胞间连丝的观察
实验一胞间连丝的观察
一、实验目的：
观察植物细胞间的胞间连丝，进一步认识细胞并不是“独立王国”，胞间连丝为细胞间的物质运输与信号传递起桥梁作用。
二、实验用具：
1、器材：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子等
2、材料：红辣椒、玉米
三、实验内容：
1、红辣椒表皮细胞临时装片制作：观察胞
间连丝，剪取一小块红辣椒，用小刀小
心刮除果肉，留下一层极薄的表皮，置
于载玻片上，滴一滴清水，盖盖片，吸
水后即可。
2、玉米籽粒糊粉层临时装片制作：玉米籽
粒用镊子剥去表皮后，露出糊粉层，制
作徒手切片，制作时刀口与糊粉层平行，把切好的薄片置于载玻片上，加一滴清
水后盖片，即可观察。
3、柿子胚乳细胞永久装片的观察。
四、注意事项：光线不要太亮
五、作业：
1、完成实验报告，并绘胞间连丝图。
2、胞间连丝属于哪种细胞连接，有何生物学功能？
实验二植物细胞原生质流动的观察
一、实验目的
在活细胞中，原生质流动是细胞活力强弱的重要指标。通常认为，原生质流动是原生质中微丝肌动蛋白与肌球蛋白相互滑动的结果，这个过程要消耗能量，也受光照、温度、渗透压、机械损伤等的影响。通过实验认识细胞原生质流动的现象，并了解其影响因素。
二、实验用品：
1、材料：黑藻
2、器材：显微镜、载玻片、盖玻片等
三、实验内容：
1、黑藻叶片细胞质流动的观察
取黑藻叶片制作临时装片并观察，注意流速，并记录。
2、用温水浸泡，再观察其流动速度有无改
变，并记录。
3、用照明灯照射一段时间后再观察其流动速度有无改变，并记录。
四、作业：
1、如何理解细胞原生质流动的原理？
2、细胞质环流有何特点？
3、图示细胞质环流。
实验三动物细胞线粒体的超活染色与观察一、实验原理：
活体染色是指对生活有机体的细胞或组织能着色但又无毒害的一种染色方法。线粒体是细胞进行呼吸作用的场所。詹纳斯绿B可专一性地对线粒体进行超活染色，这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态（即有色状态）呈现蓝悬浮绿色，而线粒体周围的细胞质中，这些染料被还原为无色的色基。
二、实验器材：
显微镜、恒温水浴锅等，1%詹纳斯绿B 三、实验内容：
（一）线粒体超活染色
1、取清洁载玻片放在37℃恒温水浴锅的金
属板上，滴2滴詹纳斯绿B染色液。2、用牙签取口腔上皮细胞放置于染色液的液滴中，染色15分钟（注意：染色液不能干燥）盖片，吸出多余的染色液即可观察，线粒体为蓝绿色颗粒或短棒状的结构。
（二）永久装片的观察
1、线粒体
2、中心体
四、作业：实验报告、并绘线粒体形态图
实验四叶绿体的分离与观察
一、实验原理：
组织匀浆后悬浮在等渗介质中进行差速离心，是分离细胞器的常用方法。一个颗粒在离心场中的沉降速率取决于颗粒的大小，形状和密度，也同离心力以及悬浮介质的粘度有关。在一定的离心场中，同一时间内，密度不同，大小不同、沉降速度不同，依次增加离心力和离心时间，能够使非均一悬浮液中的颗粒按其大小、密度先后分批沉降在离心管底部，分批收集即可获得各种亚细胞组分。
二、材料与用具：
离心机、组织匀浆器、天平、纱布、菠菜等
三、实验内容：
1、选取新鲜嫩菠菜叶，洗净擦干后去除叶脉，称30g于150ml 0.35mol/LNaCl溶液中
