斐林试剂热滴定定糖法

费林试剂热滴定定糖法

xx 生科四班201100140120 同组者：xx

【实验目的】

1. 初步掌握费林试剂热滴定定糖法的原理和方法。

2. 正确掌握滴定管的使用方法和热滴定的终点。

【实验原理】

1. 还原糖

还原糖（reducing sugar ）：羰基碳（异头碳）没有参与形成糖苷键能够还原斐林(H.von Fehling)试剂或托伦斯(B.Tollens)试剂(银氨溶液)的糖称为还原糖，所有的单糖（除二羟丙酮和五碳糖，即核糖和脱氧核糖），不论醛糖、酮糖都是还原糖。大部分双糖也是还原糖，蔗糖例外。斐林试剂是含 Cu2+络合物的溶液，被还原后得到砖红色 Cu

O的沉淀。托伦斯试剂被还

2

原后（银镜反应）能生成单质银，在试管壁上可看到“银镜”。分子结构中含有还原性基团（如游离醛基`半缩醛羟基或游离羰基）的糖，叫还原糖，如葡萄糖、果糖、麦芽糖、乳糖。

一般情况下，单糖的还原能力主要来自它的醛基，如葡萄糖，而多糖则大多因为半缩醛羟基的存在。还原后，自己会变成糖酸。如葡萄糖就会变成葡萄糖酸。

2. 费林试剂

费林试剂由氢氧化钠的质量分数为 0.1 g/mL 的溶液和硫酸铜的质量分数为 0.05 g/mL 的溶液，还有酒石酸钾钠配制而成的。它与可溶性的还原性糖(葡萄糖、果糖和麦芽糖)在加热的条件下，能够生成砖红色的氧化亚铜沉淀。因此，斐林试剂常用于鉴定可溶性的还原性糖的存在与否。

3. 实验方法

本实验采用费林试剂热滴定法，费林试剂是氧化剂，由甲、乙两种溶液组成。甲液含硫酸铜和次甲基蓝(氧化还原指示剂)；乙液含氢氧化钠，酒石酸钾钠和亚铁氰化钾。当甲、乙两溶液混合时，硫酸铜与氢氧化钠反应生成天蓝色的氢氧化铜沉淀。在碱性溶液中，酒石酸钾钠与沉淀的氢氧化铜作用

形成可溶性的络合物。

【实验仪器】

1. 移液管(5、10 毫升)

2. 100 毫升容量瓶

3. 水浴锅

4. 铁架台

5. 胶头滴管

【实验材料】

1.面粉

2. 酚酞试剂

3. 菲林试剂（甲、乙液）

4. 10%氢氧化钠

5. 标准葡萄糖（1mg/ml）

6. 6M HCl

7. 烧杯

8. 玻璃棒

9. 碱式滴定管

10. 电炉

11. 分析天平

【实验操作】

1. 总糖的提取

准确称取面粉 1 克，加入 6mol/L 盐酸 10 毫升，蒸馏水 15 毫升，混匀。沸水浴加热半小时后，取出几滴水解液用碘化钾-碘溶液检查水解是否完全，若已经水解完全，则不呈现蓝色。冷却后用 10%氢氧化钠中和至中性溶液，定容至100 毫升。准确吸取该溶液 10ml，移入 100ml容量瓶内并定容至刻度，即为测定总糖的样品液。

2. 空白测定

准确吸取费林甲、乙液各 5ml 和蒸馏水 5ml 放入 100 毫升的锥形瓶中，再用滴定管加入6ml 的标准葡萄糖液，混匀后加热，沸腾后，记录下滴定管的起始刻度，每滴 1-2 秒的速度由滴定管滴入标准葡萄糖液直至蓝色变成黄色且在30s 内颜色又变成深红色为止。记录滴定完后滴定管的刻度，并同时记录滴定所需时间。平行测定三次，直至所得的平均数与各组的差值＜0.05ml。

3. 总糖的测定

准确吸取样品液 5ml 放于 100ml 锥形瓶内，加入费林甲液、乙液各 5ml，为使测定的时间与空白测定的时间基本一致，向锥形瓶内加入 3ml 的标准葡萄糖液，然后按测定空白同样操作进行滴定（控制流速，使滴定时间与空白滴定的时间基本一致），记下耗用标准葡萄糖的毫升数。平行测定三次，直至所得的平均数与各组的差值＜0.05ml。

2、3 步中所加试剂如下表：

空白滴定样品滴定

次数 1 2 3 平

均1 2 3 平

均

费林甲/ml 5 5 5 / 5 5 5 /

费林乙/ml 5 5 5 / 5 5 5 /

蒸馏水/ml 5 5 5 / / / / /

样液/ml / / / / 5 5 5 /

预加葡萄

糖/ml

8 8 8 / 4 4 4 /

消耗葡萄

糖/ml

1.75 1.50 1.45 1.57 1.25 1.30 1.15 1.23

【计算】

样品m=1.0025g V1=9.57

V2=5.23

还原糖(或总糖)%=

5

×

)

克

(

称取的

×)

毫升

/

克

(

标准葡萄糖液浓度

×

V2)

-

(V1

样品量

稀释倍数

=86.58%

【分析讨论】

1. 原理分析

本实验采用费林试剂热滴定法，费林试剂由甲、乙两种溶液组成。甲液

含硫酸铜和次甲基

蓝(氧化还原指示剂)；乙液含氢氧化钠，酒石酸钾钠和亚铁氰化钾。当甲、乙两溶液混合时，

硫酸铜与氢氧化钠反应生成天蓝色的氢氧化铜沉淀。在碱性溶液中，酒石酸钾钠与沉淀的氢氧

化铜作用形成可溶性的络合物。热滴定中滴入标准葡萄糖液直至蓝色变成黄色且在 30s 内颜色

又变成深红色为止，记录下数据处理即可得面粉中的糖含量。

2. 步骤分析

1) 为使空白测定与样品测定的时间一致，在样品滴定之前应提前加入一定

量的葡萄糖；

2) 在滴定过程中，应注意在颜色由蓝色变为紫色时，应减慢滴速，当颜色

变为土黄色时，立

即停止加入葡萄糖，颜色会再度变回紫色时，不应再滴加葡萄糖；

3) 在水解面粉时应确保面粉完全水解，即加入碘液后不再出现特殊的蓝色，

此外，水解液应

中和为中性。

3. 误差分析

本实验至少有以下几种原因可能导致实验误差的出现：

1) 实验过程中容量瓶定容后，没有摇匀，导致局部浓度过高；

2) 全部滴定过程并没有完全在沸腾状态下快速进行，导致不断的还原、氧

化，而使滴定终点

延后。

3) 各组滴定的时间不一致，空气中的 O

2

对实验结果造成了影响；

4) 对滴定终点的把握不够精确，导致超过滴定终点，使得实验数据产生较

大偏差；

5) 面粉未完全水解成为葡糖，水解后的葡糖溶液不为中性，也会给实验结

果带来一定的实验

误差。

【注意事项】

1. 菲林试剂一般应现配现用，因为斐林试剂甲和斐林试剂乙混合后会因酒

石酸有一定的还原性而自发地缓慢产生氧化亚铜沉淀；

2. 总糖的提取步骤中，面粉应在液体加入三角瓶之后再加入，因为这样可以使面粉更容易溶解，沸水浴 30min 后检查是否水解完全，若未则应继续加热；

3. 用酚酞作指示剂时用 10%氢氧化钠调 PH 至 7，应先计算大概需加入氢氧化钠溶液的体积，然后在接近拐点处应一滴一滴甚至半滴半滴的加，因为此处突变很大，避免加入氢氧化钠过量后再用盐酸调 PH，因为这会使得葡萄糖溶液变得粘稠；

