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真菌培养基

真菌培养基
真菌培养基

[沙氏葡萄糖蛋白胨琼脂,沙堡弱培养基,SDA]

(一)组成

葡萄糖40.0g

蛋白胨10.0g

琼脂12.0~15.0g

蒸馏水1000ml

(二)制法

上述混合后加入200mg氯霉素,121摄氏度10分钟灭菌后备用。

(三)目的

是常用的分离或保存菌种的培养基。

[沙氏液基,SDB]

(一)组成

葡萄糖40.0g

蛋白胨10.0g

蒸馏水1000ml

(二)制法

上述混合后加入200mg氯霉素,121摄氏度10分钟灭菌后备用。

[加抗生素沙氏葡萄糖蛋白胨琼脂基,SDA with antibiotic]

(一)组成

葡萄糖40.0g

蛋白胨10.0g

琼脂12.0~15.0g

蒸馏水1000ml

(二)制法

上述混合后加入200mg氯霉素。250mg放线菌酮,121摄氏度10分钟灭菌后备用。[改良沙氏葡萄糖蛋白胨琼脂基,modified SDA]

(一)组成

葡萄糖20.0g

蛋白胨10.0g

琼脂12.0~15.0g

蒸馏水1000ml

(二)制法

上述混合后121摄氏度10分钟灭菌后备用。

(三)目的

保存菌种培养基。

[马铃薯葡萄糖琼脂,PDA]

(一)组成

马铃薯200.0g

葡萄糖20.0g

琼脂12.0~15.0g

蒸馏水1000ml

(二)制法

先将马铃薯洗净去皮切片,加水180ml,煮沸30分钟后过滤,再加葡萄糖、琼脂,将过滤液补足到1000ml,121摄氏度灭菌后备用。

(三)用途

此培养基是培养真菌较好的培养基,同时也是鉴定真菌较好的培养基之一。鉴定皮肤癣菌一般不用此培养基。

[玉米吐温80琼脂,CMA with T w80]

(一)组成

玉米粉40.0g

琼脂15.0g

蒸馏水1000ml

吐温80 10ml

(二)制法

先将玉米粉混于水中,65摄氏度水浴一小时,过滤,再补足水量,然后加入琼脂和吐温80,121摄氏度10分钟灭菌后备用。

(三)用途

用于观察白念珠菌厚壁孢子及假菌丝;红色毛癣菌在此培养基产色素较好。

[米饭培养基rice grain medium]

(一)组成

大米300.0g

蒸馏水1000ml

(二)制法

将3g大米放入试管中,加入10ml蒸馏水,高压121摄氏度10分钟灭菌后备用。

(三)用途

用于区分奥杜盎小孢子菌和犬小孢子菌,前者在米饭培养基上生长差,犬小孢子菌生长良好,产生黄色素和典型大分生孢子。

[麦芽浸汁琼脂,MA]

(一)组成

麦芽浸膏25.0g

琼脂15.0g

蒸馏水1000ml

(二)制法

上述混合后,121摄氏度10分钟灭菌后备用。

(三)用途

用于观察酵母产生子囊孢子。

[脑心浸膏琼脂。BHI]

(一)组成

脑心浸膏35.0g

琼脂15.0g

蒸馏水1000ml

(二)制法

上述混合后,121摄氏度10分钟灭菌后备用。

(三)用途

双相真菌可在该培养基上呈酵母相。

[皮肤癣菌鉴定培养基,DTM]

(一)组成

葡萄糖10.0g

蛋白胨10.0g

琼脂15.0g

酚红0.2g

0.8N盐酸 6.0g

放线菌酮0.5g

庆大霉素0.1g

氯霉素0.125g

蒸馏水1000ml

(二)制法

将葡萄糖、蛋白胨和琼脂混于1000ml水中,加入40ml酚红并震荡(酚红0.5g溶于15ml 0.1NaOH中加水至100ml),然后加入6ml0.8N HCL并震荡;放线菌酮0.5g溶于2ml丙酮中,倒入培养基中;庆大霉素及氯霉素溶于2ml水中,然后加入培养基。121摄氏度15分钟灭菌后备用。

(三)用途

分离和鉴定皮肤癣菌。

[尿素培养基,Christensen urea agar]

(一)组成

A溶液:

葡萄糖 1.0g

蛋白胨 1.0g

NaCl 5.0g

KH2PO4 2.0g

尿素20.0g

酚红0.012g

蒸馏水100ml

B溶液:

琼脂15.0g

蒸馏水900ml

(二)制法

将A溶液混匀,过滤灭菌;加热溶解B液,然后121摄氏度15分钟灭菌后。将B液冷却至50摄氏度后与A液混合后分装。

(三)用途

用于鉴定须癣毛癣菌和隐球菌,可使橘红色培养基变成紫红色。

[察氏培养基,CZA]

(一)组成

硝酸钠(NaNO3) 3.0g

磷酸二氢钾(KH2PO4) 1.0g

硫酸镁(MgSO4.7H2O)0.5g

氯化钾(KCl)0.5g

硫酸亚铁(FeSO4.7H2O)0.01g

葡萄糖30.0g

琼脂15.0g

蒸馏水1000ml

(二)制法

将以上成分依次混入1000ml水中,加热直到完全溶解,高压121摄氏度,15分钟灭菌后备用。

(三)用途

分离和鉴定青霉、曲霉。

[咖啡酸琼脂,CAA]

(一)组成

硫酸铵(NH4)2SO4 5.0g

磷酸二氢钾(KH2PO4)0.8g

硫酸镁(MgSO4.3H2O)0.7g

咖啡酸0.18g

枸橼酸铁0.002g

酵母浸膏 2.0g

葡萄糖 5.0g

琼脂15.0g

蒸馏水1000ml

(二)制法

将以上成分依次混入1000ml水中,枸橼酸铁先配成原液,然后加入。高压121摄氏度,15分钟灭菌后备用。

(三)用途

鉴定新生隐球菌和其他隐球菌。前者成为黑色或深棕色。

[高盐培养基,Takashio medium]

(一)组成

磷酸二氢钾(KH2PO4) 1.0g

硫酸镁(MgSO4.7H2O) 1.0g

葡萄糖 2.0g

蛋白胨 1.0g

琼脂15.0g

蒸馏水1000ml

(二)制法

将以上成分依次混入1000ml水中,高压121摄氏度,15分钟灭菌后备用。

(三)用途

用于观察皮肤癣菌的有性时期。

[子囊孢子培养基,ascospore agar]

(一)组成

醋酸钾10.0g

酵母浸膏 2.5g

葡萄糖 1.0g

琼脂15.0g

蒸馏水1000ml

(二)制法

将以上成分依次混入1000ml水中,高压121摄氏度,15分钟灭菌后备用。

(三)用途

鉴定产子囊孢子的真菌。

[酵母浸膏磷酸盐培养基,yeast extract phosphate agar]

(一)组成

A液:

酵母浸膏 1.0g

琼脂15.0g

蒸馏水1000ml

B液:

磷酸二氢钾(KH2PO4) 6.0g

磷酸二氢钠(NaH2PO4) 4.0g

蒸馏水30ml

C液:

氢氧化铵(NH4OH) 1.0g

(二)制法

先将A液混匀,将B液PH调节至6,然后取2ml加入A液,高压121摄氏度,15分钟灭菌后备用,每次用时加入少许氢氧化铵。

(三)用途

鉴定和培养组织胞浆菌,和皮炎芽生菌。

[石蕊牛乳培养基,litmus milk agar]

