平板划线法中几次灼烧接种环的目的
细菌接种技术
（一）平板划线接种法（又称分离培养法）平板划线接种法为最常用的分离培养细菌的方法，通过平板划线后，可使细菌分散生长，形成单个菌落，有利于从含有多种细菌的标本中分离出目的菌。平板分离划线的方法较多，其中以分区划线法与曲线划线法较为常用。其目的都要使细菌呈现单个菌落生长，便于同杂菌菌落鉴别。 现只介绍分区划线法。 1、右手持接种环，经火焰灭菌，待凉后，挑取大肠杆菌（或葡萄球菌）培养物少许。 2、左手斜持琼脂平板，皿盖留在桌上，于火焰近处将菌涂于琼脂平板上端，来回划线，涂成薄膜（约占平板总表面积的1/10），划线时接种环与平板表面成30~40o角，轻轻接触，以腕力在平板表面行轻快地滑移动作，接种环不应划破培养基表面。 3、烧灼接种环，杀灭环上残留细菌，待冷（是否冷却，可先在培养基边缘处试触，若琼脂溶化，表示未凉，稍等再试），从薄膜处取菌作连续平行划线，约占平板表面1/5左右，再次烧灼接种环，等三次平行划线……以同样方法作第四次，第五次划线，将平板表面划完。 4、划线完毕，盖上平皿盖，底面向上，用标签或腊笔注明菌名检验号码，接种者信息等，置37℃孵育培养24小时后观察结果。 （二）纯培养细菌接种法（斜面培养基接种法：用于培养，保存菌种及其它实验用） 1、取一支斜面培养基及一支纯菌种管，并排倾斜放在左手四指中拇指压住并以手掌支住两试管底部。右手将白金环于火焰上灭菌、冷却。并拔起两试管的棉塞。（勿放置桌上，如棉塞太紧时应预先松动）。 2、试管口部于火焰上往返通过2~3次灭菌，将灭菌白金环伸入有菌试管中，取少量细菌（一般应从斜面底部沾取），然后小心移至准备接种的试管中。 3、接种方法是自管底向上连续平划线，若以保存菌为目的时可自管底上划一粗直线即可。 4、取出接种环，将试管上部再经火焰灭菌，塞好棉塞，接种环灭菌后放回原处。 5、若自平皿培养物中取菌时，只应沾取一个单个菌落。 6、接种菌应作好标记，标明菌种名称，日期等，置37℃温箱中培养，次日观察结果。液体培养基接种法：用于增菌及鉴定细菌生长特点，如表面生长，沉淀生长，均匀混浊生长等。操作技术基本与上法相同，只是接种时应将沾菌之接种环沿接近液体表面之管内壁轻轻摩擦（勿用力振荡）使细菌混入培养基内，置37℃温箱中培养，次日观察结果。 （三）半固体培养基穿刺培养法用于保存菌种及间接观察细菌之动力（无动力之细菌仅沿穿刺线生长，清晰可见；有动力的细菌使培养基呈现混浊样，穿刺线甚至难以看出）。用无菌操作技术，灭菌穿刺针沾取细菌后，垂直刺入半固体培养基中央直达近管底处，再沿原穿刺线抽出即可，置37℃温箱培养，次日观察结果。
微生物学实验报告
2012级制药专业 工业微生物学实验报告 姓名: 刘甜甜学号: 2012304090 班级: 制药12-2班指导老师：王健 日期：2014.6.11
一、实验目的 1、抑制或杀死微生物的一些物理、化学及生物的因素抑菌、杀菌的原理。 2、掌握物理、化学及生物的因素抑菌、杀菌的试验方法。 3、了解细菌的形态特征、染色特点。 4、了解细菌在普通培养基、选择培养基、血平板上的菌落特征。 5、掌握细菌分离划线培养的方法。 6、掌握细菌的初步生化反应。 7、掌握细菌密集划线法，掌握细菌K-B药敏纸片法。 二、实验内容 1 细菌Gram’s stain染色，镜检，观察记录细菌形态和特色特征 1.1 实验原理：染色原理：G+菌与Gˉ菌细胞壁不同，G+菌比Gˉ菌细胞内核糖核酸镁盐含量高，G+菌比Gˉ等电点低。 1.2 实验步骤： 1.2.1.制片：○1涂片：取半滴生理盐水置一洁净玻片上，以无菌操作技术自平板上去菌落少许，与生理盐水混匀，均匀涂布约1cm2大小，自然干燥； ②固定：取含菌膜的玻片与酒精灯火焰上来回三次，使菌膜牢固附于玻片表面； 1.2.2染色：①初染：取结晶紫一到两滴覆盖于菌膜表面，轻微摇动，维持30〃~40〃,细流水冲洗，切勿直接冲洗涂片区域； ②媒染：取卢氏碘液1~2滴覆盖菌膜表面，轻微摇动，维持30〃~40〃,用上法细流水冲洗； ③脱色：取95%酒精2~3滴于菌膜表面，轻微摇动，局部接近无色即可, 用上法细流水冲洗； ④复染：取1：10稀释石炭酸复红覆盖涂片区域，轻微摇动，用上法细流水冲洗； ⑤吸水纸初步吸干玻片水分，然后自然干燥； 1.2.3 镜检：于涂片区域加半滴香波油，油镜（100倍目镜）下。 图1：Gram’s stain（1000×）图2：染色试验 三、分离培养 1实验原理：四区划线法是把混杂着在一起的微生物或同一微生物群体的不同细胞用接种环在平板培养基表面通过分区划线稀释而得到较多独立分布的单个细胞，经培养繁殖后生成个菌落。有时这些单菌落并非由单个细胞繁殖而来，故必须反复分离多次才能得到纯种。其原理是微生物样品在固体培养基表面多次作“由点到线”稀释而达到分离的目的。
