叶酸代谢能力基因检测操作流程

MTHFR C677T , MTHFR A1298C,MTRR A66G基因检测操作流程实验流程

一、操作步骤

适用仪器：普通PCR仪

样本要求：EDTA抗凝剂的静脉全血（100μl），室温保存不超过7天，2～8℃保存不超过1个月，-20℃保存不超过3个月，反复冻融次数不超过5次；DNA的浓度应不低于5ng/μl，A260/ A 280应在1.6~2.0之间。有血块的样本需经匀浆处理或用组织研磨仪研磨处理后再进行全血DNA的提取。

检验方法：（试剂盒中的检本测卡、阳性/阴性对照卡上标识解释如下：M表示突变型，WT表示

野生型，C表示质控线，T表示检测线。）

A：样本DNA的制备

试剂盒准备工作：

1、清洗液BW-I：用50 ml量筒分别移取35 ml无水乙醇（分析纯）和35 ml异丙醇加入至清洗液BW-I试剂瓶中，颠倒混合均匀，在试剂瓶上标明“已加入醇”和日期，备用。

2、清洗液BW-II：用50 ml量筒移取49 ml无水乙醇加入至清洗液BW-II试剂瓶中，颠倒混合均匀，在试剂瓶上标明“已加入醇”和日期，备用。

3、蛋白酶K准备：取出蛋白酶K，室温解冻，涡旋混匀后备用。

4、磁性微粒准备：将磁性微粒涡旋混匀，保证均一。

实验操作步骤：

1.将20 μl蛋白酶K溶液加入2 ml 离心管的管底。依次加入100 μl全血、200 μl裂解液

BL，用涡旋振荡器混合15 sec(以下简称涡旋混匀)，56 ℃水浴20 min。

2.向步骤1裂解处理的样品中依次加入300 μl结合液BI、25 μl的磁性微粒（移取前必须充

分涡旋混匀），涡旋混匀，室温静置5 min。磁性分离5 min，弃上清。

3.从磁性分离器上取出离心管，加入400 μl清洗液BW-I，涡旋混匀，磁性分离至上清澄清（期

间上下颠倒数次，以清洗离心管管壁），弃上清；重复本步操作，以400μl清洗液BW-I重复清洗一次。

4.从磁性分离器上取出离心管，加入400 μl清洗液BW-II，涡旋混匀，磁性分离至上清澄清（期

间上下颠倒数次，以清洗离心管管壁），弃上清（尽可能弃去所有的清洗液BW-II）。

5.打开离心管盖，将其室温晾干5 min。

6.从磁性分离器上取下离心管，向管中加入100 μl 洗脱液ES，涡旋混匀，56℃水浴5 min。

7.将离心管置于磁性分离器上，磁性分离至上清澄清。将上清液（分离纯化得到的DNA溶液）

转移到2 ml离心管中，直接用于下游实验或于-20 ℃保存备用。

B：PCR扩增液准备

（1）每人份需做两个反应，取两个无菌0.2ml PCR薄壁管，在PCR薄壁管管盖上依次标有M、WT。

（2）将试剂从-20℃取出平衡至室温，瞬时离心。在标有M的管中加入29μl 扩增液（M），在标

有WT的管中加入29 μl扩增液（WT）。

（3）分别向以上M和WT各管中加入1μl反应液。将管盖盖紧后，涡旋混匀，瞬时离心待用。C：待检测DNA样本的配制

在上述标有M、WT管中分别加入3μl待测基因组DNA，分别再加入17μl ddH2O使终体积为50 μl。将管盖盖紧后，涡旋混匀，瞬时离心。

D：PCR扩增

将PCR管放入PCR仪中，按如下程序扩增：50℃2min；95℃5min；94℃ 30sec、60℃ 30sec、65℃ 1min（26Cycles）；65℃ 10min；4℃Hold。取出PCR产物，2~8℃保存。

E：检测卡检测实验

从密封袋中取出检测卡，将待测样本M与WT管中的PCR产物分别滴加在检测卡对应的样品垫处，待2~5 min对结果进行判读，20min后结果不可靠。

F：质量控制

（1）检测结果中阳性对照应在阳性对照卡检测线（T线）出条带，阴性对照应在阴性对照卡检测线（T线）不出条带。正常检测时，应定期进行阳性对照品及阴性对照品实验。

（2）阳性对照品实验：取两个无菌0.2ml PCR薄壁管，在PCR薄壁管管盖上依次标有M、WT，将20μl M阳性对照液、20μl WT阳性对照液分别加入标有M、WT的PCR薄壁管中，再依次分别加入M扩增液29μl及1μl反应液、WT扩增液29μl及1μl反应液，按照步骤中D~F完成，检测线（T线）及质控线（C线）均应出现条带。

（3）阴性对照品实验：取两个无菌0.2ml PCR薄壁管，在PCR薄壁管管盖上依次标有M、WT，将M扩增液29μl、1μl反应液及WT扩增液29μl、1μl反应液分别加入标有M、WT的PCR薄壁管中，再分别加入20μl阴性对照液，按照步骤中D~F完成，质控线（C线）应出现条带，检测线（T线）应无条带出现。

G：结果判读（如下图、下表）

如上图一所示，以阳性对照液为模板进行PCR反应，对PCR产物进行检测，检测线（T线）有

条带出现，作为阳性对照；以阴性对照液为模板进行PCR 反应，对PCR 产物进行检测，检测线（T 线）无条带出现，为阴性对照。若阴性样本有条带出现，有可能加样时未及时更换吸头，有DNA 污染，建议在操作过程中，先配制阴性对照管并及时闭合PCR 管盖。图二显示MTHFR 677CC 表示正常野生型；图三显示MTHFR 677TT 表示一对等位基因的第677位胞嘧啶（C ）均变为胸腺嘧啶（T ），即纯合突变；图四显示MTHFR 677CT 表示其中一个等位基因的第677位胞嘧啶（C ）变为胸腺嘧啶（T ），即杂合突变；图五质控线（C 线）无条带或质控线（C 线）与检测线（T 线）均无条带，即为无效检测。无效原因可能为操作不正确或试纸条已变质损坏。应再次仔细阅读说明书，并用新的检测卡重新检测。如果问题仍然存在，应立即停止使用该批号产品，并与厂家或供应商联系。

