液相色谱峰异常问题分析

HPLC色谱峰异常问题分析

目录

1、色谱峰问题的来源 (1)

2、所有峰均为负峰 (2)

3、一个或几个峰是负峰 (2)

4、所有的峰都是宽峰 (2)

5、较早洗脱的峰呈宽峰 (2)

6、色谱峰峰形异常问题 (2)

（1）、峰比预想的要小 (2)

（2）、双峰或肩峰 (3)

（3）、前伸峰 (3)

（4）、平头峰 (3)

（5）、拖尾峰 (3)

（6）、分叉峰 (3)

（7）、色谱图中未出峰 (3)

（8）、色谱图中出峰比预想的少 (4)

（9）、色谱图中出峰比预想的多(鬼峰) (4)

7、色谱峰保留时间异常问题分析 (4)

（1）、保留时间飘忽不定(各次运行之间) (4)

（2）、保留时间增加或减少(各次运行之间) (4)

（3）、保留时间改变到一个新的恒定值 (5)

（4）、保留时间重现性：pH的影响 (5)

8、HPLC系统压力问题分析 (5)

（1）、系统压力高 (5)

（2）、压力低或没压力 (5)

（3）、压力不稳可能原因: (6)

9、HPLC流路基线噪音问题分析 (6)

（1）、基线不稳定(不重复) (6)

（2）、基线漂移 (6)

（3）、基线周期性噪声 (7)

（4）、基线非周期性噪声 (7)

（5）、基线周期性波动 (7)

（6）、基线有无规律的尖峰 (7)

1、色谱峰问题的来源

①、色谱柱毁坏

②、溶解样品的溶剂不当

③、第二种相互作用

④、色谱柱过载——质量过载——体积过载

⑤、其他柱外效应

⑥、管路连接

2、所有峰均为负峰

——信号电缆接反或检测器输出极性设置颠倒——光学装置尚未达到平衡。

3、一个或几个峰是负峰

——流动相吸收本底高

——进样过程中进了空气

——离子对分离中的系统峰

——样品组分的吸收（RI或UV）低于流动相

4、所有的峰都是宽峰

——系统未平衡或未达到化学平衡

——溶样的溶剂比流动相强很多

——色谱柱类型或尺寸不正确

——色谱柱或保护柱被污染或降级

——温度变化对色谱柱的影响

5、较早洗脱的峰呈宽峰

——进样体积过大或样品浓度太高

——进样器有问题，定量环（Loop）大小不合适——在线过滤器，保护柱，色谱柱或管路堵塞

——管路问题：内径不对或切管不正确

——管路连接问题：接头或锥箍不正确

——检测器时间常数不正确

6、色谱峰峰形异常问题

（1）、峰比预想的要小

①、样品粘度过大

②、进样器有问题或进样体积有误

③、检测器设置不正确，定量环（Loop）体积不正确

④、检测器输出未置零

⑤、用了不正确的检测器输出信号

⑥、检测池被污染

⑦、检测器的灯可能有问题

（2）、双峰或肩峰

①、进样量或样品浓度过大

②、保护柱或色谱柱进口堵塞

③、保护柱或色谱柱污染或失效

（3）、前伸峰

①、进样量或样品浓度过大

②、溶液的溶剂相对于流动相太强

③、保护柱或色谱柱污染或失效

（4）、平头峰

①、检测器设置不正确

②、进样体积过大或样品浓度太高

（5）、拖尾峰

①、保护柱或色谱柱问题：污染或失效

②、进样问题

③、检测器时间常数设置不正确

（6）、分叉峰

①、保护柱或分析柱污染

②、样品溶剂不溶于流动相

（7）、色谱图中未出峰

①、进样问题:未进样或样品分解

②、流动相问题:泵未输液或流动相不正确

③、检测器设置不正确,或检测器有问题

（8）、色谱图中出峰比预想的少

①、样品分解

②、色谱柱柱效丧失

③、用错流动相

④、梯度洗脱时平衡不足(例如,过早将手动进样器扳至Load位置) （9）、色谱图中出峰比预想的多(鬼峰)

①、样品分解或制样时导入了杂质

②、流动相被污染,或用错流动相

③、流动相中含有稳定剂或稳定剂发生变化

④、前次进样的后流出物(某些Rt值特别大的组分)

⑤、进样器被污染,洗针系统出问题或注射器脏

⑥、未充分平衡进样器Loop管

⑦、保护柱脏,色谱柱被污染,分辨率下降

或①、进样阀残余峰

②、样品中未知物

③、柱未平衡

④、水污染

⑤、三氟乙酸

7、色谱峰保留时间异常问题分析

（1）、保留时间飘忽不定(各次运行之间)

①、系统不稳定或未达化学平衡

②、泵压力不稳(泵头里有气泡)

③、进样体积过大或样品浓度过大

④、温度波动

⑤、流动相混合不均匀

⑥、色谱柱被污染

（2）、保留时间增加或减少(各次运行之间)

①、系统不稳定或化学平衡不足

②、泵流速变化

③、温度变化

④、色谱柱污染,柱效下降

⑤、流动相被污染

⑥、溶剂入口过滤器堵或管路堵塞

⑦、系统渗漏

（3）、保留时间改变到一个新的恒定值

①、流动相不正确或其组成不正确

②、泵流速变化

③、实际输液的流速不正确(泵失灵或故障)

④、环境温度变化；柱温不正确

⑤、色谱柱尺寸或类型不正确

⑥、色谱柱被污染

⑦、流动相含有稳定剂或稳定剂发生变化

⑧、输液系统的梯度滞后体积不正确

（4）、保留时间重现性：pH的影响

化学因素

——中性物质：无影响

——酸性物质：pH增加，保留降低

——碱性物质：pH增加，保留增加

——0.1 pH的变化会导致高达10%的保留时间变化。(pH在pKa +/- 1之内保留时间变化最大)

8、HPLC系统压力问题分析

（1）、系统压力高

可能的原因：

①、温度太低

②、流速太高

③、流动相粘度大

④、管路堵塞

⑤、仪器或色谱柱堵塞

⑥、压力传感器问题

（2）、压力低或没压力

可能原因:

——温度太高;流速太低

——泵关闭或保险丝断了

——泵未输送流动相

——系统内有渗漏处

——所用溶剂不正确

——自动进样器在Purge时卡住

——储液瓶中无溶剂

——低压限设置不当

——泵未正确排气

——溶剂入口过滤头堵

——入口管路中有空气

——泵失效

（3）、压力不稳

可能原因:

①、压力传感器问题

②、泵排气不充分

③、泵失效

④、流动相未正确脱气

⑤、所用溶剂不混溶或易挥发

9、HPLC流路基线噪音问题分析

（1）、基线不稳定(不重复)

①、检测池中有大的气泡

②、流路中有小气泡流过

③、系统未稳定或未达到化学平衡

④、流动相被污染

⑤、检测器流动池漏

⑥、色谱柱污染

（2）、基线漂移

①、色谱柱有其他组份被洗脱出————冲洗, 直至基线稳定

②、溶剂发生变化(如溶入气体或溶剂挥发)————氦气或脱气机脱气, 溶剂瓶避光,密封(但要注意防止溶剂瓶内产生负压)

