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DGGE法

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DGGE法

变性梯度凝胶电泳

变性梯度凝胶电泳

原著:Jeroen H. Roelfsema and Dorien J. M. Peters1.翻译:小高

1.简介

变性梯度凝胶电泳是人们多年来广泛使用的一种健全的检测点突变的方法(1)。它是一种基于PCR的方法,其原理是,与野生型基因相比,改变了PCR产物中突变序列的解链温度。通过PCR,致使DNA两个基因其中一个中的点突变变成不同的DNA的混合体。PCR 后的产物中包括野生型基因和突变型基因。即同源二聚体。然而这两种产物的解链温度差别不大。在PCR反应的最后一个循环,形成另外一种产物,即异源双链DNA,它包括一条野生型的链和一条突变的链。DGGE的原理就在于同源PCR产物的解链温度远远低于异源PCR的产物,因为异源双链有一个错配(see Fig. 1)。

为了看到同源和异源DNA的解链温度之间的差别,只要让其在含有变性剂尿素和甲酰胺的丙烯酰胺梯度凝胶上电泳即可。仅仅靠这些变性剂本身是不够的。另外,跑电泳的胶的温度也比较高,通常在60℃。电泳过程中,PCR产物在变性以前一直保持双链DNA的形式。一旦变性后,PCR产物将以单链DNA的形式继续跑,但是片段则会保留在变性的地方。为了达到这个目的,需要连上一个所谓的GC夹子以阻止完全变性。这个GC夹子是由40-60个单纯的鸟嘌呤和胞嘧啶核苷酸构成的一条链,然后连接在其中的一种PCR引物上。加上GC夹子进行PCR后的产物其一端具有很高的变性温度。因此,PCR产物在DGGE的胶上将部分变性。GC夹子保持双链。其余的片段形成“Y”形继续保留在胶上原来的地方。

2.操作步骤

2.1.设计PCR引物

对于DGGE来说,用于筛选点突变的PCR引物的解链特性是很关键的。当片段到达凝胶的临界点时,应该及时地变性,而不是在一端开始随着电泳的进行逐渐的慢慢的变性。这种慢性解链会形成模糊的条带或者斑点,将导致很难检测出突变。因为解链特性对于实验的成败至关重要,所以选取用来扩增目标产物的引物时必须格外小心。出于这个目的,为了选择引物,我们必须使用专门的软件来分析PCR可能产物的解链曲线。在这方面有各种各样的商业或者免费的平台软件可供使用。并且也有专门用来在线分析序列的网站。研究者在分析目标序列的时候通常都会得到一条不规则的解链曲线。但是连接上一个含40-60个核苷酸的GC夹子后往往会使曲线明显地变得平滑(see Fig. 2)。曲线的上下浮动范围应该在1℃以内。当然,GC夹子附近的解链温度很高。如果连接上GC夹子后曲线未变的平滑,那么我们应该尝试连到另一端。因为对于DGGE来说,GC夹子连接在引物的哪一端都可以。选择过程就是通过尝试各种不同的正反引物以获得曲线平滑的产物和适合PCR的引物。DGGE 产物大多数在200-400bp。对于大于400bp的产物很难找到理想的解链曲线。

GC夹子的长度也会改变整个序列的解链过程。人们通常都使用含55个核苷酸的GC 夹子,但是有时候也需要含60个核苷酸的,尤其是含GC丰富的序列。最终,通过计算机分析大多数目标序列都能获得好的平滑的曲线。然而,也有一些麻烦的序列需要使用特别的方法。例如,如果一段没有GC夹子的序列其解链曲线末端下降,这样可以再连接一个小一些的GC夹子。这叫做两极镶嵌。在这种极少的案例中我们可以在需要的地方使用一串8-20

个核苷酸的序列。我们仍需特别注意富含GC的序列,因为这种序列在GC夹子开始的地方解链曲线并没有剧烈的变化,但是当接近GC夹子时解链温度开始上升。这里要说明的是,在引物上GC夹子之间增加一些A、T碱基,退火部分将会导致解链曲线剧烈的变化。

就向前面所说的,一个GC夹子包括40-60个鸟嘌呤和胞嘧啶。我们强烈建议在实践中使用已经被证实有效的一段序列作为GC夹子。设计你自己的GC夹子是很困难的,这或许将导致在PCR过程中形成稳定的发夹结构。许多解链预处理程序提供GC夹子的序列。制作一个带GC夹子的PCR引物并不需要专门的改变。操作规程与其它的PCR是一样的,并且退火和变性温度都没有变化。

变性梯度凝胶电泳非常适合筛选基因组DNA中的突变,因为大部分的外显子长度都小于400bp,可以作为一个片段来分析。因此用来筛选大的片段的许多方法对小的外显子来说用处不大。这些年来,根据许多基因的突变分析来看,很多突变都影响一致的剪接位点。因此,在外显子附近的内含子序列里的引物就会被选择,通过这种方式其剪接位点也将作为外显子的序列筛选出来。剩下的内含子与编码序列相比就不是隐藏有害的突变,而是更像包含无害的多态性片段。因此,在DGGE片段中我们应该尽量的减少内含子的序列。

2.2.呈现突变

为了分离同质双链和异源双链,DGGE片段需要经过丙烯酰胺凝胶。含有9%的丙烯酰胺凝胶可以保证清晰并且易于处理的条带。灌注这些凝胶,需要两种储备液:97.5:1丙烯酰胺/双丙烯酰胺in 0.5XTAE和相同的储备液加上7M尿素和40%的甲酰胺。前者叫做0%变性剂,后者叫做100%变性剂。

100%到0%之间的梯度很少用到,因为在这么宽的梯度范围内同质双链和异源双链的变性点可能很接近,然而,设置一个30%的梯度却是很有必要的。为了选择尿素/甲酰胺梯度,一段序列的解链温度(Tm)通常根据由计算机分析得到的经验公式得到:TmX3.2-182.4=变性度%。通过增加或者减少计算得到的尿素/甲酰胺浓度的15%来获得需要的30%这个梯度,以使得解链点大概在凝胶的中心。具有不同尿素和甲酰胺梯度的丙烯酰胺凝胶是用底部有短管相通的两个容器组成的简单的梯度混合器倾注的。这种系统适用于倾倒各种梯度。

第一次电泳是在一种叫做time-travel的凝胶上进行的,在这种胶上,DGGE序列停留在泳道的15到20分钟时间间隔内。电泳跑完后,所有泳道变性的序列都应该停留在凝胶的相同高度,无论是什么时候加的。如果不是这种结果,那么这个系统就必须重新设计(see Fig.

3)。如果一条序列的条带不清楚或者在胶上停留的位置太靠前或者太靠后,那么这个梯度就应该调整。

从技术角度上来讲,DGGE实验最具有挑战性的问题是如何使电泳温度保持在60℃。有很多种方法可以使其温度达到60℃,但是最常用的是将盛有丙烯酰胺凝胶的玻璃槽放到一个恒温的热水器内。也有很多商用的可供DGGE的全部的配套设备,它们是用较低的缓冲室喷淋温水。通常都是在90V0.5XTAE缓冲液中电泳一宿,但是也可以用更高的电压在白天做短时间的电泳。电泳完后,胶要沉浸在含有EB的0.5XTAE的缓冲液中以呈现DNA 条带。

3. EDGGE的应用

变性梯度凝胶电泳是用来鉴定小的突变的一种方法,例如点突变。点突变是指一个核苷酸转移或者颠换到另一个上去。然而,许多类型的小突变例如缺失或者插入一个或者多个核苷酸都可以用DGGE鉴定出来。事实上,这些突变对于同质双链和异源双链都会引起解链温度的巨大差异,因此在胶上很容易就能看出来。

如前所述,DGGE可以鉴定200-400bp的序列,这使得它很方便的应用于分析基因组中的外显子。然而,DGGE也可以用来筛选RNA。但是,RNA比起DNA更加的容易降解,因此他需要先转化成cDNA。因此,为了诊断和研究基因遗传性异常,人们通常扫描基因组DNA突变。例如,DGGE被广泛的应用于结肠直肠癌的各种基因分析,像

APC,MSH2,MSH6,MLH1等等。对于像结肠直肠癌这种可以治愈的潜在的致死性疾病症状前诊断特别重要。经过突变分析发现,患有结肠直肠癌的家族,基因突变通常都是唯一的。显然,检测一个家族的未知突变需要一种已经尝试并且证实有效的技术,例如DGGE,特别是当风险很高的时候。然而,出于研究目的,可靠性也是很重要的。要研究各种类型的突变需要这种检测技术能够反映出各种点突变,如此才可以做出突变范围的正确的分析报告。

