江西中医学院

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20 届毕业论文

论文题目:吴茱萸对大鼠肝线粒体呼吸功能的影响课题来源:国家课题

论文性质:应用基础研究

学生姓名:XXXXXX

学生学号:XXXXXXXXXX

所在班级:XXXXXXXXXXXXXXXXX院XXXXXXX班

导师姓名:XXXXXXXXXXXX

导师职称:XXXXXXXXX

导师电话:XXXXXXXXXXXX

导师签名:XXXXXXXXXXXX

实习单位:XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX

单位地址:XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX

完成时间:XXXX年XX月

目录

一、论文

1、标题和作者…………………………………………………?

2、中文摘要及关键词…………………………………………?

3、英文摘要及关键词…………………………………………?

4、前言…………………………………………………………?

5、正文…………………………………………………………?

6、讨论或小结…………………………………………………?

7、参考文献……………………………………………………?

8、文献综述……………………………………………………?

9、致谢及声明…………………………………………………?

二、导师评阅意见表(单张)

三、优秀论文申报表(单张)、优秀导师申报表(单张)

四、实习总结(单张)

五、优秀实习生申报表(单张)、优秀实习组申报表(单张)

六、平时成绩表(单张)

吴茱萸对大鼠肝线粒体呼吸功能的影响

吴玉霞(江西中医学院330004)黄丽萍(江西中医学院药学院330004)

中文摘要

目的:本试验尝试从给药组与空白组表征大鼠肝脏线粒体呼吸功能各指标变化的角度,探索吴茱萸对机体呼吸功能的调控机制,以证实吴茱萸对大鼠肝脏线粒体呼吸功能的影响。方法:采用Clark氧电极法测定大鼠肝脏线粒体在密闭反应体系中耗氧的变化,以确定线粒体耗氧速率。结果:与空白组比较,给药组有较高的RCR,差异显著。结论:吴茱萸组通过加快Ⅲ态呼吸耗氧速率,降低Ⅳ态耗氧速率而提高RCR。

关键词吴茱萸;肝脏线粒体;呼吸功能

ABSTRACT

Purpose:To prove the effect of Evodia rutaecarpa on the respiratory system of mitochondria in mouse liver,the indes of these have been detected,and also the Regulatory mechanism.Methods:The Clark oxygen electrode is used to test the change of oxygen ,which consumed by mitochondrium in mouse liver ,to calculate the rate of the consumption of mitochondrial oxygen. Result: Compared with the blank group, the administration group have a higher level of RCR, and the difference was obvious. Conclusion:Evodia rutaecarpa is helpful to the higher level of RCR,by accelerating the rate of the oxygen consumption of state Ⅲ ,and reducing that of state Ⅳ.

Key words

Evodia rutaecarpa;liver mitochondria; respiratory chain function

前言

现代实验已证实,寒证的出现可能与人体能量代谢降低有关,由于能量代谢降低,身体热量不足,体温较低,呼吸缓慢,心跳减慢,心搏出量减少,体表毛细血管及小动脉反射性收缩,大脑皮层兴奋性减低而产生上述一系列“寒”的证候[1]。温里药具有温中散寒、补火助阳、回阳救逆等功效,通过提高能量代谢对于寒证患者有很好的调节作用。吴茱萸为芸香科植物吴茱萸、石虎或疏毛吴茱萸的干燥近成熟果实,属热性中药代表,具有散寒止痛、降逆

止呕、助阳止泻的功效。

生物能量是维持机体生命的重要物质基础,能量代谢是人体物质代谢的最基本形式。线粒体是细胞活动的主要供能场所,是物质代谢和能量转化的中心站[2]。线粒体通过氧化磷酸化(oxidative phosphorylation,OXPHOS)生成大量ATP供应细胞内各种化学反应与功能的能量需要[3]。

