福清黑松醇溶蛋白的群体遗传分析
胃善及醇溶谷蛋白
胃善及醇溶蛋白 胃善的来历： 醇溶谷蛋白缘自糯米，从糯米中提取出珍贵的天然醇溶谷蛋白作为胃善主原料，。醇溶谷蛋白是粮食作物中蛋白质的一种，在治理胃病方面比较显著，但糯米中的醇溶谷蛋白和其他蛋白质交合在一起，仅有3‰的含量。在大量提取上遇到了困难，随后成立韩国茶山药食株式会社，进而解决大量获取糯米醇溶谷蛋白的生产问题，促成了“胃善”及“金胃善”的迅速上市，从而为胃病患者带来福音。 胃善上市后在韩国引起了极大地轰动，韩国KBS、MBC电视台多次对安博士进行专访，韩国《中央日报》、《朝鲜日报》、《韩民族》、《光州日报》多次对安博士和胃善进行报道。 胃善的成分： 高纯度的醇溶谷蛋白： 醇溶谷蛋白是粮食作物中蛋白质的一种，在提取过程中会有其他的蛋白质与醇溶谷蛋白交合在一起，服用时影响醇溶谷蛋白的效果，安博士带领的研发团队采用独家提取技术大大提高了醇溶谷蛋白的纯度，高纯度的醇溶谷蛋白服用后能够迅速附着在溃疡面上，结合胃粘膜，给胃粘膜留出足够的时间进行自我修复，达到治疗胃溃疡及消炎的目的。 红茶提取物： 茶叶中所含的重要物质--茶多酚具有收敛性，对胃有一定的刺激作用，在空腹的情况下刺激性更强。而红茶就不一样了。它是经过发酵烘制而成的。红茶不仅不会伤胃，反而能够养胃。加入红茶能消炎、保护胃黏膜，对治疗溃疡也有一定效果。 胃善的作用： 提高胃粘膜蛋白： 根据动物实验测试，服用胃善及金胃善能够提高胃粘膜蛋白50%，胃粘膜蛋白是胃粘膜重要的组成成分，能够有效防止胃酸的侵蚀。 提高胃粘膜抗氧化能力30%：
根据动物实验测试显示，服用金胃善及胃善抗氧化能力明显提高，最高高达30%，有效地提高胃部机能。 在溃疡创面形成保护层： 醇溶谷蛋白能够尽快到达作用部位，附着胃粘膜，持久保护胃粘膜，覆盖的范围和持久度更加强。 激活胃壁膜修复因子： 采用绿茶和红参的配方能够，将比例调大最大，激活胃壁修复因子，服用胃善或金胃善11周，能够完整修复受伤的胃壁。 胃善与传统胃药对比： 1.长期服用胃药将使记忆力减退，因一般胃药多含有金属铋和金属铝，长期服用会造成重金属沉淀，造成记忆力减退。 2.胃药是肾脏的隐形杀手。长期服用会造成肾脏的伤害加重，严重会造成尿毒症。服用胃药最好不要超过两个月，胃病下最好为医生指导下服用药物。 产品说明： 产品样貌： 产品成颗粒状，方便服用。 适用病症： 胃胀、胃痛、反酸、烧心、胃寒、食欲不振、胃炎、胃溃疡等胃部病状。 服用方法： 建议一日一次，每次一包，病情严重者，酌情加量，以水送服。 疗程： 一周期：2盒 适合：调养普通烧心、胃胀、胃不适
醇溶蛋白
2.2.2.3醇溶蛋白分析（酸性聚丙烯酰胺凝胶电泳即A-PAGE） 使用ISTA于1986年颁布的APAGE（Ph3.2）标准程序(Driper,1987).APAGE的分析方法如下: a. 溶液的配制: 样品提取Buffer(100ml):甲基绿0.05g,2-氯乙醇25ml。 10×电极Buffer(1L):冰醋酸40ml,甘氨酸4g,使用前稀释10倍。 凝胶Buffer(1L):冰醋酸20ml, 甘氨酸1g。 凝胶溶液(200ml):Acr=20g,Bis=0.8g,尿素12g,抗坏血酸0.2g,硫酸亚铁 0.008g,溶于凝胶Buffer中。 b. 样品醇溶蛋白提取:取15-20粒种子去掉内外稃,称重,用样品钳夹碎,放入0.5ml离心管中,然后按1mg加5ul的比例加入样品提取液,室温浸提过夜,使用前用10000rpm离心10min。 c. 凝胶制备:取适量的凝胶溶液,加入适量的10%过硫酸胺(Aps)和TEMED,迅速摇匀,灌胶,插好样品梳,让其在5-10分钟内完全聚合.一般为每ml凝胶溶液加入1ul的10%过硫酸胺(Aps)和TEMED。 d. 加样:小心拔出样品梳,用电极缓冲液冲洗加样孔,每个样品的上样量为 6-10ul。 e. 电泳:恒压500V,恒温4℃,电泳时间为甲基绿前沿指示剂迁移至底板所需时间的三倍。 f. 固定染色:每块胶板吸取1%考马斯亮蓝溶液5ml再加入10%三氯乙酸200ml,染色过夜(染色液可重复使用) 。 g. 保存:在7%冰醋酸中保存,或拍照,制干胶保存。 h. 数据处理:每个样品的电泳条带按有或无记录,电泳带存在时赋值为1,否则赋值为0。按Nei的方法计算材料间相似系数(GS): GS=2N ij/(N i+N j) —i品种出现的谱带数; 其中:N i —j品种出现的谱带数; N j —i品种和j品种共有的谱带数. N ij
玉米19kD醇溶蛋白启动子克隆与植物表达载体构建