(一)组成

脱脂奶粉100.0g

石蕊750.0g

酵母浸膏 5.0g

葡萄糖 3.0g

蒸馏水1000ml

(二)制法

混合上述物质,高压121摄氏度,15分钟灭菌后备用。

(三)用途

用于鉴定放线菌。

[Bennett琼脂]

(一)组成

酵母浸膏 1.0g

牛肉浸膏 1.0g

酪蛋白氨基酸 2.0g

葡萄糖10.0g

琼脂15.0g

蒸馏水1000ml

(二)用途

用于需氧放线菌产生孢子。

[诺卡菌鉴定培养基,identification agar for Nocardia]

(一)组成

1、液化明胶脑心浸汁25.0g

明胶120.0g

蒸馏水1000ml

(PH 7.4~7.6)

2、水解淀粉淀粉 2.0g

葡萄糖 6.0g

蛋白胨10.0g

琼脂15.0g

蒸馏水1000ml 3、水解酪蛋白

A液:脱脂奶粉10.0g

蒸馏水90ml

B液:琼脂 3.0g

蒸馏水17ml

分别高压,然后混匀。

4、酪氨酸(黄嘌呤)琼脂营养琼脂23.0g

酪氨酸(黄嘌呤) 5.0(4.0)g

水1000ml

5、营养琼脂牛肉浸膏 3.0g

蛋白胨 5.0g

琼脂15.0g

蒸馏水1000ml

(二)制法

高压121摄氏度,15分钟灭菌后备用

(三)用途

用于鉴定诺卡菌和链丝菌。

[合成毛霉琼脂,synthetic agar for Mucor]

(一)组成

磷酸二氢钾(KH2PO4)0.5g

硫酸镁(MgSO4.7H2O)0.25g

葡萄糖40.0g

天门冬酰胺 2.0g

硫胺0.5g

琼脂15.0g

蒸馏水1000ml

(二)制法

将以上成分依次混入1000ml水中,高压121摄氏度,15分钟灭菌后备用。

(三)用途

鉴定接合菌。

[无碳源培养基,yeast nitrogen base]

(一)组成

硫酸铵(NH4)2SO4 5.0g

磷酸二氢钾(KH2PO4) 1.0g

硫酸镁(MgSO4.7H2O)0.5g

酵母浸膏0.2g

琼脂15.0g

蒸馏水1000ml

(二)制法

将以上成分依次混入1000ml水中,高压121摄氏度,15分钟灭菌后备用。

(三)用途

糖同化试验基础培养基。先转种菌种在培养基上,3天后重复转种一次。将菌悬液与上述培养基混合后制成平皿。将含20%的糖滤片置于平皿中,观察同化现象。先用蔡氏滤液过滤糖溶液。

[Leeming和Notman培养基]

(一)组成

蛋白胨10.0g

葡萄糖 5.0g

酵母浸膏 1.0g

牛胆盐 4.0g

甘油 1.0g

单硬脂酸甘油酯0.5g

吐温60 0.5ml

全脂牛奶10.0g

橄榄油20.0ml

琼脂12.0g

放线菌酮0.5g

氯霉素0.05g

蒸馏水1000ml

(二)用途

用于培养马拉色菌。

[七叶苷琼脂,esculin agar]

(一)组成

Leeming和Notman培养基加入0.2%枸橼酸铁和0.1%七叶苷。(二)用途

用于鉴定马拉色菌。

[橄榄油培养基,olive oil medium for Malassizia sp.]

(一)组成

蛋白胨10.0g

葡萄糖40.0g

酵母浸膏0.1g

单硬脂酸甘油酯 2.5g

吐温80 2.0ml

橄榄油40.0ml

琼脂18.0g

放线菌酮0.5g

氯霉素0.05g

蒸馏水1000ml

(二)用途

用于培养马拉色菌。其中如果没有橄榄油,也可以用菜籽油代替。

真菌培养基

真菌培养基 一、沙保罗琼脂培养基 [用途] 供真菌及酵母样真菌的分离培养用。 [配法] 麦芽糖40g,蛋白胨10g,琼脂20g,蒸馏水1L。 将上述成分溶于水,加热溶解,调pH至6.0±0.2,分装三角瓶或试管中,118℃灭菌15mi n,倾注平板或置斜面,无菌试验后备用。 [用法] 将标本接种培养基,如系血液标本,则采取1~2ml,与冷却至45℃左右沙保琼脂混合,倾注接种平板。分别置35℃和25℃恒温箱内同时培养。35℃培养48h,25℃需连续培养5天,逐日观察结果。发现真菌及酵母样可疑菌落,转种沙保菌斜面,获得纯培养后进行鉴定。 [质量控制] 白色念珠菌和新型隐球菌生长良好。 注: ⑴本培养基如不加入琼脂,即为沙保罗液体培养基,供真菌及念珠菌的增菌培养用。 ⑵增加氯霉素0.05~0.125mg/ml或放线菌酮0.5mg/ml,可抑制细菌和污染的霉菌及隐球菌生长。此二种药均耐热,可直接加入培养基内高压灭菌。 ⑶添加酵母浸膏5mg/ml,可促进皮肤癣菌生长。增加维生素B 0.1mg/ml,可促进紫色癣菌和断发癣菌生长。 ⑷将麦芽糖减少到20g/L,为沙保罗20g/L麦芽糖琼脂培养基,可供诱导真菌产生孢子用。 ⑸该培养基呈酸性,应提高20%的琼脂用量。 二、玉米粉琼脂培养基 [用途]

鉴定酵母样真菌用。白色念珠菌在该培养基上25℃24h培养可长出假菌丝,顶端有典型的厚壁孢子,可与其它念珠菌鉴别。 [配法] 玉米粉4g,琼脂粉8g,蒸馏水1L (pH6.0±0.2)。 将细米粉加水浸泡数分钟,扎紧瓶口,浸入60℃水浴4h,取出后用沙布过滤,除去粗渣,补足水分。无须调整pH。加入琼脂,煮沸溶解,有沉淀物再过滤1次,分装试管,121℃灭菌15min备用。 用玻璃片法点种后,置平皿内,保持一定湿度,置23~26℃下培养24~48h。取出玻片培养物,用高倍镜观察真假菌丝和有无厚壁孢子。 [质量控制] 白色念珠菌(ATCC 26790)厚膜孢子阳性;新型隐球菌(ATCC 9763)厚膜孢子阴性。注: ⑴玉米粉可用糯米粉或可溶性淀粉代替,效果相同。 ⑵该培养基加入10ml/L Tween-80,制成玉米粉Tween-80琼脂,用途相同,效果更好。

细菌真菌放线菌培养基配方

。 细菌培养基:肉膏蛋白胨培养基是一种广泛用于培养细菌的一. 培养基,肉膏蛋白胨培养基的主要成分是牛肉膏、蛋白胨和NaCl。 肉膏蛋白胨培养基 1.药品比例: 牛肉膏3g,蛋白胨10g,Nacl5g,琼脂15~20g,水1000mL, PH7.4~7.6 2.实验器材: 牛肉膏、蛋白胨、琼脂、可溶性淀粉、葡

萄糖、孟加拉红、链霉素、 1mol/L NaOH、lmol/L HCl、KNO、NaCl、K HPO·3HO、MgSO·7HO、222434 FeSO·7HO、4.5mL 无菌水6 管,10%酚液,49.5mL 无菌水( 带玻璃珠)124 瓶。土壤样品、试管、培养皿、移液管、三角瓶、烧杯、量筒、玻璃棒、天平、称量纸、牛角匙、pH试纸、棉花、报纸、记号笔、线绳、纱布、酒清灯。电炉、高压蒸气灭菌锅、超净工作台 . 3.配置方法 (1)称药品:按实际用量计算后,按配方称取各种药品放入大烧杯中。牛肉膏可放在小烧杯中称量,用热水溶解后倒入大烧杯。蛋白胨极易吸潮,故称量时要迅速。 (2)加热溶解:在烧杯中加入少于所需要的水量,然后放在石棉网上,小火加热,并用玻棒搅拌,待药品完全溶解后再补充水分至.

