏,别墅内的隔 栏(装饰品)、防?跌落. 船Boat ?板 Wooden Planks 在?中?驶. ?质台阶Wooden Slabs ?板 Wooden Planks ?于建造台阶、屋檐、 窗台等. ?质台阶Stone Slabs ?头,砖,?砖,砂?,圆?, 地狱砖,?英 Stone or Brick or Stone Brick or Sandstone or Cobblestone or Nether Brick or Quartz ?于建造台阶、屋檐、 窗台等. 告?牌Sign ?板和?棍 Wooden Planks & Stick ?牌、路标、告?牌、 贴在楼梯两侧可组成沙 发. ?Doors ?板或者铁锭 Wooden Planks or Iron Ingots ??能够??打开或者 红?系统打开. 铁?只能 ?红?系统打开. 我的世界合成表?全
动物细胞培养及胚胎培养培养基的要求
动物细胞培养时对培养基的要求： 培养基按其来源可分为天然培养基和合成培养基。天然培养基的营养成分与细胞在体内所需条件比较接近，但就细胞在体外生存的环境来说，合成培养液也有其独特之处，譬如成分便于控制和标准化。体外培养的细胞直接生活于培养基中，无论何种培养基都应该能满足细胞生长所需的营养与生理的基本要求。 (1)营养成分： 1）氨基酸合成培养液中的氨基酸以12种必需氨基酸为主，这些氨基酸不能由细胞自身合成，必需由培养液供给。在氨基酸的成分中谷氨酰胺的作用特别重要，细胞需要谷氨酰胺合成核酸和蛋白质，在配制各种培养液中应补加一定量的谷氨酰胺。 2）单糖葡萄糖是最常用和最好的单糖 3）维生素维生素在细胞代谢过程中必不可少，主要可以提供辅酶和辅基。生物素、叶酸、泛酸、核黄素、维生素B12等等 4）其他成分：细胞生长过程中除需钠、钾、钙、镁、氮和磷等基本元素外，还需要一些微量元素，如铁、锌、硒、铜、锰、钼等。此外，为优化细胞生存环境，合成培养基中有时还添加些其他成分，包括核酸降解物、抗氧化剂等。 （2）促生长因子及激素 各种激素、生长因子对于促进细胞生长、维持细胞功能、保持细胞的状态具有十分重要的作用。如胰岛素能促进细胞利用葡萄糖和氨基酸，泌乳素可促进乳腺上皮细胞生长的作用。各种生长调节因子的作用更加明显并具有特异性。 （3）pH 大多数细胞的适宜pH为7.2-7.4，偏离此范围对细胞将产生有害影响。造成培养基pH 波动的主要物质是细胞代谢产生的二氧化碳。解决这一问题可采取两种方法：一是用具有一定缓冲能力的培养基，如使用NaHCO3-CO2缓冲系统，二是采用开放式培养的方法，使细胞代谢产生的二氧化碳及时逸出培养皿。 （4）渗透压 细胞必须生活在等渗的环境中，大多数培养细胞对渗透压有一定的耐受性。 注：天然培养基主要指来自动物体液或利用组织分离提取的一类培养基，如血浆、血清、淋巴液、鸡胚浸出液等。 合成培养基是人工配制的培养基，给细胞提供一个近似体内生存的环境，又便于控制和标准化的体外生存环境，但合成培养基尚未成为十分完全的培养基。只能维持细胞不死，不能促进细胞增殖生长，使用时还需要添加一定比例的天然培养基（如小牛血清） 早期胚胎的体外培养 体外受精的早期胚胎在体外发育的中，往往会停止在某一阶段不再发育，这种现象称为：发育阻滞。此外体外培养环境下不能及时清除有害物质（如细胞内H2O2），不断积累也会造成细胞中毒，使胚胎阻滞。 发育阻滞是体外培养中的一个主要障碍，通过改进培养液成分和建立体细胞共同培养体系，在不少动物中已克服，使胚胎顺利发育到囊胚阶段。 1.培养条件： （1）能量底物 胚胎培养液一般不含葡糖糖，代之以乳酸和丙酮酸为能量供应物。研究表明早期胚胎对葡萄糖的利用是有限的，而主要以乳酸和丙酮酸为能量代谢的底物，所以，培养液中低剂量葡萄糖的添加是必需的。
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木材(Wooden Plank) 需要物品：原木(Wood)×1 木棒(Stick) 需要物品：木材(Wooden Plank)×2 火把(Torch) 需要物品：木棒(Stick)×1 + 煤(Coal)×1 用途：照明、避免刷怪
