酶法提取越桔果渣花色苷酶解条件的研究
葡萄皮花色苷的提取
葡萄皮中花色苷和油的提取 一.实训目的： 1. 会通过查阅文献资料，搜集有关数据，并正式选用公式的能力。当缺乏必要数据尚需自己通过实验测定或在生产现场进行实际查定。 2. 在兼顾技术上先进性，可行性，经济合理性的前提下，学生能够综合分析设计任务要求，确定仪器分析测定。进行设备选型，并提出保证过程正常，安全运行所需要的监测和计量参数，同时，还要考虑改善劳动条件和环境保护的有效措施。 3. 进一步巩固、提高已有的实验操作技能，掌握常规工艺试验技术，常规检验技术，学会设计工作思路、方法、步骤，受到技术员的基本训练，提高技术实施能力。 4.能够用精炼的语言，简洁的文字，清晰地的图标来表达自己的实际思想和实验结果。 5. 树立严谨的科学作坊的良好的工作习惯，提高独立思考和与他人合作完成任务的能力。 二、实训场所： 北京电子科技职业学院色谱分析实验室及生化实验室。 三、实训要求： 1. 论述相关企业中分析仪器的种类，尤其侧重于气象色谱仪、液相色谱仪、紫外可见以及酸度计等仪器的使用。 2. 测定方法依据和方法原理。 3. 样品及采样过程。 4. 分析工作质量保证措施。 5. 测定数据记录以及数据计算处理过程。 6. 报告测定结果，对样品质量作出评价。
7. 分析工作质量作出自我评价。 四、实训内容及安排： （一）课程设计的主要任务： 1.葡萄皮中花色苷和油的提取 本组做的是葡萄皮中油的提取。 五、实训过程： 12月26日查阅相关资料确定实验方案 1、超声波提取法： 利用超声波破碎细胞（空化）和强化传质作用（机械作用），使溶剂分子渗透到组织细胞中，能更好地与溶质分子接触，使细胞中可溶成分更好地释放出来。它具有操作简单、提取温度低、提取率高、提取物结构不易被破坏等优点。近年来，研究者们已将超声波技术应用到多种油脂的提取中。 相关研究表明，对比无水乙醇、丙酮、石油醚和正己烷四种提取剂在超声波作用下对油的提取效率，石油醚为较适宜的提取剂。以石油醚作为提取剂时，最佳提取工艺为超声时间25min，功率500W,循环泵转速1200r/min，料液比1：5，在此条件下提取率可达94．12%。 2、超临界CO2流体技术： 超临界流体技术是近年来新兴的一门食品工程高新技术。超临界流体以其特有的理化性质、无可比拟的优点受到了各行各业的重视，并被不断地加以应用。超临界CO2的特殊性质决定了其在提油、萃取天然成分等非极性物质方面具有独特的优越性——速度快；产率高；不破坏不饱和脂肪酸；无溶剂残留；油脂色泽浅；脱酸、脱色、脱蜡、脱臭等在萃取器内一次完成。现在，超临界流体技术的基础性和应用性研究正处于一个高潮，将这一技术用于油脂等非极性天然成分萃取的研究和报道已经很多，如在小麦胚芽油提取、植物精油萃取、酒花萃取、磷脂提取等方面已有大量报道。 3、索氏提取法： 在实验室多采用索氏提取法来提取油脂，索氏提取器就是利用溶剂回流及虹吸原理，使固体物质连续不断地被溶剂萃取，既节约溶剂，萃取效率又高。 萃取前先将固体物质研碎，以增加固液接触的面积。然后将固体物质放在滤纸套内，置于提取器中，提取器的下端与盛有溶剂的圆底烧瓶相连，上面接回流冷凝管。加热园底烧瓶，使溶剂沸腾，蒸气通过提取器的支管上升，被冷凝后滴入提取器中，溶剂和固体接触进行萃取，当溶剂面超过虹吸管的最高处时，含有萃取物的溶剂虹吸回烧瓶，因而萃取出一部分物质，如此重复，使固体物质不断为纯的溶剂所萃取、将萃取出的物质富集在烧瓶中。
紫番薯原花青素的热回流法提取技术研究
《食品工业》2011年第8期 54 遵义医学院珠海校区（珠海 519041） 紫番薯原花青素的热回流法提取技术研究 王文君，向灿辉，陈阳，胡永泽，孙志勇，冯丽娟，王敏 摘 要 以脱脂紫番薯粉为原料，研究其原花青素的热回流提取工艺条件。运用单因素试验和正交试验，探讨溶剂浓度、提取次数、提取温度、料液比、pH 值和提取时间等因素对紫番薯原花青素提取率的影响，并以吸光度作为提取率的评价指标，分析最佳提取条件。结果表明：热回流法的最佳工艺条件为：料液比1︰25，pH6，提取温度70 ℃，乙醇浓度50%，提取时间60 min ，提取次数为2次，原花青素的提取率为5.258 mg/g 。 关键词 紫番薯；原花青素；热回流提取法；正交试验 Research on Hot Re ? ux Extraction Method of Purple Sweet Potatoes’ Proanthocyanidins Wang Wen-jun, Xiang Can-hui, Chen Yang, Hu Yong-ze, Sun Zhi-yong, Feng Li-juan, Wang Min Zunyi Medical College Zhuhai Campus (zhuhai 519041) Abstract Hot reflux extraction method of the proanthocyanidins from the purple sweet potatos was investigated by examining the effects of extraction times, solvent concentration, temperature, time, solid-liquid ratio and pH on the proanthocyanidins yield using single factor method coupled with orthogonal ayyay design. Results showed the best extraction conditions is as follows, solid-liquid ratio of 1︰25, pH6, temperature is 70 ℃, ethanol concentration of 50%, extraction time is 60 min,extraction times as 2. Under such conditions,the yield of proanthocyanidins was 5.258mg/g .Keywords purple sweet potato ; proanthocyanidins ; hot re ? ux extraction ; orthogonal array design 基金项目：遵义医学院基金项目(2008F-356） 原花青素(Proanthocyanidins ，简称PC )是一种天然色素，是植物中广泛存在的一类属于双黄酮衍生物的天然多酚化合物。