H ：注意事项

（1）实验室应该遵循PCR 实验规范的要求分区操作，各区物品均为专用，不得交叉使用，加模板和引物的移液器不能混用，每次加样后均需更换吸头，推荐使用无核酶、带滤芯的吸头。各区的仪器、设备和工作服应独立使用。

（2）本试剂盒用于体外操作。用户切勿吸入试剂或直接接触皮肤。

（3）使用本试剂盒前，请仔细阅读说明书，严格按照说明书的要求操作。打开包装后请尽快使用。

（4）使用本试剂盒时，因PCR 体系为50μl 体系，应使用200μl 的PCR 扩增管进行操作。

（5）本试剂盒备有“PCR 组分加入确认单”，在【检测方法】中的步骤B(PCR 扩增系统的准备)和C(待检测DNA 样本的配制)操作过程中应在确认单中逐一标注，以保证“扩增液、反应液、DNA 模板和ddH 2O ”图二 野生型 图三 纯合突变 图一 阳性及阴性对照 图五 无效图

图四 杂合突变

已准确无误加入至PCR扩增管里。

（6）如发现铝箔袋包装破损，请勿使用；铝箔袋包装内的干燥剂，请勿使用。（7）试剂使用前，请将反应液、扩增液等瞬时离心。

叶酸代谢障碍遗传检测

浙江殷欣生物技术有限公司 叶酸代谢障碍遗传检测项目 推荐书 PCR+测序法

1.叶酸代谢障碍遗传检测项目简介 1.1开展叶酸代谢障碍遗传检测的必要性 1.1.1 我国出生缺陷的严峻形势 出生缺陷已构成婴儿和儿童死亡的主要原因，成为全世界尤其是发展中国家在人口健康方面面临的重大公共卫生问题。我国是一个出生缺陷高发国家。据2012年《国家人口发展战略研究报告》，全国每年约有20-30万肉眼可见先天畸形儿出生，加上出生后逐渐显现出来的缺陷，出生缺陷总数高达80-120万，约占每年出生人口总数的4%-6%。根据WHO和我国合作发表的《出生缺陷疾病经济负担的评价》，我国每年因新生儿缺陷造成的直接损失达10亿元人民币，仅神经管缺陷一项的直接经济损失超过2亿。用于抚养残疾儿的医疗费用支出每年超过50亿，而大部分存活下来的出生缺陷儿因残疾给一个家庭造成长达几十年的心理负担和精神痛苦更是无法用金钱衡量。由此可见，出生缺陷的现状正严重威胁着我国的人口素质和生命质量，已经不仅仅是一个严重的公共卫生问题，而且成为影响经济发展和人民正常生活的社会问题。 1.1.2 叶酸代谢能力具有较大的个体差异性 目前，全世界已经公认，妇女围孕期增补叶酸可以预防胎儿神经管缺陷(NTDs)的初发及再发。由于叶酸与DNA的合成密切相关，妇女围孕期若摄入叶酸不足，则会导致同型半胱氨酸（HCY）向甲硫氨酸转化出现障碍，导致高HCY血症或低甲硫氨酸血症。高HCY血症可引起血管内皮损伤、促进血管平滑肌细胞增生，同时引起凝血和纤溶系统功能失调，使血液处于高凝状态。近年来研究发现，血浆中HCY水平升高与习惯性流产、胎盘早剥、胎儿生长受限、胎儿畸形、死胎、早产、低体重儿等现象的发生密切相关。低甲硫氨酸血症则会引起S-腺苷甲硫氨酸/S-腺苷同型半胱氨酸比值降低，抑制DNA甲基转移酶活性和DNA甲基化，造成染色

叶酸代谢与基因组稳定性

叶酸代谢与基因组稳定性 王晓会124120035 12生A 摘要：叶酸是人体DNA合成、氨基酸之间相互转化、血红白肾上腺索、胆碱、肌酸合成所必需的物质。叶酸为体内DNA合成、修复及甲基化所必需的微营养素，其缺乏可诱发DNA其代谢涉及DNA 合成及甲基化等重要生化过程，对维持人类遗传稳定性意义重大。 关键词：叶酸；人类基因组；稳定性 许多国内外实验室营养基因组学的研究发现，若干微量营养素能影响人类基因组的稳定性，这些微量营养素表现了对基因组的保护或损伤作用对基因组的健康有维护效应。 叶酸简介：叶酸(folic acid，FA)又称蝶酰谷氨酸，由喋啶核、对氨苯甲酸及谷氨酸三部分组成，是一种水溶性B族维生素。FA作为一类重要的微营养物质，对保持染色体正常染色体构像和DNA正常甲基化起到重要作用。FA具有众多的衍生化合物，包括蝶酰单谷氨酸、蝶酰多聚谷氨酸以及携带或不携带甲基的各种形式，所有这些FA的衍生分子统称folate(FL)植物或食品中的FL都以多聚蝶酰谷氨酸形式存在，被摄人体内后，大部分被还原为5．甲基四氢叶酸(5-methyltetrahydrofolate，5-methylTHF)，5-methylTHF是进入血液的主要FL。5-methylTHF进入细胞后通过一碳单位的若干传递过程，最后转变为四氢叶酸(tetrahydrofolate，，IHF)。 叶酸的代谢过程：叶酸主要涉及DNA合成和DNA甲基化两个重要的生物化学过程，一方面涉及尿嘧啶脱氧核苷酸(dUTP)到胸腺嘧啶脱氧核苷酸（dTTP）的合成。另一方面，通过同型半胱氨酸（HC）

