高速逆流色谱法分离纯化环孢菌素
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紫茎泽兰致病型链格孢菌毒素(TeA)在病原体侵染寄主过程中的作用机制研究
紫茎泽兰致病型链格孢菌毒素（TeA）在病原体侵染寄主过程中 的作用机制研究 链格孢菌(Alternaria alternata(Fr.)Keissler)是自然界三大致病植物真菌之一。来自外来恶性杂草紫茎泽兰(Ageratina adenophora)致病型链格孢菌能够产生一种毒素——细交链格孢菌酮酸(TeA),该毒素在较低的浓度下能够迅速杀死紫茎泽兰以及其它多数单双子叶杂草,具有开发成生物除草剂的潜力。 TeA杀草的主要机理是与光系统Ⅱ的D1蛋白结合,抑制光系统Ⅱ受体侧QA 到QB之间光合电子的传递,引起过能量化,导致在叶绿体中活性氧爆发,引起叶绿体结构破坏,大量活性氧扩散到整个细胞中,进一步引起膜脂过氧化、细胞膜破裂、细胞器解体、细胞核浓缩和DNA断裂,导致细胞死亡和组织坏死,最终杀死杂草。本研究利用通过限制性内切酶介导整合法(REMI)获得的弱毒突变体001和野生型为研究材料来阐明TeA在病原体入侵寄主叶片阶段的作用机理。 利用野生型和缺毒突变体(菌丝体)为材料接种寄主紫茎泽兰叶片,突变体接种时结合加入TeA.研究结果表明TeA是链格孢菌病原体侵染寄主引起病害的主要毒理因子。来自Imaging-PAM结果显示:野生型菌丝接种寄主紫茎泽兰叶片1 8h后,植物的PSII活性降低,36小时,病害开始出现;而对应时间下,突变体菌丝处理紫茎泽兰叶片并没有引起明显的PSII活性降低和病害出现,但在突变体菌丝中加入一定浓度的TeA后可以得到与野生型相似的结果,突变体的致病能力得到一定程度的恢复。 同时,添加毒素也能恢复部分突变体菌丝扩展的能力。通过监测孢子萌发和生长、附着胞形成与否、菌丝在细胞和叶片中生长和扩散情况、病斑产生情况,发现毒素在病原体侵入叶片组织和菌丝扩张、病害的发展过程中都发挥作用,是
空心莲子草致病菌假隔链格孢菌原生质体的制备与再生
第41卷第2期2014年4月 植物保护学报 ACTA PHYTOPHYLACICA SINICA Vol．41No．2Apr．2014 基金项目：安徽省农业科学院院长青年创新基金项目（12B1122） 作者简介：周凤艳，女，1982年生，助理研究员，研究方向为杂草抗性机制与生物防治，E-mail ：zhoufy1982@163．com 收稿日期：2013－09－03 空心莲子草致病菌假隔链格孢菌原生 质体的制备与再生 周凤艳 1 张勇 1 周振荣 2 刘小林 1 （1．安徽省农业科学院，植物保护与农产品质量安全研究所，合肥230031； 2．当涂县农业技术推广中心，安徽当涂243100） 摘要：为建立空心莲子草致病菌假隔链格孢菌Nimbya alternantherae 的原生质体提取体系，以其强致病性野生型菌株N．alternantherae 11-2为供试菌株，研究了不同菌龄、酶系统、酶解时间及稳渗剂等对假隔链格孢菌原生质体制备及再生的影响，并采用聚乙二醇PEG 介导转化法，构建了随机插入突变体库。结果表明，在酵母浸出粉胨葡萄糖液体培养基中培养2d 的假隔链格孢菌丝体，以0.7M 山梨醇为稳渗剂，同时使用2%裂解酶、2%崩溃酶和2%蜗牛酶3种酶的混合液，在30?下酶解3h 能获得足量的原生质体，且其再生率也可满足后继转化试验的要求。 关键词：假隔链格孢菌；原生质体；突变体 Preparation and regeneration of protoplasts for alligator weed pathogen Nimbya alternantherae Zhou Fengyan 1 Zhang Yong 1 Zhou Zhenrong 2 Liu Xiaolin 1 （1．Institute of Plant Protection and Aro-Product Safety ，Anhui Academy of Agricultural Sciences ， Hefei 230031，Anhui Province ，China ；2．Dangtu County Agriculture Technology and Popularization Center ，Dangtu 243100，Anhui Province ，China ） Abstract ：Nimbya alternantherae is a pathogenic fungus of the invasive alligator weed ，Alternanthera philoxeroides （Mart．）Griseb．In this study ，a highly pathogenic and wild-type strain of N．alternantherae 11-2was selected to establish a protoplast extraction system．The influences of age ，enzyme system ，enzymolysis time and osmotic stabilizer on the preparation and regeneration of fungal protoplasts were examined．In addition ，the polyethylene glycol-mediated transformation method was used to establish a randomly inserted mutant library．The results showed that sufficient protoplasts could be produced when N．