装入研钵捣碎；
2、将匀浆用纱布过滤于烧杯中；
3、取滤液4ml在1000r/min下离心2分钟，弃沉淀；
4、将上清液在3000r/min下离心5分钟，
弃上清，沉淀即是叶绿体；
5、将沉淀用0.35mol/L氯化钠溶液悬浮。
6、取叶绿体悬液制临时装片观察。
四、作业：完成实验报告，并绘图。
实验五细胞膜的通透性
一、实验目的：
1、观察细胞膜的通透性及各类物质进入细胞的速度。
2、了解细胞膜通透性的一般规律。
二、实验原理：
细胞膜是一种选择透过性膜。将红细胞放在低渗溶液中，水分子会大量渗到细胞内，使细胞胀破，血红细胞释放到介质中，这种现象称为溶血。将红细胞放入含有不同
溶质的等渗溶液中，由于细胞膜对各种溶质的透性不同，有的溶质可以渗入，有的溶质则不能渗入，渗入的溶质能够提高红细胞的渗透压，所以促进水分进入细胞，随着水分的不断进入红细胞最终破裂，即引起溶血。由于溶质透入的速度互不相同，溶血时间也不同。因此，发生溶血现象所需时间长短可作为测量物质进入红细胞速度的一种指标。
三、实验用品：剪刀，试管等
四、实验材料：兔血
五、实验步骤：
1、制备兔红细胞悬液
取兔静脉血20ml（加抗凝剂 3.8%柠檬酸钠），以1份兔血加10份0.17mol/L氯化钠溶液配制兔红细胞悬液。
2、低渗溶血的观察
取试管1支，加入3mL蒸馏水，再加入0.5ml红细胞悬液，观察溶液颜色的变化，由不透明逐渐变成红色澄清，说明红细胞发生破裂造成100%红细胞溶血。
3、兔红细胞的渗透性
1）取试管1支，加入0.17mol/l氯化钠
溶液3mL，再加入0.5ml红细胞悬液，轻轻摇动，观察溶液颜色有无变化？有无溶血现象？分析原因。
2）取试管9支，编号后分别加入其他9种等渗溶液各3ml，再逐一加入0.5ml红细胞悬液，分别记下时间，轻轻摇动，观察溶液颜色有无变化。以低渗溶血管的溶液作对照管，若有的实验管溶液变成与对照一样透明，说明发生完全溶血，记下那一刻的时间。某种溶液的溶血时间等于自加入红细胞悬液到溶液变成红色透明所需的时间。
4、溶血结果判断：
1）不溶血：液体分两层，上层浅黄色，下层红色不透明，镜检红细胞完好。
2）不完全溶血：溶液浑浊，上层变红色，镜检红细胞有部分破裂。
3）完全溶血：液体变红而透明，镜检红细胞全部呈碎片。
六、作业：
1、统计不同等渗溶液的溶血情况。
2、讨论溶血实验在研究中应用的可能性。
实验六相差显微镜观察口腔上皮细胞
一、实验原理：相差显微镜具环状光阑，带相板的物镜，合轴调中望远镜及滤色片，这些特殊装置能使活细胞或未经染色的标本中各部分的折射率或厚度的微小差异，产生相位差，然后利用光的衍射和干射原理，把相位差变成振幅（明暗差）之差，使人的肉眼能够辩认出来。
二、实验用具：相差显微镜、普通显微镜、解剖器具
三、实验内容：
1、阅读教材20：二、相差显微镜的成像原理
掌握：环状光阑、相板、正相差、负相差、滤光片、调中望远镜
2、口腔上皮细胞临时装片的制备与普通光镜下的观察。
3、相差显微镜观察口腔上皮细胞。
四、注意事项：制备样品时，防止产生气泡
五、作业：调好口腔上皮细胞的相差像后，对比一般明视野的像和相差像，画图说
明你所看到的两个像的差别，指出相差像的成像特点。
实验七细胞荧光染色观察与荧光显微镜的使用
一、实验目的：
