自来水中细菌总数的测定

自来水中细菌总数的测定

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自来水中细菌总数的测定

（生物系学号：指导老师:)

摘要水中细菌总数测定是测定水中需氧菌、兼性厌氧菌和异养菌的总数。水中细菌总数可作为判定被检水样被有机物污染程度的标志，细菌数量越多，则水中有机质含量越大。本实验应用平板计数技术测定水中细菌总数。以1 ml水样在营养琼脂培养基中，于37 ℃培养24 h后所生长的细菌菌落的总数，作为水体受细菌污染程度的标志，我国规定1 ml自来水中细菌总数不得超过100个。

关键词水中细菌总数牛肉膏蛋白胨琼脂培养基

引言水是生命之源，人的生存离不开水环境。水源日渐被生活污水和工业废水所污染。水质的好坏对人们的生活起着至关重要的作用，直接影响人们的身体健康。水是微生物广泛分布的天然环境。各种天然水中常含有一定数量的微生物。水中细菌总数越多则水被污染越重。因此测定细菌在水中的数目就尤为重要。

1. 材料与方法

1.1实验材料

牛肉膏天平电磁炉培养箱烧杯玻璃棒灭菌三角瓶灭菌培养皿灭菌吸管温度计高压蒸汽灭菌锅

1.2实验方法

1.2.1 牛肉膏蛋白胨培养基的配制

称取牛肉膏蛋白胨粉4.8g于烧杯中，倒入100ml水在微波炉上加热，加热煮沸至少持续5min。冷却至45—50℃倾注平板。

1.2.2 水样的采集

自来水：先将自来水龙头用酒精灯火焰灼烧灭菌，再开放水龙头使水流5min，以灭菌三角瓶接取水样以备分析

1.2.3倾注平板

实验组：用灭菌吸管吸取水样1ml，注入灭菌培养皿中。共做2个平皿。分别倾注冷却至45℃左右的培养基于培养皿中约1/3-2/3高度，在平整的桌面上作平面旋转摇动，使样与培养基充分混匀。

空白组：不加水样，倾注培养基于培养皿中约1/3-2/3高度

1.2.4细菌培养

待培养基凝固后，倒置于37℃培养箱中培养24h，进行菌落计数。1.2.5 计数

两个实验组的菌落数减去空白组的菌落数的和除以2得到两个平板的平均菌落数，即为1ml水样的细菌总数。

2 结果及分析

2.1实验结果

表1 实验结果

2.2数据分析

由表可知，实验室

中1ml自来水的菌落总数在我国自来水卫生指标的范围内，故自来水

合格。一般情况下，实验结果在60到100个属正常，而本实验结果低于60个每毫升，细菌数过少。造成这种结果可能是培养基温度过高就倒平板导致细菌被烫伤或烫死影响其生长和平板上细菌分布情况(如菌苔等)导致计数时的主观误差。

3 讨论

实验结果表明，我校自来水符合我国自来水标准。实验结果受三方面影响，一是自来水本身水质影响，二是实验误差的影响。水中细菌种类繁多，它们对营养和其他生长条件的差别很大，不可能找到一种培养基在一种条件下，使水中细菌均能生长繁殖，因此计算出来的水中细菌总数仅是近似值。本实验除采用菌落计数测定细菌总数外，现在已有许多快捷迅速简便的微生物检测仪等也用来测定细菌总数。在实验中需注意：倒掉灭菌培养皿中的冷凝水，在此过程中尽量少在空气中暴露。水样即取即用。倒平板时要用温度计测定培养基温度，防止温度过高，烫伤或烫死细菌，又有防止温度过低培养基凝固，不易倒平板。倒平板时平面旋转不要过快，倒平板时间不要过长，倒完一个立刻用另一个灭菌培养皿盖住。确保培养基完全凝固后将其倒置放入培养箱中。计数时。到达规定培养时间，应立即计数。计数时难免存在误差，必要时用放大镜检查以防遗漏。平板出现的效果：细菌菌落过少、细菌菌落分散均匀易于计数、细菌菌落聚集成片状，培养基被霉菌污染。菌落过少，可能是培养基温度过高导致，烫伤或烫死细菌。菌落聚集成片状是倒平板时水样没有与培养基充分混匀所致。细菌太多铺满整个培养基可能是水样取太早，倒平板不熟练等使其暴

露空气中时间过长，空气中细菌落入。

4结论

水孕育了生命，使地球上的一切都生机勃勃。而随着人类发展的需要，水资源污染严重。我们要正确认识水体污染的危害，培养合理利用和保护水资源的意识。

【参考文献】

［1］沈萍陈向东主编《微生物学实验》（第四版）.高等教育出版.2007年

水中细菌总数的测定

水中细菌总数的检测 1.实验目的 1、学习并掌握水的细菌学检测方法 2、了解水质状况与细菌数量在饮用水检测中的重要性。 2.菌落总数standard plate-count bacteria 水样在营养琼脂上、有氧条件下37°C培养48 h后，所得1 mL水样所含菌落的总数。 细菌总数是评价水质污染程度的主要卫生指标，所测定的细菌总数增多说明水被生活废弃物污染。由于结果不能说明污染的来源，因此必须结合总大肠菌群数来判断污染源和安全程度。 3.培养基与试剂 营养琼脂成分 制法：根据实际需要量，按照上述配方称取各成分混合后，加热溶解，调整pH为~，分装于玻璃容器中（如用含有较多杂质的琼脂，应先过滤。），经 kPa（121°C,15 lb）湿热灭菌20 min，储存于冷暗处备用。 4.仪器和材料 4.1仪器：高压蒸汽灭菌器、干热灭菌箱、水热恒温培养箱、电炉、天平、冰箱。 4.2材料：灭菌平皿（直径9 cm）、灭菌试管、刻度吸管、三角烧瓶、采样瓶、酒精灯、消毒水、 镊子、试管架等。 4.3放大镜或菌落计数器、pH计或精密pH试纸、火柴或打火机。 5.样品采集 5.1自来水的取样：先将自来水龙头用酒精棉擦拭，再用酒精灯火焰灭菌，打开龙头放水3-5 min， 用无菌空三角瓶接取水样200 ml。 5.2纯净水取样：用消毒酒精棉擦拭纯水机出口后，先放走部分水，再用无菌空三角瓶接取水样 200毫升。 5.3地表水的取样：应取距水面10—15 cm的深层水样，先将灭菌的带玻璃塞瓶，瓶口向下浸入 水中，然后翻转过来，除去玻璃塞，水即流入瓶中，盛满后，将瓶塞盖好，再从水中取出，最好立即检查，否则需放入冰箱中保存。 6.检验步骤 6.1生活饮用水（自来水、纯净水）：以无菌操作方法用灭菌吸管吸取1 mL充分混匀的水样，注 入灭菌培养皿中，倾注约15 ml已融化并冷却到45°C左右的营养琼脂培养基，并立即旋摇平皿，使水样与培养基充分混匀。每次检验时应做一平行接种，同时另用一个平皿只倾注培养基作为空白对照。 待冷却凝固后，翻转平皿，使底面向上，置于36°C±1°C条件下连续培养48 h，进行菌落计数，即为1 ml水样中的菌落总数。 6.2水源水：以无菌操作方法吸取1 ml充分混匀的水样，注入盛有9 ml灭菌生理盐水的试管中，

