生化习题集
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蛋白质化学
一、填空题
1．构成蛋白质的氨基酸有种，一般可根据氨基酸侧链（R）的大小分为侧链氨基酸和侧链氨基酸两大类。其中前一类氨基酸侧链基团的共同特怔是具有性；而后一类氨基酸侧链（或基团）共有的特征是具有性。碱性氨基酸（pH6～7时荷正电）有两种，它们分别是氨基酸和氨基酸；酸性氨基酸也有两种，分别是氨基酸和氨基酸。
2．紫外吸收法（280nm）定量测定蛋白质时其主要依据是因为大多数可溶性蛋白质分子中含有氨基酸、氨基酸或氨基酸。
3．丝氨酸侧链特征基团是；半胱氨酸的侧链基团是；组氨酸的侧链基团是
。这三种氨基酸三字母代表符号分别是
4．氨基酸与水合印三酮反应的基团是，除脯氨酸以外反应产物的颜色是；因为脯氨酸是α—亚氨基酸，它与水合印三酮的反应则显示色。
5．蛋白质结构中主键称为键，次级键有、、
、、；次级键中属于共价键的是键。
6．镰刀状贫血症是最早认识的一种分子病，患者的血红蛋白分子β亚基的第六位
氨酸被氨酸所替代，前一种氨基酸为性侧链氨基酸，后者为性侧链氨基酸，这种微小的差异导致红血蛋白分子在氧分压较低时易于聚集，氧合能力下降，而易引起溶血性贫血。
7．Edman反应的主要试剂是；在寡肽或多肽序列测定中，Edman反应的主要特点是。
8．蛋白质二级结构的基本类型有、、
和。其中维持前三种二级结构稳定键的次级键为
键。此外多肽链中决定这些结构的形成与存在的根本性因与、、
有关。而当我肽链中出现脯氨酸残基的时候，多肽链的α-螺旋往往会。
9．蛋白质水溶液是一种比较稳定的亲水胶体，其稳定性主要因素有两个，分别是
和。
10．蛋白质处于等电点时，所具有的主要特征是、。
11．在适当浓度的β-巯基乙醇和8M脲溶液中，RNase（牛）丧失原有活性。这主要是因为RNA酶的被破坏造成的。其中β-巯基乙醇可使RNA酶分子中的键破坏。而8M脲可使键破坏。当用透析方法去除β-巯基乙醇和脲的情况下，RNA酶又恢复原有催化功能，这种现象称为。
12．细胞色素C，血红蛋白的等电点分别为10和7.1，在pH8.5的溶液中它们分别荷的电性是、。
13．在生理pH条件下，蛋白质分子中氨酸和氨酸残基的侧链几乎完全带负电，而氨酸、氨酸或氨酸残基侧链完全荷正电（假设该蛋白质含有这些氨基酸组分）。
14．包含两个相邻肽键的主肽链原子可表示为，单个肽平面及包含的原子可表示为。
15．当氨基酸溶液的pH＝pI时，氨基酸（主要）以离子形式存在；当pH＞pI时，氨基酸
（主要）以离子形式存在；当pH＜pI时，氨基酸（主要）以离子形式存在。
16．侧链含—OH的氨基酸有、和三种。侧链含—SH的氨基酸是氨基酸。
17．人体必需氨基酸是指人体自身不能合成的、必须靠食物提供的氨基酸。这些氨基酸包括、、、、
、、、等八种。
18．蛋白质变性的主要原因是被破坏；蛋白质变性后的主要特征是；变性蛋白质在去除致变因素后仍能（部分）恢复原有生物活性，表明没被破坏。这是因为一级结构含有的结构信息，所以蛋白质分子构象恢复后仍能表现原有生物功能。19．盐析作用是指；盐溶作用是指。
20．当外界因素（介质的pH＞pI、电场电压、介质中离子强度、温度等）确定后，决定蛋白质在电场中泳动速度快慢的主要因素是和。
二、选择填空题
1．侧链含有咪唑基的氨基酸是（ D ）
A、甲硫氨酸
B、半胱氨酸
C、精氨酸
D、组氨酸
2．PH为8时，荷正电的氨基酸为（ B ）
A、Glu
B、Lys
C、Ser
D、Asn
3．精氨酸的Pk1=2.17、Pk2=9.04（α-NH3）Pk3=12.48（胍基）PI=（C ）
A、1/2(2.17+9.04)
B、1/2(2.17+12.48)
C、1/2(9.04+12,48)
D、1/3（2.17+9。04+12。48）
4．谷氨酸的Pk1=2.19(α-COOH)、pk2=9.67(α-NH3)、pk3=4.25(γ-COOH) pl=（ C ）
A、1/2（2.19+9。67）
B、1/2（9.67+4.25）
C、1/2(2.19+4.25)
D、1/3(2.17+9.04+9.67)
5．氨基酸不具有的化学反应是（ D ）
A、肼反应
B、异硫氰酸苯酯反应
C、茚三酮反应
D、双缩脲反应
6．当层析系统为正丁醇∶冰醋酸∶水=4∶1∶5时，用纸层析法分离苯丙氨酸（F）、丙氨酸（A）和苏氨酸（T）时则它们的R f值之间关系应为：（ A ）
A、F＞A＞T
B、F＞T＞A
C、A＞F＞T
D、T＞A＞F
7．氨基酸与亚硝酸反应所释放的N2气中，氨基酸的贡献是（B ）
A、25%
B、50%
C、80%
D、100%
8．寡肽或多肽测序时下列试剂中最好的是（ C ）
A、2，4-二硝基氟苯
B、肼
C、异硫氰酸苯酸
D、丹酰氯
9．下列叙述中不属于蛋白质一般结构内容的是（ C ）
A、多肽链中氨基酸残基的种类、数目、排列次序
B、多肽链中氨基酸残基的键链方式
C、多肽链中主肽链的空间走向，如α-螺旋
D、胰岛分子中A链与B链间含有两条二硫键，分别是A7-S-S-B7，A20-S-S-B19
10．下列叙述中哪项有误（ C ）
A、蛋白质多肽链中氨基酸残基的种类、数目、排列次序在决定它的二级结构、
三级结构乃至四级结构中起重要作用
B、主肽链的折叠单位～肽平面之间相关一个Cα碳原子
C、蛋白质变性过程中空间结构和一级结构被破坏，因而丧失了原有生物活性
D、维持蛋白质三维结构的次级键有氢键、盐键、二硫键、疏水力和范德华力
11．蛋白质变性过程中与下列哪项无关（ D ）
A 、理化因素致使氢键破坏
B 、疏水作用破坏
C 、蛋白质空间结构破坏
D 、蛋白质一级结构破坏，分子量变小
12．加入下列试剂不会导致蛋白质变性的是（ D ）
A 、尿素（脲）
B 、盐酸胍
C 、十二烷基磺酸SDS
D 、硫酸铵
13．血红蛋白的氧合动力学曲线呈S 形，这是由于（ B ）
A 、氧可氧化Fe （Ⅱ），使之变为Fe （Ⅲ）
B 、第一个亚基氧合后构象变化，引起其余亚基氧合能力增强
C 、这是变构效应的显著特点，它有利于血红蛋白质执行输氧功能的发挥
D 、亚基空间构象靠次级键维持，而亚基之间靠次级键缔合，构象易变
14．下列因素中主要影响蛋白质α-螺旋形成的是（ C ）
A 、碱性氨基酸的相近排列
B 、酸性氨基酸的相近排列
C 、脯氨酸的存在
D 、甘氨酸的存在
15．蛋白质中多肽链形成α-螺旋时，主要靠哪种次级键维持（C ）
A 、疏水键
B 、肽键
C 、氢键
D 、二硫键
16．关于蛋白质结构的叙述，哪项不恰当（A ）
A 、胰岛素分子是由两条肽链构成，所以它是多亚基蛋白，具有四级结构
B 、蛋白质基本结构（一级结构）中本身包含有高级结构的信息，所以在生物
体系中，它具有特定的三维结构
C 、非级性氨基酸侧链的疏水性基团，避开水相，相互聚集的倾向，对多肽链
在二级结构基础上按一定方式进一步折叠起着重要作用
D 、亚基间的空间排布是四级结构的内容，亚基间是非共价缔合的
17．有关亚基的描述，哪一项不恰当（ C ）
A 、每种亚基都有各自的三维结构
B 、亚基内除肽键外还可能会有其它共价键存在
C 、一个亚基（单位）只含有一条多肽链
D 、亚基单位独立存在时具备原有生物活性
18．关于可溶性蛋白质三级结构的叙述，哪一项不恰当（ B ）
A 、疏水性氨基酸残基尽可能包裹在分子内部
B 、亲水性氨基酸残基尽可能位于分子内部
C 、羧基、氨基、胍基等可解离基团多位于分子表面
D 、苯丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸等残基尽可能位于分子内部
19．蛋白质三级结构形成的驱动力是（ B ）
A 、范德华力
B 、疏水作用力
C 、氢键
D 、离子键
20．引起蛋白质变性原因主要是（ A ）
A 、三维结构破坏
B 、肽键破坏
C 、胶体稳定性因素被破坏
D 、亚基的解聚
21．以下蛋白质中属寡聚蛋白的是（ B ）
A 、胰岛素
B 、Rnase
C 、血红蛋白
D 、肌红蛋白
22．下列测定蛋白质分子量的方法中，哪一种不常用（ C ）
A 、SDS-PAGE 法
B 、渗透压法
C 、超离心法
D 、凝胶过滤（分子筛）法
23．分子结构式为HS －CH 2－CH －COO －的氨基酸为（ B ）
A 、丝氨酸
B 、苏氨酸
C 、半胱氨酸
D 、赖氨酸
24．下列氨基酸中为酪氨酸的是（ B ）
A 、 -CH 2－CH －COO －
B 、HO － －CH 2－CH －COO － NH 3 NH 3
C 、 CH 2－CH －COO －
D 、CH 3－S －CH 2－CH 2－CH －COO － + HN NH + + +
+
NH 3 NH 3 25．变构效应是多亚基功能蛋白、寡聚酶及多酶复合体的作用特征，下列动力学曲线中哪种一般是别构酶
（蛋白质）所表现的：（ D ）
A 、
B 、
C 、
D 、
26．关于二级结构叙述哪一项不正确（ ）
A 、右手α-螺旋比左手α-螺旋稳定，因为左手α-螺旋中L-构型氨基酸残基侧链
空间位阻大，不稳定；
B 、一条多肽链或某多肽片断能否形成α-螺旋，以及形成的螺旋是否稳定与它
的氨基酸组成和排列顺序有极大关系；
C 、多聚的异亮氨基酸R 基空间位阻大，因而不能形成α-螺旋；
D 、β-折叠在蛋白质中反平行式较平行式稳定，所以蛋白质中只有反平行式。
27．根据下表选出正确答案：
样品液中蛋白质的组分 蛋白质的pI
蛋白质分子量MW(KD) A
6.2 40 B
4.5 30 C
7.8 60 D 8.3 80
①pH8.6条件下电泳一定时间，最靠近阳极的组分一般是（ ）；
②SephadexG 100柱层析时，最先洗脱出来的组分应该是（ ）。
28．前胰岛素原信号肽的主要特征是富含下列哪类氨基酸残基（ ）
A 、碱性氨基酸残基
B 、酸性氨基酸残基
C 、羟基氨基酸残基
D 、亲水性氨基酸残基
29．蛋白质三维结构的构象特征主要取决于（ ）
A 、氨基酸的组成、顺序和数目
B 、氢键、盐键、范德华力和疏水力
C 、温度、pH 和离子强度等环境条件
D 、肽链间或肽链内的二硫键
30．双缩脲法测定禾谷类作物样品中的蛋白质含量时，加入少量的四氯化碳（CCl4)其主要作用是（ ）
A 、促进双缩脲反应
B 、消除色素类对比色的干扰
C 、促进难溶性物质沉淀
D 、保持反应物颜色的稳定
31．醋酸纤维薄膜电泳时，下列说法不正确的一项是（ ）
A 、点样前醋酸纤维薄膜必须用纯水浸泡一定的时间，使处于湿润状态
B 、以血清为样品，pH8.6条件下，点样的一端应置于电泳槽的阴极一端
C 、电泳过程中保持恒定的电压（90～110V ）可使蛋白质组分有效分离
D 、点样量太多时,蛋白质组分相互粘联,指印谱带会严重拖尾，结果不易分析
三、是非判断（用“对”、“错”表示，并填入括号中）
1．胰岛素分子中含有两条多肽链，所以每个胰岛素分子是由两个亚基构成（ ）
2．蛋白质多肽链中氨基酸的种类数目、排列次序决定它的二级、三级结构，即一级结构含有高级结构的
结构信息。（ ）
3．肽键中相关的六个原子无论在二级或三级结构中，一般都处在一个刚性平面内。（ ）
4．构成天然蛋白质的氨基酸，其D －构型和L －型普遍存在。（ ）
5．变构效应是蛋白质及生物大分子普遍的性质，它有利于这些生物大分子功能的调节。（ ）
6．功能蛋白质分子中，只要个别氨基酸残基发生改变都会引起生物功能的丧失。（ ）
7．具有四级结构的蛋白质，当它的每个亚基单独存在时仍能保持蛋白质有的生物活性。（ ）
8．胰岛素分子中含有A 7-S-S-B 7，A 20-S-S-B 19和A 6-S-S-A 11三个二硫键，这些属于二级结构的内容。（ ）
v s v s v s v s + H
9．β-折叠是主肽链相当伸展的结构，因此它仅存在于某些纤维状蛋白质中。（）
10．在RNase（核糖核酸酶）分子中存在His12、His119侧链的咪唑基及Lys41-NH3由于多肽链是按特定方式折叠成一定空间结构，这三个在一级结构上相距甚远的氨基酸残基才彼此靠近构成RNase的催化中心。（）
11．变性后的蛋白质电泳行为不会改变（）
12．沉降系数S是蛋白质以及核酸分子量大小常用的表示单位。（）
13．调节溶液的pH值对盐析分离蛋白质影响不大。（）
14．Folin-酚试剂法测定蛋白质的灵敏度较高，但由于不同蛋白质含有酪氨酸的量不尽相同，会使测定结果往往带来较大偏差。（）
15．重金属盐对人畜的毒性，主要是重金属离子会在人体内与功能蛋白质结合引起蛋白质变性所致。（）16．利用蛋白质系数计算粗蛋白含量时对不同的生物样品都一样（即为6.25）。（）