4. 空白滴定中一定以每滴 1-2 秒的速度由滴定管滴入标准葡萄糖液直至蓝色变成黄色且在30s 内颜色又变成深红色为止；

5. 平行三次后所得的平均数与各组的差值＜0.05ml。

6.称量面粉后及时记录数据，以免过后遗忘或记错。

总糖和还原糖的测定——斐林氏法

总糖和还原糖测定方法较多，如3，5—二硝基水杨酸法、碱性铜试剂法、蒽酮比色法、斐林氏法等。这里只介绍斐林氏法。 一、目的 学习掌握生产实践中常用的快速定糖方法。 二、原理 还原糖在碱性溶液中能将Ag+，Hg+，Cu2+，Fe（CN）3-等金属离子还原，而糖本身则氧化成各种羟酸，利用这一特性可以对还原糖进行定量测定。本实验采用斐林试剂热滴定法，氧化剂是斐林试剂，它是由甲乙两种溶液组成，甲液中含有硫酸铜、次甲基蓝；乙液中含有氢氧化钠、酒石酸钾钠和亚铁氰化钾（黄血盐）。当甲乙两液混合时，硫酸铜和氢氧化钠作用形成氢氧化铜沉淀，由于溶液中存在酒石酸钾钠，它和氢氧化铜形成了可溶性络合物。 酒石酸络铜（Ⅱ）钾钠盐在与还原糖共热时，二价铜离子即被还原成一价的氧化亚铜红色沉淀。 此氧化亚铜与试剂中亚铁氰化钾反应生成可溶性的亚铁氰酸络铜（Ⅰ）钾盐。 Cu2O + K4Fe(CN)6 + 3 H2O →K2Cu2Fe(CN)6 + 2 KOH + 2 H2O 亚铁氰化钾亚铁氰酸络铜（Ⅰ）钾盐 斐林试剂中二价铜的还原力比次甲基蓝强，因此所滴入的标准葡萄糖溶液首先使二价铜还原，只有当二价铜被还原完毕后，才能使次甲基蓝（甲烯蓝）还原为无色，测定中以此作为滴定终点。 在测定时先做一对照管（不加样品），用标准葡萄糖滴定求知一定体积斐林试剂中二价铜和次甲基蓝的量，即测定对照管消耗的标准葡萄糖量（A）。再做样品管，样品中还原糖消耗斐林试剂中一部分二价铜，剩余的量再用标准葡萄糖来滴定，即样品消耗的标准葡萄糖量（B）。将（A）减去（B）就可求得样品中还原糖量。 三、器材及试剂： 1．器材： ①山芋粉②广范试纸pH1～12。 ③吸管5毫升（×4），10毫升（×2）④容量瓶100毫升（×3）

斐林试剂热滴定定糖法

费林试剂热滴定定糖法 xx 生科四班 201100140120 同组者：xx 【实验目的】 1.初步掌握费林试剂热滴定定糖法的原理和方法。 2.正确掌握滴定管的使用方法和热滴定的终点。 【实验原理】 1.还原糖 还原糖（reducing sugar ）：羰基碳（异头碳）没有参与形成糖苷键 能够还原斐林(H.von Fehling)试剂或托伦斯(B.Tollens)试剂(银氨溶液) 的糖称为还原糖，所有的单糖（除二羟丙酮和五碳糖，即核糖和脱氧核糖） ，不论醛糖、酮糖都是还原糖。大部分双糖也是还原糖，蔗糖例外。斐林 试剂是含 Cu 2+络合物的溶液，被还原后得到砖红色 Cu 2O 的沉淀。托伦斯试 剂被还原后（银镜反应）能生成单质银，在试管壁上可看到“银镜”。分 子结构中含有还原性基团（如游离醛基`半缩醛羟基或游离羰基）的糖，叫 还原糖，如葡萄糖、果糖、麦芽糖、乳糖。 一般情况下，单糖的还原能力主要来自它的醛基，如葡萄糖，而多糖 则大多因为半缩醛羟基的存在。还原后，自己会变成糖酸。如葡萄糖就会 变成葡萄糖酸。 2.费林试剂 费林试剂由氢氧化钠的质量分数为 0.1 g/mL 的溶液和硫酸铜的质量 分数为 0.05 g/mL 的溶液，还有酒石酸钾钠配制而成的。它与可溶性的还 原性糖(葡萄糖、果糖和麦芽糖)在加热的条件下，能够生成砖红色的氧化 亚铜沉淀。因此，斐林试剂常用于鉴定可溶性的还原性糖的存在与否。 3.实验方法 本实验采用费林试剂热滴定法，费林试剂是氧化剂，由甲、乙两种溶 液组成。甲液含硫酸铜和次甲基蓝(氧化还原指示剂)；乙液含氢氧化钠， 酒石酸钾钠和亚铁氰化钾。当甲、乙两溶液混合时，硫酸铜与氢氧化钠反 应生成天蓝色的氢氧化铜沉淀。在碱性溶液中，酒石酸钾钠与沉淀的氢氧 、管路敷设技术通过管线不仅可以解决吊顶层配置不规范高中资料试卷问题，而且可保障各类管路习题到位。在管路敷设过程中，要加强看护关于管路高中资料试卷连接管口处理高中资料试卷弯扁度固定盒位置保护层防腐跨接地线弯曲半径标等，要求技术交底。管线敷设技术中包含线槽、管架等多项方式，为解决高中语文电气课件中管壁薄、接口不严等问题，合理利用管线敷设技术。线缆敷设原则：在分线盒处，当不同电压回路交叉时，应采用金属隔板进行隔开处理；同一线槽内强电回路须同时切断习题电源，线缆敷设完毕，要进行检查和检测处理。、电气课件中调试对全部高中资料试卷电气设备，在安装过程中以及安装结束后进行 高中资料试卷调整试验；通电检查所有设备高中资料试卷相互作用与相互关系，根据生产工艺高中资料试卷要求，对电气设备进行空载与带负荷下高中资料试卷调控试验；对设备进行调整使其在正常工况下与过度工作下都可以正常工作；对于继电保护进行整核对定值，审核与校对图纸，编写复杂设备与装置高中资料试卷调试方案，编写重要设备高中资料试卷试验方案以及系统启动方案；对整套启动过程中高中资料试卷电气设备进行调试工作并且进行过关运行高中资料试卷技术指导。对于调试过程中高中资料试卷技术问题，作为调试人员，需要在事前掌握图纸资料、设备制造厂家出具高中资料试卷试验报告与相关技术资料，并且了解现场设备高中资料试卷布置情况与有关高中资料试卷电气系统接线等情况 ，然后根据规范与规程规定，制定设备调试高中资料试卷方案。 、电气设备调试高中资料试卷技术电力保护装置调试技术，电力保护高中资料试卷配置技术是指机组在进行继电保护高中资料试卷总体配置时，需要在最大限度内来确保机组高中资料试卷安全，并且尽可能地缩小故障高中资料试卷破坏范围，或者对某些异常高中资料试卷工况进行自动处理，尤其要避免错误高中资料试卷保护装置动作，并且拒绝动作，来避免不必要高中资料试卷突然停机。因此，电力高中资料试卷保护装置调试技术，要求电力保护装置做到准确灵活。对于差动保护装置高中资料试卷调试技术是指发电机一变压器组在发生内部故障时，需要进行外部电源高中资料试卷切除从而采用高中资料试卷主要保护装置。

