溶血实验-

溶血实验

1，准备2% 红细胞

保定兔子，自心脏抽取血液5 ml，加入0.2 ml抗凝剂EDTA，用PBS洗涤、离心，除去表面的白细胞，至上清液不显红色，弃上清液后取1 ml再加入50 ml的PBS即得。

2，准备材料

将不同种类的材料用PBS溶液调整浓度为800，400，200，100，50和25 ug/ml。金团簇的浓度为50，25，12.5，6.25，3.15 ug/ml。

3，实验过程

4，每次使用红细胞前，用PBS洗，直至上清液中无明显红色（略黄），吸取底物200ul, 稀释至10ml 使用

将0.5ml的材料与0.5ml的2%的红细胞溶液混合，室温条件下静止3h，之后用10050 r/min 离心3min。取出100ul于96孔板上，用570nm的波长检测。分别以水和PBS作为阳性对照和阴性对照。每个样品2个平行。

溶血率（%）=（样品吸收-阴性对照吸收）/（阳性对照吸收-阴性对照吸收）×100%。溶血率超过5%视为溶血。

医学检验免疫学检验归纳总结

医学检验免疫学检验归纳 总结

三大免疫结合反应 直接凝集反应玻片凝集反应 试管凝集反应 间接凝集反应间接血凝试验 胶乳凝集试验 凝集反应 P47 明胶凝集试验 自身细胞凝集试验 抗球蛋白试验直接coombs试验（RBC膜上的不完全抗原） 间接coombs试验（血清中的游离抗原） 液体内沉淀试验絮状沉淀试验抗原稀释法 抗体稀释法 方针滴定法 免疫浊度测定 沉淀反应凝胶内沉淀试验单向扩散试验 双向扩散试验 免疫电泳技术对流免疫电泳 CIEP 火箭免疫电泳RIE 免疫电泳IEP 免疫固定电泳 交叉免疫电泳 三大标记技术 一、放射免疫：放射免疫：

免疫放射： 二、荧光免疫技术P81 荧时间分辨荧光免疫测定（方法）双抗体夹心法 光 免固相抗体竞争法 疫 分固相抗原竞争法 析 类 型 荧光偏振免疫测定测定 荧光酶免疫测定（方法）双抗体夹心法 双抗原夹心法 固相抗原竞争法 三、酶免疫技术 P95 酶免疫技术分类均相酶免疫测定 EMIT 克隆酶测定分析 异相酶免疫测定异相液相酶免疫测定 固相酶免疫测定 酶联免疫吸附试验ELISA （方法）Ab 双抗体夹心法 双位点一步法 竞争法 Ag 间接法 双抗体夹心法 竞争法 捕获法 其他标记技术 化学发光免疫分析技术 CLIA 直接化学发光免疫分析CLIA P109 类型化学发光酶免疫分析CLEIA 电化学发光免疫分析ECLIA 生物素，亲和素放大技术

固相膜免疫测定免疫试验IFA 免疫层析试验 ICA 膜免疫测定的种类斑点酶免疫吸附试验 DOT-ELISE 酶联免疫斑点试验 ELISPOT 免疫印迹法 IBT/EITB 放射免疫浊度试验 RIPA 免疫细胞 1、分离方法外周血单个核细胞分离 PBMC P161 淋巴细胞分离贴壁粘附法 吸附柱滤过法 磁铁吸引法 Percoll分离液法 T细胞和B 细胞的分离 E花环沉降法 尼龙毛柱分离法 T细胞亚群分离亲和板结合分离法 磁性微球分离法 荧光激法细胞分离仪分离法 2、免疫细胞表面标志的检测方法抗体致敏细胞花环法 P174 免疫细胞化学法 免疫荧光法 FCM 3、功能检测 T 细胞增殖试验方法形态学 P178 3H-TdR掺入法 淋巴细胞 T细胞 MTT比色法 CFSE（活细胞染料） T细胞分泌功能检测 T细胞介导的细胞毒性试验 体内试验 B细胞：B细胞增殖试验、溶血空斑实验、ELISPOT、体内试验 NK细胞：..........

血清标本溶血对血液生化指标的影响

血清标本溶血对血液生化指标的影响45 血清标本溶血对血液生化指标的影响；李大磊1，史文华1，刘志峰1,2；1山东省天然药物工程技术研究中心；2烟台大学药学院山东省烟台市264005；摘要：目的探讨血清标本溶血对血液生化检验结果的影；关键词：溶血；生化检验；；Theinfluenceofhemolysiso；LI Da-lei1，SHIWen-hua1，LI；1．ShandongEngineerin 血清标本溶血对血液生化指标的影响 李大磊1，史文华1，刘志峰1,2 1山东省天然药物工程技术研究中心 2烟台大学药学院山东省烟台市264005 摘要：目的探讨血清标本溶血对血液生化检验结果的影响，为药物安全性评价的长期毒性试验数据的分析提供一定的依据。方法采用全自动生化分析仪检测10份正常大鼠血液标本在溶血前和溶血后血清葡萄糖(GLU)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总蛋白(T P)、白蛋白(ALB)、肌酐（Cre）、尿素氮(BUN)、胆固醇(CHO)、碱性磷酸酶(ALP)、总胆红素(TBIL)、钙（Ca++）、镁（Mg++）、钠（Na+）、钾（K+）、氯（Cl-）的值，并进行了比较和统计分析。结果溶血后AST、TBIL 、ALT、K+的值比溶血前的值高，具有统计学意义；Cre的值比溶血前的值低，统计差异显著；GLU、TP、ALB、BUN、CHO、ALP 、Ca++ 、Mg++ 、Na+ 、Cl-的值溶血前后未见明显统计学意义的改变。结论溶血对血清A ST、TBIL 、ALTK+、Cre有明显的干扰影响，提请在分析测定结果时注意溶血情况。 关键词：溶血；生化检验； The influence of hemolysis on sericem biochemical tests LI Da-lei1，SHI Wen-hua1，LIU Zhi-feng1,2 1．Shandong Engineering Research Center for Natural Drugs, Yantai, Shandong 26400 3 2．School of Pharmacy, Yantai University, Yantai, Shandong 264005