alternantherae hyphostroma were cultivated in a liquid medium of yeast extract peptone dextrose for 2days and then underwent 3hours of enzymolysis at 30?，with 0．7M sorbierite as the osmotic stabilizer along with a mixture of 2%lyase ，2%driselase ，and 2%snailase．Furthermore ，the regeneration rate of N．alternantherae protoplasts could also meet the requirements of subsequent transformation experiments．Key words ：Nimbya alternantherae ；protoplast ；mutant 空心莲子草Alternanthera philoxeroides 因其具有繁殖迅速、适应性强等特点，于20世纪50年代被引 入我国江苏和浙江等地作为牲畜饲料植物栽培，随 后相继传入全国各地并引起草害，与农作物争夺水
高速逆流色谱的应用与发展
高速逆流色谱的应用与发展 （内部交流） 欧阳藩 顾铭 中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室 国家生化工程技术研究中心 2007年6月1日 从重液滴通过另一液体滴落，溶质在两相中间实现分配的原理出发，进行设备与过程的研发转变，20世纪60年代发明了连续液/液的高速逆流色谱（High-speed Countercurrent Chromatography，HSCCC）技术，目前已广泛应用于生物、医药、天然产物、环境分析、食品等领域的分离、分析和用于质控的指纹图谱的制定工作。从本次会议的论文亦可见，主要利用有机/水两相系统分离和纯化天然药物制备高纯度的药用成分标准品或参照物和探索建立中药材和中药方剂指纹图谱快速简便的质控新方法。从化学工程原理主要而言还是利用目标产物在两不相互溶的液相中的分配实现分离和纯化。 本文将从化学工程原理和技术角度讨论高速逆流色谱的应用与发展，供参考： 一、设备和装置的结构与规模的多样化、系列化、自动化 最早利用溶质在互不混溶的液/液两相分配原理设计了逆流分配装置，将许多试管式的部件安装在一个能转动的台架上，以半自动方式使试管部件及其中两相溶液同时振摇，静置分层，转移传递。 基于对流体与传递原理的分析研究发展逆流色谱设备，设备在不断地创新，主要有两大类。 一是基于流体静力学平衡的体系，有液滴逆流色谱（DCCC）、回转腔式逆流色谱仪（RLCCC）、旋转腔式逆流色谱（GLCCC）和固定螺旋管式逆流色谱仪（HCCC）等。 二是基于流体动力学平衡的体系，与上述差别是螺管绕自身轴线运动，分为非行星式、非同步式和同步式三大类，已开发出了多种形式的离心式逆流色谱设
番茄对AAL-toxin和链格孢菌抗性的调控机制研究
番茄对AAL-toxin和链格孢菌抗性的调控机制研究腐马素(fumonisin)和AAL-toxins是一种神经鞘脂类似类真菌毒素(sphinganineanalogymycotoxins,SAMTs),它们通过竞争性抑制神经酰胺合成酶,使植物细胞中神经鞘氨醇的含量上升,从而诱发细胞程序性死亡(programmed cell death,PCD)。腐马素能够提高镰刀菌属真菌对玉米等粮食作物的致病性,而AAL-toxins是番茄链格孢菌(Alternaria alternata f.sp.lycopersicp.AAL)的致病因子,除此之外,两者对动物和人的健康造成严重威胁。 因此研究植物对SAMT及其产毒病原菌的抗性机理,挖掘调控该过程的关键基因,不仅有助于加深对植物防御体系的理解,而且为通过遗传工程手段提高植物对SAMT产毒菌的抗性,减少农业中SAMT的污染奠定基础。本研究在克隆拟南芥FB1(fumonisin B1)抗性基因Fumonisin B1resistant 41(FBR41)的基础上,进一步探究FBR41在拟南芥和番茄中防御SAMT的作用及其机理,以及在番茄中对产毒菌AAL的抗性机制;同时,首次探究了植物激素油菜素甾醇(brassinosteroid,BR)信号转导途径在番茄对AAL-toxin及AAL抗性中的作用。 主要研究结果如下:1、拟南芥突变体fbr41在FB1处理后,没有出现明显的PCD表型。FBR41突变位点发生在拟南芥SPT(serine palmitoyltransferase)的LCB2b(long chainbase 2b)亚基上。 通过对FBR41和AtLCB2b氨基酸序列的比对发现,FBR41上缺少SPT必需的赖氨酸催化位点;荧光素酶互补实验证明,FBR41可以与AtLCB1亚基结合;进一步对SPT下游产物神经鞘氨醇的含量进行分析发现,在FB1的处理下,fbr41中神经鞘氨醇的含量明显减少,而神经鞘氨醇对于诱导PCD具有重要的作用。由以上结果可知,FBR41可能通过影响SPT的功能,缓解FB1诱导的神经鞘氨醇的积累,从
微生物降解霉菌毒素的研究进展