进行性假肥大性肌营养不良是由X染色体上的一个编码抗肌萎缩蛋白的大型基因突变引起的。绝大多数的突变是大量的缺失或者重复,但是大约百分之三十的突变是发生在第70个外显子或者它们附近的结合位点上的点突变。为了加速筛选程序,PCR产物必须聚集起来,从三个到六个片段,然后在一条泳道上跑胶。当然,这种多路技术不仅仅限于大的基因。一个例子就是α胰岛素。使用二重扩增反应就可以筛选出整个的基因。两种反应的产物都可以在同一个胶上分析,这样可以快速地筛选大量的序列。

DGGE最初是用来轻松的诊断突变出现时的异源双链核酸。在筛选显性遗传病的基因突变时,PCR过程中形成异源双链DNA。然而,DGGE是否能应用于隐形遗传病?囊性纤维化是已知的最常见的隐形遗传病。自从1989年CFTR基因鉴定出来以后,突变诊断后显示,一些突变很频繁,最显著的是508位置的突变,三个核苷酸的缺失导致508位置色氨酸苯丙氨酸读码框的缺失。这种频繁的突变经常用其他的方法分析,以筛选已知的具体的突变。对于那些剩下的罕见的先前没有鉴定出来的突变,DGGE尤其适合。囊性纤维化是一个隐性基因,但这并不妨碍筛选,一个很简单的原因就是筛选的是患者的父母的DNA。他们的父母以杂合子的形式携带突变。尽管如此,筛选他们父母的基因没有太大的困难,因为在两个基因中很难同时出现稀缺突变。然而,我们必须注意的是由于地理或者自然条件的隔离,群体中的纯合稀缺突变也经常发现。即使这样,大多数的情况下,仔细的分析DGGE凝胶也将会发现纯合的突变。然而待测DNA也可以与正常的DNA混合以创建异源双链DNA。从技术的角度来看,隐形遗传和X连配错乱没有区别。此外,通常都是检测含杂合子的母亲的DNA。

检测点突变不仅仅局限于遗传错乱。它也适用于肿瘤。癌症是由于基因中的一系列的突变引起的,从整条染色体的缺失到点突变。手术上切除肿瘤并没有改变DNA的量,但是根据肿瘤和DNA分离的方法,DNA或许会被降解成小的片段。总之,这对于DGGE 方法来说并不是个难题,因为PCR片段通常都很小。另一个问题是肿瘤样品并不仅仅包含肿瘤细胞,其中也可能有血管和结缔组织。尤其是恶性肿瘤细胞可能导致样品中含有大量的未感染细胞。从经验来看,DGGE比其他方法更容易发现突变。在这种类型的研究中经常检测的典型基因有TP53、K-、N-和H-RAS。TP53基因上的突变检测通常受限于外显子5-8,人们认为这个区域隐藏了大部分的突变。然而,整个基因的突变分析显示这会导致忽略许多的突

变。免疫组织化学常常被用来检查肿瘤中的p53的状态。研究者应该注意的是免疫组学化学和DGGE之间不能相互替代。在观察肿瘤中的p53时这两种方法是互补的。

DGGE的另外一个完全不同的应用是可以估计不同菌种的数量和种类。编码rRNA的基因被当作靶标,因为在不同的种之间这些基因高度保守。在绝大多数保守区退火的引物可以用来扩增完全不同种类的基因。在不是很保守的区域的片段序列变化DGGE可以显现出来并且可以用来鉴定不同的种。这种技术最早在微生态学中发展起来用来检测生活在土壤和水中的物种。这种方法也可以应用于评估生活在人类体内或者体外的物种。例如监测用抗生素治疗的病人。

检测点突变既可以用SSCP分析也可以用DGGE方法。这两种方法都有十多年的历史了,并且比起需要昂贵设备的最新的最先进的技术相对廉价。然而,什么时候用SSCP或者DGGE?DGGE是一种健全地方法,一旦优选一个产物,他将很有效。结果也很容易检测出来,因为只要放在紫外灯下一看就能立刻看到突变。清晰的结果是DGGE的一个巨大的优点。另外一个优点是它不需要放射性标记。SSCP需要放射性PCR或者银染,并且结果不够清晰。另一方面,SSCP比DGGE需要的时间少,并且不需要昂贵的材料。这就是为什么大量的样本用这种方法的原因。例如,筛选少量的样本要求用SSCP。DGGE适合于少选大量的长周期的样本。

当在胶上发现异常的条带后,很明显就能看出哪个样本上的哪个序列出现了变化。变化的的性质或者确切的位置是未知的。为此,必须对PCR产物进行测序。如果最后必须测序,为什么检测突变不直接测序而是选择DGGE?答案有两个。首先,DGGE结果很清楚。DGGE条带上的突变可以清楚的看到,然而测序需要成熟的软件和电脑分析后仔细乏味的检查。第二,也是决定性的因素,当筛选大量的样本时,DGGE成本较低。

引物选自外显子附近的内涵子序列,用来筛选整个的编码区和侧面的剪接位点。如果DGGE序列中含有相对大量的内含子片段,用DGGE来筛选基因组DNA中的外显子对于有些基因会比较的麻烦,因为内涵子序列中包含大量的多态性片段。用DGGE来筛选此类基因将会导致样本的条带异常,并且测序后大部分会显示多态性。研究者对于这类基因通常直接采取对样本测序以检测点突变。

如果想筛选大量的样本的未知突变,DGGE是个不错的选择。因为它不需要放射性标记,所以被认为是一种用户容易掌握的技术。再加上可靠性和低廉的成本都是DGGE的优势。

1、实验原理

变性梯度凝胶电泳(DGGE)是一种根据DNA片段的熔解性质而使之分离的凝胶系统。核酸的双螺旋结构在一定条件下可以解链,称之为变性。核酸50%发生变性时的温度称为熔解温度(Tm)。Tm值主要取决于DNA分子中GC含量的多少。DGGE将凝胶设置在双重变性条件下:温度50~60 ℃,变性剂0~100%。当一双链DNA片段通过一变性剂浓度呈梯度增加的凝胶时,此片段迁移至某一点变性剂浓度恰好相当于此段DNA的低熔点区的Tm 值,此区便开始熔解,而高熔点区仍为双链。这种局部解链的DNA分子迁移率发生改变,

达到分离的效果。Tm的改变依赖于DNA序列,即使一个碱基的替代就可引起Tm值的升

高和降低。因此,DGGE可以检测DNA分子中的任何一种单碱基的替代、移码突变以及少于10个碱基的缺失突变。

为了提高DGGE的突变检出率,可以人为地加入一个高熔点区——GC夹。GC夹(GC clamp)就是在一侧引物的5′端加上一个30~40bp的GC结构,这样在PCR产物的一侧可产生一个高熔点区,使相应的感兴趣的序列处于低熔点区而便于分析。因此,DGGE的突变检出率

可提高到接近于100%。

作为一种突变检测技术,DGGE具有如下的优点:(1)突变检出率高。DGGE的突变检出率为99%以上。(2)检测片段长度可达1kb,尤其适用于100~500bp的片段。(3)非同位素性。DGGE不需同位素掺入,可避免同位素污染及对人体造成的伤害。(4)操作简便、快速。DGGE一般在24小时内即可获得结果。(5)重复性好。但是,该方法需要特殊的

仪器,而且合成带GC夹的引物也比较昂贵。

2步骤

1.PCR反应(同前)

其中,上游引物加40bp [GC] Clamp。

2.PCR产物经琼脂糖凝胶电泳确认。

3.垂直变性梯度凝胶电泳

变性梯度递增的方向与电泳方向垂直。所使用的胶为4%-10%聚丙烯酰胺凝胶,变性浓度为0~100%。其中,含7 M尿素和40%去离子甲酰胺的胶为100%变性,不含尿素和去离子

甲酰胺的胶为0%变性。垂直变性梯度凝胶电泳主要是检测引物的最适解链条件(即变性浓度)。

PCR产物加上样缓冲液后上样,300~400μl/孔

4.平行变性梯度凝胶电泳

变性梯度递增的方向与电泳方向平行。根据垂直变性梯度凝胶电泳检测的解链区域的变性浓度,制备相应变性浓度的平行变性梯度凝胶,检测各标本是否存在突变。

PCR产物加上样缓冲液后,25μl~30μl/孔,电压80-120V,温度60℃,时间31~16小时。

5.染色5分钟,凝胶成像仪分析结果。

简介

这个方法是应用最早也是最常用的突变筛查方法之一,在过去的十年中经历了很大的改进,并被诊断室所广泛使用,最近有篇关于该问题的综述(Fodde>和Losekoot 1994 年)。原理

