肝T-SOD测定

试验五小鼠肝匀浆T-SOD测定

一．目的

掌握动物脏器T-SOD测定的方法；

熟悉掌握T-SOD的概念及意义

二．方法及原理

羟胺法：通过黄嘌呤及黄嘌呤氧化酶反应系统产生超氧阴离子自由基（O2－·），后者氧化羟胺形成亚硝酸盐，在显色剂的作用下呈现紫红色，用可见光分光光度计测其吸光度。当被测样品中含SOD时，则对超氧阴离子自由基有专一性的抑制作用，使形成的亚硝酸盐减少，比色时测定管的吸光度值低于对照管的吸光度值，通过公式计算可求出被测样品中的SOD活力。

三．主要试剂及仪器

T-SOD试剂盒；550nm 的分光光度计；37℃恒温水浴或气浴箱；台式离心机；微量移液器；双蒸水；冰醋酸（分析纯，乙酸浓度≥99.5%）；旋涡混匀器;

试剂配制：

（1）试剂一：贮备液, 10ml×1 瓶（天冷时或放冰箱会有部分结晶析出，需热水浴溶解后再用）；试剂一应用液的配制：用时每瓶10ml 贮备液加双蒸水稀释至100ml，4℃保存 1 年。

（2）试剂二：液体10ml×1 瓶，4℃～10℃保存 1 年。

（3）试剂三：液体10ml×1 瓶，4℃～10℃保存 1 年。

（4）试剂四：贮备液：350μl×2 支，4℃保存，不可冷冻；

4 号稀释液：10ml×1 瓶，4℃保存6 个月。

试剂四应用液的配制:用时按贮备液:稀释液=1∶14 比例配制，用多少配多少。4℃保存，不可冷冻。

[注]：所用吸嘴为一次性吸嘴。

（5）试剂五：粉剂×1 支，用时加70℃～80℃热双蒸水75ml 溶解后备用，若加热过程中水分蒸发减少，此时必须用双蒸水补充至75ml，配好后的试剂避光4℃冷藏1年。

（6）试剂六：粉剂×1 支，用时加双蒸水75ml 溶解后备用，配好后试剂避光4℃冷藏保存6 个月。

（7）显色剂的配制：按试剂五:试剂六:冰乙酸=3:3:2 的体积比配显色剂，用多少配多少，配好的显色剂4℃避光冷藏 3 个月。

[注]：1.冰醋酸（分析纯，乙酸浓度≥99.5%）

2.试剂五、试剂六必须分开进行配制(切不可将试剂五、试剂六混合后再进行配制),否则不显色

四．操作步骤

色。

最佳取样量A 的确定方法：

（1）最佳取样量的确定：分别以我们举例的取样量为中间值再加 10μl 及减 少 10μl 做三只样本管及一只对照管按操作表进行预试验，以确定最佳取样量。

（2）最佳取样量的计算：（对照管吸光度-测定管吸光度）÷对照管吸光度

（3）最佳取样范围：应该在 0.15～0.55 之间，即百分抑制率在 15～55%之间

（4）此段曲线基本呈正比曲线关系）。

（5）最佳取样量的选择：取百分抑制率在 45%～50%左右的这一管的取样量作为最佳取样量。

（6）最佳取样量的调整：若百分抑制率大于 60%时（曲线为平坦部分），则需将样品浓度稀释或减少取样量后再测试。若百分抑制率小于 20%时，则需将样品量加大后测试。 最佳取样量参考值：1%组织匀浆30—50ul ；

五．计算:

定义：每毫克组织蛋白在1ml 反应液中SOD 抑制率达50%时所对应的SOD 量为一个SOD 活力单位（U ）

)/(%50)/(ml mgprot ml OD OD OD mgprot U SOD 待测样本蛋白浓度）取样量（反应液总体积值对照值测定值对照活力总÷?÷-=*mgprot 为毫克蛋白数。

六．注意事项

1. A*代表样本取样量和双蒸水取样量。

2. 最佳取样量因样品种类不同，其 SOD 活力不一。根据酶的百分抑制率与酶的活力呈抛物线关系 (附录：SOD 标准曲线) ，各种测定样品取样量不一样，在每测定一种新的样品前最好选择一个最佳取样量。

FibroTouch无创肝纤维化诊断系统

FibroTouch无创肝纤维化诊断系统 FibroTouch是全球首台影像引导的肝纤维化和脂肪肝程度的集成检测系统，提供了对肝脏组织形态、肝脏纤维化程度和肝脏脂肪变性的一体化检测和全方位评估方案。 FibroTouch是一种完全无创的肝脏健康检测设备，在一次检测中能够同时为用户提供： 肝纤维化度：肝脏纤维化程度的定量结果； 脂肪度：肝脏脂肪变性程度的定量结果。 肝脏组织形态：超声影像检测的肝脏形态 【FibroTouch在临床上有哪些用途】 FibroTouch可以实现对如下病症的诊断、筛查、跟踪、监测等 1.慢性乙型肝炎 2.慢性丙型肝炎 3.非酒精性脂肪肝 4.寄生虫感染所导致的肝病 5.胆道疾病 6.长期饮酒引发的酒精性肝病 7.长期药物治疗所造成的肝损伤 8.长期抽烟引发的原发性胆汁性肝硬化 FibroTouch可以应用于如下领域： 1.用于进行普通人群的肝脏情况状况筛查 2.用于进行慢性肝病患者的肝纤维化程度快速测量 3.用于对慢性肝病治疗效果的全过程跟踪 4.用于各类肝硬化并发症的预测 5.用于评估长期药物治疗所造成的肝损伤