合成甲硫氨酸（Met）、S-腺苷甲硫氨酸（SMA）的生化过程进而影响DNA甲基化。当叶酸缺乏时会导致dTTP合成受阻，dUTP积累并掺入DNA，可在继后的DNA修复和修复过程中诱发基因突变、DNA单双链断裂、染色体的断裂及等位基因稳定性下降事件；叶酸缺乏也可导致SAM合成受阻，降低整体DNA甲基化程度，甚至改变细胞中的特异性甲基化模式，从而改变基因表达方式，DNA甲基化水平的降低还可能导致着丝粒异染色质凝聚水平下降，从而在有丝分裂过程中引起某些染色体分离异常，形成非整倍体[1]。 FL进入叶酸循环后，所参与的一碳单位传递转移包括几个关键步骤：首先，一碳单位在2种不同氧化态(甲酸氧化态和甲醛氧化态)的4个位点进入叶酸循环(见图1)：携带甲酸氧化态一碳单位的FL通过5．formylTHF(5．甲酰四氢叶酸)、10．formyl，IHF(10一甲酰四氢叶酸)、5-formiminoTHF(5．亚胺甲基四氢叶酸)3个部位进入叶酸循环；携带甲醛氧化态一碳单位的FL通过5，10．methylene，IHF(亚甲基四氢叶酸，5，10一MnTHF)进入叶酸循环。携带一碳单位的FL进入叶酸循环以后，随即参与分子内一碳单位的传递与转换。5-formylTHF 及10一fomylTHF被转化为5，10．methenyl THF，后者随即被还原为5，10．MnTHF。亚甲基四氢叶酸还原酶将5，10。MnTHF还原为5一methylTHF，后者经甲硫氨酸合成酶催化转变为THF，以接受下一个碳单位[2]。

叶酸能力代谢基因检测

荧光PCR仪检测平台：叶酸能力代谢基因检测 一、叶酸能力代谢基因检测的临床意义： 1、提前预防脑卒中，降低脑卒中发生率和死亡率 大量研究数据显示：亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）基因型变异是导致我国人群脑卒中高发最主要的遗传危险因素。 MTHFR基因的多个位点在人群中具有多态性，其中与功能和疾病最为相关的是C677T位点多态性。在MTHFR基因第677个核苷酸位置，其碱基可发生胞嘧啶（C）向胸腺嘧啶（T）的突变，MTHFR酶的活性逐级降低（CC型活性为100%，CT型活性为70%，TT型活性为35%），引起同型半胱氨酸在人体内不同程度的蓄积，破坏全身血管，从而形成”H型高血压”，导致卒中风险比一般人高出11-28倍。因此提前检测与脑中风最相关的基因MTHFR677C/T基因对预防脑卒中，提前进行干预治疗，从而降低脑卒中的发病率，有着非常重要的意义。 2、提前预防新生儿出生缺陷，提高我国人口素质 神经管畸形，唇腭裂等是常见的新生儿缺陷。出生缺陷不仅影响儿童的生命健康和生活质量，而且给患者家庭带来巨大的精神痛苦和经济负担。而大量的研究表明MTHFR677C/T基因突变会导致孕妇体内同型半胱氨酸升高，从而导致孕妇早产、低出生体重儿、新生儿神经管畸形、唇腭裂等。因此提前检测与孕妇早产，新生儿出生缺陷相关基因，提前进行干预治疗，从而降低新生儿出生缺陷以及孕妇早产，对提高我国人口素质，降低国家和家庭负担方面有着重要的意义。二、检测试剂盒介绍及优势 采用实时荧光定量PCR（Quantitative Real-time PCR）、对MTHFR 基因C677T 位点多态性进行定性检测：首先从EDTA 抗凝的全血中提取基因组DNA，在PCR反应体系中加入荧光探针，利用荧光利用探针可与DNA模板特异性结合的特点，通过报告荧光的不同来分辨出样本的亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）的基因型，最后通过电脑软件自动计算给出结果，区分该基因位点的野生型（CC）、杂合型（CT）和纯合突变型（TT）。 基因多态性检测试剂盒优势： 1.灵敏度高：可以对低至1ng的DNA模板准确的进行基因多态性检测；

叶酸能力代谢基因检测复习课程

如有侵权请联系网站删除 精品资料荧光PCR仪检测平台：叶酸能力代谢基因检测 一、叶酸能力代谢基因检测的临床意义： 1、提前预防脑卒中，降低脑卒中发生率和死亡率 大量研究数据显示：亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）基因型变异是导致我国人群脑卒中高发最主要的遗传危险因素。 MTHFR基因的多个位点在人群中具有多态性，其中与功能和疾病最为相关的是C677T位点多态性。在MTHFR基因第677个核苷酸位置，其碱基可发生胞嘧啶（C）向胸腺嘧啶（T）的突变，MTHFR酶的活性逐级降低（CC型活性为100%，CT型活性为70%，TT型活性为35%），引起同型半胱氨酸在人体内不同程度的蓄积，破坏全身血管，从而形成”H型高血压”，导致卒中风险比一般人高出11-28倍。因此提前检测与脑中风最相关的基因MTHFR677C/T基因对预防脑卒中，提前进行干预治疗，从而降低脑卒中的发病率，有着非常重要的意义。 2、提前预防新生儿出生缺陷，提高我国人口素质 神经管畸形，唇腭裂等是常见的新生儿缺陷。出生缺陷不仅影响儿童的生命健康和生活质量，而且给患者家庭带来巨大的精神痛苦和经济负担。而大量的研究表明MTHFR677C/T基因突变会导致孕妇体内同型半胱氨酸升高，从而导致孕妇早产、低出生体重儿、新生儿神经管畸形、唇腭裂等。因此提前检测与孕妇早产，新生儿出生缺陷相关基因，提前进行干预治疗，从而降低新生儿出生缺陷以及孕妇早产，对提高我国人口素质，降低国家和家庭负担方面有着重要的意义。二、检测试剂盒介绍及优势 采用实时荧光定量PCR（Quantitative Real-time PCR）、对MTHFR 基因C677T 位点多态性进行定性检测：首先从EDTA 抗凝的全血中提取基因组DNA，在PCR反应体系中加入荧光探针，利用荧光利用探针可与DNA模板特异性结合的特点，通过报告荧光的不同来分辨出样本的亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）的基因型，最后通过电脑软件自动计算给出结果，区分该基因位点的野生型（CC）、杂合型（CT）和纯合突变型（TT）。 基因多态性检测试剂盒优势： 1.灵敏度高：可以对低至1ng的DNA模板准确的进行基因多态性检测；

