柠檬香精抑菌实验方案

柠檬果皮精油的抑菌实验

食品保鲜主要手段多为冷藏结合化学杀菌剂。但是化学杀菌剂对人类健康和

环境的危害同样也成为全世界关心的重要问题。因此，开发天然的防腐保鲜剂已经成为

当前食品行业保鲜研究领域的一个热点。从某些植物中提取的精油具有良好的抑菌能力

和较高的食用安全性，是开发天然防腐保鲜剂的重要原材料。

精油除了具有良好的抑菌能力外，在气态时还具有较强的生物活性，可以作为使用

方便的熏蒸剂用于农产品的贮藏保鲜过程之中。一些研究表明，植物精油可以通过控制

细菌生长腐败而延长食品的存储货架期。

通过对柠檬果皮抑菌性的探讨，确定出离心法与蒸馏法所得柠檬精油的抑菌性能

力，进一步比较离心法柠檬精油与蒸馏法所得柠檬精油的区别，为后续将柠檬精油作为

抑菌剂而使用提供一定的理论依据。

1材料与方法

1.1材料与试剂

柠檬精油蒸馏水牛肉膏蛋白胨NaCl 琼脂

试验菌种

金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌

1.2仪器与设备

电子天平酸度计电热恒温隔水式培养箱立式压力蒸汽压灭菌器家用冷藏冷冻箱显微镜血球计算板磁力加热搅拌器电炉其他：具塞三角瓶、试管、大小烧杯、量筒、培养平皿、涂布棒、接种环、移液管、

酒精灯、游标卡尺等。

1.3实验方法

菌悬液的制备

细菌选用牛肉膏蛋白胨作为培养基，将供试菌种分别接种于装有对应培养基的试管

之内，进行扩大培养。将细菌置于37℃恒温培养箱中培养24h，然后取活化好的菌种斜面，用无菌生理盐水配制成（1~10）×10个/ml 的菌悬液，备用。

1.4抑菌效力的测定

采用滤纸片扩散法测定细菌的抑菌效力。分别取0.1 ml 的菌悬液再分别倒入培养皿

中。用无菌三角玻璃棒将菌悬液在平板表面涂抹均匀，直至涂布棒与培养基之间有粘稠感。将直径约6mm 的无菌滤纸片先在柠檬精油中充分浸润，然后取出置于平板中，并

用无滤纸片的含菌培养皿作为对照，最后将上述平板置于恒温培养箱中，37℃培养24h。用游标卡尺测定其抑菌圈直径，取其平均值。

最低抑菌浓度（MIC）的测定

根据抑菌圈测定的结果，采用试管法

测定各样品的最低抑菌浓度MIC，以丙酮作

为溶剂，用无菌试管配制一系列梯度浓度的柠檬精油溶液，将各梯度浓度的精油溶液加

入已经融化好的培养基中，混合均匀，使得培养基中精油含有的浓度分别为8.000%、

4.000%、2.000%、1.000%、0.500%、0.250%、0.125%。等到培养基冷却凝固后，取受

试菌种进行平板划线接种菌种，在37℃培养24h 后观察结果，每个精油浓度梯度分别作3 组平行试验，与对照组（菌落正常生长）进行比较，有肉眼可见菌落的生长者视为无

抑制作用，以完全没有菌落生长的最低精油浓度为其最低抑菌浓度（目测并以下列标准

记录：菌完全无生长“-”；菌生长迟缓“+”；菌生长比较快“++”；菌生长迅速“+++”）、

判断抑菌效果标准

抗菌素抑菌圈试验结果的判定标准：抑菌圈直径大于20mm 时为极敏感，大于15~20 mm 时为高度敏感，10～15 mm 时为中度敏感，7～9 mm 时为低度敏感，小于7mm 无抑菌圈者为不敏感

抗菌实验方法

一、抗菌实验 字体[大][中][小] (一) 体外抗菌实验 1. 实验前的准备工作 (1) 培养基的准备：肉汤琼脂培养基、真菌琼脂培养基等均可按药典规定的方法配制。 (2) 药液的准备：一般采用中草药水煎液，经滤过浓缩成1：10～1：1的浓度，试验前的药液需灭菌，以免污染影响结果。 (3) 试验菌株的选择及制备：一般使用典型的菌株，或从临床分离经鉴定后取得的菌株，如金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、痢疾杆菌、绿脓杆菌、链球菌、肺炎双球菌、白色念珠菌、酵母菌及真菌等。 细菌菌液的制备：将斜面菌种接种于普通肉汤培养基中，肺炎双球菌及溶血性链球菌须在上述培养基中加入5%～10%血清，或加入25%(V/V)或20%猪血水，37℃培养6～8小时或16～18小时。 真菌菌液的制备：将菌种接种于大试管中，并在22℃～25℃培养24小时或7天(视菌种及生长速度而定)，然后用灭菌生理盐水10mL洗脱制成混悬液。 菌液的浓度一般先采用培养液，如不显示抗菌作用，可再稀释成一定浓度。金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、痢疾杆菌可用1：1000浓度，肺炎双球菌、溶血性链球菌、白色念珠菌、酵母菌可用1：10或1：100浓度。 2. 实验方法 (1) 平碟法：取熔化后的培养基，每平碟(培养皿)倒入15mL，待凝固后，在培养基表面划线接种试验菌株，在划线的中间位置安放一个灭菌的不锈钢圈，在圈内滴入试验药液。也可采用打洞法，即在凝固的培养基上用已灭菌的打孔器打孔挖去琼脂块，将药液滴在洞内。用灭菌陶盖盖好，细菌在37℃、真菌在22℃～25℃培养18～20小时，观察细菌生长情况，如全线生长则认为该浓度的药液无抗菌作用，如细菌或真菌划线为药液所切断，则认为该浓度药液有抗菌作用。 (2) 平碟稀释法：先将中药药液2mL加入平碟内，再加入已溶化的培养基8mL，充分摇匀，待凝固后，划线接种菌株，同时用水2mL代替药液制作空白对照平碟，方法同样，接种后，将平碟倒置，在37℃(真菌在22℃～25℃) 培养18～20小时，观察结果。如对照碟长菌、药液碟不长菌，则认为有抗菌作用。 (3) 试管法：取试管12支，在每一试管中加入培养基5mL，于第1管中加被试药液5mL，混合均匀，吸出5mL加到第2管中，混合均匀，再吸5mL加到第3管中，依次操作，直到第10管，将第10管混合均匀后吸出5mL弃去，其药液稀释依次为1：2，1：4，1：8，……1：1024，再于前11管中各加入适当浓度的菌液0.1mL，第11管作为菌液对照，第12管不加菌液，加被试药液0.1mL，作为药液对照。将其全部在37℃(真菌22℃～25℃)培养16～24小时(真菌24～72小时)，观察各管菌株生长情况。如菌液对照管浑浊，表示菌株生长良好;药液对照管澄明，表示药液没有染菌。再将试验管与对照