6.用于评估各类代谢综合症（糖尿病、高血压、高血脂）所引起的肝脏损伤 FibroTouch为各类肝脏健康问题的早诊断、早预防、早治疗、早康复提供了有力的支持。 【FibroTouch与传统方法相比，有哪些不同】 传统临床检测肝纤维化的金标准是肝穿刺活检，与之相比较，FibroTouch带来肝纤维化检测的技术革新： 无创无痛：无需采血、无需肝穿，快速安全，可多次重复；而肝穿刺活检会给病人带来巨大的痛苦，同时容易引发出血等并发症。 准确直观：通过量化的数字直接反应肝脏的纤维化程度，采样的肝脏组织体积比肝穿样本大100倍，能更全面地反映肝脏健康程度； 低频恒定：采用第三代瞬时弹性成像技术，不同时间的测定结果具有可比性，便于慢性肝病的全过程跟踪监测； 快速简便：全过程只需要约两分钟，检查结果立即呈现； 适用范围广：可用于所有的慢性肝病的病情监测、诊断、筛查 传统的肝功化验转氨酶，无法提供肝纤维化的信息。转氨酶不能反应肝纤维化的指标。 与现有的B超检测相比，B超仅能够提供肝脏的组织形态学信息，而无法提供关于肝脏硬度的信息。因而，只有当肝硬化发展到晚期，肝脏的组织形态已经发生变化时，B超才能够检测得到。而此时的肝硬化已经无法逆转。 同样，现有的检测脂肪肝的技术，也仅能提供肝脏脂肪化的定性结果，如轻度脂肪肝、重度脂肪肝，而无法提供直观量化的结果，来反应患者脂肪肝的程度。FibroTouch则可以给出肝脏脂肪化程度的定量结果，从而使患者能够更直观地评估自己的脂肪肝病变程度，从而使得对其治疗效果的跟踪成为可能。

SOD(超氧化物歧化酶)活性测定

SOD(超氧化物歧化酶)活性测定 氮蓝四唑法 一、原理 超氧化物歧化酶(superoxide dismutase ，SOD)普遍存在动、植物的体内，是一种清除超氧阴离子自由基的酶，它催化下面的反应： o 2.-+H O 2 22+O H ＋ 反应产物H 2O 2可由过氧化氢酶进一步分解或被过氧化物酶利用。超氧化物歧化酶抑制氮蓝四唑(NBT)在光下的还原作用来确定酶活性的大小。在有氧化物质存在下，核黄素可被光还原，被还原的核黄素在有氧条件下极易被氧化而产生超氧阴离子，超氧阴离子可将氮蓝四唑还原为蓝色的甲腙，后者在560nm 处有最大吸收。而SOD 可清除超氧阴离子，从而抑制了甲腙的形成。于是光还原反应后，反应液蓝色愈深，说明酶的活性愈低，反之酶的活性俞高。据此可计算出酶活性的大小。 二、材料、仪器设备及试剂 (一)材料 植物器官(花瓣、叶片等) (二)仪器设备 冰箱、低温高速离心机、微量加样器 (1mL 、20μL 、100μL)、移液管、精密电子天平、UV-752型紫外分光光度计、试管、研钵、剪刀、镊子、荧光灯(反应试管处照度为4000Lux 或Lx) (三)试剂 (1) 0.05mol/L 磷酸缓冲液(PH7.8)。 (2) 130mmol/L 甲硫氨酸(Met)溶液：称1.9399gMet 用磷酸缓冲液定溶至100mL 。 (3)750μmol/L 氮蓝四唑溶液：称取0.06133gNBT 用磷酸缓冲液定溶至100mL ，避光保存。 (4)100μmol/LEDTA -Na 2溶液：称取0.03721g EDTA-Na 2，用磷酸缓冲液定溶1000mL 。 (5)20μmol/L 核黄素溶液：称取0.0753g 核黄素用蒸馏水定溶到1000mL ，避光保存。 三、试验步骤 (一)酶液的提取 (1)称取植物材料(去叶脉)0.2g ，加1ml 预冷的磷酸缓冲液在冰浴上研磨成浆，加缓冲