③、系统有漏液之处————检漏并处理

④、环境温度影响(尤其对示差,电导,电化学检测)————室温,柱温,检测池温度控制

⑤、环境湿度影响————对光检测器有较大影响

⑥、反压变化————溶剂和样品过滤，注意黏度过大的样品

（3）、基线周期性噪声

①、绝大多数情况下是来源于泵的问题

——泵头内有气泡 - 流动相脱气,泵头排气

——泵进出口阀有问题 - 更换单向阀组件

——柱塞杆有问题 - 更换柱塞杆及其密封圈

②、溶剂混合不良 - 加装混合器

③、电噪声 - 去除噪声源

（4）、基线非周期性噪声

①、气泡 - 流动相脱气

②、检测池内有气泡 - 流动相脱气, 检测池后加适当反压

③、系统有漏液之处 - 检漏并处理

④、溶剂混合不良 - 加装混合器

⑤、电噪声 - 去除噪声源

（5）、基线周期性波动

①、温度影响 - 环境温度及检测池温度控制. 注意空调的影响

②、溶剂混合不良 - 加装混合器

③、流动相脱气不良 - 流动相脱气

④、供电电源的影响

⑤、泵不良–检修泵

（6）、基线有无规律的尖峰

①、气泡 - 溶剂脱气

②、电路接触不良 - 保证清洁, 接线牢固, 接点无氧化

③、光源灯不良- 检查处理

④、电噪声 - 去除噪声源

峰形拖尾的原因及解决方法

技术报告 改善反相HPLC中的峰拖尾 在反相HPLC中峰拖尾是一个普遍的现象。特别是分离碱性化合物和通过HPLC分析药物成分时是经常产生拖尾缘由。峰拖尾可以引起分离度降低，灵敏度减弱，精密度和定量变差。图1表明峰之间的分离度和灵敏度与峰拖尾成负相关。图2表明准确度和精密度因数据系统无法准确识别峰的起点和终点而受到影响。 图1 拖尾对分离度和灵敏度的影响 当峰拖尾（T，拖尾因子）从1.0增加到2.0时，分离度（Rs）从1.5降到1.0。灵敏度（峰高）由于峰的体积增大和样品的浓度降低而降低。 图2 峰拖尾对准确度和精密度的不利影响

拖尾峰使数据系统难以准确确定峰的终点，故而影响准确度和精密度。在这个例子中，在B点测得到峰面积比在A点测得的峰面积少约3%。 峰拖尾的原因，峰拖尾的主要原因有： 1、溶解样品的溶剂比流动像更强， 2、样品量过载， 3、固定相中的硅醇基与胺类物质相结合反应， 4、硅胶吸附酸性化合物， 5、色谱柱柱床中有空隙。 只要确定了拖尾的原因就可以采取措施减少拖尾并消除之。（表1） 表1 峰拖尾：原因及解决方案 原因解决方案 样品溶剂极性强于流动相在流动相中溶解样品，尽可能降低样品 溶剂的强度 样品量过载减少进样量，参考表2中推荐的不同柱 型对应的不同进样体积 硅醇基与胺类物质的结合 1.调节流动相的pH<3.0。 2.增加流动相的离子强度，25mM～ 50mM。 3.流动相中增加竞争性的胺类，10mM

的TEA（三乙胺）。 4.选择低硅醇活性的固定相。参照图6 C18柱按固定相硅醇活性分级。 5. 酸性物质在硅胶上的吸附 1.增加流动相中盐的浓度，25mM～ 50mM。 2.调节流动相的pH< 3.0 3.增加竞争性的有机酸，1%醋酸或者 是0.1%TFA（三氟乙酸） 柱子空隙更换新的色谱柱 尝试填充空隙很少能达到较好的效果。 一、由于溶解样品的溶剂极性强于流动相而引起的拖尾 如果溶解样品的溶剂极性强于流动相，就会引起宽的甚至是拖尾的峰。有几种线索可以帮助确定是由于此种原因引起的拖尾。第一种就是先流出的峰的拖尾较后流出的峰拖尾严重；另一种迹象就是进样量减少或者是样品经流动相稀释后进样峰拖尾减轻了。 如果怀疑拖尾的原因是流动相的强度引起的，解决很简单。将样品溶解在流动相中，或者将样品经流动相稀释至进样后峰拖尾符合要求。 二、由样品量过载引起的峰拖尾 当进样量超过柱子的容量，样品峰会呈现一个直角三角形。当更多的样品量注入时，峰的前端变得很尖而后端就拖尾更严重。另一个现象就是色谱柱过载后保留时间会随样品量的增加而提前。（见图3）由样品过载引起的峰拖尾的解决方案就是减少进样量。表2提供了各色谱柱的直径及参考的最大进样量，表2还提供了进样量的范围，因为实际进样量依赖于柱子的填料（具有高的表面积的填充材料可以具有大的进样量），分析物质（分子量大的进样量要少），和其他的因素比如样品在流动相中的溶解性。 图3 样品量过载引起的拖尾

液相色谱峰形问题 减少拖尾

液相色谱峰形问题减少拖尾 2010-09-17 06:46:08| 分类：03液相色谱问答 | 标签：液色迷人液相色谱专家四极杆液质联用仪液相色谱品牌排名|字号订阅 液相色谱峰形问题减少拖尾液相色谱峰形拖尾解决方案 液相色谱峰形问题- 夜色砖家的日志- 网易博客 高效液相色谱法专家专注hplc药物分析液相...在流动相中加入三乙胺，能显著的改善...四烷基季铵盐（如四丁基硫酸氢铵、四...3）增加流动相中缓冲盐的浓度增加缓 冲https://www.wendangku.net/doc/839465021.html,/hplc2@126/blog/static/108348 ... 2010-12-26 - 百度快照 三、峰形问题 峰形对称性的优劣对峰面积和分离度有很大的影响，从而影响分析结果的准确性。引起峰形异常的因素很多，柱外死体积引起峰形异常有个特点：对先出的峰影响大，对后出峰影响小；柱头塌陷、柱头和筛板污染会引起所有的峰形都异常，而硅醇基次级保留只引起部分峰拖尾。相塌陷除了引起保留下降外，也会造成峰拖尾。色谱实践中，大部分的峰形问题都不是色谱柱的问题，仪器参数设定、色谱条件和方法正确与否对峰形有很大影响。 1. 峰后拖 常见的3种拖尾情况：

次级保留引起峰拖尾的机理解析： 反相色谱中，通常非极性和弱极性的化合物能获得良好的峰形，而带有－COOH、－NH2、－NHR、－NR2等极性基团的化合物则比较容易产生拖尾，原因是硅胶表面残留硅羟基对极性和碱性样品分子产生次级保留效应。 反相填料表面有残余的硅羟基，具有一定的酸性，其pKa约为4.5～4.7。根据电离规律，流动相的pH－pKa>2即pH>6.7时，99％以上的硅羟基应该是呈离子状态的，即Si－O－，而pKa－pH>2即pH<2.5时，酸性环境抑制了硅羟基的电离，99％以上的硅羟基应该是呈分子状态的，即Si－OH，但其极性仍然