食品企业标准格式

Q/××× （食品标准名称） （标准名称必须反映产品的真实属性，不得使用治疗、功能术语，不得使用谐音、形似等容易引起联想、误导的字眼。） （企业名称）发布

前言 说明标准中的附录哪些是规范性附录，哪些是资料性附录； 本标准编制所依据的起草规则为GB/T 《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》。 本标准代替了（指以前的标准代号），（说明：若是修改标准需列出此项内容，则应紧接着另起一行说明本标准与代替标准相比的主要变化之处；若是制定新标准则不需此项。） 本标准与（以前的标准代号）相比，主要变化如下： ——××××。 ——××××。 ——………。 本标准由（××××公司名称）提出。如集团公司统一使用一个企业标准，还应写明其他适用的食品企业名称。 本标准起草单位：××××。 本标准主要起草人：×××，×××，……。 本标准发布时间：×××，×××，……。

（食品标准名称） 范围 本标准规定了……（食品标准名称）的术语和定义、产品分类、技术要求、试验方法、检验规则、标志、标签、包装、运输、贮存和保质期。 本标准适用于……（说明产品由什么原辅料组成、经过什么样的工艺生产、产品的属性<如：饮料、罐头>是什么什么包装）制成（食品标准名称）。 【注：上述内容应载明所有原辅材料名称，食用油、食品添加剂、香辛料应标注具体名称。】规范性引用文件 本标准中引用的文件对于本标准的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本标准。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本标准。示例如下：（最新的规范性引用文件） GB/T 191 包装储运图示标志 GB 317 白砂糖 GB 2760 食品添加剂使用标准 GB 食品添加剂柠檬黄 GB 食品微生物学检验菌落总数测定 GB 食品微生物学检验大肠菌群计数【已批保健食品应执行】 GB 食品微生物学检验沙门氏菌检验 GB/T 食品卫生微生物学检验志贺氏菌检验 GB/T 6543 运输包装用单瓦楞纸箱和双瓦楞纸箱 GB 7718 预包装食品标签通则 GB 8957 糕点厂卫生规范 GB 12695 饮料企业良好生产规范 GB 14880 食品营养强化剂使用卫生标准 QB 1014 食品包装纸 QB/T 1505食品添加剂食用香精 JJF 1070 定量包装商品净含量计量检验规则 国家质量监督检验检疫总局令第75号（2005）《定量包装商品计量监督管理办法》 国家质量监督检验检疫总局令第123号（2009）《食品标识管理规定》 【说明：以上为示例，制标企业应全部列出本标准所需标准中当前有效的规范性引用的标准和文件一览表。一览表中文件排列的顺序为：国家标准、行业标准、地方标准、国内有关文件、其他国际标准及有关文件。国家标准按标准顺序号从小到大排列；其他标准按标准代号的拉丁字母顺序排列，再按标准顺序号排列。在第3章节后出现的所有引用文件都应出现在第2章中。】 术语和定义（或产品分类） 下列术语和定义适用于本标准。 …… …… 【说明：如果标准仅适用于一个产品则可以省略此章】 技术要求 原辅料要求示例： 白砂糖应符合GB 317的规定。 鲜蛋应符合GB 2748的规定。 …………

抑菌活性实验设计方案

八宝景天抑菌活性实验方案 1 材料与仪器 1.1 材料 八宝景天（茎、叶、花），采摘于吉林农业大学校园，去离子水洗净，阴干，经粉碎机粉碎(过40～60 目筛)，所得植物粉用密封袋于遮光处保存备用。 1.2 微生物 真菌：黄瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporum)、黄瓜黑星病菌（Cladosporium cucumerinum）、辣椒炭疽病菌（Colletotrichum nigrum）由吉林省蔬菜花卉科学研究院提供。番茄叶霉病菌( Fulvia fulva )、番茄早疫病菌(Alternaria solani)、甜瓜茎腐病菌(Fusarium gramimearum)、水稻立枯病菌（Rhizoctonia solani Kuhn）、番茄灰霉病菌（Botrytis cinerea）、黄瓜菌核病菌(Sclerotinia sclerrotium) 均由吉林农业大学农学院植物病理研究室提供。 1.3 试剂与仪器 95%乙醇分析纯国药集团化学试剂有限公司 葡萄糖分析纯国药集团化学试剂有限公司 琼脂粉生化试剂天津科密欧化学试剂有限公司 马铃薯 JFSD-100粉碎机上海淀久中药机械制造有限公司 JJ200型精密电子天平美国双杰兄弟有限公司常熟双杰测试仪器厂HH-S数显恒温水浴锅江苏省金坛市医疗仪器厂 RE-2000旋转蒸发器上海亚荣生化仪器厂 SHZ-III型循环水真空泵上海亚荣生化仪器厂 TDL-5A低速大容量离心机上海悦丰仪器仪表有限公司 生化培养箱SPX-250型上海跃进医疗器械厂 ZKF035电热真空干燥箱上海实验仪器厂有限公司 KQ5200B型超声波清洗器昆山市超声仪器有限公司 不锈钢手提式灭菌器上海申安医疗器械厂 超净工作台上海生物科技有限公司