邻苯三酚自氧化法简易操作图解-测量SOD活性方法

连苯三酚自氧化法测定·O2-自由基的清除能力简介（适用于：SOD及各种抗氧化剂） 文献来源 [1] Xican Li. Improved Pyrogallol Autoxidation Method: A Reliable and Cheap Superoxide-scavenging Assay Suitable for All Antioxidants. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2012, 60:6418-6424. 操作图解 具体方法 1 溶液配制 1.1 Tris溶液（0.1mol/L）：1.21 gTris（三羟甲基氨基甲烷，M.W. 121.1）+100 mL蒸馏水。 1.2 HCl溶液（0.1mol/L）：取0.1 mL浓盐酸，加蒸馏水稀释到6 mL。 1.3 Tris-HCl缓冲液（0.05mol/L，pH7.4，含1mmol/L Na2EDTA） 40 mL0.1 mol/L Tris溶液+ x mL0.1 mol/L HCl溶液+15.2 mg Na2EDTA，混合，稀释到80 mL。用pH 计测量，pH应为7.4。用棕色瓶保存在冰箱内(最多保存三天) 。（以上为一个样品的用量）用前稍热至室温，再测pH值，符合要求即可。 1.4 60 mmol/L连苯三酚溶液（溶于1 mmol/L盐酸中） 取0.1mol/L HCl溶液（见1.2项）20μL，用蒸馏水稀释到2 mL，得1 mmol/L盐酸溶液（用pH计测量，pH＝2.5-3.0）。再往里加连苯三酚14.6 mg (M。W.126.1 )，即得。（当天有效,以上为1个样品的用量）。 2 测试液 2.1连苯三酚溶液：取2950μL Tris-HCl缓冲液加入到石英比色皿中，再加约50μL连苯三酚溶液，迅速混合(颠覆式)，开始计时,每隔30秒读数一次A值（325nm），至300秒（5min）时为止。（空白参比：Tris-HCl 缓冲液） ΔA＝A325nm,300s - A325nm,30s。由于ΔA值反映了生成·O2的初始浓度，所以，对于同一批实验而言，此时的ΔA值必须相等。此时的ΔA为ΔA0。 3.2 样品溶液：取xμL样品溶液加入到大石英比色皿中，再加（2950-x）μL Tris-HCl缓冲液，再加50μL 连苯三酚溶液，迅速混合(颠覆式)，开始计时,每隔30秒读数一次（A值，325nm），至300秒时为止。（空白参比：Tris-HCl缓冲液） ΔA＝A325nm,300s - A325nm,30s。此时的ΔA为ΔA样。 3 计算公式

标准肝体积公式评估-中国人正常肝脏体积预测公式的评估

Zheng-Rong Shi, Lu-Nan Yan, Bo Li, Tian-Fu Wen, Liver Transplantation Division, Department of Surgery, West China Hospital, Sichuan University, Chengdu 610041, Sichuan Province, China Author contributions: Shi ZR, Yan LN participated in the research design and writing of the paper; all authors participated in the performance of the research; Shi ZR contributed analytic tools and data analysis. Correspondence to: Lu-Nan Yan, MD, PhD, Liver Trans-plantation Division, Department of Surgery, West China Hospital, Sichuan University, Chengdu 610041, Sichuan Province, China. yanlunan2009@https://www.wendangku.net/doc/8f5864946.html, Telephone: +86-28-85422867 Fax: +86-28-85422867 Received: May 31, 2009Revised: July 16, 2009 Accepted: July 23, 2009 Published online: August 28, 2009 Abstract AIM: To evaluate different standard liver volume (SLV) formula and verify the applicability of the formulae for Chinese adults. METHODS:Data from 70 cases of living donor liver transplantation (LDLT) performed at our transplanta-tion centers between January 2008 and April 2009 were analyzed. SLV was estimated using our recently reported formula [the Chengdu formula: SLV (mL) = 11.5 × body weight (kg) + 334] and other reported formulae used for Chinese adults. Actual intraoperative liver volumes were obtained from a review of the patients’ medical records. RESULTS:The actual right liver volume was not signi? -cantly different from the estimated right liver volume de-termined by the Chengdu formula, but was signi? cantly smaller than estimates using the Heinemann, Urata, Vauthey, and Lee formulae (P < 0.01), and signi? cantly larger than estimates using the Fan formula (P < 0.05). CONCLUSION: The Chengdu formula was demon-strated to be reliable by its application in LDLT. ? 2009 The WJG Press and Baishideng. All rights reserved. Key words: Standard liver volume; Living donor liver transplantation; Chinese adult; Liver volume formula Peer reviewers: Silvio Nadalin, MD, PhD, Director of Transplant Program, Department of General, Visceral and Transplant Surgery, University Hospital Tübingen, Hoppe Seyler Strasse 3, 72076 Tübingen, Germany; Salvatore Gruttadauria, MD, Assistant Professor, Abdominal Transplant Surgery, ISMETT, Via E. Tricomi, 190127 Palermo, Italy Shi ZR, Yan LN, Li B, Wen TF. Evaluation of standard liver volume formulae for Chinese adults. World J Gastroenterol 2009; 15(32): 4062-4066 Available from: URL: http://www. https://www.wendangku.net/doc/8f5864946.html,/1007-9327/15/4062.asp DOI: http://dx.doi. org/10.3748/wjg.15.4062 INTRODUCTION Living donor liver transplantation (LDLT) has been used to alleviate the shortage of available liver donors. Accurate estimation of the standard liver volume (SLV) of the living donor and recipient is crucial. Overestimation of the donor’s SLV may result in excessive hepatic resection leading to liver failure, while underestimation of the recipient’s SLV may result in small-for-size graft syndrome[1-5]. Since 2001, our transplant centers have carried out 212 LDLTs. We estimated the SLV using computed tomography (CT) or reported formulae. However, there was a difference between these estimates and the actual liver volumes (ALVs) for Chinese adults. Recently, we developed a new formula (named the Chengdu formula) to estimate SLV using data from 115 LDLTs[6]. The formula is: SLV (mL) = 11.5 × body weight (kg) + 334. Using this formula, the SLVs were evaluated in 76 cases of LDLT performed from January 2008 to April 2009. Its accuracy was compared to that of other internationally reported formulae[7-10] to assess which formula is the most accurate for Chinese adults. MATERIALS AND METHODS Patient selection The data from 76 living donors were analyzed. Inclusion criteria were: (1) a healthy adult donor, aged 19-59 years; (2) right liver graft without middle hepatic vein; (3) adult-to-adult LDLT; (4) single donor; (5) no history of long term drinking. Exclusion criteria: (1) donor age < 18 or > 60 years; (2) left hepatic graft or left lateral lobe graft; (3) double donor grafts; (4) adult-to-child transplant; (5) donors who were hepatitis B or C carriers[11-14]. Clinical data Data of preoperative donors included age, sex, height Online Submissions: https://www.wendangku.net/doc/8f5864946.html, World J Gastroenterol 2009 August 28; 15(32): 4062-4066 wjg@https://www.wendangku.net/doc/8f5864946.html, World Journal of Gastroenterology ISSN 1007-9327 doi:10.3748/wjg.15.4062 ? 2009 The WJG Press and Baishideng. All rights reserved. Evaluation of standard liver volume formulae for Chinese adults Zheng-Rong Shi, Lu-Nan Yan, Bo Li, Tian-Fu Wen BRIEF ARTICLES