工作台(Crafting Table) 需要物品：木材(Wooden Plank)×4 用途：合成物品 炉子(Furnace) 需要物品：石材(Cobblestone)×8 用途：烧制 箱子(Chest) 需要物品：木材(Wooden Plank)×4 用途：存放物品、迷路时暂存身上物品Tip：两个箱子并排放可以增加存放空间
矿物方块(Ore Block) 需要物品：铁块(Iron Ingots)或金块(Gold Ingots)或青金石(Lapiz Lazuli Dyes)或钻石(Diamond)×9 地狱萤石(Glowstone Block) 需要物品：地狱萤石碎块(Glowstone Dust)×9 用途：照明、装饰 羊毛(Wool)[不推荐此合成] 需要物品：蛛丝(String)×9
炸药(TNT) 需要物品：沙子(Sand)×4 + 火药(Gunpowder)×5 用途：爆破、开矿 平板(Slab) 需要物品：砂岩(Sand Stone)或木材(Wooden Plank)或石材(Cobblestone)或石头(Stone)×3 用途：台阶、屋檐、窗台等 楼梯(Stairs) 需要物品：木材(Wooden Plank)或石材(Cobblestone)×6 用途：楼梯、屋顶等
雪块(Snow Block) 需要物品：雪球(Snowballs)×4 黏土块(Clay Blocks) 需要物品：黏土(Clay)×4 砖块(Brick)
固定化动物细胞大规模培养技术研究进展
固定化动物细胞大规模培养技术研究进展 石 凯1 熊晓辉1 许建生 2 (1南京工业大学制药与生命科学学院,南京,210009;2苏州农业职业技术学院,苏州,215008) 摘 要 介绍了固定化动物细胞培养过程中主要的技术及其进展,包括吸附、包埋、中空纤维、微囊化等。并在此基础上探讨了固定化动物细胞培养中尚存在的问题以及未来的发展方向。关键词 固定化,动物细胞培养,吸附,微载体,包埋,中空纤维,微囊化 中图分类号 Q 813.1+1 文献标识码 A 文章编号 1000-6613(2002)08-0556-04 固定化技术作为实现动物细胞大规模培养的重要途径,相对悬浮培养而言具有细胞生长密度高、抗剪切力和抗污染能力强、产物易于收集和分离纯化、对贴壁型和非贴壁型细胞都适用的优点,因此在动物细胞的大规模培养上得到越来越广泛的应用,相继出现了微载体、中空纤维及微囊化等多种固定化培养技术。本文作者将结合动物细胞的培养特性,介绍目前动物细胞大规模培养中的固定化技术。 1 动物细胞的特点及生长特性 动物细胞虽可像微生物细胞一样,在人工控制条件的生物反应器中进行大规模培养,但其细胞结构和培养特性与微生物细胞相比,有显著差别[1]:①动物细胞比微生物细胞大得多,无细胞壁,机械强度低,对剪切力敏感,适应环境能力差;②倍增时间长,生长缓慢,易受微生物污染,培养时须用 抗生素;③培养过程需氧量少(氧传质系数k L a 大于10h -1即可满足每毫升107个细胞的生长);④培养过程中细胞相互粘连以集群形式存在;⑤原代培养细胞一般繁殖50代即退化死亡;⑥代谢产物具有生物活性,生产成本高,但附加值也高。 动物细胞根据其在体外培养时对生长基质的依赖性差异,分为锚地依赖性和非锚地依赖性。大多数分泌药用蛋白的动物细胞属于锚地依赖性细胞,即要有足够地支持细胞贴壁的表面,又要保持均匀悬浮状态。固定化技术就是解决这两个问题的有效途径。 2 固定化培养方法 在传统的固定化酶技术中,常采用戊二醛、聚丙烯酰胺、聚氨酯等作为固定化细胞载体。但在动物细胞培养中,培养细胞的目的不仅仅要求催化活 力,更重要的是利用细胞来合成和分泌蛋白,因此如何保持细胞的活性显得尤为重要。由于动物细胞的极度敏感性,上述这些固定化方法会对动物细胞 产生毒性,另外多糖(如卡拉胶等)由于具有很高的离子强度也会对细胞产生毒害。故在动物细胞培养中要考虑使用较温和的固定化方法,如吸附、包埋、中空纤维或胶囊化。2.1 吸附2.1.1 多孔陶瓷 KC.Biologicals (USA )公司开发了一种完全自 动化的细胞培养系统[2]。该系统的核心是陶质矩形蜂窝状生物反应器。反应器构型是一圆筒内装置有许多陶质矩形通道的蜂窝状圆柱体。通道长30cm ,截面积是长方形,约为1mm 2,壁厚0.12mm ,可提供4.25m 2的生长表面积。这种结 构的生物反应器,既可用于培养悬浮生长的细胞,又可用于培养贴壁依赖性细胞。 