1、初步了解荧光显微镜的基本组件、位置和基本原理。
2、学习细胞荧光染色的基本方法。
二、实验用具：
1、材料：洋葱、牛蛙
2、用具：荧光显微镜、镊子、盖玻片等
三、实验内容：
1、阅读实验指导书P8
1）荧光：物质中电子吸收光的能量由低能转变为高能状态，再回到低能状态时释放出的光。
2）荧光显微镜组件：光源、激发滤片、双色反射镜、阻断滤片、物镜、目镜等。3）荧光显微镜的成像原理，
2、蛙血细胞的染色观察
蛙血——涂片——晾干——甲醇固定，10
分钟——1%丫啶橙染色，5分钟——水洗——干燥
3、洋葱表皮细胞染色观察
撕取内表皮——铺展于玻片上——晾干——1%啶橙染色，5分钟——水洗——干燥
4、植物叶表皮细胞自发荧光观察
撕取绿色植物叶表皮细胞制作临时装片，即可观察。
四、注意事项：
1、荧光显微镜要在光线尽量暗的环境下观察。
2、不要直接观察激发光源，保护眼睛。
五、作业：简述荧光显微镜的主要部件和基本光路。
实验八细胞融合
一、实验目的：
1、了解PEG诱导细胞融合的基本原理。
2、通过实验，初步掌握细胞融合的技术。
二、实验原理：
两个或两个以上的细胞合成为一个双核或多核细胞的现象为细胞融合，也称为细胞杂交。常用的诱导方法有病毒诱导融合、化学融合剂诱导融合和电融合。它们一般都是使细胞凝聚，破坏接触处的细胞膜的磷脂双分子层，从而使相互接触的细胞膜之间发生融合，进而细胞质沟通，形成一个大的双核或多核融合细胞。
三、实验材料与用具：P89
四、实验步骤：
1、在公鸡翼下静脉抽取2mL鸡血，加入盛有8mL的Alsever液中，使血液与Alsever液的比为1：4，混匀。
2、取此贮存鸡血1ml加入4ml 0.85%生理盐水，充分混匀，800r/min离心3min，弃上清，重复上述条件离心两次。最后弃上清，加GKN液4ml离心，1000r/min，5min。
3、弃上清，加GKN液制成10%细胞悬
液。
4、取上述细胞悬液1ml于离心管中，放入37℃水浴中预热，同时将50%PEG液一并预热20min。
5、20分钟后将0.5ml 50%PEG溶液逐滴沿离心管壁加入到1mL细胞悬液中，边加边摇匀，然后放入37℃水浴中保温20min。
6、20分钟后加入适量GKN液到8mL，静止于水浴中20min。
7、800r/min离心3min，弃上清，加GKN液再离心1次。
8、弃上清，加入GKN液少许，混匀，取少量制临时装片观察细胞融合情况。
五、作业：
1、绘制细胞融合图像。
2、分析实验中遇到的问题及其解决办
法。
实验九植物凝集素对红细胞的凝集作用
一、实验目的：
1、学习植物凝集素的提取方法；
2、观察红细胞的凝集现象。
二、实验原理：
细胞外被是指细胞质膜外表面的一层黏多糖物质，它在细胞间的联系和识别、细胞生长和分化、免疫反应和肿瘤发生等过程中发挥重要作用。
动物细胞表面的糖蛋白、糖脂中的糖链伸向膜的表面，它们是细胞识别、细胞免疫及细胞接触抑制等现象的必要组分。凝集素是一类含糖的，并能与糖专一结合的蛋白质，它具有凝集细胞和刺激细胞分裂的作用。凝集素使细胞凝集是由于它与细胞表面的糖分子连接，在细胞间形成“桥”的结果。凝集素与糖分子结合有一定的专一性和结合价，并与细胞膜上受体的分布有关。
三、实验用具：
离心机、天平、显微镜、试管、注射器等四、实验材料：土豆块茎或芸豆粒，家兔1只
五、实验步骤