抗菌抗病毒常用实验研究方法知识

抗菌抗病毒常用实验研究方法 细菌、病毒性疾病是目前国内外流行的主要传染病,尤其是近两年来,由冠状病毒引起的SARS及由流感病毒引起的禽流感给动物及人类带来的严重危害,是人所共知的"由于各种疫苗的不断出现,虽然一些细菌、病毒病已得到了有效的控制,但是其治疗尚无有效的解决方法因此研制高效、低毒的新型中药抗菌、抗病毒制剂已成为巫待解决的问题。 1、常用的抗菌方法 1、1稀释法 1、1、1试管稀释法 培养基内抗生素的含量按几何级数稀释并接种适量的细菌，经孵育后，观察能引起抑菌作用最低抗生素浓度，称最低抑菌浓度(MIC)为该菌对药物的敏感度。稀释法所获得的结果比较准确，常被用作校正其他方法的标准。如以下黄贝贝等的青钱柳抗菌作用的实验研究和黄利权等的火绒草的抗菌活性研究的实验方法: 1、应用试管稀释法,测定青钱柳提取物对试验菌的抑菌效果,检验不同浓度下青钱柳提取物对细菌、霉菌的抗菌作用。结果:青钱柳提取物在体外对金黄色葡萄球菌、乙型溶血性链球菌等革兰氏阳性菌具有较强的抗菌作用;而对大肠埃希氏菌、铜绿假单孢菌等革兰氏阴性菌的抗菌作用不明显;对黄曲霉、烟曲霉等霉菌的抗菌作用不明显[1]。 2、采用试管稀释法,分别测定了火绒草水煎液、水提醇沉液、醇提物、醇提石油醚部分、醇提乙酸乙酯部分、醇提正丁醇部分、醇提水溶部分等7种提取物对大肠杆菌C83882、大肠杆菌C8390 3、大肠杆菌C8391 4、沙门氏菌C79-20、金黄色葡萄球菌Newbould S-30 5、金黄色葡萄球菌临床分离株等6株病原菌的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)。试验结果表明,火绒草醇提物及其石油醚部分和乙酸乙酯部分对两种金黄色葡萄球菌具有较强的抑制作用,其MIC为0114 mg/ml生药浓度,MBC为0127 mg/ml生药浓度,而其它部分对金黄色葡萄球菌的抑制作用较弱。火绒草醇提正丁醇部分和水溶部分对3株大肠杆菌和1株沙门氏菌具有较强的抑制作用,其MIC为2170 mg/ml生药浓度,MBC为2170 mg/ml 生药浓度,显示了较强的抗菌活性[2]。 1、1、2肉汤稀释法 以水解酪蛋白(M-H)液体培养基将抗生素作不同浓度的稀释，然后种入待检细菌，定量测定抗菌药物抑制或杀死该菌的最低抑菌浓度(MIC)或最低杀菌浓度(MBC)。 如刘菁菁的研究蓝玉簪龙胆对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌( MRSA) 的体内外抗菌活性。蓝玉簪龙胆分别以乙醇、氯仿、正丁醇、蒸馏水提取，得到极性不同的4部分产物，利用肉汤稀释法测定其对 MRSA 和甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌( MSSA) 的最低抑菌浓度( MIC) ; 体内实验部分: 采用腹腔注射 MRSA 法建立小鼠感染模型，分别给予蓝玉簪龙胆水提液高、中、低剂量，银黄胶囊治疗 15 d，并与模型对照组比较，观察存活率。结果：体外实验: 蓝玉簪龙胆各极性组分对 MRSA 和 MSSA 菌株均有不同程度的抑菌作用，其中正丁醇组分抑菌作用最强，其次为乙醇、水层组分; 体内试验: 除了蓝玉簪龙胆大剂量组，其余各治疗组存活率均高于模型对照组，而蓝玉簪龙胆中剂量组存活率最高。结论蓝玉簪龙胆对 MRSA 和 MSSA 均具有一定的抗菌作用，而且敏感性差异无显著性; 对MRSA 感染小鼠有一定治疗作用[3]。胡景玉等为了了解衡水地区大肠埃希菌的药

实验七杀菌剂生物活性测定方法——抑菌圈法

v1.0 可编辑可修改 1 实验七杀菌剂生物活性测定方法——抑菌圈法 一、实验目的 学习并掌握杀菌剂的离体活性测定方法——抑菌圈法。 二、实验原理 抑菌圈法即水平扩散法基本原理是在已接种供试菌的琼脂培养基上施以少量抗菌性物质或杀菌剂，使之接触培养基和病菌，经定温培养一定时间后，因药剂的渗透扩散作用，施药部位周围因杀死了病菌而抑制了其在培养基上的生长，从而产生了抑菌圈。在一定范围内，抑菌圈直径的平方或面积与药剂浓度的对数呈直线函数关系，从而可比较供试样品杀菌活性大小。其最大优点是精确度高，操作简单，能较快得出结果。但测定结果受药剂溶解性和扩散能力影响很大，具一定局限性。根据药剂施加在琼脂培养基表面方式不同，又分为管碟法（牛津杯法）、滤纸片法、孔碟法、滴下法等，其中以管碟法和滤纸片法应用最广。 三、实验材料 供试药剂：速克灵或扑海因。供试病原菌：番茄灰霉病菌。 实验器材：无菌水、无菌接种针、灭菌三角瓶、玻璃珠、灭菌双层纱布、75%酒精棉球、消毒摄子、移液管、试剂瓶、吸耳球、超净工作台、胶头滴管、尺子。 四、实验方法 采用管碟法。将供试药剂加于放置在琼脂培养基表面的用不锈钢制成的小圆筒（又称为牛津杯，一般为外径8 mm，内径6 mm，高10 mm）内，定温培养一定时间后测量抑菌圈大小。 1．配制药液：用灭菌蒸馏水将供试药剂配成一系列梯度浓度，一般5-7个浓度。灭菌蒸馏水为对照。2．制备一定“浓度”的供试菌悬浮液：如真菌，则宜用孢子悬浮液。在培养好的菌种上倒入10 mL灭菌水，用接种针轻轻刮动平面孢子悬浮，倾于灭菌三角瓶内（事先装数粒玻璃珠）摇动5 min，将孢子悬浮液用灭菌双层纱布过滤入另一灭菌三角瓶内。用低倍（15×20倍）显微镜检查，调节孢子浓度，每视野80-100个孢子为宜；以上操作应在无菌条件下进行，动作要迅速准确。 3．浇制双层培养基：将装在试管内已灭菌的清水琼脂培养基10 mL溶化后，趁热倒入9 cm直径培养皿中，水平冷凝。将适合供试菌生长发育的100 mL培养基熔化后冷至45-50℃左右后，迅速吸取10 mL菌液加入培养基中，充分混匀后，立即吸取5 mL带菌培养基加在已凝固的清水琼脂培养基上，并使之均匀地铺在底层上。 4．注药用消毒镊子夹取不锈钢小管（即牛津杯，外径8.0mm、内径6.0mm、高10mm），每皿内按合适的间隔放置6个不锈钢小管，其中1个小管为对照，其余5管为5种不同浓度的药液（药液加至在管口形成凸面），在适合的温度下培养。 6．结果检查培养一定时间后，取出用十字交叉法测量抑菌圈直径，并以抑菌圈的有无及抑菌圈大小评价杀菌活性。若抑菌圈直径呈椭圆形，长短之差超过一个单位，最好舍去不要。