17．胰蛋白酶作用时对肽键N-端氨基酸残基的要求是赖氨酸或精氨酸，这种专一性可称为基团专一性。（）
18．同源蛋白质中，保守性较强的氨基酸残基在决定蛋白质三维结构与功能方面起重要作用，因此致死性突变常常与它们的密码子突变有关。（）
O
19．肽平面或酰胺平面是因为－C－NH－结构中 C=0的π电子离域或说是sp2杂化N的孤对电子与 C=0 P-π共轭后引起的。（）
20．有两种蛋白质A和B的等电点分别是6.5和7.2，在pH为8.5的条件下同一静电场中A一定比B向异极泳动速度快。（）
21．多肽链出现180°回折的地方会形成转角，其中甘氨酸和脯氨酸常出现在β-转角处，因为其侧链较短，对4→1氢键形成空间位阻小。（）
22．苯丙氨酸疏水性比缬氨酸强（）
23．由于静电作用，在等电点时氨基酸的溶解度最小（）
24．渗透压法、超离心法、凝胶过滤法及PAGE（聚丙稀酰胺凝胶电泳）法都是利用蛋白质的物理化学性质来测定蛋白质的分子量的（）
25．当某种蛋白质分子的酸性氨基酸残基数目等于碱性氨基酸残基数目时，此蛋白质的等电点为7.0（）26．蛋白质的亚基（或称为亚单位）和肽是同义词（）
四、解释下列名词
1．二面角 2．蛋白质一级结构 3．蛋白质二级结构
4．蛋白质三级结构 5．蛋白质四级结构 6．超二级结构
7．别构效应 8．同源蛋白质 9．简单蛋白质
10．结合蛋白质 11．蛋白质变性作用 12．蛋白质盐析作用
13．蛋白质分段盐析 14．结构域 15．寡聚蛋白
16．构象 17．构型 18．肽单位
19．肽平面 20．α—螺旋 21．β—折叠或β—折叠片
22．超二级结构 23．β—转角 24．蛋白质的变性作用
25．蛋白质的复性作用 26．亚基
五、问答题
1．组成蛋白质的20种氨基酸依据什么分类？各类氨基酸的共同特性是什么？这种分类在生物学上有何重要意义？
2．蛋白质的基本结构与高级结构之间存在的关系如何？
3．Edman反应所有的试剂和反应的特点如何？
4．何谓蛋白质等电点？等电点时蛋白质的存在特点是什么？
5．何谓盐析？分段盐析粗分蛋白质的原理是什么？
6．哪些因素可引起蛋白质变性？变性后蛋白质的性质有哪些改变？
7．蛋白质分离分析技术常用的有哪几种，简述凝胶过滤、电泳基本原理。
8．有哪些沉淀蛋白质的方法？其中盐析和有机溶剂沉淀法有何区别或特点？
9．溴化氰在多肽裂解中的作用部位，和裂解产物的末端氨酸残基为何物？
10．举例说明蛋白质一级结构与功能关系。
11．举例说明蛋白质变构效应与意义。
12．一样品液中蛋白质组分为A（30KD）、B（20KD）、C（60KD），分析说明用SephadexG100凝胶过滤分离此样品时，各组分被洗脱出来的先后次序。
13．多聚赖氨酸（poly－Lys）在pH7时呈无规线团，在pH10时则呈α－螺旋；而多聚的谷氨酸酸（poly －Glu）在pH7时也呈无规线团，而在pH4时则呈α－螺旋，为什么？
14．简述胰蛋白酶原激活过程。
15．α－螺旋的特征是什么？如何以通式表示？
16．高浓度的硫酸铵（pH5时）可使麦清蛋白沉淀析出，并用于初步分离该种蛋白的早期步，简要说明其原理。
17．用阳离子交换柱层析一氨基酸混合液（洗脱剂：pH3.25，0.2N柠檬酸钠），其结果如下：①各洗脱峰的面积大小或高度有何含义？②Asp比Glu先洗脱出来的原因？
吸
光
度
洗脱剂流出体积
18．为什么鸡蛋清可用作铅中毒或汞中毒的解毒剂？
六、计算题
1．测得一种蛋白质分子中Trp残基占分子量的0.29%，计算该蛋白质的最低分子量（注：Trp的分子量为204Da）。
2．一种蛋白质按其重量含有1.65%亮氨酸和2.48%异亮氨酸，计算该蛋白质最低分子量。（注：两种氨基酸的分子量都是131Da）。
3．某种氨基酸α－COOHpK＝2.4，α－N＋H3pK＝9.6，ω－N＋H3pK＝10.6，计算该种氨基酸的等电点（pI）。4．某种四肽α－COOHpK＝2.4，α－N＋H3pK＝9.8，侧链－N＋H3pK＝10.6侧链－COOHpK＝4.2，试计算此种多肽的等电点（pI）是多少？
5．有一种多肽，其侧链上羧基30个（pK＝4.3），嘧唑基有10个（pK＝7），ε－N＋H3（pK＝10），设C末端α－羧基pK＝3.5，N－末端氨基pK＝9.5，计算此多肽的pI。
6．已知氨基酸平均分子量为120Da。有一种多肽的分子量是15120Da，如果此多肽完全以α－螺旋形式存在，试计算此α－螺旋的长度和圈数。
、
核酸
一、选择题
1．A TP分子中各组分的连结方式是：
A、R-A-P-P-P
B、A-R-P-P-P
C、P-A-R-P-P
D、P-R-A-P-P
E、P-A-P-R-P
2．决定tRNA携带氨基酸特异性的关键部位是：
A、3′末端
B、T C环
C、二氢尿嘧啶环
D、额外环
E、反密码子环
3．构成多核苷酸链骨架的关键是：
A、2′，3′－磷酸二酯键
B、2′，4′－磷酸二酯键
C、2′，5′－磷酸二酯键
D、3′，4磷酸二酯键
E、3′，5′－磷酸二酯键
4．含稀有碱基较多的核酸是：
A、核DNA
B、线粒体DNA
C、tRNA
D、mRNA
E、rRNA
5．有关DNA的叙述哪项绝对错误：
A、A＝T
B、G＝C
C、Pu=Py
D、C总=C+mC
E、A=G，T=C
6．真核细胞mRNA帽结构最多见的是：
A、m7ApppNmP
B、m7GpppNmP
C、m7UpppNmP
D、m7CpppNmP
E、m7TpppNmP
7．DNA变性后，下列那一项变化是正确的?
A、对260nm紫外吸收减少
B、溶液粘度下降
C、磷酸二酯键断裂
D、核苷键断裂
E、嘌吟环破裂
8．双链DNA的T m较高是由于下列哪组核苷酸含量较高所致:
A、A＋G
B、C＋T
C、A＋T
D、G＋C
E、A＋C
9．DNA复性的重要标志是:
A、溶解度降低
B、溶液粘度降低
C、紫外吸收增大
D、紫外吸收降低二、填空题
1．核酸可分为和两大类，前者主要存在于真核细胞的和原核细胞部位，后者主要存在于细胞的部位。
2．构成核酸的基本单位是，由、和3个部分组成.
3．在DNA和RNA中，核苷酸残基以互相连接，形成不分枝的链状分子。由于含氮碱基具有，所以核苷酸和核酸在nm处有最大紫外吸收值。
4．细胞的RNA主要包括、和3类，其中含量最多的是，分子量最小的是，半寿期最短的是。
5．核外DNA主要有、和。
6．RNA中常见的碱基是、、和。
7．DNA常见的碱基有、、和。其中嘧啶的氢键结合性质类似于RNA中的。
8．在含DNA和RNA的试管中加入稀的NaOH溶液，室温放置24小时后，被水解了。
9．核苷中，核糖及脱氧核糖与碱基间的糖苷键是键。
10．Watson-CrickDNA双螺旋每盘旋一圈有对核苷酸，高度为，直径为。
11．组成DNA的两条多核苷酸链是的，两链的碱基顺序，其中与配对，形成个氢键，与配对，形成个氢键。
12．由于连接互补碱基的两个糖苷键并非彼此处于对角线的两端，在DNA双螺旋的表面形成较宽的和较窄的。
13．维持DNA双螺旋结构的主要作用力是、、。
14．核酸变性时，260nm紫外吸收显著升高，称为；变性的DNA复性时，紫外吸收回复到原来水平，称为。
15．DNA热变性呈现出，同时伴随A260增大，吸光度增幅中点所对应的温度叫做，用符号表示，其值的大小与DNA中碱基对含量呈正相关。
16．DNA在水溶液中热变性后，如果将溶液迅速冷却，则大部分DNA保持状态，若使溶液缓慢冷却，则DNA重新形成。
17．稀有核苷 中的糖苷键是连接。
18．RNA一般以存在，链中自身互补的反平行序列形成结构，这种结构与它们间的单链组成结构。
19．病毒和噬菌体只含一种核酸，有的只有，另一些只有。
20．染色质的基本结构单位是，由核心和它外侧盘绕的组成，核心由各两分子组成，核小体之间由相互连接，并结合有。
21．tRNA的二级结构呈型，三级结构呈型，其3'末端有一共同碱基序列，其功能是。
22．真核细胞的mRNA帽子由组成，其尾部由组成，帽子的功能是，尾巴的功能是。
23．含氧的碱基有烯醇式和酮式两种互变异构体，在生理pH条件下，主要以
式存在，这有利于形成。
三、是非题
1．DNA是生物遗传物质，RNA则不是。
2．同种生物体不同组织中的DNA，其碱基组成也不同。
3．核小体是构成染色体的基本单位。
4．多核苷酸链内共价键断裂叫变性。
5．DNA的T m值和A-T含量有关，A-T含量高则T m高。
6．真核生物mRNA的5'端有一个多聚A的结构。
7．DNA分子含有等摩尔数的A、G、T、C。
8．真核细胞的DNA全部定位于细胞核。
9．B－DNA代表细内DNA的基本构象，在某些情况下，还会呈现A型，Z型和三股螺旋的局部构象。
10．构成RNA分子中局部双螺旋的两个片段也是反向平行的。
11．复性后DNA分子中的两条链并不一定是变性之前的两条互补链。
12．自然界的DNA都是双链的，RNA都是单链的。
四、名词解释
反密码子Chargaff规则核酸的变性核酸的复性退火增色效应减色效应发夹结构分子杂交DNA的解链(溶解)温度碱基堆积力超螺旋DNA DNA的一级结构DNA的二级结构
五、问答题
1．核酸的组成和在细胞内的分布如何?
2．核酸分子中单核苷酸间是通过什么键连接起来的？什么是碱基配对？
3．简述DNA和RNA分子的立体结构，它们各有哪些特点？稳定DNA结构的力有哪些？
4．下列三种DNA中，哪个的T m值最高？哪个的T m值最低？为什么？
A、AAGTTCTCTGAA TTA
B、AGTCGTCAATGCATT
C、GGATCTCCAAGTCAT
TTCAAGAGACTTAAT TCAGCAGTTACGTAA CCTAGAGGTTCAGTA 5．将下列DNA分子加热变性，再在各自的最适温度下复性，哪种DNA复性形成原来结构的可能性更大？为什么？
A、ATATATATAT
B、TAGACGATGC
TATATATATA A TCTGCTACG
6．真核mRNA和原核mRNA各有何异同特点?
六、计算题
1．由结核分枝杆菌提纯出含有15.1％（按摩尔计算）的腺嘌呤的DNA样品，计算其它碱基的百分含量。
2．计算分子量为3×107的双螺旋DNA分子的长度，含有多少螺旋（按一对脱氧核苷酸的平均分子量为618计算）？
3．人体有1014个细胞，每个体细胞含有6.4×109对核苷酸，试计算人体DNA的总长度（Km）。
糖类化学
一、填空题
1.纤维素是由________________组成,它们之间通过________________糖苷键相连。
2.常用定量测定还原糖的试剂为________________试剂和________________试剂。
3.人血液中含量最丰富的糖是________________,肝脏中含量最丰富的糖是________________,肌肉中含量最丰富的糖是________________。
4.乳糖是由一分子________________和一分子________________组成,它们之间通过________________糖苷键相连。
5.鉴别糖的普通方法为________________试验。
6.蛋白聚糖是由________________和________________共价结合形成的复合物。
7.糖苷是指糖的________________和醇、酚等化合物失水而形成的缩醛(或缩酮)等形式的化合物。
8.判断一个糖的D-型和L-型是以________________碳原子上羟基的位置作依据。
9.多糖的构象大致可分为________________、________________、________________和________________四种类型,决定其构象的主要因素是________________。
二、是非题
1.[ ]果糖是左旋的，因此它属于L-构型。
2.[ ]从热力学上讲,葡萄糖的船式构象比椅式构象更稳定。
3.[ ]糖原、淀粉和纤维素分子中都有一个还原端,所以它们都有还原性。
4.[ ]同一种单糖的α-型和β-型是对映体。
5.[ ]糖的变旋现象是指糖溶液放置后,旋光方向从右旋变成左旋或从左旋变成右旋。
6.[ ]D-葡萄糖的对映体为L-葡萄糖,后者存在于自然界。
7.[ ]D-葡萄糖,D-甘露糖和D-果糖生成同一种糖脎。
8.[ ]糖链的合成无模板,糖基的顺序由基因编码的转移酶决定。
9.[ ]醛式葡萄糖变成环状后无还原性。
10.[ ]肽聚糖分子中不仅有L-型氨基酸,而且还有D-型氨基酸。
三、选择题
1.[ ]下列哪种糖无还原性?