对特定基因突变的患者进行检查,应用异源双链技术和“ GC 夹板”技术,按照所推荐

的方法进行检测,现在已经清楚如果有突变存在,那么几乎毫无遗漏地被检出来。例如,在

一项对44 例血友病 B 患者所作的研究中,40 例患检出潜在缺陷,用序列测定法或变

性梯凝胶电泳法在其余4 例中没有检出突变。应用此方法分析308 例丹麦苯丙酮尿症患

者染色体,检出了99% 的等位基因突变(其中32 例为单碱基突变,3 为例缺失突变)(Guldberg等1993 年)。在轻型或缓和型血友病A 的例子里,检测出26 例已知点

突变,用45 对引物对99% 的编码序列进行扩增,检测出了所有突变(Higuchi 等1991 年)。在29 例患者中检出了25 例突变(检出率为86% ),不过其他突变可能

位于未被检测的区域(例如内含子)。

对用带有GC 夹板的异源双链变性梯度凝胶电泳分析所遇到的假阴性问题(即漏掉突变)比较难以找到准确的原因,但如果用来检测已知突变,那就变得显而易见了。在7 例

次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶(HGPRTase)突变实验中,CDGE (恒变性剂凝胶电泳)法漏掉了一例突变,令人惊讶的是,“ GC 夹板” DGGE 法漏掉了4 例突变(Hovig

等1991 年)。“宽幅度”(broad range )DGGE 也被用上去了,所以不清楚是否选

用不同引物就可以使这4 例突变分开,或是因为DNA 前后序列影响对突变的检测。在因

子Ⅷ基因GC 堆积的371bp 片段中报道了同一密码子上另外的4 个假阴性突变(Traystman等1990 年),但当该片段降解为236bp 长的片段后就易于检测了。

看来尚无假阳性的报道,应该注意到可能会检测出甲基化的碱基(见Cotton 1992 年

a )。

总之,看来使用DGGE 结合“ GC 夹板”技术以及使用异源双链技术都可检出近100% 的突变,但不能说这100% 检出率是由于假阴性得到了证明。这近乎100% 的检出率已

使此方法成为寻找未知突变的诊断室和许多实验室的首选方法。

灵敏度

对于遗传性疾病,在给一定位点(该位点突变为杂合状态)野生型占50% 的情况下,

一个方法要能检测出50% 的突变碱基。然而如果要研究嵌合体或癌症,就必需有更加灵

敏的方法,因为这时突变分子所占的比例降低了很多。对于检测癌症中小量的残存性病灶这

一点特别正确,要尽可能检测出最小数量的突变分子。

在DGGE 法中,突变的同源双链分子和另两种互补异源双链分子完好无损,分离后可

用于定量分析和进一步进行其它分析,如测序(而裂解法破坏突变分子)。在某些特定情况

下DGGE 法可以从100bp 长的序列中检测出0.5% 的突变分子(见Khrapko等

1994 年)。如果用CDGE (见前文)法进行分离,分离工作用毛细管电泳完成,通过激

光诱生的荧光进行探测,这时可以从206bp 长的片段中检测出0.03% 或1/3000 的

突变分子(Khrapko等1994 年)。在检测残留的癌细胞方面,这一方法应该很有用。

突变和邻近序列效应(context effects )

到目前为止,已对不同邻近序列(contexts )中DNA 链间所有可能的单碱基差异

进行了研究,但没有对影响检测的因素作大规模系统的研究。有一项研究使用TGGE (温

PCR 扩增需要几小时,凝胶准备 1 小时,电泳3-6 小时,染色几分钟。因此,一项检测分析仅需7 小时,接到样品24 小时后分析就可完成分析工作。

操作步骤参考文献

以下参考文献,以多种不同的模式详细说明了如何购买或制作这些装置以及如何检测分析样品,从当前通用的改进方法应用时起,所有方法都写进了这些参考文献。

1.Dlouhy等1991 年。简要叙述了检测方法,实验装置和所用溶液。

2.Abrams 和Stanton1992 年。从发展这一方法的实验室角度,详细地描述了该方法的原理及实际操作,而且给出了综述所参考的文献,所以可能是本方法的权威性叙述。

3.Hovig等1994 年。这是一本有关人类遗传学方法手册中的一个单元,详细地对DGGE 法和不太常用的CDGE 法做了说和明评论。

Word单项操作(2010版)

1.主控文档和子文档 1. 在答题文件夹下,按序创建子文档"Slave1.docx"、"Slave 2.docx"、"Slave 3.docx"。 2. "Slave1.docx"中第一行内容为"矩阵的表示",样式为正文,将该文字设置为书签(名为BookTag1);第二、三行为空白行;在第四行引用书签BookTag1标记的文本。 3. "Slave2.docx"中第一行内容为,第二行内容为符号,样式均为正文。 4. "Slave3.docx"中第一行内容为,样式为正文。 5. 在主控文档"Master.docx"中,插入子文档"Slave1.docx"、"Slave2.docx"、"Slave3.docx",构成一个完整的文档;并在最后一行插入文档创建的日期(使用域,日期格式为“yyyy年M月d日星期W”)。 操作步骤: (1)在答题文件夹空白处单击右键,新建→Microsoft Word文档,将新建的文件 重命名为“Slave1.docx”(一般情况下,后缀无需输入);再依次创建“Slave2.docx”和“Slave3.docx”; (2)在Slave1的第一行输入“矩阵的表示”,样式为正文;选中“矩阵的表示”,选择【插入】→【链接】→【书签】;在“书签名”中键入“BookTag1”,单击【添 加】;三次回车,光标置于第四行,单击【插入】→【链接】→【交叉引用】,引用类型选“书签”,引用内容选“书签文字”,引用哪一个书签选“BookTag1”; (3)在Slave2的第一行输入“M1,2=X1*Y2”,将相应的内容设为下标(字 体);回车后,光标置于第二行,【插入】→【符号】→【其他符号】,字体选“Wingding 2”,选中相应的符号,单击【插入】,样式默认为正文; (4)在Slave3的第一行输入a2-b2=(a+b)(a-b),将相应的内容设为上标(字体); (5)打开“Master.docx”,【视图】→【大纲视图】,切换到“大纲视图”;

PCR扩增的原理和操作步骤

PCR 扩增反应的操作 第一节PCR 扩增反应的基本原理 一、聚合酶链式反应(PCR )的基本构成 PCR 是聚合酶链式反应的简称,指在引物指导下由酶催化的对特定模板(克隆或基因组DNA )的扩增反应,是模拟体内DNA 复制过程,在体外特异性扩增DNA 片段的一种技术,在分子生物学中有广泛的应用,包括用于DNA 作图、DNA 测序、分子系统遗传学等。 PCR 基本原理: 是以单链DNA 为模板,4 种dNTP 为底物,在模板3'末端有引物存在的情况下,用酶进行互补链的延伸,多次反复的循环能使微量的模板DNA 得到极大程度的扩增。在微量离心管中,加入与待扩增的DNA 片段两端已知序列分别互补的两个引物、适量的缓冲液、微量的DNA 膜板、四种dNTP 溶液、耐热Taq DNA 聚合酶、Mg 2+等。反应时先将上述溶液加热,使模板DNA 在高温下变性,双链解开为单链状态;然后降低溶液温度,使合成引物在低温下与其靶序列配对,形成部分双链,称为退火;再将温度升至合适温度,在Taq DNA 聚合酶的催化下,以dNTP 为原料,引物沿5'→ 3'方向延伸,形成新的DNA 片段,该片段又可作为下一轮反应的模板,如此重复改变温度,由高温变性、低温复性和适温延伸组成一个周期,反复循环,使目的基因得以迅速扩增。因此PCR 循环过程为三部分构成:模板变性、引物退火、热稳定DNA 聚合酶在适当温度下催化DNA 链延伸合成(见图)。 1.模板DNA 的变性 模板DNA加热到90~95 C时,双螺旋结构的氢键断裂,双链解开成为单链,称为DNA的变性,以便它与引物结合,为下轮反应作准备。变性温度与DNA 中G-C 含量有关,G-C 间由三个氢键连接,而A-T 间只有两个氢键相连,所以G-C 含量较高的模板,其解链温度相对要高些。故PCR 中DNA 变性需要的温度和时间与模板DNA 的二级结构的复杂性、G-C 含量高低等均有关。对于高G-C含量的模板DNA在实验中需添加一定量二甲基亚砜(DMSO),并且在PCR循环中起 始阶段热变性温度可以采用97 C ,时间适当延长,即所谓的热启动。 2.模板DNA 与引物的退火 将反应混合物温度降低至37~65C时,寡核苷酸引物与单链模板杂交,形成DNA模板-引物复 合物。退火所需要的温度和时间取决于引物与靶序列的同源性程度及寡核苷酸的碱基组成。一般要求引物的浓度大大高于模板DNA 的浓度 ,并由于引物的长度显著短于模板的长度, 因此在退火时,引物与模板中的互补序列的配对速度比模板之间重新配对成双链的速度要快得多,退火时间一般为1?2min。 3.引物的延伸 DNA 模板-引物复合物在Taq DNA 聚合酶的作用下,以dNTP 为反应原料,靶序列为模板, 按碱基配对与半保留复制原理,合成一条与模板DNA 链互补的新链。重复循环变性-退火-延伸三过程,就可获得更多的“半保留复制链”,而且这种新链又可成为下次循环的模板。延伸所需要的时间取决于模板DNA的长度。在72 C条件下,Taq DNA聚合酶催化的合成速度大约为40?60个碱基/秒。经过一轮“变性-退火-延伸”循环,模板拷贝数增加了一倍。在以后的循环中,新合成的DNA 都可以起模板作用,因此每一轮循环以后, DNA 拷贝数就增加一倍。每完成一个循环需2?4min, —次PCR 经过30?40次循环,约2?3h。扩增初期,扩增的量呈直线上升,但是当引物、模板、聚合酶达到一定比值时,酶的催化反应趋于饱和,便出现所谓的“平台效应”,即靶DNA 产物的浓度不再增加。 PCR 的三个反应步骤反复进行,使DNA 扩增量呈指数上升。反应最终的DNA 扩增量可用Y =(1 + X)n计算。Y代表DNA片段扩增后的拷贝数,X表示平(Y)均每次的扩增效率,n代表循环次数。平均扩增效率的理论值为100%,但在实际反应中平均效率达不到理论值。反应初期, 靶序列DNA片段的增加呈指数形式,随着PCR产物的逐渐积累,被扩增的DNA片段不再呈指数