瞬时弹性成像技术检测肝硬度失败原因及对策

瞬时弹性成像技术检测肝硬度失败原因及对策 发表时间：2016-02-15T16:00:25.537Z 来源：《健康世界》2015年19期供稿作者：李洪兰梁静朱光竹 [导读] 四川省达州市中心医院探讨瞬时弹性成像技术（FibroScan）测量肝硬度失败原因及提高成功率的方法 四川省达州市中心医院四川达州 635000 摘要：目的探讨瞬时弹性成像技术（FibroScan）测量肝硬度失败原因及提高成功率的方法。方法用FibroScan 对5000 例慢性肝病患者进行肝脏硬度检测，每例进行10次有效测量，并对检测失败的患者进行身高、体重、肋间隙宽度测量、肝脏B 超或CT检查，以评价身体质量指数、性别、年龄、肋间隙、影像原因对检测成功的影响.结果 5000例检测者中的240例检测失败，失败率为4.8%。BMI≥28kg /m2 者失败率明显高于BMI ＜ 28kg /m2 者（，女性失败率高于男性，老年人失败率较<60 岁的人高，肋间隙＜ 9mm 患者失败率高，差异均有统计学意义（P<0.01）.肝脏影像学显示异常（肝脏血管瘤、结节、囊肿，肝脏缩小、腹腔积液、气体干扰）患者检测失败173例，失败率为3.5%。对240 例初次检测失败患者采取重新摆放体位、更换检测部位、调整探头方向等方法重新检测成功52例，使失败率降低至3.8%。结论 FibroScan 检测的失败多由于肥胖、肋间隙狭窄、肝脏影像学显示异常（肝脏血管瘤、结节、囊肿，肝脏缩小、腹腔积液、气体干扰等）引起，老年人与女性检测失败率较高。针对检测失败的原因，采取相应的对策，可降低检测失败率。 关键词：瞬时弹性成像技术；肝硬度检测；失败率 Abstract Objective To investigate the cause of the failure of the transient elastic imaging（FibroScan）and the method of improving the success rate.Methods 5000 cases were detected for liver stiffness with FibroScan， in each case were 10 times of the effective measurement，and in patients with failure detection for height，weight，rib clearance width measurement，liver B ultrasonic or CT examination and evaluation of body mass index，gender，age，intercostal space，image of the successful detection of influence.Results LSM failure occurred in 4.8% of all examinations（240 patients out of 5000）.Body mass index （BMI）≥28kg /m2 failure rate was significantly higher than BMI ＜28kg /m2.The failure rate of female patients with liver stiffness was higher than that of male，the elderly failure rate was higher than that of younger people（< 60 years of age），the intercostal space < 9mm failure rate is higher than that of the intercostal space ≥9mm.，the difference had statistically significant（P<0.01）.Liver imaging showed abnormal（liver hemangioma，nodules，cysts，liver，ascites，gas interference）in patients with 173 cases of failure detection，in which failure rate was 3.5%.In 52 cases，the failure rate was reduced to 240 by re examination of 3.8% cases，which was used to re position the position，change the detecting position and adjust the direction of the probe.．Conclusion The failure of FibroScan measurement much due to obesity，narrow rib spaces，liver imaging showed abnormal（liver hemangioma，nodules，cysts，shrinking liver，ascites，gas interference，etc.）caused by，the elderly and women detection failure rate is higher.To detect the failure of the reasons，to take the corresponding measures，can reduce the detection failure rate. Key words Transient elastography；Liver stiffness measurement（LSM）；Failure rate 基于瞬时弹性成像技术的FibroScan 能够通过检测肝脏硬度值来判断肝纤维化的程度[1]，具有无创、无痛、重复性好的优点，在我国已广泛用于临床，作为动态观察患者肝纤维化程度及抗肝纤维化治疗效果的重要评价手段之一【2】。本文通过对5000例肝病患者利用FibroScan 进行肝硬度检测对其中检测失败的病例的失败原因进行分析，采取相应的对策，提高检测成功率。 1 对象与方法 1.1 研究对象：选择本院 2014年3月～ 2015年6月住院及门诊的各种慢性肝病患者5000例行肝硬度值检测。病种包括HBV 携带者、慢性乙型肝炎、慢性丙型肝炎、酒精性肝病以及肝炎后肝硬化、自身免疫性肝病、肝癌及肝移植术后患者。检测失败240 人，其中男性76例，女性164 例，平均年龄龄37.2 ± 8.8 岁。 1.2 方法：FibroScan 为法国EchoSense 公司产品，检测方法参照FibroScan用户手册。要求每位患者成功检测10次，成功率（成功检测的次数/总的检测次数）≥60%，检测值四分位间距与中位值比值（IQR/M）应＜0.3时结果有效［1］。10 次有效测量的中位值代表肝组织的硬度，以kPa 表示。测量中完全测不出数值、成功率＜ 60%、IQR/M＞0.3 均视为测量失败。并对检测失败的患者进行身高、体重、肋间隙宽度测量、肝脏B超或CT检查。对初次检测失败病例适当改变患者的体位、检测部位、探头方向等进行再测量。 1.3 统计学处理：应用SPSS13.0软件进行数据处理，以P<0.05为差异具有统计学意义。 2 结果 2.1 一般情况：检测人数共5000 人，初次检测失败人数为240 人，失败率为4.8%。经再次测量后52 例测量成功，失败率降低为 3.8%。 2.2不同特征人群对失败率的影响 BMI≥28kg /m2 者失败率明显高于BMI ＜ 28kg /m2 者；女性失败率高于男性；老年人测量失败率高；肋间隙狭窄患者失败率高，差异均有统计学意义（P<0.01）.见表1 2.3 不同影像学原因FibroScan 探测失败率的比较［n（%）］ B 超或CT 检查示肝脏血管瘤、结节、囊肿，肝脏缩小、腹腔积液、气体干扰等导致FibroScan 探测失败率明显增高。见表2。