研究表明，原花青素具有抗腹泻、抗溃疡、抗抑郁、抗癌、抑菌、防辐射、降血压及促进毛发生长等多种疗效，其毒理试验研究也表明，原花青素无致畸变、突变作用，大鼠、小鼠口服原花青素的LD 50均在4 000 mg/kg 以上，属安全无毒级[1-4]。 PC 拥有强有力的抗氧化能力，其在人体内氧化后清除自由基的能力是VC 的20倍，VE 的50倍。PC 以其优越多功能性及安全性，在营养保健、化妆品、食品、医药等领域的应用越来越广泛[5-6]。然而，目前原花青素的提取主要来自葡萄籽，由于原材料品种单一和产量不高，使得原花青素的价格非常昂贵。试验以热回流法对紫番薯原花青素进行提取，并进行正交试验分析，得出了紫番薯原花青素的最佳提取工艺。1 材料与方法 1.1 材料、试剂与仪器 紫番薯，市售；儿茶素标准品，天津尖峰天然产物亚就开发有限公司；香草醛、硫酸铁铵等均为分析纯。 UV210型紫外可见分光光度计：日本岛津；CQ-200B 型超声波振荡器：上海跃进医学用光学器械厂(28KHZ )；400 g 摇摆式高速中药粉碎机：温岭市林大机械有限公司；SHB-III 循环水式多用旋转蒸发仪：巩义市英峪仪器厂。1.2 方法 1.2.1 单因素变量试验 1.2.1.1 提取次数对提取率的影响 准确称取脱脂紫番薯粉2.000 g 置于圆底烧瓶中，向其中加入10.00 mL 乙醇溶剂，在60 ℃水浴恒温60 min ，抽滤，固体残渣在相同条件下进行第二次、第三次、第四次提取，四次滤液分别定容至100 mL ，以紫外分光光度法测定吸光度(A )作为提取率的评价指标。1.2.1.2 溶剂浓度对提取率的影响 准确称取5份脱脂紫番薯粉2.000 g 分别置于圆底 烧瓶中，向其中分别加入浓度为20%， 40%，60%，80%，100%乙醇溶剂10.00 mL ，在60 ℃水浴恒温60 min ，提取两次，合并滤液，定容至100 mL ，以紫外分光光度法测定吸光度(A )作为提取率的评价指标。1.2.1.3 料液比对提取率的影响 准确称取4份脱脂紫番薯粉2.000 g 分别置于圆底烧 瓶中，按料液比(w ︰v )1︰5， 1︰10，1︰20，1︰30向其中加入60%的乙醇溶剂，在60 ℃水浴恒温60 min ，提取两次，合并滤液，定容至100 mL ，以紫外分光光度法测定吸光度(A )作为提取率的评价指标。 1.2.1.4 提取温度对提取率的影响 准确称取4份脱脂紫番薯粉2.000 g 置于圆底烧瓶中，向其中加入40.00 mL 60%乙醇溶剂，分别为30 ℃，50 ℃，70 ℃，90 ℃恒温60 min ，提取两次，合并滤液，定容至100 mL ，以紫外分光光度法测定吸光度(A )作为提取率的评价指标。
葡萄皮花色苷的提取及稳定性研究(一)
论文摘要：葡萄皮花色苷是一种天然色素，具有溶解性好、色彩鲜艳、易与食品结合上色等特点，是替代合成色素的一类重要食品添加剂。 本实验利用超声波辅助酸性乙醇溶剂法对葡萄皮花色苷的提取进行了研究，获得葡萄皮花色苷提取的最优工艺，并研究了花色苷对外界环境的稳定性。实验结果表明，葡萄皮中花色苷的最适提取条件为：提取温度60℃，提取液的乙醇浓度80%，提取液pH 0.5。提取液的pH对花色苷提取率有显著性影响。稳定性实验结果表明，低温条件下的花色苷较为稳定，随着温度的升高葡萄皮花色苷降解速度加快，稳定性逐渐下降；避光保存时花色苷稳定性最好，当葡萄皮花色苷溶液处于光照条件下，花色苷降解速率加快；蔗糖、防腐剂、亚硫酸钠对葡萄皮花色苷的稳定性无明显影响；H2O2对葡萄皮花色苷的稳定性有较大影响。 Keywords: grape skin; anthocyanins; extraction; stability test Abstract ：Anthocyanins are natural technicolored pigments and are bright-coloured, which can dissolve in water and combine with food easily. They are important food additives instead of artificial colour. The anthocyanins were extracted from grape skin by ultrasonic wave and the stability of anthocyanins from grape skins were studied. The results showed the optimal temperature for extraction was 60℃, the concentration of ethanol was 80% and the pH was 0.5. The pH of extraction had significantly influence on the ratio of extraction. The stability test showed that anthocyanins from grape skins with low temperature were stable and the rate of degradation was rapid when temperature was high. Light affected the stability of anthocyanins from grape skins and it was stable when anthocyanins were out of light. Glucose, aseptic, Na2SO3 had little influence on the stability of anthocyanins from grape skins;while H2O2 had great influence on the stability of anthocyanins from grape skins. 