培育良种中蜂的条件 注意事项是什么

培育良种中蜂的条件注意事项是什么

在中蜂良种培育中，蜂种遗传性极其重要。养蜂生产与蜜源条件息息相关，培育良种也不例外。那么培育良种蜜蜂应该注意什么问题呢？以下由39蜂疗网小编为大家整理相关信息：

（1）中蜂年年换王，有有利的一面，也有不利的一面，不可一概而论，从实践中可以见到，有些中蜂蜂王，其产卵可以持续2年左右，仍不逊色，类似这样的蜂王，一直可以保存利用到它发生自然交替为止。而有些蜂王，其产卵力1年内就很快衰退，或是出现间歇性产卵现象（即产卵力有高低起伏），我们培育良种是择其优而去其劣；同样，中蜂的产蜜量与分蜂性也有强弱之分，我曾经饲养过一个强群，终年保持6~8框左右群势，产蜜量高，可惜第2子代分蜂后，无法保留其优良性状。

（2）育王场地最忌所大山塘、大水库的地方，并且要求避风向阳，敌害（蜻蜒、燕子、胡蜂之类）较少，以免交尾失王，造成损失。

（3）培育良种，我认为对新建蜂场的巩固更为重要，因为蜂种往往是各地引进或者收捕而来的，形形色色，很难管理，这样的蜂群如果未经造脾换五，遇很难成为强群，更不能投入生产，蜂群也容易罹病和逃跑。

（4）养中蜂与养外来蜂一样，需要保持强群优势，有人说，中蜂3框群即可采蜜，但3框群与8~9框蜂的产量就相形见拙了，没有什么经济效益。要高产就必须从培育良种着手。可以在蜂场内部筛选出一批良种，优中选优，使之成为一个新的中蜂品种。

蜜蜂养殖知识汇总

蜜蜂养殖知识 “蚕吐丝、蜂酿蜜”，谈起养蜂，人们都把它称作“甜蜜的事业”。蜜蜂以植物的花蜜、花粉为食物，以酿造蜂蜜、分泌王浆、蜂胶、蜂蜡等蜂产品为我们人类所利用。这些蜂产品在医疗、营养、美容、工业等方面都有很大的用途。作为养蜂大国，我国的蜂群数量和蜂产品产量均居世界的首位。饲养蜜蜂在我国有着良好的传统和基础，许多农民都是通过养蜂走上了致富之路。但是养蜂又是一门科学，只有科学的养蜂才能获得丰产丰收，获得高利润。本文我们就给准备饲养蜜蜂的广大养殖户们介绍养殖蜜蜂所要了解的基本知识、养殖条件、蜜蜂的日常管理，以及在一年四季不同季节对蜜蜂的管理技术。

蜜蜂养殖的基本知识 蜜蜂的初步认识 1、初步认识：在养蜂之前，让我们先来了解一些有关蜜蜂的知识。目前我国饲养着7百万群蜜蜂，其中90%是从国外进口的欧洲蜜蜂，包括意大利蜂和东北黑蜂等，还有10%是中华蜜蜂。意大利蜂，简称意蜂。广泛饲养在华北、东北地区。意蜂蜂王产卵力强，工蜂育虫能力强，不仅在生产上起重要作用，而且是重要的育种素材。东北黑蜂，是欧洲黑蜂的过度类型。繁殖力强，在寒冷地区越冬性能好。但在纬度低的地区不能保持强群。中华蜜蜂是简称中蜂，适宜在我国东北、西北、华北、华东、西南等地区生活。中蜂飞动敏捷，嗅觉灵敏，勤奋，抗病、耐寒、耐热力强。但产蜜量和分泌王浆的能力略低于欧洲蜜蜂。通过介绍，您就可以根据各地区的具体条件，选择合适的品种，采取相应的饲养措施。 2、群居昆虫：一群蜜蜂通常由一只蜂王，占1%的雄蜂，和占99%的工蜂组成。蜂王、雄峰、工蜂在群内各有专职，分工合作，相互依存。蜂王是蜂群中的雌性蜜蜂。正常情况下一群蜜蜂中只有一只蜂王。蜂王的职责是产卵。蜂王交尾一次，受精囊中储存的精子，就可满足一生繁殖的需要。交尾后2～3天开始产卵。一只蜂王一昼夜可产卵1500～2000粒。 3、蜂卵认识：

中蜂养殖技术

中蜂养殖的四大定理_中蜂养殖技术 二四定理又可叫温饱律。 “二”指每张脾保持二指宽蜜粉是中华蜜蜂生存和发展的最基本的物质保证。好比人类生存的温饱线，超越此线则“家庭幸福、人 丁兴旺”。蜜蜂生活状态长期处在低于温饱线时，则会导致巢虫严 重危害、蜂蜜恋巢性降低、蜜蜂繁殖率急剧下降、蜂群严重衰退甚 至蜜蜂飞逃等结果。 “四”指中华蜜蜂蜂群发展的基准群势，即每一个蜂群发展最起码从4框开始，若低于4框则力量不够，抵御自然灾害的能力极差，甚至导致全群衰败而亡。在4框蜂及以上群势，工蜂喂养幼虫及蜂 王的能力远高于4框以下，容易达到繁殖的最佳哺喂期。所以4框 是蜂群发展的群势分界线，无论是自然分蜂群还是人工分蜂群，或 是春繁、秋繁群，都应该以4框为底线，才能迅速达到蜂群发展的 最佳状态，养蜂人务必认真对待。 四八定理也可称小康律。“四”指每脾有4指宽的存蜜，此时蜜蜂的生活水平相当于人类的小康，然后可适当取蜜，但是不能逾越 小康线。小康水平的蜜蜂繁殖好，抗病虫能力强，容易适应人类的 干扰，所以养蜂者可以随便搬运和检查蜜蜂，也可以取蜜和分蜂， 此限度又称中蜂的取蜜线。“八”指每个生产蜂群群势达8框，是 高产和稳产的基本群势，因为实验证明，8框及以上群势的蜂群， 能够顺利应对各种自然和人为影响带来的风险和灾难，从而顺利的 完成生产蜂蜜的任务。此限度又称为生产线。在蜜蜂的生产过程中，完全遵循人多力量大和团结就是力量的原则，所以养殖者务必把蜂 养强、养好，才能高产稳产。此限度又称中蜂的生产线。因此长期 保持中蜂的小群取蜜和见蜜就取，而不遵循中蜂养殖四八定理(小康律)，就会导致蜂群严重受损，中蜂优良基因逐渐丢失，中蜂生产力 下降，中蜂养殖不能规模化，更不可能使中华蜜蜂产业的优势得以 发挥和发扬光大。