SOD测定方法

酶液提取:称取鲜叶样品。0.5g于预冷的研钵中，加lml0.05mol/1 pH7.0磷酸缓冲液在冰浴上研磨成浆，加缓冲液使终体积为5ml。将提取液于10000转/分冷冻离心20分钟，上清液用于测定SOD, POD, CAT活力测定及丙二醛含量测定。 SOD： 测定SOD活性的试剂配制及用量: ①磷酸缓冲液(PH7.8) 0.05moI/L 3.1m1，空白为3.2m1; ②EDTA-Na 2 1mg/m1 0.2mL; ③L一甲硫氨酸20mg/mL 0.2m1; ④核黄素0.1 mg/ml，吸取上清液0.2m1; ⑤NBT lmg/ml 0.2m1; ⑥提取酶液0.1ml，空白不加酶液。 反应总体积为4m1, 第1组、4000Lx光照30min，遮黑布终止反应(用光照培养箱，灯管全部打开即可)。 第2组、黑暗处理30 min。 置560nm处测定光密度。SOD活性单位以抑制NBT光化还原50%作为一个酶活性单位(u)，按以下公式计算SOD活性: 式中，Ack为照光管的吸光度值;AE为遮光管的吸光度值:V为样品液总体积((ml);Vt为测定时样品用量(ml); W为样品鲜重。 POD： 在试管中依次加入 4m1 0.3%愈创木酚(0.02mo1/1 pH6磷酸缓冲液配置)、 50ul酶液、 50 ul0.3%H 20 2， 摇匀，立即计时，1分钟后在470nm波长下比色，每1分钟记录一次吸光度值，连续记录5分钟。以每分钟内A470变化0.01为1个过氧化物酶活性单位(U)，按下式计算过氧化物酶活性:

式中:d A470为反应时间内吸光度的变化:Vt为提取液总体积(ml); W为样品鲜重(g); Vs为测定时取用酶液体积(ml); t为反应时间(min) 。 CAT 取酶提取液50 u 1， 加入3m1 0.05 mol/1 pH7.0磷酸缓冲液， 再加入0.3%H 2O 2 200 u1， 迅速摇匀，立即计时，1分钟后在UV-754分光光度计的240nm波长下比色，每1分钟记录一次吸光度值，连续记录5分钟。以每分钟内A240下降0.01为1个酶活性单位(U)，按下式计算过氧化氢酶活性: 式中:△A 240 为反应时间内吸光度的变化;Vt为提取液总体积(ml):w为样品鲜重(g); Vs为测定时取用酶液体积(ml); t为反应时间(min) MDA 取上清液1.5m1， 加入2.5m10.5%的硫代巴比妥酸(TBA)(用10%三氯乙酸配制)。 混合物于100℃沸水浴中加热20min，迅速冷却，于10000转/分离心20分钟，分别测定上清液在450, 532nm及600nm处的吸光度值。按以下公式计MDA浓度C( u mol/1)和含量(nmollgFW): C(u mol/1)=6.45 X (A532-A600)-0.56 X A450

抗氧化酶SODPODCAT活性测定方法

抗氧化酶 S O D P O D C A T活性测 定方法 集团文件版本号：（M928-T898-M248-WU2669-I2896-DQ586-M1988）

抗氧化酶（SOD、POD、CAT）活性测定方法 酶液制备：取0.2g（可视情况调整）样品（新鲜叶片或根系）洗净后置于预冷的研钵中，加入1.6ml 50mmol/L预冷的磷酸缓冲液 （pH7.8）在冰浴上研磨成匀浆，转入离心管中在4℃、12000g下离心20min，上清液即为酶液。 一、超氧化物歧化酶（SOD）活性测定（氮蓝四唑光化还原法） 1、试剂的配制 （1）0.05mol/L磷酸缓冲液(PBS，pH7.8)： A母液：0.2mol/L磷酸氢二钠溶液: 取Na 2HPO 4 ·12H 2 O（分子量 358.14）71.7g； B母液：0.2mol/L磷酸二氢钠溶液：取NaH 2PO 4 ·2H 2 O（分子量 156.01）31.2g。 分别用蒸馏水定容到1000ml。 0.05mol/L PBS（pH7.8）的配制：分别取A母液(Na 2HPO 4 ) 228.75ml，B母液(NaH 2PO 4 ) 21.25ml，用蒸馏水定容至1000ml。 参考文献：李合生主编：植物生理生化实验原理和技术.高等教育出版社，2000：267～268。 （2）130mM甲硫氨酸溶液：取1.9399g Met用磷酸缓冲液（pH7.8）定容至100ml。 （3）100μM EDTA-Na 2溶液：取0.03721gEDTA-Na 2 用磷酸缓冲液定 容至1000ml。 （4）20μM核黄素溶液：取0.0753g核黄素用蒸馏水液定容至1000ml，避光保存。 （5）750uM 氮蓝四唑(NBT)溶液：取0.06133g NBT用PBS定容至100ml，避光保存。 2、酶活性测定 （1）取10ml试管（要求透明度好）