所需量。若配制固体培养基,则将称好的琼脂放入己溶解的药品中, 再加热融化,此过程中,需不断搅拌,以防琼脂糊底或溢出,最后补 足所失的水分。 (3)调pH:检测培养基的pH,若pH 偏酸,可滴加lmol/L NaOH,边加边搅拌,并随时用pH试纸检测,直至达到所需pH 范围。若偏碱,则用lmol/L HCl 进行调节。pH 的调节通常放在加琼脂之前。应注意 pH值不要调过头,以免回调而影响培养基内各离子的浓度。 (4)过滤:液体培养基可用滤纸过滤,固体培养基可用4 层纱 布趁热过滤,以利培养的观察。但是供一般

常用细菌培养基配方

常用抗生素 氨苄青霉素(ampicillin)(100mg/ml) 溶解1g氨苄青霉素钠盐于足量的水中,最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以25ug/ml~50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 羧苄青霉素(carbenicillin)(50mg/ml) 溶解0.5g羧苄青霉素二钠盐于足量的水中,最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以25ug/ml~50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 甲氧西林(methicillin)(100mg/ml) 溶解1g甲氧西林钠于足量的水中,最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以37.5ug/ml终浓度与100ug/ml氨苄青霉素一起添加于生长培养基。 卡那霉素(kanamycin)(10mg/ml) 溶解100mg卡那霉素于足量的水中,最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以10ug/ml~50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 氯霉素(chloramphenicol)(25mg/ml) 溶解250mg氯霉素足量的无水乙醇中,最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以12.5ug/ml~25ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 链霉素(streptomycin)(50mg/ml) 溶解0.5g链霉素硫酸盐于足量的无水乙醇中,最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以10ug/ml~50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 萘啶酮酸(nalidixic acid)(5mg/ml) 溶解50mg萘啶酮酸钠盐于足量的水中,最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以15ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 四环素(tetracyyline)(10mg/ml) 溶解100mg四环素盐酸盐于足量的水中,或者将无碱的四环素溶于无水乙醇,定容至10ml。分装成小份用铝箔包裹装液管以免溶液见光,于-20℃贮存。常以10ug/ml~50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 常用培养基 LB培养基 将下列组分溶解在0.9L水中: 蛋白胨10g 酵母提取物5g 氯化钠10g 如果需要用1N NaOH(~1ml)调整pH至7.0,再补足水至1L。注:琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。(实验室一般都不调PH) SOB培养基 将下列组分溶解在0.9L水中: 蛋白胨20g 酵母提取物5g 氯化钠0.5g 1 mol/L 氯化钾2.5ml

146种细菌-真菌-酵母培养基配方

146种培养基配方 ——2009年2月1日星期日by尛森蟲1. Acetobacter Medium (醋酸菌培养基) Glucose (葡萄糖) 100g Yeasst extract (酵母膏) 10g CaCO3 20g Agar (琼脂) 15g Distilled water (蒸馏水) 1000ml Adjust (调) pH to 6.8 适用范围:恶臭醋酸杆菌混浊变种 2. Nutrient Agar (营养肉汁琼脂) Pepton (蛋白胨) 5g Beef extract (牛肉膏) 30g NaCl 5g Agar (琼脂) 15g Distilled water (蒸馏水) Adjust (调) pH to 7.0-7.2 [Note]:When cultivation of Bacillus,5mg of to MnSO4.H2O may be added . It is favorable to promote spore formation . 适用范围:产气气杆菌、粪产碱杆菌、蜡状芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌蕈状变种、地衣形芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、多粘芽孢杆菌、尘埃芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、嗜热脂肪芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌深黑变种、苏云金芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌蜡螟亚种(青虫菌)、苏云金芽孢杆菌戈尔斯德变种、苏云金芽孢杆菌猝倒亚种、产氨短杆菌、黄色短杆菌、谷氨酸棒状杆菌、北京棒杆菌、大肠埃希氏菌(大肠杆菌)、铜绿假单胞菌(绿脓杆菌)、凸形假单胞杆菌、荧光假单胞菌、弯曲假单胞菌、恶臭假单胞菌、假单胞杆菌、藤黄八叠球菌、亚黄八叠球菌、尿素八叠球菌、金黄色葡萄球菌、运动发酵单孢菌 3. Azotobacter Medium (固氮菌培养基) KH2PO4 0.2g K2HPO4 0.8g MgSO4.7H2O 0.2g CaSO4.2H2O0.1g Na2MoO4.2H2O Trace(微量) Yeast axtract(酵母膏) 0.5g Mannitol(甘露醇) 20g FeCl3 Tract(微量) Distilled water (蒸馏水) 1000ml Agar (琼脂) 15g Adjust (调) pH to 7.2 适用范围:固氮菌、胶质芽孢杆菌 4. Corn Meal Medium (玉米粉培养基) Maize flour (玉米粉) 5g Peptone (蛋白胨) 0.1g Glucose (葡萄糖) 1g Tap water (自来水) 1000ml [Note]:Boil the mixture in autoclave at 121℃for 1 hr. distribute the medium into 18ⅹ18 mm tubes , each contains 10 ml of the li quid , then autoclave at 121℃for 1 hr . again (15磅蒸煮1小时,分装入18ⅹ18毫米试管,每管深度达6厘米。15磅再次灭菌15小时。) 5. Lactic-bacteria Medium I (乳酸菌培养基I ) Yeast extract (酵母膏) 7.5g Peptone (蛋白胨) 7.5g Glucose (葡萄糖) 10g KH2PO4 2g Tomato juice (西红柿汁) 100ml Tween (吐温) 80 0.5ml Distilled water (蒸馏水) 900ml pH 7.0 适用范围:植物乳杆菌(胚芽乳杆菌)、嗜热乳酸链球菌 6. Lactic-bacteria Midium Ⅱ(乳酸菌培养基Ⅱ) Lacto-casein peptone (乳酪蛋白胨) 10g Beef extract (蛋白胨) 10g Yeast extract (酵母膏) 5g Glucose (葡萄糖) 5g Tween (吐温) 80 1g K2HPO4 2g Na-acetate (醋酸钠) 5g Diamine citrate (柠檬酸二胺) 2g MgSO4.7H2O 0.2g MnSO4.H2O 0.05g Distilled water (蒸馏水) 1000m pH 6.5-6.8 适用范围:植物乳杆菌(胚芽乳杆菌) 7. Peotone Glucose Yeast extract Medium PGY (蛋白胨、酵母膏、葡萄糖培养基)