1、提取凝集素：称取土豆去皮块茎20g，加
100mlPBS缓冲液，浸泡2小时后，将浸
出的粗提取液过滤，即为土豆凝集素提
取液。
2、制备2%红细胞悬液：以无菌方法提取兔
子静脉血液（加抗凝剂）2ml，加8ml
生理盐水，以2000r/m离心5min，去掉
上清液，再加生理盐水至10ml反复洗涤
5次，最后按压积红细胞体积用生理盐水
配成2%红细胞悬液。
3、凝集反应：用滴管吸取凝集素和红细胞
悬液各一滴，于双凹片的一个凹槽中，
混匀静止10分钟后于低倍显微镜下观
察。
4、以PBS液加2%红细胞悬液作对照实验。
六、作业
1、记录红细胞凝集情况。
2、查资料，简述凝集素在生物分子分离提取中的应用。
实验五 胞间连丝的观察
实验五胞间连丝的观察 实验目的：认识多细胞植物体的活细胞通过胞间连丝相互联系。 实验原理：胞间连丝是处于相邻植物细胞壁间并且连接两个细胞的原生质细丝，胞间连丝的存在使细胞之间保持了生理上的有机联系的通道，是植物物质运输、信息传导的特有结构，有些植物染色处理，就有在其细胞上观察到胞间连丝的存在。 实验材料：新鲜的红辣椒果实、柿子、梨、显微镜、刀片、载玻片、盖玻片、红墨水、碘液、0.2％～0.3％龙胆紫、0.1％酸性品红 实验步骤： 一、用刀片沿新鲜的红辣椒的果皮表面平行方向，切取一薄片（或把辣椒的果皮里面朝上平放桌面上，用快刀刮去肥厚物质，使之很薄），加碘液染色制片观察。在高倍镜下，可以看见其表皮是由不太规则的细胞群构成的，细胞中有着淡黄色的细胞质。细胞壁很厚，着深黄色，壁上有小孔（纹孔），孔里有细胞质丝穿过。此实验可用红墨水染色30分钟，然后吸去多余的染料，加水封片镜检，可见其细胞质被染成粉红色。也可观察到纹孔和胞间连丝。 二、柿胚乳临时装片的制作及观察 （一）、装片的制作 取新鲜的柿核，除去种皮，取一窄条用刀片作连续的徒手切片，取较薄的切片制成装片，用显微镜检查。 （二）、染色方法和观察结果 1．装片用0.2％～0.3％龙胆紫染色10min左右，视切片的厚薄而定染色时间的长短，然后水洗镜检，可见胚乳细胞壁染成浅紫色，而胞间连丝被染成紫色（或深紫色）。 2．装片用0.2％～0.3％龙胆紫溶液染色5～10min，水洗、吸干，再用0.1％酸性品红复染5～10min，水洗、镜检，可见柿核胚乳细胞壁染成了浅红色（或带浅紫色），胞间连丝染成红色（如时间长为深红色）。 三、梨果肉临装片制作 用镊子取少许梨果实离散组织，放在载玻片上，拨碎；染色加一滴红红墨水，观察。 四、永久装片的观察。 五、实验注意事项 1．徒手切片时一定要正，切出的胚乳细胞正多边形，如切出长多边形，则不易染色和观察；切片一定要薄。 2．染色时，染液量不要过多，水洗一定要充分，复染时间不能超过 10min。 六、作业 1、绘制胚乳细胞胞间连丝结构图 2、解释胞间连丝和纹孔
胞间连丝的观察
实验一胞间连丝的观察 一、实验目的： 观察植物细胞间的胞间连丝，进一步认识细胞并不是“独立王国”，胞间连丝为细胞间的物质运输与信号传递起桥梁作用。 二、实验用具： 1、器材：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子等 2、材料：红辣椒、玉米 三、实验内容： 1、红辣椒表皮细胞临时装片制作：观察胞 间连丝，剪取一小块红辣椒，用小刀小 心刮除果肉，留下一层极薄的表皮，置 于载玻片上，滴一滴清水，盖盖片，吸 水后即可。 2、玉米籽粒糊粉层临时装片制作：玉米籽 粒用镊子剥去表皮后，露出糊粉层，制 作徒手切片，制作时刀口与糊粉层平行，把切好的薄片置于载玻片上，加一滴清 水后盖片，即可观察。 3、柿子胚乳细胞永久装片的观察。 四、注意事项：光线不要太亮