叶酸代谢与基因组稳定性

叶酸代与基因组稳定性 王晓会124120035 12生A 摘要：叶酸是人体DNA合成、氨基酸之间相互转化、血红白肾上腺索、胆碱、肌酸合成所必需的物质。叶酸为体DNA合成、修复及甲基化所必需的微营养素，其缺乏可诱发DNA其代涉及DNA合成及甲基化等重要生化过程，对维持人类遗传稳定性意义重大。 关键词：叶酸；人类基因组；稳定性 许多国外实验室营养基因组学的研究发现，若干微量营养素能影响人类基因组的稳定性，这些微量营养素表现了对基因组的保护或损伤作用对基因组的健康有维护效应。 叶酸简介：叶酸(folic acid，FA)又称蝶酰谷氨酸，由喋啶核、对氨苯甲酸及谷氨酸三部分组成，是一种水溶性B族维生素。FA作为一类重要的微营养物质，对保持染色体正常染色体构像和DNA正常甲基化起到重要作用。FA具有众多的衍生化合物，包括蝶酰单谷氨酸、蝶酰多聚谷氨酸以及携带或不携带甲基的各种形式，所有这些FA的衍生分子统称folate(FL)植物或食品中的FL都以多聚蝶酰谷氨酸形式存在，被摄人体后，大部分被还原为5．甲基四氢叶酸(5-methyltetrahydrofolate，5-methylTHF)，5-methylTHF是进入血液的主要FL。5-methylTHF进入细胞后通过一碳单位的若干传递过程，最后转变为四氢叶酸(tetrahydrofolate，，IHF)。 叶酸的代过程：叶酸主要涉及DNA合成和DNA甲基化两个重要的生物化学过程，一方面涉及尿嘧啶脱氧核苷酸(dUTP)到胸腺嘧啶脱氧核苷酸（dTTP）的合成。另一方面，通过同型半胱氨酸（HC）合

成甲硫氨酸（Met）、S-腺苷甲硫氨酸（SMA）的生化过程进而影响DNA 甲基化。当叶酸缺乏时会导致dTTP合成受阻，dUTP积累并掺入DNA，可在继后的DNA修复和修复过程中诱发基因突变、DNA单双链断裂、染色体的断裂及等位基因稳定性下降事件；叶酸缺乏也可导致SAM 合成受阻，降低整体DNA甲基化程度，甚至改变细胞中的特异性甲基化模式，从而改变基因表达方式，DNA甲基化水平的降低还可能导致着丝粒异染色质凝聚水平下降，从而在有丝分裂过程中引起某些染色体分离异常，形成非整倍体[1]。 FL进入叶酸循环后，所参与的一碳单位传递转移包括几个关键步骤：首先，一碳单位在2种不同氧化态(甲酸氧化态和甲醛氧化态)的4个位点进入叶酸循环(见图1)：携带甲酸氧化态一碳单位的FL 通过5．formylTHF(5．甲酰四氢叶酸)、10．formyl，IHF(10一甲酰四氢叶酸)、5-formiminoTHF(5．亚胺甲基四氢叶酸)3个部位进入叶酸循环；携带甲醛氧化态一碳单位的FL通过5，10．methylene，IHF(亚甲基四氢叶酸，5，10一MnTHF)进入叶酸循环。携带一碳单位的FL 进入叶酸循环以后，随即参与分子一碳单位的传递与转换。5-formylTHF及10一fomylTHF被转化为5，10．methenyl THF，后者随即被还原为5，10．MnTHF。亚甲基四氢叶酸还原酶将5，10。MnTHF还原为5一methylTHF，后者经甲硫氨酸合成酶催化转变为THF，以接受下一个碳单位[2]。

叶酸与基因

叶酸与基因 叶酸是一种水溶性的B族维生素，即B9。最初科学家是从菠菜中提取出来的，因此命名。叶酸对维持健康至关重要，叶酸缺乏会导致很多疾病的发生。 叶酸是人体内重要的"一碳单位"搬运工。所谓"一碳单位"就由一个碳原子构成的化学基团，我们人体内很多重要的化学物质就需要用"一碳单位"来修饰或参与合成，经过修饰的这些物质才能执行正常的生理功能。叶酸就在体内的代谢网络中辛勤搬运这些"一碳单位"。 叶酸参与人体内的代谢主要涉及两个重要方面，一个是DNA的合成。DNA 就是我们熟知的遗传物质。在生长发育过程中，人体的一些细胞要分裂增殖，遗传物质DNA的量也必须加倍供应。DNA是双螺旋结构的大分子，组成它的是一块块建筑材料即核苷酸，核苷酸的一头构成DNA的骨架，而另一头是用于编码遗传信息的碱基。碱基缺乏，DNA就不能顺利合成，缺乏遗传物质的细胞就不能正常分裂增殖，生长发育也会受阻。叶酸是人体内参与合成碱基的关键辅因子。因此，缺乏足够的叶酸，对于胎儿、婴幼儿就会出现发育缺陷和迟缓，孕妇要特别注意补充叶酸。成人的血液细胞也是更新很快的部分，缺乏叶酸也会导致贫血。 肿瘤生长过程中需要大量合成DNA，由于叶酸对DNA材料的加工很重要，因此叶酸代谢途径也被作为抗肿瘤治疗的靶点。一个叫甲氨喋呤的化合物就是叶酸的类似物，它抑制了叶酸的代谢循环，目前仍是临床上多种肿瘤的化疗药物，适用于急性白血病、乳腺癌、绒毛膜上皮癌及恶性葡萄胎、头颈部肿瘤、骨肿瘤、白血病脑膜脊髓浸润、肺癌、生殖系统肿瘤、肝癌、顽固性普通牛皮鲜、自体免疫病等。 叶酸还参与一些氨基酸的转换。我们摄入的蛋白质在体内会分解成各种氨基酸，其中一种叫蛋氨酸，它会被代谢成一种叫同型半胱氨酸的形式。这是一种非常有害的物质，它会造成血管内皮细胞损伤和凝血系统异常等诸多损伤，增加各类心脑血管疾病的危险，比如脑卒中和心肌梗死。叶酸这名优秀的搬运工这时的