A.麦芽糖
B.蔗糖
C.阿拉伯糖
D.木糖
E.果糖
2.[ ]环状结构的己醛糖其立体异构体的数目为
A.4
B.3
C.18
D.32
E.64
3.[ ]下列物质中哪种不是糖胺聚糖?
A.果胶
B.硫酸软骨素
C.透明质酸
D.肝素
E.硫酸粘液素
4.[ ]下图的结构式代表哪种糖？
A.α-D-葡萄糖
B.β-D-葡萄糖
C.α-D-半乳糖
D.β-D-半乳糖
E.α-D-果糖
5.[ ]下列有关葡萄糖的叙述,哪个是错的?
A.显示还原性
B.在强酸中脱水形成5-羟甲基糠醛
C.莫利希(Molisch)试验阴性
D.与苯肼反应生成脎
E.新配制的葡萄糖水溶液其比旋光度随时间而改变
6.[ ]糖胺聚糖中不含硫的是
A.透明质酸
B.硫酸软骨素
C.硫酸皮肤素
D.硫酸角质素
E.肝素
7.[ ]下列哪种糖不能生成糖脎?
A.葡萄糖
B.果糖
C.蔗糖
D.乳糖
E.麦芽糖
8.[ ]下列四种情况中,哪些尿能和班乃德(Benedict)试剂呈阳性反应?
(1).血中过高浓度的半乳糖溢入尿中(半乳糖血症)
(2).正常膳食的人由于饮过量的含戊醛糖的混合酒造成尿中出现戊糖(戊糖尿)
(3).尿中有过量的果糖(果糖尿)
(4).实验室的技术员错把蔗糖加到尿的样液中
A.1,2,3
B.1,3
C.2,4
D.4
E.1,2,3,4
9.[ ]α-淀粉酶水解支链淀粉的结果是
(1).完全水解成葡萄糖和麦芽糖
(2).主要产物为糊精
(3).使α-1,6糖苷键水解
(4).在淀粉-1,6-葡萄糖苷酶存在时,完全水解成葡萄糖和麦芽糖
A.1,2,3
B.1,3
C.2,4
D.4
E.1,2,3,4
10.[ ]有关糖原结构的下列叙述哪些是正确的?
(1).有α-1,4糖苷键
(2).有α-1,6糖苷键
(3).糖原由α-D-葡萄糖组成
(4).糖原是没有分支的分子
A.1,2,3
B.1,3
C.2,4
D.4
E.1,2,3,4
四、问答与计算
1.大肠杆菌糖原的样品25mg,用2ml 1mol/L H2SO4水解。水解液中和后,再稀释到10ml。最终溶液的葡萄糖含量为
2.35mg/ml。分离出的糖原纯度是多少?
2.
上述化合物中(1)哪个是半缩酮形式的酮糖？(2)哪个是吡喃戊糖？(3)哪个是糖苷？(4)哪个是α-D-醛糖？
3.五只试剂瓶中分别装的是核糖、葡萄糖、果糖、蔗糖和淀粉溶液,但不知哪只瓶中装的是哪种糖液,可用什么最简便的化学方法鉴别?
酶
一、填空题
1．酶是产生的，具有催化活性的。
2．T.Cech从自我剪切的RNA中发现了具有催化活性的，称之为这是对酶概念的重要发展。
3．结合酶是由和两部分组成，其中任何一部分都催化活性，只有才有催化活性。
4．有一种化合物为Ａ－Ｂ，某一酶对化合物的Ａ，Ｂ基团及其连接的键都有严格的要求，称为，若对Ａ基团和键有要求称为，若对Ａ，Ｂ之间的键合方式有要求则称为。
5．酶发生催化作用过程可表示为Ｅ＋Ｓ→ＥＳ→Ｅ＋Ｐ，当底物浓度足够大时，酶都转变为此时酶促反应速成度为。
6．竞争性抑制剂使酶促反应的km 而Vmax 。
7．磺胺类药物能抑制细菌生长，因为它是结构类似物，能性地抑制酶活性。
8．当底物浓度远远大于Km，酶促反应速度与酶浓度。
9．PH对酶活力的影响，主要是由于它和。
10．温度对酶作用的影响是双重的：①②。
11．同工酶是一类酶，乳酸脱氢酶是由种亚基组成的四聚体，有种同工酶。
12．与酶高催化效率有关的因素有、、、
和活性中心的。
13．对于某些调节酶来说，、Ｖ对［Ｓ］作图是Ｓ形曲线是因为底物结合到酶分子上产生的一种效应而引起的。
14．测定酶活力时要求在特定的和条件下，而且酶浓度必须底物浓度。
15．解释别构酶变构机理，主要有和两种。
16．能催化多种底物进行化学反应的酶有个Km值，该酶最适底物的Km 值。
17.与化学催化剂相比，酶具有 、 、 和
等催化特性。
18．在某一酶溶液中加入Ｇ-ＳＨ能提出高此酶活力，那么可以推测 基可能是酶活性中心
的必需基团。
19．影响酶促反应速度的因素有 、 、 、
、 、 。
20．从酶蛋白结构看，仅具有三级结构的酶为 ，具有四级结构的酶
，而在系列反应中催化一系列反应的一组酶为 。
二、选择题
1．有四种辅因子(1)NAD ，(2)FAD ，（3）磷酸吡哆素，（4）生物素，属于转移基团的辅酶因子为：
A 、(1)(3)
B 、(2)(4)
C 、(3)(4)
D 、(1)(4)
2．哪一种维生素具有可逆的氧化还原特性：
A 、硫胺素
B 、核黄素
C 、生物素
D 、泛酸
3．含B 族维生素的辅酶在酶促反应中的作用是：
A 、传递电子、质子和化学基团
B 、稳定酶蛋白的构象
C 、提高酶的催化性质
D 、决定酶的专一性
4．有机磷农药作为 酶的抑制剂是作用于酶活性中心的：
A 、巯基
B 、羟基
C 、羧基
D 、咪唑基
5．从组织中提取酶时，最理想的结果是：
A 、蛋白产量最高
B 、转换系数最高
C 、酶活力单位数值很大
D 、比活力最高
6．同工酶鉴定最常用的电泳方法是：
A 、纸电泳
B 、SDS —聚丙烯酰胺凝胶电泳
C 、醋酸纤维薄膜电泳
D 、聚丙烯酰胺凝胶电泳
7．酶催化底物时将产生哪种效应
A 、提高产物能量水平
B 、降低反应的活化能
C 、提高反应所需活化能
D 、降低反应物的能量水平
8．下列不属于酶催化高效率的因素为：
A 、对环境变化敏感
B 、共价催化
C 、靠近及定向
D 、微环境影响
9．米氏常数：
A 、随酶浓度的增加而增加
B 、随酶浓度的增加而减小
C 、随底物浓度的增加而增大
D 、是酶的特征常数
10．下列哪种辅酶结构中不含腺苷酸残基：
A 、FAD
B 、NADP+
C 、辅酶Q
D 、辅酶A
11．下列那一项符合“诱导契合”学说：
A 、酶与底物的关系如锁钥关系
B 、酶活性中心有可变性，在底物的影响下其空间构象发生一定的改变，才能
与底物进行反应。
C 、底物的结构朝着适应活性中心方向改变而酶的构象不发生改变。
D 、底物类似物不能诱导酶分子构象的改变
12.下列各图属于非竞争性抑制动力学曲线是:
V 1 V 1 V 1
[I] O [I] O [I]
O
[]S 1 []S 1 []S 1 m K 1 m K 1 m
K 1 A B C
13．关于米氏常数Km 的说法，哪个是正确的？
A 、饱和底物浓度时的速度
B 、在一定酶浓度下，最大速度的一半
C 、饱和底物浓度的一半
D 、速度达最大速度一半时的底物浓度
14．酶的竞争性抑制剂具有下列哪种动力学效应：
A 、Vm 不变，Km 增大
B 、Vm 不变，Km 减小
C 、Vm 增大，Km 不变
D 、Vm 减小，K m 不变
15．下面关于酶的描述，哪一项不正确：
A 、所有的酶都是蛋白质
B 、酶是生物催化剂
C 、酶具有专一性
D 、酶是在细胞内合成的，但也可以在细胞外发挥催化功能
16．催化下列反应的酶属于哪一大类：
1，6—二磷酸果糖 3-磷酸甘油醛+磷酸二羟丙酮
A 、水解酶
B 、裂解酶
C 、氧化还原酶
D 、转移酶
17．下列哪一项不是辅酶的功能：
A 、传递氢
B 、转移基团
C 、决定酶的专一性
D 、某些物质分解代谢时的载体
18．下列关于酶活性中心的描述，哪一项是错误的：
A 、活性中心是酶分子中直接与底物结合，并发挥催化功能的部位
B 、活性中心的基团按功能可分为两类，一类是结合基团，一类是催化基团
C 、酶活性中心的基团可以是同一条肽链但在一级结构上相距很远的基团
D 、不同肽链上的有关基团不能构成该酶的活性中心
19．下列哪一种抑制剂不是瑚珀酸脱氢酶的竞争性抑制剂：
A 、乙二酸
B 、丙二酸
C 、丁二酸
D 、碘乙酸
20．酶原激活的实质是：
A 、激活剂与酶结合使酶激活
B 、酶蛋白的别构效应
C 、酶原分子空间构象发生了变化而一级结构不变
D 、酶原分子一级结构发生改变从而形成或暴露出活性中心
21．酶原激活的生理意义是：
A 、加速代谢
B 、恢复酶活性
C 、生物自我保护的方式
D 、保护酶的方式
22．一个简单的米氏酶催化反应，当[S]< A 、反应速度最大 B 、底物浓度与反应速度成正比 C 、增加酶浓度，反应速度显著变大 D 、[S]浓度增加，Km 值也随之变大 23．下列哪一项不能加速酶促反应速度： A 、底物浓集在酶活性中心 B 、使底物的化学键有适当方向 C 、升高反应的活化能 D 、提供酸性或碱性侧链基团作为质子供体或受体 24．关于酶的抑制剂的叙述正确的是： A 、酶的抑制剂中一部分是酶的变性剂 B 、酶的抑制剂只与活性中心上的基团结合 C 、酶的抑制剂均能使酶促反应速度下降 D 、酶的抑制剂一般是大分子物质 25．胰蛋白酶原经肠激酶作用后切下六肽，使其形成有活性的酶，这一步骤是: A、诱导契合 B、酶原激活 C、反馈调节 D、同促效应 26．酶的比活力是指： A、任何纯酶的活力与其粗酶的活力比 B、每毫克蛋白的酶活力单位数 C、每毫升反应混合液的活力单位 D、以某种酶的活力作为1来表示其他酶的相对活力 27．泛酸是下列哪一过程的辅酶组成成分： A、脱羧作用 B、乙酰化作用 C、脱氢作用 D、氧化作用 28．下列哪一种维生素是辅酶A的前体： A、核黄素 B、泛酸 C、钴胺素 D、吡哆胺 29．下列那种维生素衍生出了TPP: A、维生素B1 B、维生素B2 C、维生素B5 D、生物素 30．某一酶的动力学资料如下图，它的Km为： 6 1/V 4 -3-2-10 1 2 3 1/[S] A、2 B、3 C、0.33 D、0.5 三、是非题 1．测定酶活力时，底物的浓度不必大于酶的浓度。 2．酶促反应的初速度与底物浓度无关。 3．当底物处于饱和水平时，酶促反应的速度与酶浓度成正比。 4．酶有几种底物时，其Km值也不相同。 5．某些调节酶的V---S的S形曲线表明，酶与少量底物的结合增加了酶对后续底物的亲和力。 6．在非竟争性抑制剂存在下，加入足够量的底物，酶促反应能够达到正常的Vm.。 7．如果有一个合适的酶存在，达到过渡态所需的活化能就减少。 8．T.Cech从自我剪切的RNA中发现了有催化活性的RNA,称之为核酶。 9．同工酶指功能相同、结构相同的一类酶。 10．最适温度是酶特征的物理常数，它与作用时间长短有关。 11．酶促反应中，酶饱和现象是普遍存在的。 12．转氨酶的辅酶是吡哆醛。 13．酶之所以有高的催化效率是因为它可提高反应活化能。 14．对于多酶体系，正调节物一般是别构酶的底物，负调节物一般是别构酶的直接产物或代谢序列的最终产物 15．对共价调节酶进行共价修饰是由非酶蛋白进行的。 16．反竞争性抑制作用的特点是Km值变小，Vm也变小。 17．别构酶调节机制中的齐变模型更能解释负协同效应。 四、计算题 1．某底物在溶液中的浓度为0.001mmol,而其活性中心的浓度的为100mmol,求活性中心的浓度比溶液中的的浓度高多少倍？ 2．酶作用于某底物的米氏常数为0.005mol,其反应速度分别为最大反应速度 90%,50%,10%时，底物浓度应为多少？ 3．催化焦磷酸水解的酶的分子量为120 000 ,由六个相同的亚基组成，纯酶的比活力为3600U/mg酶，它的一个活力单位（U）规定为：15分钟内在37℃标准条件下水解10微摩尔焦磷酸的酶量。 求：（1）每mg酶在每秒钟内水解多少摩尔底物。（2）每mg酶中有多少摩尔的活性中心？（假设每个亚基上有一个活性中心）。(3)酶的转换系数 4．称取25mg的蛋白酶粉配制成25ml酶液，从中取出0.1ml,以酪蛋白为底物用Folin-酚比色法测定酶活力，结果表明每小时产生1500μg酪氨酸。另取2ml酶液，用凯氏定氮法测得蛋白氮为0.2mg。若以每分钟产生1μg酪氨酸的量为1个活力单位计算，根据以上数据，求：A、1ml酶液中蛋白的含量及活力单位。 B .1g酶制剂的总蛋白含量及总活力。 