微生物降解霉菌毒素的研究进展 张高娜*，张建梅，谷巍 （山东宝来利来生物工程股份有限公司，山东泰安271000）摘要：霉菌毒素（mycotoxin）是霉菌在生长过程中产生的次级代谢产物，具有高毒性和强致癌性，对畜牧业生产造成严重的危害。本文就畜牧生产过程中常见的几种霉菌毒素的种类、毒性机理及生物脱毒等方面作一综述。 关键词：霉菌毒素；微生物；生物降解；毒性机理 Research Progress on microbial degradation of the mycotoxin Zhang Gao-na Zhang Jian-mei Gu Wei (Bora Lee Shandong to bio-engineering Co., Ltd., Tai'an, Shandong, 271000) Abstract: Mycotoxin are fungal secondary metabolites produced in the process of growth, highly toxic and carcinogenic, caused serious harm to the livestock production. In this paper, livestock production process of several common species of mycotoxins, toxic mechanism and biological detoxification of reviewed. Key words: mycotoxin; microorganism; biodegradation; toxic mechanism 1.引言 霉菌毒素是由霉菌产生的次生代谢产物，分子量在几百到几千道尔顿，没有抗性，但有热稳定性，不因加热而被破坏。因物理和化学的去毒方法存在一些弊端，故生物降解法作为一种安全、高效、环保的方法倍受畜牧生产者的关注。霉菌种类繁多，其有毒代谢物也具有多样性，现已知的霉菌毒素就有200多种。本文就在动物生产过程中，常见霉菌毒素的种类、毒性机理及生物脱毒等方面进行了综述。 2. 霉菌毒素的种类、结构特征和产生条件 2.1霉菌毒素的种类 霉菌毒素是霉菌在生长过程中产生的次级代谢产物，特别是曲霉菌、镰刀霉、青霉菌、链格孢菌等真菌产生。这些霉菌毒素是由几百种化学成分不同的有毒化合物组成，目前已发现有33属164种霉菌产生200多种霉菌毒素[1]，其中最常见的霉菌毒素有黄曲霉毒素、赭曲霉毒素A、单端孢霉烯、玉米赤霉烯酮和伏马菌素。 作者简介：张高娜（1984—），女，汉族，河南正阳人，硕士主要研究方向：单胃动物营养、环境与生产通讯地址：山东省泰安市宝来利来生物工程股份有限公司研究院山东泰安 271000 作者邮箱：gaona52@https://www.wendangku.net/doc/8811087741.html,
链格孢菌产毒菌株及产毒培养基的筛选
第19卷第3期湖北民族学院学报(自然科学版)V ol.19 N o.3 2001年8月 Journal of Hubei Institute for Nationalities(Nat.Sci.) Aug.2001 文章编号:1008-8423(2001)03-0007-04 链格孢菌产毒菌株及产毒培养基的筛选 万佐玺1,周光来2,强 胜1 (1.南京农业大学植物科学系,江苏南京210095; 2.湖北民族学院园艺系,湖北恩施445000) 摘要:对紫茎泽兰(Eupatoriun adenophorum Spreng.)的自然致病菌-链格孢菌(Alternaria alternata(Fr.) K eissler)的6个菌株501、402、503、LS、Y N、AW的产毒能力进行了比较研究,选出501菌株产毒能力最 强;同时对501菌株的产毒培养条件进行了研究.结果表明:小麦培养基(水的质量分数40%)和PSK培 养基分别可以作为产毒的固体和液体培养基. 关键词:链格孢菌;产毒能力;产毒培养基;筛选 中图分类号:S497 文献标识码:A 紫茎泽兰(Eupatoriun adenophorum S preng.)是一种世界性恶性杂草,现已危害世界30多个国家和地区,寻求防除紫茎泽兰的有效措施成为世界范围关注的问题[1,2].由于紫茎泽兰是一种环境性杂草,生境十分复杂,难以用人工和化学的方法加以控制,生物防除成为理想的选择[3-5].链格孢菌(Alternaria alternata(Fr.) K eissler)是紫茎泽兰的自然致病菌,有潜力发展成为防除紫茎泽兰的真菌除草剂[6].链格孢菌引起紫茎泽兰致病与其产生的毒素有关[7].因此,筛选产毒能力强的菌株作为生防真菌是非常重要的.另外,菌株的产毒能力与其培养条件关系很大,尤其是培养基的选择[8,9].为此,作者对链格孢菌的6个菌株501、402、503、LS、Y N、AW的产毒能力进行了比较分析,并对产毒培养条件进行了研究. 1 材料与方法 1.1 材料 供试菌株:501、402、LS、Y N、503、AW. 供试植物:紫茎泽兰种子采自云南省昆明市;紫茎泽兰幼苗为培养2周的子叶期幼苗;紫茎泽兰成株为培养5个月的突生菌. 1.2 方法 1.2.1 菌株培养方法、无菌滤液的制备、无菌滤液和粗毒素的生测方法参见文献[10]. 1.2.2 产毒菌株的筛选 对501、402、503、LS、Y N、AW等6个菌株按1.2.1方法培养后,用4层纱布过滤,将菌丝洗净,于80℃下烘干,称重;以滤液制备无菌滤液,用种子萌发抑制法、幼苗浸渍法、离体叶片针刺法进行生测,对6个菌株的产毒能力分析比较.CK0用无菌水,CK1用无菌处理的PSK,重复3次. 1.2.3 产毒培养条件的设置 1.2.3.1 固体培养基的筛选 以大米、小麦、玉米、大豆等材料作培养基,培养501菌株,然后制备粗毒素,比较产毒差异.具体方法是:将上述4种材料各称取100g,装入500ml的三角瓶中,用清水淘净后,再浸泡10h,除去多余水分,置于灭菌锅中灭菌30min(121℃),冷却后接种501菌株,于25℃、12h L(光照)/12hD(黑暗)的条件下培养,每天摇动1 -2次三角瓶,避免结块,3周后取出培养物,80℃下烘干、粉碎,然后用乙酸乙酯萃取3次,合并乙酸乙脂相, 收稿日期:2001-03-06. 基金项目:农业部九五高技术和基础研究项目(960205);国家教委博士点基金资助(02-03-031). 作者简介:万佐玺(1968-),男(土家族),湖北建始人,硕士,讲师,主要从事生物防治研究,现在湖北民族学院园艺系任教.