实验六检测还原糖

实验六检测生物组织中还原糖的实验 一、教学目标 1、初步学会生物组织中还原糖的鉴定方法，领悟并能描述该实验的实验原理。 2、比较不同实验材料所做的实验结果，探索该实验的理想实验材料。 3、培养学生的动手操作能力，培养学生树立实事求是、认真严肃的的科学态度。 二、学情分析 学生在《第一节 - 细胞中的元素和化合物》的学习中，学生对糖的概念有了明确的认识，对于生物组织中哪些含糖类型，怎么鉴别还原糖还不清楚。通过本节实验教学让学生对颜色反应这一类验证实验有一个总体把握，再则让学生体会出生物学上一些典型的实验现象是要选择实验材料是关键，以及实验中要注意每一步实验方法。 三、实验原理 生物组织中普遍存在的还原糖种类较多，常见的有葡萄糖、果糖、麦芽糖。它们的分子内都含有还原性基团（游离醛基或游离酮基），因此叫做还原糖。蔗糖的分子内没有游离的半缩醛羟基，因此叫做非还原性糖，不具有还原性。本实验中，用斐林试剂只能检验生物组织中还原糖存在与否，而不能鉴定可溶性的非还原性糖。 斐林试剂由质量浓度为0.1 g／mL的氢氧化钠溶液和质量浓度为0.05g／mL的硫酸铜溶液配制而成，二者混合后，立即生成淡蓝色的Cu(OH)2沉淀。Cu(OH)2与加入的葡萄糖在加热的条件下，能够生成砖红色的Cu 2 O沉淀，而葡萄糖本身则氧化成葡萄糖酸。其反应式如下： 2NaOH+CuSO 4 Na 2 SO 4 +Cu(OH) 2 (淡蓝色沉淀) -CHO+2Cu(OH) 2-COOH+Cu 2 O(砖红色沉淀)+2H 2 O 用斐林试剂鉴定还原糖时，溶液的颜色变化过程为浅蓝色棕色砖红色(沉淀)。 本实验能利用还原糖能与斐林试剂发生颜色反应的特性，通过一系列实验检测生物组织中是否含有还原糖。

高中生物实验常用的试剂(人教版,很全)

生物学中常用的试剂： (乙液)。用法：将1.斐林试剂：成分：0.1g/ml NaOH(甲液)和0.05g/ml CuSO 4 斐林试剂甲液和乙液混合，再将混合后的斐林试剂倒入待测液，水浴加热，如待测液中存在还原糖，则呈砖红色。 2.班氏糖定性试剂：为蓝色溶液。和葡萄糖混合后沸水浴会出现砖红色沉淀。用于尿糖的测定。 (乙液)。用法：向3.双缩脲试剂：成分：0.1g/ml NaOH(甲液)和0.01g/ml CuSO 4 待测液中先加入2ml甲液，摇匀，再向其中加入3~4滴乙液，摇匀。如待测中存在蛋白质，则呈现紫色。 4.苏丹Ⅲ：用法：取苏丹Ⅲ颗粒溶于95%的酒精中，摇匀。用于检测脂肪。可将脂肪染成橘黄色(被苏丹Ⅳ染成红色)。 5.二苯胺：用于鉴定DNA。DNA遇二苯胺(沸水浴)会被染成蓝色。 6.甲基绿：用于鉴定DNA。DNA遇甲基绿(常温)会被染成蓝绿色。 吡罗红：检测RNA，呈红色 7、50%的酒精溶液：用于洗去苏丹Ⅲ在脂肪上的浮色。 8、70%的酒精溶液：用于医学临床上的消毒灭菌。 9、95%的酒精溶液：冷却的体积分数为95%的酒精可用于凝集DNA

10、15%的盐酸：和95%的酒精溶液等体积混合可用于解离根尖。 11.龙胆紫溶液或醋酸洋红：碱性染料，用于染色体染色时，前者呈深蓝色，后者呈红色 改良苯酚品红染液：检测染色体，红色 健那绿：检测线粒体，专一性让线粒体染色呈蓝绿色 12.20%的肝脏、3%的过氧化氢、3.5%的氯化铁：用于比较过氧化氢酶和Fe3+的催化效率。（新鲜的肝脏中含有过氧化氢酶） 13、3%的可溶性淀粉溶液、3%的蔗糖溶液、2%的新鲜淀粉酶溶液：用于探索淀粉酶对淀粉和蔗糖的作用实验。 14.碘液：用于鉴定淀粉的存在。遇淀粉变蓝。遇糖原变红 15.丙酮：用于提取叶绿体中的色素 16.层析液：(成分：20份石油醚、2份丙酮、和1份苯混合而成，也可用93号汽油)可用于色素的层析，即将色素在滤纸上分离开。 17.二氧化硅：在色素的提取的分离实验中研磨绿色叶片时加入，可使研磨充分。 18.碳酸钙：研磨绿色叶片时加入，可中和有机酸，防止在研磨时叶绿体中的色素受破坏。

“温度对酶活性影响实验”中不用斐林试剂原因的探究

“温度对酶活性影响实验”中不用斐林试剂原因的探究 ◆董红宇甘肃省天水市第一中学741000 新人教版《生物》必修1教材中，有一个探究影响酶活性的条件的实验，其中之一是探究温度对酶活性的影响，最后用的鉴定试剂是碘液而不是斐林试剂。众所周知，斐林试剂是鉴定还原性糖的常用试剂,在此实验中为何不用？是无法鉴定还是有什么别的原因？这个问题在K12论坛上也是众说纷纭、各持己见。笔者为此进行了相关探究，实验如下： 实验结果与预期不符，0℃下的试管中也出现了砖红色沉淀。 分析原因：在水浴温度65℃时用斐林试剂检测，0℃和60℃的试管中都有砖红色沉淀。出现这种结果的原因，应该是用65℃水浴加热时，使原本处于受抑制状态的酶逐渐恢复了活性，导致预期不应该发生的反应出现了，对实验结果干扰很大。这就是我们常给学生讲的：因为斐林试剂在使用过程中要加热，0℃试管中的酶会逐渐恢复活性，所以此实验不能用斐林试剂鉴定。 事实果真如此吗？ 笔者继续以下实验： 其它条件不变，只将上述实验中加斐林试剂时65℃水浴变成沸水浴即可，结果只有60℃试管中有砖红色沉淀，结果和预想一致。 分析原因：应该是沸水使淀粉酶立即失去活性所致，而前面实验中所用的65℃水浴恰好是α-淀粉酶活性最强的适宜温度，所以不同的水浴温度对实验结果影响很大。 斐林试剂是新制的Cu(OH)2溶液，PH值呈较强的碱性，对酶活性是否也有影响呢？笔者继续做以下探究：将各试管中的物质按下表顺序依次加好

结果分析： 第一组是α-淀粉酶活性最强的条件，作为对照，砖红色最深。 第二组中斐林试剂已让α-淀粉酶失活。 第三组结果表明：将酶、斐林试剂、淀粉同时加入，酶没有立即失活，还可以水解部分淀粉（分别是附图中的试管1、2、3）。 本实验证明：斐林试剂对酶活性的影响与斐林试剂和酶接触的先后顺序有很大关系。不放底物，直接与酶混合，酶会立即失活；若与底物和酶一起混合，酶还可水解部分淀粉；如果最后放斐林试剂，则不影响实验结果。 由于α-淀粉酶溶液有一定的颜色，虽然实验现象也明显，但颜色与真实情况有一定差距。笔者又用无色的唾液淀粉酶做了以上实验，各试管中的颜色与预期最接近，而且在65℃水浴下唾液淀粉酶就已失去了活性，实验结果与预期相符（附图中的6、7号试管）。 综上所述：在温度对酶活性影响实验中，可以用斐林试剂做鉴定，选择唾液淀粉酶做实验效果最好。但在实验过程中需注意以下两点：斐林试剂不能与酶直接接触，必须最后一步加；水浴加热必须为沸水，才能保证结果与预期相符，如果实验过程稍不严谨，就会影响实验结果。鉴于上述原因，此实验一般不选斐林试剂作为鉴定试剂。