五、作业： 1、完成实验报告，并绘胞间连丝图。 2、胞间连丝属于哪种细胞连接，有何生物学功能？ 实验二植物细胞原生质流动的观察 一、实验目的 在活细胞中，原生质流动是细胞活力强弱的重要指标。通常认为，原生质流动是原生质中微丝肌动蛋白与肌球蛋白相互滑动的结果，这个过程要消耗能量，也受光照、温度、渗透压、机械损伤等的影响。通过实验认识细胞原生质流动的现象，并了解其影响因素。 二、实验用品： 1、材料：黑藻 2、器材：显微镜、载玻片、盖玻片等 三、实验内容： 1、黑藻叶片细胞质流动的观察 取黑藻叶片制作临时装片并观察，注意流速，并记录。 2、用温水浸泡，再观察其流动速度有无改
变，并记录。 3、用照明灯照射一段时间后再观察其流动速度有无改变，并记录。 四、作业： 1、如何理解细胞原生质流动的原理？ 2、细胞质环流有何特点？ 3、图示细胞质环流。
胞间连丝的结构、类型及其在植物发育中的作用
胞间连丝是穿过植物细胞壁将植物细胞的原生质连接起来的细胞质通道。作为细胞共质体的联系途径，胞间连丝为细胞间信号传导、分子交换提供了交流的途径，在控制植物的发育及植物生理功能的协调中发挥至关重要的作用。 在竞赛教学和高中生物教学过程中，教师和学生对于植物细胞胞间连丝在完成植物细胞间信息交流的过程中所起到的作用，以及胞间连丝的结构、起源、类型等还存在疑问。1.胞间连丝的结构概述 胞间联丝呈现为直径20～50nm的小管状。相邻2个细胞质膜通过这个管道相连，中间是压缩变形的圆柱形内质网，称压缩内质网。压缩内质网的内质网膜紧密贴合而成，直径约为15nm，两端与相邻细胞中的内质网囊相连，压缩内质网膜的内页变化形成中心棒。压缩内质网也称连丝微管（附：最早研究认为胞间连丝中间的小管状结构可能是细胞分裂时纺锤丝包埋在新细胞壁中形成的，虽然后来证实情况不是这样，但连丝微管的名词被保留了下来）。 压缩内质网与质膜之间的空间是胞质套筒或称胞质环。通常认为胞质套筒是共质运输的主要通道，胞质套筒在胞间联丝的中部略有扩张；两端变窄形成颈区，可能对物质的交流有控制的作用。
2.胞间连丝的类型 图2图3 起源分： 初生胞间连丝：胞质分裂时，在新细胞壁上形成的胞间连丝（图2A-B） 次生胞间连丝：与胞质分裂无关，完全从头开始在已有的细胞壁上重新产生（图3F-H）。 形态结构分： 简单胞间连丝：是直的，结构相对简单（图2A、B；图3A-H） 分支胞间连丝：胞间连丝在细胞壁的中部会形成特别大的中央腔，由中央腔向外发出多个分支，结构比较复杂（图3B-H）。 PS通常初生胞间连丝多为简单的胞间连丝，但随着细胞壁的发育，进一步也会形成分支的结构（图3，B）；次生胞间连丝多为分支的胞间连丝，但也有形成简单结构的次生胞间连丝。 3.不同类型的胞间连丝的起源 1、初生胞间连丝 初生胞间连丝在细胞分裂过程中形成。在有丝分裂的后期，许多来自于高尔基体、含有细胞壁物质或物质前体的小泡，在赤道面相互融合，组装形成细胞板。