溶血实验

溶血实验 1.浓度 2.溶液配制 D-PBS：Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline 3.方法 ⑴新鲜血液2ml至用抗凝剂肝素预处理的采血管中。 ⑵加入4ml D-PBS，10000g离心5min。 ⑶弃上清，补加D-PBS至10ml，混匀后10000g离心5min。

⑷重复⑶4次，至上清澄清透明。 ⑸加入20ml D-PBS重悬红细胞。 ⑹将0.2ml红细胞悬液与0.8ml材料工作液混合。以加0.8ml水作为阳性对照组，0.8ml D-PBS为阴性对照组。 ⑺各组设4个平行，4h后，10016g离心5min，各取样品100ul至96孔板测定577nm吸光度，以655nm吸光度为参考。 溶血率% =[(OD样品-OD阴性)/(OD阳性–OD阴性)]×100% 取健康非吸烟男性志愿者静脉血3 ml。取2 ml血液，加入4 ml PBS，

涡旋混匀。4 ℃，10020 g离心10 min。小心移除上清，补加PBS至10 ml，混匀后离心，PBS重复处理5次至上清澄清透明。最后将红细胞用PBS定容至20 ml重悬混匀。用PBS配制三种HAP纳米粒子的梯度工作液：100 μg/ml，50 μg/ml，25 μg/ml，12.5 μg/ml，6.25 μg/ml。用0.2 ml上述红细胞重悬液与0.8 ml纳米粒子工作液混合，得到纳米粒子的终浓度为80 μg/ml，40 μg/ml，20 μg/ml，10 μg/ml，5 μg/ml。 0.2 ml红细胞悬液与0.8 ml PBS混匀为阴性对照，0.2 ml红细胞悬液与0.8 ml无菌三次水混匀为阳性对照，各组设3个平行。涡旋混匀后，于37 ℃孵育3 h，10020 g离心10 min，各样取100 μl上清，于570 nm 处测吸光度值。溶血率计算方法如下：溶血率% = [(OD样品-OD阴性)/ (OD阳性–OD阴性)] ×100%。

溶血对生化检验的影响

溶血对生化检验的影响 溶血是临床生化检验中最常见的一种干扰和影响因素。鉴于红细胞的脆性较大，血液标本采集、分离等过程中稍有不慎，均可引起标本发生不同程度的溶血而影响检验结果。笔者对溶血的原因、发生机制及对检验结果的影响及其对策进行综述。 1溶血的原因及其对策 溶血可分为体内溶血和体外溶血。体内溶血可由物理因素(如人工心脏瓣膜或大血管手术后)、生物因素(恶性疟疾)、药物因素等引起;体外溶血多由物理因素(机械性破坏、冻疮)、化学因素(如血液接触表面激活剂)和代谢因素(如遗传病引起红细胞脆性增加)等引起。常见体外溶血的原因有:1)扎压脉带时间过长、过紧; 2)静脉穿刺处的消毒酒精液未干即开始采血; 3)针头在皮下反复穿刺3次以上，过度损伤组织; 4)针头过细或抽血速度太快，负压太大，红细胞通过针尖时破坏而溶血; 5)抽出的血液注入试管时用力过猛、速度过快，或带针头将血液注入试管，红细胞受挤压破裂; 6)抗凝时用力摇晃试管或剥离血凝块; 7)用破裂的离心管盛放标本，离心速度太快，离心管和套管之间有硬物; 8)标本置于过冷或过热的水箱或在运输过程中动作幅度过大; 9)采血量不足，相对低渗抗凝; 10)抽血器具内含氧化还原性洗涤[1]剂。要规范采血程序，选择合适静脉，要求扎压脉带后1min内采血，避免用力拍打或反复握拳等不良动作，见血即松压脉带，并一针见血，抽血速度要慢，向试管内注血前先取下针头，沿试管壁缓慢将血液注入洁净试管，不得将气泡注入。妥善处理和保存标本，严把注射器和试管质量关。 2 体内溶血和体外溶血的鉴别 [2] 体内溶血多见于血管内溶血性疾病，实验室检查有以下几个方面的改变: 1)血浆游离血红蛋白增 加; 2)血清结合珠蛋白降低; 3)血浆高铁血红素清蛋白阳性; 4)血红蛋白尿，尿潜血试验阳性; 5)尿含铁血红素试验阳性; 6)血清游离胆红素增高，尿胆原阳性; 7)外周血网织红细胞增高; 8)增生性贫血骨髓像，以中、晚幼红细胞增多为主。体外溶血由标本采集和处理不当引起。体外和体内溶血的主要区别是前者血清或血浆Hb、LDH和钾同时升高，而后者通常是血清或血浆Hb和LDH升高，而钾不升高，还可通过珠蛋白检测、间接胆红素 [3]测定和网织红细胞计数进一步加以鉴定。 3 溶血对生化检验结果的影响 溶血时血清ALT、AST和ALP升高1.1~8.0倍，而CK升高不明显，GGT则明显降低[4]。Fe、AST、CK、LDH、CK-MB、K、ALT、TP、TB、DB、CH、P、Mg、Urea升高，[5]UIBC、HDL-C、GLU、Ua、CO2、Na、ALB、AMY、TBA、Crea、CI、Ca降低。轻度溶血AST、ALT仅轻微升高，中、重度溶血明显升高，因此明显溶血的标本不能用于AST和ALT[6]的测定;轻度溶血LDH活性显著升高，故测定LDH标本应避免溶血。溶血可使CK、CK-[7]MB、LDH、а-HBDH、TP、AST 升高，而GGT降低。溶血对酶类、电解质和胆红素影响最大， CK、CK-MB、LDH、HBDH、AST 5项心肌酶测定随溶血程度加重增高显著，其中LDH[8][9]升高最明显。溶血对肝功能指标有显著影响。 4 溶血对检验结果的影响机制 溶血对不同检验项目结果的影响机制不同，主要表现为以下几个方面: 1)细胞内外成分浓度差的干扰，细胞内含量高的血红蛋白、酶类、离子、有机物等，溶血后细胞内的物质顺浓度差溢出，使测得值明显高于非溶血标本;相反，红细胞内浓度极低的物质，如脂蛋白、胆固醇酯、钠等随溶血，细胞内液对血清的稀释作用，使测定结果明显下降; 2)细胞内、外液成分之间反应的干扰; 3)有色物质对吸收光谱的干扰，造成吸光度和散光度产生较大的误差，当被测溶液的颜色与有色物质的颜色接近时发生正干扰，而与有色物质的颜色相差较远时产生负干扰; 4)溶血标本中血红素中的正铁离子，可被试剂中的氧化剂(如亚硝酸钠)氧化成为黄色的高铁血红素，对两点比色法造成干扰;在血清总胆固醇CHODPAP终点法中，Hb高于2g/L时会引起正干扰;在磷的测定中，溶血标本中红细胞内磷酸酯被水解，使无机磷增加; 5)溶血引起稀释的负干扰和Hb增加吸光度的正干扰相互作用形成综合干扰。 5 溶血标本的处理与评价 为减少误差，提高检验结果的准确性，一旦发现标本溶血，应采取相应的措施: 1)主动与临床联系，结合临床首先排除体内溶血的可能。若不是体内溶血，建议重新采集标本。