细胞培养的操作步骤

传代细胞培养的视频拍摄脚本 一、实验准备 器材 液氮冷冻灌、恒温培养箱、电冰箱、高压灭菌锅、磁力搅拌器、离心机、分析天平、倒置显微镜、超净工作台、弯头吸管（1个）、胶头滴管（9个）、离心管（9个）、带塞培养瓶（不定个）、试管架、量桶、烧杯、酒精灯、抽滤瓶、G6型号细菌过滤漏斗、带塞小玻璃瓶，大三角瓶、无菌冻存管、液氮瓶（一）、器皿 1玻璃器皿的清洗灭菌： 种类：小玻璃瓶、弯头吸管、滴管（3个）、培养瓶、量桶、烧杯、抽滤瓶、大三角瓶，细菌过滤器接口管 药品：5％盐酸溶液、重鉻酸钾120ml、硫酸200ml、蒸馏水200ml （1）浸泡:新使用或重复使用的玻璃器皿须经5％盐酸溶液或自来水浸泡过夜或煮沸30min，水洗。以去除新购进玻璃器皿所带有灰尘、铅、砷等物质，并消除其弱碱性。 （镜头一：实验人员将器皿放进加有5％盐酸溶液的盆内，并以字幕和配音的形式显示浸泡或煮沸时间和浸泡目的） （2）刷洗:浸泡后用软毛刷和优质的洗洁精进行刷洗。刷洗后经行烘干 （镜头二：实验人员刷洗器皿，使用正规的清洗方法，并烘干，只示范其中2--3种即可，实验人员必须介绍操作示范烘干箱的使用方法和相关数据的设置方法） （3）酸浸:刷洗后的玻璃制品酸浸前须适当晾干或烘干，以免造成酸浸液稀释，影响效果。将玻璃制品完全浸泡入清洁液中24h。清洁液具有极强酸蚀作

用，操作过程需戴防护用具。 （镜头三：带好橡胶手套将清洁液加入到盆中，让后进行酸浸，并以字幕的形式显示浸泡时间） （4）冲洗、烘干备用:浸酸后的玻璃器皿先用自来水充分冲洗，吸管需冲洗10min，器皿需每瓶灌满自来水、倒掉反复10次以上，不留任何酸浸液残迹，然后用蒸馏水漂洗2～3次 将清洗好的玻璃器皿放入烘干箱中，烘干后的玻璃器皿要求干净透明，无油烟，不能残留任何有害物质及化学药品等。 （镜头四：自来水冲洗，蒸馏水清洗，烘干一起完成，在这个过程中可在装器皿的盘中放入一定量的玻璃器皿，只对其中一种进行自来水冲洗、蒸馏水清洗，洗好后就将所有仪器放入烘干箱中烘干，并在每一个步骤中以字幕或语音的形式显示相关操作次数和时间） （5）包装灭菌:器材经清洗烤干或晾干后，先应严格包装，然后再行消毒灭菌处理，以防止消毒灭菌后再次遭受污染。包装材料常用包装纸、牛皮纸、硫酸纸、棉布、铝饭盒、玻璃或金属制吸管筒、纸绳等。 （镜头五：实验人员对实验器皿中的1—2种进行包装示范，然后将其他包装过的器皿一起放入高压蒸汽灭菌锅中进行灭菌） （实验人员必须示范操作高压灭菌锅和恒温干燥箱的用法，示范操作步骤，只示范一次即可，在下面的不同灭菌温度和不同灭菌时间可以字幕的形式显示）2、橡胶制品清洗消毒 种类：玻璃瓶橡胶塞、培养瓶瓶塞、皮管、滴管头 新的橡胶制品洗涤方法：0.5mol/L NaOH煮沸15分钟，流水冲洗，0.5mol/L HCl煮沸15分钟，流水冲洗，自来水煮沸2次，蒸馏水煮沸20分钟，50℃烤干备

原代细胞培养和传代培养的方法及其注意事项

初代培养 原理 将动物机体的各种组织从机体中取出，经各种酶（常用胰蛋白酶）、螯合剂（常用EDTA）或机械方法处理，分散成单细胞，置合适的培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖，这一过程称原代培养。 仪器、材料及试剂 仪器：培养箱（调整至37℃），培养瓶、青霉素瓶、小玻璃漏斗、平皿、吸管、移液管、纱布、手术器械、血球计数板、离心机、水浴箱（37℃） 材料：动物组织块 试剂：1640培养基（含20%小牛血清），0.25%胰酶，Hank′s液，碘酒 初代消化培养法 1. 准备：取各种已消毒的培养用品置于净化台面，紫外线消毒20分钟。开始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。 2. 布局：点燃酒精灯，安装吸管帽。 3. 处理组织：把组织块置于烧杯中，用Hanks液漂洗2~3次，去除血污；如怀疑组织可能污染，可先置于含有青链霉素的混合液中30~60分钟。 4. 剪切：用眼科剪把组织切成2~3毫米大小的块，以便于消化。加入比组织块总量多30~50倍的胰蛋白酶液，然后一并倒入三角烧瓶中，结扎瓶口或塞以胶塞。 5. 消化：或用恒温水浴，或置于37℃温箱消化均可，消化中每隔20分钟应摇动一次，如用电磁恒温搅拌器消化更好。消化时间依组织块的大小和组织的硬度而定。 6. 分离：在消化过程中见消化液发混浊时，可用吸管吸出少许消化液在镜下观察，如组织已分散成细胞团或单个细胞，立即终止消化，随即通过适宜不锈钢筛，滤掉尚未充分消化开的组织块。低速 （500~1000转/分）离心消化液5分钟，吸出上清，加入适量含有血清的培养液。 7. 计数：用计数板计数，如细胞悬液细胞密度过大，再补加培养液调整后，分装入培养瓶中。对大多数细胞来说，pH要求在7.2~7.4范围，培养液呈微红色，如颜色偏黄，说明液体变酸，可用NaHCO3调整。 8. 培养：置于36.5℃温箱培养，如用CO2温箱培养，瓶口需用纱布棉塞或螺旋帽堵塞，纱布塞易生霉菌，每次换液时需要换新塞。 初代组织块培养法 1. 剪切：把组织小块置于小烧杯或青霉素小瓶中，用Hanks液漂洗二三次以去掉表面血污，吸静Hanks液，用眼科剪反复剪切1mm3块为止。 2. 摆布：用弯头吸管吸取若干小块，置于培养瓶中，用吸管弯头把组织小块摆布在培养瓶底部，小块相互距离以0.5cm为宜，每一25ml培养瓶底可摆布20~30块。 3. 轻轻翻转培养瓶，另瓶底向上，注意翻瓶时勿另组织小块流动，塞好瓶塞，置36.5℃温箱培养2小时左右（勿超过4小时），使小块微干涸。 4. 培养：从微箱中取出培养瓶，开塞，46度斜持培养瓶，箱瓶底脚部轻轻注入培养液少许，然后缓缓再把培养瓶翻转过来，让培养液慢慢覆盖附于瓶地上的组织小块。置温箱中静止培养。待细胞从组织块游出数量增多后。再补加培养液。

养蜂学知识点(植保)