1 绪论 1.1 花色苷的概述 花色苷是自然界中最庞大的一类水溶性色素，日常生活中人们食用的被子植物和开花植物中，至少有27个科，73个属和很多个种的植物中含有花色苷类物质[1]。花色苷广泛存在这些植物的花、果实、茎、叶和根等器官的细胞液中，使其呈现由红、紫红到蓝等不同的颜色。 1.1.1 花色苷的化学结构以及种类 在花色苷属于黄酮类化合物[8] [9] [10]，由花色苷配基（花色素）和糖基以糖苷键结合形成。花色苷配基（花色素）具有黄酮类物质的C6C3C6 结构[11]，是2-苯基-苯并吡喃阳离子的衍生物。花色素很不稳定，所以在食品中和植物中主要以花色苷的形式存在。 花色素因为3、5位上的取代基的差异而有不同的种类。目前已知的花色素有二十余种，在食品中重要的有六种[11] [12] [13]，即花翠素（飞燕草素）、花青素（矢车菊素）、3′-甲花翠素（矮牵牛色素）、甲基花青素（芍药色素）、二甲花翠素（锦葵色素）[2] [3]。不同种类的花色苷因花色素结构的不同而带有不同的颜色。
生物酶解技术
天然植物有效成分的提取新技术——生物酶解技术 酶是生物体活细胞产生的，以蛋白质形式存在的一类特殊的生物催化剂。某些酶可以在常温、常压和温和的酸碱条件下，将植物细胞壁分解，较大幅度提高天然植物中有效成分的提取率，改善生产过程中的滤过速度和纯化效果，提高产品纯度和制剂的质量。 生物酶解技术包括酶法提取(又称酶反应提取)和酶法分离精制两方面。该技术是在传统的天然植物成分提取基础上进行的，应用常规提取设备即可完成，操作简便，成本低廉。 1原理 酶法提取是根据植物细胞壁的构成，利用酶反应所具有高度专一性的特点，选择相应的酶，将细胞壁的组成成分(纤维素、半纤维素和果胶质)水解或降解，破坏细胞壁结构，使细胞内的成分溶解、混悬或胶溶于溶剂中，从而达到提取目的，且有利于提高成分的提取率。许多天然植物中含有蛋白质，采用煎煮法时蛋白质遇热凝同，影响提取成分的煎出，如加入蛋白酶，就可以将天然植物中的蛋白质分解析出，如此可提高成分的提取率。 天然植物水提液除了含有提取成分外，还含有淀粉、蛋白质、果胶、树胶、树脂、黏液质等，这些成分的存在往往使提取液呈混悬状态，并影响提取液的滤过速度，为此要实施除杂，常用的方法有离心法、澄清剂法、醇沉法、大孔树脂吸附法、离子交换法、微孑L滤膜滤过法及超滤法。而酶法除杂是分离精制的新方法，此方法是根据天然物提取液中杂质的种类、性质，有针对性地采用相应的酶，将这些杂质分解或除去，以改善液体产品的澄清度，提高产品的稳定性。由于酶反应具有高度的专一性，决定了酶解方法除杂的高效性。 2酶的种类 2．1 用于天然植物细胞破壁的酶 2．1．1 纤维素酶 纤维素是由链状结构的β-D-葡萄糖以β- l，4-葡萄糖苷键结合而成的聚合物，纤维素分子束聚集成为较大的单位——微纤丝，构成了植物细胞壁的框架，在微纤丝之间的空隙中尚有其他物质(角质、木质素、二氧化硅)，形成植物细胞壁的基本结构。在干燥植物中纤维素约占总重的l／3～l／2。 纤维素酶具有分解、软化纤维素、破坏细胞壁、增加植物细胞内容物的溶出量的作用，它是降解纤维素生成葡萄糖的一组酶的总称，包括内切葡聚糖酶、纤维二糖水解酶、β-葡萄糖苷酶3个组分。最适pH值4～5，最佳作用温度40~60℃。 2．1．2半纤维素酶 半纤维素包括木聚糖、甘露聚糖、阿托伯聚糖、阿拉伯半乳聚糖和木葡聚糖等多种组分，约占植物干重的35％。含量仅次于纤维素。 半纤维素酶由β-甘露聚糖酶、β-木聚糖酶等内切型酶，β-葡萄糖苷酶、β-甘露糖苷酶、β-木糖苷酶等外切型酶以及阿拉伯糖苷酶、半乳糖苷酶、葡萄糖苷酸酶和乙酰木聚糖酶等组成。具有消化植物细胞壁的作用。 2．1．3果胶酶 果胶质属于黏液质类，是植物细胞的正常产物，多见于植物的地下部分及种子中。 果胶酶是分解果胶质的聚糖水解酶、果胶质酰基水解酶的一类复合酶的总称。固体的呈浅黄色，易溶于水；液体的呈棕褐色。最适作用温度45-50 ℃，作用pH值3～6。
中草药提取方法——溶剂提取法
⑴溶剂提取法原理及常用溶剂溶剂提取法是根据中草药中各种成分在溶剂中的溶解性质，选用对活性成分溶解度大，对不需要溶出成分溶解度小的溶剂，而将有效成分从药材组织内溶解出来的方法。当溶剂加到中草药原料（需适当粉碎）中时，溶剂由于扩散、渗透作用逐渐通过细胞壁透入到细胞内，溶解了可溶性物质，而造成细胞内外的浓度差，于是细胞内的浓溶液不断向外扩散，溶剂又不断进入药材组织细胞中，如此多次往返，直至细胞内外溶液浓度达到动态平衡时，将此饱和溶液滤出，继续多次加入新溶剂，就可以把所需要的成分近于完全溶出或大部溶出。中草药成分在溶剂中的溶解度直接与溶剂性质有关。运用溶剂提取法的关键，是选择适当的溶剂。溶剂选择适当，就可以比较顺利地将需要的成分提取出来。选择溶剂要注意以下三点：①溶剂对有效成分溶解度大，对杂质溶解度小；②溶剂不能与中药的成分起化学变化；③溶剂要经济、易得、使用安全等。选用什么样的溶剂提取中药成分，取决于溶剂的性质和被提取成分的化学结构及溶解性。溶剂可分为水及酸水或碱水。亲水性有机溶剂、亲脂性有机溶剂。根据“相似相溶原理”，欲提取亲脂性成分应选用亲脂性溶剂，欲提取亲水性成分则选用水及亲水性溶剂。