水质的细菌学检查

水质的细菌学检查 一、目的要求 (一)学习水质的细菌学检查法 (二)了解水质状况同细菌数量的关系及大肠菌群的数量在饮水中的重要性。 二、基本原理 检测水中的细菌数量是评价水质状况的重要指标之一。饮水是否合乎卫生标准，需要进行水中细菌数量及大肠菌群数量的测定。大肠菌群是肠道最普遍存在和数量最多的一群细菌，由于大肠菌群是一群能发酵乳糖的革兰氏阴性、无芽孢杆菌，它们在乳糖培养基中经37℃培养24小时即能产酸、产气，所以常将其作为粪便污染的标志。 饮用水一般规定：1毫升自来水中总菌数不得超过100个；1000毫升自来水中大肠菌群数不得超过3个。 三、实验材料 培养基及器皿、牛肉膏蛋白胨培养基、乳糖蛋白胨发酵管（内倒置小管）、三倍乳糖蛋白胨发酵管（内倒置小管）、伊红美蓝琼脂培养基、无菌空瓶、无菌水、无菌培养皿、移液管、试管。 四、实验内客 (一)采取水样 1、自来水：从学校各生活区取样。先将自来水龙头用火焰灭菌,再开放水龙头使水流1—2分钟后，用无菌空瓶接取水样。 2、池水、湖水或河水：用无菌空瓶取距水面10—15厘米深层水样。水样采取后应立即检验，不得超过4小时。 (二）水中细菌总数测定 l、自来水： 稀释水样：原水样和10-1 水样，用无菌移液管分别吸取l毫升原水样和10-1水样，分别注入二个无菌培养皿中。每皿各加13--15毫升已融化并冷却到4 5-- 50℃的牛肉膏蛋白胨培养基，轻轻旋转，使培养基与水样充分混匀，待凝固后，将平板倒置于37℃恒温箱内，培养24小时进行菌落计数。 制作培养基方法、消毒灭菌、接种、计数皆参照参微生物学实验指导，具体如下：培养基制作：实验五、培养基的制备 培养基配方：附录二、常用培养基之一 培养基灭菌：实验六、灭菌与消毒 水样接种：实验七、土壤微生物的分离与测数 细菌总数测定：实验七、土壤微生物的分离与测数 2、池水、湖水或河水等。 稀释水样：稀释倍数视水样污浊程度而定，使水样培养后每个平板中的菌落数在30--300之间的的稀释度最为合适。例如：取湖水稀释成10-1、10-2、10-3。每个稀释度作两个培养皿，并依上法倾入培养基制成平板，培养，计数。 菌落计数方法： （1）先计算同一稀释度的平均菌落数。若其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不应采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的平均菌落数。若片状菌落的大小不到培养皿的一半，而其余的一半菌落分布又很均匀时，则可将此一

水中细菌总数的测定

水中细菌总数的测定 一、目的要求 l．学习水样的采取方法和水样细菌总数测定的方法。 2．了解水源水的平板菌落计数的原则。 二、基本原理 本实验应用平板菌落计数技术测定水中细菌总数。由于水中细菌种类繁多，它们对营养和其他生长条件的要求差别很大，不可能找到一种培养基在一种条件下，使水中所有的细菌均能生长繁殖，因此，以一定的培养基平板上生长出来的菌落，计算出来的水中细菌总数仅是一种近似值。目前一般是采用普通肉膏蛋白胨琼脂培养基。 三、器材 l．培养基肉膏蛋白胨琼脂培养基，无菌水。 2.仪器或其他用具灭菌三角烧瓶，灭菌的带玻璃塞瓶，灭菌培养皿，灭菌吸管，灭菌试管等。 四、操作步骤 l．水样的采取 (1)自来水先将自来水龙头用火焰烧灼3min灭菌，再开放水龙头使水流 5min后，以灭菌三角烧瓶接取水样，以待分析。 (2)池水、河水或湖水应取距水面l0～15cm的深层水样，先将灭菌的带玻璃塞瓶，瓶口向下浸入水中，然后翻转过来，除去玻璃塞，水即流入瓶中，盛满后，将瓶塞盖好，再从水中取出，最好立即检查，否则需放入冰箱中保存。 2．细菌总数测定 (1)自来水

①用灭菌吸管吸取lml水样，注入灭菌培养皿中。共做两个平皿。 ②分别倾注约15mL己溶化并冷却到45℃左右的肉膏蛋白胨琼脂培养基，并立即在桌上作平面旋摇，使水样与培养基充分混匀。 ③另取一空的灭菌培养皿，倾注肉膏蛋白胨琼脂培养基15mL作空自对照。 ④培养基凝固后，倒置于37℃温箱中，培养24h，进行菌落计数。 ⑤两个平板的平均菌落数即为lml水样的细菌总数。 (2)池水、xx或xx等 ①稀释水样取3个灭菌空试管，分别加入9ml灭菌水。取lml水样注入第一管9ml灭菌水内、摇匀，再自第一管取1ml至下一管灭菌水内，如此稀释到第三管，稀释度分别为10- 1、10-2与10-3。稀释倍数看水样污浊程度而定，以培养后平板的菌落数在30～300个之间的稀释度最为合适，若三个稀释度的菌数均多到无法计数或少到无法计数，则需继续稀释或减小稀释倍数。 一般中等污秽水样，取10- 1、10- 2、10-3三个连续稀释度，污秽严重的取10- 2、10- 3、10-4三个连续稀释度。 ②自最后三个稀释度的试管中各取lmL稀释水加入空的灭菌培养皿中，每一稀释度做两个培养皿。 ③各倾注15ml已溶化并冷却至45℃左右的肉膏蛋白胨琼脂培养基，立即放在桌上摇匀。

水中细菌总数的检测

水中细菌总数的检测 Revised by Jack on December 14,2020

水中细菌总数的检测 1.实验目的 1、学习并掌握水的细菌学检测方法 2、了解水质状况与细菌数量在饮用水检测中的重要性。 2.菌落总数standardplate-countbacteria 水样在营养琼脂上、有氧条件下37°C培养48h后，所得1mL水样所含菌落的总数。细菌总数是评价水质污染程度的主要卫生指标，所测定的细菌总数增多说明水被生活废弃物污染。由于结果不能说明污染的来源，因此必须结合总大肠菌群数来判断污染源和安全程度。 3.培养基与试剂 营养琼脂成分 制法：根据实际需要量，按照上述配方称取各成分混合后，加热溶解，调整pH为~，分装于玻璃容器中（如用含有较多杂质的琼脂，应先过滤。），经kPa（121° C,15lb）湿热灭菌20min，储存于冷暗处备用。 4.仪器和材料 仪器：高压蒸汽灭菌器、干热灭菌箱、水热恒温培养箱、电炉、天平、冰箱。材料：灭菌平皿（直径9cm）、灭菌试管、刻度吸管、三角烧瓶、采样瓶、酒精灯、消毒水、镊子、试管架等。放大镜或菌落计数器、pH计或精密pH试纸、火柴或打火机。 5.样品采集 自来水的取样：先将自来水龙头用酒精棉擦拭，再用酒精灯火焰灭菌，打开龙头放水3-5min，用无菌空三角瓶接取水样200ml。

