结合态淀粉合成酶(Granule-bound starch synthase,GBSS)试剂盒说明书

货号:QS3405-25 规格:25管/24样

结合态淀粉合成酶

(Granule-bound starch synthase,GBSS)试剂盒说明书

紫外分光光度法

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

GBSS(EC 2.4.1.21)以束缚态存在于淀粉体中,催化淀粉链的加长反应,主要负责直链淀粉的合成。

测定原理:

GBSS催化ADPG与淀粉引物(葡聚糖)反应,将葡萄糖分子转移到淀粉引物上,同时生成ADP;进一步通过反应体系中添加的丙酮酸激酶、己糖激酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶依次催化NADP+还原为NADPH,其中NADPH生成量与前一步反应生成的ADP数量呈正比,通过340nm下测定NADPH 的增加量,可以计算GBSS活性。

自备实验用品及仪器:

紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机、移液器、1 mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配制:

提取液:液体60mL×1瓶,4℃保存;

液体一:7mL×1瓶,4℃保存;

液体二:4mL×1瓶,4℃保存;

液体三:8mL×1瓶,4℃保存;

粉剂一:1支,4℃保存;

粉剂二:1支,4℃保存;

粉剂三:1支,-20℃保存;

粉剂四:1支,4℃保存;

粉剂五:1支,4℃保存;

粉剂六:1支,-20℃保存;

粉剂七:1支,-20℃保存;

粉剂八:1支,4℃保存;

粉剂九:1支,4℃保存;

粉剂十:1支,-20℃保存;

试剂一:液体×1支,-20℃保存;临用前加入250μL蒸馏水,充分溶解备用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。

试剂二:粉剂×1支,-20℃保存;临用前加入250μL蒸馏水,充分溶解备用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。

反应液Ⅰ的配制:临用前取液体一、粉剂一、粉剂二和粉剂三各一支,依次把粉剂一、粉剂二和粉剂三转移到液体一中混合溶解;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。

反应液Ⅱ的配制:临用前取液体二、粉剂四、粉剂五、粉剂六和粉剂七各一支,依次把粉剂四、粉剂五、粉剂六和粉剂七转移到液体二中混合溶解;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。

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