溶血率实验方案

溶血率测定实验方案 1.实验目的 考察XXXX是否具有溶血反应。 2.实验原理 当稀释血液中加入溶血剂后，红细胞溶解并释放出血红蛋白（Hb），血红蛋白与溶血剂中的某些成分结合形成一种血红蛋白衍生物，在特定波长（530～550nm）下比色，吸光度变化与稀释液中Hb含量成正比，最终显示Hb浓度。溶血剂配方不同，所形成血红蛋白衍生物不同，吸收光谱不同，一般最大吸收峰接近540nm。 3.实验材料 3.1受试品 受试品XXXXX由本公司自制，受试品储备液浓度为XXX mg/mL。 3.2实验动物 SD大鼠，体重200±20 g，雌雄各半，上海斯莱克实验动物有限责任公司提供，许可证: XXX 3.3实验仪器及试剂 试剂：磷酸盐缓冲液（PBS），XXX公司提供；Triton X-100（2%，w/v），，XXX公司提供。 仪器：离心机: 北京医用离心机厂，型号:XXX,恒温水浴锅: 上海跃进医疗器械厂，型号：XXXX。 4.实验方法 1. 2%红细胞悬液的制备取新鲜大鼠血～10 mL，1000～1500r/min离心10 min，除去上清液，沉淀的红细胞再用PBS按上述方法洗涤3次，至上清液不显红色为止。将所得红细胞用PBS配成2%的混悬液(红细胞2mL，加生理盐水至100mL)，供试验用。 2.实验分为4组，每组取5个离心管，每组各管分别加入材料A 0.9 mL （实验组A）、材料B 0.9 mL （实验组B）、同批号PBS 0.9 mL（阴性对照组）和Triton X-100（2%，w/v）0.9 mL（阳性对照组）。每管加稀释兔血0.1 mL，轻轻混匀

后置37℃水浴孵育1 h，1000r/min离心5 min，吸取上清移至96孔板，用酶标仪在波长545 nm处测吸光度（A）值，取平均值计算溶血率。 溶血率: 溶血率(%)=（实验组A值－阴性对照组A值）/（阳性对照组A值－阴性对照组A值）×100%。 预实验：正式实验之前用紫外分光光度计测定溶血后形成的血红蛋白衍生的最大吸收波长。 5 数据处理 6 实验结果 7 结论

输血溶血反应的应急预案演练

输血溶血反应的应急演练 时间：2013.4.11 参加人员：所有护理人员及值班医生 指挥：×××护士长 演练场景及记录 场景：12床患者发生输血反应 演练记录： 1、责任护士×××巡视观察12床患者输血时发现患者胸闷、恶心呕吐、头胀痛、四肢麻木、腰背剧疼等，立即停止输血，更换输液器，输生理盐水维持输液通路,保留血袋及输血器。 2、值班护士×××立即通知×××护士长、值班医生。 3、值班医生查看病人。 4、责任护士×××立即遵医嘱给予地塞米松5mg静推、5%碳酸氢钠250ml静滴。同时责任护士王贺给患者心电监护及测量体温、责任护士刘冬艳给患者吸氧。 5、在抢救过程中，患者出现黄疸和血红蛋白尿（酱油色）。同时伴有寒战、发热、呼吸困难、血压下降。责任护士鲍春花立即给予建第二路静脉通道，并遵医嘱血浆、低分子右旋糖酐静滴。血压稳定时呋塞米60mg静推。 6、护士×××给予患者保暖及心理护理,关心患者及家属，稳定患

者情绪。 6、护士×××做好抢救记录，核对、检查、封存血袋和输血管道，并抽取患者血样一同送输血科检验。填写溶血反应报告卡，报护士长、科主任、上报输血科。 7、严格执行交接班制度加强床边交接。 8、科内讨论,分析原因,提出整改措施。 总结本次演练总体反应及时、指挥有条不紊、各组人员能各就其位、分工明确、不混乱、各组人员配合较好。 存在问题 1、有些护士不严肃，与护士认为只是演练有关。 2、熟练程度稍有欠缺。 改进措施 1、将存在的问题立即反馈给个人，及时整改。 2、护士长将演练的结果及存在的问题在科室会议上反馈。 3、定期组织应急演练强化应急意识。 记录人: ×××

溶血素与补体激活实验报告

实验报告

4. 补体结合反应实验原理 补体结合反应是一种有补体参与，并以绵羊红细胞和溶血素作为指示系统的抗原抗体反应。参与本反应的五种成分可分为两个系统： 一为待检系统，即为已知抗原（或抗体）和待检抗体（或抗原）； 另一个为指示系统，即绵羊红细胞和其相应的溶血素。待检抗原、抗体和补体作用后，再加入指示系统。若待检系统中的抗原和抗体相对应，两者特异性结合后激活补体，补体被消耗。再加入的指示系统无补体结合，不出现溶血；若待检系统中的抗原与抗体不对应或缺少一方，补体不被激活，当指示系统加入后，绵羊红细胞和溶血素复合物激活补体，产生溶血现象。 5. 空斑形成实验 是一种体外检测IgM、IgG类型抗体产生细胞的实验方法，又称空斑形成细胞（PFC)测定。可作为评估药物影响抗体产生水平以及临床筛选抗肿瘤新药的重要依据。 经绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞与一定量的绵羊红细胞混合后，抗体形成细胞产生的抗体与绵羊红细胞结合；在补体参与下，绵羊红细胞溶解，形成肉眼可见的溶血空斑。一个空斑即代表一个抗体形成细胞。