肝脏体积

肝脏体积（liver volume,LV）测量不仅可以定量评价肝脏大小，还能间接反映肝功能情况，具有广泛而重要的临床应用价值，在评估肝硬化肝功能储备、肝脏肿瘤手术方式选择和预后评价、肝移植中都有重要意义。 1 肝脏体积测量方法 常用的肝脏体积测量方法包括水测法、B超、SPECT、CT和MRI。水测法被认为能够测量肝脏的实际体积，B超、SPECT、CT、MRI测量肝脏体积原理基本相同，又各有其优缺点，以下分别做简单介绍。 1.1 水测法 将离体肝脏室温下放入盛满水的容器，放入标本后使容器内水外溢，收集全部溢出的水并测量其体积，即为待测肝脏体积。该方法只能用于离体肝脏测量，不能用于术前活体肝体积评估。Heinemann等［1］观察到在死亡当时至死后检查这段时间中LV无明显变化，但由于死亡原因不同，如循环血容量减少或心源性休克，及其他情况导致肝淤血，死后LV可能会比真实情况减少或增多［2］。又由于肝脏的比重近似于水的比重［3，4］，有学者在原位肝移植后，取下的肝脏在去除附着的韧带、胆囊、门静脉结构和其他组织，但不去除移出肝中的血液（因为活体肝含有大量血液）后立即称取肝脏重量，以此作为肝脏的实测体积，认为这种方法避免了经过福尔马林固定后因组织萎缩造成的人为误差［5］。 1.2 B超测量肝脏体积 利用超声探头平行或垂直于人体纵轴得到肝脏纵切面或横截面，由计算机分别测出这些平行切面的面积，将所测面积与平行面积体间的距离进行积分，即可得到肝脏体积值。V an Thiel等［3］发现超声测量肝脏体积值接近水测法体积值，而且比CT更准确。Hatsuno等［6］比较超声和CT测量左外叶体积，发现没有明显差异，但超声测量值略低于CT测量值。超声测量肝脏体积优势在于安全、无射线辐射或无需使用造影剂、可重复、价格较低，但超声检查易受操作者经验及腹腔内肠道气体、钙化等因素干扰，这些直接影响到断层的截取、肝脏边界的确定，使最后得出的结果存在误差。三维超声体积计算在心血管、妇产科、空腔脏器（如胆囊、膀胱）及实质脏器（如前列腺、肾、脾）应用较多，应用于肝脏体积还有待进一步研究。 1.3 SPECT测量肝脏体积 SPECT断层显像时，探头围绕人体长轴旋转360°，采集不同方向上的核素分布图像而形成原始的三维立体图像，再经计算机进行图像重建，可获得脏器各截面的核素分布图像，并可重建脏器的三维立体图像。肝实质内的Kupffer细胞为单核巨噬细胞的主要成分之一。经静脉注射99mTc-胶体显像剂后，正常时90%的胶体能被肝内Kupffer细胞吞噬，其余10%由其他脏器的单核巨噬细胞摄取，如脾、骨髓等。当肝脏发生弥漫性或占位性病变或肝硬化时，病变部位的Kupffer细胞功能受损或数量减少，摄取放射性胶体的功能减低或受损，在显像图上表现为放射性稀疏区或缺损区。因而SPECT测量肝脏体积同时，还能了解肝内病变存在情况及严重程度。许敏等［7］用SPECT测量幼猪肝体积，与水测法肝体积进行比较，得出两者间差异无显著性。Sugahara等［8］用SPECT评价1例急性肝衰病人，结果显示

SOD酶活性测定方法

SOD酶活性测定 所需药品： （1）0.1mol/l pH7.8的磷酸钠缓冲液： A液：0.1mol/l磷酸氢二钠液 B液：0.1mol/l磷酸二氢钠液 1毫升B+10.76毫升A （2）0.026mol/l蛋氨酸液（Met）：现用现配 称取0.3879克蛋氨酸，用1号液定容至100毫升。 （3）75*10-5mol/l氯化硝基四氮唑蓝（NBT）液：现用现配 称取0.1533克NBT，先用少量蒸馏水溶解，然后定容至250毫升。 （4）1umol/lEDTA-2钠和2*10-5mol/l核黄素混合液 （5）0.05mol/l pH7.8的磷酸钠缓冲液 （6）石英砂 实验步骤： 1.酶液制备：称取0.5克鲜叶，放入研钵中，加入3毫升5号液和少量石英砂，于冰浴中研成匀浆。然后用5号液定容至8毫升，于0～4℃、13000g时离心15分钟，上清液即为酶提取液。酶液可在低于0℃下的环境中保存。 2.按下表加入试剂： 试剂摇匀后，迅速遮光处理1号杯，其余杯在25℃、光强为4000勒克司的条件下照光处理15分钟，然后立即遮光。接着在560nm下，以1号杯作为空白测定其余杯中溶液的光密度。假定2、3号杯中溶液抑制NBT光还原的相对百分率为100%，然后按下式分别计算其余杯中溶液抑制NBT光还原的相对百分率。 M/N=100/X M——2、3号杯中溶液的光密度的平均值 N——其余杯中溶液的光密度值 X——其余杯中溶液抑制NBT光还原的相对百分率 然后以酶液量为横坐标，以其余杯中溶液抑制NBT光还原的相对百分率（X）为纵坐标制作曲线，根据线性好的曲线所得出的函数关系计算抑制NBT光还原的相对百分率为50%时所加入的酶液量，以该酶液量作为1个酶活单位。 结果计算：SOD活力按下式计算： A=V*1000*60/（B*W*T）