第13期收稿日期：2010－12－17 基金项目：山东省科技攻关课题（2009GG10009012） 作者简介：李慧伦（1984－），女，河南许昌人，在读硕士研究生，研究方向为转基因植物，（电话）135********，0531－88728276（电子信箱） xclihuilun＠126．com ；通讯作者，杨合同，（电子信箱）yanght＠keylab．net 。 随着植物基因工程的不断完善，人们需要目的基因准确高效地在受体植物特定部位表达，但组成型启动子使基因表达分散而造成目标部位表达量不足，难以满足要求，因此克隆专一的组织特异性启动子成为目前植物基因工程研究的重点［1］。玉米醇溶蛋白是玉米种子贮藏蛋白的主要成分，占总蛋白的50％～60％。根据醇溶蛋白一级结构的相似性 可分为α、β、γ、δ4种，其中α－醇溶蛋白由25～50个基因组成的基因家族编码，包括19kD 和22kD 的醇溶蛋白。由于玉米醇溶蛋白基因的表达具有严格的时空特异性，在种子发育过程中，其表达严格限定在胚乳组织中，一般授粉后10～12d 开始表达［2］，因此本实验从玉米基因组中克隆了19kD 醇溶蛋白基因（ze19）的启动子序列，对其结构和功能进行分 玉米19kD 醇溶蛋白启动子克隆与植物表达 载体构建 李慧伦1，2，魏艳丽2，李红梅2，扈进冬2，李纪顺2，杨合同2 （1．山东理工大学生命科学学院，山东淄博 255049；2．山东省科学院生物研究所／山东省应用微生物重点实验室，济南250014） 摘要：从玉米自交系9801基因组DNA 中克隆了玉米19kD 醇溶蛋白基因（ze19）启动子，将其连接到 pMD18－T 载体上。测序结果表明该序列与已报道序列同源性为94％，包含TATAbox 、CAATbox 启动子基 本元件以及GCN4、skn－1、prolamin box 、－300element 等参与调节玉米醇溶蛋白表达及活性的顺式元件。将克隆的ze19启动子取代质粒pBI121中的35S 启动子，成功构建了由ze19启动子驱动gus 报告基因的植物表达载体pBIze19。利用土壤杆菌介导法将构建好的重组质粒pBIze19转入烟草中，为进一步研究该启动子组织特异性表达奠定了基础。 关键词：ze19启动子；土壤杆菌介导法；植物表达载体中图分类号：Q785 文献标识码：A 文章编号：0439－8114（2011）13－2775-05 Cloning of 19kD Zein Promoter from Maize and Construction of Plant Expression Vector LI Hui－lun 1，2，WEI Yan－li 2，LI Hong－mei 2，HU Jin－dong 2，LI Ji－shun 2，YANG He－tong 2 （1．School of Life Science ，Shandong University of Technology ，Zibo 255049，Shandong ，China ； 2．Biology Institute of Shandong Academy of Sciences ／Key Laboratory for Applied Microbiology of Shandong Province ，Jinan 250014，China ） Abstract ：The 19kD zein （ze19）promoter was amplified from the genomic DNA of maize inbred line 9801，and the sequence was linked to vector pMD18－T．Sequence analysis indicated that the cloned sequence shared 94％homolo gy with the pub-lished sequence．The cloned promoter contains the two basic promoter element ，TATA box and CAAT box ，and several cis－regulatory elements ，such as GCN4motif ，s kn－1motif ，prolamin box ，－300element ，which were necessity for mediating en-dosperm expression of maize zein．By replacing the 35S promoter ，ze19promoter was inserted upstream of the β－glu-curonidase （gus ）reporter gene in plasmid p BI121；and the plant expression vector pBIze19was constructed． Then tobacco were transformed via Agrobacterium tumefacients mediated procedure ，thus a foundation for further research about tissue－spe-cific expression of ze19promoter was laid ． Key words ：ze19promoter ；Agrobaterium tumefacients mediated procedure ；plant expression vector 第50卷第13期2011 年7月湖北农业科学 H ubei A gricultural S ciences Vol．50No.13 Jul ．，2011