应注意的是乙醇、甲醇虽然属于亲水性溶剂，它们可与水随便混溶，但很多亲脂性成分可溶于乙醇、甲醇，所以乙醇或甲醇溶液中既有水溶性成分，也有很多脂溶性成分。乙醇或甲醇中可加入水配成不同浓度的乙醇或甲醇，根据提取成分的情况可选用适当浓度的醇进行提取。⑵提取方法用溶剂提取中药成分，常用浸渍法、渗漉法、煎煮法、回流提取法、连续提取法等。同时，原料的粉碎度、提取时间、提取温度、设备条件等因素也都能影响提取效率，必须加以考虑。①浸渍法：浸渍法是将处理过的药材，用适当的溶剂在常温或温热（60～80℃）的情况下浸渍以溶出其中成分。本法适用于有效成分遇热易破坏以及含多量淀粉、树胶、果胶、粘液质的中药的提取。比较简单易行，但浸出率较差，特别是用水为溶剂，其提取液易于发霉变质，须注意加入适当的防腐剂。②渗漉法：渗漉法是将中草药粉末装在渗漉器中，不断添加新溶剂，使其渗透过药材便可认为基本上已提取完全。在大量生产中常将收集的稀渗淮液作为另一批新原料的溶剂之用。本法浸出效率较高，浸出液较澄清，但溶剂消耗量大、费时长、操作仍嫌麻烦。③煎煮法：煎煮法是我国最早使用的传统的浸出方法。所用容器一般为陶器、砂罐或铜制、搪瓷器皿，不宜用铁锅，以免药液变色。直火加热时最好时常搅拌，以免局部药材受热太高，容易焦糊。有蒸汽加热设备的药厂，多采用大反应锅、大铜锅、大木桶，或水泥砌的池子中通入蒸汽加热。还可将数个煎煮器通过管道互相连接，进行连续煎浸。此法简便，药中大部分成分可被不同程度地提出，但含挥发性成分及有效成分遇热易破坏的中药不宜用此法，对含有多糖类中药，煎煮后，药液比较粘稠，过滤比较困难。④回流提取法：应用有机溶剂加热提取，需采用回流加热装置，以免溶剂挥发损失。小量操作时，可在圆底烧瓶上连接回流冷凝器。溶剂浸过药材表面约1～2cm。在水浴中加热回流，一般保持沸腾约1小时放冷过滤，再在药渣中加溶剂，作第二、三次加热回流分别约半小时，或至基本提尽有效成分为止。此法提取效率较冷浸法高，大量生产中多采用连续提取法。但受热易破坏的成分不宜用此法，且溶剂消耗量仍大，操作亦麻烦。⑤连续提取法：为了弥补回流提取法中需要溶剂量大、操作较烦的不足，可采用连续提取法。实验室常用脂肪提取器或称索氏提取器。应用挥发性有机溶剂提取中草药有效成分，不论小型实验或大型生产，均以连续提取法为好，而且需用溶剂量较少，提取成分也较完全。连续提取法，一般需数小时才能提取完全。提取成分受热时间较长，遇热不稳定易变化的成分不宜采用此法。上述几种为提取中药的传统方法，存在的缺点主要有：(1)煎煮法有效成份损失较多,尤其是水不溶性成份；(2)提取过程中有机溶剂有可能与有效成分作用,使其失去原有效用；(3)非有效成分不能被最大限度的除去,浓缩率不够高；(4)提取液中除有效成分外,往往杂质较多,尚有少量脂溶性成分,给精制带来不利；
回流提取法
回流提取法应用有机溶剂加热提取，需采用回流加热装置，以免溶剂挥发损失。小量操作时，可在圆底烧瓶上连接回流冷凝器。瓶内装药材为容量的1／3－1／2，溶剂浸过药材表面1-2cm在水浴中加热回流，一般保持沸腾约1小时。放冷过滤，再在药渣中加溶剂，作第二、三次加热回流分别约半小时，或至基本提尽有效成分为止。此法提取效率较冷浸法高，大量生产中多采用连续提取法。 索氏提取法的优缺点是什么啊？ 1) 选择性好 2)索式萃取的选择性主要取决于目标物质和溶剂性质的相似性。萃取剂可用 CS2苯、甲醇等。通常的做法是将萃取剂按照极性不同的顺序进行多级萃取。从而提高了产品的萃取纯度；将不同类的物质分别萃取出来。 3)(2) 能耗低 4)由于索式萃取是直接对萃取剂进行加热，且选用的萃取剂一般沸点都较低， 从根本上保证了能量的快速传导和充分利用。而且萃取剂是在索式萃取器中循环利用的，这既减少了溶剂用量，又缩短了操作时间，大大降低了能耗。 5)(3) 设备简单、操作简便 6) 不同的分离方法有不同的操作方法，对应的实验设备也各有不同。但索式萃 取的设备简单、操作简便。且其造价低，体积小，适于实验室应用。 天然产物常用的提取方法? 浸渍法：根据溶剂的温度可分为热浸、温浸和冷浸等数种。此法比较简单，可将药粉装入适当的容器中，加入适当的溶剂（多用水或稀醇），以能浸透药材稍有过量为度，时常振摇或搅拌，放置一日以上过滤，
药渣另加新溶剂。 如此再提2?3次。第2、3次浸渍时间可缩短。合并提取液，浓缩后可得提取物。本法不需加热（必要时温热），适用于有效成分遇热易破坏以及含多量淀粉、树胶、果胶、粘液质的天然药物的提取。但本法提取时间长，效率不高，特别用水浸渍时，水提取液易发霉变质，必要时应加适量的甲苯等防腐剂。 渗漉法：将中药粗粉装入渗漉筒中，用适当的溶剂润湿膨胀24h?48h,然后不断地添加新溶剂。使其自上而下渗透过药材，自渗漉筒的下口收集提取液。当溶剂渗进药粉溶出成分比重加大而向下移动时，上层的溶液或稀浸液便置换其位置，造成良好的浓度差，使扩散能较好地进行，提取的过程是一种动态的过程，故浸出效果优于浸渍法。但应控制流速（宜成滴不宜成线），在渗漉过程中随时自药面上补充新溶剂，使药材中有效成分充分浸出为止。或当渗漉液颜色极浅或渗漉液的体积相当于原药材重的10 倍时，便可认为基本上已提取完全。在大量生产中常将收集的稀渗漉液作为另一批新原料的溶剂之用。本法溶剂消耗量大，费时长，操作仍嫌麻烦。 煎煮法：煎煮法是我国最早使用的传统的提取方法。操作时将中药粗粉放在适当的容器中（如砂锅、金属夹层锅等，应避免铁器），加水浸过药面，充分浸泡后，直火或蒸气加热煮，一般煮2?3次，每次?1h,煎煮次数及时间可按投药量及药材质地适当增减。直火加热时最好时常搅拌，以免局部药材受热太高，容易焦糊。此法简便，药材中大部分成分可被不同程度地提出， 但煎出液中杂质较多，且容易发生霉变，含挥发性成分及有效成分遇热易破 坏的中药不宜用此法。 回流提取法：应用有机溶剂加热提取时，需采用回流加热装置，以免溶剂挥发损
葡萄皮花色苷的提取