一、绪论 1、蜜蜂属中的蜜蜂有3个方面的生物学特性：社会性生活；泌蜡筑造双面具有六角形巢房的巢脾；采蜜贮蜜积极 2、标志现代养蜂学开始的三大技术：蜂箱(美国)，巢础(德国)，摇蜜机(奥地利) 3、中国养蜂优势：养蜂历史悠久；养蜂资源丰富 中国养蜂不足：①养蜂者老龄化，文化素质较低，影响新技术推广；②人均饲养蜂群数量少； ③单位面积蜂群数量少 4、影响我国养蜂业发展的因素：①蜂产品质量不稳；②过度依赖国外；③宣传不够：养蜂目的，蜂产品用途，蜂产品感官鉴定；④养蜂产业化程度低；⑤国家引导及管理问题；⑥蜂产品中几个混淆问题 5、我国养蜂业发展方向：①提高蜂产品质量；②回归走生产成熟蜂蜜之路；③进行规模化饲养，提高机械化水平；④加强蜜蜂授粉宣传与推广工作；⑤加强蜂病的无污染防治、研究工作 6、蜂蜜检测：蜂蜜中花粉粒检测 7、发展养蜂业意义： ①大幅度提高农作物的产量和品质； ②维持生态平衡； ③提供营养丰富的蜂产品： 蜂王浆：延年益寿的作用；加快参与新陈代谢 蜂蜜：含有葡萄糖和果糖（主要成分），能被人体直接吸收；含有大量酶类、维生素、微量元素、有机酸等，营养丰富；含有的矿物质与人体血液内矿物质成分相似；有抗菌性，对牙有保护作用 蜂毒：治疗风湿性关节炎 ④农民增收致富的一条途径 ⑤控制植物虫害 ⑥蜜蜂是有效的环境监测生物指示器 ⑦蜜蜂是一种理想模式生物 二、养蜂资源 1、蜜蜂种类：东方蜜蜂，西方蜜蜂，大蜜蜂，小蜜蜂，黑大蜜蜂，黑小蜜蜂，沙巴蜜蜂，绿努蜂，苏拉威西蜂 2、中蜂、意蜂区别 ①中蜂更早出晚归，中蜂中午有一段时间采集低峰 ②当气温低于14℃时，意蜂不能外出进行采集；在8℃~9℃时，中蜂仍外出采蜜；11℃时，意蜂翅僵，7℃，足僵 ③中蜂善于采集零星分散的花源，西方蜂善于利用大面积的花源；中蜂消耗蜂蜜量更少 ④相对于西方蜜蜂，中蜂更易谜巢、盗蜂 ⑤当蜂群无蜂王时，西方蜜蜂有5~24%工蜂卵巢得到充分发育，并在失王6~30天才开始产卵；东方蜜蜂在失王2~3天后，工蜂就开始产卵，有72%工蜂卵巢得到发育，产卵后不易接受新蜂王

适合中蜂继箱饲养的技术方法

适合中蜂继箱饲养的技术方法 中蜂双王继箱饲养可以采用中蜂十框标准箱。方法是用闸板将箱内一分为二成2个室，每室养1群，巢门分别开设在箱前向。平时 平箱饲养双王群，流蜜期叠加浅继箱取蜜。采用FWF型中蜂箱双王 继箱饲养，方法是用闸板(或框式隔王板)将箱内一分为二成2个室，每室各养1群，巢门分别开设在箱前向，或1个设在箱前向，1个 设在箱侧向。这种蜂箱其巢框(内围尺寸宽为300mm，高为175mm)大 小只有朗氏框的1/2，每个箱体容纳12个巢框，当底箱满箱时，就 要像意蜂上继箱那样，用继箱扩大蜂巢，将子脾调上继箱，并根据 需要上、下调整巢脾，进行继箱饲养。流蜜期，用继箱取蜜，或同 时也可采用2块框式隔王板将2群的蜂王分别限制在底箱侧向1～2 框范围内产卵，底箱内中央也供贮蜜，或用囚王笼将1只王扣起来，用1块框式隔王板将另1只蜂王限制在底箱一侧1～2框范围内产卵 繁殖，底箱内其他部分供贮蜜。 1、过箱条件：应在外界有蜜粉源并且气温稳定在15℃以上时进行，不宜在阴雨天及大风天进行。蜂群应选择强群且过箱蜂数达三、四框以上为宜。此外，还应备好过箱用具。 4、过箱后的管理：首先要缩小蜂箱巢门，观察工蜂活动情况， 若在第二天工蜂能积极进行采集和清巢，并携带花粉团回巢，表示 蜂群已恢复正常;其次，在三四天后对蜂巢进行整顿，粘牢的可以除 去绑线，若发现失王，要选留1～2个好王台或诱入一只蜂王;最后，经过一段时间的饲养，若蜂群强壮，且又正当流蜜时期，应及时加 础造脾，以更新蜂巢，促进蜂群繁殖。 l、组织双群同箱饲养 中蜂弱群的繁殖能力较差，很难在大流蜜期时达到强群的群势。在蜂场的分蜂季节里，经常可以用蜂笼收捕到一些中等群势的蜜蜂。这时就可以组织双群同箱饲养了。方法如下;用蜂笼收捕到蜂群时，

细胞传代培养的原理及操作步骤,细胞冻存,细胞复苏

细胞传代培养的原理及操作步骤 （一）原理：细胞在培养瓶长成致密单层后，已基本上饱和，为使细胞能继续生长，同时也将细胞数量扩大，须进行传代再培养。传代培养也是一种将细胞种保存下去的方法。同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。悬浮型细胞直接分瓶就可以，而贴壁细胞需经消化后才能分瓶。 （二）细胞传代培养具体操作 1、细胞：贴壁细胞株 2、操作步骤 1）将长满细胞的培养瓶中原来的培养液弃去。 2)加入0.5-1ml 0.25％胰酶溶液，使瓶底细胞都浸入溶液中。 3)瓶口塞好橡皮塞，放在倒置镜下观察细胞。随着时间的推移，原贴壁的细胞逐渐趋于圆形，在还未漂起时将胰酶弃去，加入10ml培养液终止消化。 观察消化也可以用肉眼，当见到瓶底发白并出现细针孔空隙时终止消化。一般室温消化时间约为1-3分钟。 4)用吸管将贴壁的细胞吹打成悬液，分到另外两到三瓶中，实践培养液塞好橡皮塞，置37℃下继续培养。第二天观察贴壁生长情况。 细胞冻存 1. 实验前准备：细胞室及工作台紫外线照射15min；培养液、PBS、胰酶、小牛血清、DMSO、恒温水 浴箱37℃预热备用；收集对数生长期细胞，在冻存前一天最好换液 2．用吸管吸出培养瓶中的细胞培养液，PBS清洗2遍吸出冲洗液，加入适量胰蛋白酶消化。 3. 适时去掉胰蛋白酶，加入少量新培养液。吸管吸取培养液吹打瓶壁上的细胞，使其成为均匀分散的 细胞悬液。 4. 用吸管将培养液加入冻存管中，离心(1000r/min，10分钟)。 5. 去上清液，加入与细胞悬液等量的冻存液，用吸管轻轻吹打使细胞均匀 6. 冷存管置于4℃10分钟----20℃30分钟----80℃16～18小时(或隔夜)---液氮槽vaporphase长期储 存。-20℃不可超过1h，以防止胞内冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃冰箱中，惟存活率稍微降低一些。 7．记录每一个冷冻管的位置以确保在以后应用时能够找到每一个冷冻管。 细胞复苏 1.室内紫外消毒；培养基、PBS于37℃恒温水浴预热备用。 2.自液氮罐中取出冷冻管，立即放入37℃水槽中快速解冻，离心。 3.去上清，加入培养基，吹打，然后移入培养瓶中，用培养基清洗冻存管，清洗液也移入培养瓶中。 4.于培养瓶中加入适量培养基，放入CO2培养箱中培养 5.记录复苏日期；次日换液。