纯净水取样：用消毒酒精棉擦拭纯水机出口后，先放走部分水，再用无菌空三角瓶接取水样200毫升。 地表水的取样：应取距水面10—15cm的深层水样，先将灭菌的带玻璃塞瓶，瓶口向下浸入水中，然后翻转过来，除去玻璃塞，水即流入瓶中，盛满后，将瓶塞盖好，再从水中取出，最好立即检查，否则需放入冰箱中保存。 6.检验步骤 生活饮用水（自来水、纯净水）：以无菌操作方法用灭菌吸管吸取1mL充分混匀的水样，注入灭菌培养皿中，倾注约15ml已融化并冷却到45°C左右的营养琼脂培养基，并立即旋摇平皿，使水样与培养基充分混匀。每次检验时应做一平行接种，同时另用一个平皿只倾注培养基作为空白对照。 待冷却凝固后，翻转平皿，使底面向上，置于36°C±1°C条件下连续培养48h，进行菌落计数，即为1ml水样中的菌落总数。 水源水：以无菌操作方法吸取1ml充分混匀的水样，注入盛有9ml灭菌生理盐水的试管中，混匀呈1:10稀释液。 吸取1:10稀释液1ml，注入盛有9ml灭菌生理盐水的试管中，混匀呈1:100稀释液。按同法依次稀释成1:1000、1:10000稀释液备用。如此递增稀释一次，必须更换一支刻度吸管。 用灭菌吸管吸取1ml未稀释的水样和2~3个适宜稀释度的水样，分别注入灭菌培养皿内，其余操作同生活饮用水的检验步骤。 7.菌落计数及报告方法 作平皿菌落计数时，可用眼睛直接观察，必要时用放大镜检查以防遗漏。在记下各平皿的菌落数后，应求出同稀释度的平均菌落数，供下一步计算时应用。在求同稀释度的平

细菌学检查

细菌学检查 非发酵菌 鼻疽假单胞菌 鼻疽假单胞菌（P.Mallei）是鼻疽病的病原菌。可从患者血液、脓液、痰中分离到。 【临床意义】 对马、骡、驴的传染性很强，犬、猫、羊等都可被感染。可通过擦伤皮肤、直接接触 和吸入本菌而感染。人类感染较少见，但经常与病畜接触的人也可患鼻疽病。实验室感染 也可发生。 产碱假单胞菌 【临床意义】 为条件致病菌，可引起脓胸、眼部感染、脓肿等 恶臭假单胞菌 恶臭假单胞菌(P.Putida)为鱼类的一种病原菌，常可从腐败的鱼类中检出，偶尔可从 尿路感染患者的尿中及血库存血中分离出来。 非发酵菌 非发酵菌（Nonfermenters）大多是条件致病菌。包括十几个菌属的数十个种别，如 假单胞菌属、不动杆菌属、黄杆菌属、产碱杆菌属、莫拉氏菌属等。 由于非发酵菌有很多菌属，每个菌属又有多个种，因此对其必须先进行初步分群，即 先进行科、属的鉴别，然后再进行种间鉴别。 腐败假单胞菌 腐败假单胞菌（P.Putrefaciens）为腐物寄生菌，分布非常广泛，河水、污水、土壤、牛奶、鸡蛋等均有存在。可引起奶油、鱼、肉变质并产生H2S。 【临床意义】 本菌为条件致病菌。可引起人类中耳炎、创伤后溃疡、败血症、呼吸道感染，以及糖 尿病或体弱患者的皮肤化脓性溃疡。 假单胞菌属

假单胞菌属（Rseudomonas）分布很广，水、污水、土壤和空气中均存在。本属有几 十个菌种，临床较常见的有十种左右。代谢菌种为铜绿色假单胞菌。人类感染的非发酵菌，假单胞菌占70%～80%。主要是铜绿色假单胞菌（占55%～65%）。 类鼻疽假单胞菌 类鼻疽假单胞菌（P.Pseudomallei）可引起类疽病。 【临床意义】 为条件致病菌。人类接触污染的污水、土壤或通过直接接触（划破皮肤或擦伤）而进 入人体，也可从呼吸道、消化道进入人体而感染。但罕见人与人之间相互传染。 本菌可潜伏体内几年不发病，在多发地区这种隐性感染是很高的。败血性类鼻疽病如 不及时治疗进展迅速，且死亡率很高。 类产碱假单胞菌 类产碱假单胞菌（P.Pseudoalcaligenes）与产碱假单胞菌很相似，属于假单胞菌中 的产碱群。 【临床意义】 可引起肺炎、术后膝关节感染、脑膜炎和败血症。 嗜麦芽假单胞菌 嗜麦芽假单胞菌（P.Maltophilia）在自然界分布很广，自来水、河水、污水、牛奶 和冻鱼中均可存在，在正常人的咽喉、痰和粪便中可检出。 【临床意义】 本菌为条件致病菌，可引起大叶性肺炎、支气管肺炎、吸入性肺炎、心内膜炎、结膜炎、脑膜炎、伤口感染和败血症等。 斯氏假单胞菌 斯氏假单胞菌（P.Stutzeri）在水中及土壤中到处可见，在粪便、肥料、人类的呼吸道、泌尿道均可发现。 【临床意义】 本菌为条件致病菌。可引起呼吸道感染、中耳炎、关节炎、尿路感染及败血症。 铜绿假单胞菌

水 中 细 菌 总 数 的 检 测

水中细菌总数的检测 一、实验的目的要求 1、学习并掌握水的细菌学检测方法 2、了解水质状况与细菌数量在饮用水检测中的重要性。 二、实验原理 细菌总数是指1ml水样在营养琼脂培养基中，于37℃经24h培养后，所生长的细菌菌落的总数。细菌总数是评价水质污染程度的主要卫生指标。我国现行的生活饮用水标准检验方法GB5750—85规定水样中细菌总数测定是1ml水样在普通营养琼脂培养基中37℃经24小时培养所生长的细菌菌落的总数。所测定的细菌总数增多说明水被生活废弃物污染，但不能说明污染的来源。因此必须结合总大肠菌群数来判断水污染的来源和安全程度。 本实验应用平板计数技术测定水中细菌总数。由于水中细菌种类繁多，它们对营养和其他生长条件的要求差别很大，不可能找到一种培养基在一种条件下，使水中所有的细菌均能生长繁殖，因此，以一定的培养基平板上生长出来的菌落，计算出来的水中细菌总数仅是一种近似值。目前一般是采用普通牛肉膏蛋白胨琼脂培养基。 平板菌落计数法的优点： 能测出样品中的活菌数。此法常用于某些成品和生物制品检定以及食品、水源的污染程度的检定等。 缺点：手续较繁，而且测定值常受各种因素的影响。 生活饮用水细菌卫生标准 我国饮用水卫生标准： ≤3个大肠菌群/1L饮水，≤100个细菌总数/1ml饮水