玉米19 kD醇溶蛋白启动子克隆与植物表达载体构建
玉米19 kD醇溶蛋白启动子克隆与植物表达载体构建 摘要:从玉米自交系9801基因组DNA中克隆了玉米19 kD醇溶蛋白基因(ze19)启动子,将其连接到pMD18-T载体上?测序结果表明该序列与已报道序列同源性为94%,包含TATAbox?CAATbox启动子基本元件以及GCN4?skn-1?prolamin box ?-300 element等参与调节玉米醇溶蛋白表达及活性的顺式元件?将克隆的ze19启动子取代质粒pBI121中的35 S启动子,成功构建了由ze19启动子驱动gus报告基因的植物表达载体pBIze19?利用土壤杆菌介导法将构建好的重组质粒pBIze19转入烟草中,为进一步研究该启动子组织特异性表达奠定了基础? 关键词:ze19启动子;土壤杆菌介导法;植物表达载体 Cloning of 19 kD Zein Promoter from Maize and Construction of Plant Expression Vector Abstract: The 19 kD zein(ze19)promoter was amplified from the genomic DNA of maize inbred line 9801, and the sequence was linked to vector pMD18-T. Sequence analysis indicated that the cloned sequence shared 94% homology with the published sequence. The cloned promoter contains the two basic promoter element, TATA box and CAAT box, and several cis-regulatory elements, such as GCN4 motif, skn-1 motif, prolamin box,-300 element, which were necessity for mediating endosperm expression of maize zein. By replacing the 35 S promoter, ze19 promoter was inserted upstream of the β-glucuronidase (gus) reporter gene in plasmid pBI121; and the plant expression vector pBIze19 was constructed.Then tobacco were transformed via Agrobacterium tumefacients mediated procedure, thus a foundation for further research about tissue-specific expression of ze19 promoter was laid. Key words: ze19 promoter; Agrobaterium tumefacients mediated procedure; plant expression vector 随着植物基因工程的不断完善,人们需要目的基因准确高效地在受体植物特定部位表达,但组成型启动子使基因表达分散而造成目标部位表达量不足,难以满足要求,因此克隆专一的组织特异性启动子成为目前植物基因工程研究的重点[1]?玉米醇溶蛋白是玉米种子贮藏蛋白的主要成分,占总蛋白的50%~60%?根据醇溶蛋白一级结构的相似性可分为α?β?γ?δ 4种,其中α-醇溶蛋白由25~50个基因组成的基因家族编码,包括19 kD和22 kD的醇溶蛋白?由于玉米醇溶蛋白基因的表达具有严格的时空特异性,在种子发育过程中,其表达严格限定在胚乳组织中,一般授粉后10~12 d开始表达[2],因此本实验从玉米基因组中克隆了19 kD醇溶蛋白基因(ze19)的启动子序列,对其结构和功能进行分析,以期构建种子特异性启动子,为玉米种子生物反应器的研究奠定基础?