操作流程简要说明

一、统计系统 登录单位信息管理系统 修改学校属性 登录统计系统 报表录入 (必需点保存,表内校验) 表间校验 (所有表格均需为表内已校验) 学校上报 (所有表格均需为表间已校验) 登录统计系统 查看校验表 (必需点保存) 表间校验 (所有表格均需为表内已校验) 镇级上报 (所有表格均需为表间已校验及 下属单位均已上报) 登录统计系统 查看校验表 (必需点保存) 表间校验 (所有表格均需为表内已校验) 县级上报 (所有表格均需为表间已校验及 下属单位均已上报) 录入基础县基表格 (必需点保存) 学校级操作 县 级操作 镇 级操作 基础管理 -> 学校管理 -> [修改] 报表处理 –> 报表录入/上报 –> [录入] ->[保存] 报表处理 –> 报表录入/上报 –> [表间校验] 报表处理 –> 报表录入/上报 –> [上报] 报表处理 –> 报表录入/上报 –> [查看] 报表处理 –> 报表录入/上报 –> [间校难验] 报表处理 –> 报表录入/上报 –> [上报] 报表处理 –> 报表录入/上报 –> [查看] 报表处理 –> 报表录入/上报 –> [间校难验] 报表处理 –> 报表录入/上报 –> [上报] 报表处理 –> 报表录入/上报 –> [录入] ->[保存]

二、基础库 登录基础库系统 新增新生 学生转学 (转出/转入) 学生异动处理 (休学、复学、死亡申报等) 调整教师、占地及场室、校舍信息 基础信息管理 -> 教师信息/占地及场室/校舍信息 新生入籍 -> 新生登记 学生变动办理 -> 转入申请/转出申请 学生变动办理 -> 学生休学/复学/退学/跳级/降级/留级/死亡申报 学校级操作

word单项-操作步骤

单项操作1 在考生文件夹Paper子文件下,建立文档“Three.doc ”,由三页组成.其中第一页中第一行内容为“中国”,样式为“正文”,页面方向为纵向、纸张大小为16 开;第二页中第一行内容为“美国”,样式为“正文”,页面方向为横向、纸张大小为A4 ,第三页中第一行内容为“日本”,样式为“正文”,页面方向为纵向、纸张大小为B5。 操作步骤: 建立文档“Three.doc ”,在前三行分别输入相应内容,光标定位在开头,页面设置……应用于“插入点之后”,确定。光标定位在第二页开头,…… 单项操作2 在考生文件夹Paper子文件下,建立成绩信息(CJ.xls),如表1所示。再使用邮件合并功能,建立成绩范本文件CJ_T.doc,如图1所示。最后生成所有考生的成绩单“CJ.doc”。 表1 操作步骤: 1.在Paper子文件下,建立成绩信息(CJ.xls)。 2.在Paper子文件下,建立CJ_T.doc,插入表格,输入除含? ?以外的文字。 3.显示“邮件合并”工具栏,单击“打开数据源”按钮…… 4.单击“插入域”按钮……,保存。 5.单击“合并到新文档”按钮,将字母1文档另存为:CJ.doc,保存位置:paper。 单项操作3 在考生文件夹Paper子文件下,先建立文档“Example. doc”,由六页组成.其中第一页中第一行内容为“浙江”,样式为“正文”,第二页中第一行内容为“江苏”,样式为“正文”;第三页中第一行内容为“浙江”,样式为“正文”;第四页中第一行内容为“江苏”,样式为“正文”,第五页第一行内容为“安徽”,样式为“正文”,第六页为空白; 在文档页脚处插入“第X 页共Y 页”形式的页码,居中显示.再使用自动索引方式,建立索引自动标记文件“MyIndex.doc " ,其中:标记为索引项的文字 1 为“浙江”,主索引项1 为“zhejiang ”;标记为索引项的文字2 为“江苏”,主索引项 1 为,“Jiangsu”.使用自动标记文件,在文档“Example. doc”第六页中创建索引。

RT-PCR的实验原理与操作步骤

提取组织或细胞中的总RNA以其中的mRN作为模板,采用Oligo(dT)或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA再以cDNA为模板进行PCR扩增,而获得目的基因或检测基因表达。RT-PCF使测的灵敏性提高了几个数量级,使一些极为微量 RNA羊品分析成为可能。该技术主要用于:分析基因的转录产物、获取目的基因、合成cDNA探针、构建RNA高效转录系统。 (一)反转录酶的选择 1. Moloney 鼠白血病病毒(MMLV)反转录酶:有强的聚合酶活性,RNA酶H活 性相对较弱。最适作用温度为37 C。 2. 禽成髓细胞瘤病毒(AMV)反转录酶:有强的聚合酶活性和 RNA 酶 H 活性。 最适作用温度为42 C。 3. Thermus thermophilus 、 Thermus flavus 等嗜热微生物的热稳定性反转录 酶:在Mn2存在下,允许高温反转录 RNA,以消除RNA模板的二级结构。 4. MMLV 反转录酶的 RNase H- 突变体:商品名为 SuperScript 和 SuperScript U。此种酶较其它酶能多将更大部分的RNA转换成cDNA,这一 特性允许从含二级结构的、低温反转录很困难的 m 模板合成较长 cDNA 。 (二)合成 cDNA 引物的选择 1. 随机六聚体引物:当特定 mRNA 由于含有使反转录酶终止的序列而难于拷贝 其全长序列时,可采用随机六聚体引物这一不特异的引物来拷贝全长 mRNA 。 用此种方法时,体系中所有RNA分子全部充当了 cDNA第一链模板,PCR引物在扩增过程中赋予所需要的特异性。通常用此引物合成的 cDNA 中 96%来源 于 rRNA。 2. Oligo(dT) :是一种对 mRNA 特异的方法。因绝大多数真核细胞 mRNA 具有

LED显示屏操作流程说明书

LED显示屏组装及应用说明书 一、LED显示屏基础知识 (3) 二、LED显示屏同步与异步控制系统工程图 (14) 1、异步系统工程简易图 (14) 2、同步系统工程简易图 (15) 三、LED相关软件、卡说明及其应用 (一)L ED显示屏电气极性判断 (16) (二)L ED异步卡 1、励研系列卡(CL2005软件) (17) 2、诣阔系列卡(LED图文控制系统软件) (23) 3、其它卡…………………………………………………………………………………………..? (三)L ED同步卡 1、灵星雨系列卡 (28) 四、LEDLED显示产品 (36) 1、户外产品………………………………………………………………………………… (1)P H10………………………………………………………………………………… (2)P H16…………………………………………………………………………………