药物的体外抑菌试验

实验五药物的体外抗菌试验 药物的抗菌试验是为了检查药物的抗菌能力。该项试验方法已广泛应用于新药研究和指导临床用药。如抗菌药物的筛选，提取过程的生物追踪、抗菌谱的测定、耐药谱的测定、药敏试验、药物血浓度测定等各个方面。 药物的体外抗菌试验在实验室进行，优点是方法简便、需时短、用药量少，不需要活的动物、实验条件容易控制。因此，药物的体外抗菌试验已广泛应用各种测定了。 药物的体外抑菌试验是常用抗菌试验方法，其中最常用的方法用系列稀释法和琼脂扩散法。 （一）稀释法（结果示教） 稀释法有液体培养基连续稀释法和固体稀释法（斜面法）两种。这两种方法都可以用来测定药物的最小抑菌浓度（MIC）：是指该药物能抑制细菌生长的最低浓度，通常用μg∕ml或U/ml表示。 （二）琼脂扩散法 它是将抗菌药物加至接种试验菌的平板表面，抗菌药物在琼脂胶内向四周自由扩散，其浓度随扩散距离增大而降低，在药物一定的扩散距离内，由于药物的抗菌效应，试验菌不能生长，此无菌生长的范围称为抑菌圈，抑菌圈的大小与药物的抑菌效应成正比。琼脂扩散法常有纸片法、管碟法、打洞法和挖沟法。 滤纸片法（K-B纸片法）－学生操作 滤纸片法是最常用的方法，适用于新药的初筛试验（初步药物是否有抗菌作用）及临床的药敏试验（细菌药物第三性试验、以便选择用药）。滤纸片分湿、干两种，可以在试验时用无菌纸片沾取药物溶液放在含菌的平板表面，也以预先做成一定浓度的干燥纸片。一般来说预先做成的干燥纸片实用一些而且准确一些。 至于干燥纸片的制备方法：选用吸水力强而且质地均匀的滤纸，用打洞机制成6mm直径的圆纸片，120℃干燥灭菌2小时。然后把配制好的各种适宜浓度的抗生素溶液，每100张纸片加入0.5ml药液，使它均匀浸润，放在无菌平皿中，

香精检验作业指导书

香精检验作业指导书 1 目的 制定本公司香精的采购及验收标准，以保证本公司生产产品的质量。 2 适用范围 本标准规定了本公司生产所用香精的技术要求、试验方法、检验规则和标签、包装、贮存的要求。 3 参考引用标准 QB/T 1505-2007 食用香精 4 检验标准及方法 4.1 检验标准 4.1.1 原料供应商首先向本公司提供“三证两报告一标准”。 “三证”：指营业执照、卫生许可证、生产许可证； “两报告”：产品出厂检验报告、经权威机构认证的产品检验报告单； “一标准”：指质量指标执行标准。 4.1.2 技术要求

4.2检验方法

4.2.1 色状测定：将试样和标准样品分别置于带刻度的同体积小烧杯中至同刻度处，用目测法观察有无差异。 4.2.2香气测定：按GB 14454.2-2008 香料香气评定法执行。 4.2.3 香味测定：按QB/T 1505-2007 5.3规定方法执行。 4.2.4 折光指数测定：将全自动数显折射仪的检测温度设置为20℃，用蒸馏水校准调零后，测定试样折光指数。 4.2.5 相对密度测定：25℃下，试样绝对密度与蒸馏水绝对密度之比。 5.1 组批 同批进货、同一规格的产品视为一批作一次验收，不同批次分别验收。 5.2 抽样 每批抽1桶取样80ml左右，分成2份，注明产品名称、批号、生产日期等，一份供检验用，一份作为留样备查（保存到该批次产品使用6个月后）。 5.3检验分类 5.3.1来料检验

来料检验项目为色状、香气、香味、折光指数，应逐批进行检验。 5.3.2 型式检验 5.3.2.1 出现下列情况之一时，应进行型式检验 （1）出现较大质量问题时；（2）正常生产时，生产厂家每年至少进行一次型式检验。 5.3.2.2 型式检验项目为本作业指导书规定的全部检验项目5.4 合格批判定 5.4.1如果在检验中有一项指标不符合标准，应加倍取样，重新检验，核检结果如有一项不符合标准，则整批产品为不合格品 5.4.2 未密封或包装不完整的产品应拒收。 5.4.3 超过保质期的产品应拒收。 6 标志、包装、运输和贮存 6.1 产品包装外应注明：产品名称、生产厂名和地址、商标、批号、净含量、生产日期和保质期、许可证号及采用标准编号。。

抑菌试验方案

利用吸附法测定壳聚糖无纺布抑菌性能试验方案 一、实验原理：本实验参考了国标GB/T20944方法，根据我们的材料特性进行了微调。即：选取革兰氏阴性菌（大肠杆菌（25922））和革兰氏阳性菌（金黄色葡萄球菌（25923））两类代表性指示微生物。将测试材料浸泡在活化好的菌悬液（浓度控制为107CFU/ml）中，设置不同处理时间，稀释涂布，平板单菌落计数，计算无纺布材料的抑菌性能。 二、实验方法： 2.1试验菌种的活化 1）冻干粉接种至大豆蛋白肉汤(TSB)培养基，37℃培养24h。一部分用于抑菌试验，另一部分用于划线接种至斜面或平皿冷藏保藏（可保藏1个月）。 2）培养液稀释。活化好的菌悬液用稀释液稀释20倍，取1ml培养液添加到19ml稀释液（应提前灭菌）中。 3）式样预处理。大小合适的试样饱和吸水，灭菌处理。（周教授负责） 4）菌悬液洗涤。将稀释好的菌悬液转移到试样中，分别震荡15min 和30min，为防止微生物传代，影响试验结果，立即放入冰箱冷藏。 5）洗涤液梯度稀释。处理后的洗涤液立即梯度稀释到10-1, 10-2,10-3,10-4和10-5。具体方法：取1ml洗涤原液加入9ml稀释液此时为10-1梯度；取1ml稀释后的10-1菌液加入到9ml稀释液，此时为

10-2梯度；······。 6）涂布。分别取10-3,10-4和10-5的稀释液200ul涂布到平板（计数培养基，简称EA），每个处理做2个平行，37℃，培养24-48h，计数。 7）抑菌效果评价。参照GB/T20944。 三、试验简易流程 注：如果活化后的菌液浓度较高，可取10-4、10-5和10-6梯度稀释液涂布。

抗菌肽体外抑菌实验方法

微量肉汤稀释法（borth microdilution method） 实验方法： 1.用无菌蒸馏水在聚丙烯离心管中将抗菌肽和抗生素溶解制成1280 g/L的储 备液，然后用等量无菌的0.02%乙酸（含0.4% BSA）稀释，在用0.01%乙酸（含0.2% BSA）溶液对等量稀释后的溶液在进行一系列的双倍稀释，得到质量浓度为640，320，160……1.25 mg/L的共10个梯度的系列稀释液， 4 ?C下保存备用。 2.将待测细菌在灭菌MH肉汤琼脂平板上过夜培养，挑取菌落接种于灭菌试管 中的MH肉汤，37 ?C，180 r/min过夜培养。将培养后的菌液稀释至2*10^5-7*10^5 CFU/mL，向无菌的96孔平板中的1-11孔各加入100 μL的菌液，12孔不加入菌液而加入100 μLMH肉汤，然后从1～10孔逐一加入相应的待测抗菌肽，11孔作为扫描对照组不加肽。37 ?C，90 r/min培养18-24 h，这样待测抗菌肽的终质量浓度分别为64，32，16，……0.125 mg/L。（不知道待测抗菌肽添加量是多少，最终抗菌肽的终浓度怎么缩小了10倍） 3.最小抑菌浓度MIC（mininmal inhibitory concentration）就是能阻止50%以 上细菌生长的最小肽浓度。用酶标仪在490 nm下对平板进行扫描，肽的MIC 的确定按照比对照孔（11孔）的浑浊程度低50%以上的最小质量浓度计算。 4.最小杀菌浓度MBC（minimal bactericidal concentration）就是能抑制任何残 余菌落生长的肽的最低浓度。从没有细菌生长的平板孔中的内容物中取10 μL涂布到MH琼脂平板上，37 ?C培养18 h，以此来确定肽的MBC。 参考文献： 【1】汪以真，抗菌肽与抗生素的体外抗菌效果比较[J].中国兽医学报，2004，24（3）：270-273. 抗菌肽的体外抑菌实验（平板法） 1.稀释：将一定效价的抗菌肽做6个浓度的稀释，将抗生素按正常使用剂量同 样做6个浓度的稀释 2.指示菌：指示菌用液体LB培养基培养24 h后稀释至10^6 CFU/mL