三、实验仪器和材料 1、高压蒸汽灭菌锅、恒温箱、冰箱、无菌接种间。 2、消毒酒精、消毒水。 3、试管、三角瓶、平皿、刻度吸管、涂布器等（实验前包扎灭菌处理好备用） 4、培养基 蛋白胨10g 牛肉膏3g 氯化钠5g 琼脂10~20g 蒸馏水1000ml 制备方法： 按照实际的需要量，按上述配方称取各成分混合后，加热溶解，调整pH 为7.4~7.6，，分装于玻璃容器中，用高压蒸汽灭菌锅121℃灭菌20min，倒制成平板后储存于冷处备用。 5、水样：自来水、中水。 四、实验内容： （一）、培养基的制备： 实验前事先准备好培养基平板（方法见上），每小组2-4个平板。（二）、取水样： 1、自来水的取样：先将自来水龙头用酒精棉擦拭，再用酒精灯火焰灭菌， 打开龙头放水1-2分钟，用无菌空三角瓶接取水样200毫升。 2、纯净水取样：用消毒酒精棉擦拭纯水机出口后，先放走部分水，再用

水中细菌总数的检测

水中细菌总数的检测 1. 实验目的 1、学习并掌握水的细菌学检测方法 2、了解水质状况与细菌数量在饮用水检测中的重要性。 2. 菌落总数standard plate-count bacteria 水样在营养琼脂上、有氧条件下37°C培养48 h后，所得1 mL水样所含菌落的总数。细菌总数是评价水质污染程度的主要卫生指标，所测定的细菌总数增多说明水被生活废弃物污染。由于结果不能说明污染的来源，因此必须结合总大肠菌群数来判断污染源和安全程度。 3. 培养基与试剂 2.1 营养琼脂成分 2.2 制法：根据实际需要量，按照上述配方称取各成分混合后，加热溶解，调整pH为7.4~7.6，分装于玻璃容器中（如用含有较多杂质的琼脂，应先过滤。），经10 3.43 kPa（121°C,15 lb）湿热灭菌20 min，储存于冷暗处备用。 4. 仪器和材料 仪器：高压蒸汽灭菌器、干热灭菌箱、水热恒温培养箱、电炉、天平、冰箱。材料：灭菌平皿（直径9 cm）、灭菌试管、刻度吸管、三角烧瓶、采样瓶、酒精灯、消毒水、镊子、试管架等。放大镜或菌落计数器、pH计或精密pH试纸、火柴或打火机。 5. 样品采集 自来水的取样：先将自来水龙头用酒精棉擦拭，再用酒精灯火焰灭菌，打开龙头放水3-5 min，用无菌空三角瓶接取水样200 ml。 纯净水取样：用消毒酒精棉擦拭纯水机出口后，先放走部分水，再用无菌空三角瓶接取水样200毫升。 地表水的取样：应取距水面10—15 cm的深层水样，先将灭菌的带玻璃塞瓶，瓶口向下浸入水中，然后翻转过来，除去玻璃塞，水即流入瓶中，盛满后，将瓶塞盖好，再从水中取出，最好立即检查，否则需放入冰箱中保存。 6. 检验步骤 生活饮用水（自来水、纯净水）：以无菌操作方法用灭菌吸管吸取1 mL充分混匀的水样，注入灭菌培养皿中，倾注约15 ml已融化并冷却到45°C左右的营养琼脂培养基，并立即旋摇平皿，使水样与培养基充分混匀。每次检验时应做一平行接种，同时另用一个平皿只倾注培养基作为空白对照。 待冷却凝固后，翻转平皿，使底面向上，置于36°C±1°C条件下连续培养48 h，进行菌落计数，即为1 ml水样中的菌落总数。 水源水：以无菌操作方法吸取1 ml充分混匀的水样，注入盛有9 ml灭菌生理盐水的试管中，混匀呈1:10稀释液。 吸取1:10稀释液1 ml，注入盛有9 ml灭菌生理盐水的试管中，混匀呈1:100稀释液。按同法依次稀释成1:1000、1:10000稀释液备用。如此递增稀释一次，必须更换一支刻度吸管。用灭菌吸管吸取1 ml未稀释的水样和2~3个适宜稀释度的水样，分别注入灭菌培养皿内，

污水中细菌总数测定

污水中细菌总数测定 （一）实验目的： (1)了解和学习水中细菌总数 (2)学习和掌握用稀释平板计数法测定水中细菌总数的方法 （二)实验原理 水中的病菌如伤寒杆菌、痢疾杆菌、霍乱弧菌、钩端螺旋体等主要来自人和动物的粪便及污染物。因此，粪便管理在控制和消灭消化道传染病有重要意义。但直接检查水中的病原菌是比较困难的，常用测定细菌总数和大肠杆菌菌群数，来判断水的污染程度，目前我国规定生活饮用水的标准为1m1水中细菌总数不超过100个, 超过此数，表示水源可能受粪便等污染严重，水中可能有病原菌存在。 所谓细菌总数是指1mL或1g检样中所含细菌菌落的总数，所用的方法是稀释平板计数法，由于计算的是平板上形成的菌落(colony-forming unit，cfu)数，故其单位应是cfu/g(mL)。它反映的是检样中活菌的数量。 (三)实验器材 (1) 菌落总数的测定： 1)培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，无菌生理盐水。 2)器材：灭菌三角瓶，灭菌的具塞三角瓶，灭菌平皿，灭菌吸管，灭菌试管等。 （四）实验方法 (1)水样的采集： 1)自来水：先将自来水龙头用酒精灯火焰灼烧灭菌，再开放水龙头使水流5min，以灭菌三角瓶接取水样以备分析。 2)池水、河水、湖水等地面水源水：在距岸边5m处，取距水面10-15cm的深层水样，先将灭菌的具塞三角瓶，瓶口向下浸入水中，然后翻转过来，除去玻璃塞，水即流入瓶中，盛满后，将瓶塞盖好，再从水中取出。如果不能在2h内检测的，需放入冰箱中保存。 (2)细菌总数的测定： 1)水样稀释及培养： ①按无菌操作法，将水样作10倍系列稀释： ⑦根据对水样污染情况的估计，选择2-3个适宜稀释度(饮用水如自来水、深井水等，一般选择1、1:10两种浓度；水源水如河水等，比较清洁的可选择1:10、1:100、1:1000 三种稀释度；污染水—被选择1:100、1:1000、1:10000三种稀释度)，吸取1mL稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度作3个重复。