葡萄皮中花色苷和油的提取 一. 实训目的： 1.会通过查阅文献资料，搜集有关数据，并正式选用公式的能力。当缺乏必要数据尚需自己通过实验测定或在生产现场进行实际查定。 2.在兼顾技术上先进性，可行性，经济合理性的前提下，学生能够综合分析设计任务要求，确定仪器分析测定。进行设备选型，并提出保证过程正常，安全运行所需要的监测和计量参数，同时，还要考虑改善劳动条件和环境保护的有效措施。 3.进一步巩固、提高已有的实验操作技能，掌握常规工艺试验技术，常规检验技术，学会设计工作思路、方法、步骤，受到技术员的基本训练，提高技术实施能力。 4.能够用精炼的语言，简洁的文字，清晰地的图标来表达自己的实际思想和实验结果。 5.树立严谨的科学作坊的良好的工作习惯，提高独立思考和与他人合作完成任务的能力。 二、实训场所： 北京电子科技职业学院色谱分析实验室及生化实验室。 三、实训要求： 1.论述相关企业中分析仪器的种类，尤其侧重于气象色谱仪、液相色谱仪、紫外可见以及酸度计等仪器的使用。 2.测定方法依据和方法原理。 3.样品及采样过程。 4.分析工作质量保证措施。 5.测定数据记录以及数据计算处理过程。 6.报告测定结果，对样品质量作出评价 7.分析工作质量作出自我评价 四、实训内容及安排：
（一）课程设计的主要任务： 1.葡萄皮中花色苷和油的提取本组做的是葡萄皮中油的提取。 五、实训过程： 12月26日查阅相关资料确定实验方案 1、超声波提取法： 利用超声波破碎细胞（空化）和强化传质作用（机械作用），使溶剂分子渗透到组织细胞中，能更好地与溶质分子接触，使细胞中可溶成分更好地释放出来。它具有操作简单、提取温度低、提取率高、提取物结构不易被破坏等优点。近年来，研究者们已将超声波技术应用到多种油脂的提取中。 相关研究表明，对比无水乙醇、丙酮、石油醚和正己烷四种提取剂在超声波作用下对油的提取效率，石油醚为较适宜的提取剂。以石油醚作为提取剂时，最佳提取工艺为超声时间25min,功率500W循环泵转速1200r/min ,料液比1: 5, 在此条件下提取率可达94． 1 2%。 2、超临界CO2流体技术： 超临界流体技术是近年来新兴的一门食品工程高新技术。超临界流体以其特有的理化性质、无可比拟的优点受到了各行各业的重视, 并被不断地加以应用。超临界C02的特殊性质决定了其在提油、萃取天然成分等非极性物质方面具有独特的优越性——速度快；产率高；不破坏不饱和脂肪酸；无溶剂残留；油脂色泽浅；脱酸、脱色、脱蜡、脱臭等在萃取器内一次完成。现在,超临界流体技术的基础性和应用性研究正处于一个高潮, 将这一技术用于油脂等非极性天然成分萃取的研究和报道已经很多,如在小麦胚芽油提取、植物精油萃取、酒花萃取、磷 脂提取等方面已有大量报道。 3、索氏提取法： 在实验室多采用索氏提取法来提取油脂,索氏提取器就是利用溶剂回流及虹吸原理,使固体物质连续不断地被溶剂萃取,既节约溶剂,萃取效率又高。 萃取前先将固体物质研碎,以增加固液接触的面积。然后将固体物质放在滤纸套内,置于提取器中, 提取器的下端与盛有溶剂的圆底烧瓶相连, 上面接回流冷凝管。加热园底烧瓶,使溶剂沸腾,蒸气通过提取器的支管上升,被冷凝后滴入提取器中, 溶剂和固体接触进行萃取, 当溶剂面超过虹吸管的最高处时, 含有萃取物的溶剂虹吸回烧瓶, 因而萃取出一部分物质, 如此重复, 使固体物质不断为纯的溶剂所萃取、将萃取出的物质富集在烧瓶中。 本组所选用的方法为索氏提取法。 12月27日领取用品进行索氏提取 用品：索氏提取器、石油醚、CH30H圆底烧瓶、正己烷、无水亚硫酸钠等。 准确称取了10.00g已粉碎的葡萄皮样品于滤纸筒中，放于索氏提取器中，加入200mL石油醚，在80C水浴中提取8h。
液相色谱使用方法(花色苷)
一、摘要 ⑴、葡萄皮色素来源较为丰富。葡萄果皮花色苷不但含量高, 而且种类多, 葡萄花色苷作为一种天然食用色素, 安全、无毒，且具有降低肝脏及血清中脂肪含量、抗氧化、抗肿瘤、延迟血小板凝集等多种生理和药用活性功能对葡萄皮花色苷的提取技术及稳定性的研究具有重要意义 ⑵、目前为止花色苷的定量分析方法主要有直接比色法、pH示差法、亚硫 酸脱色法、色谱法，本次实训我们采用液相色谱法对花色苷进行提取。 ⑶、用于液相色谱法提取葡萄酒中的花色苷前要进行样品的预处理，再测定 其中的花色苷来判断葡萄酒或者葡萄皮中的花色苷，标定是否合格以及是否符合国家标准。 二、关键词 ⑴花色苷⑵液相色谱⑶分光光度计 三、正文 引言 花色苷的提取方法有溶剂浸提法、微波辅助萃取法、酶解法超高压辅助提取法、本次我们是利用微波萃取，微波是一种频率300～300 000 MHz的电磁波。在微波场中吸收微波能力的差异使得基体物质的某些区域或萃取体系中的某些组分 被选择性加热，从而使得被萃取物质从基体或体系中分离，进入到介电常数较小、微波吸收能力相对较弱的萃取剂中。由于传统提取过程中能量累积和渗透过程以无规则的方式发生，萃取的选择性较差，只能通过改变溶剂性质或延长溶剂萃取时间来获得，同时又受限于溶解能力和扩散系数，效果不够理想；微波因其能对
萃取体系中不同组分进行选择加热，因而能使目标组分直接从基体分离萃取。微 波萃取受溶剂亲和力的限制较小，可供选择的溶剂较多。另外，微波加热则利用 分子极化或离子导电效应直接对物质进行加热，避免了传统加热过程因热传导、 热辐射造成的热量损失，加热效率高、升温快速均匀，缩短了萃取时间。具有设 备简单、适用范围广、重现性好、萃取效率高、萃取时间短、能耗低、污染轻等 特点。用液相色谱法来检测葡萄酒及葡萄皮中的花色苷，用等度及梯 度检测花色苷的存在来判断其营养成分。 ⑴、材料及方法 ①仪器及试剂 材料：葡萄皮 仪器：超声波提取器、紫外-可见分光光度计、安捷伦-高效液相 色谱仪 试剂：甲醇、甲酸、水 ②实验方法 葡萄皮花色苷提取液的制备 干葡萄皮→粉碎→加入提取液→超声波辅助提取→花色苷提取液 称取 1g 粉碎过的干葡萄皮，按 1:40（g/mL）的料液比加入酸性乙醇提取液，用超声波清洗器辅助提取。超声波辅助提取条件定为：频率 40KHZ，功率 500W，工作状态 100%。超声波辅助提取 40min 后过滤得到花色苷提取液，用722可见光分光光度计在530nm下测定吸光值，以吸光值为考察指标，确定提取效果。 在提取液乙醇浓度为 60%，提取液 pH 1.0 的条件下，于 30℃、40℃、50℃、