基因检测与叶酸吸收

基因与优孕 当年的美国电影《侏罗纪公园》让所有人对“基因”的神奇产生了深刻的印象，回到现实中，神秘的基因科技除了在电影里制造恐龙，具体对我们的生活有些 什么帮助呢？目前，这项前沿科技已经正式应用于临床，为寻常百姓提供个人 基因检测服务，找到身体治病内因，以便针对性、方向性的改善外因，避免重 大疾病的发生。 近年来，不育不孕与新生儿出生缺陷发生率呈逐年上升趋势，引起了医疗及政府相关部门的高度重视。中国疾病预防控制中心妇幼保健中心于2007年先后三次向全国妇幼保健院发出关于开展“妇幼保健遗传检测服务项目”的函，特别强调：“随着人类基因组计划和国际人类基因组单体型图计划的完成，在发达国家基因检测技术也逐渐成为健康医疗体系中的一部分，并已证明能有效降低个人患病风险，同时节约医疗开支”。同时指出：“为了提升妇幼保健服务的技术含量，将最新的预防检测技术及时应用于妇幼保健服务。”首期推出了以“孕期叶酸需求遗传检测”为代表的15项“妇幼保健遗传检测服务项目”。卫生部于2009年6月发出了关于《增补叶酸预防神经管缺陷项目管理方案》的通知，进一步加大了预防新生儿出生缺陷宣传和管理力度，对各级卫生部门提出了具体要求。 叶酸缺乏是导致新生儿出生缺陷的主要原因。 导致机体缺乏叶酸有两个方面的原因：一是叶酸摄入量不足，二是由于遗传（基因）缺陷导致机体对叶酸的利用能力低下（叶酸代谢通路障碍）。 科学研究证明，通过基因检测技术手段，对人体MTHFR基因及MTRR基因做检测，可以及早发现不同个体对叶酸的吸收利用水平，从而筛查出容易引起叶酸缺乏的高危人群，实现个性化增补叶酸（因人而异地确切给出叶酸补充计划和补充量），从而增强叶酸补充依从性，同时加强产前检查，以降低新生儿出生缺陷风险。 而现实生活中，有超过50%的女性是在无意中受孕的。当知道受孕后，增补叶酸的关键期往往已滞后了2-3个月，不利于胎儿神经管缺陷的有效预防。从另一方面，，叶酸增补不应仅仅局限在女性，男性补充叶酸有着同等重要的意义。科学研究证明，男性体内缺乏叶酸，会导致精子质量降低，精液中精子携带的染色体数量异常，引起新生儿出生缺陷。机体叶酸水平低下，也是引起不育不孕、自发性流产的重要原因之一。因此，新婚夫妇准备怀孕前，至少应该做一项“孕期叶酸需求（女性）”及“高同型半胱氨酸血症（男性）”的基因检测，这样更有利于优孕。

叶酸检测意义

叶酸基因检测意义 近年来，不育不孕与新生儿出生缺陷发生率呈逐年上升趋势，引起了医疗及政府相关部门的高度重视。中国疾病预防控制中心妇幼保健中心于2007年先后三次向全国妇幼保健院发出关于开展“妇幼保健遗传检测服务项目”的函，特别强调：“随着人类基因组计划和国际人类基因组单体型图计划的完成，在发达国家基因检测技术也逐渐成为健康医疗体系中的一部分，并已证明能有效降低个人患病风险，同时节约医疗开支”。同时指出：“为了提升妇幼保健服务的技术含量，将最新的预防检测技术及时应用于妇幼保健服务。”首期推出了以“孕期叶酸需求遗传检测”为代表的15项“妇幼保健遗传检测服务项目”。卫生部于2009年6月发出了关于《增补叶酸预防神经管缺陷项目管理方案》的通知，进一步加大了预防新生儿出生缺陷宣传和管理力度，对各级卫生部门提出了具体要求。 叶酸缺乏是导致新生儿出生缺陷的主要原因。导致机体缺乏叶酸有两个方面的原因：一是叶酸摄入量不足，二是由于遗传（基因）缺陷导致机体对叶酸的利用能力低下（叶酸代谢通路障碍）。 科学研究证明，通过基因检测技术手段，对人体MTHFR基因及MTRR基因做检测，可以及早发现不同个体对叶酸的吸收利用水平，从而筛查出容易引起叶酸缺乏的高危人群，实现个性化增补叶酸（因人而异地确切给出叶酸补充计划和补充量），从而增强叶酸补充依从性，同时加强产前检查，以降低新生儿出生缺陷风险。 而现实生活中，有超过50%的女性是在无意中受孕的。当知道受孕后，增补叶酸的关键期往往已滞后了2-3个月，不利于胎儿神经管缺陷的有效预防。从另一方面，，叶酸增补不应仅仅局限在女性，男性补充叶酸有着同等重要的意义。

基因检测

深圳首家基因检测、基因体检、产前基因检测 ★一、通俗了解基因：当人在母体孕育时，其新生命体的智慧、思维模式、爱好领域和倾向、身高、身体状况等就已经定格了；包括出生后，就形成了由父母带给的这种"先天性"，这种"先天性"就是人们常说的基因。 ★二、基因体检的确切阐述：一谈到基因体检，人们常常就会和人的病况结合起来（虽然这是基因体检的重要组成部分），其实基因体检更确切地应该是"基因解析"才更符合它体检的功能特点和结果。 ★三、基因体检的优势：常规体检是人们对身体情况的检查，对身体有可能、但未发生的病况是未知或盲目的；对已知病况的体检是定向的，所以这就需要每年例行体检。而基因体检终生只需要做一次。不仅能预估因基因薄弱环节有可能引起的恶性疾病，更能提醒人们对薄弱方面进行及早预防，常规体检是无法完成这一任务的。基因体检还能测评出智力、学习、爱好趋向、人际关系等诸多方面的情况，这对孩子的后天教育有着极大的参考和帮助。对中老人而言，正处于疾病多发年龄段，这种提前预知的基因体检，对病况的预防、治疗更有意义。防病胜于治病，基因体检真正能才做到这一点！ 基因检测体检套餐 高脂、高蛋白饮食人群基因体检项目 一、项目定义： 高脂、高蛋白饮食人群是指喜欢吃肉、吃某些高脂、高热量西餐，从而吸收产生高脂、高蛋白的人群。 二、检测项目（16 项）： 1.胆固醇代谢能力、 2.抗氧化能力、 3.动脉粥样硬化、 4.房颤、 5.肥厚性心肌病、 6.冠心病、 7.老年性痴呆症、 8.脑梗塞、 9.脑溢血、10.深静脉血、11.心肌梗塞、12.原发性高血压、13.II型糖尿病、14.单纯性肥胖、15.高脂血症、16.脂肪肝 三、检测的意义： 检查相关方面患病几率或致病程度。