一、SRBC的制备 （一）无菌抽取绵羊血 1.手术剪减去绵羊颈部毛发备皮，止血带扎住颈部，碘酒消毒，酒精棉球再擦拭。 2.抽取一定量的绵羊血，注入无菌玻璃瓶，轻轻摇晃获得抗凝绵羊血，摇晃时不能用力过猛，防止SRBC破裂。 （二）绵羊红细胞的制备 1.在无菌实验室中，用移液枪吸取5ml抗凝绵羊血于试管中，共4支试管。 2.配平后对称放入离心机中2000rpm离心10分钟。 3.4支试管，胶头滴管吸去上清液，加入适量的灭菌生理盐水后轻轻摇晃混匀。 4.再次配平后，2000rpm离心10分钟，2-3次。 5.吸去上清液，获得绵羊红细胞。 （三）绵羊红细胞悬液制备 1.20%绵羊红细胞悬液制备 在无菌实验室中，用移液枪吸取2ml绵羊红细胞于锥形瓶中，用移液管再加入8ml灭菌生理盐水，混合均匀。 2.2%绵羊红细胞悬液制备 在无菌实验室中，用移液枪吸取1ml绵羊红细胞于锥形瓶中，量筒量取49ml无菌生理盐水加入锥形瓶，混合均匀。 二、溶血素的制备 （一）免疫接种程序

溶血的影响

溶血对试验指标的影响 项目误差类型原理D-二聚体（D-D）增高↑释放了促凝物质纤维蛋白原（Fg）降低↓释放了促凝物质凝血酶原时间（PT）降低↓释放了促凝物质部分活化凝血酶时间（APTT）降低↓释放了促凝物质抗凝血酶（AT）降低↓干扰分析 增高↑细胞中酶的释放天门冬氨酸氨基转移酶 （AST） 丙氨酸氨基转移酶（ALT）增高↑细胞中酶的释放γ-谷氨酰基转肽酶（GGT）降低↓干扰分析碱性磷酸酶（ALP）降低↓干扰分析总胆红素（TBiL）降低↓干扰分析 降钙素（CT）增高↑蛋白水解 肌酸激酶（CK）增高↑干扰分析乳酸脱氢酶（LDH）增高↑细胞释放脂肪酶（LPS）增高↑干扰分析 肌酐（CREA）增高↑干扰分析 尿素（Urea）增高↑细胞释放 清蛋白（Alb）降低↓稀释作用氯（Cl-）降低↓稀释作用 钾（K+）增高↑细胞释放 钠（Na+）降低↓稀释作用 磷（P）增高↑细胞释放 镁（Mg2+）增高↑细胞释放 血清铁（Fe）增高↑干扰分析雄激素（androgen）降低↓干扰分析胰岛素（Ins）降低↓蛋白水解糖皮质激素（GC）降低↓干扰分析促胃液素（gastrin）降低↓蛋白水解 胰高血糖素（glucagon）降低↓蛋白水解甲状旁腺激素（PTH）降低↓蛋白水解 促肾上腺皮质激素（ACTH）降低↓蛋白水解葡萄糖（Glu）降低↓稀释作用结合珠蛋白（Hp）降低↓干扰分析同型半胱氨酸（Hcy）降低↓干扰分析 叶酸（folic acid）增高↑细胞内叶酸释放维生素B12（VitB12）降低↓干扰分析肌钙蛋白I（cTnI）增高↑干扰分析肌钙蛋白T（cTnT）降低↓干扰分析 前列腺特异抗原（PSA）增高↑干扰分析

免疫学练习题7

免疫细胞的分离与检测 一、选择题 （一）单项选择题（A型题） 1．外周血中的单个核细胞主要是指 A．淋巴细胞 B．嗜酸性粒细胞 C．单核细胞-淋巴细胞 D．单核细胞 E．中性粒细胞 2．分离人外周血淋巴细胞分层液的最佳密度为 A．1.030 B．1.035 C．1.092 D．1.020 E．1.077 3．用Ficoll-hypaque分层液分离PBMC，分离的PBMC层位于试管的 A．血浆层之上 B．血浆层之中 C．血浆层与分层液之间 D．分层液之中 E．试管底部 4．用玻璃纤维或葡聚糖凝胶Sephadex-G10柱分离细胞时，从柱上洗脱下的细胞主要是 A．粒细胞 B．淋巴细胞 C．单核细胞 D．T细胞 E．B细胞 5．能与SRBC结合形成E花环的细胞主要是 A．T细胞 B．B细胞 C．单核细胞 D．粒细胞 E．血小板 6．用小鼠抗人CD3单克隆抗体检测T细胞，其结果代表的是 A．T细胞总数 B．Th细胞数 C．Ts细胞数 D．CD4 + 细胞数 E．CD8 + 细胞数 7．用尼龙棉柱分离细胞时，不易黏附尼龙棉纤维而被洗脱的细胞是： A．粒细胞 B．B细胞 C．单核细胞 D．T细胞 E．血小板 8．表示淋巴细胞的活力常用 A．活淋巴细胞占总淋巴细胞的百分比 B．活细胞浓度 C．淋巴细胞浓度 D．活细胞和总细胞的比值 E．T细胞和B细胞的比例 9．用腹腔渗出法可从动物的腹腔渗出液中分离出 A．血小板 B．B细胞 C．单核细胞 D．T细胞 E．巨噬细胞 10．活细胞经台盼蓝染色后呈 A．蓝色 B．棕色 C．红色 D．不着色 E．天青色 11．荧光标记法计数外周血B淋巴细胞，检测的特有的表面标志是 A．CD19 B．CD20 C．补体受体 D．SmIg E．FcR 12．NK细胞特有的表面抗原是 A．CD2 B．CD16 C．无特异的表面抗原 D．CD23 E．CD56 13．仅能使T细胞发生淋巴母细胞转化的因子是 A．PHA B．PWM C．LPS D．ConA E．EBV 14．能使B细胞和T细胞发生淋巴母细胞转化的因子是 A．PHA B．PWM C．LPS D．SPA E．EBV 15．检查体液免疫功能最常用的方法是 A．血清免疫球蛋白定量测定 B．溶血空斑试验 C．B淋巴细胞计数 D．淋巴母细胞转化试验 E．SmIgG测定 16．溶血空斑试验用于检测下列何种细胞的功能？ A．T细胞 B．B细胞 C．中性细胞 D．吞噬细胞 E．NK细胞 17．测定T淋巴细胞功能的体内试验是 A．锡克试验 B．狄克试验 C．结核菌素试验