细胞培养集锦一个培养300多种细胞人的经验总结

细胞培养集锦(一个培养300多种细胞人的经验总结) 一、消化与吹打 版上很多朋友讨论细胞培养问题，见到很多很好的经验总结，这里说一些我个人的经验，因为一些比较特殊的原因，我自己培养接触过近300种细胞，常用于做实验的，累积有百余种，可以说遇到过许多各式各样古怪的细胞。这里挑细胞消化开始做我的第一篇专题，并不是因为细胞消化最重要，而是近期看到大家频繁讨论这个话题，我就抛砖引玉，下面几点拙见，可能与其它朋友总结的一些经验有点出入，仅供大家参考。 许多同学对细胞消化做了许多研究，得出了很多有价值的经验，也见到很多人的困惑。其实细胞培养，尤其是细胞系的培养，就消化而言，不是太难，做得多了，善于总结经验，就能把细胞越养越好。一般的程序步骤，细节操作，我这里就不讲了，只讲一些基本操作背后的知识，如果不对之处，欢迎指正，一起讨论： 1，其实绝大部分细胞消化的时候是只要用胰酶润洗一遍即可，吸去胰酶后，残留的那些无法计算体积的附着在细胞表面的微量胰酶在37度一般不到2min足够消化细胞（绝大部分1min不到）。对于这些细胞原则上不要用胰酶孵育细胞，连续这样传代，对细胞伤害很大。简单的程序是PBS润洗吸去，胰酶润洗吸去，然后37度消化。 2，什么算是消化好了呢？不是细胞全部成间隔分布很离散的单个圆形才算消化好了，一般你肉眼观察贴壁细胞层，只要能移动了，多半呈沙壮移动，其实已经可以了，很多人喜欢把细胞消化或者吹打成完全分离细胞，这是没有必要的。一般能移动了，说明细胞与培养基质材料的附着已经消失了，细胞之间的附着也已经消失了，细胞已经独立分布了（虽然没有呈现很广的离散分布）。这个时候应该停止消化，不要等到看到镜下所有细胞都分离得非常好，间隙很大，才停止。细胞就是完全成单个细胞悬液，之后在贴壁的过程中仍然会聚集，这个是贴壁培养的细胞，尤其是肿瘤细胞的一个特性，无论死活的细胞都是如此，你可

中蜂过箱技术要点

中蜂过箱技术要点 在我省山区，有很多农户有饲养蜜蜂的习惯，但有相当部分是用旧法养蜂，把蜜蜂养在树筒、竹笼或没有巢框的木箱中，不能对蜂群进行科学的管理，是一种让蜜蜂自生灭的饲养方法，产量低，效益差。过箱是把养在不能开箱检 查的蜂箱或蜂桶、蜂笼中的蜜蜂，用人工的方法，转移到活框式的蜂箱中，这种方法就叫过箱。过箱后的蜂群，养蜂者就能随时开箱，抽出巢脾进行检查，并对蜂群出现的不同情况，采取必要的处理措施。此外，蜜蜂生活在没有巢框的旧式蜂箱中，巢脾不能移动，在收蜜时，只能毁脾取蜜，巢脾不能重复使用，这样，每收一次蜜，蜜蜂就要重造一次巢。因此，每个花期，只能收一次蜜，产量低。加上毁脾灭子，严重阻碍了蜂群的发展。过箱后，由于使用活框式的巢框，巢脾可随意取出，收蜜时可重复使用，一个花期就可多次收蜜，产量高。且收蜜时，不损害巢脾上的蜂子，因此不影响蜂群的繁殖。过箱条件1.蜜粉源：由于过箱是一 种强迫蜜蜂迁移的方法，难免造成蜂巢内贮蜜的损失和对蜜蜂幼子的伤害。因此，为了过箱后能使蜂群情绪安定，群势能早日恢复，一定要在外界有较多的蜜粉源植物开花时，才能过箱。2 .气候条件：由于过箱时，要使蜂巢在蜂箱外暴露一段时间，气温太高或太低，都会使蜜蜂的幼子闷死 或冻死。因此，过箱应在气温为2 5?3 0C、晴朗无风的天气进

行，且要尽量缩短子脾在箱外暴露的时间，才不会造成蜂子闷死和冻死，也不会使蜜蜂情绪暴烈，容易螫人，使过箱能顺利进行。 3 .蜂群条件：要求蜜蜂群势过箱后 具有两足脾以上，脾上有较多低龄的蜜蜂幼虫，贮粉、贮蜜较足，无病虫害等。过箱工具蜜蜂过箱工具有：蜂箱、上了铁丝的巢框、割脾刀（可用水果刀、垫板（多块，其中一块与巢框内径长宽相同）、缚脾用的绳子（尼龙绳、麻皮等）、收蜂器、面网、喷烟器、装废弃巢脾的桶、毛巾和水盆等，还要一套开箱的工具。过箱方法过箱要求快速时间短、动作轻稳利索，最好能在20分钟内过箱完毕。为达到以上目的，过箱最好由三个人协同操作。过箱有三种方法：翻巢过箱、原巢过箱和借脾过箱。现将过箱方法介绍如下：（一）、翻巢过箱所谓翻巢过箱，就是将要 过箱的蜂巢翻转180。，使巢脾的下端向上，利用蜜蜂向上的特性，驱赶蜜蜂离脾，使蜜蜂进入收蜂笼或空蜂箱中，然后进行割脾过箱的方法。用这种方法，可避免巢脾断折，操作较为方便。对凡可翻转或底板和侧板可打开的箱或蜂桶等，都可用这个方法。 1.翻转巢箱：将巢箱搬离原地， 在原地放一个空箱，用于收集飞回巢的蜜蜂。把巢箱底部清扫干净，然后翻转18 0。，放在平地或另一个空蜂上。如果原巢离地较远，可逐日下降到过箱后放置蜂箱的位置，再 过箱。 2 .驱蜂离脾：打开诱捕箱的底板或蜂桶无巢门