发酵液还原糖的测定方法

中间体化验操作法 发酵液中糖含量的测定： 1．原理：利用还原性糖类的自由配合基在碱性溶液中能将高价铜还原成为 低价铜，过量的高价铜在酸性溶液中与碘化钾作用生成Cu2I2，同时析出碘，析出的碘以标准硫代硫酸钠（Na2S2O3）溶液滴定，同时做一空白对照，从两者之间求出糖的含量。 反应式如下： 酸△ (C6H10O6)n n(C6H10O6) 水解 CuSO4+2NaOH Cu(OH)2＋Na2SO4 CHOH—COONa O—CH--COONa Cu(OH)2＋Cu ＋2H2O CHOH—COOK O—CH--COOK O-CHCOOK CHO Cu ＋CHOHO4 O-CHCOOK CHOH O--CHCOOK COONa HO--CHCOOK 2Cu ＋NaOH＋H2O (CHOH)4＋Cu2O＋ O--CHCOOK CH2OH HO--CHCOONa O—CHCOOK CHOHOOK 过量的Cu ＋2H2SO4 O—CHCOOK CHOHOONa ＋CuSO4＋Na＋＋K＋＋SO42- 2CuSO4＋4KI＋2Cu↓2K2SO4＋I2（在酸化条件下） I2＋2Na2S2O32NaI＋Na2S4O6 2．试剂： 1）斐林试剂直接配制法：将酒石酸钾钠800g溶于水中，再溶入硫酸铜160g，加入1N的NaOH溶液1318ml （或固体氢氧化钠580g），最后加入KI400g溶后，加入纯化水至总体积为10000ml，摇匀即得。 2）斐林试剂贮备液的制备 a．硫酸铜贮备液：称取硫酸铜（CuSO4·5H2O）800g加纯化水溶解（如 浊可用玻璃棉过滤），使总体积成10000ml，摇匀即可。 b．酒石酸钾钠贮备液：称取酒石酸钾钠400g，加纯化水使总体积为1000ml 摇匀即得。 c．斐林试剂混合液：取硫酸铜贮备液1000ml，加酒石酸钾钠贮备液1000ml， 摇匀加11mol/L氢氧化钠（NaOH）659.5ml或固体NaOH290g，最后加入碘化钾（KI）200g，溶后加入水，使总体积为5000ml。 3）8N的硫酸：取36mol/ml 的试剂H2SO4（密度为1.84g/ml）222ml，缓缓注入778ml水中，放冷摇匀，即得。 4）0.5%淀粉指示剂： a．称取可溶性淀粉5g，溶于约50ml纯化水中。

斐林试剂与双缩脲试剂的比较

斐林试剂与双缩脲试剂的比较 1.主要区别 2.典型例题赏析 例1.现提供新配置的斐林试剂甲液（0.1g/ml NaOH溶液）、乙液（0.05g/ml CuSO4溶液）、蒸馏水，则充分利用上述试剂及必需的实验用具，能鉴别出下列哪些物质（） ①葡萄糖②蔗糖③胰蛋白酶④DNA A.只有① B.①和② C.①和③ D.②、③和④ 错解：A 分析：一般只看到了斐林试剂甲液（0.1g/ml NaOH溶液）、乙液（0.05g/ml CuSO4溶液）可以鉴定还原性糖,所以选A。而忽略了婓林试剂乙液可被蒸馏水稀释到0.01g/ml CuSO4溶液，即双缩脲试剂B液，故可以来鉴定蛋白质。 正解：主要考查审题的细心认真程度，“蒸馏水”是关键词。婓林试剂甲液、婓林试剂乙液可以来鉴定葡萄糖等可溶性还原性糖，而蔗糖不是还原性糖。婓林试剂和双缩脲试剂的成分区别是：斐林试剂甲液=双缩脲试剂A液，都是0.1g/ml NaOH溶液；斐林试剂乙液和双缩脲试剂B液成分都是CuSO4溶液，但浓度不同，分别是0.05g/ml、0.01g/ml。根据题意，双缩脲试剂B液可以通过蒸馏水和斐林试剂乙液来稀释而成。故答案选C。 例2．在下列四个试管中分别加入一些物质，甲试管：豆浆；乙试管：氨基酸溶液；丙试管：牛奶和蛋白酶；丁试管：人血液中的红细胞和蒸馏水。上述四个试管中加入双缩脲试剂振荡后，有紫色反应的是（） A．甲、丁 B．甲、乙、丁 C．甲、乙、丙 D．甲、丙、丁 错选：C 分析：很多学生误认为氨基酸含有肽键，能被双缩脲试剂鉴定成紫色。而红细胞中没有蛋白质。 正解：豆浆和牛奶的主要成分是蛋白质。牛奶在蛋白酶的催化作用下，分解成多肽。蛋白酶的本质是蛋白质。人成熟的红细胞中含有血红蛋白，把它放在清水中，会吸水胀破，血红蛋白会释放出来。甲乙丙试管中加入双缩脲试剂，能出现紫色。氨基酸中不含肽键。从中可以看出，双缩脲试剂是鉴定含有肽键的化合物，如蛋白质、多肽等。正确答案选D 精选

斐林试剂热滴定定糖法

费林试剂热滴定定糖法 xx 生科四班201100140120 同组者：xx 【实验目的】 1. 初步掌握费林试剂热滴定定糖法的原理和方法。 2. 正确掌握滴定管的使用方法和热滴定的终点。 【实验原理】 1. 还原糖 还原糖（reducing sugar ）：羰基碳（异头碳）没有参与形成糖苷键能够还原斐林(H.von Fehling)试剂或托伦斯(B.Tollens)试剂(银氨溶液)的糖称为还原糖，所有的单糖（除二羟丙酮和五碳糖，即核糖和脱氧核糖），不论醛糖、酮糖都是还原糖。大部分双糖也是还原糖，蔗糖例外。斐林试剂是含 Cu2+络合物的溶液，被还原后得到砖红色 Cu O的沉淀。托伦斯试剂被还 2 原后（银镜反应）能生成单质银，在试管壁上可看到“银镜”。分子结构中含有还原性基团（如游离醛基`半缩醛羟基或游离羰基）的糖，叫还原糖，如葡萄糖、果糖、麦芽糖、乳糖。 一般情况下，单糖的还原能力主要来自它的醛基，如葡萄糖，而多糖则大多因为半缩醛羟基的存在。还原后，自己会变成糖酸。如葡萄糖就会变成葡萄糖酸。 2. 费林试剂 费林试剂由氢氧化钠的质量分数为 0.1 g/mL 的溶液和硫酸铜的质量分数为 0.05 g/mL 的溶液，还有酒石酸钾钠配制而成的。它与可溶性的还原性糖(葡萄糖、果糖和麦芽糖)在加热的条件下，能够生成砖红色的氧化亚铜沉淀。因此，斐林试剂常用于鉴定可溶性的还原性糖的存在与否。 3. 实验方法 本实验采用费林试剂热滴定法，费林试剂是氧化剂，由甲、乙两种溶液组成。甲液含硫酸铜和次甲基蓝(氧化还原指示剂)；乙液含氢氧化钠，酒石酸钾钠和亚铁氰化钾。当甲、乙两溶液混合时，硫酸铜与氢氧化钠反应生成天蓝色的氢氧化铜沉淀。在碱性溶液中，酒石酸钾钠与沉淀的氢氧化铜作用