玉米醇溶蛋白
玉米醇溶蛋白对药物的缓控释效果 王永亮 (广东食品药品职业学院 09设备2班) 摘要玉米醇溶蛋白是 Gorhamin 在 1821 年首次从玉米中提取的一种能溶解于乙醇的蛋白质，并将这种蛋白质取名为玉米醇溶蛋白（zein），简称醇溶蛋白。作为一种天然蛋白质，醇溶蛋白有着广泛的应用。在医药领域常作为控释制剂、微球等新剂型的药用辅料；另外玉米醇溶蛋白在细胞培养、多孔支架及药物控释等方面都表现出较好的生物相容性和可降解性。本文就醇溶蛋白缓控释行为方面做了进一步综述。 关键词玉米醇溶蛋白用途配制缓释控缓释阿司匹林肝素 玉米醇溶蛋白相关剂型的制备 玉米醇溶蛋白溶液的配制将一定量的玉米醇溶蛋白粉按 10：1的液固比用80%的乙醇溶液湿润, 摇匀, 放入恒温水浴中加热, 然后用离心机离心,取上清液密封备用。 醇溶蛋白空白片的制备用950 ml/ L 乙醇溶解醇溶蛋白,在50℃恒温水槽中加热30min,配制浓度为65 g / ml醇溶蛋白溶体, 然后将溶体平铺于聚四氟乙烯板上, 真空干燥8 h 后取出,用万能粉碎机将其粉碎,过20目药用筛,不加任何成分直接用压片机压制成型。
玉米醇溶蛋白的性质及市场应用 玉米中的醇溶蛋白是玉米的主要贮存蛋白,根据玉米种类和分离方法的不同, 它在玉米胚乳蛋白中的含量占 44～79 %不等。玉米中的醇溶蛋白是由分子大小和溶解度不同的一组蛋白质组成, 可分为α、β、γ、δ四种。其中α- 玉 米醇溶蛋白占约 70 %, γ占约 20 %。α-玉米醇溶蛋白可由乙醇溶液提取出来, 其余三种需在醇溶液中添加还原剂。在添加还原剂提纯的α玉米醇溶蛋白 SDS- PAGE凝胶电泳出现 2条带, 分子量为19kDa和 22kDa 。 由于商品化的玉米醇溶蛋白是由玉米湿法加工生产淀粉的副产物玉米蛋白 粉提取的, 湿法生产中二氧化硫破坏了二硫键, γ -玉米醇溶蛋白成水溶性的, 随玉米浸泡水去除了。而β-玉米醇溶蛋白不溶于 90 %异丙醇和乙醇。因此原料和提取工艺造成商品化的玉米醇溶蛋白仅含α玉米醇溶蛋白。 玉米醇溶蛋白具有良好的成膜性、黏接性和防水、防湿性能, 还具有耐酸、耐油等特性, 可广泛应用于医药、食品及化工等其它行业。在食品工业中, 醇溶蛋白可以作为被膜剂, 即以喷雾方式在食品表面形成一个涂层, 可防潮、防氧化、从而延长食品货架期, 喷在水果上, 还能增加光泽。它是一种无毒且能强化食品的保鲜剂。在医药方面, 由于玉米醇溶蛋白的憎水性, 所以可以涂在药片的外面, 作防潮层; 另外又由于对胃酸稳定, 可以作肠溶药片的包衣。此外, 如果将玉米醇溶蛋白与纸张复合, 可以制成防水防潮的包装材料, 还可以作为工业 上的黏接剂、发泡剂和乳化剂等。 玉米醇溶蛋白–肝素微球的缓释 利用玉米醇溶蛋白和肝素的溶解性质,将其制备成微球结果发现：随着蛋白 质浓度的增高,蛋白质微球的粒径也发生显著变化,从几百纳米到几微米,如图1 所示
小麦醇溶蛋白电泳分析及其在品种分类上的应用
河北农业技术师范学院学报 第13卷第2期,1999年6月 Journal of H ebeiA gro technical T eachers Co llege V o l.13 N o.2 June1999 小麦醇溶蛋白电泳分析及其在品种 分类上的应用 董 洪 平 (河北职业技术师范学院动农学系,昌黎,066600) 摘 要 采用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术对200多个小麦品种的醇溶蛋白进行了分析。结果表 明:醇溶蛋白带谱是品种的重要遗传特征,它既能区分所有具有遗传差异的品种(品系),又能(品系)间的亲缘关系的远近。该方法分辨力高,重复性好,操作简便,成本低,可应用于品种鉴定、纯度分析和作为一种遗传选择标记应用于作物育种。本次研究以品种间醇溶 蛋白带谱的相似系数为指标,采用类平均法,对其中部分品种进行了聚类分析。聚类分析的结 果与品种间的亲缘关系相符,由此说明,醇溶蛋白凝胶电泳技术在小麦品种分类上有着重要 的意义。 