食用香精质量标准

1目的建立食用香精的质量标准。 2范围适用于食用香精质量的评估。 3责任质量部组织制订、监督实施。 4内容 4.1标准依据企业标准 4.2品名 4.2.1中文名食用香精 4.2.2汉语拼音 Shiyongxiangjing 4.3物料代码 F0051 4.4质量标准 食用香精的内控质量标准

食用香精的内控质量标准（续） 4.5 检验项目 4. 5.1 色状 将试样与标准样品分别置于带刻度的同体积小烧杯中至同刻度处，用目测法观察有无差异。 4.5.2 香味的评定 4.5.2.1 试液的配制 分别称取0.1g （精确至0.01g ）试样和标准样品加入各自糖水溶液（蔗糖8g-12g ，柠檬酸0.10g-0.16g ，加蒸馏水至100ml 配成）的小烧杯中。配制成含0.1%试样和标准样品的二个糖水溶液，搅拌均匀即为试液。 4.5.2.2 评定方法 分别小口品尝试液，辨其香味特征、强度、口感无差异，试样应和标准样品一致。 4.5.3 检查 4.5.3.1 相对密度 取本品，按照相对密度检查法标准操作规程操作，结果应为D ±0.010。 4.5.3.2 折光指数 取本品，按照折光率检查法标准操作规程操作，结果应为n ±0.010。 4.5.3.3 溶解度 取本品1g ，应全部溶于700g ～1000g 水中或溶于300g ～500g 的20%乙醇中。 4.5.3.4 重金属 取本品，按照重金属检查法标准操作规程检查，含重金属不得过10mg/kg 。 4.5.3.5 砷盐 取本品，按照砷盐检查法标准操作规程检查，不得过3mg/kg 。 4.5.3.6 甲醇含量 取本品，按照气相色谱法测定标准操作规程操作，不得过0.2%。

柠檬香精的质量标准

香料香精标准目录 (一) 方法标准： 1 GB/T 11538-1989 精油毛细管柱气相色谱分析通用法 2 GB/T 11539-1989 单离及合成香料填充柱气相色谱分析通用法 3 GB/T 11540-1989 单离及合成香料相对密度的测定 4 GB/T 14454.1-1993 香料试样制备 5 GB/T 14454.2-1993 香料香气评定法 6 GB/T 14454.3-1993 香料色泽检定法 7 GB/T 14454.4-1993 香料折光指数的测定 8 GB/T 14454.5-1993 香料旋光度的测定 9 GB/T 14454.6-1993 香料蒸发后残留物含量的评估 10 GB/T 14454.7-1993 香料冻点的测定 11 GB/T 14454.8-1993 香料桉叶素含量的测定邻甲酚冻点法 12 GB/T 14454.9-1993 香料黄樟油素含量的测定冻点法 13 GB/T 14454.10-1993 香料闪点的测定闭口杯法 14 GB/T 14454.11-1993 香料含酚量的测定 15 GB/T 14454.12-1993 香料微量氯测定法 16 GB/T 14454.13-1993 香料羰基化合物含量的测定中性亚硫酸钠法 17 GB/T 14454.14-1993 香料标准溶液、试液和指示液的制备

18 GB/T 14454.15-1993 黄樟油黄樟素和异黄樟素含量的测定填充柱气相色谱法 19 GB/T 14454.16-1993 香料羰值和羰基化合物含量的测定盐酸羟胺法 20 GB/T 14454.17-1993 香料羰值和羰基化合物含量的测定游离羟胺法 21 GB/T 14455.1-1993 精油命名原则 22 GB/T 14455.2-1993 精油取样方法 23 GB/T 14455.3-1993 精油乙醇中溶混度的评估 24 GB/T 14455.4-1993 精油相对密度的测定 25 GB/T 14455.5-1993 精油酸值的测定 26 GB/T 14455.6-1993 精油酯值的测定 27 GB/T 14455.7-1993 精油乙酰化后酯值的测定和游离醇与总醇含量的评估 28 GB/T 14455.8-1993 精油(含叔醇) 乙酰化后酯值的测定和游离醇含量的评估 29 GB/T 14455.9-1993 精油填充柱气相色谱分析通用法 30 GB/T 14455.10-1993 精油含难以皂化的酯类精油的酯值的测定法 31 GB/T 14457.1-1993 单离及合成香料乙醇中溶解度测定法 32 GB/T 14457.2-1993 单离及合成香料沸程测定法 33 GB/T 14457.3-1993 单离及合成香料熔点测定法 34 GB/T 14457.4-1993 单离及合成香料酸值或含酸量的测定 35 GB/T 14457.5-1993 单离及合成香料含酯量的测定 36 GB/T 14457.6-1993 单离及合成香料伯醇或仲醇含量的测定乙酰化法