本实验尝试从给药组与空白组表征大鼠肝脏线粒体呼吸功能各指标变化的角度,探索吴茱萸对大鼠肝脏线粒体呼吸功能的影响,以期探讨热性中药影响能量代谢的途径与机制。

正文

1试验材料

1.1试验动物健康雄性SD大鼠40只,体重220士20g,由江西中医学院实验动物中心提供。动物质量合格证编号:SCXK(赣)2006-0001;将大鼠按随机数字表法分为4组,每组10只动物,分别为吴茱萸20天组、吴茱萸30天组、吴茱萸40天组、空白组。试验期间动物均饲养于同一环境下,保持室温18~24℃,环境安静,动物随意进食进水,空白组给等体积生理盐水。所有动物于试验前12h禁食,但自由饮水。

1.2试验药材吴茱萸,购自北京鹤元堂医药科技有限公司。

1.3 试验试剂蔗糖(solarbio)、甘露醇(天津市恒兴化学试剂制造有限公司)、EDTA-2K (国药集团化学试剂有限公司批号:F20080423)、KCl(上海实验试剂有限公司批号:

200805025)、KH

2PO

4

(天津市福城化学试剂厂批号:20080913)、Tris(solarbio)、HCL(上

海焱晨化工实业有限公司)、线粒体提取试剂盒(碧云天生物技术研究所)、考马斯亮蓝G-250(sigma公司)、琥珀酸钠(sigma公司)、ADP-2Na(sigma公司)、Janusgreen B(sigma公司)、95%乙醇(天津市恒兴化学试剂制造有限公司批号:20090123)、85%磷酸(天津市恒兴化学试剂制造有限公司批号:20081203)。

1.4仪器设备 782-1Channel Oxygen system(Strathkelvin Instruments),低温高速离心机(Thermo),-80℃冰箱(Thermo ),DY89-Ⅱ型电动匀浆机(宁波新芝生物科技股份有限公司),SC-15数控超级恒温槽(宁波新芝生物科技股份有限公司),722型可见分光光度计(上海欣茂仪器有限公司),Gilson P型移液器,Sartorius PB-10 PH计,ELGA purelab UHQ超纯水机,分析天平(1/100、1/1000、1/10000、1/100000)(Sartorius)。

2试验方法

2.1 实验试剂配置

2.1.1 线粒体呼吸功能反应介质:称取4.0991g的甘露醇、2.5673g蔗糖、0.1211g Tris 、

0.0020g EDTA-2K、0.0373g KCL、0.0680g KH

2PO

4

(PH=7.4)用双蒸水定容至100ml。

2.1.2 线粒体提取缓冲液:称取21.393g蔗糖、0.151g Tris、0.101gEDTA-2K;(PH=7.4)用双蒸水定容至250ml。

2.1.3 底物(0.4M 琥珀酸纳):称取 1.62g琥珀酸钠用双蒸水定容至25ml。

2.1.4 50mM ADP:称取0.02365gADP-2Na用双蒸水定容至1ml。

2.2吴茱萸水煎剂的制备

取2.0kg吴茱萸药材,加入10倍量水,浸泡60min,回流提取60min,倒出药液,残渣再加入8倍水,回流提取60min。合并两次药液,滤过、浓缩后制成吴茱萸水提液,制备成生药浓度为0.42g/ml,放置于-20℃冰箱保存备用。

2.3 大鼠肝脏线粒体的制备

2.3.1 大鼠实验前禁食12小时,动物麻醉后,迅速手术、切取肝脏组织。

2.3.2 肝组织处理:迅速取出肝脏,移入25ml烧杯加入足量带冰渣生理盐水,将肝组织剪碎,清洗积血以尽可能减少残留血液。清洗完后迅速用滤纸吸干后用万分之一分析天平称取150mg肝脏组织,将称好的组织转移至预冷的玻璃电动匀浆器中,加入线粒体分离试剂,(注意:分离试剂要保存在4℃的冰水浴中)。

2.3.3 匀浆:用玻璃电动匀浆器匀浆,(注意:匀浆器应置于冰水浴中)。

2.3.4 离心:将匀浆分装在2个1.5ml的离心管内,平衡离心,4℃下以600g离心5分钟,此时细胞核,红细胞和细胞碎块及各种细胞器分布在不同层次,轻轻倒出上清装进两个离心管内,(注意:倾倒时必须小心勿将底部的细胞核倒出以保证所制备线粒体的纯度),平衡后11000rpm离心10分钟,将大部分上清倒出,所得褐色沉淀为最后制备的线粒体。取少量保存介质,将沉淀悬浮起来,用较大的Tip头缓慢的吹打均匀,操作中尽量避免出现气泡,取样测定蛋白浓度,此为最后制备的线粒体悬液,(整个线粒体制备过程均在4℃进行)。