酶技术原理与应用
酶法提取原理 摘要：简要介绍了酶法提取的基本原理、特点及提取速率的影响因素，结合酶法在提取有效成分中的应用实例和与其他技术的联用，对酶法在中药提取领域的前景进行展望。 关键词：酶法；中药提取；综述 中药是中华民族灿烂文明中一朵盛开的奇葩，有着几千年的悠久历史。中药成分复杂且很多贵重有效成分含量很低，因此中药开发中的关键工序即为如何有效地提取中药中的有效成分。传统提取方法如煎煮、回流、浸渍、渗漉法，存在着周期长、工序多、提取率不高等缺点。酶作为一种生物催化剂，在中药提取中，对中草药细胞壁的有效成分进行分解破坏，从而降低传质阻力，提高提取率；可改变中药目标产物的生理生化性能，优化产物效用，并且酶法提取操作简单，条件温和，环保无毒，现已将其用于中药提取过程。本文就酶法的提取技术及其应用进展方面进行综述。 1酶法提取的基本原理 大多数中药为植物性草药，中药材中的有效成分多存在于植物细胞的细胞质中。在中药提取过程中，溶剂需要克服来自细胞壁及细胞间质的传质阻力。细胞壁是由纤维素、半纤维素、果胶质等物质构成的致密结构，选用合适的酶(如纤维素酶、半纤维素酶、果胶酶)对中药材进行预处理，能分解构成细胞壁的纤维素、半纤维素及果胶，从而破坏细胞壁的结构，产生局部的坍塌、溶解、疏松，减少溶剂提取时来自细胞壁和细胞间质的阻力，加快有效成分溶出细胞的速率，提高提取效率，缩短提取时间[1]。 而且，在中药提取中酶法可作用于目标产物，改善目标产物的理化性质，提高其在提取溶剂中的溶解度，减少溶剂的用量，降低成本；也可改善目标产物的生理生化功能，从而提高其效用。 2酶法提取的特点 2.1反应条件温和，产物不易变性 酶法提取主要采用酶破坏细胞壁结构，具有反应条件温和、选择性高的特点，而酶的专一性可避免对底物外物质的破坏。在提取热稳定性差或含量较少的化学成分时，优势更为明显。杨云龙等[2]用酶法提取洋葱中黄酮类化合物，采用酶解法来处理洋葱皮，避免了因高温对黄酮类化合物结构的破坏，提高了黄酮类化合物的提取率。 2.2提高提取率，缩短提取时间
提取浸膏方法
2.2.1供试品溶液的制备 取三七药材100 g，各取2份，粉碎成最粗粉， 分别置圆底烧瓶中，其中一份加5倍量60%乙醇， 直接回流提取3次，每次1 h,滤过，合并滤液，力「 60%乙醇调节总量至1500 mL，作为三七提取液1; 另一份加5倍量60%乙醇，浸泡过夜，其余操作同 三七提取液1制备方法，作为三七提取液2。按按 2.1.1项下色谱条件测定提取液中三七总皂普的含 月民门 数为:体积分数70%乙醇,8倍药材量溶剂、阶段纂 取时间30min、提取温度50 0C。与热回流、超声、舅 氏提取工艺相比，在保证较高提取率的情况下，少 大节省了提取溶剂，降低后续蒸发浓缩过程的育 耗，充分显示出罐组逆流提取工艺在提高提取率 减少药材损耗、节省溶剂、提高生产效率等方而白 明显优势，是一种值得在中药生产中大力推广的弓 茹土早av士古十 2 2提取方法 221渗流法取20 g三七，加巧倍量的SOIo的乙醇，润湿1h后装柱，浸泡12h以lOml/min 的速 度过滤，收集滤液，浓缩，乙醇定容至500 m 1备用. 2 2 2醇回流法取20 g三七，加10倍量的SOIo，乙醇回流提取2次，每次1 l}合并2次溶液，浓缩， 乙醇定容至500 m 1备用. 223超声波提取法取20 g三七，加10倍量的SOIo的乙醇，超声提取2次，第一次40
分钟，第二次 20分钟，合并两次滤液，浓缩乙醇定容至500 m 1备用. 1. 3提取工艺 1. 3. 1水煎煮法称取三七lOg，加10倍量的水， 煎煮2次，每次1h，过滤，合并2次滤液，减压浓缩，乙醇定容至100 mL备用。 1.3.2醇回流法称取三七10 g，加10倍量60 % 乙醇回流提取2次，每次1h，过滤，合并2次滤液， 减压浓缩，乙醇定容至100 mL备用。
花青苷(花色苷)种类、提取及检测
花青苷种类、提取及检测 一.种类 花色素均具有类黄酮的基本结构，由两个苯环和一个含氧杂环组成的(C6-C3-C6)C15化合物(如图)，根据B环羟基化和甲基化位置和数目的不同而将花色素主要分为六类:天竺葵色素((Pelargonidin)、矢车菊色素((cyanidin)、芍药色素(peonidin)(3＇-甲基矢车菊色素)、飞燕草色素(delphinidin)、矮牵牛色素(petunidin)(3＇,5＇-甲基飞燕草色素)和锦葵色素(malvidin)( 3＇,5＇-二甲基飞燕草色素)。不同植物中花色素发生糖苷化的位点(C3、C5和C7位等)和数目的差异，及酞化程度的不同使植物中存在着不同的花色素普，其结构复杂，但都以这六种花色素为基本结构(Grotewold，2006)。 二.提取 国内外学者对花青苷的提取做了大量研究，提取目的及目标花青苷不同，提取方法略有差异。花青苷易溶于水、甲醇、乙醇等极性溶液，花青苷的稳定性受酶、温度、氧气、光、pH值、金属离子等理化性质的影响，在中性和碱性条件下不稳定。 提取过程常采用酸性溶液，酸能够破坏植物细胞膜并溶解水溶性色素，甲醇溶液提取效率高于乙醇及水溶液。花青苷一般用于食品着色，考虑到甲醇的不安全因素，一般选用体积分数为1%的乙醇溶液。采用盐酸酸化可保持提取液pH值较低，阻止无酰基花青苷的降解。随着盐酸被浓缩，pH 值升高，导致花青苷的降解。为获得更接近于天然状态的花青苷，采用弱有机酸或中性溶剂做初步提取，弱有机酸多用甲酸、乙酸、丙酸、柠檬酸和酒石酸，中性溶剂一般采用丙酮作提取剂。粗提后的花青苷提取液浓度很低，浓缩时一般不超过40℃，时间也不宜太长。 1. 2. 花青苷含量的测定：用0.1%的盐酸甲醇浸提叶片2 h后,测657nm、530nm处的吸光度。 3.