中草药提取有效成分及抑菌试验的实验方案

题目：中草药提取有效成分及抑菌试验的实验方案 顾建凯，李威，宗凯，唐勇，吴杰 （生物技术0901） 一、问题的提出 西药抗生素的抗菌作用不容置疑，但其毒副作用、所引起的过敏反应、二重感染及细菌的耐药性等使其应用受到一定限制;单味中药抗菌谱一般较窄，其效用难以适应复杂而多变的病情;中药复方制剂因含多种有效成分，具有多方位的综合效用，抗菌谱广，且高效、低毒、不易产生耐药性等特点与优势，日渐受到学者们的重视。我小组想通过单味中药与中药复方制剂抑菌效果的对比，来验证中药复方的效果。 二、实验假设与理论依据 中医复方的抗菌作用所以优于单味药，主要在于通过配伍发挥了药物间的相辅相成作用，从而明显增强复方的抗菌效能。 三、实验目标 1.了解中药的抑菌作用 2.学习中药有效成分的提取方法 3.验证中药复方制剂的抑菌效果优于单味中药; 四、实验对象、方法及手段 1.实验对象 实验室中老师所准备的各种微生物 2.实验方法 目前中药包括复方制剂杭菌作用的测定方法大部分是沿用抗菌素的研究方法，主要分为体外抗菌作用和体内抗菌作用两个方面。体外抗菌作用的测定方法又分为三类:一是连续稀释法，包括肉汤连续稀释法即试管两倍稀释法，肉汤琼脂斜面连续稀释法，肉汤琼脂平板连续稀释法;二是扩散法，包括纸片法，小杯法、打孔法等;三是熏蒸法，因其只限于挥发性物质抗菌作用研究，所以在复方制剂抗菌研究中很少使用。体内抗菌作用的测定多用动物实验性感染治疗模型，该模型均系注射大量细菌引起暴发型感染如小鼠致死性感染，家兔腹膜炎等。 五、实验内容（实验步骤） 1.中草药提取液的制备。将各中草药烘干、粉碎，用35%的酒精于50℃萃取48h，将提 取液离心后，减压浓缩．用35%酒精定容，使最终质量浓度为1g/ml。置于0-4℃冰箱中，备用； 2.培养基制备。○1按改良液体 马丁培养基常规制备方法 配制，用于测定中药M IC 值的培养基加入微量酚红(0 001%)。○2牛肉膏蛋白胨琼

实验七杀菌剂生物活性测定方法——抑菌圈法.doc

v1.0可编辑可修改实验七杀菌剂生物活性测定方法——抑菌圈法 一、实验目的 学习并掌握杀菌剂的离体活性测定方法——抑菌圈法。 二、实验原理 抑菌圈法即水平扩散法基本原理是在已接种供试菌的琼脂培养基上施以少量抗菌性物质或杀菌剂，使之接触培养基和病菌，经定温培养一定时间后，因药剂的渗透扩散作用，施药部位周围因杀死了病菌而抑 制了其在培养基上的生长，从而产生了抑菌圈。在一定范围内，抑菌圈直径的平方或面积与药剂浓度的对 数呈直线函数关系，从而可比较供试样品杀菌活性大小。其最大优点是精确度高，操作简单，能较快得出 结果。但测定结果受药剂溶解性和扩散能力影响很大，具一定局限性。根据药剂施加在琼脂培养基表面方 式不同，又分为管碟法（牛津杯法）、滤纸片法、孔碟法、滴下法等，其中以管碟法和滤纸片法应用最广。 三、实验材料 供试药剂：速克灵或扑海因。供试病原菌：番茄灰霉病菌。 实验器材：无菌水、无菌接种针、灭菌三角瓶、玻璃珠、灭菌双层纱布、75%酒精棉球、消毒摄子、移液管、试剂瓶、吸耳球、超净工作台、胶头滴管、尺子。 四、实验方法 采用管碟法。将供试药剂加于放置在琼脂培养基表面的用不锈钢制成的小圆筒（又称为牛津杯，一般 为外径 8 mm，内径 6 mm，高 10 mm）内，定温培养一定时间后测量抑菌圈大小。 1．配制药液：用灭菌蒸馏水将供试药剂配成一系列梯度浓度，一般5-7 个浓度。灭菌蒸馏水为对照。 2．制备一定“浓度”的供试菌悬浮液：如真菌，则宜用孢子悬浮液。在培养好的菌种上倒入10 mL 灭菌水，用接种针轻轻刮动平面孢子悬浮，倾于灭菌三角瓶内（事先装数粒玻璃珠）摇动 5 min ，将孢子悬浮液用灭菌双层纱布过滤入另一灭菌三角瓶内。用低倍（15× 20 倍）显微镜检查，调节孢子浓度，每视野 80-100 个孢子为宜；以上操作应在无菌条件下进行，动作要迅速准确。 3．浇制双层培养基：将装在试管内已灭菌的清水琼脂培养基10 mL溶化后，趁热倒入9 cm直径培养皿中， 水平冷凝。将适合供试菌生长发育的100 mL培养基熔化后冷至45-50 ℃左右后，迅速吸取10 mL菌液加入培养基中，充分混匀后，立即吸取 5 mL 带菌培养基加在已凝固的清水琼脂培养基上，并使之均匀地铺在 底层上。 4．注药用消毒镊子夹取不锈钢小管（即牛津杯，外径8.0mm、内径 6.0mm、高 10mm），每皿内按合适的间隔放置 6 个不锈钢小管，其中 1 个小管为对照，其余 5 管为 5 种不同浓度的药液（药液加至在管口形成 凸面），在适合的温度下培养。 6．结果检查培养一定时间后，取出用十字交叉法测量抑菌圈直径，并以抑菌圈的有无及抑菌圈大小评价 杀菌活性。若抑菌圈直径呈椭圆形，长短之差超过一个单位，最好舍去不要。 1

香精香料行业浅析

香精香料行业浅析 一、香精香料及产业链情况 香料是一种能够依靠嗅觉或味觉感受到香味的有机化合物，也称香原料，主要用于调配成香精用于加香产品，或直接作为食品添加剂使用。香精是由香料和相应辅料构成的具有特定香气或香味的混合物，一般用于加香产品后被消费。 香料香精并不是人们生活中的直接消费品，而是作为配套的原料添加在其他产品中，其被广泛应用于食品、烟草、日化、医药、饲料、化妆品、纺织和皮革等各行各业，用量虽微，但其对产品品质至关重要。 香精香料行业的上游包括香料植物种植、香料动物养殖、石化煤化工和油脂加工等行业，下游主要为食品饮料、日化、烟草、饲料等行业。 二、香料分类、香料种类及需求量情况 1、香料分类 按原料来源及制造工艺的不同，香料分成天然香料和合成香料。天然香料的优点是主要成分来源于天然，相对而言符合健康理念，产品味道层次丰富，但由于受到自然条件限制，数量有限，价格相对较高；合成香料通常由化工原料通过化学手段合成制成，合成香料的优点是原材料来源广泛，产品品类较天然香料丰富，缺点是味道层次单一，需要组合调配使用。

2、香料的种类及需求量情况 目前，世界上香料品种约7000种，数量众多，其中合成香料约6000多种、天然香料（国际市场有名录的）约500种。根据下游的用量及用途的不同，不同香料品种的市场需求量从几十公斤至上万吨不等，差异较大，基本情况如下： 三、香精大类及应用 香精是由多种香料、溶剂或者载体及其他辅料调配而成的芳香类混合物，通常直接用于增加各类终端产品的香气和气味。随着全球的经济增长及消费升级，消费者对于食品等消费品的要求愈来愈高，在食品、饮料、日化、烟草等众多行业中，香精都有着广泛的应用。