第五章 微生物的营养和培养基习题整理

第五章微生物的营养和培养基 一、选择题 1. 大多数微生物的营养类型属于:() A. 光能自养 B. 光能异养 C. 化能自养 D. 化能异养 2. 蓝细菌的营养类型属于:() A.光能自养 B. 光能异养C.化能自养 D. 化能异养 3. 碳素营养物质的主要功能是:() A. 构成细胞物质 B. 提供能量 C. A,B 两者 4. 占微生物细胞总重量70%-90% 以上的细胞组分是:() A. 碳素物质 B. 氮素物质 C. 水 5. 能用分子氮作氮源的微生物有:() A. 酵母菌 B. 蓝细菌 C. 苏云金杆菌 6. 大肠杆菌属于()型的微生物。 A. 光能无机自养 B. 光能有机异养 C. 化能无机自养 D. 化能有机异养 7. 自养型微生物和异养型微生物的主要差别是:() A. 所需能源物质不同 B. 所需碳源不同 C. 所需氮源不同 8. 基团转位和主动运输的主要差别是:() A. 运输中需要各种载体参与 B. 需要消耗能量 C. 改变了被运输物质的化学结构 9. 单纯扩散和促进扩散的主要区别是:() A. 物质运输的浓度梯度不同 B. 前者不需能量,后者需要能量 C. 前者不需要载体,后者需要载体 10. 微生物生长所需要的生长因子(生长因素)是:() A. 微量元素 B. 氨基酸和碱基 C. 维生素 D. B,C二者 11. 培养基中使用酵母膏主要为微生物提供:() A. 生长因素 B. C 源 C. N 源 12. 细菌中存在的一种主要运输方式为:() A. 单纯扩散 B. 促进扩散 C. 主动运输 D. 基团转位 13. 微生物细胞中的C素含量大约占细胞干重的:() A. 10% B. 30% C. 50% D.70%

真菌的培养及形态观察

题目:真菌的培养及形态观察 动物科学1204班聂孝明 20121546 指导教师:邹玲 摘要:了解酵母菌和霉菌的菌落特征及在培养基中的生长表现,还有真菌的分离培养方法和载片培养,学习真菌水浸片的制备及形态观察。本实验通过真菌的固体培养,酵母菌水浸片旳制备观察及划线分离培养的方法进行形态观察。在固体培养基上,观察到A菌落成绿色比较光滑、有分生孢子、菌丝有横隔为青霉。D菌落有大量直立菌丝并且顶部发黑、有孢子囊、菌丝无横隔为根霉。B菌落大而光滑、显微镜下菌体较大、有假菌丝并且出芽生殖的为酵母菌。 关键词:酵母菌霉菌形态观察分离培养 引言:真菌在自然界中分布广、数量大、种类多。酵母菌是单细胞微生物,细胞核和细胞质有明显的分化,个体直径比细菌大10倍左右,多为圆形或卵圆形,无性繁殖为出芽生殖,可以形成假菌丝,有性繁殖是通过结合产生子囊孢子。用美蓝染色液制成水浸片可以观察期外形和区分细菌的死活。霉菌的营养体是分支的丝状体,较大,分为基内菌丝和气生菌丝,不同的霉菌的繁殖菌丝可以形成不同的孢子,细胞易收缩变形,孢子容易分散。利用培养在玻璃纸上的霉菌作为观察材料,可以得到清晰,完整,保持自然状态的霉菌形态。 1材料与方法 1.1材料 1.1.1菌种:酵母菌,青霉,根霉的斜面培养菌种 1.1.2试剂:沙堡培养基、美蓝染色液、70%酒精、无菌水等 1.1.3其他:解剖针、玻片、盖玻片、接种环、显微镜等 1.2方法 1.2..1真菌的划线分离培养 培养基:将沙堡琼脂培养基融化后,冷却至45摄氏度,注入无菌平皿中,每皿15~20ml,做成平板备用。 接种:取待分离的材料少许,投入无菌水试管中,振荡,使分离菌悬浮于水中,将接种环火焰灭菌后冷却,取上述悬液,进行平板划线分离。 培养与观察:划线完毕后,置于28摄氏度温箱培养2~5天,待形成子实器官后,取单个菌落部分,制片镜检。若只有一种菌,既得纯培养物。如有杂菌可取培养物少许制成悬液,用作划线分离,有时反复多次可获得纯种。也可在放大镜下观察,用无菌镊子夹取一段分离的真菌菌丝,在平板上分离培养,即可得到真菌的纯培养物。 1.2.2真菌在固体培养基上的生长表现: 酵母菌在固体培养基上菌落呈油脂状或蜡质状,表面光滑、湿润、粘稠,有的表面呈现粉粒状,粗糙或褶皱,菌落边缘整齐、缺损或带丝状。菌落颜色有乳白色、黄色、红色等。将不同的霉菌在固体培养基上培养2~5d,可见霉菌有绒毛状、絮状、绳索状等。大小依霉菌种类而异,很多霉菌的孢子和菌丝能产生色素,致使菌落表面、背面甚至培养基呈现不同的颜色,如黄色、绿色、黑色、橙色等。 1.2.3真菌的形态观察 1.2.3.1酵母菌水浸片的制备:将美蓝染色液或蒸馏水滴于干净的载玻片中央,用接种环以无菌及操作取培养48h的酵母菌少许,均匀涂于液滴中,染色2~3min后加盖玻片。注意切勿产生气泡,然后低倍镜和高倍镜观察其细胞形态、芽殖方式,注意酵母菌的形态、大小和芽体,同时可以根据是否染上颜色来区别死活细胞。 1.2.3.2挑取真菌孢子接入盛有灭菌水的试管中,震荡试管制成孢子悬液,用灭菌滴管吸取

真菌培养常用培养基

[沙氏葡萄糖蛋白胨琼脂,沙堡弱培养基,SDA] (一)组成 葡萄糖40.0g 蛋白胨10.0g 琼脂12.0~15.0g 蒸馏水1000ml (二)制法 上述混合后加入200mg氯霉素,121摄氏度10分钟灭菌后备用。(三)目的 是常用的分离或保存菌种的培养基。 [沙氏液基,SDB] (一)组成 葡萄糖40.0g 蛋白胨10.0g 蒸馏水1000ml (二)制法 上述混合后加入200mg氯霉素,121摄氏度10分钟灭菌后备用。[加抗生素沙氏葡萄糖蛋白胨琼脂基,SDA with antibiotic] (一)组成 葡萄糖40.0g 蛋白胨10.0g 琼脂12.0~15.0g

蒸馏水1000ml (二)制法 上述混合后加入200mg氯霉素。250mg放线菌酮,121摄氏度10分钟灭菌后备用。[改良沙氏葡萄糖蛋白胨琼脂基,modified SDA] (一)组成 葡萄糖20.0g 蛋白胨10.0g 琼脂12.0~15.0g 蒸馏水1000ml (二)制法 上述混合后121摄氏度10分钟灭菌后备用。 (三)目的 保存菌种培养基。 [马铃薯葡萄糖琼脂,PDA] (一)组成 马铃薯200.0g 葡萄糖20.0g 琼脂12.0~15.0g 蒸馏水1000ml (二)制法 先将马铃薯洗净去皮切片,加水180ml,煮沸30分钟后过滤,再加葡萄糖、琼脂,将过滤

液补足到1000ml,121摄氏度灭菌后备用。 (三)用途 此培养基是培养真菌较好的培养基,同时也是鉴定真菌较好的培养基之一。鉴定皮肤癣菌一般不用此培养基。 [玉米吐温80琼脂,CMA with T w80] (一)组成 玉米粉40.0g 琼脂15.0g 蒸馏水1000ml 吐温80 10ml (二)制法 先将玉米粉混于水中,65摄氏度水浴一小时,过滤,再补足水量,然后加入琼脂和吐温80,121摄氏度10分钟灭菌后备用。 (三)用途 用于观察白念珠菌厚壁孢子及假菌丝;红色毛癣菌在此培养基产色素较好。 [米饭培养基rice grain medium] (一)组成 大米300.0g 蒸馏水1000ml (二)制法 将3g大米放入试管中,加入10ml蒸馏水,高压121摄氏度10分钟灭菌后备用。