C . 酶比活力 5．某酶的Km=4.7×10-5mol/L；Vmax=22μmol/min。当[S]=2×10-4mol/L，[I]=5×10-4mol/L，Ki=3×10-4mol/L 时，求：I为竞争性抑制和非竞争性抑制时，V分别是多少？ 五、名词解释 酶的活性中心酶的专一性竞争性抑制作用非竞争性抑制作用别构酶别构效应同工酶酶的比活力酶原激活寡聚酶酶的转换数辅酶和辅基诱导契合全酶别构酶的序变模型及齐变模型固化酶多酶体系 RNA酶过渡态 六、问答题 1．为什么处于低介电环境中的基团之间的反应会得到加强？ 2．影响酶高催化效率的因素及其机理是什么？为什么说咪唑基是酸碱催化中的重要基团? 3．什么是别构效应？简述别构酶的结构和动力学特点及其在调节酶促反应中的作用。 4．某酶在溶液中会丧失活性，但若此溶液中同时存在巯基乙醇可以避免酶失活，该酶应该是一种什么酶，为什么？ 5．测定酶活力时为什么以初速度为准？ 6．为什么酶的最适pH不是一个物理常数？ 7．羧肽酶A催化甘氨酰酪氨酸水解时，其催化机制的几个效应是什么？ 8．同工酶作为一个重要生化指标，主要用于哪些研究领域？ 生物膜 一、选择题 1．磷脂酰肌醇分子中的磷酸肌醇部分是这种膜脂的那个部分？ A、亲水尾部 B、疏水头部 C、极性头部 D、非极性尾部 2．在生理条件下，膜脂主要处于什么状态？ A、液态 B、固态 C、液晶态 D、凝胶态 3．以下那种因素不影响膜脂的流动性？ A、膜脂的脂肪酸组分 B、胆固醇含量 C、糖的种类 D、温度 4．哪种组分可以用磷酸盐缓冲液从生物膜上分离下来？ A、外周蛋白 B、嵌入蛋白 C、跨膜蛋白 D、共价结合的糖类 5．哪些组分需要用去垢剂或有机溶剂从生物膜上分离下来？ A、外周蛋白 B、嵌入蛋白 C、共价结合的糖类 D、膜脂的脂肪酸部分 6．以下哪种物质几乎不能通过扩散而通过生物膜? A、H2O B、H+ C、丙酮 D、乙醇 7．下列各项中,哪一项不属于生物膜的功能: A、主动运输 B、被动运输 C、能量转化 D、生物遗传 8．当生物膜中不饱和脂肪酸增加时，生物膜的相变温度: A、增加 B、降低 C、不变 D、范围增大 9．生物膜的功能主要主要决定于: A、膜蛋白 B、膜脂 C、糖类 D、膜的结合水 10．人们所说的“泵”是指： A、载体 B、膜脂 C、主动运输的载体 D、膜上的受体 11．已知细胞内外的Ca2+是外高内低，那么Ca2+从细胞内向细胞外运输属于哪种方式？ A、简单扩散 B、促进扩散 C、外排作用 D、主动运输 二、填空题 1．构成生物膜的三类膜脂是 、 和 。 2． 是生物膜中常见的极性脂，它又可分为 和 两类。 3．耐寒植物的膜脂中 脂肪酸含量较高，从而使膜脂流动性 ,相变温 度 。 4．当温度高于膜脂的相变温度时，膜脂处于 相，温度低于相变温度时则处于 相。 5．胆固醇可使膜脂的相变温度范围 ，对膜脂的 性具有一定的调节功能。 6．膜的独特功能由特定的 执行,按照在膜上的定位,膜蛋白可分为 和 。 7．下图中 为外周蛋白， 为嵌入蛋白，其中 为跨膜蛋白。 生物膜 8．1972年 提出生物膜的“流动镶嵌模型”，该模型突出了膜的 性和膜蛋白分布的 性。 9．被动运输是 梯度进行的，溶质的净运输从 侧向 侧扩散,该运输方式包括 和 两种。 10．主动运输是 梯度进行的，必须借助于某些 来驱动。 三、是非题 1．质膜中与膜蛋白和膜脂共价结合的糖都朝向细胞外侧定位。 2．生物膜是由极性脂和蛋白质通过非共价键形成的片状聚集体，膜脂和膜蛋白都可以自由地进行侧 向扩散和翻转扩散。 3．膜的独特功能由特定的蛋白质执行的，功能越复杂的生物膜，膜蛋白的含量越高。 4．生物膜的不对称性仅指膜蛋白的定向排列，膜脂可做侧向扩散和翻转扩散，在双分子层中的分布 是相同的。 5．各类生物膜的极性脂均为磷脂、糖脂和胆固醇。 6．主动运转有两个显著特点：一是逆浓度梯度进行，因而需要能量驱动，二是具有方向性。 7．膜上的质子泵实际上是具有定向转运H ＋和具有A TP 酶活性的跨膜蛋白。 8．所有的主动运输系统都具有ATPase 活性。 9．极少数的膜蛋白通过共价键结合于膜脂。 10．膜脂的双分子层结构及其适当的流动性是膜蛋白保持一定构象表现正常功能的必要条件。 11．在相变温度以上，胆固醇可增加膜脂的有序性，限制膜脂的流动性；在相变温度以下，胆固醇又 可扰乱膜脂的有序性，从而增加膜脂的流动性。 四、名词解释 极性脂 中性脂 脂双层分子 外周蛋白 嵌入蛋白 跨膜蛋白 相变温度 液晶相 主动运 输 被动运输 简单扩散 促进扩散 质子泵 五、问答题 1．正常生物膜中，脂质分子以什么的结构和状态存在？ 2．流动镶嵌模型的要点是什么？ 3．外周蛋白和嵌入蛋白在提取性质上有那些不同？现代生物膜的结构要点是什么？ A B C D E F G 4．什么是生物膜的相变？生物膜可以几种状态存在？ 5．什么是液晶相？它有何特点？ 6．影响生物膜相变的因素有那些？他们是如何对生物膜的相变影响的？ 7．物质的跨膜运输有那些主要类型？各种类型的要点是什么？ 生物氧化与氧化磷酸化 一、选择题 1．生物氧化的底物是： A、无机离子 B、蛋白质 C、核酸 D、小分子有机物 2．除了哪一种化合物外，下列化合物都含有高能键？ A、磷酸烯醇式丙酮酸 B、磷酸肌酸 C、ADP D、G-6-P E、1,3-二磷酸甘油酸 3．下列哪一种氧化还原体系的氧化还原电位最大？ A、延胡羧酸→丙酮酸 B、CoQ(氧化型) →CoQ(还原型) C、Cyta Fe2+→Cyta Fe3+ D、Cytb Fe3+→Cytb Fe2+ E、NAD+→NADH 4．呼吸链的电子传递体中，有一组分不是蛋白质而是脂质，这就是： A、NAD+ B、FMN C、FE、S D、CoQ E、Cyt 5．2,4－二硝基苯酚抑制细胞的功能,可能是由于阻断下列哪一种生化作用而引起? A、NADH脱氢酶的作用 B、电子传递过程 C、氧化磷酸化 D、三羧酸循环 E、以上都不是 6．当电子通过呼吸链传递给氧被CN-抑制后，这时偶联磷酸化： A、在部位1进行 B、在部位2 进行 C、部位1、2仍可进行 D、在部位1、2、3都可进行 E、在部位1、2、3都不能进行，呼吸链中断 7．呼吸链的各细胞色素在电子传递中的排列顺序是： A、c1→b→c→aa3→O2 B、c→c1→b→aa3→O2 C、c1→c→b→aa3→O2 D、b→c1→c→aa3→O2 8．在呼吸链中，将复合物错误！未找到引用源。、复合物错误！未找到引用源。与细胞色素系统连接起来的物质是什么？ A、FMN B、Fe·S蛋白 C、CoQ D、Cytb 9．下述那种物质专一的抑制F0因子？ A、鱼藤酮 B、抗霉素A C、寡霉素 D、苍术苷 10．下列各种酶中，不属于植物线粒体电子传递系统的为： A、内膜外侧NADH：泛醌氧化还原酶 B、内膜内侧对鱼藤酮不敏感NADH脱氢酶 C、抗氰的末端氧化酶 D、 －磷酸甘油脱氢酶 11．下列呼吸链组分中，属于外周蛋白的是： A、NADH脱氢酶 B、辅酶Q C、细胞色素c D、细胞色素a- a3 12．下列哪种物质抑制呼吸链的电子由NADH向辅酶Q的传递： A、抗霉素A B、鱼藤酮 C、一氧化碳 D、硫化氢 13．下列哪个部位不是偶联部位： A、FMN→CoQ B、NADH→FMA C、b→c D、a1a3→O2 14．ATP的合成部位是： A、OSCP B、F1因子 C、F0因子 D、任意部位 15．目前公认的氧化磷酸化理论是： A、化学偶联假说 B、构象偶联假说 C、化学渗透假说 D、中间产物学说 16．下列代谢物中氧化时脱下的电子进入FADH2电子传递链的是： A、丙酮酸 B、苹果酸 C、异柠檬酸 D、磷酸甘油 17．下列呼吸链组分中氧化还原电位最高的是： A、FMN B、Cytb C、Cytc D、Cytc1 18．ATP含有几个高能键： A、1个 B、2个 C、3个 D、4个 19．证明化学渗透学说的实验是： A、氧化磷酸化重组 B、细胞融合 C、冰冻蚀刻 D、同位素标记 20．ATP从线粒体向外运输的方式是： A、简单扩散 B、促进扩散 C、主动运输 D、外排作用 二、填空题 1．生物氧化是在细胞中，同时产生的过程。 2．反应的自由能变化用来表示，标准自由能变化用表示，生物化学中pH7.0时的标准自由能变化则表示为。 3．高能磷酸化合物通常是指水解时的化合物，其中重要的是，被称为能量代谢的。 4．真核细胞生物氧化的主要场所是，呼吸链和氧化磷酸化偶联因子都定位于。 5．以NADH为辅酶的脱氢酶类主要是参与作用，即参与从到 的电子传递作用；以NADPH为辅酶的脱氢酶类主要是将分解代谢中间产物上的转移到反应中需电子的中间物上。 6．由NADH→O2的电子传递中，释放的能量足以偶联A TP合成的3个部位是、和。 7．鱼藤酮、抗霉素A和CN-、N3－、CO的抑制部位分别是、 和。 8．解释电子传递氧化磷酸化机制的三种假说分别是、 和，其中得到多数人的支持。 9．生物体内磷酸化作用可分为、和。 10．人们常见的解偶联剂是，其作用机理是。 11．NADH经电子传递和氧化磷酸化可产生个ATP，琥珀酸可产生个ATP。 12．当电子从NADH经传递给氧时，呼吸链的复合体可将对H+从泵到，从而形成H+的梯度，当一对H+经回到线粒体时，可产生个ATP。 13．F1-F0复合体由部分组成，其F1的功能是，F0的功能是，连接头部和基部的蛋白质叫。可抑制该复合体的功能。 14．动物线粒体中，外源NADH可经过系统转移到呼吸链上，这种系统有种，分别为和；而植物的外源NADH是经过将电子传递给呼吸链的。 15．线粒体内部的ATP是通过载体，以方式运出去的。 16．线粒体外部的磷酸是通过方式运进来的。 三、是非题 1．在生物圈中，能量从光养生物流向化养生物，而物质在二者之间循环。 2．磷酸肌酸是高能磷酸化合物的贮存形式，可随时转化为ATP供机体利用。 3．解偶联剂可抑制呼吸链的电子传递。 4．电子通过呼吸链时，按照各组分的氧化还原电势依次从还原端向氧化端传递。 5．生物化学中的高能键是指水解断裂时释放较多自由能的不稳定键。 6．NADPH/NADP+的氧化还原电势稍低于NADH/NAD+，更容易经呼吸链氧化。 7．植物细胞除了有对CN-敏感的细胞色素氧化酶外，还有抗氰的末端氧化酶。 8．ADP的磷酸化作用对电子传递起限速作用。 四、名词解释 生物氧化高能化合物P/O 穿梭作用能荷F1-F0复合体高能键电子传递抑制剂解偶联剂氧化磷酸化抑制剂 五、问答题 1．生物氧化的特点和方式是什么？ 2．CO2与H2O以哪些方式生成？ 3．简述化学渗透学说。 4．A TP具有高的水解自由能的结构基础是什么？为什么说A TP是生物体内的“能量通货”？ 糖代谢 一、选择题 1．果糖激酶所催化的反应产物是： A、F-1-P B、F-6-P C、F-1,6-2P D、G-6-P E、G-1-P 2．醛缩酶所催化的反应产物是： A、G-6-P B、F-6-P C、1,3-二磷酸甘油酸 D、3－磷酸甘油酸 E、磷酸二羟丙酮 3．14C标记葡萄糖分子的第1,4碳原子上经无氧分解为乳酸，14C应标记在乳酸的： A、羧基碳上 B、羟基碳上 C、甲基碳上 D、羟基和羧基碳上 E、羧基和甲基碳上 4．哪步反应是通过底物水平磷酸化方式生成高能化合物的？ A、草酰琥珀酸→α－酮戊二酸 B、α－酮戊二酸→琥珀酰CoA C、琥珀酰CoA→琥珀酸 D、琥珀酸→延胡羧酸 E、苹果酸→草酰乙酸 5．糖无氧分解有一步不可逆反应是下列那个酶催化的？ A、3－磷酸甘油醛脱氢酶 B、丙酮酸激酶 C、醛缩酶 D、磷酸丙糖异构酶 E、乳酸脱氢酶 6．丙酮酸脱氢酶系催化的反应不需要下述那种物质？ A、乙酰CoA B、硫辛酸 C、TPP D、生物素 E、NAD+ 7．