2.4 线粒体活性鉴定

2.4.1 JanusgreenB染色原理:JanusgreenB是对线粒体专一的活细胞染料,具有脂溶性,能跨过细胞膜,解离后,有染色能力的基团带正电,结合在负电性的线粒体内膜上,内膜上的细胞色素氧化酶使染料保持氧化状态,呈蓝绿色,而在胞质内染料被还原成无色。有活性的线粒体被染成蓝绿色[4]。

2.4.2 0.02%JanusgreenB配置:称取0.02g的JanusgreenB,用生理盐水定容至100ml,装入棕色瓶中。

2.4.5 载玻片的制备:在载玻片上滴一滴线粒体溶液,再滴一滴0.02%JanusgreenB ,混匀,然后盖住盖玻片。

2.4.6 线粒体活性检测:将光学显微镜预热20min ,再对制备好的载玻片进行观察。结果显示:视野中有大量呈蓝绿色游动的颗粒,提示提取的线粒体有较好的活性。见图1

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图1 在光学显微镜40×下观察用Janusgreen B 染色的线粒体

2.4 线粒体蛋白定量[5]

2.4.1 线粒体蛋白含量用Bradford 法进行蛋白含量的测定,用标准的牛血清白蛋白作标准曲线,室温下测试。具体步骤为:

①试剂准备:100mg 考马斯亮蓝G250溶于50ml95%乙醇中,再加入100ml85%的磷酸,用蒸馏水定容至1L,混匀,用滤纸过滤,4℃保存备用

②准备各种不同浓度的牛血清白蛋白标准液,2.5ug/100ul ,5.0ug/100ul ,10.0ug/100ul ,20.0ug/100ul ,14.0ug/100ul ,每个浓度做三个样,以标准蛋白含量(mg )为横坐标,吸光度值为纵坐标,作图,即得到一条标准曲线。见图2。

y = 6.1099x + 0.0044

R 2

= 0.997

00.05

0.10.150.20.25

0.30

0.01

0.020.030.040.05

标准蛋白含量(mg)

吸光度

系列1

线性 (系列1)

图2 蛋白定量标准曲线

③计算待测蛋白样品的浓度。取4支试管,1支作空白,3支留作测定管,分别加入生理盐水:100ul、60ul、60ul、60ul,向后3支测定管中加入40ul的线粒体提取液,使每支试管总体积为100ul。最后各试管中分别加入3.0ml考马斯亮兰 G—250染色液,每加完一管,立即在旋涡混合器上混合(注意不要太剧烈,以免产生大量气泡而难于消除)。待测蛋白以及标准蛋白中加入3ml①中的考马斯亮蓝,用漩涡混合器混匀后静置2分钟,用722型可见分光光度计分别测量其在595nm处的吸光度值。

2.4.2加完试剂后室温下静置2~5分钟后,分别倒入0.5cm光径玻璃比色皿中,用可见分光光度计在波长为595nm处测定各样品的OD值,空白对照为第1号试管,即100ul双蒸水加

3.0mlG-250染色液。

2.4.3 根据标准曲线方程计算待测蛋白的浓度。

2.5 线粒体呼吸功能检测[6](Strathkelvin 782 氧电极法)

2.5.1 预热生物测氧仪30分钟,恒温30℃。

2.5.2 调节氧电极,用保险粉测试电极探头,确保仪器设施良好,可用于样品的测定。

2.5.3 在反应槽中加入0.7ml反应介质(75mmol/L蔗糖、225mmol/L甘露醇、0.05mmol/L

EDTA-2K、5mmol/L KCl、5mmol/L KH

2PO

4

、10 mmol/L Tris-HCl)加入反应池中孵育2min,以

空气饱和(反应温度28℃),使仪器稳定8~10mins,调节仪器将最大相对氧浓度值设定为20左右。测定介质量=反应总体积(2~3ml)-肝脏线粒体悬浮液体积-琥珀酸体积-ADP 体积。