(3)P H20(全彩)………………………………………………………………………………… 2、室内产品 (40) (1)P H3.0………………………………………………………………………………… (2)P H3.75………………………………………………………………………………… (3)P H5.0………………………………………………………………………………… 3、亚户外产品………………………………………………………………………………… (1)P H10亚户外…………………………………………………………………………… (2)P H5.0半户外…………………………………………………………………………… 五.显示屏操作注意事项及维修资料 (43)

单项操作汇总_筛选解题步骤(1)

错误!主控文档 1、在考生文件夹Paper/DWord下,建立主控文档“Main、docx”,按序创建子文档“Sub1、docx”、“Sub2、docx”与“Sub3、docx”。要求:(2,10) (1)Sub1、docx中第一行内容为“Sub1”,第二行内容为文档创建得日期(使用域,格式不限),样式均为正文; (2)Sub2、docx中第一行内容为“Sub2”,第二行内容为“→”,样式均为正文; (3)Sub3、docx中第一行内容为“办公软件高级应用”,样式为正文,将该文字设置为书签(名为Mark);第二行为空白行;在第三行插入书签 Mark标记得文本。 2、在考生文件夹Paper/DWord下,建立主控文档“Main、docx”,按序创建子文档“Sub1、docx”与“Sub2、docx”。要求:(3) (1)Sub1、docx中第一行内容为“办公软件高级应用”,样式为正文,将该文字设置为书签(名为Mark);第二行为空白行;在第三行插入书签Mark标记得文本。 (2)Sub2、docx中第一行使用域插入该文档创建时间(格式不限);第二行使用域插入该文档得文件名称(格式不限)。 ?新建一word文档→建一main、doc主控文档 ?打开文件→视图→大纲视图→点击显示文档→创建→光标定位在后,输入sub 1,定位到后,大纲→点击显示文档→创建→光标定位在后,输入sub2,定位到 后,大纲→点击显示文档→创建→光标定位在后,输入sub3,点击“折叠子文档” →保存,此时文件中显示为超级链接得格式。 ?Ctrl+鼠标单击,打开sub1,设置sub1为正文,设置1为上标,定位到第二行,插入→文档部件→域→选择“日期与时间”中默认格式。(第一个即为文档 创建时间;在第二套题中要求插入文档得文件名称→→在第二行中插入→文档 部件→域→文档信息中得)→保存 ?Ctrl+鼠标单击,打开sub2,,设置为正文,设置2为上标,定位到第二行→插入→符号→其她符号→wingdings下得→,保存文件 ?Ctrl+鼠标单击,打开sub3,输入办公软件高级应用,设置为正文,敲回车形成三行,选中“办公软件高级应用”文字,插入→书签→书签名为“mark”→添加。 鼠标定位到第三行,引用→交叉引用→选“mark”插入,保存文件 ?保存主控文档main、docx,在文件夹中会瞧见有sub1、docx,sub2、docxsub3、docx。 错误!页面设置

word单项操作题及步骤

5.1 典型试 题 以下操作中,假设考生的准考证号码为101805126202224,考生文件夹为“D:\resul t\126202224”,如图5-1 所示,读者练习时请自行创建考生文件夹,考试时考生文件夹已建立。

图5-1 考生信息 5.1.1 单项操作题 典型试题1 一、操作要求 ,如表5-1 所示。再使在考生文件夹P a per子文件夹下,建立成绩信息(C J.xls) 用邮件合并功能,建立成绩单范本文件C J_T.doc,如图5-2 所示。最后生成所有考生的成绩单“CJ.doc”。 表5-1 考生成绩表 图5-2 成绩单范本 二、解答

步骤1:打开E xcel 2003 程序,在S he e t1工作表中输入如表5-1 所示数据,然 后保存在考生文件夹Paper 子文件夹(D:\result\126202224\P aper)下,取名。关闭Ex c el2003 程序。 为“CJ.xls” 步骤2:在W o r d2003 中,建立如图5-3 所示表格,然后选择菜单“视图”→“工具栏”选项,在打开的级联子菜单中,选中“邮件合并”复选框,打开“邮件合并”工具栏,如图5-4 所示。 图5-3 考生成绩表 格 图5-4 “邮件合并”工具栏 步骤3:在“邮件合并”工具栏中,单击“打开数据源”按钮,打开如图5-5 所示“选取数据源”对话框,选择考生文件夹Paper 子文件夹(D:\result\126202224\Paper)中的“C J.xls”文件,再单击“打开”按钮。

图5-5 “选取数据源”对话框 步骤4:在打开的“选择表格”对话框中,选中“Sh e et1$”工作表,如图5-6 所 示,再单击“确定”按钮。 步骤5:将光标定位于“同学”前,单击“邮件合并”工具栏中的“插入域”按

分子标记的实验原理及操作流程

AFLP分子标记实验 扩增片段长度多态性 Amplified fragment length polymorphism(AFLP 是在随机扩增多态性(RAPD和限制性片段长度多态性(RFLP技术上发展起来的DNA多态性检测技术,具有RFLP技术高重复性和RAPD技术简便快捷的特点,不需象RFLP 分析一样必须制备探针,且与RAPD标记一样对基因组多态性的检测不需要知道其基因组的序列特征,同时弥补了 RAPD技术重复性差的缺陷。同其他以PCR为基础的标记技术相比,AFLP技术能同时检测到大量的位点和多态性标记。此技术已经成功地用于遗传多样性研究,种质资源鉴定方面的研究,构建遗传图谱等。 其基本原理是:以PCR(聚合酶链式反应为基础,结合了 RFLP、RAPD的分子标记技术。把DNA进行限制性内切酶酶切,然后选择特定的片段进行PCR扩增(在所有的限制性片段两端加上带有特定序列的’接头”用与接头互补的但3-端有几个随机选择的核苷酸的引物进行特异PCR扩增,只有那些与3-端严格配对的片段才能得到扩增,再在有高分辨力的测序胶上分开这些扩增产物,用放射性法、荧光法或银染染色法均可检测之。 一、实验材料 采用青稞叶片提取总DNA 实验设备 1. 美国贝克曼库尔特CEQ8000毛细管电泳系统, 2. 美国贝克曼库尔特台式冷冻离心机, 3. 美国MJ公司PCR仪,

4. 安玛西亚电泳仪等。 三、实验试剂 1. 试剂:请使用高质量产品,推荐日本东洋坊TOYOBO公司的相关产品 DNA提取试剂盒; EcoRI酶,Msel酶,T4连接酶试剂盒; Taq 酶,dNTP, PCR reactio n buffer; 琼脂糖电泳试剂:琼脂糖,无毒GeneFinder核酸染料替代传统EB染料;超纯水(18.2M ? ? cm 2. 其他实验需要物品 微量移液枪(一套及相应尺寸Tip头,PCR管,冰浴等。 四、实验流程 1、总DNA提取 使用DNA提取试剂盒提取植物基因组DNA,通过紫外分光光度计检测或用标准品跑胶检测。一般来说,100ng的基因组DNA作为反应模板是足够的。 2、EcoR1酶消化(20ul体系/样品 EcoR1 1ul

财务软件安装操作步骤说明

财务软件安装操作步骤说明 一.安装财务Oracle软件 1.将本机jdk文件夹复制到对方D盘根目录下; 2.将本机的hosts文件复制到对方etc文件下,路径如图:; 3.将对方机器中jdk文件夹中bin子文件夹中的“Oracle财务.Imk(快捷方式)”复制到 对方桌面上,如图所示:; 4.双击该快捷方式(跳出的页面选择Accept),如果跳出Oracle登陆界面即可。 如图所示: 二.安装财务凭证软件(先安装财务凭证软件,再安装ERP)

1.在对方机器的运行中输入\\196.6.9.44;在如图所示的路径中找到“ORAINST.EXE”文 件; 2.开始安装:运行 ⑴语言:(选择)简体中文; ⑵目标路径改为“C:”下(注意:与后面ERP所装的ORAINST文件夹不能安装在一个盘内); ⑶到这步 选择5个安装项(如图所示): 选择安装; ⑷一直ok到结束; ⑸到这步

点“退出”即可; 3.将本机App_mate文件夹复制到对方D盘根目录下; 4.将本机中文件复制到对方admin文件下, 路径如图:; 5.将本机“(快捷方式)”复制至对方桌面; 6.关闭多余文件夹; 7.打开登录界面即可; 8.若对方要求配置打印机,先选择合适的打印机型号,在打印机设置中选择打印机服务器 属性,创建新格式(注意:设置——宽度大小不变、高度大小减半) 注意:若安装失败,卸载时需到注册表中进行删除,再把主机中原有文件夹删除即可。三.安装BO 1. 在对方机器的运行中输入\\196.6.9.44;在如图所示的路径中找到“sno.txt”文件,并打开;