真菌的分离及常用培养基

真菌的分离及常用培养基 关键词:真菌抗生素念珠菌白假丝酵母菌北纳创联北京标准物质网 医学真菌形态学观察是认识真菌的第一步,但仅通过光学显微镜对其进行观察并不能直接鉴定为真菌,需要对疑似相关病变部位的标本进行采集及分离,然后在合适的培养基进行培养。 一、病变部位标本的采集分离 通常采集疑似病变部位的皮肤附属物、分泌物、血液、痰液、脑脊液等体液,注意标本的新鲜度、无菌性、充足性,而且要对所采集标本进行正确消毒,杀死其中混有的杂菌。标本为脑脊液时,需进行离心,收集沉淀物进行培养,标本为血液时,需要先行增菌培养后再分离,这样可增加阳性率,未增菌培养的阴性结果并不能排除阳性结果。 二、真菌培养常用的培养基 目前商品化的真菌培养基多为干燥脱水的形式,可以按照配制说明书进行配制,值得注意的是,使用后的装培养基的瓶盖须拧严,防止受潮,以各下次使用。 1.沙保弱培养基及含抗生素的沙保弱培养基沙保弱培养基是培养真菌最常用的培养基,绝大多数的真菌均可以在其上生长,沙保弱培养基还可以添加抗生素,从而抑制多数细菌和污染真菌的生长速度。含抗生素的沙保弱培养基多用于皮肤癣菌和绝大多数致病真菌的分离和培养,但值得注意的是含有抗生素的培养基会抑制念珠菌属、隐球菌和少量丝状真菌的生长。 2.玉米粉(厚膜孢子)培养基多用于鉴别念珠菌属,培养基中的吐温可以促进白假丝酵母菌产生厚膜孢子,同时可以加入1%葡萄糖促进红色毛霉菌生长,并抑制须毛霉菌的生长。 3.土豆葡萄糖培养基土豆培养基中需将土豆切成小于1cm。的小块,常用于诱导真菌形成孢子或产生色素。 4.脑-心浸液琼脂培养基是一类营养丰富的真菌培养基,人工配制过程较为烦琐,一般通过商品化的培养基按照说明书进行配制。BHI多用于室温培养致病真菌,也可用于35~37℃培养致病真菌的酵母相。

培养基的主要成分及其作用

培养基的主要成分及其作用 培养基是用人工方法配制而成,适合微生物生长繁殖需要的混合营养基质。适宜的培养基不仅用于细菌的分离、纯化、传代及菌种保存等,还可用于研究细菌的生理、生化特性。因此,掌握培养基的制备技术及其原理,是进行细菌学检验的重要环节和必不可少的手段。 细菌的生长繁殖除需要一定的营养物质,如含氮化合物、糖类、盐类、类脂质及水外,有的还需加入特殊营养物质,如维生素的辅助生长因子或某些其他特殊因子;有的则需加入指示剂或抑制剂,以利于细菌的分离和鉴定。 1.营养物质营养物质提供细菌生长繁殖所需的能量、合成菌体的原料以及激活细菌酶的活性和调节渗透压等作用。细菌需要的营养物质主要有氮源、碳源、无机盐及生长因子。 (1)蛋白胨:是由动物或植物蛋白质经酶或酸碱分解而产生的中间产物,是培养基中最常用的成分之一,主要供给细菌氮源,合成菌体蛋白质、酶类等,另外还具有缓冲作用。由于蛋白质的来源和消化程度不同,因而制得的蛋白胨质量相差很大。按照生产原料的性质,蛋白胨可分为植物胨和动物胨两类。蛋白胨经喷雾干燥成粉末,吸水性较强,保存时应干燥密封,防止潮解结块。 (2)肉浸液:系用新鲜牛肉(去掉脂肪、肌膜及肌腱等)浸泡煮沸制成的肉汤。肉浸液中包括含氮和非含氮两类浸出物,还有一些生长因子。作为细菌生长所需要的氨源和碳源,由丁加热后大部分蛋白质凝固,仅留少部分氨基酸和其他含氮物质,不能满足细菌生长需要,故在制作培养基时,一般需加1%~2%蛋白胨和%的NaCl。 (3)牛肉膏:又称牛肉浸膏,是肉浸液加热浓缩而得到的一种棕黄色至棕褐色的膏状物。其中不耐热的物质如糖类已被破坏,故其营养价值不及肉浸液,但因无糖,可作为肠道细菌鉴别培养基的基础成分。 (4)糖(醇)类:含有细菌所需的碳源。制备培养基所应用的糖(醇)类很多,常用的糖类有单糖(如葡萄糖、阿拉伯糖等)、双糖(如乳糖、蔗糖等)、多糖(如菊糖、淀粉等):醇类有甘露醇、卫矛醇及侧金盏花醇等。在培养基中加入糖(醇)类物质,除提供细菌作为碳源和能源外,主要利用细菌对糖(醇)类利用能力的差异鉴别细菌。 (5)血液:血液除能增加培养基中蛋白质、多种氨基酸、糖类及无机盐等营养成分外,尚能提供辅酶、血红素等特殊生长因子。此外,还可以观察细菌的溶血现象。

1细菌培养接种、常用生化反应及细菌生长方式

实验报告 课程名称: 医学微生物学 指导老师:________________成绩:__________________ 实验名称: 细菌培养接种、常用生化反应及细菌生长方式 实验类型:_____同组学生姓名:_____ 一、实验目的和要求(必填) 二、实验内容和原理(必填) 三、主要仪器设备(必填) 四、操作方法和实验步骤 五、实验数据记录和处理 六、实验结果与分析(必填) 七、讨论、心得 一、实验目的 1. 了解细菌常用培养基 2. 掌握细菌的分离培养技术及纯种移种法 3. 熟悉细菌各种生长现象 4. 熟悉细菌常用生化反应 二、实验材料 生理盐水、大肠杆菌液、白色葡萄球菌液、痢疾杆菌液,接种环、酒精灯以及多种培养基。 三、操作方法 1. 细菌接种法 1) 分离培养法——平板划线法(葡萄球菌/大肠埃希菌) 2) 纯种培养法 ① 斜面培养基接种法(葡萄球菌/大肠埃希菌) a) 用左手握住菌种管和斜面培养基管,右手持接种环或接种针。 b) 用右手小指与手掌、小指与无名指分别拔出两管的棉塞,将管口通过火焰灭菌。 c) 用接种环或接种针伸入菌种管内,挑取用来接种的菌苔。 d) 伸入斜面培养管内,先从斜面底部到顶端拖一条接种线,再自下而上蜿蜒划线。 e) 接种完成之后,用火焰灭菌培养管口,并塞上棉塞,置于37℃培养。 ② 半固体培养基接种法 --- 穿刺接种法(大肠埃希菌/痢疾杆菌) a) 用左手握住菌种管和半固体培养管,右手持接种针 b) c) 用接种针伸入菌种管内,挑取用来接种的菌苔。 d) 垂直刺入半固体中心,至近管底部,然后沿穿刺线退出。 e) 塞回棉塞,接种针重新灭菌。接种完毕,于37℃培养18—24h ③ 液体培养基接种法 (葡萄球菌/大肠埃希菌/痢疾杆菌) a) 用灭菌接种环挑取用来接种的菌苔。 b)