高速逆流色谱技术应用现状
高速逆流色谱技术应用现状 Application actuality of high-speed countercurrent chromatography (HSCCC) 刘迪1陈雪峰1宋晓宇2 LIU Di1CHEN Xue-feng1SONG Xiao-yu2 (1.陕西科技大学生命科学与工程学院,陕西咸阳712081；2.陕西海升果业发展 股份有限公司,陕西咸阳713300) (1.Department of Life Science and Engineering,Shaanxi University of Science and Technology,Shaanxi,Xianyang712081,China；2.Shaanxi Haisheng Fresh Juice Co.Ltd,Shaanxi,Xianyang713300，China) 摘要：综述了高速逆流色谱技术(HSCCC)原理及特点，溶剂体系的选择，影响分离效果的因素，与之相联的检测技术及其应用现状。 关键词：高速逆流色谱(HSCCC)；溶剂体系；分离；检测；应用 Abstract:This paper reviews the principle,characteristic,choice of two-phase solvent systems,factors of effecting separetion impact,checking and measuring technology coupled with HSCCC forhigh-speed countercurrent chromatography(HSCCC)。The application of HSCCC is also introduced.At last，this article discusses the expectation of HSCCC. Keywords:High-speed countercurrent chromatography(HSCCC)；Two-phase solvent systems；Separation；Checking and measuring；Application 在互不相溶的溶剂中溶质可以有不同的分配系数，根据此原理，产生了逆流色谱技术。逆流色谱从产生至今，经过不断的发展与完善，逆流色谱技术和设备都已趋近于成熟。至今，已出现了高速逆流色谱技术(high-speed countercurrent chromatography，HSCCC)，它是逆流色谱技术经历了近60年发展的结果。高速逆流色谱技术(HSCCC)最早的研制应用者是美国国立卫生院Ito博士[1]，最初它是用来进行制备分离的。近几年，人们对健康的认识越来越深刻，更多的人追求天然绿色的健康理念，故HSCCC作为一种对提取物污染小的制备技术，它的应用越来越受到了人们的关注。目前，HSCCC已从制备型发展到了分析型，甚至是微量分析型，应用范围也十分广泛[2]。高速逆流色谱技术在我国的应用较早，技术水平在国际领域也处于领先地位。目前，我国是世界上为数不多的高速逆流色谱仪生产国之一。我国的深圳同田生化技术有限公司是全球第一家多分离柱高速逆流色谱仪专业生产企业。公司拥有自主知识产权的高速逆流色谱专利技术，现已研制并生产出TBE系列分析型，半制备型TBE-300、300A，制备型TBE-1000高速逆流色谱仪设备。 本文就高速逆流色谱技术的原理及特点、溶剂体系的选择、影响提取效果的因素、与之相联的检测技术以及其应用现状，做简单的综述。 1原理及特点 ————————— 基金项目：广东佛山市科技局攻关项目（03080011），陕西科技大学B类科研创新团队资助。 作者简介：刘迪(1980-)，女，陕西科技大学生命科学与工程学院在读研究生。 E-mail:didi19801210@https://www.wendangku.net/doc/8811087741.html, 收稿日期：2005-12-21
侵染性病害菌类
第二节侵染性病害 一. 病源微生物(Pathogen) （一）真菌 1. 鞭毛菌亚门 (1)疫霉属(Phytophthora de Bary) 特征：土壤传染 症状：产品病部开始出现水渍状，局部变色，然后扩展使整个瓜果腐烂，长出白霉状物。 (2) 霜疫霉属(Peronophythora) 特征：土壤传染，高温高湿易发病，低温可控制发病。 症状：果蒂开始出现不规则，无明显边缘的褐色病斑，潮湿时长出白色霉层，病斑扩展迅速，全果变褐，果肉发酸成浆，溢出褐水。 2. 接合菌亚门 (1) 根霉属(Rhizopus Ehrenb. Ex. Corda) 特征：病菌通过伤口或自然开孔入侵，低温可抑制病害发生。 症状：开始表现为水渍状圆形小斑，逐渐变成褐色，病斑表面长出蓬松发达的灰白色菌丝体，有匍匐丝(stonlon)和假根(rhizoid)。病部组织软化，易破，有酸味。 (2) 毛霉属(Mucor Mich.Ex.Fr.) 特征：病菌通过伤口入侵，低温下也可发生。 