中药提取技术与酶法提取
中草药所含成分十分复杂，既有有效成分，又有无效成分和有毒成分。为了提高中草药的治疗效果，就要尽最大限度提取有效成分，去除无效成分及有毒成分。因此，中草药提取对于提高中药制剂的内在质量和临床疗效最为重要。但常用的提取方法（如煎煮法。回流法、浸渍法。渗漉法等）在保留有效成分，去除无效成分方面，存在着有效成分损失大、周期长、工序多。提取率不高等缺点。近10年来，在中药提取方面出现了许多新技术、新方法，这些新技术和方法的应用，使得中草药提取既符合传统的中医理论，又能达到提高有效成分的收率和纯度的目的。本文就这方面作一综述。 1. 超临界流体萃取技术 超临界流体萃取（简称SC FEFE）是一种以超临界流体（简称SCF）代替常规有机溶剂对中草药有效成分进行革取和分离的新型技术，其原理是利用流体（溶剂）在临界点附近某区域（超临界区）内与待分离混合物中的溶质具有异常相平衡行为和传递性能，且对溶质的溶解能力随压力和温度的改变而在相当宽的范围内变动，利用这种SCF作溶剂，可以从多种液态或固态混合物中萃取出待分离组分。常用的SCF为CO。，因为CO。无毒，不易燃易爆，价廉，有较低的临界压力和温度，易于安全地从混合物中分离出来。超临界CO。萃取法与传统提取方法相比，最大的优点是可以在近常温的条件下提取分离，几乎保留产品中全部有效成分，无有机溶剂残留，产品纯度高，操作简单，节能。 廖周坤等用不同浓度的乙醇作夹带剂，对藏药雪灵芝进行了总皂苷粗品及多糖的苹取试验，与传统溶剂萃取工艺相比较，收率分别提高至旧．9倍和 1．62倍。何春茂、梁忠云利用超临界CO。卒取技术从黄花蒿中革取所得的萃取物中杂质（蜡状物）含量低，青蒿素提纯精制简单，收率高产品质量好。雷正杰等利用超临界CO。流体萃取技术，对厚朴的有效成分进行萃取和分离，革取物为淡黄色膏状物，经分析该萃取物由厚朴酚等11个化学成分组成，其中厚朴酚和厚朴酚的相对含量高达46．81％和45．00％。葛发欢等探讨了从黄山药中萃取薯预皂素的最佳条件，同时进行了中试放大，证明应用超临界CO。萃取薯预皂素进行工业化生产是可行的，与传统的汽油法相比较，收率提高15倍，生产周期大大缩短，避免使用汽油有易燃易爆的危险。葛发欢等研究了超临界CO。萃取柴胡挥发油和皂苷的工艺，STh－CO。法提取柴胡挥发油，与传统水蒸气蒸馏法相比较，能大大提高收率，缩短提取时间，而挥发油组成一致，只是各成分含量有差异。原永芳等通过五因素一四水平正交试 验法，用超临界流体萃取技术对川穹的挥发油萃取条件进行了优化选择，结果最佳萃取条件为压力34．smPa，温度60℃，改性剂乙醇0．3ml，静态苹取时间10min，动态萃取量10ml，以水作为吸收。与水蒸气蒸馏法相比较，该法具有耗时少，提取安全等优点。 SCFE技术对于提取分离挥发性成分、脂溶性物质、高热敏性物质以及贵重药材的有效成分显示出独特的优点，但SCFE设备属高压设备，一次性投资较大，运行成本高，因此这一技术目前在工业生产中还难以普及。 2. 超声提取技术 超声提取技术的基本原理主要是利用超声波的空化作用加速植物有效成分的浸出提取，另外超声波的次级效应，如机械振动、乳化、扩散。击碎、化学效应等也能加速欲提取成分的扩散释放并充分与溶剂混合，利于提取。与常规提取法相比，具有提取时间短、产率高、
葡萄皮色素的提取及稳定性研究
葡萄皮色素的提取及稳定性研究 赵磊，蒋建忠，康锦平，雷鹏，康瑞，金厂农，李兵 甘肃农业大学理学院，甘肃兰州（730070） E-mail：zhaolei100802@https://www.wendangku.net/doc/7815678359.html, 摘要：对从葡萄皮中提取天然葡萄色素的方法和条件进行研究，并且在各种不同条件及环境下，对它的性能和稳定性进行测试，结果表明，该色素易溶于有机溶剂，在70%的乙醇中溶解度较大，在可见光区最大吸收波长为560nm。对光、热的稳定性较好,但该色素的抗氧化能力差，在使用该色素时，应避免与氧化性物质接触。在酸性条件下稳定性较好，且色泽鲜艳，纯正，在中性介质中接近蓝色，而在碱性介质中出现褐色！ 关键词：葡萄，色素，稳定性 1 引言 某些合成的食品色素不仅毫无营养价值，还有损于人体健康。挪威、丹麦等国家已禁止在食品加工中使用合成色素。葡萄色素天然花色苷类色素，安全、无毒且含有一定的营养成分，可以作为食品及化妆品等的着色剂。葡萄色素具有抗氧化和清除自由基的作用，有一定的药用与保健价值。 天然色素提取液中含有复杂的细胞内容物及杂质导致色素不稳定，提高天然色素的稳定性至关重要。我们首先对从葡萄皮中提取色素的各项条件进行详细的试验，而后对影响色素稳定性的因素如pH、温度、光、时间、氧及食物中的其他成进行了相关的研究，为此类色素的开发和应用提供理论依据。 2 实验部分 2.1 药品与仪器 鲜葡萄皮、95%、无水乙醇、酒石酸、盐酸、丙酮、石油醚（均为分析醇）、721型分光光度计（上海精密仪器厂），真空干燥器，电热恒温水浴锅，医用真空泵，家用榨汁机，中量有机制备仪一套，烘箱一台。 2.2 色素提取流程 鲜葡萄皮→榨汁→浸提→滤后残渣→浸提液→粘稠液→性质研究 2.3 提取条件 2.3.1 色素最大吸收波长的测定[1] 将色素用乙醇溶解并稀释，用乙醇作对照，在分光光度计上从波长450-600nm每次10nm 测一次吸光度，以波长为横坐标，以吸光度为纵坐标绘制曲线。从而确定色素的最大吸收波长在560nm -1-