水中细菌总数的检测

建筑 水中细菌总数的检测 1.实验目的 1、学习并掌握水的细菌学检测方法 2、了解水质状况与细菌数量在饮用水检测中的重要性。 2.菌落总数 standard plate-count bacteria 水样在营养琼脂上、有氧条件下 37°C培养 48 h后，所得 1 mL水样所含菌落的总数。细菌 总数是评价水质污染程度的主要卫生指标，所测定的细菌总数增多说明水被生活废弃物污 因此必须结合总大肠菌群数来判断污染源和安全程度。 染。由于结果不能说明污染的来源， 3.培养基与试剂 2.1营养琼脂成分 2.2制法：根据实际需要量，按照上述配方称取各成分混合后，加热溶解，调整pH为7.4~7.6，分装于玻璃容器中（如用含有较多杂质的琼脂，应先过滤。），经 10 3.43 kPa（121°C,15 lb）湿热灭菌 20 min，储存于冷暗处备用。 4.仪器和材料 仪器：高压蒸汽灭菌器、干热灭菌箱、水热恒温培养箱、电炉、天平、冰箱。材料：灭菌平皿（直径 9 cm）、灭菌试管、刻度吸管、三角烧瓶、采样瓶、酒精灯、消毒水、镊子、 试管架等。放大镜或菌落计数器、 pH计或精密 pH试纸、火柴或打火机。 5.样品采集 自来水的取样：先将自来水龙头用酒精棉擦拭，再用酒精灯火焰灭菌，打开龙头放水 3-5 min，用无菌空三角瓶接取水样200 ml。 纯净水取样：用消毒酒精棉擦拭纯水机出口后，先放走部分水，再用无菌空三角瓶接取水 样 200毫升。 地表水的取样：应取距水面10— 15 cm的深层水样，先将灭菌的带玻璃塞瓶，瓶口向下浸 入水中，然后翻转过来，除去玻璃塞，水即流入瓶中，盛满后，将瓶塞盖好，再从水中取出， 最好立即检查，否则需放入冰箱中保存。 6.检验步骤 生活饮用水（自来水、纯净水）：以无菌操作方法用灭菌吸管吸取 1 mL充分混匀的水样，注入灭菌培养皿中，倾注约 15 ml已融化并冷却到 45°C左右的营养琼脂培养基，并立即旋 摇平皿，使水样与培养基充分混匀。每次检验时应做一平行接种， 同时另用一个平皿只倾注培养基作为空白对照。 待冷却凝固后，翻转平皿，使底面向上，置于36°C±1° C条件下连续培养 48 h，进行菌 落计数，即为 1 ml水样中的菌落总数。 水源水：以无菌操作方法吸取 1 ml充分混匀的水样，注入盛有 9 ml灭菌生理盐水的试管中，混匀呈 1:10稀释液。 吸取 1:10稀释液 1 ml，注入盛有 9 ml灭菌生理盐水的试管中，混匀呈1:100稀释液。按同 法依次稀释成 1:1000、1:10000稀释液备用。如此递增稀释一次，必须更换一支刻度吸管。 用灭菌吸管吸取 1 ml未稀释的水样和 2~3个适宜稀释度的水样，分别注入灭菌培养皿内，

微生物综合性实验__水中细菌总数的测定

微生物综合实验水中细菌总数的测定 一、实验目的 1．学习水样的采集和水样中细菌总数的测定方法。 2．了解和掌握平板菌落计数的原则。 3．复习、巩固微生物实验的各单元操作。 二、实验原理 水中细菌总数的测定是进行水质检验的必要项目之一，主要作为判定饮用水、水源水、地表水等被污染程度的标志。 本试验采用平板菌落计数技术来测定水中的细菌总数。该法是根据在固体培养基上所形成的菌落来进行计数。菌落总数是指在一定条件下，1 mL水样所生长出来的细菌菌落的总数。由于水中细菌种类繁多，它们对营养和其它生长条件的要求差别很大，不可能找到一种培养基和在一种条件下，使水中的所有细菌均能生长繁殖，因此，这种方法所得到的结果只是一种近似值。目前一般采用营养琼脂培养基，在需氧条件下，37℃培养36-48 h，所得到的细菌绝大部分是腐生性的嗜中温性需氧菌和兼性厌氧菌。 三、实验材料 1．检样：矿泉水等饮用水、河水、湖水、井水等。 2．培养基：营养琼脂培养基（附录Ⅱ-1.3） 3．仪器与其它用具：三角烧瓶，广口瓶，吸管，培养皿，试管，培养箱等。 四、实验步骤 1. 水样的采集与处理 ⑴饮用水：采样前，先用酒精棉球擦拭瓶口灭菌，以灭菌移液管或移液枪取水样。 ⑵河水、湖水、池水：应取距水面10 cm~15 cm的深层水样。先将已灭菌的带玻璃塞的广口瓶，瓶口向下浸入水中，然后翻转过来使瓶口向上，拔去瓶塞，待水盛满后，将瓶塞盖好，再将瓶子从水中取出。在一定深度采水样时，需要用特制的采水器（图14-14）。采水器是一金属框，内装玻璃瓶，其底部装有重沉坠，可按需要坠入一定深度。瓶盖上系有一绳索，拉吊绳索即可打开瓶盖，待水样瓶中水盛满后，放松绳索，即自行盖上瓶盖。水样采集后，将水样瓶取出，并立即用无菌棉塞或灭菌胶塞塞好瓶口，以备检验。 水样采集后应立即检验，如需要保存或运送，应采取冰镇措施，但一般要求不得超过4 h。 图14-14 采水器 1-开瓶绳索2-铁框3-瓶盖4-水样瓶5-沉坠 2. 细菌总数的测定 ⑴饮用水： ①用灭菌吸管吸取0.2 mL水样，涂布于事先准备好平板中，共做2个平皿。 ②另取一空的灭菌培养皿，倾注15 mL~20 mL牛肉膏蛋白胨培养基，作为空白对照。 ③将平皿倒置于37℃培养箱内，培养24 h，进行菌落计数。 ⑵河水、湖水、池水等：

细菌总数的测定

细菌总数的测定（平皿计数法） 1.概述 本法适用于生活用水、循环冷却水及其它水中细菌总数的测定。也适用于反渗透脱盐水中细菌总数的测定。 敞开式循环冷却水系统细菌总数的要求：≤1×105个/mL。 2.方法介绍 本法采用25号浮游生物网收集循环冷却水中的黏泥，所得的黏泥用石英砂充分研磨使细胞分散，再利用平皿计数技术在（29±1）℃培养72h来测定黏泥中的细菌总数。 3.试剂和材料 3.1 牛肉膏，生化试剂。 3.2 蛋白胨，生化试剂。 3.3 NaCl. 3.4琼脂，生物试剂。 3.5 NaOH溶液，40g/L。 3.6 HCl，1＋11溶液。 3.7 乙醇溶液，75％。 3.8 牛皮纸。 3.9 医用脱脂棉。 3.10 医用脱脂纱布。 3.11 石英砂，210～150μm 。 4.仪器和设备