反相色谱峰形拖尾的原因和改善方法极限色谱柱

各种造成峰形拖尾的原因分析： [柱物理损坏] 色谱柱有物理损坏是造成峰形拖尾的根源。唯一的解决方法就是更换新柱。 [柱内填料污染] 流动相和样品中的杂质是色谱柱主要污染源。 流动相所用的各种溶剂至少是分析纯，尽量使用色谱纯试剂。流动相所用的水最好是超纯水或全玻璃器皿双蒸水。用前先用0.45um溶剂微孔过滤（器）过滤，除去可能存在的微粒。流动相建议现用现配，对于含盐的溶液尤其注意长置会产生细菌或出现沉淀。此外还得保证储存流动相的容器清洁。 复杂样品可选用0.45um溶剂微孔过滤（器）或样品预处理柱对样品进行预处理，确保样品中不含微粒杂质。若样品不便处理，要使用保护柱。 柱内填料污染时，可将柱头螺丝卸下，用专用工具挖出柱内前段被污染填料，再以相同的填料重新填入，修复。或以能溶解污染物的流动相按色谱柱使用的相反方向，冲洗色谱柱（约20至30倍柱体积，或视具体情况而定；另外，此时不能接检测器），将污染物冲出色谱柱，再按色谱柱标明的使用方向使用。 [柱进口处有异物] 当断定是柱进口处有异物时，可将柱头螺丝卸下，取出滤帽并将其置于20%硝酸溶液中，用超声波清洗约20分钟，再置于超纯水中，并用超声波清洗约10分钟，重新装入色谱柱内即可。 [样品浓度过高致使柱超载] 样品在柱上超载能引起峰展宽，拖尾（或伸舌）。 适当减小进样量或样品浓度（需要时，可提高检测器灵敏度）直至峰形和保留时间不再改变，便可消除这种不良影响。减小进样量还能改善其分离度。正常情况下，样品中每种化合物在150×4.6mm柱中进样量保持在3～50ug范围内，不会引起明显超载。 [样品溶剂不对] 选择合适的样品溶剂，以排除不必要的干扰。最好选用流动相溶解样品。 [柱外效应] 柱外效应（即进样阀、色谱柱及检测器间的管路过长、直径过粗、管路接头不匹配、有死体积）是影响色谱柱柱效的主要因素之一。所以在可能的条件下，色谱柱的两端连接管路要尽可能短，连接管内径尽可能细小，切口务必平整光滑，尽可能的减小死体积，以防止因样品扩散造成不能反映色谱柱真实柱效等情况发生。 [缓冲不足或不合适] 在缓冲不好或离子强度过低的分离中，也会出现保留时间重现性差和峰形拖尾。增加缓冲浓度（与样品大小相匹配）能改善此情况。 [硅醇基团作用] 仔细分析色谱柱内填料表面性质可知：反相色谱柱填料的表面大约被键合相覆盖了一半，其余的就是未被键合的硅醇基团。所谓的保留是指样品分子与键合相相互作用的结果。但是，酸性或碱性化合物与硅胶表面残存的硅醇基团或金属杂质之间相互作用而引起双重保留机理，因此，发生了峰形拖尾。

高效液相色谱分析中异常峰的分析与处理_龚时琼

高效液相色谱分析中异常峰的分析与处理 龚时琼 (华中科技大学化学与化工学院,湖北武汉 430074) 摘 要:高效液相色谱(hig h perf ormance liquid chr omato gr aphy ,H PL C)在高等院校、医药卫生、食品、环保等多个领域的应用越来越广泛。叙述了高效液相色谱仪的工作原理,针对高效液相色谱分析中的异常峰问题进行了分析,并提出了相应的处理方法。关键词:高效液相色谱仪;异常峰;缓冲液 中图分类号:O 657.7 文献标志码:B 文章编号:1002-4956(2010)06-0037-02 Analysis and treatment of unusual peaks in analysis of high performance liquid chromatography Gong Shiqiong (School of Chemistry and Chemica l Eng ineering.H uazhong U niversit y of Science and T echnolog y,Wuhan 430074,China) Abstract:T he hig h perfo rmance liquid chro matog raphy (H PL C)is increasing ly w ide in application,for ex am -ple,colleges and universit ies,medicine health,fo od,env iro nmental pro tect ion,and so o n.T he buffer solution was cho sen and unusual questio ns w ere pro cessed. Key words:hig h per for mance liquid chr omato gr aphy(H PL C);unusual peak;buffer solution 收稿日期:2009-06-17 作者简介:龚时琼(1969)),女,湖北省仙桃市人,工程师,主要从事大 型仪器设备的使用、研发与管理维护. E -mail:370749606@https://www.wendangku.net/doc/839465021.html,;gongs hiqiong@https://www.wendangku.net/doc/839465021.html, 高效液相色谱(H PLC)具有分离效率高、分析速度快和应用范围广等特点,特别适合于高沸点、大分 子、强极性和热稳定性差的化合物的分离、分析。自20世纪60年代后期发展以来,是现代分离测定的重要手段[1] 。目前高效液相色谱已成为化学、生化、医学、工业、农业、环保、商检和法检等领域中重要的分离技术,是分析化学和生物化学等用于解决各种实际分析和分离课题必不可少的工具之一。但在高效液相色谱分析中因各种原因会经常出现异常峰形,严重影响对结果的分析。 1 高效液相色谱仪工作原理 高效液相色谱仪是由溶剂贮液器、高压泵、进样器、色谱分离柱、检测器和数据处理系统等部分组成。 高压泵从溶液贮液器中抽走流动相,流经整个仪器系统,形成密闭的液体流路。样品通过进样系统注入色谱分离柱,在柱内进行分离。柱流出液进入检测 器,使已被分离的组分逐一被检测器收集,并将响应值转变为电信号后经放大被数据处理系统记录色谱峰,通过数据处理系统对记录的峰值进行存储和计算,从而完成整个分析过程 [2] 。 2 异常峰分析 异常的色谱峰指的是色谱图中的无峰或出现负峰、宽峰、双峰、肩峰、峰形不对称等情况。异常峰是色谱实验工作中最棘手的问题。这些峰严重影响色谱分析的结果。色谱图中不可能有纯正的高斯对称峰,轻微的拖尾是正常的,这是由分离系统所决定的。在此仅对其中几种异常峰进行分析。2.1 峰前或峰后有小峰的分析 某个单组分样品的大峰附近带小峰,如图1中的第3个峰右下的小峰以及图2中第2个峰左下的小峰。产生原因大致分为以下几种情形,针对不同情况可采取具体的措施是完全可以解决此种异常峰的。 (1)样品不纯。可改变不同的流动相和色谱柱,对样品进行分离比较,选择合适的分离条件。(2)分析柱或保护柱柱头塌陷。此情况较常见,可更换分析柱或保护柱后对峰形进行比较。柱头塌陷时往往所有的峰都会出现峰分裂[3] 。对色谱柱再生和 ISS N 1002-4956 CN11-2034/T 实 验 技 术 与 管 理 Ex perim ental Technology and M anagem ent 第27卷 第6期 2010年6月Vol.27 No.6 Ju n.2010