多酚提取方法
1.1溶剂提取法 多酚就是多羟基化合物,它的结构特点决定多酚易溶或可溶于水、醇类、醚类、酮类、酯类等,所以,溶剂提取法主要有水溶剂提取与有机溶剂提取两种。水溶剂提取植物多酚类物质早90年代就有报道,该法由于工艺简便、成本低、纯度高而被广泛使用,但此法提取率低。有机溶剂提取就是利用多酚在不同溶剂中的溶解度不同进行回流提取,常用的溶剂有甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯等,此法可提高提取率、缩短反应时间。姚永志[2]等人在比较水溶剂及乙醇溶剂提取花生红衣多酚物质的研究中报道,当以水作溶剂提取花生红衣多酚物质时,最佳工艺:水浴温度40℃、液料比75、提取时间lh、提取率为6.41％,而乙醇作溶剂时最佳工艺:乙醇浓度55％、水浴温度60℃、提取时间0.5 h、料液比1:37.5,提取率达到7.858％。但有机溶剂成本高、回收困难,有毒易燃,不利于安全生产。 1.2微波辅助提取 微波辅助提取技术就是利用微波能来提高提取率的一种技术。在微波提取过程中,微波辐射能 够导致植物细胞内的极性物质吸收微波能,产生大量热量,使细胞内温度迅速上升,液态水汽化,从而使产生的压力在细胞膜与细胞壁上形成微小孔洞,使胞外溶剂可以进入细胞内溶解并释放出胞内物质,因此可以有效的提高产率,降低反应时间,减少溶剂的使用量。由于目前微波的设备比较普遍,因此,微波提取植物多酚的方法为更多的人所接受与使用。宋薇薇等[3]人用微波辅助法提取石榴皮多酚类化合物,确定了石榴皮多酚提取的最优工艺条件:40％(体积分数)乙醇作溶剂,料液比(g:m1)l:35,微波功率为242 W,提取时间60 s,提取三次,以该优化条件提取时,多酚粗提物得率26.52％,这个结果较贾冬英[43以20％(体积分数)乙醇作溶剂,料液比(g:mL)1:20,温度50℃,提取时间1 h,以该优化条件提取所得石榴多酚得率22.86％高,与醇提法相比,微波辅助提取能强化浸取过程,体系受热均匀,提取物中多酚含量高,提取时间较短等优点。 1.3超声波辅助提取 超声波辅助提取法就是利用超声波产生的强烈振动、高加速度、强烈的空化效应、搅拌作用等,可加速有效成分进入溶剂,从而提高提取率,缩短提取时间,并可避免高温对提出成分的影响。超声波提取的操作具有简便快捷、提取温度低、时间短、提取率高、提取物结构不易被破坏的特点.该法的缺点就是获得产品纯度不高。陶令霞c5]等人对苹果渣中多酚的超声辅助提取工艺条件进行了优化研究,确定最佳工艺条件为:70％乙醇,提取时间50 min,提取功率200 W,料液比1:15,提取温度35℃,提取2次,苹果多酚得率为4.29g／kg。同时,超声波辅助提取方法在荷叶多酚大麦多酚、以及诃子多酚中也有相应的报道。 1.4生物酶解提取 生物酶解提取技术就是根据酶反应具有高度专一性的特点,选择相应的酶,水解或降解细胞壁组成成分纤维素、半纤维素与果胶,从而破坏细胞壁结构,使细胞内的成分溶解、混悬或交溶于溶剂中,达到提取目的。酶法提取最大的优势就是反应条件温与。由于酶法提取就是在非有机溶剂下进行,所得产物纯度、稳定性、活性都较高,无污染,解决了有机溶剂提取法有机溶剂回收困难、用量大等缺点。此外,酶法提取在缩短提取时闻、降低能耗、降低提取成本等方面也具有一定优势[6]。刘军海等人[7]以低档绿茶为原料,采用复合酶法在较低温度下提取茶多酚。以单因素试验考察了酶用量、提取温度、提取时间及pH对茶多酚提取率的影响。通过正交试验优化并确定最佳提取工艺条件:酶用量为0.20％、提取温度为60℃、提取时间80 min、pH为4.6,在此工艺下茶多酚提取率为13.6％,其中儿茶素占茶叶干重的含量比沸水提取法高出 2.31％。1.5离子沉淀法离子沉淀法就是利用多酚能与金属离子络合生成沉淀,使其在浸提液中与其它物质分离而出,从而得到纯度较高多酚。目前常用金属离子有A13+、Zn2+、Fe2+、M92+、Ba2+、Ca2+等,其中A13+、Zn2+较为理想。离子沉淀法优点就是不使