可溶性还原糖的鉴定原理

《生物组织中还原糖与蛋白质的鉴定》学案 陈臻一、可溶性还原糖的鉴定原理： 生物组织中普遍存在的可溶性糖种类较多，常见的有葡萄糖、果糖、麦芽糖和蔗糖。前三种糖的分子内都含有游离的具有还原性的半缩醛基，因此叫还原性糖；蔗糖的分子内没有游离的半缩醛基，因此叫非还原性糖，不具有还原性。实际上本实验中，用斐林试剂只能检验生物组织中可溶性的还原糖存在与否，而不能鉴定可溶性的非还原性糖。 可溶性还原糖与斐林试剂（质量浓度为0.1g/ml的氢氧化钠溶液和质量浓度为0.05g/ml的硫酸铜溶液配制而成）混合后,可以生成砖红色沉淀。用斐林试剂鉴定可溶性还原糖时，溶液的颜色变化过程为：浅蓝色到棕色再到砖红色 二、蛋白质的鉴定原理： 鉴定生物组织中是否含有蛋白质时，常用双缩脲法，使用的是双缩脲试剂。双缩脲试剂的成分是质量浓度为0.1g/ml的氢氧化钠溶液和质量浓度为0.01g/ml的硫酸铜溶液。在碱性溶液NaOH中，双缩脲（H2NOC-NH-CONH2）能与Cu2+作用，形成紫色或紫色的络合物，这个反应叫双缩脲反应。由于蛋白质分子中含有很多与双缩脲结构相似的肽键，因此，蛋白质都可与双缩脲试剂发生颜色反应，从而用来鉴定蛋白质的存在。 题例领悟 例1：用斐林试剂鉴定可溶还原糖时，溶液的颜色变化过程为： A、浅蓝色棕色砖红色 B、无色浅蓝色棕色 C、砖红色浅蓝色棕色 D、棕色绿色无色 解析：斐林试剂的甲液和乙液混合均匀后，立即生成浅蓝色的Cu（OH）2沉淀。Cu（OH）2与加入的葡萄糖在加热的条件下，能够生成砖红色的Cu2O沉淀。因此，答案为A 例2：将面团包在纱布中在清水中搓洗，鉴定黏留在纱布上的黏稠物质和洗出的白浆用的试剂分别是： A、碘液、苏丹Ⅲ溶液 B、双缩脲试剂、碘液 C、双缩脲试剂、苏丹Ⅳ染液 D、碘液、斐林试剂 解析：白浆为淀粉，淀粉遇碘变蓝，黏稠物质为蛋白质与双缩脲试剂发生紫色反应。因此，答案为B 自我评价 一、选择题： 1、徒手切片时的刀口方向应是（） A、向前 B、向内 C、向左 D、向右 2、在鉴定蛋白质样品时，加双缩脲试剂的正确操作方法是（） A、先加A液，混合后再加B液 B、先加B液，混合后再加A液 C、A、B液混合后立即加入 D、上述方法都可以采用

高中生物学中常用的试剂

高中生物学中常用的试剂 1、斐林试剂：成分：质量浓度为0.1g/ml 的NaOH（甲液）和质量浓度为0.05g/ml 的CuSO4（乙液）。用法：将斐林试剂甲液和乙液等体积混合，再将混合后的斐林试剂倒入待测液，水浴加热或直接加热，如待测液中存在还原糖，则呈砖红色。 2.碘液：用于鉴定淀粉的存在。遇淀粉变蓝。 3、双缩脲试剂：成分：质量浓度为0.1g/ml的NaOH（A液）和质量浓度为0.01g/ml的CuSO4（B液）。用法：向待测液中先加入2ml A 液，摇匀，再向其中加入3~4滴B 液，摇匀。如待测中存在蛋白质，则呈现紫色。 4、苏丹Ⅲ：用法：取苏丹Ⅲ颗粒溶于体积分数为95%的酒精中，摇匀。用于检测脂肪。可将脂肪染成橘黄色（被苏丹Ⅳ染成红色）。 5、二苯胺：用于鉴定DNA。DNA遇二苯胺（沸水浴）会被染成蓝色。 6、甲基绿：用于鉴定DNA。DNA遇甲基绿（常温）会被染成蓝绿色。 7、50%的酒精溶液：在脂肪鉴定中，用苏丹Ⅲ染液染色，再用50%的酒精溶液洗去浮色。 8、75%的酒精溶液：用于杀菌消毒，75%的酒精能渗入细胞内，使蛋白质凝固变性。低于这个浓度，酒精的渗透脱水作用减弱，杀菌力不强；而高于这个浓度，则会使细菌表面蛋白质迅速脱水，凝固成膜，妨碍酒精透入，削弱杀菌能力。75％的酒精溶液常用于手术前、打针、换药、针灸前皮肤脱碘消毒以及机械消毒等。 9、体积分数为95%的酒精溶液：冷却的体积分数为95%的酒精可用于凝集DNA。 10、体积分数为15%的盐酸：和95%的酒精溶液等体积混合可用于解离根尖。 11、龙胆紫溶液：(质量浓度为0.01g/ml或0.02g/ml)用于染色体着色，可将染色体染成紫色，通常染色3~5分钟。（也可以用醋酸洋红染色） 12、20%的肝脏、3%的过氧化氢、3.5%的氯化铁：用于比较过氧化氢酶和Fe3+的催化效率。（新鲜的肝脏中含有过氧化氢酶） 13、3%的可溶性淀粉溶液、3%的蔗糖溶液、2%的新鲜淀粉酶溶液：用于探索淀粉酶对淀粉和蔗糖的作用实验。 14、丙酮：用于提取叶绿体中的色素。 15.二氧化硅：有助于提取色素过程中研磨得更充分。 16.碳酸钙：防止提取色素过程中研磨时色素被破坏。 17.层析液：色素能溶解在层析液中，由于溶解度不同使色素分子随层析液扩散的速度不同，而使色素分子分离开。 18.秋水仙素：用于育种工作中，使单倍体植株变成纯合正常植株，原理是抑制分裂过程中纺锤体的形成，使染色单体无法分离，而染色体数目加倍。

斐林试剂

斐林试剂、双缩脲试剂和班氏试剂比较 苗树新 斐林试剂和双缩脲试剂的成分相同，但二者的使用方法及原理不尽相同。斐林试剂和班氏试剂都是检验还原性糖的试剂，二者的使用方法及原理、成分也有区别，下面就从这几种试剂的使用原理、成分及使用方法等方面做一简单总结。 1. 斐林试剂和双缩脲试剂 斐林试剂和双缩脲试剂都由溶液和溶液组成，但二者有如下三点不同： （1）溶液浓度不同 斐林试剂中溶液称为斐林试剂甲，其浓度为溶液称为斐林试剂乙，其浓度为；双缩脲试剂中溶液（双缩脲试剂A）的浓度为，溶液（双缩脲试剂B）的浓度为。 （2）使用原理不同 斐林试剂是新配制的溶液，它在加热条件下与醛基反应，被还原成砖红色的沉淀，可用于鉴定可溶性还原糖的存在。用斐林试剂鉴定可溶性还原糖时，溶液的颜色变化过程为：浅蓝色→棕色→砖红色（沉淀）。 鉴定生物组织中是否含有蛋白质时，常用双缩脲法，使用的是双缩脲试剂，发生的是双缩脲反应。双缩脲反应实质是在碱性环境下的与双缩脲试剂发生的紫色反应。而蛋白质分子中含有很多与双缩脲（）结构相似的肽键，所以蛋白质都能与双缩脲试剂发生颜色反应，可以用双缩脲试剂鉴定蛋白质的存在。 （3）使用方法不同 斐林试剂使用时，先反溶液和溶液混合（将滴溶液滴入溶液中），而后立即使用：双缩脲试剂使用时，先加入溶液（2mL），振荡摇匀，造成碱性的反应环境，然后再加入3~4滴溶液，振荡摇匀后观察现象。 2. 斐林试剂和班氏试剂 关于斐林试剂和班氏试剂，可用下面的例题引出其异同点：例：你可用什么方法，检验人的尿液中是否含有糖？ 答案： 方法一：在试管中加入人的尿液0.1mL，加入班氏糖定性试剂1mL，混合均匀后，将试管放