气相色谱常见出峰异常问题的原因及解决办法

理论 ? 实践 190 | 2015年07月 气相色谱(gas chromatography 简称GC)是二十世纪五十年代出现的一项重大科学技术成果。经过这些年的发展，色谱分析技术日趋成熟，色谱仪的使用越来越普及，使气相色谱仪在物质的定性及定量的检测方面有着越来越重要的地位，在石油化工中的大部分的原料和产品都可使用气相色谱法来进行分析。色谱的分析过程是比较复杂的，诸多因素都可以对结果产生影响，经常会出现预料不到的现象，出峰异常就是经常遇到的问题之一,一般表现为色谱出鬼峰，色谱峰分不开，色谱峰拖尾，色谱峰出现圆顶峰，进样后不出峰等，这些问题的出现看似没有规律，认真分析大部分有迹可循。以下就比较常见的造成出峰异常的问题原因进行分析，并讨论可行的解决办法。 1 鬼峰出现的原因及解决办法 1.1 进样口硅胶垫的影响 (1)原因分析。与硅胶垫质量和进样针头质量有关，主要有 几个方面：①进样针头质量不好，边缘不够平整，硅胶垫容易损坏。②硅胶垫使用次数过多或时间长老化，硅胶垫质量不好，材料弹性差，硅胶垫碎屑进入汽化室，便会形成鬼峰。③硅胶垫被污染，如进样时针头处附着的样品液滴被硅胶隔垫所吸附，在之后的分析过程中一点点脱附后进入色谱柱中。 (2)解决办法。检查所使用的进样针及硅胶垫，对质量不好的进样针、使用时间过长或质量有问题的硅胶垫进行有针对的更换。 1.2 进样口、检测器或衬管和分流平板污染 (1)原因分析 污染产生的原因较多，可以归结为以下几 个方面：①长时间未进行色谱仪的定期维护。②待测样品的组成复杂，进样口温度设置不够高，使样品汽化不完全，较重的组分滞留在进样口当中。③汽化室和衬管内经常会聚集一些沉积物及高沸点物质，如果碰到某次分析高沸点物质时，进样口温度升高时就会使聚集的物质逸出多余的峰;④在检测器中和分流平板的凹槽中未挥发的物质会慢慢积累，造成鬼峰无规律出现。(2)解决办法 根据实际污染情况对仪器的各部件进行清理。①清洗进样口。首先拆除色谱柱，之后在保证加热和通气的前提下，将无水乙醇或丙酮由进样口注入，重复3～5次，最后加热通气干燥进样口。②更换衬管或清洗衬管。在衬管被污染时可清楚的看到有颗粒物沉积或石英棉颜色变暗，污染严重时需要更换新的衬管。清洗衬管的方法: 取出衬管中的石英棉，将衬管浸泡在铬酸洗液中24小时后取出，再分别用蒸馏水、甲醇、丙酮清洗后干燥。③分流平板的清洗。将分流衬板置于色谱纯的甲醇等有机溶剂中进行超声处理，干燥，注意在拆卸和安装分流平板的过程中不能直接用手触摸，以防污染。④检测器清洗。热导检测器：根据检测器污染的程度选择合适的清洗溶剂，将丙酮，乙醚，十氢萘等溶剂装满检定器的测量池，浸泡大约20分钟左右后倾出，如此重复多次至所倾出的溶液比较干 气相色谱常见出峰异常问题的原因及解决办法 柴聪(中国神华煤制油化工有限公司鄂尔多斯煤制油分公司, 内蒙古 鄂尔多斯 017209) 摘要：气相色谱作为一种成熟稳定的分离、分析技术，在石油化工领域应用非常广泛，利用气相色谱分析技术进行定性、定量检测时，出峰异常问题的出现往往会给结果判定带来严重干扰。对气相色谱分析时这类问题产生的原因进行分析，找出相应的解决办法， 可以减少处理结果时的干扰，进而提高分析结果判定的准确性。关键词：气相色谱；鬼峰；色谱峰分不开；色谱峰拖尾；解决办法净为止。如果选用一种溶剂不能洗净时，可以根据污染物的性 质先选用高沸点溶剂进行浸泡清洗，然后再用低沸点溶剂反复清洗。洗净后加热驱出溶剂，安装回仪器上，加热检测器至150℃左右，接通载气冲洗4小时左右即可使用。氢火焰检测器：在污染不严重时可以将色谱柱拆下，用管子将进样口与检测器联接起来，然后通载气并将检测器温度升至120℃以上，从进样口先注入20μl 左右蒸馏水，再注入几十微升丙酮溶剂进行清洗。当污染比较严重时，必须卸下检测器进行清洗，顺序拆下收集极、正极、喷嘴， 若喷嘴是不锈钢类的材料做成，可以与电极一起，先用细砂纸细心打磨掉脏污部分，再用超声清洗，最后用甲醇清洗干净，放入烘箱中烘干。 1.3 色谱柱的影响 (1)原因分析。①色谱柱未充分老化，柱温过低老化不充 分，温度过高产生液相遗失。②色谱柱长时间使用。柱自身有吸附特性，柱内余留高浓度样品或柱内留存高沸点物质，柱头被污染。再者毛细管柱低负荷量，需要高灵敏度检测器，这样就特别容易出现鬼峰。 (2)解决办法。截去受污染的柱头部分，升高进样口温度到合适的值，进行柱头老化；在进行组成复杂的样品分析后，采用程序升温对色谱柱进行吹扫，清除色谱柱中的残留物质。在程序升温的过程中，设置的最高柱温必须低于柱子最高使用温度20℃左右，以避免柱流失。 1.4 仪器分析条件设置不合适 (1)原因分析。在分析未知的新样品时，可能会由于仪器条 件设置不当产生一些干扰峰。一般原因是:①样品可能会在分析条件下发生降解产生一些干扰成分，如果这些成分恰好在该条件下有响应，就可能产生鬼峰。②选择的色谱柱不合适，不利于分析高沸点的化合物。 (2)解决办法。通过查阅文献，进行试验，查找方法，尽可能的了解检测样品的各种性质，如极性、分子结构、分子量大小等方面，选择适当的分析条件，包括柱箱、进样口、检测器的使用温度，色谱柱的极性、膜厚、长度、内径等。 1.5 样品污染 样品在进样前的处理过程中受到污染，鬼峰在检测时有规律出现，有良好的重复性，且溶剂空白不包含此峰，这种情况比较容易判断。 解决方法：由于色谱分析是一种痕量分析方法，所以在样品处理的各个过程中用到的所有物品必须保证清洁，以免使干扰物质进入样品。 2 色谱峰分不开的原因及解决办法 2.1 载气流速过高

高效液相色谱中异常峰分析范文

异常峰分析 异常的色谱峰指的是色谱图中的无峰或出现负峰、宽峰、双峰、肩峰、峰形不对称等情况。异常峰是色谱实验工作中最棘手的问题。这些峰严重影响色谱分析的结果。色谱图中不可能有纯正的高斯对称峰 , 轻微的拖尾是正常的 , 这是由分离系统所决定的。在此仅对几种异常峰进行分析。 1.峰前或峰后有小峰的分析 产生原因大致分为以下几种情形 (1) 样品不纯。可改变不同的流动相和色谱柱 ,对样品进行分离比较 , 选择合适的分离条件。 (2) 分析柱或保护柱柱头塌陷。此情况较常见 ,可更换分析柱或保护柱后对峰形进行比较。柱头塌陷时往往所有的峰都会出现峰分裂。对色谱柱再生和清洗可以改善分离效果。