2. 同时,在如图所示的路径中找到“”文件; 3.开始安装:运行 ⑴Begin→Next→输入序列号: →Next→Next ⑵到这步 选择“Custom Setup”项 ⑶到这步 选择4个安装项(如图所示):(先全不选,在进行勾选) 选择安装;“BusinessObjects”、“Designer”、 “Document Agent”、在Data Access中选择 “Oracle”(共4项) ⑷在弹出的文件夹中找到“Business objects” 快捷方式至对方桌面; ⑸关闭多余文件夹; 4.将本机bo_rep文件夹复制到对方D盘根目 录下; 5.双击“Business objects(快捷方式)”

凯氏定氮仪原理及操作步骤

凯氏定氮仪原理: 蛋白质是含氮的有机化合物。食品与硫酸和催化剂一同加热消化,使蛋白质分解,分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵。然后碱化蒸馏使氨游离,用硼酸吸收后再以硫酸或盐酸标准溶液滴定,根据酸的消耗量乘以换算系数,即为蛋白质含量。 1.有机物中的胺根在强热和CuSO4,浓H2SO4 作用下,硝化生成(NH4)2SO4 反应式为: 2NH2+H2S04+2H=(NH4)2S04 (其中CuSO4做催化剂) 2.在凯氏定氮器中与碱作用,通过蒸馏释放出NH3 ,收集于H3BO3 溶液中 反应式为: (NH4)2SO4+2NaOH=2NH3+2H2O+Na2SO4 2NH3+4H3BO3=(NH4)2B4O7+5H2O 3.用已知浓度的H2SO4(或HCI)标准溶液滴定,根据HCI消耗的量计算出氮的含量,然后乘以相应的换算因子,既得蛋白质的含量反应式为: (NH4)2B4O7+H2SO4+5H2O=(NH4)2SO4+4H3BO3 (NH4)2B4O7+2HCl+5H2O=2NH4Cl+4H3BO3 凯氏定氮仪操作步骤: (一)消化

1、准备6个凯氏烧瓶,标号。1、 2、3号烧瓶中分别加入适当浓度的蛋白溶液,样品要加到烧瓶底部,切勿沾在瓶口及瓶颈上。再依次加入硫酸钾-硫酸铜接触剂,浓硫酸,30%过氧化氢。4、5、6号烧瓶作为空白对照,用以测定试剂中可能含有的微量含氮物质,对样品测定进行校正。4、5、6号烧瓶中加入蒸馏水代替样液,其余所加试剂与1、2、3号烧瓶相同。 2、将加好试剂的各烧瓶放置消化架上,接好抽气装置。先用微火加热煮沸,此时烧瓶内物质炭化变黑,并产生大量泡沫,务必注意防止气泡冲出管口。待泡沫消失停止产生后,加大火力,保持瓶内液体微沸,至溶液澄清后,再继续加热使消化液微沸15min。在消化过程中要随时转动烧瓶,以使内壁粘着物质均能流入底部,以保证样品完全消化。消化时放出的气体内含SO2,具有强烈刺激性,因此自始自终应打开抽水泵将气体抽入自来水排出。整个消化过程均应在通风橱中进行。消化完全后,关闭火焰,使烧瓶冷却至室温。 (二)蒸馏和吸收 蒸馏和吸收是在微量凯氏定氮仪内进行的。凯氏定氮蒸馏装置种类甚多,大体上都由蒸气发生、氨的蒸馏和氨的吸收三部分组成。 1、仪器的洗涤 仪器安装前,各部件需经一般方法洗涤干净,所用橡皮管、塞须浸在10%NaOH溶液中,煮约10min,水洗、水煮10min,再水洗数次,然后安装并固定在一只铁架台上。 仪器使用前,微量全部管道都须经水蒸气洗涤,以除去管道

操作流程说明文档

操作流程说明文档内部编号:(YUUT-TBBY-MMUT-URRUY-UOOY-DBUYI-0128)

操作流程说明文档 1.下载阅卷软件方式,注意:此方法只能在学校电脑使用。 打开IE 进入后右键点击这个位置,选中目标另存为。如图操作。 然后保存在任意地方即可。 2.下载完后,找到刚刚下载文件所保存的目录地址,双击这个程序,打开阅卷软件。 3.打开后会弹出一个框,要求输入:服务器地址,用户名称,用户密码。 服务器地址必须是: 模拟试用的用户名称和密码在中可以下载。 4. 点击确定后会提示是否修改密码, 修改就在旧密码中输入“123”,新密码自行设置。 不修改就点放弃即可。 5.提交后进入批卷界面。如图示 6.开始阅卷, 进入阅卷页面后,屏幕中间位置显示的是学生的答题情况,请老师根据答题的错对程序相应给分,分数输入到右侧的“评分位置”(如上图) 评分后点击提交即是批完一份卷子,当老师点击提交后,系统会自动下载下一份学生试卷,老师则继续评分即可。

7.阅卷老师操作菜单中(左上角位置),如果上一份卷的分数给错,点了提交,可以点上一份回去重新评分。如果看不清可以点击放大。 8.阅卷常用操作讲解。 出现非本题试题有关图片(提交图像异常)自动0分点提交 是本题但答案写错位置(提交答错位置)自动0分点提交 答题超出规定范围(提交答题过界)自动0分点提交 (系统自动处理好后重新分发出来) 优秀答题标记(提交优秀试卷)给分后提交 典型解答方式标记(提交典型试卷)给分后提交 糟糕试卷标记(提交糟糕试卷)给分后提交 9. 试题批注。 应用如下:↓ 10.当提示“给你分配的试卷已经批阅完毕”, 请点击左上角的“退出”按钮(如图),退出系统,完成阅卷。 如果要继续批其他题目,请点击“注销“按钮,就会回到登陆窗口,输入其他题目的账号密码,继续批阅试卷。 以下是外网下载方式 方法2:(下面网址可以下载帮助文档,软件,账号) 1.首先打开IE 2.然后在地址栏输入:后点回车键,也可直接在此WORD文档中按住CTRL键点击链接。

计算机二级Word整理题及操作步骤参考

计算机二级Word整理题及操作步骤参考

————————————————————————————————作者:————————————————————————————————日期:

目录 第一章Word二级完整题示例 (6) 一、单项操作 (7) 1.模板-我的简历-典雅型简历 (7) 2.模板-我的简历-现代型简历 (7) 3.页面设置-Three-中国、美国、日本 (7) 4.页面设置-MyThree-浙江、江苏、安徽 (7) 5.主控文档和子文档-Main、Sub1、Sub2、Sub3 (7) 6.主控文档和子文档-Main、Sub1、Sub2 (7) 7.索引-浙江、江苏、安徽 (7) 8.索引-中国、美国、日本 (8) 9.邮件合并-成绩单 (8) 10.邮件合并-考生信息单 (8) 二、综合操作 (9) 1.样式-自动编号-题注-交叉引用-脚注 (9) 2.节-目录-图索引-表索引-页眉页脚-域 (10) 第二章Word二级题操作步骤参考 (11)

一、单项操作 (11) 1.模板-我的简历-典雅型简历 (11) 2.模板-我的简历-现代型简历 (11) 3.页面设置-Three-中国、美国、日本 (12) 4.页面设置-MyThree-浙江、江苏、安徽 (12) 5.主控文档和子文档-Main、Sub1、Sub2、Sub3 (13) 6.主控文档和子文档-Main、Sub1、Sub2 (13) 7.索引-浙江、江苏、安徽 (14) 8.索引-中国、美国、日本 (15) 9.邮件合并-成绩单 (16) 10.邮件合并-考生信息单 (18) 二、综合操作 (19) 1.样式 (19) 2.自动编号 (21) 3.题注-交叉引用 (22) 4.脚注

学生网上选课操作步骤及说明【模板】

学生网上选课操作步骤及说明 1.操作步骤: 1.1 在任意一台可访问校园网的计算机上打开IE 浏览器,在地址栏输入:******/ 登录教务处网站,然后点击“学生综合系统”。 1.2 输入自己的用户名(即学号)及密码,确认进入。 1.3 选课分为预选、正选和补、退选三个阶段 预选:学生先从选课手册上查出本人可选的课程号、课序号,然后再进行选课。 注意,在选课手册中,每一个课程号代表一门课程,每一个课序号代表一个教学班,同一课程号的不同课序号代表同一门课程有多个教学班,在选课时,一门课程只能选一个课序号。 正选:所有参加预选的学生都必须参加正选。对于选课人数小于课容量的课程,系统将自动置为选中,而对那些选课人数大于课容量的课程必须进行抽