叶酸代谢能力基因检测操作流程

MTHFR C677T , MTHFR A1298C,MTRR A66G基因检测操作流程实验流程 一、操作步骤 适用仪器：普通PCR仪 样本要求：EDTA抗凝剂的静脉全血（100μl），室温保存不超过7天，2～8℃保存不超过1个月，-20℃保存不超过3个月，反复冻融次数不超过5次；DNA的浓度应不低于5ng/μl，A260/ A 280应在1.6~2.0之间。有血块的样本需经匀浆处理或用组织研磨仪研磨处理后再进行全血DNA的提取。 检验方法：（试剂盒中的检本测卡、阳性/阴性对照卡上标识解释如下：M表示突变型，WT表示

野生型，C表示质控线，T表示检测线。） A：样本DNA的制备 试剂盒准备工作： 1、清洗液BW-I：用50 ml量筒分别移取35 ml无水乙醇（分析纯）和35 ml异丙醇加入至清洗液BW-I试剂瓶中，颠倒混合均匀，在试剂瓶上标明“已加入醇”和日期，备用。 2、清洗液BW-II：用50 ml量筒移取49 ml无水乙醇加入至清洗液BW-II试剂瓶中，颠倒混合均匀，在试剂瓶上标明“已加入醇”和日期，备用。 3、蛋白酶K准备：取出蛋白酶K，室温解冻，涡旋混匀后备用。 4、磁性微粒准备：将磁性微粒涡旋混匀，保证均一。 实验操作步骤： 1.将20 μl蛋白酶K溶液加入2 ml 离心管的管底。依次加入100 μl全血、200 μl裂解液 BL，用涡旋振荡器混合15 sec(以下简称涡旋混匀)，56 ℃水浴20 min。 2.向步骤1裂解处理的样品中依次加入300 μl结合液BI、25 μl的磁性微粒（移取前必须充 分涡旋混匀），涡旋混匀，室温静置5 min。磁性分离5 min，弃上清。 3.从磁性分离器上取出离心管，加入400 μl清洗液BW-I，涡旋混匀，磁性分离至上清澄清（期 间上下颠倒数次，以清洗离心管管壁），弃上清；重复本步操作，以400μl清洗液BW-I重复清洗一次。 4.从磁性分离器上取出离心管，加入400 μl清洗液BW-II，涡旋混匀，磁性分离至上清澄清（期 间上下颠倒数次，以清洗离心管管壁），弃上清（尽可能弃去所有的清洗液BW-II）。 5.打开离心管盖，将其室温晾干5 min。 6.从磁性分离器上取下离心管，向管中加入100 μl 洗脱液ES，涡旋混匀，56℃水浴5 min。 7.将离心管置于磁性分离器上，磁性分离至上清澄清。将上清液（分离纯化得到的DNA溶液） 转移到2 ml离心管中，直接用于下游实验或于-20 ℃保存备用。 B：PCR扩增液准备 （1）每人份需做两个反应，取两个无菌0.2ml PCR薄壁管，在PCR薄壁管管盖上依次标有M、WT。 （2）将试剂从-20℃取出平衡至室温，瞬时离心。在标有M的管中加入29μl 扩增液（M），在标

叶酸代谢简介学习资料

叶酸代谢简介

叶酸代谢 王晓会 124120035 12生A 叶酸简介：叶酸(folic acid，FA)又称蝶酰谷氨酸，由喋啶核、对氨苯甲酸及谷氨酸三部分组成，是一种水溶性B族维生素。人体自身不能合成叶酸，需从食物或消化过程中解体的微生物菌体获得。目前人类所摄人的叶酸包括天然食品中的多聚蝶酰谷氨酸，及药物和强化食品中所添加的氧化型叶酸(folic acid，FA)。饮食中不同类型的叶酸在体内经肝脏代谢转化形成5-甲基四氢叶酸(5-methyltetrahydrofolate，5-MeTHF)后进入血液循环系统被细胞吸收利用。FA作为一类重要的微营养物质，对保持染色体正常染色体构像和DNA正常甲基化起到重要作用。FA具有众多的衍生化合物，包括蝶酰单谷氨酸、蝶酰多聚谷氨酸以及携带或不携带甲基的各种形式，所有这些FA的衍生分子统称folate(FL)植物或食品中的FL都以多聚蝶酰谷氨酸形式存在，被摄人体内后，大部分被还原为5-甲基四氢叶酸，5-methylTHF是进入血液的主要FL。5-methylTHF进入细胞后通过一碳单位的若干传递过程，最后转变为四氢叶酸(tetrahydrofolate，THF)。 叶酸的代谢过程：叶酸主要涉及DNA合成和DNA甲基化两个重要的生物化学过程，一方面涉及尿嘧啶脱氧核苷酸(dUTP)到胸腺嘧啶脱氧核苷酸（dTTP）的合成。另一方面，通过同型半胱氨酸（HC）合成甲硫氨酸（Met）、S-腺苷甲硫氨酸（SMA）的生化过程进而影响DNA甲基化。当叶酸缺乏时会导致dTTP合成受阻，