(3) 色谱柱柱容量下降。当长时间使用后 , 有一些强保留组分吸附在柱子中 , 不大的进样量往往就会出现峰分裂。用强洗脱能力的溶剂清洗色谱柱 , 或更换色谱柱可使问题得到改善。 (4) 样品溶剂与流动相不匹配或进样体积过大。当样品溶剂比流动相极性大时 , 有时即使进样体积很小 , 也容易出现峰变形和裂分现象。建议用流动相溶解样品。 (5) 流动相不恰当。此情况较罕见 , 有些样品在特定的色谱条件下可能存在结构的动态平衡 , 而出双峰 , 这种双峰是无法分离完全的 , 改变色谱条件尤其是p H 值会使峰形正常。 (6) 样品分解。不稳定的样品在色谱分离过程中变成其他物质而出现双峰。这时需改变样品处理方法或色谱分离条件。 2.负峰分析 在色谱分析中有时会出现负峰或倒峰 , 如图 3 中的大峰的左下就有一负峰。出现这种现象可能是由以下几种原因引起的 , 可针对不同情况进行排除 , 进而使问题得到解决。 (1) 流动相吸收本底值过高。此时可适当改变检测波长。 (2) 进样过程中进入空气。进行排气处理 , 直到基线平稳再进样。 (3) 样品组分的吸收低于流动相。可改变流动相或改变检测波长。 (4) 配制样品的溶液与流动相不一样。重新配制样品 , 用与流动相一样的溶剂配制或稀释样品。 3.前沿、拖尾峰分析 拖尾：1 干扰峰，优化条件分离；2 色谱柱塌陷，更换色谱柱； 3 流动相pH 不合适，调节pH值；4 管路没有接好，存在较大的死体积，可以重新接一下。 前沿：1 溶剂选择不合适，选择合适的溶剂；2 样品过载，降低进样量； 3 柱温太低，升高柱温；4 色谱柱损坏，更换色谱柱； 图谱前沿和拖尾的原因主要是流动相选择不合适，可以相应调整流动相的极性，或者适当加入酸来调整，可以得到较好的改善。一般来讲，酸碱在流动相中对于前沿和拖尾影响较大。柱前沿是可能因为柱超载，拖尾是可能因为样品被污染，选择合适的流动相，调节好PH能够改善这以情况。 前辈们总是会告诉我们，拖尾峰与柱子有关，可能是过载，稀释样品再做，或换新柱做。有时候托尾峰往往是有机性相近杂质没有分开，此时，可以优化分析方法，或更换柱子试一试；也可能由于柱子使用时间太久柱效下降出现塌陷等原

色谱峰拖尾的原因

色谱峰拖尾的原因 色谱峰拖尾的原因有很多，例如： 1．色谱柱本身填装问题,筛板堵塞或填料塌陷；柱坏； 2．柱头有污染； 3．样品超载； 4．样品溶剂不合适； 5．柱外效应； 6．化学或二次保留（硅羟基）效应； 7．缓冲容量不足或不合适； 8．重金属污染。 解决方法如下： 一、与化学有关的拖尾问题 1．流动相中，加入30mM的三乙胺（用于碱性化合物）或醋酸胺（用于酸性化合物），未知化合物加醋酸三乙胺； 2．如仍然拖尾，将三乙胺换为二甲基辛胺（或醋酸二甲基辛胺）； 3.降低进样量至<1μg。 二、与色谱柱有关的拖尾问题 1.如柱头处有强保留的样品组分积聚，反相柱可用20倍柱体积的96%的二氯甲烷与4%甲醇，加1%氢氧化铵混合液冲洗；正向柱可用甲醇冲洗； 2.使用保护柱。 三、与HPLC系统有关的峰拖尾和峰加宽 1.进样体积过大，（通常≤25μL）； 2.进样阀与色谱柱及检测器之间的管路体积过大（最佳连接管应<20cm，内径为0.007"）；

3.检测器流通池的体积过大。 多数色谱分析工作者在日常工作中想必都遇到过这样的问题：当用反相柱进行酸性或碱性化合物分析时，常常出现峰形拖尾现象，严重降低分离质量和精度，尤其是使用自动数据系统时。在此，笔者就各种造成峰形拖尾的原因作一次简浅的分析： [柱物理损坏] 色谱柱有物理损坏是造成峰形拖尾的根源。唯一的解决方法就是更换新柱。 [柱内填料污染] 流动相和样品中的杂质是色谱柱主要污染源。 流动相所用的各种溶剂至少是分析纯，尽量使用色谱纯试剂。流动相所用的水最好是超纯水或全玻璃器皿双蒸水。用前先用0.45um溶剂微孔过滤（器）过滤，除去可能存在的微粒。流动相建议现用现配，对于含盐的溶液尤其注意长臵会产生细菌或出现沉淀。此外还得保证储存流动相的容器清洁。 复杂样品可选用0.45um溶剂微孔过滤（器）或样品预处理柱对样品进行预处理，确保样品中不含微粒杂质。若样品不便处理，要使用保护柱。 柱内填料污染时，可将柱头螺丝卸下，用专用工具挖出柱内前段被污染填料，再以相同的填料重新填入，修复。或以能溶解污染物的流动相按色谱柱使用的相反方向，冲洗色谱柱（约20至30倍柱体积，或视具体情况而定；另外，此时不能接检测器），将污染物冲出色谱柱，再按色谱柱标明的使用方向使用。 [柱进口处有异物] 当断定是柱进口处有异物时，可将柱头螺丝卸下，取出滤帽并将其臵于20%硝酸溶液中，用超声波清洗约20分钟，再臵于超纯水中，并用超声波清洗约10分钟，重新装入色谱柱内即可。 [样品浓度过高致使柱超载] 样品在柱上超载能引起峰展宽，拖尾（或伸舌）。 适当减小进样量或样品浓度（需要时，可提高检测器灵敏度）直至峰形和保留时间不再改变，便可消除这种不良影响。减小进样量还能改善其分离度。正常情况下，样品中每种化合物在150×4.6mm柱中进样量保持在3～50ug范围内，不会引起明显超载。 [样品溶剂不对] 选择合适的样品溶剂，以排除不必要的干扰。最好选用流动相溶解样品。 [柱外效应] 柱外效应（即进样阀、色谱柱及检测器间的管路过长、直径过粗、管路接头不匹配、有死体积）是影响色谱柱柱效的主要因素之一。所以在可能的条件下，色谱柱的两端连接管路要尽可能短，连接管内径尽可能细小，切口务必平整光滑，尽可能的减小死体积，以防止因样品扩散造成不能反映色谱柱真实柱效等情况发生。 [缓冲不足或不合适] 在缓冲不好或离子强度过低的分离中，也会出现保留时间重现性差和峰形拖尾。增加缓冲浓度（与样品大小相匹配）能改善此情况。 [硅醇基团作用] 仔细分析色谱柱内填料表面性质可知：反相色谱柱填料的表面大约被键合相覆盖了一半，其余的就是未被键合的硅醇基团。所谓的保留是指样品分子与键合相相互作用的结果。但是，酸性或碱性化合物与硅胶表面残存的硅醇基团或金属杂质之间相互作用而引起双重保留机理，因此，发生了峰形拖尾。

色谱峰拖尾的原因

液相色谱峰有拖尾现象是什么原因 A、峰拖尾 1、筛板阻塞（a、反冲色谱柱b、更换进口筛板c、更换色谱柱） 2、色谱柱塌陷（填充色谱柱） 3、干扰峰（a、使用更长的色谱柱b、改变流动相或更换色谱柱） 4、流动相PH选择错误（调整PH值。对于碱性化合物，低PH值更有利于得到对称峰） 5、样品与填料表面的溶化点发生反应（a、加入离子对试剂或碱性挥发性修饰剂b、换柱子） B、峰前延 1、柱温低（升高柱温） 2、样品溶剂选择不恰当（使用流动相作为样品溶剂） 3、样品过载（降低样品含量） 4、色谱柱损坏（见A1、A2） C、峰分叉 1、保护柱或分析柱污染图（取下保护柱再进行分析。如果必要更换保护柱。如果分析柱阻塞，拆下来清洗。如果问题仍然存在，可能是柱子被强保留物质污染，运用适当的再生措施。如果问题仍然存在，入口可能被阻塞，更换筛板或更换色谱柱。） 2、样品溶剂不溶于流动相（改变样品溶剂。如果可能采取流动相作为样品溶剂。） D、峰变形 1、样品过载（减少样品载量）