肝脏硬度检测方法及意义

肝脏硬度反映肝纤维化程度，肝纤维化是肝脏损伤修复时致病因子所致肝内结缔组织异常增生的一个病理发展过程，长期进展为肝硬化。肝脏硬度检测对于慢性肝病、肝硬化患者衡量、阻断及逆转病情发展、治疗效果具有重要意义。 肝脏硬度可以通过肝组织病理活检、生化学检测、影像学检查来评估。 肝组织病理活检是明确诊断肝纤维化的“金标准”，是对肝脏损伤的炎症活动度分级、纤维化程度分期的唯一手段。但是肝穿刺作为一种局麻下的创伤性检查，由于受到适应症、穿刺取样技术水平、费用及不良反应等条件限制，使得其适用对象比较局限，临床上一般进展为肝硬化的少部分患者会接受肝穿刺病理活检，对于慢性肝病的患者则会忽略肝纤维化的问题。生化学检测主要通过肝纤四项、APRI评分、FIB-4指数来评估。PCⅢ(Ⅲ型前胶原)与肝纤维化形成的活动程度密切相关;Ⅳ-C(Ⅳ型胶原)反映基底膜胶原更新率，含量增高可较灵敏反映出肝纤过程，是肝纤的早期标志之一;LN(层粘连蛋白)为基底膜中特有的非胶原性结构蛋白，与肝纤维化活动程度及门静脉压力呈正相关，慢活肝和肝硬变及原发性肝癌时明显增高;HA(透明质酸酶)可较准确灵敏地反映肝内已生成的纤维量及肝细胞受损状况，是肝纤维化和肝硬变的敏感指标。 肝纤四项可以反映体内任何组织的纤维化，肝纤四项的增高可能是由于其他组织纤维化引起，且肝脏炎症活跃时破坏肝细胞的同时降解细胞外基质也会引起肝纤四项的增高，因此，肝纤四项缺乏特异性，不能在临床上广泛应用。另外，利用常规临床检验项目谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、血小板(PLT)计算的比率指数APRI评分及FIB-4指数来评估肝纤维化和肝硬化，只需将相应检查结果代入公式即可直接得出，简单易行，但不够直观，且由于肝病患者使用降酶药对转氨酶水平的影响较大，服药情况下并不能客观地反映肝纤维化的程度。 影像学主要通过B超、CT、MRI检查可以发现肝脏包膜增厚、肝脏表面不规则呈结节状、肝实质信号的改变、脾脏厚度增加、门静脉脾静脉增宽等改变，简单方便无危险性，但是只能在肝纤维化晚期可看到明显的影像学图像，不能明确诊断肝纤维化及肝纤维化的程度，临床上影像学提示肝硬化患者通常到了肝硬化中晚期。这些检查方法受到操作者技术、经验等多种因素的影响，并且没有办法量化，并不能客观准确的反映肝纤维化情况。 随着临床对肝病患者肝脏硬度检测的需求，近年来无创诊断肝纤维化得到迅速发展。基于瞬时弹性成像技术的FibroTouch和FibroScan检测技术，可以在身体外面直接探查肝脏的硬度，利用瞬时弹性成像技术评估肝脏的硬度值，千帕(kPa)表示，弹性数值越大，表示肝组织硬度值越大;利用受控衰减参数理论评估肝组织的脂肪变数值，值越大，表示脂肪变数值越大。瞬时弹性成像检测实现了对肝脏硬度及脂肪变性的量化，肝纤维化程度按照弹性数值分为F0、F1、F2、F3、F4 五个等级，F0表示没有纤维化，≥F1表示轻度的肝纤维化，≥F2表示中度的肝纤维化，≥F3表示重度肝纤维化，F4表示肝硬化。 根据《慢性乙型肝炎防治指南(2015年更新版)》建议：胆红素正常没有进行过抗病毒治疗 者肝硬度测定值(LSM)≥17.5kPa 诊断肝硬化，LSM≥12.4kPa(ALT<2×ULN时为10.6kPa)可诊断为进展性肝纤维化;LSM<10.6 kPa可排除肝硬化可能;LSM≥9.4kPa可诊断显著肝纤维化;LSM<7.4kPa可排除进展性肝纤维 化;LSM 7.4～9.4kPa患者如无法决定临床决策，考虑肝穿刺活组织检查。转氨酶及胆红素均正 常者LSM≥12.0kPa诊断肝硬化，LSM≥9.0kPa诊断进展性肝纤维化，LSM<9.0kPa排除肝硬化，LSM<6.0 kPa排除进展性肝纤维化，LSM 6.0～9.0kPa者如无法决定临床决策，考虑肝穿刺活组