症状：病果表皮变成深褐色，焦干状，病斑下的果肉变成灰白或褐色，逐渐变软和水化，但没有臭味。 3. 子囊菌亚门 (1) 核盘菌属(Sclerotinia Fuck.) 特征：潜伏期长，低温下仍可发生，并可通过腐烂果实接触传染。 症状：病部组织出现水渍状褐色病斑，上面长出棉絮状的白色菌丝，并出现黑色的菌核，病部组织变软，汁液外流，无臭味。 (2) 链核盘菌属(Monilinia Honey) 特征：低温下仍可传染，并可通过腐烂果实接触传染。 症状：果实受害初期病部为浅褐色软腐状小斑，数日内迅速扩大及全果，果肉松软，病斑表面长出灰褐色绒状菌丝，上面产生褐色或灰白色孢子，呈同心圆的轮纹状排列。 4. 半知菌亚门 （1）交链孢菌属 特征：通过伤口或自然开孔入侵，潜伏期长。 症状：黑腐病、黑心病等、瓜果上病部呈褐色圆斑，稍凹陷，外有淡褐色晕环，逐渐扩大变黑，病斑上有黑褐色霉状物，果肉变黑，坏死，海绵状。 （2）葡萄孢霉属
高速逆流色谱
高速逆流色谱及其应用 王莉 (贵州大学化学与化工学院，贵阳，550003) 摘要：高速逆流色谱是近年发展起来的，不使用固定相载体的新型液液逆流色谱。本文介绍了高速逆流色谱的工作原理，HSCCC在的分离方面具有很大的优势，具有非常广阔的应用前景。本文主要综述了HSCCC在天然产物、生物医药和其他方面的应用情况。 关键词：高速逆流色谱；天然产物；分离；应用 Application of High Speed Countercurrent Chromatography WANG Li （School of Chemical Engineering，Guizhou University，Guiyang 550003，China） Abstract:The high-speed countercurrent chromatography (HSCCC) is developing in recent year which without fixed carrier. The work principle，characteristics of HSCCC were introduced in this paper，which summarized the application and purification of HSCCC on the natural product，biomedicine and so on，especially the application on the fields of purification and isolation natural product． Key words: HSCCC; natural product; isolation; application 引言 高速逆流色谱（high-speed countercurrent chromatography，HSCCC）是20世纪80年代发展起来的一种连续高效的液-液分配色谱分离技术，它不用任何固态的支撑物或载体。它利用两相溶剂体系在高速旋转的螺旋管内建立起一种特殊的单向性流体动力学平衡，当其中一相作为固定相，另一相作为流动相，在连续洗脱的过程中能保留大量固定相。 由于不需要固体支撑体，物质的分离依据其在两相中分配系数的不同而实现，因而避免了因不可逆吸附而引起的样品损失、失活、变性等，不仅使样品能够全部回收，回收的样品更能反映其本来的特性，特别适合于天然生物活性成分的分离。而且由于被分离物质与液态固定相之间能够充分接触，使得样品的制备量大大提高，是一种理想的制备分离手段。 它相对于传统的固-液柱色谱技术，具有适用范围广、操作灵活、高效、快速、制备量大、费用低等优点。目前HSCCC技术正在发展成为一种备受关注的新型分离纯化技术，已经广泛应用于生物医药、天然产物、食品和化妆品等领域，特别在天然产物行业中已被认为是一种有效的新型分离技术；适合于中小分子类物质的分离纯化。 1 高速逆流色谱原理 高速逆流色谱是建立在一种特殊的流体动力学平衡的基础上，利用螺旋管的高速行星式运动产生的不对称离心力，使互不相溶的两相不断混合，同时保留其中的一相(固定相)，利用恒流泵连续输入另一相(流动相)，此时在螺旋柱中任何一部分，两相溶剂反复进行着混合和静置的分配过程。流动相不断穿过固定相，随流动相进入螺旋柱的溶质在两相之间反复分配，按分配系数的大小次序被依次洗脱。高速逆流色谱仪器的装置如图1所示，它的公转轴水平设置，螺旋管柱距公转轴R处安装，两轴线平行。通过齿轮传动，使螺旋管柱实现在绕仪器中心轴线公转的同时，绕自转轴作相同方向相同角速度的自转。
高速逆流色谱法的概况及应用