E、早出的峰变形 1、样品溶剂选择不恰当（a、减少进样体积b、运用低极性样品溶剂） F、早出的峰拖尾程度大于晚出的峰 1、柱外效应（a、调整系统连接（使用更短、内径更小的管路）b、使用小体积的流通池） G、K’增加时，脱尾更严重 1、二级保留效应，反相模式（a、加入三乙胺（或碱性样品）b、加入乙酸（或酸性样品）c、加入盐或缓冲剂（或离子化样品）d、更换一支柱子） 2、二级保留效应，正相模式（a、加入三乙胺（或碱性样品）b、加入乙酸（或酸性样品）c、加入水（或多官能团化合物）d、试用另一种方法） 3、二级保留效应，离子对(加入三乙胺（或碱性样品）) H、酸性或碱性化合物的峰拖尾 1、缓冲不合适(a、使用浓度50-100mM的缓冲液b、使用Pka等于流动相PH值的缓冲液) I、额外的峰 1、样品中有其他组份(正常) 2、前一次进样的洗脱峰(a、增加运行时间或梯度斜率b、提高流速) 3、空位或鬼峰(a、检查流动相是否纯净b、使用流动相作为样品溶剂 c、减少进样体积) J、保留时间波动

改善反向液相色谱峰拖尾的方法

改善反相HPLC中的峰拖尾 分离碱性化合物、通过HPLC分析药物成分时是经常产生拖尾 峰拖尾可以引起分离度降低、灵敏度减弱、精密度和定量变差。（峰之间的分离度和灵敏度与峰拖尾成负相关；准确度和精密度因数据系统无法准确识别峰的起点和终点而受到影响） 峰拖尾原因及解决方案 引起的拖尾 现象： 1、先流出的峰的拖尾较后流出的峰拖尾严重； 2、进样量减少或样品经流动相稀释后进样峰拖尾情况减轻。 二、由样品量（进样量超过柱子容量）过载引起的峰拖尾 现象： 1、样品峰呈现直角三角形，当更多的样品量注入时，峰前端变尖、后端拖尾更严重。 2、色谱柱过载后，保留时间随样品量的增加而提前。（见图3） 表 进样量、进样量的范围

因为实际进样量依赖于柱子的填料（具有高的表面积的填充材料可以具有大的进样量），分析物质（分子量大的进样量要少），和其他的因素比如样品在流动相中的溶解性。 图3 样品量过载引起的拖尾 表3 反相HPLC常用缓冲液 三、固定相中的硅醇基与胺类相互作用引起的拖尾 原因：带正电荷的溶液（胺类）与固定相颗粒表面上的酸性硅醇发生了离子交换，引起二次保留(图 4)，常见于固定相具有显著的硅醇活性的的色谱柱，中性pH（6～8）条件下比酸性pH（<3）更易发生。酸性和中性的化合物一般不受影响，一些碱性化合物更易受到此效应的影响。 解决： 1、确认流动相中有合适的缓冲盐，可能的话尽量在pH<3的条件下操作（使硅胶固定相上的硅醇基质子化，减少溶质与硅醇反应的几率）。使用足够的缓冲液控制pH并减少离子交换效应。 在pH<3的条件下操作，可减少由图4 相互作用引起的峰拖尾，原理： 固定相表面的酸性硅醇基可以形成与碱性化合物反应的离子交换位点，经反相HPLC分离胺类化合物时，这种离子交换反应常常引起峰的保留（二次保留）和峰拖尾。 2、在流动相中加入竞争性的胺类，如：在流动相中加入三乙胺（TEA）（多数情况下，约10mM即可）。TEA可以与硅醇发生强的反应，并抑制样品中的胺类与硅醇反应。 如图5：向流动相中加入TEA用来提高峰形 1.苯丙醇胺 2.麻黄碱 3.苯丙胺 4.甲基苯丙 胺5. 苯三胺 色谱柱：Eclipse XDB-C8，4.6*150mm 流动相：85%25mMNa2HPO4，pH7.0，

改善反向液相色谱峰拖尾的方法修订稿

改善反向液相色谱峰拖 尾的方法 内部编号：（YUUT-TBBY-MMUT-URRUY-UOOY-DBUYI-0128）

分离碱性化合物、通过HPLC分析药物成分时是经常产生拖尾 峰拖尾可以引起分离度降低、灵敏度减弱、精密度和定量变差。（峰之间的分离度和灵敏度与峰拖尾成负相关；准确度和精密度因数据系统无法准确识别峰的起点和终点而受到影响） 峰拖尾原因及解决方案

图3 样品量过载引起的拖尾 表3 反相HPLC常用缓冲液 三、固定相中的硅醇基与胺类相互作用引起的拖尾 原因：带正电荷的溶液（胺类）与固定相颗粒表面上的酸性硅醇发生了离子交换，引起二次保留(图 4)，常见于固定相具有显着的硅醇活性的的色谱柱，中性pH（6～8）条件下比酸性pH（<3）更易发生。酸性和中性的化合物一般不受影响，一些碱性化合物更易受到此效应的影响。 解决： 1、确认流动相中有合适的缓冲盐，可能的话尽量在pH<3的条件下操作（使硅胶固定相上的硅醇基质子化，减少溶质与硅醇反应的几率）。使用足够的缓冲液控制pH并减少离子交换效应。 在pH<3的条件下操作，可减少由 图4相互作用引起的峰拖尾，原 理： 固定相表面的酸性硅醇基可以形成与碱性化合物反应的离子交换位点，经反相HPLC分离胺类化合物时，这种离子交换反应常常引起峰的保留（二次保留）和峰拖尾。 2、在流动相中加入竞争性的胺类，如：在流动相中加入三乙胺（TEA）（多数情况下，约10mM即

可）。TEA可以与硅醇发生强的反应，并抑制样品中的胺类与硅醇反应。 如图5：向流动相中加入TEA用来提高峰形 1.苯丙醇胺 2.麻黄碱 3.苯丙胺 4.甲基 苯丙胺5. 苯三胺 色谱柱：Eclipse XDB-C8， 4.6*150mm 流动相：85%25mMNa2HPO4， pH7.0，15%ACN 流速：1.0ml/min 温度：35℃ 样品：苯丙胺类 缺点：此法增加了分析方法复杂性并且改变色谱柱性质不易逆转。强度胺类（如三乙胺），不易从色谱柱上洗脱下来。既用过含有TEA的色谱柱就不再适合应用于流动相中不含TEA 的分析。 原理：三乙胺与硅醇强烈作用，减少了样品混合物中胺类与硅醇的作用，因此，使用三乙胺可以不用选择低硅醇活性的固定相。 反相HPLC色谱柱检测固定相硅醇活性的方法：根据阿米替林的对称性（峰拖尾），柱子对称性低则硅醇活性低。阿米替林在固定相中拖尾较低（对称值低），则固定相硅醇活性较低，并且检测碱性化合物时就会有较低的拖尾。图6根据测定阿米替林的对称性（即硅醇活性）排列了常用的C18反相色谱柱 色谱柱：4.6×150mm，5um 流动相：80%甲醇；20%0.05M磷酸盐缓冲液pH7 流速：2.0ml/min 温度：24℃ 样品：阿米替林 四、酸性化合物在硅胶上吸附引起的拖尾 原因：硅胶固定相的吸附。 解决：提高流动相中盐的浓度来抑制二次反应，降低流动相的pH使硅醇