dUTP积累并掺入DNA，可在继后的DNA修复和修复过程中诱发基因突变、DNA单双链断裂、染色体的断裂及等位基因稳定性下降事件；叶酸缺乏也可导致SMA合成受阻，降低整体DNA甲基化程度，甚至改变细胞中的特异性甲基化模式，从而改变基因表达方式，DNA甲基化水平的降低还可能导致着丝粒异染色质凝聚水平下降，从而在有丝分裂过程中引起某些染色体分离异常，形成非整倍体。 FL进入叶酸循环后，所参与的一碳单位传递转移包括几个关键步骤：首先，一碳单位在2种不同氧化态(甲酸氧化态和甲醛氧化态)的4个位点进入叶酸循环：携带甲酸氧化态一碳单位的FL通过5-formylTHF(5-甲酰四氢叶酸)、10-formylTHF(10-甲酰四氢叶酸)、5-formiminoTHF(5-亚胺甲基四氢叶酸)3个部位进入叶酸循环；携带甲醛氧化态一碳单位的FL通过5，10-methyleneTHF(亚甲基四氢叶酸，5，10-MnTHF)进入叶酸循环。携带一碳单位的FL进入叶酸循环以后，随即参与分子内一碳单位的传递与转换。5，1 0-甲基四氢叶酸一方面作为甲基供体随后被用于dTMP合成，参与DNA的合成，另一方面用于Met合成，从而形成在各种反应中所需的甲基供体之一的SAM，参与蛋白质的合成或生物的甲基化。5-formylTHF 及10-fomylTHF被转化为5，10-methenyl THF，后者随即被还原为5，10-MnTHF。亚甲基四氢叶酸还原酶将5，10-MnTHF还原为5-methylTHF，后者经甲硫氨酸合成酶催化转变为THF，以接受下一个碳单位。

MTHFR基因检测在妇产科领域中的应用

MTHFR基因检测 在妇产科领域中的应用
药学部临床药学科

目 录
一 二 三 四 五
MTHFR基因简介 MTHFR基因突变与畸胎儿风险
MTHFR基因突变与流产风险 MTHFR基因突变与妊高征 个体化补充叶酸方案建议

MTHFR简介
MTHFR全称为亚甲基四氢叶酸还原酶 (5,10-methylenetetra hydrofolate reductase),它是叶酸-甲硫氨酸代谢 途径中的关键酶。 MTHFR可以使5,10-亚甲基四氢叶酸 (5, 10-MTHF)还原为5-甲基四氢叶酸 (5-MTHF)， 从而为体内嘌呤、 嘧
啶的合成及DNA、RNA、蛋白质的甲基 化提供甲基，同时维持体内正常的同 型半胱氨酸 (Hcy)水平。
亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性及临床意义. 国外医学: 遗传学分册. 2005, 28(1): 29-32.

MTHFR基因型
m
MTHFR 基因位于 1 号染色体 lp36.3 位置， 具有多态性， 存在3种基因型：
CC型（野生型） CT型(杂合突变型)
MTHFR基因酶活性
100%
TT型(纯合突变型)
65%
m
30%
MTHFR C677T 基因突变使得酶活性急剧下 降。
CC
CT
CT
Geographical distribution of MTHFR C677T, A1298C, and MTRR A66G polymorphisms in China: Finding from 15357 adults of Han nationality. PLOS ONE. 2013, 8(3): e57917.

叶酸基因检测科学指导-给患者

叶酸代谢障碍遗传检测及防治指导干预 基因检测科学指导补充叶酸 1.叶酸代谢障碍是不良妊娠/出生缺陷的危险因素 2.叶酸代谢障碍遗传风险等级与不良妊娠/出生缺陷率正相关；通过整个孕期补服叶酸可弥补遗传缺 陷。 3.通过叶酸代谢障碍遗传检验临床干预，可显著提高叶酸补服率。 注：*1.叶酸代谢障碍基因检测未发现风险者按国家规定的参考传统增补剂量：从孕前3个月至孕 早期3个月补服叶酸0.4 mg/d，孕中、晚期注意食物补充即可。 *2.叶酸代谢障碍基因检测发现风险者，建议孕中、晚期继续增补叶酸0.8 mg/d，对于MTRR基因（全称5-methyltetrahydrofolate-homocysteine methyltransferase reductase,编码甲硫氨酸合成酶还原酶）突变的妇女还应注意补充维生素B12，推荐剂量为2.4-2.6微克/天。 *3.对于有过NTD（神经管畸形）生育史、再次怀孕的妇女，叶酸补充剂量可增加到4-5mg/天，详细请咨询产科医师。 小常识：叶酸广泛存在于各种食物中，富含叶酸的食物包括深绿色叶子蔬菜、柑橘、豆类和谷物等。但是食物中的叶酸很不稳定，在收割、储存、加工和烹饪的过程中，一半以上的叶酸活性都会丧失掉。叶酸是水溶性维生素，水煮时更容易丧失。而且天然叶酸不容易被人体吸收，只有大约50%能被人体吸收。以叶酸含量最高的绿叶蔬菜为例，它们的叶酸含量虽然能高达160微克/100克，但是在考虑到食物叶酸的不稳定性和可吸收性后，每天要吃1000克叶子蔬菜才能满足孕妇对叶酸的要求，这显然难以做到。因此，大多数人难以从食物中获得充足的叶酸。 牟平区妇幼保健院 咨询电话4330510，4330502

叶酸代谢简介

叶酸代谢 王晓会124120035 12生A 叶酸简介：叶酸(folic acid，FA)又称蝶酰谷氨酸，由喋啶核、对氨苯甲酸及谷氨酸三部分组成，是一种水溶性B族维生素。人体自身不能合成叶酸，需从食物或消化过程中解体的微生物菌体获得。目前人类所摄人的叶酸包括天然食品中的多聚蝶酰谷氨酸，及药物和强化食品中所添加的氧化型叶酸(folic acid，FA)。饮食中不同类型的叶酸在体内经肝脏代谢转化形成5-甲基四氢叶酸(5-methyltetrahydrofolate，5-MeTHF)后进入血液循环系统被细胞吸收利用。FA作为一类重要的微营养物质，对保持染色体正常染色体构像和DNA正常甲基化起到重要作用。FA具有众多的衍生化合物，包括蝶酰单谷氨酸、蝶酰多聚谷氨酸以及携带或不携带甲基的各种形式，所有这些FA的衍生分子统称folate(FL)植物或食品中的FL都以多聚蝶酰谷氨酸形式存在，被摄人体内后，大部分被还原为5-甲基四氢叶酸，5-methylTHF是进入血液的主要FL。5-methylTHF进入细胞后通过一碳单位的若干传递过程，最后转变为四氢叶酸(tetrahydrofolate，THF)。 叶酸的代谢过程：叶酸主要涉及DNA合成和DNA甲基化两个重要的生物化学过程，一方面涉及尿嘧啶脱氧核苷酸(dUTP)到胸腺嘧啶脱氧核苷酸（dTTP）的合成。另一方面，通过同型半胱氨酸（HC）合成甲硫氨酸（Met）、S-腺苷甲硫氨酸（SMA）的生化过程进而影响DNA甲基化。当叶酸缺乏时会导致dTTP合成受阻，dUTP积累并掺入DNA，可在继后的DNA修复和修复过程中诱发基因突变、DNA单双