(完整版)斐林试剂和双缩脲试剂区别

斐林试剂和双缩脲试剂区别 1、试剂的浓度和配制方法不同 斐林试剂：甲液： 0.1g/mL 的NaOH 溶液；乙液：0.05g/mL 的4CuSO 溶液。使用前临时配制，在2mL 的甲液中滴入4滴～5滴乙液，振荡使混合均匀后即可。 双缩脲试剂：A 液：0.1g/mL 的NaOH 溶液；B 液：0.01g/mL 的4CuSO 溶液。 分别配制好A 液和B 液即可。 2、试剂的作用和鉴定原理不同 斐林试剂： 作用：可鉴定可溶性还原糖。 原理：甲液和乙液混合后产生 2)OH (Cu 沉淀，2)OH (Cu 与含醛基（—CHO ）的可溶性还原糖，在加热条件下反应，将 2)OH (Cu 还原为砖红色的O Cu 2沉淀。双缩脲试剂： 作用：可鉴定蛋白质溶液。 原理：在碱性溶液（NaOH ）中，双缩脲（22CONH NH NCO H ）能与2Cu 反应，形成紫色络合物。由于蛋白质分子中含有许多与双缩脲结构相似的肽键（— CO —NH —）， 因此，蛋白质都可以与双缩脲试剂发生反应而使溶液呈现紫色。3、试剂的使用方法不同 斐林试剂：使用时现配现用，要水浴加热。如果斐林试剂放置一段时间， 因2)OH (Cu 沉淀在溶液底部而无法使用。使用时，甲液和乙液不可分别加入到待测液中，否则，待测液（苹果组织样液）中的有机酸会中和NaOH ，使产生的2)OH (Cu 不足而影响鉴定。 双缩脲试剂：使用时，双缩脲试剂A 液和双缩脲试剂 B 液要分别先后加入到待测液中，不需要加热。双缩脲试剂A 液和双缩脲试剂 B 液不可以混合后再加入待测液。如先混合，则会产生2)OH (Cu 沉淀而无2Cu 产生。加入的双缩脲试剂 B 液（4CuSO ）也不能过量，

实验四斐林试剂法法测定还原糖含量

一、实验目的： 掌握园艺产品中糖的测定方法。 二、实验原理 利用糖的还原性，与斐林试剂（氧化剂）中的二价铜离子还原为一价铜，进行氧化还原反应，而进行测定。非还原糖必须转化为还原糖，再进行测定。 斐林试剂中酒石酸钾钠铜是一种氧化剂，反应的终点可用次甲基蓝作指示剂，在碱性、沸腾环境下还原呈无色。根据斐林试剂完全还原所需的还原糖量，计算出样品还原糖量。 三、试剂与材料 1、斐林试剂 甲：加水溶解并定容至1000ml； 乙：346g酒石酸钾钠+100gNaOH加水溶解并定容至1000ml； 2、1%次甲基蓝，1g次甲基蓝加水溶解并定容至100ml，棕色瓶保存； 3、%标准葡萄糖，2g 105℃烘干到恒重的葡萄糖加水定容到1000ml； 4、碱式滴定管； 5、电炉，各种玻璃器皿。 四、操作方法 1、斐林试剂标定 取甲液5ml加入5ml乙液中，置于250ml三角瓶中，加入水10ml，从滴定管中加入%的标准葡萄糖若干毫升（约23ml）。（量控制在后滴定时消耗葡萄糖在－。 电炉上加热至沸，并保持微沸2分钟，加2滴1%次甲基蓝溶液，趁沸以每两秒1滴的速度继续滴加葡萄糖标准溶液，用%标准葡萄糖滴定至蓝色消失，有红棕色沉淀，溶液清亮为终点止。记录耗用的葡萄糖量为V0，必须在1min内完成。 （注意：还原的次甲基蓝易被空气中的氧氧化，恢复成原来的蓝色，所以滴定过程中必须保持溶液成沸腾状态，并且避免滴定时间过长。） 2、样品滴定预备试验 同上法取斐林试剂，加10ml样品液，摇匀于电炉上加热至沸，保持微沸2分钟，加2滴1%次甲基蓝，用%葡萄糖滴定至蓝色消失。记录耗用的葡萄糖量为V1。 3、样品滴定 同上法吸取斐林试剂加10ml样品液(预先稀释)，补加（V0-V1）ml水，并从滴定管中预先加入（V1-1）ml %葡萄糖，摇匀至电炉上加热至沸，保持2min微沸，加入2滴1%次甲基蓝，继续用葡萄糖滴定至蓝色消失。记录消耗的标准葡萄糖体积为V毫升。 五、结果计算 还原糖含量(以葡萄糖计)（g/ml)=（Vo-V)××1/10×n 式中：Vo--------斐林试剂标定值，ml V---------样品糖液测定值，ml 标准葡萄糖溶液浓度，g/ml 10--------样品糖液体积，ml n---------样品稀释倍数 六、思考题：

总糖和还原糖的测定

总糖和还原糖的测定——斐林试剂热滴定法 发布时间：2013-7-1 11:01:32 实验原理 还原糖是指含有自由醛基（如葡萄糖）或酮基（如果糖）的单糖和某些二糖（如乳糖和麦芽糖）。在碱性溶液中，还原糖能将Cu2+、Hg2+、Fe3+、Ag+等金属离子还原，而糖本身被氧化成糖酸及其他产物。糖类的这种性质常被用于糖的定性和定量测定。 直接滴定法即斐林试剂热滴定法。斐林试剂由甲溶液和乙溶液组成。甲溶液含硫酸铜和亚甲基蓝（氧化还原指示剂）；乙溶液含氢氧化钠、酒石酸钾钠和亚铁氰化钾。将一定量的甲溶液和乙溶液等体积混合时，硫酸铜与氢氧化钠反应，生成氢氧化铜沉淀：2NaOH+CuSO4=Cu（OH）2+NaSO4。在碱性溶液中，所生成的氢氧化铜沉淀于酒石酸钠反应，生成可溶性的酒石酸钾钠铜络合物。 在加热条件下，用样液滴定，样液中的还原糖与酒石酸钾钠铜反应，酒石酸钾钠铜被还原糖还原，产生红色氧化亚铜沉淀。 反应生成的氧化亚铜沉淀于斐林试剂中的亚铁氰化钾（黄血盐）反应生成可溶性复盐，便于观察滴定终点。滴定时以亚甲基蓝为氧化还原指示剂。因为亚甲基蓝氧化能力比二价铜弱，待二价铜离子全部被还原后，稍过量的还原糖可使蓝色的氧化亚甲基蓝还原为无色的还原型的亚甲基蓝，即达滴定终点。根据样液量可计算出还原糖含量。 实验材料 藕粉、淀粉 实验器材 试管3.0×20cm（×1）、移液管5ml（×2）、烧杯100ml（×1）、250ml锥形瓶、调温电炉、滴定管25ml （×1）、电子天平等。 试剂 1、斐林试剂 甲液：称取15g硫酸铜及0.05g亚甲基蓝，溶于蒸馏水并稀释到1000ml。 乙液：称取50g酒石酸钾钠及75gNaOH，溶于蒸馏水中，在加入4g亚铁氰化钾，完全溶解后，用蒸馏水稀释到1000ml，储存于具橡皮塞玻璃瓶中。 2、0.1%葡萄糖标准溶液：称取1g经98-100℃干燥至恒重的无水葡萄糖，加蒸馏水溶解后移入1000ml容量瓶中，加入5ml浓HCL（防止微生物生长），用蒸馏水稀释到1000ml。 3、6mol/L HCL：取250ml浓HCL（35%-38%）用蒸馏水稀释到500ml。 4、碘-碘化钾溶液：称取5g碘和10g碘化钾，溶于蒸馏水中，定容至100ml。 5、6mol/L NaOH：称取120gNaOH，溶于蒸馏水中，定容至500ml。 6、0.1%酚酞指示剂。 实验方法 1、样品中还原糖的提取：准确称取1g藕粉，放入100ml烧杯中，先以少量蒸馏水调成糊状，然后加入约40ml蒸馏水，混匀，于50℃恒温水浴中保温20分钟，不时搅拌，使还原糖浸出。过滤，将滤液全部收集到50ml的容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，即为还原糖提取液。 2、样品中总糖的水解及提取：准确称取1g淀粉，放入大试管中，然后加入10ml 6mol/L HCL和15ml蒸馏水，在沸水浴中加热0.5小时，取出1-2滴置于白瓷板上，加1滴I-KI溶液检查水解是否完全。如已水解