签。当学生所选课程因名额(即课容量)限制抽签时未能选中,则可查询选课手册,改选该课程的另一课序号(必须为所在院系可选的课序号)。 补、退选:正选结束后即进入补、退选阶段,凡未选中课程或对已选课程不满意者,可在此阶段补选或退选。 1.4 预选 依次点击导航条中的【选课管理】→【选课方案】→【方案课程】按钮,进入“方案课程”选课页面,在“计划学年学期”下拉列表框中选择相应学年学期,根据所显示的课程名和课序号,对照所发选课手册中所列课程,选择本专业教学计划规定的相应课程,然后单击【确定】即可。(也可直接在“课程号”和“课序号”中,输入课程号和课序号过滤出欲选择的课程) 1.5 正选 学生依次点击【选课管理】→【已选课程】按钮,若页面“选课结果列表”中所看到的选课状态为“选中”,此时表明该门课程已经选定,无需抽签;若页面“选课结果列表”中所看到的选课状态为“拟选”,此时表明该门课程需抽签。

Word单项操作LX

第一章Word二级操作题 一、单项操作 1.模板-我的简历-典雅型简历 操作步骤: 1)选择菜单“文件”/“新建”,选择“本机上的模板”…/“其他文档”/“典雅型简 历”,新建类型选择为“模板”,点“确定”按钮新建模板。 2)将“传真”修改为“手机”。 3)以“我的简历”为文件名,保存模板文件,关闭模板文件。 4)选择菜单“文件”/“新建”,选择“本机上的模板…”/“常用”/“我的简历”,新 建类型选择为“文件”,点“确定”按钮新建文件。 5)在姓名信息处填入真实姓名,以“简历”为文件名保存文件,注意考试时要选择保 存目录为考生文件夹Paper子文件夹。 2.页面设置-Three-中国、美国、日本 操作步骤: 1)新建空白文档后,在第一行输入文字“中国美国日本”。 2)选中文字“中国”,选择菜单“文件”/“页面设置”,在页边距中选择方向为“纵 向”,在纸张中选择纸张大小为16开,注意应用于选择为“所选文字。 3)选中文字“美国”,选择菜单“文件”/“页面设置”,在页边距中选择方向为“横 向”,在纸张中选择纸张大小为A4,注意应用于选择为“所选文字。 4)选中文字“日本”,选择菜单“文件”/“页面设置”,在页边距中选择方向为“纵 向”,在纸张中选择纸张大小为B5,注意应用于选择为“所选文字。 5)保存文件为“Three.doc”。

3.主控文档和子文档-Main、Sub1、Sub2、Sub3 操作步骤: 1)新建空白文档后,在第一行输入文字“子文档一”,保存文件为Sub1.doc。注意考 试时要选择保存目录为考生文件夹Paper子文件夹。 2)同理新建Sub2.doc和Sub3.doc。 3)新建空白文档,选择菜单“视图”/“大纲”,在大纲工具栏上点击“”插入子 文档,选择Sub1.doc。 4)依次插入Sub1.doc、Sub2.doc、Sub3.doc作为子文档后,保存文件为Main.doc。4.索引-浙江、江苏、安徽 操作步骤: 1)新建空白文档后,在第一行输入文字“浙江”,按Ctrl+Enter到一页。输入文字“江 苏”,按Ctrl+Enter到一页。输入文字“浙江”,按Ctrl+Enter到一页。输入文字“江 苏”,按Ctrl+Enter到一页。输入文字“安徽”,按Ctrl+Enter到一页。此时文档共 有六页。 2)选择菜单“视图”/“页眉和页脚”,将光标置于页脚处,“插入”/“自动图文集” /“第X页共Y页”。设置为居中。保存文件为Example.doc。 3)创建索引自动标记文件“MyIndex.doc”。新建Word文档,插入一个两列表格。在 第一列中输入要搜索并标记为索引项的文字,第二列中输入第一列中文的索引项。 完成后保存文件,关闭文件。

百威软件操作流程说明教学内容

百威软件操作流程说明 【STEP 1】进入后台管理系统 双击进入系统,此时系统提示输入管理员密码,实验室POS机无需密码,直接点击确定进入后台管理系统 【STEP 1】系统主要功能

从系统主界面上可以看出,POS收银后台系统可以实现多种功能。这里主要介绍以下几种。 [商品分类] 商品分类是用来设置本公司所有商品的类别,分类必须明确方便易记。 操作方法:进入此界面后如果要新建大类,就点击新的大类按钮,如果需新建子类,则首先点到需某大类,然后在该大类下面新建子类。需修改类别名称,首先点击该类别然后按修改类别,如需删除某类,首先点击到该类,然后按删除类别即可,删除类别时要注意,如果该类中已有子类或者有商品,则该类不能删除。 以上操作全部作完后,如果需要保存,则按确定按钮,如果不需要保存,则按取消。 [类别代码] 类别代码是用来为每个类别指定一个唯一的代码,代码可以是英文字母,也可是数字,一般不要用中文。

操作方法是:首先点击到该类,然后按设置按钮或双击该类,系统会弹出输入框,可在此框中输入类别代码,输入完后按确定即可。此处需注意的是类别代码不能重复,如果该类中已有商品,类别代码不可更改。 如果打印商品类别列表,可按打印按钮即可进行打印。 [商品档案] 商品档案是用来设置本公司所有的商品信息,包括商品的供应商,条码,价格以及包装规格等。操作方法如下: 进入信息档案 商品档案,出现如下界面。

商品档案可进行新建、删除、打印、复制、导出、表格设置 新建:如果需增加商品档案,可按新建按钮,新建商品档案时首先要选择要新建商品所属的类别,然后再点击新建,系统会弹出新建商品的输入界面。 (基本信息) ◇自编码/条码:表示商品的条形码或者是商品的店内码(要用条形码)◇商品名称:表示商品的名称或者是叫法 ◇单位:表示商品的计量单位,在这里也是商品的最小单位 ◇进价:表示商品的参考进货价格 ◇零售价:表示商品的零售价格 ◇供应商:表示该商品的供货商 ◇所属类别:表示该商品属于哪个类别,以后还可更改 ◇库存上限:表示商品的库存最高限度,如果超过此限度,系统将会在库存积压报表中体现出来 ◇库存下限:表示商品的库存最低限度,如果低于此限度,系统将会在库存不足报表中体现出来 ◇期初库存:表示在开业前该商品的实际库存 ◇此商品只按零售价销售:表示该商品在前台销售时只允许按零售价销

word单项操作题目操作步骤图解说明(全)(2010版本新)

类型一:页面设置 1、在考生文件夹Paper子文件下,建立文档“比赛信息.docx”,由三页组成。要求: (1)第一页中第一行内容为“足球”,样式为“标题 1”;页面垂直对齐方式为“居中”;页面方向为纵向、纸张大小为16开;页眉内容设置为“football”,居中显示;页脚内容设置为“成绩不行”,居中显示。 (2)第二页中第一行内容为“篮球”,样式为“标题 2”;页面垂直对齐方式为“顶端对齐”;页面方向为横向、纸张大小为A4;页眉内容设置为“basketball”,居中显示;页脚内容设置为“成绩还行”,居中显示;对该页面添加行号,起始编号为“1”。 (3)第三页中第一行内容为“乒乓球”,样式为“正文”;页面垂直对齐方式为“底端对齐”;页面方向为纵向、纸张大小为B5;页眉内容设置为“table tennis”,居中显示;页脚内容设置为“成绩很好”,居中显示。 操作难点简要说明: 1、先插入2个分隔符中分节符中下一页,再分别设置各页面,设置第 2、3页页眉页脚时,注意单击链接到前一条页眉,取消链接到上一节。 2、行号添加。页面布局---页面设置,展开页面设置版式后,版式----行号—把添加行号打上勾----确定。