4.1 25号浮游生物网。 4.2 量筒，25mL和500mL。 4.3 转子流量计。 4.4 瓷研钵。 4.5 无菌箱（室）或超净工作台。 4.6 蒸汽压力灭菌器。 4.7 生化培养箱。 4.8 电热干燥箱，温度可控制在[（60～280）±2]℃. 4.9 刻度吸管，1mL和5mL。 4.10 磨口三角瓶，100mL。 4.11容量瓶，1000mL。 4.12 培养皿，d90mm 。 4.13 三角瓶，500mL。 4.14 搪瓷量杯，1000mL。 5.试验前的准备 5.1 培养基的制备 称取下列试剂：牛肉膏3.0g，蛋白胨10.0g，NaCl5.0g,琼脂15.0g。将上述试剂加水约950mL，在电炉上加热溶解后，趁热用四层医用脱脂纱布过滤于搪瓷量杯中，并用热水补充至1000mL。用NaOH溶液或HCl溶液调节pH值至7.2±2，并分装在500mL三角瓶中，每瓶分装量不超过其总容量的2/3。塞上棉塞，用牛皮纸把瓶口包好，用蒸汽压力灭菌器在（121±1）℃下灭菌15min,此为灭过菌的培养基。

细菌学检查

非发酵菌 鼻疽假单胞菌 鼻疽假单胞菌（P.Mallei）是鼻疽病的病原菌。可从患者血液、脓液、痰中分离到。 【临床意义】 对马、骡、驴的传染性很强，犬、猫、羊等都可被感染。可通过擦伤皮肤、直接接触和吸入本菌而感染。人类感染较少见，但经常与病畜接触的人也可患鼻疽病。实验室感染也可发生。 产碱假单胞菌 【临床意义】 为条件致病菌，可引起脓胸、眼部感染、脓肿等 恶臭假单胞菌 恶臭假单胞菌(P.Putida)为鱼类的一种病原菌，常可从腐败的鱼类中检出，偶尔可从尿路感染患者的尿中及血库存血中分离出来。 非发酵菌 非发酵菌（Nonfermenters）大多是条件致病菌。包括十几个菌属的数十个种别，如假单胞菌属、不动杆菌属、黄杆菌属、产碱杆菌属、莫拉氏菌属等。 由于非发酵菌有很多菌属，每个菌属又有多个种，因此对其必须先进行初步分群，即先进行科、属的鉴别，然后再进行种间鉴别。 腐败假单胞菌 腐败假单胞菌（P.Putrefaciens）为腐物寄生菌，分布非常广泛，河水、污水、土壤、牛奶、鸡蛋等均有存在。可引起奶油、鱼、肉变质并产生H2S。

【临床意义】 本菌为条件致病菌。可引起人类中耳炎、创伤后溃疡、败血症、呼吸道感染，以及糖尿病或体弱患者的皮肤化脓性溃疡。 假单胞菌属 假单胞菌属（Rseudomonas）分布很广，水、污水、土壤和空气中均存在。本属有几十个菌种，临床较常见的有十种左右。代谢菌种为铜绿色假单胞菌。人类感染的非发酵菌，假单胞菌占70%～80%。主要是铜绿色假单胞菌（占55%～65%）。 类鼻疽假单胞菌 类鼻疽假单胞菌（P.Pseudomallei）可引起类疽病。 【临床意义】 为条件致病菌。人类接触污染的污水、土壤或通过直接接触（划破皮肤或擦伤）而进入人体，也可从呼吸道、消化道进入人体而感染。但罕见人与人之间相互传染。 本菌可潜伏体内几年不发病，在多发地区这种隐性感染是很高的。败血性类鼻疽病如不及时治疗进展迅速，且死亡率很高。 类产碱假单胞菌 类产碱假单胞菌（P.Pseudoalcaligenes）与产碱假单胞菌很相似，属于假单胞菌中的产碱群。 【临床意义】 可引起肺炎、术后膝关节感染、脑膜炎和败血症。

实验 水中细菌总数的测定 水中大肠杆菌的测定

实验2 水中大肠菌群数的测定 一、目的要求 1．了解大肠菌群数量在引用水中的重要性 2．学习掌握多管发酵法和滤膜法测定大肠菌群数 二、原理 若水源被粪便污染，则有可能也被肠道病原菌污染，然而肠道病原菌在水中容易死亡与变异，因此数量较少，要从中特别是自来水中分离出病原菌常较困难与费时，这样就要找到一个合适的指示菌，此指示菌要求是大量出现在粪便中的非病原菌，并且和水源病原菌相比是较易检出的。若指示菌在水中不存在或数量很少，则大多数情况也保证没有病原菌。最广泛应用的指示菌是大肠菌群，它的定义是：一群好氧和兼性厌氧、革兰氏阴性、无芽胞的杆状细菌，并在乳糖培养基中，经37oC、24～48h培养能产酸产气，根据水中大肠菌群的数目来判断水源是否被粪便所污染，并间接推测水源受肠道病原菌污染的可能性。我国规定每升自来水中大肠菌群不得检出；若只经过加氯消毒即供作生活饮用水的水源水，大肠菌群数平均每升不得超过1000个；经过净化处理及加氯消毒后供作生活饮用水的水源水，其大肠菌群数平均每升不得超过10000个。 检查大肠菌群的方法有多管发酵法与滤膜法两种。多管发酵法使用历史较久，又称水的标准分析方法，为我国大多数卫生单位与水厂所采用；滤膜法是一种快速的替代方法，而且结果重复性好，又能测定大体积的水样，目前国内已有很多大城市的水厂采用此法。 三、实验仪器和材料 1．锥形瓶（500 ml）、试管（18 mm×180 mm）、大试管（容积150 ml）、移液管1 ml 及10ml、培养皿（直径90 mm）、接种环、试管架1个。 2．革兰氏染色液一套：草酸铵结晶紫、革氏碘液、95％乙醇、蕃红染液 3．显微镜 4．自来水（或受粪便污染的河、湖水）400ml 5．蛋白胨、乳糖、磷酸氢二钾、琼脂、无水亚硫酸钠、牛肉膏、氯化钠、1.6％溴甲酚紫乙醇溶液、5％碱性品红乙醇溶液、2％伊红水溶液、0.5％美蓝水溶液。 6．10％NaOH、10％HCl、精密pH试纸6.4～8.4。 四、实验前准备工作 （一）配培养基 1．乳糖蛋白胨培养基（供多管发酵法的复发酵用） 配方：蛋白胨10g、牛肉膏3g、乳糖5g、氯化钠5g、1.6％溴甲酚紫乙醇溶液1 ml、蒸馏水1 000ml、pH＝7.2～7.4。 制备：按配方分别称取蛋白胨、牛肉膏、乳糖及氯化钠加热溶解于1 000 ml蒸馏水，调整pH为7.2～7.4。加入1．6％溴甲酚紫乙醇溶液1 ml，充分混匀后分装于试管内，每管10 ml，另取一小倒管装满培养基倒放入试管内。塞好棉塞、包扎。置于高压灭菌锅内以0.7kg/cm2（115℃）灭菌20min，取出置于阴冷处备用。 2．三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液（供多管法初发酵用） 按上述乳糖蛋白胨培养液浓缩三倍配制，分装于试管中，每管5ml。再分装大试管，每管装50ml，然后在每管内倒放装满培养基的小导管、塞棉塞、包扎，置高压灭菌锅内以0.7kg/cm2（115℃）灭菌20min，取出置于阴冷处备用。 3．品红亚硫酸钠培养基（即远滕氏培养基），供多管发酵法的平板划线用 配方：蛋白胨10g、乳糖10g、磷酸氢二钾3.5g、琼脂20～30g、蒸馏水1000ml、无水亚硫酸钠5g左右、5％碱性品红乙醇溶液。 制备：先将琼脂加入900ml蒸馏水中加热溶解，然后加入磷酸氢二钾及蛋白胨，混匀使之溶解，加蒸馏水补足至l 000 ml，调整pH为7.2～7.4，趁热用脱脂棉或绒布过滤，再