斐林试剂与双缩脲试剂的比较完整版

斐林试剂与双缩脲试剂 的比较 标准化管理处编码[BBX968T-XBB8968-NNJ668-MM9N]

斐林试剂与双缩脲试剂的比较 1.主要区别 2.典型例题赏析 溶例1.现提供新配置的斐林试剂甲液（0.1g/mlNaOH溶液）、乙液（0.05g/mlCuSO 4液）、蒸馏水，则充分利用上述试剂及必需的实验用具，能鉴别出下列哪些物质（） ①葡萄糖?②蔗糖?③胰蛋白酶?④DNA? A.只有① B.①和② C.①和③ D.②、③和④

错解：A? 分析：一般只看到了斐林试剂甲液（0.1g/mlNaOH溶液）、乙液（0.05g/mlCuSO 溶液）可 4 溶以鉴定还原性糖,所以选A。而忽略了婓林试剂乙液可被蒸馏水稀释到0.01g/ml?CuSO 4液，即双缩脲试剂B液，故可以来鉴定蛋白质。 正解：主要考查审题的细心认真程度，“蒸馏水”是关键词。婓林试剂甲液、婓林试剂乙液可以来鉴定葡萄糖等可溶性还原性糖，而蔗糖不是还原性糖。婓林试剂和双缩脲试剂的成分区别是：斐林试剂甲液=双缩脲试剂A液，都是0.1g/ml?NaOH溶液；斐林试剂乙液和双缩脲试剂B液成分都是CuSO 溶液，但浓度不同，分别是 0.05g/ml、0.01g/ml。根据题 4 意，双缩脲试剂B液可以通过蒸馏水和斐林试剂乙液来稀释而成。故答案选C。 例2．在下列四个试管中分别加入一些物质，甲试管：豆浆；乙试管：氨基酸溶液；丙试管：牛奶和蛋白酶；丁试管：人血液中的红细胞和蒸馏水。上述四个试管中加入双缩脲试剂振荡后，有紫色反应的是（）A．甲、丁B．甲、乙、丁C．甲、乙、丙D．甲、丙、丁错选：C? 分析：很多学生误认为氨基酸含有肽键，能被双缩脲试剂鉴定成紫色。而红细胞中没有蛋白质。

高中生物实验常用的试剂(归纳总结)

生物学中常用的试剂： 1.斐林试剂：成分：0.1g/ml NaOH(甲液)和0.05g/ml CuSO4(乙液)。用法：将斐林试剂甲液和乙液混合，再将混合后的斐林试剂倒入待测液，水浴加热，如待测液中存在还原糖，则呈砖红色。 2.班氏糖定性试剂：为蓝色溶液。和葡萄糖混合后沸水浴会出现砖红色沉淀。用于尿糖的测定。 3.双缩脲试剂：成分：0.1g/ml NaOH(甲液)和0.01g/ml CuSO4(乙液)。用法：向待测液中先加入2ml甲液，摇匀，再向其中加入3~4滴乙液，摇匀。如待测中存在蛋白质，则呈现紫色。 4.苏丹Ⅲ：用法：取苏丹Ⅲ颗粒溶于95%的酒精中，摇匀。用于检测脂肪。可将脂肪染成橘黄色(被苏丹Ⅳ染成红色)。 5.二苯胺：用于鉴定DNA。DNA遇二苯胺(沸水浴)会被染成蓝色。 6.甲基绿：用于鉴定DNA。DNA遇甲基绿(常温)会被染成蓝绿色。 吡罗红：检测RNA，呈红色 7、50%的酒精溶液：用于洗去苏丹Ⅲ在脂肪上的浮色。 8、70%的酒精溶液：用于医学临床上的消毒灭菌。 9、95%的酒精溶液：冷却的体积分数为95%的酒精可用于凝集DNA 10、15%的盐酸：和95%的酒精溶液等体积混合可用于解离根尖。 11. 龙胆紫溶液或醋酸洋红：碱性染料，用于染色体染色时，前者呈深蓝色，后者呈红色 改良苯酚品红染液：检测染色体，红色 健那绿：检测线粒体，专一性让线粒体染色呈蓝绿色 12.20%的肝脏、3%的过氧化氢、3.5%的氯化铁：用于比较过氧化氢酶和Fe3+的催化效率。（新鲜的肝脏中含有过氧化氢酶） 13、3%的可溶性淀粉溶液、3%的蔗糖溶液、2%的新鲜淀粉酶溶液：用于探索淀粉酶对淀粉和蔗糖的作用实验。 14.碘液：用于鉴定淀粉的存在。遇淀粉变蓝。遇糖原变红 15.丙酮：用于提取叶绿体中的色素 16.层析液：(成分：20份石油醚、2份丙酮、和1份苯混合而成，也可用93号汽油)可用于色素的层析，即将色素在滤纸上分离开。 17.二氧化硅：在色素的提取的分离实验中研磨绿色叶片时加入，可使研磨充分。 18.碳酸钙：研磨绿色叶片时加入，可中和有机酸，防止在研磨时叶绿体中的色素受破坏。 19、0.3g/mL的蔗糖溶液：相当于30%的蔗糖溶液，比植物细胞液的浓度大，可用于质壁分离实验。 20、0.1g/mL的柠檬酸钠溶液：与鸡血混合，防凝血 21、氯化钠溶液：①可用于溶解DNA。当氯化钠浓度为2mol/L、0.015mol/L时DNA的溶解度最高，在氯化钠浓度为0.14 mol/L时，DNA溶解度最低。②浓度为0.9%时可作为生理盐水。 22、胰蛋白酶：①可用来分解蛋白质。②可用于动物细胞培养时分解组织使组织细胞分散于。 23、秋水仙素：人工诱导多倍体试剂。用于萌发的种子或幼苗，可使染色体组加倍，原理是可抑制正在分裂的细胞纺缍体的形成。 24、氯化钙：增强细菌细胞壁的通透性，可用于基因工程。 25．石磊试剂：检验溶液酸碱性→判断光合速率与呼吸速率快慢的关系； 26、NaHCO3/ Na2CO3 Na２HＰＯ４/ NaH２ＰＯ４：酸碱缓冲对→调节ＰＨ27．NaCl：配制生理盐水（0.9%）或用于提取DNA（0.14M或2M) 28．溴麝香草酚蓝水溶液：检测CO2，由蓝变绿再变黄