同型半胱氨酸代谢基因检测报告(模板)

。 。 1 同型半胱氨酸代谢基因检测及遗传分析报告 基本信息 基因分型结果 * 基因的基本组成单位是四种脱氧核糖核苷酸，分别由A 、T 、C 和G 四种字母表示。每个人都有两套基因，分别源自父亲和母亲，某个基因位点的遗传变异可能存在于这两套基因中的一个或两个，因此，将组合出三种基因型：野生型，表示两个等位基因都无变异；杂合突变，表示其中有一个等位基因存在变异；纯和突变，表示两个等位基因都存在变异。 **分型结果中的绿色代表野生纯合基因型，该基因型的个体基因功能处于正常水平； *** 分型结果中的红色代表突变基因型，该基因型的个体基因功能较正常水平有所降低；

遗传分析 1、遗传分析结论 根据您的基因检测结果，您在MTHFR基因的C677T位点为纯和突变，在MTRR的基因的A66G位点为纯和突变，因此您在同型半胱氨酸的代谢能力方面具有先天遗传缺陷。2、基因位点遗传分析 MTHFR MTHFR（5,10-methylenetetrahydrofolate reductase, 亚甲基四氢叶酸还原酶）是叶酸代谢途径的关键酶之一，可催化5，10-二甲基四氢叶酸产生甲基供体，促使体内同型半胱氨酸甲基化合成甲硫氨酸，使同型半胱氨酸代谢并降低。 MTHFR基因的C677T位点突变，改变了编码的亚甲基四氢叶酸还原酶的蛋白结构，导致酶的活性与耐热性下降，机体转化叶酸为甲基化叶酸的能力显著降低。根据研究表明，携带MTHFR基因的C677T位点为纯和突变, 会导致机体叶酸转化能力降低约70%（携带MTHFR基因的C677T位点为杂合突变, 会导致机体叶酸转化能力降低约40%）。 因此，您需要不定期的补充甲基化叶酸，以调控先天缺陷基因的表达，确保机体有足够的活性叶酸用以降低同型半胱氨酸毒素可能升高的风险。尤其需要注意的是避免使用合成叶酸，因为长期服用合成叶酸具有导致癌症的风险。 MTRR MTRR（5-Methyltetrahydrofolate-Homocysteine MethyltransferaseReductase，甲硫氨酸合成酶还原酶）是同型半胱氨酸向甲硫氨酸转化的关键酶之一。甲硫氨酸是蛋白质合成和一碳代谢的必需氨基酸，它的合成是由甲硫氨酸合成酶（MTR基因编码）催化的，而甲硫氨酸合成酶因为辅助因子维生素B12被氧化而最终失活。MTRR编码的甲硫氨酸合成酶还原酶能够通过还原型甲基化作用重新生成具有功能活性的甲硫氨酸合成酶。 突变基因影响了产物酶的活性，导致维生素B12不能被有效甲基化，使得甲硫氨酸合

叶酸代谢

孕期叶酸需求基因检测 叶酸属于B 族维生素，是DNA 和RNA 合成过程中需要的重要物质，为基因调控的甲基化过程提供甲基供体，参与体内许多重要物质如蛋白质、脱氧核糖核酸(DNA)及血红蛋白等的合成，并协助完成氨基酸的转化，从而在细胞生长、分化、修复和宿主防御等方面起重要作用。人体不能合成叶酸，必须依靠外源性供给。叶酸缺乏导致母体同型半胱氨酸浓度升高，会造成胎儿生长迟缓、早产及婴儿低出生体重的危险性增加，还可导致胚胎神经管畸形(NTD)、心脏畸形，使母体习惯性自发流产和妊娠并发症增加。 育龄妇女增补叶酸是我国优生优育相关措施的重要内容之一，1997年，卫生部批准第一个小剂量叶酸片“斯利安”用于临床。2009年6月，卫生部印发了《增补叶酸预防神经管缺陷项目管理方案》的通知。临床实践证明，服用叶酸可以使神经管缺陷的发病率下降50-85%。 但我国每年仍还有10万人左右的神经管缺陷发生。 导致机体缺乏叶酸主要有两个方面的原因：一是叶酸摄入量不足，二是由于遗传（基因）缺陷导致机体对叶酸的利用能力低下（叶酸代谢通路障碍）。另外，孕妇、乳母都处于特殊的生理状态，叶酸需要量增加，更需特别注意叶酸的增补。 与叶酸利用能力相关的关键基因位点： 科学研究证实并且机理研究清楚的与甲基类维生素（叶酸及维生素B12）代谢密切相关的基因是MTHFR 和MTRR 。5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR ）、甲硫氨酸合成酶还原酶（MTRR ）这两个基因变异引起的相应的酶活性降低可阻抑同型半胱氨酸转化为甲硫氨酸，导致低叶酸血症和高同型半胱氨酸血症

以MTHFR 基因C677T 位点为例： 我国推荐孕期补充量为400微克/天，可以显著降低患儿的出生缺陷，据统计数据显示可以降低胚胎神经管畸形NTDs 发病率，但是仍对15%-59%的人群效果不明显，通过增加合适剂量的叶酸可以进一步降低NTDs 。 通过基因筛查叶酸代谢缺陷人群，个性化增补叶酸： 叶酸利用能力基因检测项目涉及的基因及位点如下表所示： 风险分级：