细菌真菌放线菌培养基配方

。 一.细菌培养基:肉膏蛋白胨培养基是一种广泛用于培养细菌的 培养基 ,肉膏蛋白胨培养基的主要成分是牛肉膏、蛋白胨和NaCl。肉膏蛋白胨培养基 1.药品比例: 牛肉膏 3g,蛋白胨 10g,Nacl5g,琼脂 15~20g,水 1000mL,PH7.4~7.6 2.实验器材: 牛肉膏、蛋白胨、琼脂、可溶性淀粉、葡萄糖、孟加拉红、链霉素、 1mol/L NaOH、lmol/L HCl、KNO3、NaCl、K2 HPO4·3H2O、MgSO4·7H2O、FeSO4·7H2O、4.5mL 无菌水 6 管,10%酚液,49.5mL 无菌水 ( 带玻璃珠 )1瓶。土壤样品、试管、培养皿、移液管、三角瓶、烧杯、量筒、玻璃棒、天平、称量纸、牛角匙、pH试纸、棉花、报纸、记号笔、线绳、纱布、酒清灯。电炉、高压蒸气灭菌锅、超净工作台 . 3.配置方法 (1)称药品:按实际用量计算后,按配方称取各种药品放入大 烧杯中。牛肉膏可放在小烧杯中称量,用热水溶解后倒入大烧杯。蛋 白胨极易吸潮,故称量时要迅速。 (2)加热溶解:在烧杯中加入少于所需要的水量,然后放在石 棉网上,小火加热,并用玻棒搅拌,待药品完全溶解后再补充水分至

所需量。若配制固体培养基,则将称好的琼脂放入己溶解的药品中, 再加热融化,此过程中,需不断搅拌,以防琼脂糊底或溢出,最后补 足所失的水分。 (3)调 pH:检测培养基的 pH,若 pH偏酸,可滴加 lmol/L NaOH,边加边搅拌,并随时用pH试纸检测,直至达到所需pH范围。若偏碱,则用 lmol/L HCl 进行调节。 pH 的调节通常放在加琼脂之前。应注意 pH值不要调过头,以免回调而影响培养基内各离子的浓度。 ( 4)过滤:液体培养基可用滤纸过滤,固体培养基可用 4 层纱布趁热过滤,以利培养的观察。但是供一般使用的培养基,这步可省 略。 (5)分装:按实验要求,可将配制的培养基分装入试管或三角 瓶内。分装时可用漏斗以免使培养基沾在管口或瓶口上而造成污染。 分装量:固体培养基约为试管高度的l/5 ,灭菌后制成斜面。分装 入三角瓶内以不超过其容积的一半为宜。半固体培养基以试管高度 的1/3 为宜,灭菌后垂直待凝。 (6)加棉塞:试管口和三角瓶口塞上用普通棉花 ( 非脱脂棉 ) 制 作的棉塞。棉塞的形状、大小和松紧度要合适,四周紧贴管壁,不留缝隙,才能起到防止杂菌侵入和有利通气的作用。要使棉塞总长约 3/5 塞入试管口或瓶口内,以防棉塞脱落。有些微生物需要更好的通 气,则可用 8 层纱布制成通气塞。有时也可用试管帽或塑料塞代替棉塞。 (7)包扎:加塞后,将三角瓶的棉塞外包一层牛皮纸或双层报 纸,以防灭菌时冷凝水沾湿棉塞。若培养基分装于试管中,则应以5 支或 7 支在一起,再于棉塞外包一层牛皮纸,用绳扎好。然后用记号 笔注明、培养基名称、组别、日期。

细菌培养常用培养基和抗生素的配制方法

细菌培养常用培养基和抗生素的配制方法 、常用培养基 1、LB 培养基将下列组分溶解在0.9L 水中:蛋白胨10g 酵母提取物5g 氯化钠10g 如果需要用INNaOH (?1ml)调整pH至7.0,再补足水至1L。注:琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。 2 、SOB 培养基 将下列组分溶解在0.9L水中: 蛋白胨20g 酵母提取物5g 氯化钠0.5g 1mol/L 氯化钾2.5ml 用水补足体积到1L。分成100ml的小份,高压灭菌。培养基冷却到室温后,再在每100ml 的小份中加1ml 灭过菌的1mol/L 氯化镁。 3、SOC培养基 成分、方法同SOB培养基的配制,只是在培养基冷却到室温后,除了在每100ml的小份中 加1ml 灭过菌的1mol/L 氯化镁外,再加2ml 灭菌的1mol/L 葡萄糖(18g 葡萄糖溶于足够水中,再用水补足到100ml,用0.22um的滤膜过滤除菌)。 4 、TB 培养基 将下列组分溶解在0.9L水中: 蛋白胨12g 酵母提取物24g 甘油4ml 各组分溶解后高压灭菌。冷却到60 C , 再加100ml灭菌的 170mmol/LKH2PO4/0.72mol/LK2HPO4 的溶液(2.31g 的KH2PO4和12.54gK2HPO4溶在足量的水中,使终体积为100ml。高压灭菌或用0.22um的滤膜过滤除菌)。 5、2X Y培养基 将下列组分溶解在0.9L水中: 蛋白胨16g 酵母提取物10g 氯化钠4ml

如果需要用INNaOH (?1ml )调整pH 至7.0,再补足水至1L 。注:琼脂平板需添加琼脂粉 12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉 7g/L 。 6、YPD 培 养基 将下列组分溶解在 0.9L 水中: 蛋白胨 20g 酵母提取物 10g 葡萄糖 20g 用水补足体积为 1L 后,高压灭菌。建议在高压灭菌之前,对色氨酸营养缺陷型每升培养基 添加1.6g 色氨酸,因为 YPD 培养基是色氨酸限制型培养基。为了配制平板,需要在高压灭 菌前加入 20g 琼脂粉。 二、常用抗生素 氨苄青霉素( ampicillin )( 100mg/ml ) 溶解 1g 氨苄青霉素钠盐于足量的水中,最后定容至 25ug/ml ? 50ug/ml 的终浓度添加于生长培养基。 羧苄青霉素( carbenicillin )( 50mg/ml ) 溶解0.5g 羧苄青霉素二钠盐于足量的水中,最后定容至 以 25ug/ml ? 50ug/ml 的终浓度添加于生长培养基。 甲氧西林( methicillin )( 100mg/ml ) 溶解1g 甲氧西林钠于足量的水中, 最后定容至10ml 。分装成小份于-20C 贮存。常以37.5ug/ml 终浓度与 100ug/ml 氨苄 青霉素一 起添加于生长培养基。 卡那霉素( kanamycin )( 10mg/ml ) 溶解0.1g 卡那霉素于足量的水中, 最后定容至10ml 。分装成小份于-20C 贮存。常以10ug/ml 50ug/ml 的终浓度添加于生长培养基。 氯霉素( chloramphenicol )( 25mg/ml ) 溶解 0.25g 氯霉素足量的无水乙醇中,最后定容至 12.5ug/ml ?25ug/ml 的终浓度添加于生长培养基。 链霉素( streptomycin )( 50mg/ml ) 溶解 0.5g 链霉素硫酸盐于足量的无水乙醇中,最后定容至 常以 10ug/ml ? 50ug/ml 的终浓度添加于生长培养基。 萘啶酮酸( nalidixicacid )( 5mg/ml ) 溶解0.05g 萘啶酮酸钠盐于足量的水中,最后定容至 10ml 。分装成小份于-20C 贮存。常以 15ug/ml 的终浓度添加于生长培养基。 四环素(tetracyyline ) ( 10mg/ml ) 溶解0.1g 四环素盐酸盐于足量的水中,或者将无碱的四环素溶于无水乙醇,定容至 10ml 。 分装成小份用铝箔包裹装液管以免溶液见光,于 -20 C 贮存。常以10ug/ml ?50ug/ml 的终浓 10ml 。分装成小份于-20C 贮存。常以 10ml 。分装成小份于-20C 贮存。常 10ml 。分装成小份于-20 C 贮存。常以 10ml 。分装成小份于-20 C 贮存。