细胞培养操作步骤

培养基的配置：基础培养基500ml+胎牛血清50ml+双抗5ml 冻存液的配置：DMS018ml+胎牛血清2ml。 依次比例酌量配置。 超净工作台常规配置 移液器1套（2.5小20 d、200 pl> 1ml）,酒精灯1盏，液器1台，斜架1台， 酒精喷壶 1 个，酒精棉球缸 1 个，污缸 1 个， 常规耗材：培养瓶（50 cm 2）,定量移液管（5ml、10ml）,枪头（1ml、200小 10 d）,培养皿，6/24/48/96孔板，医用脱脂棉球，保种管 所需试剂：gibco高糖培养基，胎牛血清，双抗，DMSO,胰酶，苯扎溴氨，75% 酒精…… 实验前准备： 所需的各项高压后的耗材放于超净工作台内，用酒精喷壶喷洒实验台面，并关闭工作台打开紫外灯照射30min 后开始实验操作。 首次传代前细胞的复苏，首先用一大烧杯盛满37C的温水放于液氮罐旁边，待 细胞株取出后留上端1/3于37C水面上尽最大速摇动管使其在2min内迅速融化。若 种管顶部含有冻存的细胞液在摇动期间用力甩动使其降于管底后再摇动。这一过程可在超净工作台外操作。 实验步骤 一、原代细胞的培养 1. 紫外消毒30min 后关闭紫外灯，开启超净台正常工作状态，用酒精消毒操作者的 双手。 2. 将所需的培养基确保瓶身干净后放于工作台面内，点燃酒精灯，将培养基瓶口用酒 精棉球擦拭后，再将瓶口对准在酒精灯上消毒2-3 次，旋开瓶盖后再次分别消毒瓶口和瓶盖，分别放于酒精灯的两侧。特别是将培养基瓶放于斜架上，瓶口对准酒精灯，且放在距离酒精灯最近的位置，瓶盖置于酒精灯的另一侧。 3. 取1 个高压后的新培养瓶，瓶口在酒精灯上消毒2-3 次，旋开后分别再次消毒瓶 口和瓶盖2-3 次分别放于酒精灯两侧，把保种管在超净台外用酒精棉球擦拭下2/3 后拿进超净台内在酒精灯上消毒保种管口2-3次放于台面左手边，取1ml 移液器快速移动在酒精灯上消毒1-2 次，然后再装上枪头吸取保种管内的细胞液，悬空移入培养瓶内。 4. 拿出1 支高压后的5ml 定量移液管，在酒精灯上灼烧尾部后装于电动移液器上， 再次放于酒精灯上灼烧整个定量移液管管身2-3 次，悬空进入培养基瓶内吸取4ml 培养基再悬空移入培养瓶内，将培养瓶瓶口和瓶盖在酒精灯上消毒2-3 次后拧紧平放，在瓶身做好实验标记。 5. 将培养基瓶口和瓶盖消毒2-3 次后拧紧，熄灭酒精灯，整理实验台面，取出实验试 剂及污缸等，关闭超净工作台。 6?将培养瓶放于28C,5%CO2的培养箱内培养，旋开瓶口少许。注意整个培养箱底托盘内一定要放高压后的水，且定期更换确保无菌。 在CO2培养箱内培养10-12h，瓶盖拧紧后拿出培养箱，置于荧光倒置显微镜下观察细胞贴壁情况，及细胞形态。最后更换培养液。 、培养液的更换

细胞培养基的基本知识

培养细胞的完全培养基由基础培养基（如MEM）和添加剂（如血清或无血清培养用的某些确定的激素及生长因子）组成，培养基的配方一直在改进，其中包括抗生素和抗有丝分裂剂等等。 一、基础培养基 绝大多数培养基是建立在平衡盐溶液(BSS)基础上，添加了氨基酸、维生素和其它与血清中浓度相似的营养物质。最广泛应用的培养基是Eearle`s MEM 的混合物，其中含有13种必须氨基酸、8种维生素。而Ham`s F12 也包括非必须氨基酸，维生素的范围亦很广，另外常规含有无机盐和代谢添加剂（例如核苷酸）。MEM/F12 这两种培养基各取 1/2，形成神经生物学最通用的培养基。Dulbecco`s改良培养基——DMEM，现应用于快速生长的细胞，同MEM含有相同的营养成分，但浓度高出2~4倍。选择某种培养基，应仔细了解成分表，应知道大多数情形下培养基都有不足。例如，有些培养基在氨基酸中包括有谷氨酸，而这种培养基虽广泛用于神经生物学领域，但它对某些对谷氨酸敏感的可能有细胞外毒性损伤的神经元而言，则并非最佳选择，特别是如果神经元生长在缺乏胶质的环境中时。F12中含有硫酸亚铁，据报道也有神经毒效应。 在所有这些培养基中，谷氨酸比其他氨基酸有更高的浓度，这是因为它具有不稳定性以及在许多细胞培养中它常用作碳源。对于神经元的培养常常在基础培养基中增加葡萄糖的含量到0.6%或者加入丙酮酸（若培养基中这两种物质缺乏时）。MEM与F12均要用5%的CO2来平衡，DMEM 含更高浓度的NaCO3，要用10%的CO2来平衡，当然也可以在较低CO2浓度下使用。这些基础培养基的组成成分是建立在对不同细胞系生长的研究之上的，但通常在原代培养中使用也能有比较令人满意的结果。 原则上，HEPES作为缓冲剂可用来代替碳酸氢盐，以解除需要高浓度CO2培养环境的限制。实际操作中并非如此简单。显然，溶解的CO2与碳酸氢盐对良好的细胞生长是重要的。Leiboviz`s L15培养基可用来在大气环境中令神经细胞生长，该培养基采用了与众不同的BSS作基础，它含有高浓度的氨基酸来提高缓冲能力，培养基中使用半乳糖作碳源，以阻止培养基中乳酸形成，少量溶解的CO2由丙酮酸代谢产生。这一培养基的优点是明显的，特别是在保持较高CO2有困难时，例如在长时间的显微操作及生理学研究中。L15培养基已用来成功的培养了外周神经元，但尚未在CNS神经元的发育研究中全面检测过。