三羧酸循环的限速酶是： A、丙酮酸脱氢酶 B、顺乌头酸酶 C、琥珀酸脱氢酶 D、异柠檬酸脱氢酶 E、延胡羧酸酶 8．糖无氧氧化时，不可逆转的反应产物是： A、乳酸 B、甘油酸－3－P C、F－6－P D、乙醇 9．三羧酸循环中催化琥珀酸形成延胡羧酸的琥珀酸脱氢酶的辅助因子是： A、NAD+ B、CoA-SH C、FAD D、TPP E、NADP+ 10．下面哪种酶在糖酵解和糖异生作用中都起作用： A、丙酮酸激酶 B、丙酮酸羧化酶 C、3－磷酸甘油酸脱氢酶 D、己糖激酶 E、果糖－1,6－二磷酸酯酶 11．催化直链淀粉转化为支链淀粉的酶是： A、R酶 B、D酶 C、Q酶 D、α－1,6糖苷酶 12．支链淀粉降解分支点由下列那个酶催化？ A、α和β－淀粉酶 B、Q酶 C、淀粉磷酸化酶 D、R—酶 13．三羧酸循环的下列反应中非氧化还原的步骤是： A、柠檬酸→异柠檬酸 B、异柠檬酸→α－酮戊二酸 C、α－酮戊二酸→琥珀酸 D、琥珀酸→延胡羧酸 14．一分子乙酰CoA经三羧酸循环彻底氧化后产物是: A、草酰乙酸 B、草酰乙酸和CO2 C、CO2+H2O D、CO2,NADH和FADH2 15．关于磷酸戊糖途径的叙述错误的是: A、6－磷酸葡萄糖转变为戊糖 B、6－磷酸葡萄糖转变为戊糖时每生成1分子CO2，同时生成1分子NADH＋H C、6－磷酸葡萄糖生成磷酸戊糖需要脱羧 D、此途径生成NADPH＋H+和磷酸戊糖 16．由琥珀酸→草酰乙酸时的P/O是： A、2 B、2.5 C、3 D、3.5 E、4 17．胞浆中1mol乳酸彻底氧化后，产生的ATP数是： A、9或10 B、11或12 C、13或14 D、15或16 E、17或18 18．胞浆中形成的NADH＋H+经苹果酸穿梭后，每mol产生的ATP数是： A、1 B、2 C、3 D、4 E、5 19．下述哪个酶催化的反应不属于底物水平磷酸化反应： A、磷酸甘油酸激酶 B、磷酸果糖激酶 C、丙酮酸激酶 D、琥珀酸辅助A合成酶 20．1分子丙酮酸完全氧化分解产生多少CO2和A TP？ A、3 CO2和15A TP B、2CO2和12ATP C、3CO2和16ATP D、3CO2和12ATP 21．高等植物体内蔗糖水解由下列那种酶催化？ A、转化酶 B、磷酸蔗糖合成酶 C、ADPG焦磷酸化酶 D、蔗糖磷酸化酶 22．α－淀粉酶的特征是： A、耐70℃左右的高温 B、不耐70℃左右的高温 C、在pH7.0时失活 D、在pH3.3时活性高 23．关于三羧酸循环过程的叙述正确的是： A、循环一周可产生4个NADH＋H+ B、循环一周可产生2个ATP C、丙二酸可抑制延胡羧酸转变为苹果酸 D、琥珀酰CoA是α－酮戊二酸转变为琥珀酸是的中间产物 24．支链淀粉中的α－1,6支点数等于： A、非还原端总数 B、非还原端总数减1 C、还原端总数 D、还原端总数减1 二、填空题 1．植物体内蔗糖合成酶催化的蔗糖生物合成中葡萄糖的供体是，葡萄糖基的受体是；在磷酸蔗糖合成酶催化的生物合成中，葡萄糖基的供体是，葡萄糖基的受体是。 2．α和β淀粉酶只能水解淀粉的键，所以不能够使支链淀粉彻底水解。 3．淀粉磷酸化酶催化淀粉降解的最初产物是。 4．糖酵解在细胞内的中进行,该途径是将转变为,同时生成 实验一基因的PCR扩增技术 一、实验目的与原理简介 聚合酶链式反应（polymerase chain reaction）是体外克隆基因的重要方法，它可在几个小时内使模板分子扩增百万倍以上。因此能用于从微量样品中获得目的基因，同时完成了基因在体外的克隆，是分子生物学及基因工程中极为有用的研究手段。 常规PCR反用于已知DNA序列的扩增，具体可分为三个主要过程：一、变性。通过升高温度使DNA双链模板分子中氢断裂，形成单链DNA分子，温度为94℃，时间1min。二、复性。降低温度使DNA单链分子同引物结合。温度为55℃，时间1min。三、延深。升高温度，在DNA聚合酶最佳活性的条件下在引物3端加入dNTP，实现模板的扩增，温度为72℃，时间2min。同时第一步变性前要在94℃下预变性5分钟，使DNA双链完全解开。经过 25-35个循环之后，在72℃下继续延伸10分钟。 PCR反应包含的七种基本成分： 1）热稳定性DNA聚合酶：Taq DNA聚合酶是最常适用的酶，商品化Taq DNA酶的特异性活性约为80000单位/mg. 2）寡核苷酸引物：寡核苷酸引物的设计是影响PCR扩增反应的效率与特异性的关键因素。 3）脱氧核苷三磷酸（dNTP）：标准的PCR反应体系应包括4种等摩尔浓度的脱氧核苷三磷酸，即dATP、dTTP、dCTP和dGTP。每种dNTP的浓度一般在200-250μl之间，高浓度的dNTP对扩增反应会起抑制作用，可能是dNTP与Mg2+螯合有关。 4）二价阳离子：一般需要Mg2+来激活热稳定的DNA聚合酶，由于dNTP与寡聚核酸结Mg2+合，因而反应体系中阳离子的浓度一般要超过dNTP和引物来源的磷酸盐基团的摩尔浓度。Mg2+的最佳浓度为1.5mmol/L。 5）维持PH值的缓冲液：用Tris-Cl在室温将PCR缓冲液的PH值调至8.3-8.8之间，标准PCR缓冲液浓度在10mmol/L。在72℃温育时，反应体系的温度将下降1个多单位，致使缓冲液的PH值接近7.2。 6）一价阳离子：标准PCR缓冲液内含有50mmol/L的KCl，它对扩增大于500bp长度的DNA是有益的。 7）模板DNA：含有靶序列的模板DNA可以以单链或双链形式加入到PCR混合液中，闭环DNA的及增效率略低于线性DNA。 学习PCR反应的基本原理和基本技术。 了解引物设计的一般要求。 二、材料和试剂 10Х扩增缓冲液 4种dNTP贮存液（20mmol/L，PH 8.0） Tap DNA 聚合酶 5端引物（20μmol/L）及3端引物（20μmol/L） 模板DNA 琼脂糖凝胶 PCR仪（Bio-Rad公司）移液枪（0.5-10μL 5-50μL）枪头微量移液管 一、实验操作 1）按照以下次序，将各成分加到微量离子管内混合： 10Х扩增缓冲液2.5μl M g2+1.5μl 5端引物1μl 一、问答题 1.食用油长时间放置后,为什么会有异味? 不饱和脂肪酸被氧化或水解的过程和现象，酸败的食物具有难闻气味和难吃味道。油脂长时间暴露于温热和潮湿的环境中，会产生所谓的臭油味。这些臭油味就是由于脂肪被氧化或水解而产生的：水解酸败从脂肪里的脂肪酸链中把甘油结构分解出来，并继续被水解或氧化。 2.为什么有的抑制剂虽不与底物结合部位结合,但仍表现出竞争性 抑制? 1.反竞争性抑制：抑制剂不能与游离酶结合，但可与ES复合物结合并阻止产物生成，使酶的催化活性降低，称酶的反竞争性抑制。其特点为：a.抑制剂与底物可同时与酶的不同部位结合；b.必须有底物存在，抑制剂才能对酶产生抑制作用；c.动力学参数：Km减小，Vm降低。 2. 非竞争性抑制：抑制剂既可以与游离酶结合，也可以与ES复合物结合，使酶的催化活性降低，称为非竞争性抑制。其特点为：a.底物和抑制剂分别独立地与酶的不同部位相结合；b.抑制剂对酶与底物的结合无影响，故底物浓度的改变对抑制程度无影响；c.动力学参数：Km值不变，Vm值降低。 3.肌红蛋白与血红蛋白的疏水侧链的比例有何不同? 4.DNA在纯水中为何易变性? 磷酸脊骨在中性pH 下，会带有许多负电荷，导致两股 DNA 相互排斥分离而变性，要加入镁离子稳定之，因此DNA 不能溶在纯水中。 真核细胞核中含带有强正电性的组织蛋白(histone)，与DNA 结合成复杂结构，并中和掉核酸的负电荷。 5.蛋白质的酸水解通常只能检测到17种氨基酸,为什么? 因为有些氨基酸在酸性条件下不能稳定存在，比如天冬酰胺，谷氨酰胺 6.磷脂可作为细胞膜成分的分子特征是什么? 7.用哪两种简易的方法可以区别酶的可逆抑制和不可逆抑制? 透析和增加底物量 8.利用SDS电泳和分子筛层析测得的血红蛋白的分子量是不同的,为 什么?（一个变性，另一个未变性） 血红蛋白分子是四聚体，如果SDS电泳加了还原剂测出来的分子量（16－17KDa）就是一个多肽亚基的分子量，是血红蛋白分子量的四分之一。 9.从营养学的角度看,奇数碳原子的脂肪酸比偶数碳原子的脂肪酸 营养价值高,为什么? 10.一位生物化学家在对某酶分离纯化过程中得到以下实验结果. 期中答案 一、单项选择题(每小题0.5分，共10分) 1．Watson-Crick的DNA结构为： B．DNA双链呈反平行排列 2．已知某酶的Km为0.05mol/L，使此酶催化的反应速度达到最大反应速度80％时的底物浓度是：C． 0.2mol/L 3．tRNA的作用是：B．把氨基酸带到mRNA的特定位置上 4．下列哪一种物质是琥珀酸脱氢酶辅酶：B．FAD 5．若电子通过下列过程传递，释放能量最多的是： A．NADH-->Cytaa3 6．氨基酸与蛋白质都具有的理化性质是：B．两性性质 7．稀有核苷酸主要存在于：C．tRNA 8．在寡聚蛋白中，亚基间的立体排布、相互作用及接触部位间的空间结构称之为：D．别构现象 9．下列哪种氨基酸是极性酸性氨基酸：D．Glu 10．DNA一级结构的连接键是：B. 肽键 11．定位于线粒体内膜上的反应是：D、呼吸链 12．属于解偶联剂的物质是：A．2,4-二硝基苯酚 13.关于酶催化反应机制哪项不正确：D．酶-底物复合物极稳定 14.酶在催化反应中决定专一性的部分是：B．辅基或辅酶 15.核酸分子储存和传递遗传信息是通过：D．碱基顺序 16.核酸对紫外线吸收是由哪种结构产生的：C．嘌呤、嘧啶环上共轭双键 17.关于氧化磷酸化叙述错误的是：A．线粒体内膜外侧pH比线粒体 基质中高 18.具有下列特征的DNA中Tm最高的是：B．T为15% 19.底物水平磷酸化涵义：C．底物分子重排后形成高能磷酸键，经磷酸基团转移使ADP磷酸化为ATP 20.三羧酸循环，哪条不正确：C．无氧条件不能运转氧化乙酰COA 二、多项选择题（选错或未选全不得分。号码填于卷头答题卡内；）1．属于酸性氨基酸的是：C．天冬E．谷 2．EMP中，发生底物水平磷酸化的反应步骤是：P208 A．甘油酸-1,3-二磷酸→甘油酸-3-磷酸E．磷酸烯醇式丙酮酸→丙酮酸 3．蛋白质二级结构中包括下列哪几种形式：P27 A．α-螺旋 B．β-折叠D．β-转角 E．无规则卷曲 4．下列哪些是呼吸链组成成份：P177 A．辅酶Q B．乙酰CoA C．细胞色素类D．铁硫蛋白E．钼铁蛋白5．下列属于高能化合物的是：A.磷酸烯醇式 B．ATP C．柠檬酸 D．磷酸二羟丙酮 E．3-磷酸甘油酸 6．蛋白质变性后： B．次级键断裂 D．天然构象解体 E．生物活性丧失 7．维持蛋白质三级结构稳定的作用力是: A．疏水作用 B．氢键 C．离子键 D．范德华作用力 一.选择题 1.唾液淀粉酶应属于下列那一类酶( D ); A 蛋白酶类 B 合成酶类 C 裂解酶类 D 水解酶类 2.酶活性部位上的基团一定是( A ); A 必需基团 B 结合基团 C 催化基团 D 非必需基团 3.实验上,丙二酸能抑制琥珀酸脱氢酶的活性,但可用增加底物浓度的方法来消除其抑制,这种抑制称为( C ); A 不可逆抑制 B 非竟争性抑制 C 竟争性抑制 D 非竟争性抑制的特殊形式 4.动物体肝脏内,若葡萄糖经糖酵解反应进行到3-磷酸甘油酸即停止了,则此过程可净生成( A )ATP; A 0 B －１ C 2 D 3 5.磷酸戊糖途径中,氢受体为( B ); A NAD+ B NADP+ C FA D D FMN 6.高等动物体内NADH呼吸链中,下列那一种化合物不是其电子传递体( D ); A 辅酶Q B 细胞色素b C 铁硫蛋白 D FAD 7.根据化学渗透假说理论,电子沿呼吸链传递时,在线粒体内产生了膜电势,其中下列正确的是( A ); A 内膜外侧为正,内侧为负 B 内膜外侧为负,内侧为正 C 外膜外侧为正,内侧为负 D 外膜外侧为负,内侧为正 8.