生物分析中溶血对检测的影响及其对策

生物分析中溶血对检测的影响及其对策 ［摘要］液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）技术灵敏度高，选择性强，是目前体内药物分析的首选方法，但 LC-MS/MS生物分析中仍面临着溶血样品测定失败的难题。溶血导致的样品测定数据不准确，将直接影响药物的药动学研究，如何进行溶血样品的测定已成为各国监管机构和全球生物分析行业探讨的重点。本文从溶血样品产生的原因进行分析，将溶血对检测的影响和作用方式以及溶血效应的考察方法进行了概述，最后对溶血样品的测定方法和策略进行探讨。 ［关键词］溶血；生物分析；串联质谱；色谱法，高压液相液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）技术是将分离能力强的液相色谱与能够提供结构信息的串联质谱结合在一起，具有灵敏度高、选择性强的特点。LC-MS/MS技术的应用，可获得丰富、有效的化合物结构信息，建立快速、高效的分析研究体系，目前已成为体内药物分析的首选方法。体内药物分析的样品一般为人血浆或血清样品，涉及被测样品少，样品复杂及干扰物质多等问题，在实际测定工作中，采集的血浆或血清样品常出现溶血的现象。一项针对欧洲分析协会的调查显示溶血为方法学验证失败的原因之一，目前也有不少文献报道了溶血样品测定失败的案例，溶血样品测定过程中面临

着溶血样品响应低、样品稳定性差以及基质效应等问题，导致阿托伐他汀、去氧肾上腺素、氟伏沙明等药物的检测失败。可见，溶血对测定的影响成为体内药物分析领域中亟待解决的难题，同时也受到了各国监管机构的广泛关注。中国药典2015版《生物样品定量分析指导原则》指出“除正常基质外，还应关注其他样品的基质效应，例如溶血或高血脂的血浆样品等”。欧洲药品管理局（EMA）同样要求考察溶血样品的基质效应。而巴西国家卫生监督局（ANVISA）的要求则更加明确，基质效应需分析八个不同来源的样品，包括4个正常血浆样品、2个脂血样品以及2个溶血样品。与此同时，美国政府在近年的白皮书中也多次讨论溶血样品的测定问题。然而各国监管机构的要求都相对模糊，缺乏明确的做法和标准，因此溶血样品的检测仍面临着严峻的挑战，广大研究者应引起重视。本文结合溶血样品测定现状，对溶血样品测定失败问题进行全面分析和总结，并探讨了溶血测定失败的解决方案，从而保证生物分析结果的准确性。 溶血样品的产生溶血是指红细胞破裂，血红蛋白逸出释放到血浆或血清中。一项针对18项临床生物等效性（bioequivalency，BE）试验的10640个样品的调查显示，溶血样品为211个，占样品总量的1.98%。溶血会造成血浆或血清颜色和密度的改变，溶血血浆根据溶血程度不同颜色呈粉红色或红色；溶血的血浆中血红蛋白、胆红素、磷脂等生

溶血会影响哪些检验结果

溶血会影响哪些检验结果 检验人都知道，在标本采集、处理过程中，红细胞破坏造成溶血。原因有很多，包括采血不顺、压脉带过紧、抗凝血混匀用力过猛、离心破管等等。溶血会影响部分检验结果。在此，我查阅文献，汇总一下，与大家分享。 一、生化项目 （1）结果偏高的项目 溶血对乳酸脱氢酶（LDH）的影响最大，可使测定值升高达100-180；其次是肌酸激酶（CK），高达约69倍；；再次，是血清磷（P）和钾（K），前者为50倍，后者为20-30倍。还有谷草转氨酶（AST），10-30倍；肌酸激酶同工酶（CK-MB）15倍；谷丙转氨酶（ALT），7倍。其他受到影响但影响程度尚不明确的有钠（Na），镁（Mg），铁（Fe），氯化物（CL），总蛋白（TP），α-羟丁酸脱氢酶（HBDH），低密度脂蛋白（LDH）等。 （2）结果偏低的项目 溶血导至某些项目的测定结果偏高外，还可导至有的项目值偏低。如γ-谷氨酰转肽酶（γ -GT）。 （3）影响不大的项目 多种文献报道显示，白蛋白（Alb）和高密度脂蛋白（HDL）受溶血的影响不大。 二、凝血项目 溶血标本检测的凝血酶原时间（PT），凝血酶时间（TT）要比不溶血的标本测定值分别升高约7.22%和26.26%；血浆纤维蛋白原（Fg）则降低约9.88%。溶血后结果的改变与溶血程度无明显比例关系。促凝血检测结果受溶血因素影响,但不随溶血程度的增加而成简单的线性改变。活化部分凝血活酶时间（APTT）升高约8.48%，但也有人认为溶血对此项目影响不大。 三、免疫项目 在免疫项目检测中，溶血对化学发光法或时间分辨免疫荧光法所检测的项目的影响报道较多。其中，神经元特异性烯醇化酶（NSE）的影响最大，可使结果升高达到20倍。其次，对前列腺特异抗原（PSA）、游离T3（FT3）、游离T4（FT4）、心肌肌钙蛋白I（cTn）、肌红蛋白（MYO）也有一定影响。再者，有研究显示，溶血本身对胰岛素水平影响不大，但由于红细胞内含有胰岛素降解酶，溶血后该酶释放，随着溶血时间的延长，胰岛素不断降解，从而导至浓度降低。对于ELISA方法的影响，有研究认为HIV抗体检测实验中，溶血可造成约3.75%的标本出现假阳性。 溶血对有些项目的影响仍然存在争议，例如血钙（Ca）、尿素氮（BUN）、肌酐（CR）、碱性磷酸酶（ALP）、尿酸（UA）、甘油三酯（TG）、总胆固醇（CHO）、葡萄糖（Glu）、总胆红素（TBIL）、直接胆红素（DBIL）。这可能与检测方法不容有关，也可能与试验标本的溶血程度有关。 总之，作为检验人，我们要明确受溶血影响的检验项目，在实际工作中注意观察标本质量，以避免给临床提供不可靠的的实验室数据。同时，溶血对部分项目的影响尚不明确，我们不妨继续研究，提供数据以供同仁参考。 参考文献 1.谯娟, 冯涛倩, 邓华, 等. 探讨溶血对临床生化检验结果的影响[J]. 求医问药，2012, 10(11):