3、。 2、在考生文件夹Paper子文件下,建立文档“考试信息.docx”,由三页组成。其中: (1)第一页中第一行内容为“语文”,样式为“标题 1”;页面垂直对齐方式为“居中”;页面方向为纵向、纸张大小为16开;页眉内容设置为“90”,居中显示;页脚内容设置为“优秀”,居中显示。 (2)第二页中第一行内容为“数学”,样式为“标题 2”;页面垂直对齐方式为“顶端对齐”;页面方向为横向、纸张大小为A4;页眉内容设置为“65”,居中显示;页脚内容设置为“及格”,居中显示;对该页面添加行号,起始编号为“1”。 (3)第三页中第一行内容为“英语”,样式为“正文”;页面垂直对齐方式为“底端对齐”;页面方向为纵向、纸张大小为B5;页眉内容设置为“58”,居中显示;页脚内容设置为“不及格”,居中显示。 类型二:索引 1、在考生文件夹Paper子文件下,先建立文档“Example.docx”,由六页组成。其中: (1)第一页中第一行内容为“浙江”,样式为“正文”; (2)第二页中第一行内容为“江苏”,样式为“正文”; (3)第三页中第一行内容为“浙江”,样式为“正文”; (4)第四页中第一行内容为“江苏”,样式为“正文”; (5)第五页中第一行内容为“安徽”,样式为“正文”; (6)第六页为空白; (7)在文档页脚处插入“X/Y”形式的页码,居中显示; (8)使用自动索引方式,建立索引自动标记文件“MyIndex.docx”,其中:标记为索引项的文字1为“浙江”,主索引项1为“Zhejiang”;标记为索引项的文字2为“江苏”,主索引项1为“Jiangsu”。使用自动标记文件,在文档“Example.docx”第六页中创建索引。 2、在考生文件夹Paper子文件下,先建立文档“省份信息.docx”,由六页组成。其中: (1)第一页中第一行内容为“浙江”,样式为“正文”; (2)第二页中第一行内容为“江苏”,样式为“正文”;

Word单项操作步骤

一:版面设置类 步骤: 1.新建一个word文档,命名为“会议邀请函”。 2.在第一页依次插入四节: (1)页面布局-分隔符-分节符-下一页 (2)点3次页面布局-分隔符-分节符-下一页(3)共有4个页面,也就是4节

3.在页面(一)(也就是第1页即第1节)上输入“邀请函”三个字: (1)改变文字方向,改成竖排,然后修改页面为纵向 (2)修改页面布局-页面设置启动器-版式-页面垂直对齐方式-居中 (3)修改文字水平居中对齐,在段落里面选择居中 (4)修改字体为隶书,字号为72号。 (5)页面(一)已经完成。

4.在页面(四)(也就是第2页即第2节)上输入“时间:2013年6月1日” 和“地点:学生活动中心”: (1)在第2页上第1行上输入“时间:2013年6月1日”,第2行上输入“地点:学生活动中心” (2)改变文字方向,改成竖排,然后修改页面为纵向 (3)修改页面布局-页面设置启动器-版式-页面垂直对齐方式-居中 (4)修改文字水平居中对齐,在段落里面选择居中 (5)修改时注意“时间:2013年6月1日”水平居中后,“地点:学生活动中心”也要水平居中 (6)页面(四)(也就是第2页即第2节)完成 5.在页面(三)(也就是第3页即第3节)上输入“汇报演出定于2013年6月 1日,在学生活动中心举行,敬请光临。”其他不用修改,页面(三)(也就是第3页即第3节)完成

6.在页面(三)(也就是第4页即第4节)上输入“演出安排”: (1)在第一行输入“演出安排”四字 (2)将光标定位在“演出安排”四字这一行,打开样式对话框里面的样式库,选中“标题1”样式 (3)将“演出安排”四字,水平居中(段落里面的水平居中) (4)页面(三)(也就是第4页即第4节)完成 7.页面布局-页面设置 (1)页码范围:多页-选择“拼页” (2)纸张方向:横向 (3)应用于“整篇文档” (4)整个“会议邀请函”完成

ERP操作流程图解word版本

ERP操作图解一般流程控制(具体操作可以查看ERP操作视频) 一)已成车为例 第一步:销售订单录入。菜单选择【销售】→【销售订单录入】 第二步:销售订单的审核。菜单选择【销售】→【销售订单审核】注:如果系统参数设置中的【销售订单直接审核】,该步省略。 第三步:订单客户BOM的提交【技术】→【订单客户BOM维护】

第四步:订单客户BOM的审核【技术】→【订单客户BOM审核】 注:如果系统参数中设定【订单客户BOM提交后直接审核】,该步省略。 第五步:做LRP维护。菜单【生产】→【LRP维护】

注:在LRP中会出现以下数据的分支,外购件下达给采购,自制件下达给加工中心 对于外购件:(采购管理)对应的单据为:采购订单 以下为采购管理步骤 步骤一:LRP采购指导菜单【采购】→【采购计划指导】→【LRP采购指导】 注:跟踪条件的选择:方便起见使用“按销售订单”跟踪(这里需要根据公司情况而定) 选择生成以后,物料明细将会到达下面的窗口中,我们要对下面的物料进行采购订单的保存

注:如果在系统参数中【是否有采购修补单业务】,当选择物料保存时将会提示是否保存采购修补单 步骤二:采购订单维护:菜单:【采购】→【采购订单维护】可以进行采购订单信息的维护。 注:只有采购订单为【新建】状态时,可修改单据信息。 步骤三:采购订单审核菜单:【采购】→【采购订单审核】 注:如果在系统参数中【采购订单直接审核】框中,当选择某一采购订单来源时,所生成的采购订单将直接通过审核。 步骤四:采购收料单录入菜单【采购】→【采购收料单管理】→【采购收料单录入】 【新增】→【供应商选择】→【收料类型:依据订单】→【确定】→【保存】

AOA单项操作过程说明

单项操作: 1、建立子文档:视图->大纲视图->显示文档->插入->找Sub1、Sub 2、Sub3 2、建立子文档:视图->大纲视图->显示文档->创建->在框内输入Sub1,创建->在框内输入同样Sub2 3、页面布局->分隔符->下一页->建3张空白页->键入“浙江”->页面设置->"页边距和纸张"中选,后面2张差不多 4、页面布局->分隔符->下一页->建6张空白页-输入各页的文字 插入->页码->页码底端->选加粗显示的数字2(x/y)->修改为第1页共6页 建立“我的索引”文件->插入->2x2表格->输入相关的文字,保存 建立索引:鼠标放到第六页->引用->插入索引->自动标记->找到“我的索引文件”-确定 插入索引->确定 5、打开WORD->文件->新建->样本模板->基本简历->以“我的简历”命名保存在\AOAtest\Word文件夹下 把ADMIN改为张三保存为简历 6、打开WORD->文件->新建->样本模板->基本信函->参考第五题 7、简历2张EXCEL和WORD文档,WORD文档中得<>都不要输入 邮件->选择收件人->使用现有列表->找到CJ.CLSX->选Sheet1$->插入合并域->“姓名”在同学的前面 再在第二列插入“语文、数学、英语”->完成并合并->编辑单个文档->全部->确定生成了成绩文档 把文档保存到word文件夹下就OK了 8、参考第七题 9、页面布局->分隔符->下一页->建3张空白页->键入“足球”

开始->更改样式->选项->选择要显示的样式->选“所有样式”->单击“样式1” 页面布局->页面设置 双击这页顶部(或下拉菜单插入->页眉)->完成后->做页脚 单击第二页开始,输入篮球,其它参考上面的设置 双击这页顶部(或下拉菜单插入->页眉)->单击链接到前一条页眉(实际是和上一页页眉断开),输入basketball 后面的设置参考上面,基本相同 10、参考第四题 11、页面布局->分隔符->分页符->分页符->分节符->分页符->分页符->分节符->分页符->分页符 第x节:插入->文档部件->域->编号->Section->选壹、贰、叁,... 第y页:插入->文档部件->域->编号->Page->选壹、贰、叁,... 共z页:插入->文档部件->域->编号->NumPages->选壹、贰、叁,... 页面布局->页面设置->版式->行号->添加行号->每节重新编号 页面设置->文档网格->指定行和字符网格->添加“每行30、每页40” 12、参考第九题 13、章的操作:开始->更改样式->右下角小箭头-〉选项->样式窗格选项->选择要显示的样式->所有样式->确定 鼠标右键单击->修改->居中->确定->鼠标放到第1章的前面->鼠标单击“标题1” 多级列表->“第一章标题1-再定义新的多级列表->此级别的编号样式(N)选一,二,三,...->确定,以后的2、3章只要鼠标放在第几章的前面,单击“标题1”就OK了。 节的操作:“标题2”设置后,再多级列表->“多级列表中“定义新的多级列表”->方法基本同上。但是要注意:要选左下角的“更多”->把“要在库中显示的级别”选为“级别2”。 奇数页开始:页面布局->页面设置->版式->节的起始位置“奇数页”->应用于“插入点以后”-> 日期:插入->文档部件->域->日期和时间“date” 作者:插入->文档部件->域->文档信息->Author

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