动物体内,脂酰CoA经β-氧化作用脱氢,则这对氢原子可生成( B )分子ATP; A 3 B 2 C 4 D 1 9.高等动物体内,游离脂肪酸可通过下列那一种形式转运( C ); A 血浆脂蛋白 B 高密度脂蛋白 C 可溶性复合体 D 乳糜微粒 10.对于高等动物,下列属于必需氨基酸的是(B ); A 丙氨酸 B 苏氨酸 C 谷氨酰胺 D 脯氨酸 11.高等动物体内,谷丙转氨酶(GPT)最可能催化丙酮酸与下列那一种化合物反应( D ); 生物化学考试试卷及答 案 Company number：【WTUT-WT88Y-W8BBGB-BWYTT-19998】 河南科技学院 2014-2015学年第二学期期终考试 生物化学试题（A ） 适用班级：园林131-134 注意事项：1.该考试为闭卷考试； 2.考试时间为考试周； 3.满分为100分，具体见评分标准。 ） 1、蛋白质的变性作用： 氨基酸的等点： 3、氧化磷酸化： 4、乙醛酸循环： 5、逆转录： 二、选择题（每题1分，共15分） 1、蛋白质多肽链形成α-螺旋时，主要靠哪种次级键维持（ ） A ：疏水键； B ：肽键： C ：氢键； D ：二硫键。 2、在蛋白质三级结构中基团分布为（ ）。 A ：疏水基团趋于外部，亲水基团趋于内部； B ：疏水基团趋于内部，亲水基团趋于外部； C ：疏水基团与亲水基团随机分布； D ：疏水基团与亲水基团相间分布。 3、双链DNA 的Tm 较高是由于下列哪组核苷酸含量较高所致（ ） A ：A+G ； B ：C+T ： C ：A+T ； D ：G+C 。 4、DNA 复性的重要标志是（ ）。 A ：溶解度降低； B ：溶液粘度降低； C ：紫外吸收增大； D ：紫外吸收降低。 5、酶加快反应速度的原因是（ ）。 A ：升高反应活化能； B ：降低反应活化能； C ：降低反应物的能量水平； D ：升高反应物的能量水平。 6、鉴别酪氨酸常用的反应为( )。 A 坂口反应 B 米伦氏反应 C 与甲醛的反应 D 双缩脲反应 7、所有α-氨基酸都有的显色反应是( )。 A 双缩脲反应 B 茚三酮反应 C 坂口反应 D 米伦氏反应 8、蛋白质变性是由于( )。 A 蛋白质一级结构的改变 B 蛋白质空间构象的破环 C 辅基脱落 D 蛋白质发 生水解 9、蛋白质分子中α-螺旋构象的特征之一是( )。 实验三蛋白质颜色反应及沉淀反应 一、目的 1、掌握鉴定蛋白质的原理及方法。 2、熟悉蛋白质的沉淀反应。 3、进一步掌握蛋白质的有关性质。 二、原理 蛋白质分子中的某种或某些基团与显色剂作用，可产生特定的颜色反应，不同蛋白质所含氨基酸种类不同，颜色反应亦不同。颜色反应不是蛋白质的专一反应，一些非蛋白物质亦可产生相同的颜色反应，因此不能仅根据颜色反应的结果决定被测物质是否是蛋白质。颜色反应是一些常用的蛋白质定量测定的依据。 多数蛋白质是亲水胶体，当其稳定性被破坏或与某些试剂结合成不溶解的盐后，即产生沉淀。 三、实验器材 1、鸡蛋白 2、试管 3、吸管 4、滴管 5、水浴锅等 四、实验试剂 1、卵清蛋白液：将鸡蛋白用蒸馏水稀释20-40倍，2-3层纱布过滤，滤液冷藏备用。 2、%茚三酮溶液：0.1g茚三酮溶于95%乙醇并稀释至100ml。 3、10%氢氧化钠溶液：10g氢氧化钠溶于蒸馏水并稀释至100ml。 4、浓硝酸：比重。 5、1%硫酸铜溶液：硫酸铜1g溶于蒸馏水，稀释至100ml。 6、饱和硫酸铵溶液：蒸馏水100ml加硫酸铵至饱和。 7、95%乙醇。 8、结晶氯化钠。 9、1%醋酸铅：1g醋酸铅溶于蒸馏水并稀释至100ml。 10、饱和苦味酸溶液。 11、1%醋酸溶液：冰醋酸1ml用蒸馏水稀释至100ml。 五、操作 1、颜色反应： A、双缩脲反应：蛋白质分子中含有肽键，与两分子尿素经过加热形成的双缩脲的结构相似，能与硫酸铜结合成红紫色的络合物。 取一支试管，加蛋白质溶液10滴，再加10%NaOH溶液10滴及1%CuSO4溶液2滴，混匀，观察是否出现紫玫瑰色。 B、黄色反应：蛋白质分子中含有苯环结构的氨基酸。遇硝酸可硝化成黄色物质，此物质在碱性环境中变为橘黄色的硝苯衍生物。 生物化学作业题及答案（一） （绪论、糖类、脂类、蛋白质化学） 填空题： 1、生物化学简单地说就是生命的化学，它是用化学的理论和方法研究生物机体的化学组成和生命过程中的化学变化规律的一门学科。它大体上包括静态生化、动态生化和机能生化这三个方面的内容。 2、生物体内特有的大而复杂的分子叫生物大分子，包括糖、脂肪、蛋白质、酶、核酸等。 3、我国科学工作者于1965 年，首先合成世界上公认的第一个具有全部生物活性的结晶牛胰岛素；于1972 年，对猪胰岛素空间结构的X光衍射法研究分析率达到了1.8 A 水平。1981 年又胜利完成了酵母丙氨酸转移核糖核酸的人工合成。 4、生物体内的三大营养物质是指糖、脂肪、蛋白质，其中糖是生物体最重要的能源和碳源物质。 5、糖是一类多羟基的醛、酮和它们的缩合物及其衍生物的总称，而脂类则是指由甘油 和高级脂肪酸所构成的不溶于水而溶于非极性的有机溶剂的生物体内的化合物。 6、糖可依据其结构的繁简分为单糖、寡糖和多糖三类，最简单的单糖是甘油醛和二羟丙酮，最常见的单糖有葡萄糖、果糖、半乳糖和核糖，大米中含量最多的糖是淀粉。 糖原、支链淀粉和直链淀粉分别加入碘溶液后各产生的颜色是红色、紫色和兰色。 糖原可以在肝脏和肌肉组织中找到。 糖原和支链淀粉都以α—1，6 糖苷键形成分支 10、自然界中最多的有机物是钎维素，此有机物是组成单位是β—D—比喃葡萄糖。 11、动物脂肪的碘价较低，在室温下呈固态。 12、膜的两种主要成分是蛋白质和类脂，在所有的生物膜中都有磷脂。 13、饱和脂肪酸的碳原子之间的键都是单键；不饱和脂肪酸碳原子之间则含有双键。 14、在人体内，对新陈代谢、生殖、生长和发育等生命活动具有调节作用的蛋白质叫激素， 在新陈代谢过程中起催化作用的蛋白质叫酶；在细胞膜上起运载作用的蛋白质称为载体；对入侵人体内的病原体具有特殊的抵抗能力的蛋白质是抗体。 15、组成蛋白质的元素主要有C、H、O、N、S 等五种。有些蛋白质还含有P、Fe、I、Zn、Mn、Cu 。 16、假定1克生物样品的含N量为0.01g，则该样品的蛋白质含量为0.0625g 。 17、氨基酸是蛋白质的基本组成单位。主要有20 种，可用“R—CH NH2—COOH ”通式来表示。 18、唯一无光学活性的氨基酸是甘氨酸，它的等电点是5.97 。 19、氨基酸或蛋白质在等电点时，没有净的电荷，而且溶解度最低。 20、氨基酸与茚三酮共热生成蓝紫色复合物；而与2?4—二硝基苯酚反应则生成_稳定的2、4—二硝基苯氨基酸黄色物_。 21、维系蛋白质一级结构的主键是_肽键_和___二硫键__;维系蛋白质空间结构的次级键有_氢键__、_疏水键__、_盐键_、__酯键_、_范特华力_等。 牛胰岛素是由_51个氨基酸构成的，含有_A_链和_B_链，有_3_个二硫键。 23、蛋白质在水中能形成胶体溶液，是因为它的颗粒直径达到了_ 胶体颗粒（即1—100nm）_范围。胶体溶液得以稳定的原因则是因为__胶体颗粒表面形成水膜（水化层）__和_在非等电点的条件下带有同种电荷。 24、蛋白质变性是指_引起蛋白质天然构象的变化，而不涉及肽链断裂的任何过程_；凝固是指_变性后的蛋白质分子相互凝集为固体的现象_；沉淀是指_当蛋白质胶体溶液的稳定因素受到破坏后胶体颗粒聚集下沉的现象_。 25、加入大量中性盐使蛋白质从其溶液中沉淀析出的现象叫_盐析_；调节盐浓度使蛋白质中的几种蛋白质分段析出的现象叫_分段盐析_。 二、选择题（单选）： 下面关于氨基酸的说法中错误的是（C ） 天然蛋白质中的氨基酸都是L—a—氨基酸； 甘氨基酸无光学活性； 赖氨酸的侧链含S元素； 组成血红蛋白的氨基酸分子在结构上的共同点是（C ）每种氨基酸只含有一个氨基和一个羧基； 每个碳原子都有一个氨基和一个羧基； 都有一个氨基和一个羧基位于同一个碳原子上。 苯丙氨酸的等电点大约是（ B ） 3 ； 6； 10； 有5种氨基酸组成的五肽，可能出现的不同的排列次序有（D ） 30种； 90种； 120种。 某氨基酸溶于PH为7的水中，所得的氨基酸溶液的PH值为6。则此氨基酸的PH应该是（C ） 大于6； 等于6； C. 小于6； 下述关于蛋白质a—螺旋结构的说法中，错误的是（D ）每一个螺旋含3.6个氨基酸残基； 一、填空题 2．蛋白质分子表面的_电荷层______ 和__水化膜_ 使蛋白质不易聚集，稳定地分散在水溶 液中。 5. 写出下列核苷酸的中文名称： ________________________ ATP__三磷酸腺苷—和dCDP_脱氧二磷酸胞苷 _____________________________________________ 。6．结合蛋白质酶类是由__酶蛋白__和__辅助因子_____ 相结合才有活性。 7.竞争性抑制剂与酶结合时，对Vm 的影响__不变_______ ，对Km 影响_是增加 _______ 。有机磷杀虫剂中毒是因为它可以引起酶的___不可逆______ 抑制作用。 & 米氏方程是说明—底物浓度―和—反应速度—之间的关系，Km的定义—当反应速度为最大速度的1/2 时的底物的浓度__________________________ 。 9. FAD含维生素B2 _____ ，NAD+含维生素 _____ P P _______ 。 12. 磷酸戊糖途径的主要生理意义是__生成磷酸核糖__和 __NADPH+H_ 。 13. 糖酵解的主要产物是乳酸___。 14. 糖异生过程中所需能量由高能磷酸化合物 _ATP__和__GTP__供给。 15?三羧酸循环过程的限速酶—柠檬酸合酶__、一异柠檬酸脱氢酶、_a—酮戊二酸脱氢酶复合体。 16.糖酵解是指在无氧条件下，葡萄糖或糖原分解为_乳酸________ 的过程，成熟的_红细胞 ____ 靠糖酵解获得能量。 17?乳糜微粒（CM ）在__小肠粘膜细胞__合成，其主要功能是_转运外源性甘油三酯 ______________________________________________________________________________________ 。 极低密度脂蛋白在__肝脏_合成。 18?饱和脂酰CoA 氧化主要经过脱氢、_ 加水__、—再脱氢—、__硫解—四步反应。 19. _________________________________________ 酮体是由__乙酰乙酸___、__2---_羟基丁酸___________________________________________ 、__丙酮 ___ 三者的总称。 20. ____________________________ 联合脱氨基作用主要在__肝、_肾__、__脑___等组织中进行。 21. ______________________________________________ 氨在血液中主要是以__谷氨酰胺__和__丙氨酸____________________________________________ 的形式被运输的。 22. ATP的产生有两种方式，一种是作用物水平磷 _酸化 _____ ，另一种—氧化磷酸化 _____ 。 23. 线粒体外NADH的转运至线粒体内的方式有_苹果酸-天冬氨酸—和_a_---磷酸甘油___。 24. ___________________________________________________________________________ 携带一碳单位的主要载体是_四氢叶酸__，一碳单位的主要功用是_合成核苷酸等 ______________________________________________________________________________________ 。 