细胞培养基本操作

细胞复苏是将休眠的细胞重新活化，使之重新生长，进入细胞周期，进而分裂产生子细 胞的过程。细胞复苏后，可进入细胞周期，重新获得细胞类型特异的生物学功能。 一、实验前准备 实验开始前，水浴箱调节至36度恒温。取细胞完全培养基，放于水浴箱中预热。 消毒双手和超净台。取约1ml 细胞完全培养基放于15ml 离心管中。 水浴箱调节至40度恒温，由液氮中取出冻存的细胞，迅速将冻存管投入到已经预热到40度的水浴锅中迅速解冻，并要不断的摇动，使管中的液体迅速融化，注意管口处高于水面，以免进入导致污染。整个解冻过程最好在1分钟以内，以防融化过程中产生大量冰晶损伤细胞，约1min后冻存管内液体完全溶解，用酒精喷拭冻存管的外壁，立即拿入超净台内。 注：解冻到0度时（即冻存管里还有最后一点冰）立刻转移到含培养基的离心管中。然后用5ml的热培养基以0.5ml的加入量逐步将细胞内的DMSO渗透出来，之后补全生于的培养基到细胞瓶中。 二、制备细胞悬液 吸取细胞冻存液，置于已放入细胞完全培养基的离心管中，吸取1ml培养液加入冻存管，将剩余细胞全部吸入离心管中。上下吹打5次，使冻存液与完全培养基充分混匀，尽量减少冻存液中DMSO 的浓度，减轻细胞损伤。 离心：1000rpm，室温离心3min。 注：细胞复苏后最好等几分钟再离心，因为冻存前加了胰酶消化，对细胞造成一定损伤，复苏后立即离心对细胞造成损伤较大。 三、细胞培养 离心后，倒掉上清液，缓慢操作，不要倒掉底部的细胞沉淀。向离心管内的细胞沉淀加入1ml 细胞完全培养基，反复吹打制成细胞悬液。培养瓶内加入4ml 完全培养基，细胞悬液加入培养瓶内，左右前后轻轻摇动培养瓶，把细胞摇均匀，将培养瓶放入37℃，5％CO2 的培养箱中培养。24-48 小时后换液或传代继续培养，换液传代的时间由细胞情况而定。 四、注意事项 1、解冻速度要快 在常温下，冻存液中的DMSO 对细胞的毒副作较大，因此，必须在一到两分钟内使冻 存液完全融化。如果复苏温度太慢，会造成细胞的损伤。 2、一次复苏细胞不宜过多 细胞在解冻时，需要迅速将冻存管投入到已经预热的水浴锅中迅速解冻，并要不断的摇动，使管中的液体迅速融化。并且一次复苏细胞过多，容易忘记更换吸头和吸管，导致细胞交叉污染。 3、培养瓶上注明细胞类型，日期，人名。

细胞传代培养标准操作规程

细胞传代培养（消化法）标准操作规程 一、原理 细胞在培养瓶长成致密单层后，已基本上饱和，为使细胞能继续生长，同时也将细胞数量扩大，就必须进行传代（再培养）。 传代培养也是一种将细胞种保存下去的方法。同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。悬浮型细胞直接分瓶就可以，而贴壁细胞需经消化后才能分瓶。 二、材料和试剂 1. 无菌磷酸生理缓冲液(PBS) 2. 胰酶-EDTA溶液(0.05%胰酶-0.53mM EDTA-4Na): 以10ml分装于15 ml无菌离心管中，保存于–20℃，使用前放在37℃水槽回温。 3. 新鲜培养基 4. 无菌吸管/离心管/培养瓶 三、操作步骤 1. 传代前准备 （1）预热培养用液：把已经配制好的装有培养液、PBS液和胰蛋白酶的瓶子放入37℃水浴锅内预热。 （2）用75％酒精擦拭经过紫外线照射的超净工作台和双手。 （3）正确摆放使用的器械：保证足够的操作空间，不仅便于操作而且可减少污染。 （4）点燃酒精灯：注意火焰不能太小。 （5）准备好将要使用的消毒后的空培养瓶。 （6）取出预热好的培养用液，用酒精棉球擦拭好后方能放入超净台内。 （7）从培养箱内取出细胞：注意取出细胞时要旋紧瓶盖，用酒精棉球擦拭显微镜的台面，再在镜下观察细胞。 （8）打开瓶口：将各瓶口一一打开，同时要在酒精灯上烧口消毒。 2. 胰蛋白酶消化 （1）加入消化液：小心吸出旧培养液，用PBS清洗（冲洗），加入适量消化液（胰蛋白酶液），注意消化液的量以盖住细胞最好，最佳消化温度是37℃。

（2）显微镜下观察细胞：倒置显微镜下观察消化细胞，若胞质回缩，细胞之间不再连接成片，表明此时细胞消化适度。 （3）吸弃消化液加入培养液：弃去胰蛋白酶液，注意更换吸管，加入新鲜的培养液。 3. 吹打分散细胞 （1）吹打制悬：用滴管将已经消化细胞吹打成细胞悬液。 （2）吸细胞悬液入离心管：将细胞悬液吸入10ml离心管中。 （3）平衡离心：平衡后将离心管放入台式离心机中，以1000转/分钟离心6-8 分钟。 （4）弃上清液，加入新培养液：弃去上清液，加入2ml培养液，用滴管轻轻吹打细胞制成细胞悬液。 4. 分装稀释细胞 （1）显微镜下观察细胞：倒置显微镜下观察细胞量，必要是计数。注意密度过小会影响传代细胞的生长，传代细胞的密度应该不低于5×105/ml。最后要做好标记。 （2）分装：将细胞悬液吸出分装至2～3个培养瓶中，加入适量培养基旋紧瓶盖。（3）继续培养：用酒精棉球擦拭培养瓶，适当旋松瓶盖，放入CO2培养箱中继续培养。传代细胞2小时后开始贴附在瓶壁上。 5. 悬浮型细胞的传代 （1）吸出细胞培养液，放入离心管中，离心1000 rpm 5 分钟。 （2）吸掉上清液，加入适量之新鲜培养基，混和均匀后，依稀释比例转移至新的培养瓶中，以正常培养条件培养。 注意事项： 1.严格的无菌操作。 2.适度消化：消化的时间受消化液的种类、配制时间、加入培养瓶中的量等诸多因素的影响，消化过程中应该注意培养细胞形态的变化，一旦胞质回缩，连接变松散，或有成片浮起的迹象就要立即终止消化。

细胞培养的注意事项

相关疾病： 每天对待细胞比孝敬爹妈还用心，那真是捧在手里怕碎了，含在嘴里怕化了，看在眼里怕丢了，培养细胞时有哪些惨痛经验教训可以分享呢? 早走早脱身，从此专注黑生物 1. 严格无菌操作，多喷喷酒精，要是对灭菌的东西不放心，自己包自己送自己烘干。 2. 不要和别人共用试剂耗材，自己准备一套。 3. 有可能的话在拿到新细胞的时候做好支原体衣原体检测。 4. 水浴锅很脏，生化培养箱要是得手动加湿的话盘里的水也会很脏，勤换(灭菌水加进去)。 5. 晚上离开的时候最好给细胞房照紫外，超净台是用完就开。 6. 最好的是同一时间就你一个人在用细胞房在养细胞。 非科班出身经验分享 1. 别怕浪费。枪头什么的只要有可能污染就换，如果用酒精灯就什么都稍微烤一下，别直接放到火上，离一段距离。 2. 动作要既轻柔又有力。动作太重会有一堆一堆的气泡，动作太轻就吹不下来... 刚开始的时候吹细胞太痛苦了，稍微一下就起泡。后来就是吹的时候枪里的培养基不要一次全都压出来，留一点，枪的最头部尽量深的在液面以下。 3. 离开过操作台的东西再进操作台之前一定要用酒精喷一遍，包括一切实验耗材、仪器、以及你带着手套的手。 4. 实验结束后对实验台的消毒。紫外什么的，用前用后都照个30 分钟。 5. 身体的各个部分尽量的少接触不需要接触的地方的地方。比如实验台，又比如培养箱内部。 6. 细胞的密度根据细胞的性质、传代的时间以及自己的心情来定。培养基的话最多最多不要超过2 天就要换一次。细胞可以不传代，但是培养基是一定要换的。 大概就是，不该碰的地方不碰，有影响的地方少碰; 该使劲的时候绝对不含糊，不该使劲的地方一定忍住。如果是比较简陋的操作台就一定要摆个酒精灯，所有操作紧密围绕在酒精灯周围进行。如果是高级台子就多用酒精喷喷。感觉生物的实验，心疼钱就还是不要做了。 最后一点点绝对非科班的经验。癌细胞真是坚挺。有一次实在是不想传了，放了 5 天