真菌常用培养基的配方

酵母菌、霉菌常用培养基的配制 一、目的要求 了解合成培养基、半合成培养基和天然培养基的配制原理。 学习和掌握麦芽汁培养基、马铃薯葡萄糖培养基、豆芽汁葡萄糖培养基和察氏培养基的配制方法。 二、基本原理 麦芽汁培养基和马铃薯葡萄糖培养基被广泛用于培养酵母菌和霉菌。马铃薯葡萄糖培养基有时也可用于培养放线菌。豆芽汁葡萄糖培养基也是培养酵母菌及霉菌的一种优良培养基。察氏培养基主要用于培养霉菌观察形态用。麦芽汁培养基为天然培养基,马铃薯葡萄糖培养基和豆芽汁葡萄糖培养基二者均为半合成培养基,而察氏培养基则为合成培养基。培养基配方中出现的自然pH系指培养基不经酸、碱调节而自然呈现的pH。 三、实验材料 (一)药品 葡萄搪、蔗糖、NaN03、K2HP04、KCl、MgSO4·7H2O,FeS04、琼脂。 (二)仪器 天平、高压蒸汽灭菌锅。 (三)玻璃器皿 移液管、试管、锥形瓶、烧杯、量筒、培养皿、玻璃漏斗等。 (四)其他物品 药匙、pH试纸、称量纸、记号笔、棉花、纱布、线绳、塑料试管盖、牛皮纸、报纸、新鲜麦芽汁、黄豆芽、马铃薯等。 四、实验内容 (一)麦芽汁培养基的配制 1.培养基成分 新鲜麦芽汁一般为10-15波林。 2.配制方法

(1)用水将大麦或小麦洗净,用水浸泡6-12h,置于15℃阴凉处发芽,上盖纱布,每日早、中、晚淋水一次,待麦芽伸长至麦粒的两倍时,让其停止发芽,晒干或烘干,研磨成麦芽粉,贮存备用。 (2)取一份麦芽粉加四份水,在65℃水浴锅中保温3-4h,使其自行糖化,直至糖化完全(检查方法是取0.5ml的糖化液,加2滴碘液,如无蓝色出现,即表示糖化完全)。 (3) 糖化液用4-6层纱布过滤,滤液如仍混浊,可用鸡蛋清澄清(用一个鸡蛋清,加水20 m1,调匀至生泡沫,倒入糖化液中,搅拌煮沸,再过滤)。 (4)用波美比重计检测糖化液中糖浓度,将滤液用水稀释到10-15波林,调pH 至6.4。如当地有啤酒厂,可用未经发酵,未加酒花的新鲜麦芽汁,加水稀释到10-15波林后使用。 (5)如配固体麦芽汁培养基时,加入2%琼脂,加热融化,补充失水。 (6)分装、加塞、包扎。 (7)高压蒸汽灭菌100 Pa灭菌20 min。 (二)马铃薯葡萄糖培养基的配制 1、培养基成分 马铃薯20g 葡萄糖 2 g 琼脂 1.5-2g 水100ml 自然pH 2.配制方法 (1)配制20%马铃薯浸汁取去皮马铃薯200g,切成小块,加水1000m1。80℃浸泡lh,用纱布过滤,然后补足失水至所需体积。100 Pa灭菌20 min。即成20%马铃薯浸汁,贮存备用。 (2)配制时,按每100 m1马铃薯浸汁加入2g葡萄糖,加热煮沸后加入2g琼脂,继续加热融化并补足失水。

36种常用微生物培养基配制汇总

36种微生物常用培养基配制 1.牛肉膏蛋白胨培养基(用于细菌培养) 牛肉膏3g,蛋白胨10g,NaCl 5g,水1000mL,pH7.4~7.6。 2.高氏1号培养基(用于放线菌培养) 可溶性淀粉20g,KNO3 1g,NaCl 0.5g,K2HPO4?3H2O 0.5g,MgSO4?7H2O0.5g,FeSO4?7H2O0.01g,水1000mL,pH7.4~7.6。配制时注意:可溶性淀粉要先用冷水调匀后再加入到以上培养基中。 3.马丁氏(Martin)培养基(用于从土壤中分离真菌) K2HPO41g,MgSO4?7H2O0.5g,蛋白胨5g,葡萄糖10g,1/3000孟加拉红水溶液100mL,水900mL,自然pH,121℃湿热灭菌30min。待培养基融化后冷却55~60℃时加入链霉素(链霉素含量为30μg/mL)。 4.马铃薯培养基(PDA)(用于霉菌或酵母菌培养) 马铃薯(去皮)200g,蔗糖(或葡萄糖)20g,水1000mL,配制方法如下: 将马铃署去皮,切成约2cm2的小块,放入1500mL的烧杯中煮沸30min,注意用玻棒搅拌以防糊底,然后用双层纱布过滤,取其滤液加糖,再补足至1000mL,自然pH,霉菌用蔗糖,酵母菌用葡萄糖。 5.察氏培养基(蔗糖硝酸钠培养基)(用于霉菌培养) 蔗糖30g,NaNO3 2g,K2HPO4 1g,MgSO4?7H2O0.5g,KCl 0.5g,FeSO4?7H2O0.1g,水1000mL,pH7.0~7.2。 6.Hayflik培养基(用于支原体培养) 牛心消化液(或浸出液)1000mL,蛋白胨10g,NaCl 5g,琼脂15g,pH7.8~8.0,分装每瓶70mL,121℃湿热灭菌15min,待冷却至80℃左右,每70mL中加入马血清20mL,25%鲜酵母浸出液10mL,15醋酸铊水溶液2.5mL,青霉素G钾盐水溶液(20万单位以上)0.5mL,以上混合后倾注平板。 *注意:醋酸铊是极毒的药品,需特别注意安全操作。 7.麦氏(McCLary)培养基(醋酸钠培养基) 葡萄糖0.1g, KCl 0.18g,酵母膏0.25g,醋酸钠0.82g,琼脂l.5g,蒸馏水l00mL。溶解后分装试管,1l5℃湿热灭菌15min。 8.葡萄糖蛋白胨水培养基(用于V.P.反应和甲基红试验) 蛋白胨0.5g,葡萄糖0.5g,K2HPO4 0.2g,水100mL,pH7.2,1l5℃湿热灭菌20min。 9.蛋白胨水培养基(用于吲哚试验) 蛋白胨10g,NaCl 5g,水1000mL,pH7.2~7.4,121℃湿热灭菌20min。 10.糖发酵培养基(用于细菌糖发酵试验) 蛋白胨0.2g,NaCl 0.5g,K2HPO4 0.02g,水100mL,溴麝香草酚蓝(1%水溶液)0.3mL,糖类lg。分别称取蛋白胨和NaCl溶于热水中,调pH至7.4,再加入溴麝香草酚蓝(先用少量95%乙醇