抗氧化酶(SOD、POD、CAT)活性测定方法79498

抗氧化酶（SOD、POD、CAT）活性测定方法 一、超氧化物歧化酶（SOD）活性测定（氮蓝四唑光化还原法） 1、试剂的配制 （1）0.05mol/L磷酸缓冲液(PBS，pH7.8)： A母液：0.2mol/L磷酸氢二钠溶液: 取Na2HPO4·12H2O（分子量358.14）71.7g； B母液：0.2mol/L磷酸二氢钠溶液：取NaH2PO4·2H2O（分子量156.01）31.2g。 分别用蒸馏水定容到1000ml。 0.05mol/L PBS（pH7.8）的配制：分别取A母液(Na2HPO4) 228.75ml，B母液(NaH2PO4) 21.25ml，用蒸馏水定容至1000ml。 参考文献：李合生主编：植物生理生化实验原理和技术.高等教育出版社，2000：267～268。 （2）14.5mM甲硫氨酸溶液：取 2.1637g Met用磷酸缓冲液（pH7.8）定容至1000ml。 （3）30μM EDTA-Na2溶液：取0.001gEDTA-Na2用磷酸缓冲液定容至100ml。 （4）60μＭ核黄素溶液：取0.0023g核黄素用磷酸缓冲液定容至100ml，避光保存。 （5）2.25mM 氮蓝四唑(NBT)溶液：取0.1840g NBT用PBS定容至100ml，避光保存。 酶液制备：取0.2g（可视情况调整）样品（新鲜叶片或根系）洗净后置于预冷的研钵中， 加入1.6ml 50mmol/L预冷的磷酸缓冲液（pH7.8）在冰浴上研磨成匀浆，转入离心管中在4℃、12000g下离心20min，上清液即为酶液。 2、酶活性测定 （1）反应混合液配制(以60个样为准)：分别取Met溶液162ml，EDTA-Na2溶液0.6ml，磷酸缓冲液 5.4ml，NBT溶液6ml，核黄素溶液6ml,混合后摇匀； （2）分别取3ml反应混合液和30μl酶液于试管中 （3）将试管置于光照培养箱中在4000 lux光照下反应20min； 同时做两支对照管，其中1支试管取3ml反应混合液加入30μl PBS（不加酶液）照光 后测定作为最大光还原管，另1支只加缓冲液置于暗中测定时用于调零。 （4）以不照光的对照管（只有缓冲液并置于暗处）调零后，避光测OD560(出现颜色即可测定)。

MRI 测量肝脏体积的准确性

MRI 测量肝脏体积的准确性 摘要】目的研究MRI测量肝脏体积的准确性。 方法对20例患者进行MRI肝脏扫描，其中6例患者进行原位肝移植，另14例患者，均为肝脏肿瘤，行肝右叶切除术，在T2压脂序列上测量全肝、肝右叶体积，将测量结果与手术后水浸法得出的肝脏体积结果进行比较。 结果 MRI测量全肝及肝右叶平均体积分别为873.4±210.5 ml、651.5±187.4 ml，水浸法测得全肝及肝右叶体 积分别为861.3±205.2 ml、635.7±178.9ml，测量结果与实际肝体积间无统计学差异(P＞0 .05)。 结论 MRI是测量肝脏体积较好的方法。 【关键词】 MRI 肝脏体积 ［中图分类号］R454.4［文献标识码］A［文章编号］1810－5734(2010)8-0001-02 The study of liver volume measurement s by MRI GUO Guang-qing , LIU Xiong-you, W U Zhao-hua, YE Shao-jun. Pu Yang Hospital Of Traditional Chinese Medical, Henan 457000,China 【Abstract】 Objective The study of liver volume measurement s by MRI．Methods 20 p atients (6cases received liver transplantation, 14 cases with right lobe tumor r eceived hepatectomy) received MRI liver scan.The liver volume and hepatic right lobe volume measured by the fat suppression T2 sequences were compared with thos e measured by water replacement method． Results The mean liver volume and the h epatic right lobe volume estimated by MRI were 873.4±210.5 ml、651.5±187.4 ml, the mean liver volume and the hepatic right lobe volume estimated by water repl acement were 861.3±205.2 ml、635.7±178.9ml.There was no significant difference between the volumes measured using the two methods (P>0.05)．Conclusion MRI can provide acceptable measurements for liver volume．【Key words】 Magnetic resonance imaging Liver volume 肝脏体积是评价肝脏大小的定量数据, 具有许多重要的临床应用价值。肝脏体积的准确测量已成为疾病诊断、治疗方法选择以及预后估计的一项重要的指标。近年来肝脏外科的快速发展，特别是活体肝移植的开展,肝移植术前肝体积的准确测量是手术成功的关键因素之一, 采用影像学方法测量肝脏体积是临床常见的方法，其中以CT及MRI的测量精确度最高。C T对肝脏体积测量的研究已有不少报道［１］，应用MRI测量肝脏体积的研究较少［２］，笔者通过对20例手术患者行MRI扫描, 探讨其测量肝脏体积的准确性。 1资料与方法 1.1研究对象：收集从2006年2月至2009年9月期间，接受MRI肝脏容积扫描患者20例，其中男15例，女5例，年龄28～65岁，平均43岁，其中6例患者进行原位肝移植，另14例患者，均为肝脏肿瘤，行肝右叶切除术。 1.2方法 1.2.1设备： MRI检查使用Siemenssonata MRI 2002B1.5T 或SiemensAvanto1.5T MR