2.5.4 加入0.1ml肝脏线粒体悬液(含0.1mg线粒体蛋白),记录一段时间基线,1min后加入反应底物10μl(0.5mol/L苹果酸钠、0.5mol/L丙酮酸钠)28℃温浴1 min,出现IV态呼吸。

2.5.5 记录约两分钟后,加入0.1mol/L ADP 5μl,出现III态呼吸,记录氧耗曲线,待ADP 完全消耗后线粒体又恢复到IV态呼吸。

2.5.6 RCR即加入ADP加入后(Ⅲ态呼吸, ST3)和ADP耗尽后(Ⅳ态呼吸,ST4)的氧耗量。RCR 反映线粒体膜的完整性和氧化磷酸化的偶联程度。P/O值为反应体系中加入ADP的nmol数与相应所消耗的nmol原子氧之比。

2.5.7 线粒体呼吸活性以单位时间内每毫克线粒体蛋白消耗多少表示(nmol·min-1·mg-1)。

3 结果

3.1大鼠肝脏线粒体呼吸耗氧曲线,见图3。

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图3 肝脏线粒体呼吸耗氧曲线图

3.1.1 吴茱萸对大鼠态3、态4的影响:见表1,结果表明吴茱萸组能显著加快Ⅲ态呼吸耗氧速率,降低Ⅳ态呼吸耗氧速率,(P<0.01)。

表1 吴茱萸对大鼠肝脏线粒体态3、态4呼吸的影响

3.1.2 吴茱萸对大鼠RCR 的影响:见表2,结果表明给药组RCR 高于空白组RCR ,可见给药组的能量生成、利用及产热均高于空白组(P<0.01)。

表2 吴茱萸对大鼠肝脏线粒体RCR 变化的影响

组别 N 剂量(g 生药/kg )

RCR 空白组 10 等体积 3.77±0.27 吴茱萸20天组 10 4.2 5.64±1.35

△△

吴茱萸30天组 10 4.2 3.96±1.21 吴茱萸40天组

10

4.2

4.09±0.21

△△

注:与空白对照组比较

△△

P <0.01

组别

N 剂量(g 生药/kg )

3(nmolO2/min.mg.pro)

4(nmolO2/min.mg.pro)

空白组

10

等体积 102.04±16.30 25.53±3.38 吴茱萸20天组 10 4.2 86.87±7.48 16.17±4.52 吴茱萸30天组 10 4.2 66.20±13.49 17.29±3.71

吴茱萸40天组 10

4.2

118.77±21.54

△△

28.99±4.73

△△

3.2 讨论

线粒体是一切生物进行生命活动的动力之源,是所有真核生物进行能量代谢、产生ATP 的重要场所[7]。线粒体的结构、功能变化必将引起其所在细胞的生物活性改变。要了解它的结构、功能变化就必需进行各种实验研究,首先就需要获得较为完整的线粒体。线粒体的提取主要是破膜以后使用梯度离心,利用沉降系数的不同获得线粒体。获得线粒体之后,需要检测线粒体的活性以确保获得的线粒体未受损伤。通常使用线粒体的呼吸控制率(respiratory control ratio)表示线粒体的活性。呼吸控制率是线粒体呼吸III态(StateIII,有呼吸底物和ADP)和呼吸IV态(StateIV,有呼吸底物,没有ADP)耗氧量的比值[8]。线粒体的呼吸耗氧偶联着ADP与Pi合成ATP的磷酸化反应,ADP/O值是指线粒体每吸收一克原子氧的同时,生成ATP的克分子数的比值,它反映线粒体的能量转化效率。呼吸控制率(RCR)与磷/氧(P/O)比值是反映磷酸化活性的重要指标,因而成为反映线粒体呼吸功能的主要指标[9,10]。

本实验研究发现,从呼吸功能指标方面看,吴茱萸组肝线粒体呼吸过程中R3较空白组快,因而使吴茱萸组RCR值(R3/ R4)高于空白组,表明给热性中药吴茱萸后能增加肝脏线粒体的有效氧耗。