高速逆流色谱法的概况及应用 高速逆流色谱( High-Speed Countercurrent Chromatography，HSCCC) 是Yoichiro Ito 博士于二十世纪八十年代首先研发、应用并发展起来的一种新型液-液分配色谱技术；HSCCC运用同步多层螺旋管进行行星式离心运动，使得在互不相溶的两相溶剂系统中可以实现样品在短时间内的高效分离，从而制备样品[1,2]。高速逆流色谱技术不需要固体支撑物，主要根据样品在两相中所具有的不同分配系数进而对样品进行分离，相对于其他色谱技术如高效液相色谱、柱色谱等来说，具有高回收率、无吸附损耗、无峰拖尾等优点。 1、HSCCC法概况 1.1 HSCCC法的基本原理 HSCCC属于液 -液分配色谱，所以其基本分离原理与其他同类色谱技术相同，即利用物质在两相间分配系数的差别进行分配。而 HSCCC将两溶剂的分配体系置于高速旋转的螺旋管内 ,建立起一种单向性流体动力平衡体系。螺旋管的运动形式，是在自身自转的基础上，同时绕一公转轴旋转，成行星运动[3]。这样 ,加在分配体系上的离心力场不断发生变化，使两相溶剂充分的混合和分配，从而达到洗脱分离目的。HSCCC技术已经广泛应用于天然产物的分离。 1.2 溶剂系统的选择 利用 HSCCC分离物质的关键是溶剂系统的选择。经查阅多篇文献，总结要点如下。对用于 HSCCC分离的溶剂体系，应该满足这几方面的要求：1)不造成样品的分解与变性；2)足够高的样品溶解度；3)样品在系统中有合适的分配系数值；4)固定相能实现足够高的保留[4]。 而对于溶剂体系选择的原则，Ito博士本人总结的几个要点是这样描的：1)待分析组分应易溶于溶剂系统 ,并不与之发生反应；2)溶剂体系的各组分应分成体积比例适合的两相，以免浪费溶剂；3)组分在溶剂系统中的分配系数 K应为适当的定值 (0.5≤K≤1)；4)固定相的保留值要满足一定要求 (保留值越大峰形越好 )。 溶剂系统的一般选择方法：HSCCC是利用溶质在不同溶剂中的分配进行分离的，所以在溶剂选择时要重点考虑溶质在两溶剂中的分配系数。因而准确测定
链格孢菌AL14代谢产物抗TMV活性研究
链格孢菌AL14代谢产物抗TMV活性研究 从植物内生真菌的次级代谢产物中分离具有抗植物病毒活性的化合物是研 究天然抗植物病毒剂的有效途径。本文运用常规柱层析的分离方法从链格孢菌（Alternaria alternata）的代谢产物中分离出单体化合物,根据化合物的核磁共振谱（NMR）鉴定其结构,采用半叶枯斑法和叶圆片法测试了化合物的抗烟草花 叶病毒（Tobacco mosaic virus,TMV）活性。 现将研究结果总结如下:对分离自臭椿的内生真菌链格孢菌（Alternaria alternata）AL14进行液体发酵,利用常规柱色谱方法从其次级代谢产物中分离 到15个化合物,通过解析其NMR谱(1H NMR、13C NMR、DEPT、1H-1H COSY、HSQC、HMBC、NOESY等)鉴定出这些化合物的结构。15个化合物的名称分别为:TeA-1（1）、TeA-2（2）、tricycloalternarene 2a（3）、tricycloalternarene 2b（4）、tricycloalternarene 3b（5）、tricycloalternarene 9a（6）、alternariol 9-methyl ether（7）、3β,5α,6β-trihydroxy-（22E,24R）-ergosta-7,22-diene （8）、3β,5α,6β-trihydroxy-（22E,24R）-ergosta-7,22-diene（9）、3β,5α-dihydroxy-6β-methoxy-（22E,24R）-ergosta-7,22-diene（10）、4-hydroxy phenethyl alcohol（11）、uracil（12）、methyl-α-D-glucopyranoside&methyl- β-D-glucopyranoside（13）、mannitol（14）、2-hydroxy-3-methylvaleric acid （15）。 利用半叶枯斑法和叶圆片法测试了15个化合物的抗TMV侵染和增殖活性, 测试结果显示TeA-1（1）具有较好的抗TMV增殖活性,100μg/mL时抑制率为96.8%,IC50值为15.5μg/mL。其他化合物均无显著的抑制活性。
高速逆流色谱仪原理特点及应用
高速逆流色谱仪原理特点及应用 高速逆流色谱法于1982年由美国国立卫生院Ito博士研制开发的一种新型的、连续高效的液液分配色谱技术，与其它色谱技术不同的是它不需任何固态载体，因此能避免固相载体表面与样品发生反应而导致样品的污染、失活、变性和不可逆吸附等不良影响。 同时它也具有适用范围广、快速、进样量大、费用低、回收率高等优点。因此，己在生物、医药、食品、材料、化妆品和环保等领域获得了广泛的应用，尤其是在天然产物活性成分的分离纯化领域倍受重视。 高速逆流色谱仪原理及特点 HSCCC利用了一种特殊的流体动力学（单向流体动力学平衡）现象。具体表现为一根100多米长的螺旋空管，注入互不相溶的两相溶剂中的一相作为固定相，然后作行星运动；同时不断注入另一相（流动相），由于行星运动产生的离心力场使得固定相保留在螺旋管内，流动相则不断穿透固定相；这样两相溶剂在螺旋管中实现高效的接触、混合、分配和传递。由于样品中各组分在两相中的分配比不同，因而能使样品中各组分得到分离。 重现性好。如果样品不具有较强的表面活性作用，酸碱性也不强，那么多次进样，其分离过程稳定性都保持很好、峰的保留相对标准偏差也小于2%，重现性相当好。 应用领域： （1）天然产物已知有效成分的分离纯化