关键词 小麦 醇溶蛋白 电泳 聚类分析 中图分类号 S512110213 Q9461125 小麦醇溶蛋白是种子胚乳中的主要贮藏蛋白质,在成熟的种子中约占蛋白质总量的40%,它不溶于水和中性盐溶液,仅溶于体积分数为0170～0180的乙醇。70年代的研究表明:这种蛋白质不受种植环境和种子处理等因素的影响(除非土壤严重缺硫),而与品种的遗传特性有关。小麦品种间醇溶蛋白组成差异很大,每个小麦品种都显示出各自独特的醇溶蛋白带谱组合,即品种的遗传“指纹”。国外许多学者已将醇溶蛋白凝胶电泳分析技术应用于遗传育种和种子生产上,如品种鉴定,种子纯度检验,代换系、易位系和体细胞无性变异的鉴定,品质预测等方面。近年来,国内学者在品种鉴定方面采用了这项技术,但多数侧重于方法上的研究。本试验利用醇溶蛋白凝胶电泳分析技术,根据小麦品种间醇溶蛋白带谱的相似程度,采用聚类分析的方法,对小麦品种进行分类。 1 材料和方法 1.1 种子 小麦品种由河北职业技术师范学院农学系小麦育种研究室提供,用于聚类分析的36个品种及编号见表1。 1.2 试剂 本试验所用的所有试剂均为国产分析纯或化学纯。用双重蒸馏水配制有关试剂。1.3 仪器 电泳仪和电泳槽为北京六一厂生产。 收稿日期:1999-04-01 修改稿收到日期:1999-05-10
醇溶蛋白的提取 用25
醇溶蛋白的提取用25%的2-氯乙醇进行三步法提取 取单粒小麦种子约0.03g，用电动粉碎机磨碎后，装入1.5mL离心管。先加入0.5mol/L的NaCl0.3mL振荡混匀后室温下提取2h以上，4000r/min离心15min，通过该步骤去除盐溶性蛋白（包括清蛋白和球蛋白）。弃去上清液，加0.5mL蒸馏水，振荡混匀后室温下提取0.5h，4000r/min离心15min，弃上清液（该步骤重复两次）。加入25%的2-氯乙醇0.3mL，振荡混匀后室温下提取0.5h，10000r/min离心10min，所得上清液即为醇溶蛋白（邵锦震等，2003）。上清液按 1：4 体积比加入上样缓冲液（含质量分数40%的蔗糖和0.15%甲基绿，pH=5.0）。混匀后上样或于4℃保存，上样量10μl。 制备胶板 A14ml凝胶Buffer，用冰醋酸调至pH 3.1 B 封底胶 2ml凝胶Buffer(pH3.1)加10μl H2O2(0.7%) C分离胶 12ml凝胶Buffer(pH3.1)加10μl H2O2 (0.7%) D封顶液 70%乙醇 E 浓缩胶 2ml凝胶Buffer加2ml ddH2O加10μl H2O2(0.7%) 加入浓缩胶后，选择合适的梳子，小心均匀用力将梳子插入（高居荣等，2003）。 2.2.2.3 恒压电泳 待胶凝固好后，小心拔出梳子，将胶板固定在电泳槽上，加入1×电极缓冲液。每孔加10μl蛋白提取液（醇溶蛋白上清液：上样缓冲液＝1：4），为消除边缘效应，两头的梳子孔加上样缓冲液。以电压100V，电流200mA的条件跑完浓缩胶部分，约30min。变换电压，调为300V，电流200mA，跑完分离胶，约1h。上述两个条件都是以甲基绿指示剂作为指示条件。待指示剂跑完分离胶后，继续跑两个半小时。 2.2.2.4 拆板染色、扫描 电泳后，小心的把胶板拆下来，用考马斯亮兰R-250染色，放在摇床上以使染色均匀，至少两小时。醇溶蛋白的提取采用70%的乙醇进行三步法提取。 取单粒小麦种子约0.03g，用电动粉碎机磨碎后，装入1.5mL离心管。先加入0.5mol/L 的NaCl 0.5mL振荡后室温下提取2h以上，4000r/min离心15min，通过该步骤去除盐溶性蛋白。去除上清液，用0.5mL蒸馏水溶解沉淀，振荡后室温下提取0.5h以上，4000r/min离心15min，弃上清液，通过该步骤去除水溶性蛋白（该步骤重复两次）。用70%乙醇0.5mL 溶解沉淀，振荡后室温下提取0.5h以上，10000r/min离心10min，所得上清液即为可用于HPLC的醇溶蛋白。