实验四 斐林试剂法法测定还原糖含量(1)

实验四斐林试剂法测定果品蔬菜中还原糖含量 一、实验目的： 掌握园艺产品中糖的测定方法。 二、实验原理 利用糖的还原性，与斐林试剂（氧化剂）中的二价铜离子还原为一价铜，进行氧化还原反应，而进行测定。非还原糖必须转化为还原糖，再进行测定。 斐林试剂中酒石酸钾钠铜是一种氧化剂，反应的终点可用次甲基蓝作指示剂，在碱性、沸腾环境下还原呈无色。根据斐林试剂完全还原所需的还原糖量，计算出样品还原糖量。 三、试剂与材料 1、斐林试剂 甲：69.3g CuSO4.5H2O加水溶解并定容至1000ml； 乙：346g酒石酸钾钠+100gNaOH加水溶解并定容至1000ml； 2、1%次甲基蓝，1g次甲基蓝加水溶解并定容至100ml，棕色瓶保存； 3、0.2%标准葡萄糖，2g 105℃烘干到恒重的葡萄糖加水定容到1000ml； 4、碱式滴定管； 5、电炉，各种玻璃器皿。 四、操作方法 1、斐林试剂标定 取甲液5ml加入5ml乙液中，置于250ml三角瓶中，加入水10ml，从滴定管中加入0.2%的标准葡萄糖若干毫升（约23ml）。（量控制在后滴定时消耗葡萄糖在0.5－1.0ml)。 电炉上加热至沸，并保持微沸2分钟，加2滴1%次甲基蓝溶液，趁沸以每两秒1滴的速度继续滴加葡萄糖标准溶液，用0.2%标准葡萄糖滴定至蓝色消失，有红棕色沉淀，溶液清亮为终点止。记录耗用的葡萄糖量为V0，必须在1min内完成。 （注意：还原的次甲基蓝易被空气中的氧氧化，恢复成原来的蓝色，所以滴定过程中必须保持溶液成沸腾状态，并且避免滴定时间过长。） 2、样品滴定预备试验 同上法取斐林试剂，加10ml样品液，摇匀于电炉上加热至沸，保持微沸2分钟，加2滴1%次甲基蓝，用0.2%葡萄糖滴定至蓝色消失。记录耗用的葡萄糖量为V1。 3、样品滴定 同上法吸取斐林试剂加10ml样品液(预先稀释)，补加（V0-V1）ml水，并从滴定管中预先加入（V1-1）ml 0.2%葡萄糖，摇匀至电炉上加热至沸，保持2min微沸，加入2滴1%次甲基蓝，继续用葡萄糖滴定至蓝色消失。记录消耗的标准葡萄糖体积为V毫升。 五、结果计算 还原糖含量(以葡萄糖计)（g/ml)=（Vo-V)×0.002×1/10×n 式中：V o--------斐林试剂标定值，ml V---------样品糖液测定值，ml 0.002-----标准葡萄糖溶液浓度，g/ml 10--------样品糖液体积，ml

费林试剂热滴定定糖法实验报告

生物化学实验报告 费林试剂热滴定定糖法

一、实验目的 1. 学习并掌握动物细胞培养的无菌操作技术。 2. 了解并掌握用组织块贴壁培养法和消化细胞培养法进行动物细胞原代培养的实验方法。 3. 熟练掌握动物细胞传代培养的实验方法。 4. 学习细胞生死状态鉴别的方法。 5. 了解细胞生死状态鉴别的原理。 6. 熟悉和掌握各种鉴别细胞生死状态方法的判定特征。 7. 掌握细胞技术方法，计算细胞存活率 二、实验原理 还原糖是指含有自由醛基(如：葡萄糖)或酮基(如：果糖)的单糖和某些二糖(如：乳糖、麦芽糖)。在碱性溶液中，还原糖能将金属离子(Cu2+、Hg2+、Ag+等)还原，而糖本身被氧化成各种羟酸类化合物。该特性常用于糖的定性和定量测定。实验采用费林试剂热滴定法，费林试剂是氧化剂，由甲、乙两种溶液组成。甲液 含质量分数为0.05 g/mL的硫酸铜和次甲基蓝(氧化还原指示剂)；乙液含质量分 数为0.1 g/mL的氢氧化钠，酒石酸钾钠和亚铁氰化钾。当甲、乙两溶液混合时， 硫酸铜与氢氧化钠反应生成天蓝色的氢氧化铜沉淀。在碱性溶液中，酒石酸钾钠 与沉淀的氢氧化铜作用形成可溶性的络合物，该含Cu2+络合物的溶液，被还原 后得到砖红色Cu2O的沉淀。因此，斐林试剂常用于鉴定可溶性的还原性糖的 存在与否。 费林试剂热滴定定糖法的基本原理,是在沸热条件下,用还原糖溶液滴定一定 量的费林试剂时, 将费林试剂中的铜离子还原为氧化亚铜, 以亚甲基蓝为指示 剂, 稍过量的还原糖立即将蓝色的氧化型亚甲基蓝还原为无色的还原型亚甲基 蓝, 指示滴定终点。 三、实验器材 1. 试剂

1.1费林试剂(定量)： 费林甲液：称取15克硫酸铜(CuSO4·5H2O)和0.05克次甲基蓝，溶于1000毫升水中。 费林乙液：称取50克酒石酸钾钠、54克氢氧化钠和4克亚铁氰化钾溶于1000毫升水中。 1.2 标准葡萄糖溶液：称取葡萄糖(预先在105℃烘干，恒重)1克，用少量蒸馏水溶解后加入8毫升浓盐酸(防止微生物生长)，再用蒸馏水定容至1000毫升。 1.3 6N盐酸溶液。 1.4 10%氢氧化钠溶液。 1.5碘试剂：将碘化钾20克及碘10克溶于100毫升水中。使用前需稀释10倍。 1.6 PH1~14试纸。 2. 器材 (1)25毫升碱滴定管。(6) 万能夹 (2)移液管(5、10毫升) (7) 铁架台 (3)100毫升溶量瓶(8) 点滴板 (4)100毫升锥形瓶(9) 水浴锅 (5)滴管(10) 600瓦电炉 五、操作步骤 1. 空白测定 准确吸取费林甲、乙液各5毫升和蒸馏水5毫升放入250毫升的锥形瓶中，再用滴定管加入一定量的标准葡萄糖液，混匀后放在石棉网上加热，应使瓶内溶液在2分钟内达到沸腾，以每滴4-5秒的速度由滴定管滴入标准葡萄糖液直至蓝色消失为止。沸腾前加入的标准葡萄糖液量与沸腾后滴定时所用的标准葡萄糖液量的总和，就是测定空白时耗用的标准葡萄糖液毫升数(V1)。 全部滴定过程必须在沸腾状态下快速进行，一般应在3分钟内完成。因此，除控制滴定速度外，滴定前需加入一部分标准葡萄糖液。加入该液的数量，应在正式滴定前的预备滴定试验时确定，同时练习掌握操作条件 2. 总糖的测定 准确称取面粉1克，加入6N盐酸10毫升，蒸馏水15毫升，混匀。沸水浴加热半小时后，取出几滴水解液用碘化钾-碘溶液检查水解是否完全，若已经水解完全，则不呈现蓝色。冷却后用10%氢氧化钠中和至中性溶液，过滤，滤液定容至100毫升。准确吸取该溶液10毫升，移入100毫升容量瓶内并定容至刻度，即为测定总糖的样品液。 准确吸取样品液5毫升放于100毫升锥形瓶内，加入费林甲液、乙液各5