输血后发生溶血反应的应急预案

输血后发生溶血反应应急预案（初稿待定） 01、发现溶血反应 （1）开始阶段：头胀痛、四肢麻木、腰背部剧烈疼痛和胸闷、注射点烧灼感（2）第二阶段：寒战、高热、呼吸急促和血压下降症状 （3）第三阶段：病人出现少尿、无尿等急性肾功能衰竭症状，严重者可导致死亡 02、立即停止输血、留存余血、立即重新交叉配血、血型鉴定 03、报告上级医师 04、碱化尿液，通常采用碳酸氢钠滴注，40~70mmol 碳酸氢钠可以将尿ph 提 《现代麻醉学三版》 a、多巴胺80mg+间羟胺40mg加入500ml0.9%生理盐水静脉滴注（待定） b、小剂量肾上腺素治疗，在500ml 液体中加入肾上腺素0.1mg~0.2mg静 滴，并根据血压调节滴速《现代麻醉学三版》 06、双腰部封闭、双侧肾区采取保暖措施（预防肾血管痉挛） 07、实验室检查血常规（血小板计数↓）、凝血四项、血浆血红蛋白浓度、直接 抗球蛋白试验、尿常规、游离血红蛋白+、生化全项（胆红素+）、血气分析、D-二聚体（排除血栓及栓塞） 08、严密监测尿量↓、尿颜色(酱油色、洗肉水色)并做记录、保持尿量在 75~100ml/hr 以上 a、大量静脉补液维持CVP 10~14cmH2O，必要时在5~10分钟内快速滴注甘 露醇12.5~50g。《现代麻醉学三版》 b、如果补液和输注甘露醇无效，则采用速尿20~40mg 静注。《现代麻醉学三版》 09、密切观察生命体征血压↓、心率↑、脉搏↑、体温↑、意识情况↓ （体温计监测体温） 10、复方右旋糖酐40注射液250ml×2静脉滴注（扩容） 11、a、地塞米松10mgIV b、甲强龙40mg×12（480mg）静滴 12、专门人做好抢救记录（护理、医疗） 13、填写《输液、输血反应登记表》三份（护理） 14、如发生肾功能衰竭则同时启动《肾功能衰竭抢救程序》 15、以上步骤应该同时进行、没有先后！争分夺秒力争抢救病人！

溶血实验(学校教学)

溶血性实验 实验目的：通过本实验认识溶血现象，并掌握溶血性实验常规的体外试管法的基本操作 实验原理：溶血是指红细胞破裂、溶解的一种现象。药物制剂引起的溶血反应包括免疫性溶血与非免疫性溶血。免疫性溶血是药物通过免疫反应产生抗体而引起的溶血，为II型和III型变态反应；非免疫性溶血包括药物为诱发因素导致的氧化性溶血和药物制剂引起的血液稳定性改变而出现的溶血和红细胞凝聚等。溶血实验室观察受试物是否会引起溶血和红细胞聚集等反应。 有些药物由于含有溶血性成分或物理、化学、生物等方面的原因，在直接注射入血管后可产生溶血现象；有些药物注入血管后可产生血细胞凝聚，引起血液循环功能的障碍等。有些中草药含有皂苷等成分，具有溶血作用。凡是注射剂和可能引起免疫性溶血或非免疫性溶血的药物制剂，均应进行溶血性实验。 实验方法 1.2%红细胞悬液的制备取新鲜鼠血10 ~ 20ml，放入盛有玻璃珠的三角烧瓶 中振摇10分钟，或用玻璃棒搅动血液，除去纤维蛋白质，使成脱纤血液。 加入生理盐水100ml，摇匀，1000~1500r/min离心15分钟，除去上清液，沉淀的红细胞再用生理盐水按上述方法洗涤2~3次，至上清液不显红色为止。 将所得红细胞用生理盐水配成2%的混悬液(红细胞2ml，加生理盐水至100ml)，供试验用。 2.取10ml干净玻璃试管7支，编号，1至5号管为供试品，6号管为阴性对照 管，7号管为阳性对照管(完全溶血对照)。按表1所示，依次加入2%红细胞悬液。0。9%氯化钠溶液或蒸馏水，混匀后，立即置(37±0。5)℃的恒温水浴中进行温育，观察并记录各管的溶血情况。开始每隔15分钟观察1次，1小时后，每隔1小时观察1次，一般观察3小时。 表1 溶血实验设计表 页脚* 1