实验四 细菌、真菌、放线菌的分离与培养

实验报告 课程名称:环境微生物学实验实验类型:综合实验 实验项目名称:微生物的分离与培养与菌落观察 学生姓名:专业:环境工程学号: 同组学生姓名: 指导老师: 实验地点:实验日期:2018 年 10月16日 一、实验目的和要求 1.掌握微生物接种培养技术 2.掌握微生物分离纯化技术 3.学习并掌握放菌落形态结构的观察方法,认识并理解它们的形态特征。 二、实验内容和原理 土壤是微生物生活的大本营,是寻找和发现具有重要价值微生物的主要菌源。在不同土壤中,各类微生物的数量千差万别。为了分离获得某种微生物,需要预先制备不同稀释度的菌悬液,并添加相应的抗生素抑制不需要的微生物,例如,添加链霉素25~50U/mL抑制细菌;添加0.5%重铬酸钾液或制霉素50 U/mL 抑制霉菌。通过10倍稀释以及平板分离、平板涂布和平板划线等操作,微生物可在平板上分散成单个的个体,经过适宜条件培养,单个个体可形成单个菌落。挑取单个菌落转接至新鲜平板上,即可使目的菌种纯化。 1.菌种的分离纯化:从混杂微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物分离 与纯化。在分子生物学的研究及应用中,不仅需要通过分离纯化技术从混杂的天然微生物群中分 离出特定的微生物,而且还必须随时注意保持微生物纯培养物的“单一性”,防止其他微生物的 混入。 2.平板涂布法:因为将微生物悬液先加到较烫的培养基中再倒平板易造成某些热敏感菌的死亡,且 采用稀释倒平板法也会使一些严格好氧菌因被固定在琼脂中间缺乏氧气而影响其生长,因此在微 生物学研究中常用的纯种分离方法是涂布平板法。用途上,一般多用于从菌种的纯化;优点是可 以观察菌落特征,对混合菌进行分离;但不能计数 3.平板划线法:最简单的分离微生物的方法是平板划线法,其原理是将微生物样品在固体培养基表 面多次作“由点到线”稀释而达到分离目的的。划线的方法很多,常见的比较容易出现单个菌落 的划线方法有斜线法、曲线法、方格法、放射法、四格法等。用途一般多用于筛选菌株。一般用 于平板培养基的回收率计数。优点是可以计数,可以观察菌落特征。缺点是吸收量较少,较麻烦,平板不于燥效果不好,容易蔓延。如果菌液密度天的话,长不出单菌落。 4.稀释倒平板法:稀释倒平板法是将细菌与液态的培养基混合后倒入培养皿再冷却凝固,使样品中 的微生物细胞充分分散开,使其均匀分布于平板中的培养基内。经培养后,单个细胞及聚在一起 的细胞可以生长繁殖,形成一个肉眼可见的菌落,统计菌落数目,即可用以评价样品中的微生物 的数量。所以细菌在培养基的内部和表面都有,适合厌氧型微生物。 5.菌种保藏:菌种保藏是将微生物的菌种经长时间的保存,不污染其它杂菌,及可保持其形态特征 和生理性状,减少变异,防止衰老,以便于将来使用。保藏菌种一-般是选用它的休眠休,如孢 子;芽孢等等,并且要创造一一个低温;干燥; 缺氧;避光和缺少营养的环境条件,以利于休眠体 能长期地处于休眠状态。对于不产孢子的微生物,应使其新陈代谢处于最低状态,又不会死亡,

真菌培养常用培养基(完整资料).doc

此文档下载后即可编辑 [沙氏葡萄糖蛋白胨琼脂,沙堡弱培养基,SDA] (一)组成 葡萄糖40.0g 蛋白胨10.0g 琼脂12.0~15.0g 蒸馏水1000ml (二)制法 上述混合后加入200mg氯霉素,121摄氏度10分钟灭菌后备用。(三)目的 是常用的分离或保存菌种的培养基。 [沙氏液基,SDB] (一)组成 葡萄糖40.0g 蛋白胨10.0g 蒸馏水1000ml (二)制法 上述混合后加入200mg氯霉素,121摄氏度10分钟灭菌后备用。[加抗生素沙氏葡萄糖蛋白胨琼脂基,SDA with antibiotic] (一)组成 葡萄糖40.0g 蛋白胨10.0g 琼脂12.0~15.0g 蒸馏水1000ml (二)制法 上述混合后加入200mg氯霉素。250mg放线菌酮,121摄氏度10分钟灭菌后备用。 [改良沙氏葡萄糖蛋白胨琼脂基,modified SDA]

(一)组成 葡萄糖20.0g 蛋白胨10.0g 琼脂12.0~15.0g 蒸馏水1000ml (二)制法 上述混合后121摄氏度10分钟灭菌后备用。 (三)目的 保存菌种培养基。 [马铃薯葡萄糖琼脂,PDA] (一)组成 马铃薯200.0g 葡萄糖20.0g 琼脂12.0~15.0g 蒸馏水1000ml (二)制法 先将马铃薯洗净去皮切片,加水180ml,煮沸30分钟后过滤,再加葡萄糖、琼脂,将过滤液补足到1000ml,121摄氏度灭菌后备用。 (三)用途 此培养基是培养真菌较好的培养基,同时也是鉴定真菌较好的培养基之一。鉴定皮肤癣菌一般不用此培养基。 ] [玉米吐温80琼脂,CMA with T w80 (一)组成 玉米粉40.0g 琼脂15.0g 蒸馏水1000ml 吐温80 10ml (二)制法

最新培养基的种类

培养基的种类繁多。因考虑的角度不同,可将培养基分成以下一些类型:(一)根据所培养微生物的种类作分类 根据微生物的种类可分为:细菌、放线菌、酵母菌和霉菌培养基。 常用的异养型细菌培养基为牛肉膏蛋白胨培养基,常用的自养型细菌培养基是无机的合成培养基,常用的放线菌培养基为高氏一号合成培养基,常用的酵母菌培养基为麦芽汁培养基,常用的霉菌培养基为察氏合成培养基。 (二)根据对培养基成分的了解程度作分类 1. 天然培养基 指一类利用动、植物或微生物体包括用其提取物制成的培养基,这是一类营养成分既复杂又丰富、难以说出其确切化学组成的培养基。例如牛肉膏蛋白胨培养基。天然培养基的优点是营养丰富、种类多样、配制方便、价格低廉;缺点是化学成分不清楚、不稳定。因此,这类培养基只适用于一般实验室中的菌种培养、发酵工业中生产菌种的培养和某些发酵产物的生产等。 常见的天然培养基成分有:麦芽汁、肉浸汁、鱼粉、麸皮、玉米粉、花生饼粉、玉米浆及马铃薯等。实验室中常用牛肉膏、蛋白胨及酵母膏等。 2. 合成培养基 又称组合培养基或综合培养基,是一类按微生物的营养要求精确设计后用多种高纯化学试剂配制成的培养基。例如高氏一号培养基、察氏培养基等。合成培养基的优点是成分精确、重演性高;缺点是价格较贵,配制麻烦,且微生物生长比较一般。因此,通常仅适用于营养、代谢、生理、生化、遗传、育种、菌种鉴定或生物测定等对定量要求较高的研究工作中。 3. 半合成培养基 又称半组合培养基,指一类主要以化学试剂配制,同时还加有某种或某些天然成分的培养基。例如培养真菌的马铃薯蔗糖培养基等。严格地讲,凡含有未经特殊处理的琼脂的任何合成培养基,实质上都是一种半合成培养基。半合成培养基特点是配制方便,成本低,微生物生长良好。发酵生产和实验室中应用的大多数培养基都属于半合成培养基。 (三)根据培养基的物理状态作分类 1. 液体培养基 呈液体状态的培养基为液体培养基。它广泛用于微生物学实验和生产,在实验室中主要用于微生物的生理、代谢研究和获取大量菌体,在发酵生产中绝大多数发酵都采用液体培养基。 2. 固体培养基

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