本实验的结果,考虑可能与以下因素有关:1、吴茱萸产地不同是否会影响本实验结论2、本实验只研究了时效药物对大鼠肝脏线粒体的影响,缺少不同剂量下药物对大鼠肝脏线粒体的影响,因此,需要增加剂量组进一步考察。

本实验只是呼吸功能研究中的一小部分内容,在研究中尽管选择了一些方法,但与全面反应吴茱萸对机体的作用可能还有一段距离。有关线粒体呼吸功能的研究还有待进一步探讨。因此,有意义的呼吸功能的研究及分析方法的建立,在今后的研究中仍然是一个重点和难点。

参考文献

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文献综述

寒热症与能量代谢

吴玉霞(江西中医学院330004)黄丽萍(江西中医学院药学院330004)

摘要:寒热是八纲中重要的两个方面,不少人对寒体和热体在能量代谢方面的差异和影响进行了研究。观察寒、热药性中药对正常大鼠及寒、热症动物大鼠线粒体能量代谢的影响,研究其可能的作用机制,以及从线粒体能量代谢的角度阐释寒热药性的现代内涵。本文从寒热症与机体能量代谢的关系、寒热症在能量代谢上的研究进展、以及展望三方面进行了阐述。关键词:寒热症;能量代谢

1.寒热症与机体能量代谢的关系

有研究表明,热证时机体内物质代谢特别是分解代谢亢进,能量代谢增高,生热效应加强;寒证时则相反,机体内物质代谢特别是分解代谢受到抑制,生热效应降低,能量产生不足。

寒症的主要表现是:体温低,畏寒,口不渴,小便清长,大便稀溏,脉迟缓或沉细无力。寒症的出现可能与人体能量代谢降低有关,由于能量代谢降低,身体热量不足,体温较低,呼吸缓慢,心跳减慢,心搏出量减少,体表毛细血管及小动脉反射性收缩,大脑皮层兴奋性减低而产生上述一系列“寒”的证候。

热症的主要表现是:发热,手足温暖,不恶寒反恶热,口渴饮水多,喜欢冷饮,小便短赤,大便秘结,面色红,舌色红苔黄,脉数或脉洪有力。热症的病理生理基础可能与能量代谢增高有关,由于能量代谢增高,体温升高,呼吸增快,心搏出量增加,皮肤血管舒张,血流加快,以及皮肤表面和呼吸器官蒸发水分增多,因而引起一系列热的症候[1]。

早在上世纪60年代徐上林[2]根据临床报导指出,寒症或阳虚症患者基础代谢率偏低;热症阴虚证病人基础代谢率偏高。寒症患者神经类型多为抑制型,热症患者偏于兴奋型。梁月华[3]等发现寒症患者体温、心率、呼吸频率、血压等均有不同程度的下降,唾液量则增加,植物神经平衡指数降低,尿内CAs、17-OHCS排出量减少;而热症患者体温、心率、呼吸频率和血压均有所上升,唾液量尊,植物神经平衡指数升高,尿CAs、17-OHCS排出量明显增加。张伟荣等[4]采用肝脏ADK活性和细胞能荷作为反映能量生成状态的指标,肝Na+-K+-ATP酶作为能量利用状态的指标,对寒、热体大鼠进行能量代谢方面的研究,结果显示:热体组ADK活性

比寒体组、正常组均高;热体大鼠的肝匀浆Na+-K+-ATP酶活性比寒体大鼠高。可见,热体的能量生成、利用及产热均比寒体高。陈群[5]等观察热症模型大鼠肝细胞线粒体SDH的变化,结果表明:热症时SDH活性升高,提示此时机体的能量代谢处于亢盛状态,即热证与机体能量代谢变化趋势呈正相关。

《神农本草经》中指出“疗寒以热药,疗热以寒药”,药物的寒热特性对机体会产生不同的生物效应。寒性药消除机体“热”的病症, 热性药消除机体“寒”的病症。寒、热中药或其有效成分可通过影响线粒体能量代谢的某些环节, 实现其对机体能量代谢的调节。如丁安荣[6]等证明大黄、栀子等也具有抑制Na+-K+-ATP酶活性作用;相反,温热药淫羊藿则被证实能够使Na+-K+-ATP酶活性回升,并能对抗地塞米松引起的Na+K+-ATP酶“耗竭”现象。寒热中药或其有效成分可以通过作用于多个环节对于机体线粒体能量代谢产生影响[7-9]。