体外细菌实验方案

评价药物的抗幽门螺旋杆菌活性等指标 ⑴检测药物对幽门螺旋杆菌标准菌株的最小抑菌浓度。 ⑵检测药物对幽门螺旋杆菌标准菌株的最小杀菌浓度。 ⑶检测药物对临床各种幽门螺旋杆菌耐药菌株的最小抑菌浓度。 ⑷评价药物对临床一线治疗幽门螺旋杆菌药物甲硝唑、阿莫西林、克拉霉素 等是否具有协同作用。 ⑸评价幽门螺旋杆菌标准菌株对药物是否耐药及耐药频率是多少？该药物与 临床治疗幽门螺旋杆菌一线药物是否存在交叉耐药。 ⑹评估药物的毒性。 ⑺看是否可以构建幽门螺旋杆菌的持留菌模型，以检测药物对处于持留状态 的幽门螺旋杆菌是否具有杀灭作用。 ⑻评价在酸性条件下，药物对幽门螺旋杆菌是否也具有抑制作用。 实验方法 药物对幽门螺旋杆菌标准菌株及临床各种耐药菌株最小抑菌浓度（Minimum 甲硝唑ibitory concentration, MIC）的测定药物对幽门螺旋杆菌最小抑菌浓度MIC是评价药物活性一个非常重要的指标。具体方法如下： 1培养细菌到达对数期，此时OD600应该在0.6-0.8之间。 2取菌液2ml至2个1.5ml的EP管内。 38,000rpm离心10min，去除上清，用新鲜配制的培养基洗涤一次。 4调节菌浓度至OD600=0.1，此浓度与0.5McFarland相当，约1×107 cfu/mL（所用培养基为1×）。另一个EP里调节菌浓度至OD600=0.2，相当于2×107 cfu/mL （所用培养基为2×） 5用相应浓度培养基稀释菌液100倍至浓度为1×105 cfu/mL和2×105 cfu/mL。6溶解药物。 7取灭菌96孔圆底微孔板，在板四周每孔加200μl灭菌去离子水，目的是减少检测孔内的培养基蒸发。 8在第二列孔B至G内，加100μl已经调节为2×105 cfu/mL浓度的待检测菌液（所用培养基为2×）。其余孔内B3至G11加入100μl已经调节为1×105 cfu/mL浓度的待检测菌液菌液（所用培养基为1×）。 9在第二列孔内分别加入100μl药物药物。充分混匀后，取100μl菌液加入到下一个孔内，依次类推。加到G10时取出100μl弃掉。G11不加药物做为对照。

中草药对大肠杆菌体外抑菌试验

中草药对大肠杆菌体外抑菌试验＊ 路振香时维静杨用光 （安徽技术师范学院，安徽凤阳，233100） 选用27种不同的中草药制剂（煎剂、挥发油、蒸馏液，以平板稀释法和纸片法对一株肉鸡源的大肠杆菌进行体外抑菌试验。结果表明，有14种中药对此株大肠杆菌有不同程度的抑制作用。试验还表明中药制剂的配方工艺不同，其抑菌的效果亦有不同。 关键词：中药；大肠杆菌; 抑菌作用 中兽医学有着悠久的历史和丰富的应用经验，在抗生素使用以前，对保障家畜健康起着重要作用。随着科学技术的不断发展，西药以其方便快捷的优势逐渐在临床应用中占据主导地位，但由于西药抗生素类的广泛使用，使得病原菌的抗药性日趋增强[1]，中草药作为替代抗生素解决抗药性和药残的重要方案，越来越受到重视[2-3]，尤其是近年来肉食品中的抗生素残留问题已经被提到了一定的高度，而大肠杆菌又属于多血清型和变异型强的细菌，极易产生抗药性，笔者用不同种类和浓度的中药制剂分别用平板稀释法和纸片法对大肠杆菌进行体外抑菌试验，以期筛选出具有临床应用价值的中药制剂，为畜牧业生产服务。 1材料方法 1.1材料 1.1.1试验菌株 肉鸡源大肠杆菌（安徽技术师范学院动科系预防兽医教研室提供）。 1.1.2 培养基 普通营养琼脂、麦康凯琼脂。按常规方法配制。 1.1.3 单味中药 银花、防风、板兰根、白芷、连翘、杏仁、射干、辛夷、贯众、羌活、荆芥、藿香，每ml相当于1g生药量。中草药的煎制与蒸馏由安徽技术师范学院中药实验室完成。 1.1.4 复方中药 银射煎液、麻杏射防煎液、羌藿连防煎液、辛芷荆煎液、辛芷荆蒸馏液、银射蒸馏液、羌藿连防蒸馏液、麻杏射防蒸馏液，每ml相当于1g生药量。 1.2 方法 1.2.1大肠杆菌对中药（单味、复方）敏感性的体外试验——平板稀释法[4]。 1.2.1.1取1ml原药液为第一支试管；在第二只试管中分别加入0.5ml原药液和0.5ml生理盐水以倍比稀释法稀释至第四支试管；第五支试管为无药对照，每支试管中均含有1ml不同浓度的药液。先把药液倒入无菌的平皿中，然后倒入60℃左右的无菌的普通营养琼脂或麦康凯琼脂，并迅速混合均匀，制成平板。然后以无菌的涂布棒蘸取细菌均匀涂布于平板表面，置37℃培养箱内培养24h后观察结果。 1.2.1.2 在第一支试管加入8ml原药液，第二支试管加入4ml原药液，第三支试管加入2ml 原药液，第四支试管加入1ml原药液，第五支试管为无药对照，在第二支试管至第五支试管中分别加入4ml、6ml、7ml及8ml生理盐水；按照1.2.1.1的方法制成平板，涂布细菌后 ＊项目基金：安徽技术师范学院稳定人才基金资助（批准号：YRC200316）

抑菌试验方案

一、实验材料的制备 （一）病虫害的制备 1、病虫害的采集 本实验所用材料分病原菌及害虫两类。 其中病原菌分别从宣木瓜和丹皮两种地道药材植物上采集。宣木瓜的病原菌本实验室已有，并且提取了单一菌种。丹皮方面需要我们查阅资料以及请教师姐，把握最佳采集时间和采集类型，然后我们进行实地考察以及集采。采集丹皮根部，连同根部泥土带回。 害虫方面，我们将到野外筛选采集。 2、病原菌的纯种分离 2.1培养基的制备 根据实验需要制备培养病原菌所需培养基，主要为牛肉膏蛋白胨培养基（用来培养细菌）、PDA培养基（用来培养真菌）。 2.2病原菌稀释平板计数 2.2.1. 制备病原菌悬液 将带有土壤的丹皮烂根放入锥形瓶中，加入9ml无菌水中，振荡20min，让菌充分分散，静置5 min. 2.2.2编号 取无菌平皿 9套，分别用记号笔标明10-4、10-5、10-6各3套。另取6支盛有9ml无菌水的试管，排列于试管架上，依次标明10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6。 2.2.3稀释 用1ml无菌吸管精确地吸取1ml病原菌悬液放入10-1的试管中，注意吸管尖端不要碰到液面，以免吹出时，管内液体外溢。然后仍用此吸管将管内悬液来回吸吹三次，吸时伸入管底，吹时离开水面，使其混合均匀。另取一支吸管自10-1试管吸1ml放入10-2试管中，吸吹三次，……其余依次类推。