25. 脂肪酸的合成在__肝脏进行，合成原料中碳源是_乙酰CoA__；供氢体是 _NADPH+H_ ，它主要来自_磷酸戊糖途径_____。 26. 苯丙酮酸尿症患者体内缺乏__苯丙氨酸氧化_酶，而白化病患者是体内缺乏_酪氨酸_______ 酶。使血糖浓度下降的激素是_胰岛素___。 27. 某些药物具有抗肿瘤作用是因为这些药物结构与酶相似，其中氨甲嘌呤（MTX ）与__ 2007～2008学年第一学期期末考试试卷 A 卷 课程名称：_生物化学(二) __ 课程代码：_MED130067 ____ 开课院系：生物化学与分子生物学_考试形式： 闭卷 姓 名： 学 号： 专 业： 一、单选题：（每题1分，共50分） 1、第二信使的化学本质是： A ．糖蛋白 B ．RNA C ．DNA D ．脂蛋白 E ．小分子物质 2、蛋白质合成的终止信号由： Ａ．ｔＲＮＡ识别 Ｂ．转肽酶识别 Ｃ．延长因子识别 Ｄ．起始因子识别 Ｅ．以上都不能识别 3、核糖体循环中，不包括的过程有： Ａ．识别 Ｂ．转位 Ｃ．延长 Ｄ．进位 Ｅ．转肽 4、信号肽： （ 装 订 线 内 不 要 答 题 ） Ａ．处于肽链Ｎ-末端Ｂ．处于肽链Ｃ-末端 Ｃ．处于肽链中段Ｄ．游离于胞浆 Ｅ．处于所有的分泌性蛋白分子上 5、操纵基因是： Ａ．诱导物结合部位Ｂ．σ因子结合部位 Ｃ．辅阻抑物结合部位Ｄ．ＤＤＲＰ结合部位 Ｅ．阻抑蛋白结合部位 6、通常既不见于ＲＮＡ，也不见于ＤＮＡ的含氮碱基是： Ａ．腺嘌呤Ｂ．黄嘌呤 Ｃ．鸟嘌呤Ｄ．胸腺嘧啶 Ｅ．尿嘧啶 7、诱导剂能诱导结构基因转录，其机理是： Ａ．诱导剂能与阻遏蛋白结合Ｂ．诱导剂能与操纵基因结合Ｃ．诱导剂能与结构基因结合Ｄ．诱导剂能与调节基因结合Ｅ．诱导剂能与辅阻抑物结合 8、在ＲＮＡ分子中ψ表示： Ａ．假腺苷Ｂ．假黄苷 Ｃ．假胸苷Ｄ．假尿苷 Ｅ．假胞苷 9、真核细胞核小体是： Ａ．染色质的基本结构单位Ｂ．细胞的核心颗粒 Ｃ．组蛋白和酸性蛋白复合体Ｄ．染色单体 Ｅ．染色体 10、氯霉素对原核细胞的生化效应是： Ａ．引起多肽的早期释放Ｂ．引起ｍＲＮＡ错读 Ｃ．抑制３０Ｓ核糖体亚基活性Ｄ．使ＤＮＡ解链 Ｅ．抑制５０Ｓ核糖体亚基活性 11、ＲＮＡ是： Ａ．核糖核苷酸Ｂ．脱氧核糖核酸 Ｃ．脱氧核糖核苷酸Ｄ．核糖核酸 Ｅ．核糖核蛋白体 12、下列有关核酸水解的不正确描述是： Ａ．ＤＮＡ和ＲＮＡ的磷酸二酯键不易被酸水解 Ｂ．ＤＮＡ嘌呤的Ｎ－糖苷键在中等酸度溶液中较不稳定 Ｃ．在碱性溶液中ＤＮＡ分子不如ＲＮＡ分子稳定 Ｄ．有一些核酸酶特异性低，既能水解ＤＮＡ又能水解ＲＮＡ Ｅ．有些核酸酶有特异性，只作用于核糖核酸或脱氧核糖核酸 13、关于ＤＮＡ变性后特点的描述，哪点是不对的 Ａ．氢键断裂，双链分开Ｂ．粘度下降 Ｃ．对紫外光的吸收增加Ｄ．碱基相互聚合 Ｅ．变性是可逆的 14、Ｘ和Ｙ两种核酸提取物，经紫外光检测，提取物Ｘ的Ａ260／Ａ280＝２，提取物Ｙ的Ａ260／Ａ280＝１，结果表明： Ａ．提取物Ｘ的纯度高于提取物ＹＢ．提取物Ｙ的纯度高于提取物ＸＣ．提取物Ｘ和Ｙ的纯度都低Ｄ．提取物Ｘ和Ｙ的纯度都高 Ｅ．不能表明二者的纯度 基础生化实验--双缩脲法测定蛋白质含量 双缩脲法测定蛋白质含量（考核实验） 一、教学目的与要求： ①加强对蛋白质的有关性质的认识； ②掌握双缩脲法测定蛋白质含量的原理和方法； ③对学生所学进行综合的测试。 二、教学实验原理： 蛋白质含有两个以上的肽键，因此有双缩脲反应。在碱性溶液中蛋白质与Cu2+形成紫红色络合物，其颜色的深浅与蛋白质的浓度成正比，而与蛋白质的分子量氨基酸成分无关，因此利用此进行比色测定蛋白质含量。 在一定条件下，未知样品的溶液与标准蛋白质溶液同时反应，并于540—560nm下比色，可以通过标准蛋白质的标准曲线求出未知的蛋白质浓度，标准蛋白溶液可以用结晶的牛（或人）血清白蛋白、卵清蛋白或酪蛋白粉末配制。 除-CONH-有此反应外，-CONH2-，-CH2-，NH2-，-CS-CS-NH2，等基团亦有此反应。 三、考核主要内容 1、标准曲线的制作 取6支干净的试管，按0→5编号，然后按下表依次加入试剂，充分混匀，在室温下放置半小时，以管为空白，在550nm波长处测定消光值（OD），以各管蛋白质含量（毫克）横坐标，OD值为坐标，画出标线。 编号0 1 2 3 4 5 蛋白质标准液（毫升）0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 蒸馏水（毫升） 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0 双缩脲试剂（毫升） 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 2、样品测定：取样品液1.0 ml，同法进行，测其OD值，对照标准曲线求得未知液蛋 白质浓度。 3、分光光度计的使用：规定每组在10min以内全部完成操作（共测6支管）；同时注意 操作是否规范。 4、成绩的计算：此次的实验占30%（包括平时的表现及实验报告的完成情况和完成质 量），平时的五次实验共占70%，每次实验按总分为5分为满分进行打分，总评折合 成百分制。 四、实验注意事项： ①标准样品的浓度为：10μg/ml； ②实验过程中不得过问他人，同组人可以配合进行； ③实验报告在课堂上独立完成，同组人数据相同，不得抄袭他人数据，一 旦发现以零分处理； ④实验过程若出现失误应向老师汇报后再进行重做； ⑤对实验结果进行简单的分析. 一、实验目的： 1.掌握分光光度计的使用方法。 2.掌握标准管法测物质含量的方法。 3.掌握双缩脲法测定蛋白质含量的方法。 二、实验原理： 双缩脲是由两分子尿素缩合而成的化合物，在碱性溶液中与硫酸铜反应生成紫红色络合物，此反应即为双缩脲反应。含有两个或两个以上肽键的化合物都具有双缩脲反应。蛋白质含有多个肽键，在碱性溶液中能与Cu2+络合成紫红色化合物。其颜色深浅与蛋白质的浓度成正比，可以用比色法进行测定。双缩脲法最常用于需要快速但并不需要十分精确的测定。 三、试剂和器材 （一）试剂: 1.标准蛋白溶液（5mg/ml）:准确称取已定氮的酪蛋白(干酪素或牛血清白蛋白)用0．05mol/L氢氧化钠溶液配制，冰箱存放备用。 2.双缩脲试剂:溶解1.5g硫酸铜晶体(CuSO4·5H2O)和6.0g酒石酸钾钠晶体 NaKC4H4O6·4H2O)溶于500ml蒸馏水中，在搅拌下加入300ml10％氢氧化钠溶液，用水稀释到1000ml，贮存于内壁涂以石蜡的瓶内。此试剂可长期保存。 生化上册作业 一、问答题 1.食用油长时间放置后,为什么会有异味? 不饱和脂肪酸被氧化或水解的过程和现象，酸败的食物具有难闻气味和难吃味道。油脂长时间暴露于温热和潮湿的环境中，会产生所谓的臭油味。这些臭油味就是由于脂肪被氧化或水解而产生的：水解酸败从脂肪里的脂肪酸链中把甘油结构分解出来，并继续被水解或氧化。 2.为什么有的抑制剂虽不与底物结合部位结合,但仍表现出竞争性 抑制? 1.反竞争性抑制：抑制剂不能与游离酶结合，但可与ES复合物结合并阻止产物生成，使酶的催化活性降低，称酶的反竞争性抑制。其特点为：a.抑制剂与底物可同时与酶的不同部位结合；b.必须有底物存在，抑制剂才能对酶产生抑制作用；c.动力学参数：Km减小，Vm降低。 2. 非竞争性抑制：抑制剂既可以与游离酶结合，也可以与ES复合物结合，使酶的催化活性降低，称为非竞争性抑制。其特点为：a.底物和抑制剂分别独立地与酶的不同部位相结合；b.抑制剂对酶与底物的结合无影响，故底物浓度的改变对抑制程度无影响；c.动力学参数：Km值不变，Vm值降低。 3.肌红蛋白与血红蛋白的疏水侧链的比例有何不同? 4.DNA在纯水中为何易变性? 磷酸脊骨在中性pH 下，会带有许多负电荷，导致两股 DNA 相互排斥分离而变性，要加入镁离子稳定之，因此DNA 不能溶在纯水中。真核细胞核中含带有强正电性的组织蛋白(histone)，与DNA 结合成复杂结构，并中和掉核酸的负电荷。 5.蛋白质的酸水解通常只能检测到17种氨基酸,为什么? 因为有些氨基酸在酸性条件下不能稳定存在，比如天冬酰胺，谷氨酰胺 6.磷脂可作为细胞膜成分的分子特征是什么? 7.用哪两种简易的方法可以区别酶的可逆抑制和不可逆抑制? 透析和增加底物量 8.利用SDS电泳和分子筛层析测得的血红蛋白的分子量是不同的, 为什么?（一个变性，另一个未变性） 血红蛋白分子是四聚体，如果SDS电泳加了还原剂测出来的分子量（16－17KDa）就是一个多肽亚基的分子量，是血红蛋白分子量的四分之一。 9.从营养学的角度看,奇数碳原子的脂肪酸比偶数碳原子的脂肪酸 营养价值高,为什么? 10.一位生物化学家在对某酶分离纯化过程中得到以下实验结果. 生物化学试题及答案 试题一 一、选择（20×2=40分） 1.正常成人每天的尿量为（C） A 500ml B 1000 ml C 1500 ml D2000 ml 2：下列哪种氨基酸属于亚氨基酸（B） A丝氨酸B脯氨酸C亮氨酸D组氨酸 3：维持蛋白质二级结构稳定的主要作用力是（C） A盐键B疏水键C氢键D二硫键 4处于等电点状态的蛋白质（C） A分子不带电荷B分子最不稳定，易变C总电荷为零D溶解度最大 5.试选出血浆脂蛋白密度由低到高的正确顺序（B） A.LDL、VLDA、CM B.CM、VLDL、LDL、HDL C. CM、VLDL、LDL、IDL D. VLDL、LDL、CM、HDL 6.一碳单位不包括（C） A．—CH3 B.—CH2— C. CO2 D.—CH=NH 7.不出现蛋白质中的氨基酸是（B） A.半胱氨基酸 B.瓜氨酸 C.精氨酸 D.赖氨酸 8.维系蛋白质一级结构的最主要的化学键是（C） A.离子键 B.二硫键 C.肽键 D.氢键 9、关于α—螺旋的概念下列哪项是错误的（D） A.一般为右手螺旋 B. 3.6个氨基酸为一螺旋 C.主要以氢键维系 D.主要二硫键维系 10.结合酶在下列哪种情况下才有活性( D) A.酶蛋白单独存在 B.辅酶单独存在 C.酶基单独存在 D.全酶形式存在 E.有激动剂存在 11.关于Km值的意义，不正确的是( C) A.Km是酶的特性常数 B.Km值与酶的结构有关 C.Km等于反应为最大速度一半时的酶的浓度 D.Km值等于反应速度为最大度一半时的底物浓度 12.维生素B2是下列哪种辅基或辅酶的组成成分（D） A .NAD B.NADPH C.磷酸吡哆醛 D. FAD 13、1 mol乙酰CoA彻底氧化生成多少mol ATP（B） A. 11 B.1 2 C.13 D.14 14、合成DNA的原料是( A) A、dATP、dGTP、dCTP、dTTP B、ATP、dGTP、CTP、TTP C、ATP、UTP、CTP、TTP D、dATP、dUTP、dCTP、dTTP 15、合成RNA的原料是( A) A、ATP、GTP、UTP、CTP B、dATP、dGTP、dUTP、dCTP C、ATP、GTP、UTP、TTP D、dATP、dGTP、dUTP、dTTP 16、嘌呤核苷酸分解的最终产物是( C) 《临床生物化学检验》考试试题与答案 一、名词解释（每小题2分，共10分） 1、临床化学 2、前带效应 3、色素原底物 4、溯源性 5、酶的比活性 二、填空（每空1分，共15分） 1 、翻译下列英文缩写（英译汉）：IFCC 的中文全称为 _______________________________________ ，其中文简称为 _______________________________ 。NCCLS 的中文全称为 _______________________________。