3.寒热证在能量代谢上的研究进展

能量代谢(energy metabolism)[10],顾名思义就是生物体内物质代谢过程中所伴随的能量释放、转移和利用,在分解代谢过程中,营养物质蕴藏的化学能便释放出来,这些化学能经过转化,便成了机体各种生命活动的能源,所以说分解代谢的放能反应。机体所需的能量来源于食物中的糖、脂肪和蛋白质。这些能源物质分子结构中的碳氢键蕴藏着化学能,在

氧化过程中碳氢键断裂,生成CO

2和H

2

O,同时释放出蕴藏的能。这些能量的50%以上迅速转

化为热能,用于维持体温,并向体外散发。其余不足50%则以高能磷酸键的形式贮存于体内,供机体利用。体内最主要的高能磷酸键化合物是三磷酸腺苷(ATP)。

生理状态下的机体“寒”、“热”状态反映了能量生成和能量利用之间的平衡关系,其中主要是ATP的生成,利用和产热作用,多种激素对此有调节作用。张伟荣等[11]的实验采用肝脏ADK活性和细胞能荷作为反映能量生成(主要是ATP生成)状态的指标,肝Na+ -K+-ATP酶活性为能量利用(主要是ATP利用及产热)状态的指标并观察了多种激素的水平,以期发现一些规律性的变化。D·E·Alkinson曾指出,细胞的能态及其变构调节物的均衡可用细胞的能量载荷表示,是细胞能量生成和利用的平衡状态的二种重要参数,能荷值越高,表明细胞内生成ADP的活性强,AD正是调节ADP生成ATP的关键酶。在正常情况下,机体细胞的能荷值在0.85

左右,并且强有力地抗拒任何偏移[12][13]。实验结果表明,热体组ADK活性比寒体组高,且也比常体组高。所以热体的细胞内能量生成率高。细胞能荷的测定也表明,热体比寒体确具有更高的能量生成能力。体内Na+-K+-ATP酶是个重要的消耗能量的酶,消耗能量大约占整个细胞总能量的40~60%[14],Na+-K+–ATP酶在消耗ATP的同时也释放出大量的热能。所以Na+-K+-ATP酶的活性越高,体内能量消耗和产热过程也越强。实验表明,热体大鼠的肝匀浆Na+-K+–ATP酶活性比寒体大鼠要高,两者相比有显著性差异。可见热体的能量生成和利用都比寒体要高,

新陈代谢率要快。

体温的维持主要与气的温煦作用有关[15],《难经·二十二难》曰:“气主煦之”。说明气是人体热量的来源。人体的体温是靠气的温煦作用来维持恒定的。而这种以温煦作用为主的气,即是阳气。而《内经》中就有“阳虚则外寒,阴虚则内热”的论述,提示阴阳与机体体温调节有一定的关系。实验研究发现,从肢端和穴位皮肤温、腋温、胃温和舌下温等多部位观测,初步证明阳虚、阴虚证具有体温规律性异常变化。阳虚患者体温平均水平低于正常,而阴虚患者高于正常。阴阳二者体温行为性调节异常,阳虚动物有显著的蜷缩拥挤、竖毛,这种体温调节行为是机体在阴虚或阳虚状态下导致的产热——散热失衡的自主性保护性反应,说明阴虚阳虚状态下存在体温调节功能的障碍,进一步研究发现阳虚证患者体温调定点上移。现代研究进一步表明,阴阳寒热的差异,其机制可能与机体微量元素及与之有关的能量代谢激素、DNA

修复能力等改变有关,如反映能量代谢的Na+-K+-ATP 酶的活性,调节产热的T

1 、T

4

以及升高基

础体温的性激素孕酮含量,寒体动物均明显低于热体,DNA修复水平寒体亦低于热体。许上林[16]报道,热证患者基础代谢率偏高,侯灿[17]把热证的原因归结为机体能量过剩。李华安[18]提出体温的高低标志着机体热量代谢的盈亏。

寒热是中医的核心问题,展望未来,寒热本质和能量代谢的研究将有更大的突破。

参考文献

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[13] t1.Rex Monigomery,et a1.Bio Chemistry 3rd edition.