水中细菌总数的测定和大肠菌群的检测.docx

水中细菌总数的测定和大肠菌群的检测（1） 录入时间 :2010-9-25 11:17:29来源：生物信息网 （一 ) 实验目的 (1)了解和学习水中细菌总数和大肠菌群的测定原理和测定意义。 (2)学习和掌握用稀释平板计数法测定水中细菌总数的方法。 (3)学习和掌握水中大肠菌群的检测方法。 （二 ) 实验原理 水是微生物广泛分布的天然环境。各种天然水中常含有一定数量的微生物。水中微生物的主要来源有：水中的水生性微生物( 如光合藻类 ) 、来自土壤径流、降雨的外来菌群和来自下水道的污染物和人畜的 排泄物等。水中的病原菌主要来源于人和动物的传染性排泄物。 水的微生物学的检验，特别是肠道细菌的检验，在保证饮水安全和控制传染病上有着重要意义，同时也是评价水质状况的重要指标。国家饮用水标准规定，饮用水中大肠菌群数每升中不超过 3 个，细菌总数每mL不超 过 100 个。 所谓细菌总数是指算的是平板上形成的菌落 1mL或 1g 检样中所含细菌菌落的总数，所用的方法是稀释平板计数法，由于计(colony-forming unit，cfu)数，故其单位应是cfu/g(mL)。它反映的是检样中 活菌的数量。 所谓大肠菌群，是指在 37℃24h 内能发酵乳糖产酸、产气的兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌的总 称，主要由肠杆菌科中四个属内的细菌组成，即埃希氏杆菌属、柠檬酸杆菌属、克雷伯氏菌属和肠杆菌属。 水的大肠菌群数是指100mL水检样内含有的大肠菌群实际数值，以大肠菌群最近似数(MPN)表示。在正常情况下，肠道中主要有大肠菌群、粪链球菌和厌氧芽胞杆菌等多种细菌。这些细菌都可随人畜排泄 物进入水源，由于大肠菌群在肠道内数量最多，所以，水源中大肠菌群的数量，是直接反映水源被人畜排 泄物污染的一项重要指标。目前，国际上已公认大肠菌群的存在是粪便污染的指标。因而对饮用水必须进 行大肠菌群的检查。 水中大肠菌群的检验方法，常用多管发酵法和滤膜法。多管发酵法可运用于各种水样的检验，但操 作繁琐，需要时间长。滤膜法仅适用于自来水和深井水，操作简单、快速，但不适用于杂质较多、易于阻

任务一水中菌落总数的测定习题(精)

任务一水中菌落总数的测定习题 一、名词解释： 1.cfu: 2.无菌操作: 3.细菌总数: 二、填空题： 1.生活饮用水标准检验方法微生物指标是（写出GB代号）。 2.生活饮用水菌落总数不得超过个/ml，总大肠菌群MPN不得检出。 3.菌落总数测定时对水样进行倍递增稀释，一般选择个连续稀释度。 4.应选取菌落数在之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数作为菌落计数标准。低于 30cfu的平板记录具体菌落数，大于300 cfu的可记录为多不可计。 5.灭菌的平板计数琼脂培养基应却至℃时倾注平皿。 6.菌落总数测定时培养温度℃，培养时间 h。 7.稀释倍数越高，平板上的菌落数应越。 三、判断题： 1.琼脂在46℃以下会发生凝固，故常用于固体培养基的凝固剂和营养剂。（） 2.菌落计数时，菌落数小于 100 cfu 时，按"四舍五入"原则修约，以整数报告。（） 3.菌落计数时，当平板内的菌落数过多（所有稀释度均大于300），但分布很均匀，可取平板的1/4计数，再乘以4作为该平板的菌落数。（） 4.空白对照试验的平板上允许有菌落生长。（） 5.菌落总数测定时，样品如果有包装，应用无水乙醇在包装开口处擦拭后取样。（） 四、简答题 1.平皿计数法(GB5750.12-2006)测定的细菌数量是样品中的实际菌数吗？为什么？ 2.某样品菌落总数测定时，所有稀释度平板上都无菌落生长，试分析出现此结果的原因有哪些。

五、实验题： 某种鸡厂对生产用水井的水样进行菌落总数测定时，按国家标准将水样处理及培养后，培养皿上生长的菌落数量记录如下： 请回答下列问题： 1.对水样进行处理及培养条件是指什么？ 2.本次实验选择的稀释度是多少？选择依据是什么？ 3.列式计算并正确地对测定结果进行报告。 4.该指标（菌落总数）的常规检验依据是什么？简要写出其检验程序。