溶血反应及措施

（一）溶血反应 它是输血中最严重的一种反应。由于病人血浆中凝集素和输入血内的红细胞中凝集原发生凝集反应，而后凝集细胞又被吞噬细胞所吞噬而溶血，导致大量游离血红蛋白散布到血浆中，而使机体发生一系列反应。通常输入10－15ml血后即可出现反应。 1.原因 （1）输入异型血。即供血者与受血者血型不符而造成血管内溶血。 （2）输血前红细胞已变质溶解。如血液贮存过久；血温过高或过低；输血时血液被加热或震荡过剧；血液内加入高渗或低渗溶液，影响PH变化的药物等因素，致使血液中红细胞大量破坏。 （3）Rh因子所致溶血。此种类型较少发生。 2.症状 开始阶段：由于红细胞凝集成团，阻塞部分小血管，从而引出四肢麻木、头胀痛、胸闷、腰背剧痛、恶心呕吐等。 中间阶段；由于红细胞发生溶解，大量血红蛋白散布到血浆中，则出现黄疸和血红蛋白尿（酱油色）。同时伴有寒战、发热、呼吸困难、血压下降。 最后阶段；由于大量的血红蛋白从血浆进入肾小管，遇酸性物质而变成结晶体，临床出现急性肾功能衰竭症状，严重者可致死亡。 3.防治方法 （1）认真做好血型签定、交叉配血试验及输血前的核对工作，避免发生差错；严格执行血液保存要求。 （2）立即停止输血，给予氧气吸入，并通知医生。 （3）即行皮下或肌肉注射0.1%肾上腺素0.5～1ml（紧急情况可静脉注射）。 （4）静脉输入低分子右旋糖酐或706代血浆，以及地塞米松或氢化可的松，血压下降者静滴多巴胺或间羟胺。 （5）保护肾脏。为解除肾血管痉挛，可行双侧腰封或肾区热敷。正确记录每小时尿量，测定尿血红蛋白，注意观察尿色。 （6）密切观察病情，尤其血压、尿量，一旦出现尿少、尿闭者，按急性肾功能衰竭处理。 （二）发热反应 1.原因 （1）主要由致热原引起，当保养液或输血用具被致热原污染，输血后即可发生发热反应。 （2）病人原有疾病，输血后血液循环改善，导致病灶毒素扩散而发生发热反应。 （3）多次输血后，病人血液中产生一种白细胞抗体和血小板抗体，这两种不完全抗体易引起发热反应。 （4）快速输入低温的库存血。 2.症状多发生在输血后1－2小时内患者有发冷或寒战，继而发热，体温可达39℃－40℃以上，伴有头痛、恶心呕吐等。 3.防治方法 （1）除去致热原严格清洁和消毒采血、输血用具。 （2）反应轻者减慢输血速度；严重者应立即停止输血。寒战时注意保暖，给热饮料，加盖被；高热时给物理降温，也可用解热镇痛药如复方阿斯匹林。反应严重者用肾上腺皮质激素，并严密观察病情。 （三）过敏反应 1.原因

细胞生物学实验考考试样题及实验思考题答案

细胞生物学实验考试样题 一、填空题（2分/每空，共30分） 1、洗液由重铬酸钾、浓硫酸和蒸馏水组成。 2、1640培养基包括RPMI1640培养液、谷氨酰胺、双抗、小牛血清。 3、鉴别活细胞的染液是0.4%台盼蓝溶液;鉴别细胞核的染液是甲基绿-派洛宁染液； 鉴别线 粒体的染液中性红-詹纳斯绿染液。 4、细胞核分离的基本步骤是组织匀浆、离心、纯化、鉴定。 5、细胞骨架中使蛋白质被保存的染料是1%Triton-100。 二、简答题（5+5+10共20分） 1.线粒体在分离提取过程中，为什么要在0~4℃中进行？ 答：①为了保持组分的生理活性; ②防止线粒体中的酶被破坏，避免酶失活 2.什么我们在检测细胞渗透性时要用一定浓度的试剂？ 答：①确保实验是在等渗条件下进行； ②防止物质的进出；

③同时避免由于渗透压不同而影响实验结果。 3.细胞的计数步骤和方法。 答：加等体积的染液与细胞悬液混合～把悬液滴在计数板上～底倍镜下观察，活细胞 无色，死 细胞为蓝色，找计数方格计四个方格的细胞总数。（压到大格线者“计左不计右，计上不计下”）计算。 Ⅰ：每毫升原液细胞数=4个大格细胞总数/4*100*稀释倍数 Ⅱ：细胞存活率(%)=(细胞总数-死细胞数)/细胞总数。 细胞生物学实验思考题答案 实验一利用各种显微镜观察细胞形态、结构 1、简述显微镜的主要结构和操作要领。 普通生物显微镜由3部分构成： ①照明系统：包括光源和聚光器。 ②光学放大系统：由物镜和目镜组成，是显微镜的主体。 ③机械装置：用于固定材料和观察方便，包括镜台(载物台) 、调节器和物镜转换器(旋转器等使用（一）、观察前准备

血清标本溶血对血液生化指标的影响

血清标本溶血对血液生化指标的影响 李大磊1，史文华1，刘志峰1,2 1山东省天然药物工程技术研究中心 2烟台大学药学院山东省烟台市 264005 摘要：目的探讨血清标本溶血对血液生化检验结果的影响，为药物安全性评价的长期毒性试验数据的分析提供一定的依据。方法采用全自动生化分析仪检测10份正常大鼠血液标本在溶血前和溶血后血清葡萄糖(GLU)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、肌酐（Cre）、尿素氮(BUN)、胆固醇(CHO)、碱性磷酸酶(ALP)、总胆红素(TBIL)、钙（Ca++）、镁（Mg++）、钠（Na+）、钾（K+）、氯（Cl-）的值，并进行了比较和统计分析。结果溶血后AST、TBIL、ALT、K+的值比溶血前的值高，具有统计学意义；Cre的值比溶血前的值低，统计差异显著；GLU、TP、ALB、BUN、CHO、ALP 、Ca++、Mg++、Na+、Cl-的值溶血前后未见明显统计学意义的改变。结论溶血对血清AST、TBIL、ALTK+、Cre 有明显的干扰影响，提请在分析测定结果时注意溶血情况。 关键词：溶血；生化检验； The influence of hemolysis on sericem biochemical tests LI Da-lei1，SHI Wen-hua1，LIU Zhi-feng1,2 1．Shandong Engineering Research Center for Natural Drugs, Yantai, Shandong 264003 2．School of Pharmacy, Yantai University, Yantai, Shandong 264005 Abstraet：Aim To observe the influence of hemolysis on the results of biochemical tests. Methods The blood collected from the rat divided into 2 samples, one of which is to process hemolysis serum, the other is to process normal serum. The serum biochemical data were detected respectively, which include glucose(GLU), alanine aminotransferase(ALT), aspartate aminotransferase(AST), total protein(TP), albumin(ALB), creatinine(Cre), Blood uric nitrogen (BUN), cholesterol (CHO), alkaline phosphal ase (ALP), total bilinibin(TBIL ), calcium (Ca++), magnesium (Mg++), natrium(Na+), kalium (K+), chlorin(Cl-). The data were treated with paired-test. Resluts The level of serum AST, TBIL, ALT and K+ increased in hemolysis samples than normal. The level of serum Cre in hemolysis samples is lower than normal. There is no significant difference in serum GLU, TP, ALB, BUN, CHO, Ca++, Mg++, Na+ and Cl- . These