2.2.4取样 用3支1ml无菌吸管分别精确地吸取10-4、10-5、10-6的稀释菌液0．2ml，对号放入编好号的无菌培养皿中。 2.2.5倒平板 于上述盛有不同稀释度菌液的培养皿中，倒入溶化后冷却至45℃左右的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基约10—15ml，置水平位置，迅速旋动混匀，待凝固后，倒置于37℃温室中培养。 0．2ml菌液对号接种于不同稀释度编号的培养皿中的培养基上，再用无菌玻璃刮棒将菌液在平板上涂布均匀，平放于实验台上20—30分钟，使菌液渗透入培养基内，然后再倒置于37℃的温室中培养。 2.3划线法分离 2.3.1、倒平板将加热融化的牛肉膏蛋白胨培养基和马铃薯蔗糖培养基分别倒平板，并标明培养基的名称。 2.3.2、划线

细菌药敏试验实验报告解读

细菌药敏试验实验报告解读 “医院有的药物不做药敏实验，医院没有的药物做什么药敏实验？”在临床上经常能听到临床医生们抱怨。“药敏报告显示敏感的药物，而临床治疗无效？”有时也让大夫们感到不解。这些问题使得临床医师不知道如何选择抗菌药物，那么如何正确解读药敏报告，合理选择抗菌药物报告呢。 我们先来了解几个概念： 最低抑菌浓度（MIC）：测量抗菌药物的抗菌活性大小的一个指标，指在体外培养细菌18至24小时后能抑制培养基内病原菌生长的最低药物浓度。 最小杀菌浓度（MBC）：抗菌药物能能使受试菌最初的活菌总数减少99.9%以上所需要的最低抗菌药物浓度。 折点：是最低抑菌浓度或者抑菌圈直径，用于区分离株为敏感、剂量依赖性敏感、中介、非敏感还是耐药 敏感（S）：通过折点来定义，指当对感染部位采用推荐剂量时，具有MIC值等于或低于敏感折点（或抑菌圈等于或高于敏感折点）的菌株通常可被抗菌药物所达到的浓度水平所抑制，产生可能的临床疗效。 中介（I）：通过折点来定义，包括这些MlC或者抑菌圈直径在中介范围内的菌株，其抗菌药物MIC接近于血液和组织中通常可达到的水平，而抗菌药物治疗的疗效可能低于敏感株。耐药（R）：通过折点来定义，指按常规用药方案，在药物通常可达到的浓度水平时，菌株不能被抑制，表明MIC值或抑菌圈直径可能在一个产生了某种特殊的耐药机制(如β-内酰胺酶）的范围内，而且治疗研究显示该药的临床疗效不可靠。 多重耐药（MDR）：是指有多重耐药性的病原菌。其定义为一种微生物对三类（比如氨基糖苷类、大环内酯类、β－内酰胺类、喹诺酮类等）或三类以上抗菌药物同时耐药，而不是同一类的三种。 泛耐药(XDR)：广泛耐药细菌指细菌对常用抗菌药物几乎全部耐药，革兰氏阴性杆菌仅对黏菌素和替加环素敏感，革兰氏阳性球菌仅对糖肽类和利奈唑胺敏感。 全耐药（PDR）：泛耐药细菌指对所有分类的抗菌药物全部耐药，革兰氏阴性杆菌对包括黏菌素和替加环素在内的全部抗菌药物耐药，革兰氏阳性球菌对包括糖肽类和利奈唑胺在内的全部抗菌药物耐药。 药敏试验目的 使用体外试验的方法检测细菌的耐药性，预测抗菌药物临床治疗效果并为临床医生针对某一特定感染问题选用药物提供依据。 判断标准

柠檬香精抑菌实验方案

柠檬果皮精油的抑菌实验 食品保鲜主要手段多为冷藏结合化学杀菌剂。但是化学杀菌剂对人类健康和 环境的危害同样也成为全世界关心的重要问题。因此，开发天然的防腐保鲜剂已经成为 当前食品行业保鲜研究领域的一个热点。从某些植物中提取的精油具有良好的抑菌能力 和较高的食用安全性，是开发天然防腐保鲜剂的重要原材料。 精油除了具有良好的抑菌能力外，在气态时还具有较强的生物活性，可以作为使用 方便的熏蒸剂用于农产品的贮藏保鲜过程之中。一些研究表明，植物精油可以通过控制 细菌生长腐败而延长食品的存储货架期。 通过对柠檬果皮抑菌性的探讨，确定出离心法与蒸馏法所得柠檬精油的抑菌性能 力，进一步比较离心法柠檬精油与蒸馏法所得柠檬精油的区别，为后续将柠檬精油作为 抑菌剂而使用提供一定的理论依据。 1材料与方法 1.1材料与试剂 柠檬精油蒸馏水牛肉膏蛋白胨NaCl 琼脂 试验菌种 金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌 1.2仪器与设备 电子天平酸度计电热恒温隔水式培养箱立式压力蒸汽压灭菌器家用冷藏冷冻箱显微镜血球计算板磁力加热搅拌器电炉其他：具塞三角瓶、试管、大小烧杯、量筒、培养平皿、涂布棒、接种环、移液管、 酒精灯、游标卡尺等。 1.3实验方法 菌悬液的制备 细菌选用牛肉膏蛋白胨作为培养基，将供试菌种分别接种于装有对应培养基的试管 之内，进行扩大培养。将细菌置于37℃恒温培养箱中培养24h，然后取活化好的菌种斜面，用无菌生理盐水配制成（1~10）×10个/ml 的菌悬液，备用。 1.4抑菌效力的测定 采用滤纸片扩散法测定细菌的抑菌效力。分别取0.1 ml 的菌悬液再分别倒入培养皿 中。用无菌三角玻璃棒将菌悬液在平板表面涂抹均匀，直至涂布棒与培养基之间有粘稠感。将直径约6mm 的无菌滤纸片先在柠檬精油中充分浸润，然后取出置于平板中，并 用无滤纸片的含菌培养皿作为对照，最后将上述平板置于恒温培养箱中，37℃培养24h。用游标卡尺测定其抑菌圈直径，取其平均值。 最低抑菌浓度（MIC）的测定 根据抑菌圈测定的结果，采用试管法 测定各样品的最低抑菌浓度MIC，以丙酮作 为溶剂，用无菌试管配制一系列梯度浓度的柠檬精油溶液，将各梯度浓度的精油溶液加