该系统可以连续化生产蛋白质。由于产物直接分泌到培养基中,给分离纯化带来方便。而且细胞不用从培养基中分离,所以不必考虑梯度问题;当培养基高速循环时,可以保持相对恒定的营养物和氧浓度。增加套数即可实现放大。2.1.2 微载体 微载体细胞培养法是一种用于培养锚地依赖性细胞的大规模培养技术,由Van Wezel [3]于1967年首创。这种培养技术是在生物反应器内加入培养 液和一种对细胞无毒害作用的材料支撑的颗粒(微载体),使细胞在微载体表面附着和生长,并通过不断搅拌使微载体保持悬浮状态。培养液中大量的 收稿日期 2001-12-07;修改稿日期 2002-03-05。 第一作者简介 石凯(1977—),男,硕士研究生。电话025-*******-3716。 ? 655? 2002年第21卷第8期 化 工 进 展 CHEMICAL INDUSTR Y AND EN GIN EERIN G PRO GRESS
植物组织培养 (2)
植物组织培养：是指在无菌和人工控制的环境条件下，利用人工培养基，对离体的植物胚胎、器官、组织、细胞及原生质体进行培养，使其再生细胞或完整植株的技术。又称为植物离体培养 离体生态学：是指研究离体培养环境条件控制的科学，其研究对象是培养基、植物材料和人工环境条件 外植体：用于离体培养的那部分植物器官、组织或细胞 愈伤组织（callus）：是指外植体因受伤或在离体培养时，其细胞进行活跃的分裂增殖而形成的一种无特定结构和功能的组织 植物组织培养的特点 1.组培技术是无菌操作技术。 2.组培材料处于完全的异养状态。 3.组培材料可以是离体状态的器官、组织、细胞或原生质体。 4.组织培养物可以形成克隆（clone，无性繁殖系），也可以进行茎芽增殖或生根 5.组培容器内的气体和环境气体可通过封口材料进行交换，相对湿度通常是几乎100％，因此，组培苗叶片表面一般都无角质层或蜡质层，且气孔保卫细胞功能缺乏，气孔始终都是张开的。 6.组培的环境温度、光照强度和时间都是人为设定的，其参数可调 植物组织培养的研究类型 组织培养 器官培养 胚胎培养 细胞培养 原生质体培养 植物组织培养的研究任务 研究离体培养条件下，细胞、组织或器官所需营养条件和环境条件，细胞、组织或器官的形态发生和代谢规律，植物脱毒方法和机理，植物特别是一些难繁植物的大量快速繁殖方法，细胞融合方法和机理，再生个体的遗传和变异，种质资源的离体保存机理和方法等 德国植物学家Schleiden和动物学家Schwann于1838-1839年提出的细胞学说 德国植物学家Haberlandt于1902年提出了植物细胞具有全能性 李继侗和沈同1933年成功培养了银杏的胚。 1952年，Morel和Martin提出了植物脱毒（virus free）技术 Guha和Maheshwari等——花药培养 Cocking等-原生质体培养
植物组织培养习题及答案
0．填空 1.根据培养的材料,植物组织培养分:愈伤组织培养、(器官培养、细胞格养、原生质体培养(悬浮培养 2.植物组织培养的发展分为三个阶段:萌芽阶段、奠基阶段，快速发展和快速发展和应用阶段 3，1902年,Haberlandt提出了植物细胞“全能性”学说,1934年, White出版了《植物组织培养手册》培养等类型从而使植物组织培养为一门新兴学科。 一．填空、 1，组织培养实验室必要的设备有超净工作台、高压灭菌器、调机、_天平、显微镜、_蒸馏水，发生器，酸度计 养基成分主要包括①无机营养成分、②有机营养成分)、_③植物生长调节物质、_④碳水化合物、⑤其它物质 3、培养基最常用的碳源是_蔗糖,使用浓度在1%-5%常用3% 4、糖在植物组织培养中是不可缺少的,它不但作为离体组织棱以生长的碳源而且还能维持培养基渗透压 5、在固体培养时琼脂是使用最方便、最好的凝固剂和支持物般用量6-10g/L之间 6.驯化的目的:在于于提高试管苗对外界环境条件的适应性,提高其光合作用的能力,促使试健壮,提高苗的移裁成活 7、生长素/细胞分裂素的高低决定着外植体的发育方向,其比值高:有利于根的形成和愈伤组织的形成:低:有利于芽的形成 8、培养基灭菌一般在108kPa的压力下,锅内温度达_121℃C,维持_20-30min、 9.选择外植体时应选择①选择优良的种质、②选健壮的植株、③选最适的时期和④选取适宜的大小。 