细胞培养的流程

细胞培养的流程，从购买试剂、分装，到无菌操作、实验、观察的过程？ 对于新手来说，细胞培养真是太难了，很多的细节你不可能一下子就考虑到、预见到，因此请教细胞培养的高手就显得非常重要且可贵了。 细胞培养包括仪器的清洗、消毒灭菌，试剂的购买、配制、分装，细胞的分离，无菌操作，培养细胞的观察，实验的设计，及结果的分析等等。但这每一个过程的含金量都很高，要求非常严格。 如果你正在培养细胞，或曾经培养过细胞，你一定有很多的经验值得大家分享，你一定有你自己的一套培养细胞的流程，从哪开始到哪结束你也一定有太多的想说。因此，你不妨说说你的细胞培养流程，以便我们广大的细胞培养新借以一鉴。 于此，我先代表广大细胞培养新手谢谢各位园丁里的奉献者！ 有空整理一下再写写。。呵呵谢了先版主建议不错，我刚开始养细胞时遇到的各种困难可以说是不计其数了，解决困难耗费了大量地时间，可惜呀！ 养细胞是一项即有难度又很讲究技术的过程，作起来不易，要真正详细的写出来示人更难！书上的规范和标准很多，但作起来每人都有自己的方法，适宜就好。 我看还没有人跟帖，我就先说一点，从最初阶段开始：（自己的做法） （一）仪器的清洗 总的分为两大类：可泡酸的和不可泡酸消毒的。酸指消毒的清洁液（由浓硫酸、重铬酸钾和蒸馏水配置的次强酸液） 可泡酸的主要是玻璃仪器培养细胞的板子，离心管等塑料器皿。消毒过程：自来水冲洗3-5遍----→超声波清洗30′----→烘干----→濅入清洁液过夜（不少于6h）----→自来水冲洗15－20遍----→蒸馏水洗3-5遍，烘干备用。 不可泡酸的主要是胶塞和盖子，虑器等，先在清水中濅泡后冲洗烘干----→2%NaOH濅泡过夜，自来水冲洗，5%HCl濅泡三○min，流水冲洗----→蒸馏水漂洗----→烘干备用。 消毒好的器具一定找个干净的柜子保存，使用前高压消毒灭菌，我科室主要使用铝制饭盒分装器具，挺方便的，用前高压。 今天暂说一点，以后有机会再续，望给师弟妹们有所借鉴。斑竹不厚道，现在知道为什么没有别的战士跟贴了么？我怎么也耗了几十分钟打的字，你就这样打击别人的信心，还有可能往后面延续么！再说，经验何止这些这点...... 您的帖子我看见了，您的抱怨我也接受！并且跟您补上一分！ 每个斑竹给分的标准有一定的差别，但是可以肯定的是：我们有自己的加分原则，大原则是不变的！比如：版内讨论得很多的东西，重复发帖一般不予以加分！ 您的这个帖子属于改范畴！ 感谢您对细胞版的支持！如果有问题可以直接pm我们！ 再次感谢！再多说点啊！ 呵呵接着说呀，很好，很有帮助，我是新手，要多向你学习顶一下。我也说说我的一些体会吧。 1、首先说清洗： 对于玻璃器皿（如移液管、盖玻片之类）可先用酸液浸泡24h以上，再用清水浸泡24h。之后用清水将移液管冲洗10遍，除去残留酸液，再用双蒸水冲洗3-5遍，彻底洗净后放入不锈钢筒中，双层牛皮纸扎口，高压灭菌20min，烘干待用。我们实验室的酸液一般是次强酸液（重铬酸钾120g 浓硫酸200 mL 蒸馏水1 000 mL）配液时要小心烫伤。装培养基的瓶子则要在每次用完培养基以后就要立即洗净，临用时再次用清水冲洗3-5遍，再用双蒸水漂洗3次，洗净后瓶口盖上锡箔纸，外包双层牛皮纸扎口后高压灭菌20min，与其配套的瓶盖则洗净后另行包好同时灭菌、烘干。培养基过滤器灭菌同瓶子，也要在用完后及时洗净、

养蜂基地管理手册

★★★蜂业有限公司 Q/ABC.M-20×× 养蜂基地管理手册 A 版 编制：年月日 审核：年月日 批准：年月日 受控状态：分发号： 20××-××-××发布 20××-××-××实施 ★★★蜂业有限公司

目录 一、备案基地管理制度 (1) 二、养蜂现场管理制度 (4) 三、养蜂用药管理制度 (6) 四、备案基地督察管理制度 (8) 五、备案基地溯源管理制度 (10) 六、蜂农培训管理制度 (11)

一、备案基地管理制度 为贯彻落实国家质检总局《关于对出口蜂产品养蜂基地实行检验检疫备案管理的通知》，加强出口蜂蜜源头管理，确保出口蜂蜜原料安全卫生，特制定本管理制度。 1 基本要求 (a) 公司成立拥有管理权的养蜂基地（即养蜂联合体或合作社），向出入境检验检疫局进行备案。 (b) 公司对养蜂基地内蜂农进行培训、指导、管理、监督和建档备案工作。 (c) 公司对蜂产品的安全卫生质量进行控制按照《出口蜂产品追溯规程》的规定，保证每批出口产品具有可追溯性。 2 蜂农参加公司养蜂基地必须符合以下条件： (a)遵纪守法、诚信，无不良记录； (b) 每户养蜂群数应大于60群； (c) 熟悉养蜂生产的有关规定和蜂病防治用药知识； (d) 熟悉国家禁用药物的规定和名称，并自觉遵守； (e) 每户（个）蜂农若加入本公司的基地备案，不得重复参加其他企业的基地备案。 3 公司对基地内蜂农建立档案和养蜂用药记录制度 3.1 公司建立养蜂基地蜂农台帐，包括蜂农数量、蜂蜜、蜂王浆年产量以及负责人资料。蜂农档案应包括如下内容：所在养蜂基地名称、养蜂户登记编号、姓名和身份证号、联系方式、养蜂历史、该养蜂户的人数和姓名、蜂群数、摇蜜机材质，蜂具卫生和转（定）地情况、参加培训记录等。