微生物实验报告：水中细菌总数和大肠菌群的检测

实验六水中细菌总数和大肠菌群的检测 摘要：本实验以测定公园河流水的细菌总数和大肠菌群的数量，来测定特定地点的水质情况。初步介绍了一种通用的方法来检测水源的健康指标，判定水体的质量。对该实验点的水源作出了定性的评价，以及关于试验中如何提高梯度重复的精度的分析。 关键字：河流水；细菌总数测定；大肠菌群；EMB培养 前言 各种天然水中常含有一定数量的微生物。水中细菌总数往往同水体受有机污染程度呈正相关，因而是评价水质污染程度的重要指标之一。细菌总数是指1mL水样中所含细菌菌落的总数[cfu/g(mL)]，可用稀释平板计数法检测。水中大肠菌群的数量可用来判断水源是否被粪便污染，并可间接推测水源受肠道病原菌污染的可能。 特征：G-无芽孢杆菌，兼性厌氧、在37℃24h内能发酵乳糖产酸、产气。 多管发酵法 初发酵：适当稀释样品，乳糖发酵培养，产酸产气； 分离培养：伊红美蓝（EMB）平板上划线分离，出现紫色、粉红色特征性菌落； 复发酵验证：挑取特征性菌落进行乳酸复发酵验证。 材料和方法 牛肉膏蛋白胨琼脂培养基：用于水中细菌总数测定 牛肉膏5g，蛋白胨10g，NaCl 5.0 g，琼脂8g，蒸馏水1000ml；pH 7.0 乳糖胆盐蛋白胨培养基：用于初发酵 1×：蛋白胨20g、牛胆盐5g、乳糖10g、0.04%溴甲酚紫水溶液25mL（调pH值后加）、水1000mL、pH 7.2－7.4 三倍浓缩液（3×）：除水以外，其余成分取三倍用量 分装：1×的培养基分装9ml/管，3×的培养基分装5ml/管或50ml/瓶，均装上德汉氏小管。灭菌条件：115℃，15min。 EMB培养基：用于大肠菌群菌落鉴定 脱水培养基，按说明书操作，水用量为90%。 水源：紫竹院河水 仪器：高压灭菌锅、无菌培养皿、试管、吸管、接种环、德汉氏小管、温箱、载玻片、酒精灯、显微镜等。 试剂：牛肉膏，蛋白胨，NaCl，琼脂粉，伊红美兰琼脂培养基、水、乳糖、0.04%溴甲酚紫水溶液、胆盐、革蓝氏染色试剂 具体实验步骤： 1），相关器械的灭菌操作，以及前往紫竹院取少量的样品水。 2），按照上述的配料，无菌操作配置培养基。 3），细菌总数的测定：取上述样品水，一次稀释10-1,10-2,10-3,3个浓度。对于每个浓度，取1ml稀释液加入冷却好的牛肉膏蛋白胨培养基中，立即混匀，每个浓度重复一次。将平皿倒置培养在37℃的温箱24h，计算平皿的细菌总数。

2021年水 中 细 菌 总 数 的 检 测之欧阳学文创编

水中细菌总数的检测 一、 欧阳光明（2021.03.07） 二、实验的目的要求 1、学习并掌握水的细菌学检测方法 2、了解水质状况与细菌数量在饮用水检测中的重要性。 二、实验原理 细菌总数是指1ml水样在营养琼脂培养基中，于37℃经24h培养后，所生长的细菌菌落的总数。细菌总数是评价水质污染程度的主要卫生指标。我国现行的生活饮用水标准检验方法GB5750—85规定水样中细菌总数测定是1ml水样在普通营养琼脂培养基中37℃经24小时培养所生长的细菌菌落的总数。所测定的细菌总数增多说明水被生活废弃物污染，但不能说明污染的来源。因此必须结合总大肠菌群数来判断水污染的来源和安全程度。 本实验应用平板计数技术测定水中细菌总数。由于水中细菌种类繁多，它们对营养和其他生长条件的要求差别很大，不可能找到一种培养基在一种条件下，使水中所有的细菌均能生长繁殖，因此，以一定的培养基平板上生长出来的菌落，计算出来的水中细菌总数仅是一种近似值。目前一般是采用普通牛肉膏蛋白胨琼脂培养基。平板菌落计数法的优点： 能测出样品中的活菌数。此法常用于某些成品和生物制品检定以及食品、水源的污染程度的检定等。

缺点：手续较繁，而且测定值常受各种因素的影响。 生活饮用水细菌卫生标准 我国饮用水卫生标准： ≤ 3个大肠菌群/1L饮水，≤ 100个细菌总数/1ml饮水 三、实验仪器和材料 1、高压蒸汽灭菌锅、恒温箱、冰箱、无菌接种间。 2、消毒酒精、消毒水。 3、试管、三角瓶、平皿、刻度吸管、涂布器等（实验前包扎灭菌处理好备用） 4、培养基 蛋白胨10g牛肉膏3g氯化钠5g琼脂10~20g蒸馏水1000ml 制备方法： 按照实际的需要量，按上述配方称取各成分混合后，加热溶解，调整pH为7.4~7.6，，分装于玻璃容器中，用高压蒸汽灭菌锅121℃灭菌20min，倒制成平板后储存于冷处备用。 5、水样：自来水、中水。 四、实验内容： （一）、培养基的制备： 实验前事先准备好培养基平板（方法见上），每小组2-4个平板。（二）、取水样： 1、自来水的取样：先将自来水龙头用酒精棉擦拭，再用酒精 灯火焰灭菌，打开龙头放水1-2分钟，用无菌空三角瓶接 取水样200毫升。

(完整版)水中菌落总数测定实训指导书(精)

《水环境监测》实训指导书 实训项目名称水中菌落总数测定学时4学时 实训班级课 次 实训时间 实训目的 1.掌握检验水中细菌总数的方法 2.掌握培养基配置方法 一．实验原理 生活饮用水及其水源水等水体受到生活污水、工农业废水或人和动物粪便的污染后，水中的细菌数量可大量增加，其中病原菌也随之增加，引发传染，危害人类健康，因而水中细菌总数和大肠菌数量可反映水体受微生物污染的程度。水中细菌总数往往同水体受有机物污染的程度呈正相关。故水的细菌学检验对了解水体被污染的程度，在流行病学和提供水质标准中具有重要意义和价值，它是评价水质污染程度的重要指标之一。。 细菌总数是指1mL水样在营养琼脂培养基中，于37℃经24h培养后，所生长的细菌菌落的总数（CFU）。我国生活饮用水卫生标准中规定生活饮用水的细菌总数1mL中不得超过100CFU。 二．材料与方法 1．材料 营养琼脂培养基 配方如下：蛋白胨10g、牛肉膏3g、氯化钠5g、琼脂10-20g、蒸馏水1000mL 制作方法：将上述成分充分混合后加热溶解，调整pH为7.4-7.6，分装于玻璃容器中，103.43Kpa（121℃，151b灭菌20min, 放置于冷暗处备用。 2．方法 水中细菌总数的平板计数测定方法。 3．仪器 高压蒸汽灭菌锅；9cm培养皿；1mL、5mL移液管；45mL烧杯；250mL三角瓶，放大镜 三．实验步骤 1．水样的采集 ①自来水：先将自来水龙头用火焰灼烧3min灭菌，再打开水龙头是水流5min后，以灭过菌的三角瓶接取水样，以待分析。 若水样内含有余氯，则采样瓶在为灭菌前按采500mL水样加3%硫代硫酸钠（Na2S2O3·5H2O溶液1mL的量，预先加入采样瓶内，用以采样后中和水样内的余氯，以防止余氯的杀菌作用。 ②江水、河水、湖水、塘水、水库等水源水：可应用采样器，器内的采样瓶应先灭菌。采样时，将采样器置于水体中所置的深度，水即注入采样瓶中。待注满后取出水面，立即送检，一般不应超过4h，否则需放入冰箱中保存，但不能超过24h。 2．水样的稀释