（2）化学合成物质的分离纯化 （3）中药一类、五类新药的开发 （4）中药指纹图谱和质量控制研究 （5）抗生素的分离纯化 （6）天然产物未知有效成分的分离纯化（新化合物开发） （7）海洋生物活性成分的分离纯化 （8）放射性同位素分离 （9）多肽和蛋白质等生物大分子分离以及手性分离等 应用范围广，适应性好。由于溶剂系统的组成与配比可以是无限多的，因而从理论上讲HSCCC适用于任何极性范围的样品的分离，所以在分离天然化合物方面具有其独到之处。并因不需固体载体，而消除了气液色谱中由于使用载体而带来的吸附现象，特别适用于分离极性物质和其它具有生物活性的物质。 标签: 色谱仪
高速逆流色谱操作
高速逆流色谱操作步骤和要点 操作步骤： 1 配液。超声脱气约20min，脱气后静置冷却至室温后泵液。 2 打开恒温水浴，将温度升至设定温度。 3 泵固定相。以10-20mL/min流速泵入固定相，检测器出口端流出固定相约20-50 mL后停泵。 4 平衡。打开紫外检测器开始预热，正转转动主机至900 rpm（FWD为正转，REV 为反转），同时以3 mL/min流速泵入流动相，至出口端流出流动相且此时紫外信号稳定，体系基本己平衡。 5 进样。以体系的上、下相溶解一定量的样品，超声溶解均匀后，在装样注射器中倒入样品溶液，将进样六通问切换至load，推排气泡后吸液至样品全进入进样圈中，将load切换至inject，检测器、工作站调零开始记录。 6 接收流分。工作站记录，设备运行时间为如5 min，保存后采集数据，保存。7清洗。断开泵与主机的连接，将主机进口与气管出口连接，吹气；将主机中溶剂吹出后，泵入约50 mL清洗液，吹气，重复此过程2~3次；最后一次长时间（1小时左右直至吹干）吹气时将主机内液体吹尽。 8 关机。 操作要点： 本仪器适用于有机溶剂，316L不锈钢及PTFE材料可耐受的酸碱溶液。 1 本设备可承受的压力限制为 2 MPa，请勿泵入不可溶解的固体颗粒。 2 设备运行前先检查连接管路是否正确，是否紧密；检测器波长是否正确。 3 配液时溶剂应混合均匀，自然分层澄清后可超声脱气，脱气时间不宜过长，脱气后如溶剂有温热则最好冷却静置至室温后使用。 4 样品溶解可为体系上相或下相，或同时两相溶解；不可以单一的溶剂来溶解进样，以免破坏主机内的体系平衡。 5 每次做完实验请及时清洗设备，一般清洗液为甲醇、乙醇等，如体系内含有酸、碱、盐等溶剂，建议先以纯净水清洗l~2次后，再以清洗液清洗。 6 日常清洗完设备后；如需继续进行实验，请设备放置2小时后重新平衡。
高速逆流色谱分离技术
四川大学 硕士研究生课程考试试卷 姓名唐昌云学号 07 学院华西药学院专业生药学 任课教师王曙教授 课程名称高等生药学 课程成绩 考试时间 2012.12.31. 四川大学
高速逆流色谱分离技术的运用 1 发展历史 高速逆流色谱(HSCCC)是在1982年，美国国立卫生院的一个教授首先研究和发展起来的一种不同于传统液相色谱法的现代色谱分离制备技术。作为一种新的色谱技术，HSCCC分离系统可以理解为以螺旋管式离心分离仪代替HPLC的柱色谱系统。HSCCC不使用固相载体作固定相, 克服了固相载体带来的样品吸附、损失、污染和峰形拖尾等缺点。由于不需要固定相，HSCCC技术具有进样量大、无不可逆吸附等优于其他色谱技术的优点，此项技术已经被广泛地应用于医药、环境、化工等领域。 2 原理 2.1 色谱分离原理 高速逆流色谱分离原理结合了液液萃取和分配色谱的优点，是一种不需任何固态载体或支撑的液-液分配色谱技术，其基本分离原理与其他同类色谱技术相同，主要是利用物质在两相间分配系数的差别进行分配。而HSCCC将两溶剂的分配体系置于高速旋转的螺旋管内，螺旋管的运动形式，是在自身自转的基础上，同时绕一公转轴旋转，形成行星运动。由此加在分配体系上的离心力场不断发生变化，使两相溶剂充分的混合和分配，从而达到洗脱分离目的。因为样品中各组分在两相中分配系数不同，导致组分在螺旋柱中的移动速度不同，因而能使样品组分按分配系数的大小次序被依次洗脱下来的一种色谱分离技术。在流动相中分配比例大的先被洗脱, 在固定相中分配比例大的后被洗脱。 2.2 固定相的保留 在高速逆流色谱仪设计方面，其有两个轴，其中一个为公转轴，一个为自转轴，两个轴由一个电动机带动。仪器的公转轴呈水平方向，圆柱形的螺旋管支持件围绕此轴进行行星式运转，同时围绕自转轴进行自转。由于螺旋管柱的行星式运动产生了一个在强度和方向上变化的离心力场，使在螺旋柱中互不相溶的两相不断混合从而达到稳定的流体动力学平衡，两相分离成两层，重相占据螺旋管的每一段的外部，轻相占据每一段的内部，并且两相沿螺旋管形成一个清晰的线性
逆流色谱原理简介