与此同时，赤道面上分布的内质网小管和其周围的细胞质束陷入到融合的高尔基小泡中，穿过融合的高尔基小泡形成的细胞板平面。随着细胞板的生长，细胞质束变得越来越狭窄，由原高尔基体小泡膜衍生的质膜内衬在胞间联丝管的外围，其中的内质网转化为连丝微管，并与两侧细胞中的内质网相连，最终成为横贯2个子细胞壁的胞间连丝。 初生胞间连丝存在于植物不同分生组织新生成的分裂壁中，来源于同一母细胞的衍生细胞通过初生胞间连丝连接彼此。当新的壁物质由高尔基小泡向细胞壁添加时，与连丝微管相连的内质网腔被逐渐包围，这些内质网被合并到胞间连丝的细胞质束中，使胞间连丝随着壁的增厚而延长。合并的内质网小管的形状决定了延长的胞间连丝形状（简单形态-图2A、B 图；分支胞间连丝-图3B-H）。 在分支胞间连丝的中央常有一个扩大的中央腔，的形成可能是由于细胞生长的过度扩张，对细胞壁产生压力，使最初形成的细胞壁层松弛所导致的结果。 2、次生胞间连丝 次生胞间联丝是在已存在的细胞壁上新形成的细胞连接。在嫁接面和再生细胞的异型融合壁上，相邻细胞之间的细胞壁局部区域变薄，在变薄的细胞壁两侧，质膜与细胞质中的内质网紧密地贴附在一起；随着壁物质的消失，2个细胞的质膜接触；经过质膜融合及内质网
植物生物学实验报告
实验一 生物显微镜的使用练习和植物细胞的显微观 实验目的 1.学会正确使用显微镜 2.学会进行生物观察绘图的基本方法 3.掌握临时装片的制作方法 4.掌握光学显微镜下植物细胞的基本结构 实验材料 洋葱、番茄、柿胚乳细胞永久制片、（青）红辣椒 实验内容 （一）普通光学显微镜的使用 （二）生物绘图法 （三）植物细胞基本结构的观察 （四）纹孔和胞间连丝的观察 （一）普通光学显微镜的使用 1.光学显微镜的结构光学部分：目镜、物镜、聚光器、反光镜 机械部分：镜座、镜筒、物镜转换器、载物台、推进器、调焦装置等 2.使用步骤 取镜 打开光源，轻调至合适亮度。 放片 低倍物镜的使用：眼睛从镜筒侧面注视镜头，并缓慢向上转动粗螺旋，使载物台上升，直至物镜镜头几乎接触到标本片时为止，但切勿相撞。然后将视线移至目镜，一边观察一边微微向下转动粗螺旋，待看到模糊的物象时，改用细螺旋调节至物象清晰为止。调节时千万不可用力任意上升载物台，以免压碎标本玻片或甚至将镜头损坏。 高倍物镜的使用：在低倍镜下将要放大观察的部分移至视野中央，通过物镜转换器把高倍镜转至中央对正，用细调焦螺旋调至物象最清晰。无需使用油镜，即100倍物镜。 （三）植物细胞基本结构的观察 1.制作洋葱表皮临时装片，观察洋葱表皮细胞的结构：取洋葱肉质鳞叶一片，在其下表面用解剖刀轻划两刀或将鳞片叶掰成两半，用镊子从切口或断裂处轻轻夹住表皮，切勿用力，沿一个方向撕下表皮，制成临时装片，置显微镜下观察 2.制作番茄果肉细胞临时装片，观察番茄果肉细胞： (1)用干净纱布将载玻片、盖玻片擦拭干净。 (2)在载玻片中央滴一滴清水。 (3)用解剖针在切开的番茄果实中挑取少许成熟的果肉，将果肉均匀地涂抹在载玻片的清水中，盖上盖玻片。 （四）纹孔和胞间连丝的观察 1.柿子胚乳的胞间连丝：取柿胚乳细胞永久制片，置低倍镜下观察。再换高倍镜观察 2. 红（青）辣椒果实表皮的初生纹孔场取一块新鲜红（青）辣椒果皮，将内果皮朝上平放在载波片上，用刀片刮去果肉，将留下的表皮加I-KI染色制成临时装片观察。 思考题 什么是胞间连丝？