London:Mosby Company,1980:2O3—2O6.

[14] 陈锐群等,阴虚内热证初探——知母对钠泵作用的大鼠体内实验,中西医结合杂志,1983,(4):235.

[15] 吴丽丽,严灿,中医脏腑功能与能量代谢和体温调节,甘肃中医学院学

报,1003-8450(2004)01-0012-02.

[16] 许上林,对“寒热虚实”实质的初步探讨,广东中医,1962,(5):3.

[17] 侯灿,“八纲”病理生理学基础初步探讨,中医杂志,1964,(120):460

[18] 李华安,寒热虚实100例:关于辩证客观化指标的探讨,山东中医杂志,1986,(13):19.

致谢

本课题是在黄丽萍教授精心指导下完成的。从课题的设计、实验操作、数据分析到论文最终定稿,黄老师无不悉心指导,倾注了很多心血,是该课题得以顺利完成的重要保证。她严谨的治学态度,活跃的学术思想,时时刻刻感染着我,鞭策着我,督促我用更高的标准要求自己。黄老师在工作、在学习以及生活上给与我最大限度的帮助、支持和谅解,在此谨表示最衷心的感谢!

感谢其他老师在实验操作具体安排上面给予我的帮助。给子我许多宝贵的建议、意见及指导,使我顺利完成本课题及本论文。

最后,再次衷心感谢曾经给与我帮助、支持的所有的人,感谢江西中医学院给我提供了良好的学习环境和机会!

此致

敬礼!

05中药班吴玉霞 2009 年5月

江西中医学院毕业论文原创性声明

本人郑重声明:所呈交的论文是本人在老师指导下独立进行研究所取得的科研成果。除了文中特别加以标注引用的地方外,论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写的成果和作品。对本论文的研究做出贡献的个人和集体,均已在文中以明确的方式表明。本人完全明白本声明的法律后果由本人承担。

签名:

年月日

关于毕业论文使用授权的声明

本人完全了解江西中医学院有关保留、使用毕业论文的规定。相关规定的内容是:学校有权保留所送交论文的原件,允许本论文被查阅和借阅;学校可以公布本论文的全部或部分内容,可以影印或其他复制手段保存本论文和汇编本论文。

签名:

年月日

江西中医学院毕业论文指导教师评阅意见表

(药学类专业)

论文题目

学生姓名学号系院

导师姓名职称单位

论文评阅意见:(导师根据任务书、开题报告的要求对学生的能力、工作量、格式规范、研究方法、完成质量等方面作出评审意见。)

是否同意推荐该论文为优秀论文同意()不同意()

指导教师:(签名)

年月日

说明:如同意请填写以下申报表,反之则不必填写!

江西中医学院本科生优秀毕业论文申报表

教学院名称(盖章):填表时间:年月日

姓名性别所在学院所学专业学生

情况

姓名性别专业技术职称所在单位指导教师

情况

毕业论文

(设计)题目

主要涉及

研究方向

选题依据

及背景

实验、实践

或实习基础

主要研读书目

答辨专家组

推荐意见

答辩专家组组长签字:年月日

教学院学术委

员会推荐意见

负责人签字:年月日

注:1、栏目内容填写不够可以附页;2、此表须单独上交实习管理老师。

江西中医学院本科毕业论文优秀指导教师申报表

指导教师情况姓名性别

专业技术

职称

所在单位

指导本科学生论文(设计)的情况当年指导

学生人数

学生所属学院学生所学专业

主要工作业绩

(本栏不够可

另附纸)

教学院

推荐意见教学院负责人签字:

(教务院盖章)年月日

教务处

审核意见教务处处长签字:

(教务处盖章)年月日

学校审核意见

分管教学校长签字:年月日

注:1、栏目内容填写不够可以附页;2、此表须单独上交实习管理老师。

实习总结

主要内容:1、实习期间主要做了那些工作?参加过那些学术活动(要求条例式)

2、实习期间主要运用了哪些知识和操作技能?熟练程度?(要求条例式)

3、实习期间的主要收获和不足,有何改进意见和建议?(要求条例式)学号姓名班级

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