中蜂活框养殖的主要技术

中蜂活框养殖的主要技术 中蜂活框养殖应根据各地区差异及中蜂生物学特性 采取相应的饲养技术，这是养好中蜂达到高产的关键。现根据云南省的环境特点，将中蜂养殖的主要技术介绍如下，以供参考。 1、选择场地，合理排列蜂群。云南省内各地山区、半山区地理差异大，“－山皆四季，十里不同天”，所以应根据各地的特点选择合适的场地。一般应选择在阳光充足，正面开阔，蜂场上有稀疏灌木，夏天能遮荫，周围有杜鹃、油菜、南瓜、野藿香及野坝子等蜜、粉源丰富的地方。特别要做好蜂场周围的有毒蜜、粉源调查，以保证人、蜂安全。不要选择周围有糖厂或蜂产品加工车间等地方，以免蜜蜂盗糖引起大量死亡。蜂群排列对中蜂饲养很重要，箱位要力求散放，巢门朝不同方向，以免引起错投，发生起盗现象。 2、培育适龄采集蜂。山区、半山区由于－年中主要蜜源植物有差异，应根据具体情况培育适龄采集蜂。保证在流蜜时有大量的青壮年蜂参加采集，达到增产目的。在花期之前40天左右就必须用蜂蜜水（1∶1）饲喂，以刺激蜂王产卵培育适龄采集蜂。经过各山区推广及云南省农科院蚕桑蜜蜂研究所蜂场繁殖试验证明，增产效果明显。

3、采蜜繁殖两不误。花期开始，子脾已贮蜜。这时适时加础繁殖很重要。由于中蜂生物学习性，在外界缺蜜、粉季节蜂增殖不快，在蜜源流蜜季节蜂群繁殖快，所以应掌握该习性做好饲养管理工作。如果有蜜压子并已全部封盖，应及时取蜜。摇蜜时，应采用“早、勤、稳、留”四字取蜜法。 4、育王分蜂。中蜂易分蜂，不易维持大群，应掌握育王时间。应在流蜜前50~60天自然分蜂之前育出新王。在大流蜜前把有分蜂情绪的蜂群作培育群，然后选择能维持大群、性情温驯、盗性弱、采集力强、抗病力强的蜂群幼虫用育王框复式移虫，10天后组织交尾群，11天介绍王台，等蜂王交尾后形成新分群就换去老王。这样能使蜂群维持强群，减弱分蜂意念，到流蜜期开始，不论新分群或原群，经过繁殖就有大量采集蜂投入采蜜。 5、巢虫防治。巢虫是中蜂群中蛀食蜡质、花粉和蜂蜜，毁坏蜜蜂的虫、卵和蛹。蛹受损坏后，变成“白头蛹”，严重时蜂群飞逃，造成损失。防治巢虫一定保持蜂脾相称，饲养强群，提出老脾，保持新脾。防治巢虫最好的办法是把冬季抽出的脾用升华硫或升华硫加奈粉熏烟杀灭几次，到来年春繁加入便可。

细胞培养热点常识

细胞培养热点常识 如何选用特殊细胞系培养基？ 培养某一类型细胞没有固定的培养条件。在MEM中培养的细胞，很可能在DMEM或M199中同样很容易生长。总之，首选MEM 做粘附细胞培养、RPMI-1640做悬浮细胞培养是一个好的开始，各种目的无血清培养最好首选AIM V（12005）培养基（SFM）。 L-谷氨酰胺在细胞培养中重要吗？它在溶液中不稳定吗？ L-谷氨酰胺在细胞培养时是重要的。脱掉氨基后，L-谷氨酰胺可作为培养细胞的能量来源、参与蛋白质的合成和核酸代谢。L-谷氨酰胺在溶液中经过一段时间后会降解，但是确切的降解率一直没有最终定论。L-谷氨酰胺的降解导致氨的形成，而氨对于一些细胞具有毒性。 GlutaMAX-I是什么？培养细胞如何利用GlutaMAX-I？这个二肽有多稳定？ GlutaMAX-I 二肽是一个L-谷氨酰胺的衍生物，其不稳定的alpha-氨基用L-丙氨酸来保护。一种肽酶逐渐裂解二肽，释放L-谷氨酰胺供利用。

GlutaMAX-I二肽非常稳定，即使在121磅灭菌20分钟，GlutaMAX-I 二肽溶液有最小的降解，如果在相同条件下，L-谷氨酰胺几乎完全降解。 什么培养基中可以省去加酚红？ 酚红在培养基中被用来作为PH值的指示剂：中性时为红色，酸性时为黄色，碱性时为紫色。研究表明，酚红可以模拟固醇类激素的作用，（特别是雌激素）。为避免固醇类反应，培养细胞，尤其是哺乳类细胞时，用不加酚红的培养基。由于酚红干扰检测，一些研究人员在做流式细胞检测时，不使用加有酚红的培养基。 酚红在培养基中被用来作为PH值的指示剂：中性时为红色，酸性时为黄色，碱性时为紫色。研究表明，酚红可以模拟固醇类激素的作用，（特别是雌激素）。为避免固醇类反应，培养细胞，尤其是哺乳类细胞时，用不加酚红的培养基。由于酚红干扰检测，一些研究人员在做流式细胞检测时，不使用加有酚红的培养基。 如何用台盼兰计数活细胞？ 用无血清培养基把细胞悬液稀释到200～2000个/毫升，在0.1

细胞培养标准流程

精品文档 细胞间基本规定 每次操作结束后开启超净台紫外（30 min）和房间大紫外（30 min）。 显微镜开启使用后将光调暗，最后一个操作者将显微镜关闭。 超净台用完收拾干净，移液器、盒子等摆放整齐。 带走空盒子、细胞圆盘以及封口膜等任何因你而产生的垃圾。 细胞培养盘至少需备注：所属者，细胞系名称 细胞间冰箱内物品至少需备注：所属者，物品名称。基培需写上开启时间。 细胞培养标准流程 1、细胞换液、传代（以圆盘培养为例） Note：所有用于培养细胞的液体均需提取20-30分钟从冰箱取出恢复到室温或置于37℃的水浴箱内。所有物品（包括双手）进入安全柜之前要酒精消毒。 步骤：1.观察：高倍镜下观察细胞状态、密度以及是否染菌 2.弃旧：细胞生长融合达90%时，吸出培养基 3.漂洗：PBS（2mL）漂洗1-2次 4.消化：加入1ml 0.25%胰蛋白酶，轻轻晃动圆盘让所有细胞接触到胰酶，后吸去胰酶计时CO放置40s-1min,，轻轻拍打圆盘侧壁促使细胞2 脱壁。 5.终止：吸弃胰酶后加入2ml含10?S的完全培养基终止消化。 6.吹悬：轻轻吹打混匀，(倒置显微镜下观察细胞完全脱壁，呈卵圆形)，吹打成单细胞悬液后按1：2 或1：3 比例传代接种于新培养皿。再加入10ml全培。（大盘10ml全培，小盘6ml全培） （细胞生长快留30%，慢40%-50%；其余细胞可提取蛋白或RNA） 7.培养：每天或每两天更换一次培养基，直至细胞生长至融合时再次进行传代，每日在倒置显微镜下观察细胞形态及生长情况。 PS:六孔板一般加培养基2300μL/孔。 . 精品文档 2、细胞转染 TurboFect 转染试剂转染（用于质粒的转染，说明书附后） 细胞接板24 h 后转染。转染时细胞密度需达到70-90%。