液相色谱峰拖尾分析审批稿

液相色谱峰拖尾分析 YKK standardization office【 YKK5AB- YKK08- YKK2C- YKK18】

w液相色谱峰拖尾分析 从色谱柱分离机理角度 造成拖尾的原因多数是因为要分离的化合物是碱性的。硅胶表面的硅羟基pKa值是2-3，也就是当流动相的pH值大于这个值，硅羟基就会解离，这时这个氧带的外层电子对碱的 吸附是特别强的，很多人知道硅羟基对碱性物质吸附，解决办法：应选择封尾的柱子，但是即使封尾，不管工艺怎么好，都不会是100%能封住。那么就争取从pH值角度考虑，减小流动相pH，或者说加三乙胺，三乙胺容易被这个解离的硅羟基吸附，其实作用相当于对色谱柱封尾。 从流动相的角度 用甲醇做碱性物质要相对比乙腈好，因为甲醇含有-OH，多少能抑制硅羟基解离，加缓冲 盐的目的也是抑制硅羟基解离。所以说种种方法都是抑制硅羟基解离或竞争吸附，尽量减少解离的硅羟基对碱性物质的吸附。 前沿峰图 非常有可能是色谱柱的硅胶溶解造成的。前沿峰还有可能是由溶解性效应引起，就是溶解样品的溶液对样品的溶解性远大于流动相。现在市场上有种色谱柱经过表面处理之后残留的硅羟基pKa值能达到我不说哪家生产的，用这种柱子做你的流动相pH控制在以下拖尾的效果非常好，另外建议做碱性化合物时选择色谱柱尽量选择比表面积小，含碳量低些的色谱柱，效果会好。 A、峰拖尾 1、筛板阻塞(a、反冲色谱柱 b、更换进口筛板 c、更换色谱柱) 2、色谱柱塌陷(填充色谱柱) 3、干扰峰(a、使用更长的色谱柱 b、改变流动相或更换色谱柱) 4、流动相PH选择错误 (调整PH值。对于碱性化合物，低PH值更有利于得到对称峰) 5、样品与填料表面的溶化点发生反应(a、加入离子对试剂或碱性挥发性修饰剂b、换柱子) B、峰前延 1、柱温低(升高柱温) 2、样品溶剂选择不恰当 (使用流动相作为样品溶剂) 3、样品过载 (降低样品含量) 4、色谱柱损坏 (见A1、A2) C、峰分叉 1、保护柱或分析柱污染图 (取下保护柱再进行分析。如果必要更换保护柱。如果分析柱阻塞，拆下来清洗。如果问题仍然存在，可能是柱子被强保留物质污染，运用适当的再生措施。如果问题仍然存在，入口可能被阻塞，更换筛板或更换色谱柱。) 2、样品溶剂不溶于流动相 (改变样品溶剂。如果可能采取流动相作为样品溶剂。) D、峰变形 1、样品过载 (减少样品载量) E、早出的峰变形 1、样品溶剂选择不恰当 (a、减少进样体积 b、运用低极性样品溶剂) F、早出的峰拖尾程度大于晚出的峰 1、柱外效应(a、调整系统连接(使用更短、内径更小的管路) b、使用小体积的流通池) G、 K’增加时，脱尾更严重 1、二级保留效应，反相模式(a、加入三乙胺(或碱性样品)b、加入乙酸(或酸性样品)c、加入盐或缓冲剂(或离子化样品)d、更换一支柱子)

气相色谱分析常见峰形异变可能原因

气相色谱分析常见峰形异变可能原因 在日常色谱定量分析中，出现色谱峰形异变或鬼峰，不但严重影响定量精度，甚至使分析工作无法进行，为此我们把峰形异变常见类型（15种）加以分析，并给出可能原因，供工作经验不足的色谱工作者参考。我们在此讨论的峰形异变是指在色谱分析方法确定后，与曾经记录的已知色谱图比较时，出现某些色谱峰形的偏离畸变或多余峰。或者说，对于一已经设立好的色谱分析方法，由于不要求或出于无奈时有些峰分离不开、拖尾或峰形不对称等并不影响方法的实施情况，不属于上述因仪器故障、经验不足或操作失误造成的峰形异变。否则需要重新审定或修改原来的分析方法。另外，还应指出：由于无乱安装使用没有评价过的色谱柱可能出现的峰形拖尾，分离不好或峰形畸变，也不属于讨论内容。显然叫一个普通色谱分析工作者，在常规工作条件下去判断色谱柱的优劣，要求似乎高了一些。在怀疑峰形异变寻找可能原因、排除方法之前最好先做以下工作： l 仔细核查操作条件，与分析方法要求是否一致； l 和当初分析所存的标准色谱图对照，判断是否真出了问题； l 逐项仔细观察仪器或设备工作状态，看有无操作失误而引起的出峰失常。 l 然后在依据以下15种异常峰形分析可能原因与排除方法。 1．台阶峰： （1）TCD热丝被样品中所含卤素、氧、硫等元素腐蚀； （2）气体流量突变如：注射垫突然漏气，气路受阻等； （3）记录色谱峰装置故障如：拉线松； 2．负峰： （1）TCD用氮做载气，由于待测组分在N2中浓度不同，热传导值呈现非线性而可能出现负峰,有时可以通过改变载气流量或进样量克服； （2）操作ECD时进样量过大而出负峰，这是由于工作原理由电子捕获转变为电离检测，此时灵敏度还会大大降低； （3）操作FID，低电离效率的溶剂（如CS2）或杂质出现，使原基流较高的输出基线减小而显示为负峰； （4）操作FID，在无极化电压，样品量较大可能出现负峰；

反相色谱峰形拖尾的原因和改善方法(英文)

Correcting Peak Tailing Problems in Reversed Phase HPLC Peak tailing in reversed phase HPLC continues to be a common complaint. It is particularly prevalent when separating basic compounds and, therefore, a source of constant problems to those analyzing pharmaceutical compounds by HPLC. Peak tailing causes a number of problems, including lower resolution, reduced sensitivity, and poorer precision and quantitation. Figure 1 illustrates how resolution between peaks and sample sensitivity is negatively affected by peak tailing. Figure 2 illustrates how accuracy and precision of an analysis can suffer because of the inability of data systems to identify exactly where a tailing peak begins and ends.

气相峰拖尾的因素

最近看到好多色友发帖，都提到峰拖尾的现象，因为拖尾的原因很多，只有正确的找到原因才能处理得当，恢复正常。 原因好多，总结如下！: 色谱拖尾原因及解决办法 1、当经历维修色谱问题（色谱峰拖尾、灵敏度降低、保留时间改变等）时， 切去色谱柱前端的1/2 到1 米。必要时，更换进样口内衬管、隔垫， 并清洗进样口。保护柱可用于提高色谱柱的使用寿命。（气相） 2、衬管脱活 进样口衬管上的活性点可以吸附样品组分并导致出现拖尾峰，并可能损失灵敏度和重现性。用脱活制剂用来覆盖衬管玻璃表面的活性点或与之发生反应。脱活程序进行脱活，该程序可以使衬管重现性高、惰性好，且使用寿命长。对于不分流的应用，或者在必须分析极性很弱的化合物时，应当使用脱活的衬管。 即使使用脱活的衬管开始也会表现出活性，当这种情况发生时，应当更换衬管。可以清洁衬管以除去颗粒物或用溶剂冲洗衬管以除去挥发性较低的组分。但是，选择合适的衬管清洗程序可能较为困难。某些溶剂可能会除去脱活层，并且工具可能会划伤衬管的玻璃表面，从而导致出现多余的活性点。新的衬管几乎总比已清洁过并且重新脱活的衬管表现优异- 尤其对于痕量分析。 3、色谱柱、进样口衬管或被污染的金属进样口密封垫所吸收的样品组分使用新的脱活的衬管或清洗旧衬管并更换玻璃毛。进样针针头撞击，进样口衬管内的填充物破碎。从衬管中取出部分填充物，或使用无填充的衬管。色谱柱末端切口不整齐（样品吸附于此）卸下色谱柱。使用安全的毛细管熔融石英切割工具（例如陶瓷片或色谱柱切割器）将色谱柱切成垂直的齐口，然后重新装入色谱柱。断裂或破碎的进样口衬管确保进样口中的总流速为40 ml/min以上。 4、色谱柱在进样口中的位置不正确，可能载气流路存在密封垫的颗粒。 5、一支色谱柱上不能装入超过2-3 个接头。多个接头会造成死体积（拖尾峰）问题。 6、超出色谱柱的温度上限会造成固定相和管表面的加速损坏。这样会造成色谱柱的过分流失，活性组分形成拖尾，以及/或降低柱效（分离度）。幸好热损坏