免疫学及免疫学检验学 题库答案

一、名词解释 第1章概论 1.免疫学： 2.免疫分子： 3.补体： 4.临床免疫学： 第2章抗原抗体反应 5.抗原抗体反应： 6.抗原抗体反应特异性 7.可逆性 8.比例性 9.抗原抗体反应的等价带（zoneofequivalence） 10.最适比（optimalratio） 11.带现象（zonephenomenon） 第3章免疫原和抗血清的制备 12.免疫原(immunogen) 13.半抗原 14.免疫佐剂 15.多克隆抗体(polyclonal antibody, pcAb) 第5章凝集反应 16.凝集反应

17.直接凝集反应 18.间接凝集反应 19.明胶凝集试验 第6章沉淀反应 20.沉淀反应 21.絮状沉淀试验 22.免疫浊度测定 23.凝胶内沉淀试验 24.单项扩散试验 25.双向扩散试验 26.免疫电泳技术 27.对流免疫电泳 28.火箭免疫电泳 29.免疫电泳 30.免疫固定电泳 第19章补体检测及应用 31.补体 32.免疫溶血法 33.补体结合试验

第22章感染性疾病与感染免疫检测34.感染 第23章超敏反应性疾病及其免疫检测 35.超敏反应 36.Ⅰ型超敏反应 37.Ⅱ型超敏反应 38.Ⅲ型超敏反应 39.Ⅳ型超敏反应 第24章自身免疫性疾病及其免疫检测 40.自身耐受 41.自身免疫 42.自身免疫病 43.自身抗体 44.抗核抗体 第25章免疫增殖性疾病及其免疫检测 45.免疫增殖性疾病 46.免疫球蛋白增殖病 47.本周蛋白

48.血清区带电泳 49.免疫电泳 50.免疫固定电泳 第26章免疫缺陷性疾病及其免疫检验 51.免疫缺陷病 52.获得性免疫缺陷综合征 第27章肿瘤免疫与免疫学检验 53.肿瘤免疫学 54.肿瘤抗原 55.肿瘤标志物 第28章移植免疫及其免疫检测 56.移植 57.主要组织相容性复合体 58.移植排斥反应 59.移植物抗宿主反应(GVHR) 60.血清学分型法 二、填空题。

沉淀反应与溶血试验

免疫实验 实验二沉淀反应 一、概述 沉淀反应是可溶性抗原与相应抗体结合后，在条件适宜时（抗原抗体比例合适，有适量电解质存在等）出现肉眼可见沉淀物的反应。 利用沉淀反应进行抗原或抗体检测的是沉淀试验，沉淀试验是抗原抗体检测方法中的一个大类。 沉淀试验有琼脂扩散试验、免疫电泳试验、环状沉淀试验、絮状沉淀试验等。 琼脂扩散试验分单向琼脂扩散试验和双向琼脂扩散试验。 二、单向琼脂扩散试验（用于检测抗原的含量）（示教试验） 1. 原理：在单向琼脂扩散试验中，形成沉淀环，沉淀环直径与抗原浓度成正比，因此可根据沉淀环直径对抗原进行定量。 2. 结果：注意观察所形成的沉淀环，了解作标准曲线根据标准曲线求抗原含量的方法。 三、双向琼脂扩散试验（检测甲胎蛋白AFP） 1. 原理：抗原抗体在琼脂中可自由扩散，若抗原抗体相对应，两者在相遇且比例合适处形成大抗原抗体复合物，此复合物沉积出现沉淀线。双向琼脂扩散试验可用于抗原抗体纯度的检测、滴定抗体效价以及未知抗原或抗体的检测。 2. 方法（检测甲胎蛋白AFP）：。 制备琼脂板→根据需要在琼脂板打孔→分别在对应孔加入待检标本、AFP阳性血清（阳性对照）和抗AFP抗体→37℃孵育，24小时后观察结果。 3. 结果判断 在AFP阳性对照孔和抗AFP孔出现白色沉淀线，为阳性对照线。待检标本孔和抗AFP 孔也出现白色沉淀线且与阳性对照线衔接成一线，表明待检标本AFP阳性；若待检标本孔和抗AFP孔不出现白色沉淀线，表明待检标本AFP阴性。 四、对流免疫电泳试验（检测甲胎蛋白AFP） 1. 原理：对流免疫电泳试验将双向琼脂扩散和电泳技术相结合的一种试验。和双扩相比，具有试验时间缩短、试验敏感度提高的优点。 2. 方法：按照实验指导进行操作。 3. 结果判断与分析： 在AFP阳性对照孔和抗AFP孔出现白色沉淀线，为阳性对照线。待检标本孔和抗AFP 孔也出现白色沉淀线，表明待检标本AFP阳性；若待检标本孔和抗AFP孔不出现白色沉淀线，表明待检标本AFP阴性。 实验三补体参与的免疫反应 一、溶血反应 1. 原理：绵羊红细胞在溶血素（绵羊红细胞的抗体）、补体均存在的条件下出现溶血。此溶血反应是补体结合试验的指示系统。 2. 方法：按照实验指导进行操作。 3. 现象观察与分析：观察溶血现象；分析第3、5管为何未出现溶血，分别缺什么成分。