PNPP 为_____________________。AMS 为_____________。AChE 为________________________。CRM 为________________。质量保证中的 VIS 为____________________。 2、将十几个步骤简化为样本采集、样本分析、质量控制、解释报告等四个步骤的过程称为病人身边检验 （床边检验），其英文缩写为_____________ 。（中国）实验室国家认可委员会的英文缩写为_________ 。美国临床化学协会的英文缩写为_____________。 3、最早对临床生物化学检验做出开创性研究的我国科学家是_______________。 4、NCCLS的精密度评价试验中，规定合乎要求的批内不精密度CV范围为_______________，批间不精密 度CV变异范围为_______________，其中的EA来源于_______________的规定标准。 三、单选（每小题1分，共30分） 1、连续监测法测定酶活性的吸光度读数次数应不少于（）次 A、2 B、3 C、4 D、7 2、测定待测酶Ex的酶偶联反应A??E?x→B??E?a→C ??Ei→D 之中，关于零级 反应、一级反应的描述正确的是（） A、三个酶催化的都是零级反应 B、Ex和Ea催化的是零级反应，Ei催化一级反应 C、Ex催化的是零级反应，Ea和Ei催化一级反应 D、三个酶催化的都是一级反应 3、测定代谢物Ax的酶偶联反应A B C D Ea Ea Ei x ???→ ???→ ??→ 1 2 之中，关于零级反应、一级反应的描述正 确的是（） A、三个酶催化的都是零级反应 B、Ea1和Ea2催化的是零级反应，Ei催化一级反应 得分 阅卷人 得分 阅卷人 得分 阅卷人 1.有四种氨基酸，其解离常数分别为： 氨基酸pK1(α-COOH) pK2(α-NH3+) pK3(R) Cys 1.71 8.33 10.78 Glu 2.19 9.67 4.25 Arg 2.17 9.04 12.48 T yr 2.20 9.11 10.07 问：⑴四种氨基酸的等电点分别是多少？ ⑵四种氨基酸在pH=7的电场中各向哪个方向移动？ 2.一种氨基酸的可解离基团可以带电或中性状态存在，这取决于它的pK值和溶液的pH。已知： pK(α-COOH)=1.82; pK(α-NH3+)=9.17; pK3(R)=6.0 （a）组氨酸有3种可解离基团，写出相应于每个pK 值的3种解离状态的平衡方程式。每种解离状态下的组氨酸分子的净电荷是多少？ （b）在pH1、4、8和12时，组氨酸的净电荷分别是多少？将每一pH下的组氨酸置于电场中，它们将向阴极还是阳极迁移？ 3.胃液（pH＝1.5）的胃蛋白酶的等电点约为1，远比其它蛋白质低。试问等电点如此低的胃蛋白酶必须存在有大量的什么样的官能团？什么样的氨基酸才能提供这样的基团？ 4.利用阳离子交换层析分离下列每一对氨基酸，哪一种氨基酸首先被pH7缓冲液从离子交换柱上洗脱出来。 （a）Asp和Lys（b）Arg和Met 5．下列试剂和酶常用于蛋白质化学的研究中： CNBr 异硫氰酸苯酯丹黄酰氯脲6mol/LHCl β-巯基乙醇水合茚三酮过甲酸胰蛋白酶胰凝乳蛋白酶 其中哪一个最适合完成以下各项任务？ （a）测定小肽的氨基酸序列。 （b）鉴定肽的氨基末端残基。 （c）不含二硫键的蛋白质的可逆变性。若有二硫键存在时还需加什么试剂？ （d）在芳香族氨基酸残基羧基侧水解肽键。 （e）在蛋氨酸残基羧基侧水解肽键。 （f）在赖氨酸和精氨酸残基侧水解肽键。 生物化学试题及答案（6） 第六章生物氧化 【测试题】 一、名词解释 1.生物氧化 2. 呼吸链 3.氧化磷酸化 4. P/O 比值 5.解偶联剂 6.高能化合物 7.细胞色素 8.混合功能氧化酶 二、填空题 9．琥珀酸呼吸链的组成成分有 ___ 、 __ 、___ 、 _ 、____ 。 10．在NADH氧化呼吸链中，氧化磷酸化偶联部位分别是、、___ ，此三处释放的能量均超过 __ KJ 11．胞液中的NADH+H通+过______ 和_________________________________ 两种穿梭机制进入线粒体，并可进入_________________ 氧化呼吸链或______________________________ 氧化呼 吸链，可分别产生 __ 分子ATP 或分子ATP。 12．ATP 生成的主要方式有___ 和。 13．体内可消除过氧化氢的酶有 __ 、 ___ 和。 14．胞液中α- 磷酸甘油脱氢酶的辅酶是___ ，线粒体中α- 磷酸甘油脱氢酶的辅基是___ 。 15．铁硫簇主要有__ 和____ 两种组成形式，通过其中的铁原子与铁硫蛋白中的____ 相连接。 16．呼吸链中未参与形成复合体的两种游离成分是____ 和__ 。 17．FMN 或FAD 作为递氢体，其发挥功能的结构是 __ 。 18．参与呼吸链构成的细胞色素有、 ____ 、____ 、___ 、____ 、___ 。 19．呼吸链中含有铜原子的细胞色素是 __ 。 20．构成呼吸链的四种复合体中，具有质子泵作用的是___ 、___ 、___ 。 21．ATP 合酶由_ 和____ 两部分组成，具有质子通道功能的是____ ，__ 具有催化生成ATP 的作用。 22．呼吸链抑制剂中， __ 、_____ 、 _ 可与复合体Ⅰ结合， ____ 、___ 可抑制复合体Ⅲ，可抑制细胞色素c 氧化酶的物质有 __ 、___ 、___ 。 23．因辅基不同，存在于胞液中SOD 为__ ，存在于线粒体中的SOD 为___ ，两者均可消除体内产生的 24．微粒体中的氧化酶类主要有 __ 和 三、选择题 一、名词解释（每题2分，共20分） 1、同工酶 2、酶活性中心 3、蛋白质等电点 4、底物水平磷酸化 5、葡萄糖异生作用 6 7 8 9 10 ( ) 10、考马斯亮蓝染料与蛋白质（多肽）结合后形成颜色化合物，在534nm波长下具有最大吸收光。 三、选择题（每题1分，共10分） ( ) 1、Watson和Crlick的DNA双股螺旋中，螺旋每上升一圈的碱基对和距离分别是： A. 11bp， 2.8nm B. 10bp， 3.4nm C. 9.3bp， 3.1nm D. 12bp， 4.5nm ( ) 2、哪一种情况可用增加底物浓度的方法减轻抑制程度： A. 不可逆抑制作用 B. 非竞争性可逆抑制作用 C. 竞争性可逆抑制作用 D. 反竞争性可逆抑制作用 ( ) 3、米氏动力学的酶促反应中，当底物浓度（[S]）等于3倍Km时，反应速度等于最大反应速度的百分数（%）为： A. 25％ B. 50％ C. 75％ D. 100％( ) 4、TCA循环中发生底物水平磷酸化的化合物是： A. α-酮戊二酸 B. 琥珀酸 C. 琥珀酰CoA D. 苹 A. 考马斯亮蓝试剂 B. 二苯胺试剂 C. 地衣酚试剂 D. DNS试剂 四、填空题（每空1分，共30分） 1、20种天然氨基酸中_____和色氨酸只有一个密码子。 2、某一种tRNA的反密码子是UGA，它识别的密码子序列是 ___ 。 3、pI为4.88的蛋白质在pH8.6的缓冲液将向电场的 _______ 极移动。 4、核酸的基本结构单元是 __ ，蛋白质的基本结构单元是 _ _ 。 5、糖酵解途径的限速酶是 _ _、_ _、__ 。 6、大肠杆菌RNA聚合酶全酶由 ___????____ 组成；参与识别起始信号的是 __?___ 因子。 7、3-磷酸甘油穿梭和苹果酸-天冬氨酸穿梭可将 ___ 产生的___所携带的电子转 入线粒体内膜。 8、某DNA模板链核酸序列为5’ TTACTGCAATGCGCGATGCAT-3’，其转录产物mRNA的核苷 酸排列顺序是____，此mRNA编码的多肽链N-端第一个氨基酸为 ___，此多 9 10 O O ( CH 3 CH 2 ) 11 _____________________ 五、简答题（30分） 1、请写出米氏方程，并解释各符号的含义（5分） 2、计算1mol丙酮酸彻底氧化为CO 2和H 2 O时产生ATP的mol数。（6分） 3、按下述几方面，比较软脂酸氧化和合成的差异：发生部位、酰基载体、二碳片段供 体、电子供体（受体）、底物穿梭机制、合成方向。（6分） 4、简述三种RNA在蛋白质生物合成过程中所起的作用。（6分） 5、请写出参与原核生物DNA复制所需要的主要酶或蛋白，并简要解释其功能。（7分） 菌落圆形，污白色，全缘，微凹，光滑 实验三细菌生理生化鉴定-LOPAT试验 一、实验目的： 1）了解细菌生理生化反应原理，掌握细菌鉴定lopat实验方法 二、实验材料： 猕猴桃溃疡病病原菌（分类地位薄壁菌门Gracilicutes，Proteobacteria纲假单胞菌科Pseudomonadaceae假单胞杆菌属Pseudomonas）、SPA培养基：蔗糖20g，蛋白胨5g，磷酸氢二钾0.5g，硫酸镁0.25g，琼脂15g，蒸馏水1000ml 对照SPA培养基：葡萄糖20g，蛋白胨5g，磷酸氢二钾0.5g，硫酸镁0.25g，琼脂15g，蒸馏水1000ml Thornley培养基配方：蛋白胨1g，精氨酸10g，氯化钠5g，磷酸氢二钾0.3g，酚红0.01g，琼脂6g，蒸馏水1000ml 1%二甲基对苯二胺盐酸盐，3×108 /ml的菌液（病原菌），烟草，马铃薯； 灭菌培养皿及培养基（平板）110套、未灭菌培养皿110套，接种针15个，试管110支，接种针55把，滤纸55张，试剂瓶55个，胶头滴管55支，喷壶55个 三、试验方法： 果聚糖试验（Levan formation）： 用细菌悬浮液，在SPA培养基上，再用葡萄糖代替蔗糖培养基平板上分别划线。在25℃条件下培养3–7 d，形成白色、粘稠、圆顶、隆起而有闪光的菌落为阳性反应。 在此条件下，在SPA培养基上可形成前述菌落，果聚糖试验为阳性；而在用葡萄糖代替蔗糖培养基上，不形成前述菌落。 氧化酶试验（oxidase reaction）： 在培养皿内放一张滤纸，滤纸上加3–4滴1%二甲基对苯二胺盐酸盐，使其湿润。用玻棒挑取生长24 h的菌苔涂在滤纸上，若菌苔在10 s内变成紫色，为阳性反应；在60 s以后变色或一直不变色，为阴性反应。 在此条件下，菌苔的氧化酶试验为阴性反应 氧化酶（细胞色素氧化酶）是细胞色素呼吸酶系统的最终呼吸酶 马铃薯软腐试验（potato erroring capacity）： 在马铃薯上做刺伤伤口，将细菌接到伤口上，几天后观察，是否出现软腐。 精氨酸双水解酶检验（argine reaction）： 配制Thornley培养基。每试管装3–4 ml培养基灭菌，冷却，针刺接种细菌至培养基底部，立即用凡士林封管，在27℃条件下培养7 d。 在此条件下，精氨酸双水解酶为阴性，颜色不变。 细菌的精氨酸双水解作用是将精氨酸经过两步水解，生成有机胺和无机氨。鉴定细菌的精氨酸试验，无论发酵菌还是非发酵菌，革兰阳性菌还是革兰阴性菌，测的都是精氨酸双水解酶，使用脱羧酶试验培养基。所以，赖氨酸脱羧酶，鸟氨酸脱羧酶和精氨酸双水解酶用同一种基础培养基，为Moeller配方或Falkow配方，均须加盖石蜡油。对于发酵菌，细菌生长后，培养基变黄为阴性，变紫为阳性；对非发酵菌，培养基颜色不变为阴性，变黄为阳性。另有一种精氨酸双水解酶专用培养基，其中使用的是酚红指示剂。这种配方目前已不使用。细菌生化反应表中的精氨酸双水解酶的阳性百分率也不是在这种培养基上做的，所以，该配方实际已淘汰。 烟草过敏性反应（tobacoo hypersensitivity）：八种常用生化实验步骤
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