10、诱导胚状体比诱导芽的优点:(1)数量多、(2)速度快、_(3)结构完整 11、试管苗的生态环境:高温且恒温、高湿、弱光、无菌 12、培养基中加入活性炭的目的:利用其吸附能力,减少一些有害物质的影响大 13、筛选培养基的方法:单因子试验法、多因子试验法、广谱实验法 14、植物培养技术:灭菌、接种种、培养、驯化四个环节 15、试管苗的驯化注意:基质、温、光、水、肥、气的综合管理 二．填空 1.绝大多数培养植物再生植株时都先经过愈伤组织阶段 2.愈伤伤组织形成大致经历诱导期、分裂期一和分化期三个时期 3、愈用植物生长调节物质时要注意:种类和浓度生长素和细胞分裂素的比值4.愈伤组织的形态发生方式主要有不定芽方式和胚状体方式 5.组织培养细胞再分化包括四个水平:细胞水平的再分化、组织水平的再分化、器官水平的再分化(器宣发生)和植株水平的分化 三．填空: 1.植物器官培养主要是指植物的根、茎、叶、花器和幼小果实的无菌培养。 2、茎尖培养根据培养目的和取材大小分为茎尖分生组织培养和普通茎尖培养两种类型。前者主要是对茎尖长度不超过,最小只有几十微米的茎尖进行培养,目的是获得无病毒植株:后者是对几毫米乃至几十毫米长的茎尖、芽尖及侧芽的培养,目的是离体快繁 3.不定芽产生的途径一是从外植体上直接产生二是从由外植体诱导产生的愈伤组织上产生 4.离体叶培养是指包括叶原基、叶栖、叶鞘、叶片、子吐等叶组织的无菌培养 5.在离体叶培养中,6-BA和KT利于芽的形成;24D利于愈伤组织的形成 四．填空 1、胚胎培养包括幼胚培养、成熟胚培养、胚乳培养、胚珠培养以及子房培养 2、离体胚的培养分为二种类型:。成熟胚培养和_幼胚培养六
动植物细胞的大规模培养
动植物细胞的大规模培养 动物细胞培养简介 所谓动物细胞培养是指离散的动物活细胞在体外人工条件下的生长、增值过程。在此过程中，细胞不再形成组织。动物细胞培养是生产许多临床和医学上重要生物制品的一种必不可少的方法，这些生物制品包括疫苗、干扰素、激素、生长因子和单克隆抗体等，既推动了生物学和医学的发展，又带来了巨大的社会效益和经济效益。目前, 动物细胞大规模培养技术水平的提高主要集中在培养规模的进一步扩大、细胞培养环境的优化、生物反应器的改良、改变细胞特性、提高产品的产出率与保证其质量上。 动物细胞培养的环境 影响动物细胞培养的主要因素有温度、pH值、CO2 、DO、葡萄糖、乳酸、氨、甲基乙二醛、培养基成分等。一般情况下，人和哺乳动物细胞的最适温度为37℃，pH值在7.2-7.4之间，CO2 水平为4-10%, DO维持在20-50%，葡萄糖是细胞培养过程中的能量的主要来源，需要维持在一定水平。乳酸、氨、甲基乙二醛等是动物细胞培养中的主要限制因素。在实际应用中，降低甲基乙二醛的浓度是通过降低葡萄糖用量来实现的。 培养基 用于动物细胞的培养基可以分为天然培养基和合成培养基两大类。 天然培养基的优点是营养成分丰富、培养效果良好；缺点是成分复杂、个体差异大、来源有限。天然培养基的种类很多，包括血清、血浆、组织浸出液、水解乳蛋白等。其中血清是最常用的天然培养基。 合成培养基的优点是既能给细胞提供一个近似于体内的生存环境，又便于控制和提供标准化体外生存环境。然而合成培养基中还是需要加入一定量的天然培养基予以补充。 培养方法 动物细胞的体外培养有两种类型：贴壁依赖性细胞和非贴壁依赖性细胞。 悬浮培养： 悬浮培养主要用于非贴壁依赖性细胞，是指细胞在培养器中自由悬浮生长的过程。对于小规模培养可采用转瓶和滚瓶培养，大规模培养则可采用发酵罐式的细胞培养反应器。悬浮培养对设备的要求也比较简单。 贴壁培养： 贴壁培养是动物培养的一种重要方法，是指必须贴附在固体介质表面上生长的细胞培养，主要用于非淋巴组织和许多异倍体等贴壁依赖性细胞的培养。 优点： 1.细胞紧密黏附于固相表面，可直接倾去旧培养液，清洗后直接加入新培养液，容易更换培养液； 2.因细胞固定载体表面，不需过滤系统，容易采用灌注方式培养，从而达到提高细胞密度的目的； 3.当细胞壁贴于生长基质时，细胞将更有效的表达一种产品； 4.同一设备可培养多种细胞，并根据需要采用不同的培养液和细胞的比例； 缺点： 1.细胞繁殖贴壁后不易消化下来，培养的扩大比较困难； 2.培养设施占地面积大，设备投资大；