逆流色谱原理简介 任何熟悉液液萃取（使用分液漏斗）和色谱（例如HPLC）技术的人都很容易理解逆流色谱液液萃取的原理(countercurrentchromatography(CCC))。 液液萃取为化学家们分离大量的化学物质提供了一个简单的方法，而且使用的溶剂最少。把样品溶在两相溶剂系统中，振摇使两相充分混合，静置后，两相重新分层。这些步骤是分离样品组分的关键。这种经典的液液萃取在色谱工作者看来，最大的缺点是它在分离过程中只有一个理论塔板数。（事实上，这种情况下没什么理论可言。这一个分离塔板数是源自于工业上的分馏。 因此，化学工作者要么设计一合适的单步分离方法去适应自己的需要，要么就用多次液液萃取去提高分离度。通常使用前者，因为后者太麻烦了。（尽管多次液液萃取经常用到，但溶剂系统在不同的提取中通常要改变，以便提高效率。）为了改善分液漏斗，以经过许多的尝试。克雷格逆流分布仪是其中一个最引人注意的突破。这套精妙的仪器，把一系列的分液漏斗有效的排成链，重复的进行系列的步骤：振摇（混合）、静置、分离，再重头开始，这样就提高了塔板数。假如有足够的塔板数，那这套仪器可以达到色谱级的分离。 液滴逆流色谱（DCCC） 在发展过程中又开发出了液滴逆流色谱（DropletCounterCurrentChromatograph）。这个仪器把一系列垂直的管子用毛细管连接起来。液体固定相留有直管中，把流动相慢慢的泵进去，（如果流动相比较重就从上方泵进去；反之，则从下方）。象所有的色谱那样，组分比较容易溶于流动相中的就移动的快；而比较容易溶于固定相中就滞后了。于是就分离开来了。很显然，每一个直管只有最小可能的理论塔板数。所以，要有显著的效能就要用大量这样的直管。其分离步骤如下：把样品液滴与流动相混合，通过不移动的固定相，期间没有发生振摇。液滴的大小与其他溶剂系统的参数限制了溶质在两质中的分配。静置最终在直管末端形成，在这儿，流过固定相的流动相在通过毛细管进入下一根直管前先聚集起来。如果流速过高就会干扰静置并破坏了分离。通过毛细管，流动相从一个直管流入下一个直管，达到分离的目的。DCCC最大的弱点是可允许的流速太低，因此分离时间长，两相混合差，相对来说，造成效率就低了。 离心液滴逆流色谱（centrifugalDCCC，entrifugalplanetarychromatograph,CPC）比DCCC进步的地方就是使用离心加快重力分离。离心液滴逆流色谱更通用的叫法是离心行星色谱，使用很小的直管和毛细管（用多性塑料制成多层的）。一套实用的仪器包含数以千计的直管，可以获得几百个理论塔板数的效能。CPC的缺点和DCCC相似，只是用离心代替了地球重力分离。另外，CPC还多了个缺点，就是它在流动相的进口和出口必须使用旋转流体密封件；而这些密封件性能不好，价格又高，容易损耗，并且限制了泵液的压力，进而限制了流速和离心速度。 高速逆流色谱（High-SpeedCountercurrentChromatography,HSCCC） 现代的CCC源于Dr.YoichiroItod（国家健康研究中心）的研究：行星离心分离机，及其能支持的许多可能的柱几何学。这些巧妙的仪器运用了鲜为人知的离心分离机定子与转子非旋转连接的方法。（这超出了当前的讨论范围，涉及到如何达到这一目的的方法，任何一本讨论CCC的书对此都有详细的阐述）。功能上，高速逆流色谱有能自转和公转的螺旋盘绕的惰性管（既进行绕自轴旋转的行星式旋转，又同时进行绕公轴旋转。）组成。自轴和公轴（像行星自轴和恒星的公轴）必须同步，这里的讨论只集中于不同HSCCC的共同的地方。这两种旋转造成螺旋盘绕管中作令人昏乱的运动的液体产生混合区和静置分层区。这就为色谱形成造就了非常好的分离环境。
高速逆流色谱原理及应用
高速逆流色谱
High Speed Counter Current Chromatography (HSCCC)
Outline
1. Principle 2. Properties 3. Applications
分配定律：Nernst, 1891 年，Ｋ＝Ｃ1／Ｃ2
两组分K相差较大： 一次萃取可得到分离 较小： 多次萃取
? 1941, Martin & Synge 级联链型萃取，开创了分 配色谱技术 ? 1944，Craig 非连续式逆流分溶 (countercurrent distribution, CCD) ? 1966，Ito 离心式螺旋管逆流色谱 (countercurrent chromatography,CCC) ? 1981， Ito 高速逆流色谱 High Speed Counter Current Chromatography (HSCCC) 液液分配色谱的新纪元
CCD法（Countercurrent distribution， 反流分布法，逆流分溶法）： 是一种多次连续的液-液萃取分离过程
Principle
液－液分配色谱 or 逆流色谱
利用一种特殊的流体动力学现象使互不混溶的两相溶 剂(固定相和流动相)在螺旋管中高效地接触、混合、 分配和传递 其中固定相以一种相对均匀的方式分布在一根聚四氟 乙烯管绕成的螺旋管中 流动相以一定的速度通过固定相，并按照被分离物质 分配系数的不同依次洗脱而获得分离
特殊的流体动力学？