改善反向液相色谱峰拖尾的方法

改善反向液相色谱峰拖尾的方法 改善反相HPLC中的峰拖尾一、溶解样品的溶剂极性强于流动相引起的拖尾现象: 1、先流出的峰的拖尾较后流出的峰拖尾严重; 分离碱性化合物、通过HPLC分析药物成分时是经常产生拖尾 2、进样量减少或样品经流动相稀释后进样峰拖尾情况减轻。峰拖尾可以引起分离度降低、灵敏度减弱、精密度和定量变差。(峰 之间的分离度和灵敏度与峰拖尾成负相关;准确度和精密度因数据系 二、由样品量(进样量超过柱子容量)过载引起的峰拖尾统无法准确识别峰的起点和终点而受到影响) 现象: 峰拖尾原因及解决方案 1、样品峰呈现直角三角形，当更多的样品量注入时，峰前端变尖、 编号原因解决方案后端拖尾更严重。 2、色谱柱过载后，保留时间随样品量的增加而提前。(见图3) 样品溶剂在流动相中溶解样品，或者将样品经解决方案:减少进样量一极性强于流流动相稀释至进样后峰拖尾符合要求，动相总之尽可能降低样品溶剂的强度柱直径(mm)参考最大样品样品量过减少进样量，参考表2中推荐的不同ID 量(mg) 二载柱型对应的不同进样体积 10 35-65 1.调节流动相的pH<3.0。 4.6 4.5-9.0 2.增加流动相的离子强度，25mM,3.0 2.0-4.0 50mM。表2 HPLC色谱柱的直径、参考的最大进样量、进样量的范围硅醇基与 因为实际进样量依赖于柱子的填料(具有高的表面积的填充材料三胺类物质的3.流动相中增加竞争性的胺类，10mM

可以具有大的进样量)，分析物质(分子量大的进样量要少)，和其他结合的TEA(三乙胺)。 的因素比如样品在流动相中的溶解性。 4.选择低硅醇活性的固定相。参照图6 C18柱按固定相硅醇活性分级。 1.增加流动相中盐的浓度，25mM, 50mM。酸性物质四在硅胶上的2.调节流动相的pH<3.0 吸附 3.增加竞争性 的有机酸，1%醋酸或者是0.1%TFA(三氟乙酸) 更换新的色谱柱五柱子空隙尝 试填充空隙很少能达到较好的效果。 图3 样品量过载引起的拖尾三、固定相中的硅醇基与胺类相互作用引起的拖尾 原因:带正电荷的溶液(胺类)与固定相颗粒表面上的酸性硅醇 发生了离子交换，引起二次保留(图 4)，常见于固定相具有显著的硅醇 活性的的色谱柱，中性pH(6,8)条件下比酸性pH(<3)更易发生。 酸性和中性的化合物一般不受影响，一些碱性化合物更易受到此效应 的影响。 解决:

色谱峰的前沿与拖尾问题

1.产生前沿和拖尾的原因一般有哪些？ 拖尾：1 干扰峰，优化条件分离2 色谱柱塌陷，更换色谱柱3 流动相pH不合适，调节pH值 4 管路没有接好，存在较大的死体积，可以重新接一下 前沿：1 溶剂选择不合适，选择合适的溶剂2 样品过载，降低进样量3 柱温太低，升高柱温 4 色谱柱损坏，更换色谱柱 5 干扰峰，优化色谱条件分离 可能的问题：1.柱子问题2.流动相不恰当3.定容样品的溶剂不合适 产生峰前沿的原因：柱过载，柱头塌陷，溶剂选择不对 产生峰拖尾的原因：存在杂质未分开，柱污染，柱子选择不对。 拖尾峰与柱子有关，可能是过载，稀释样品再做，或换新柱做吧 一般产生托尾峰往往是有机性相近杂质没有分开，可以优化分析方法，或更换柱子试一试；也可能由于柱子使用时间太久柱效下降出现塌陷等原因；再有也会根样品本身性质有关，基团需要流动相中添加能与之结合优化峰形的化学物质，要根据具体情况而定。柱子可能污染了吧，溶剂也可能有，或柱效下降。 图谱前沿和拖尾的原因主要是流动相选择不合适，可以相应调整流动相的极性，或者适当加入酸来调整，可以得到较好的改善。一般来讲，酸碱在流动相中对于前沿和拖尾影响较大。 柱前沿是可能因为柱超载，拖尾是可能因为样品被污染，选择合适的流动相，调节好PH能够改善这以情况。 液相拖尾峰出现原因及解决办法：1.柱头有空隙。解决办法：使用填料或玻璃珠填充柱顶部。2.柱上样品超载。解决办法：使用更高负载量的固定相。增加色谱柱内径、减少样品量。3.单峰- 存在干扰性组分。解决办法：净化样品；预分离。4.存在未扫的死体积。解决办法：减少接头的数量、确保进样器密封垫紧密、确保接头正确固定。5.碱性化合物- 硅醇相互作用。解决办法：换成聚合物固定相。6.碱性基质- 硅醇相互作用。解决办法：使用更强的流动相或添加竞争碱（例如，三甲胺）。7.硅胶基- 柱降解。解决办法：使用特种色谱柱；聚合物柱或空间位阻。8.溶剂相极性不匹配。较早流出的峰或靠近溶剂前沿的峰更容易出现拖尾，解决办法：改变样品溶剂。另外，为减少拖尾，可以选择设计优良的封端色谱柱，且使用象三乙胺（TEA，较少需要）等添加剂，或使用“极性”键合相。 峰拖尾可能的原因: 解决方法 1.柱超载:降低样品量,增加柱直径采用较高容量的固定相 2.峰干扰:清洁样品,调整流动相 3.硅羟基作用加三乙胺,用碱致钝化柱增加缓冲液或盐的浓度降低流动相PH值,钝化样品 4.柱内烧结不锈钢失效:更换烧结不锈钢,加在线过滤器,过滤样品 5.柱塌陷或形成短路通道: 更换色谱柱,采用较弱腐蚀性条件 6.死体积或柱外体积过大: 连接点降至最低,对所有连接点作合适调整,尽可能采用细内径的连接管 7.柱效下降:用较低腐蚀条件,更换柱,采用保护柱。 可能两种情况：1.柱效低，需老化或用甲醇冲洗。2.有杂质峰 在条件（流动相、固定相、温度和压力等）一定，样品浓度很低时（Cs、Cm很小）时，K只取决于组分的性质，而