微生物接种方法
微生物接种 1、平板倾注法 1）、以无菌操作，将检样25g（或25ml）剪碎放于含有225ml灭菌生理盐水的广口瓶内（瓶内置有适量玻璃珠）或灭菌研钵内，经充分振摇或研磨用成1：10的均匀稀释液。 2）、用1.0ml灭菌吸管吸取1：10稀释液1.0ml，沿管壁徐徐注入含有9.0ml灭菌生理盐水的试管内（注意吸管尖端不要触及管内液面），振摇试管混合均匀，作成1：100的稀释液。 3）、另取1.0ml灭菌吸管，按上述操作作10倍稀释，如此每递增稀释一次，即换1支1.0ml 吸管。 4）、根据食品卫生要求或对标本污染程度的估计，选择2-3个适宜稀释度，分别作10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释液的吸管移1.0ml稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度作两个平皿。 5）、稀释液移入平皿后应及时将凉至46℃营养琼脂（可放于46×1℃水浴保温）注入平皿约15ml，并移动平皿使混合均匀。同时将营养琼脂培养基倾入加有1.0ml灭菌生理盐水的平皿内作空白对照。 6）、待稀释液入平皿后，翻转平板，置36×1℃温箱内培养24±2h（肉、水产品、乳和蛋品为48±2h）取出，计算平板内菌落数，乘以稀释倍数，即得每克（或ml）样品所含菌落总数。 2、平板表面涂布法 将营养琼脂制成平板，经50℃l一2小时或35℃18—20小时干燥后，于其上滴加检样稀释液0．2ml，用L捧涂布于整个平板的表面，放置片刻(约lO分钟)，将平板翻转，移至36±1℃温箱内培养24±2小时(水产品用30℃培养48±2小时)，取出，按前述方式进行菌落计数，然后乘以5(由O．2m1换算为1m1)，再乘以样品稀释的倍数，即得每g或m1 检样所含菌落数。此法较上述倾注法为优，因菌落生长在表面，便于识别和检查其形态，虽检样中带有食品颗粒也不会发生混淆，同时还可使细菌不必遭受融化琼脂的热力，不致因此而使菌细胞受到损伤而不生长，从而可避免由于检验操作中的不良因素而使检样中细菌菌落数降低。但是本法取样量较倾注法为少(仅倾注法的五分之一)，代表性将受到一定的影响。 3、平板表面点滴法与涂布法相似。所不同者，只是用标定好的微量吸管或注射器针头按滴(使每滴相当于0．025mi)将检样稀释液滴加于琼脂平板上固定的区域(预先在平板背面用标记笔划成四个区域)，每个区域滴1滴，每个稀释度滴两个区域，作为平行试验。滴加后，将平板放平片刻(约5～10分钟)，然后翻转平板，如前移入温箱内培养6～8小时后进行计数，将所得菌落数乘以40(由o.025ml换算为1ml)，再乘以样品稀释的倍．数，即得每g 或ml检样所含菌落数。李兆普等利用此方法，与倾注法进行对比试验，经过六种食品，1536
灭菌
一、灭菌（Sterilization） 是指用物理或化学的方法杀灭全部微生物，包括致病和非致病微生物以及芽孢，使之达到无菌保障水平。经过灭菌处理后，未被污染的物品，称无菌物品。经过灭菌处理后，未被污染的区域，称为无菌区域。 杀灭或者消除传播媒介上的一切微生物，包括致病微生物和非致病微生物，也包括细菌芽胞和真菌孢子。同时，灭菌可以看成是一个过程。 灭菌 sterilization 用来使产品无存活微生物的过程 二、微生物 微生抵抗力取物对灭菌剂的决于原始存在的群体密度、菌种或环境赋予菌种的抵抗力。灭菌是获得纯培养的必要条件，也是食品工业和医药领域中必需的技术。将培养基、发酵设备或其他目标物中所有微生物的营养细胞及其芽胞（或孢子）杀灭或去除，从而达到无菌的过程。 三、灭菌原则 1.基本要求 重复使用的诊疗器械、器具和物品，使用后应先清洁，再进行消毒或灭菌。 被朊病毒、气性坏疽及突发不明原因的传染病病原体污染的诊疗器械、器具和物品，应执行WS/T 367第11章的规定。 耐热、耐湿的手术器械，应首选压力蒸汽灭菌，不应采取化学消毒剂浸泡灭菌。环境与物体表面，一般情况下先清洁，再消毒；当受到患者血液、体液等污染时，先去除污染物，再清洁与消毒。 医疗机构消毒工作中使用的消毒产品应经卫生行政部门批准或符合相应标准技术规范，并应遵循批准使用的范围、方法和注意事项。 2.方法的选择 根据物品污染后导致感染的风险高低选择相应的消毒或灭菌方法： 1）高危险度物品，应采用灭菌的方法处理； 2）中危险度物品，应采用达到中水平消毒以上效果的消毒方法； 3）低危险度物品，宜采用低水平消毒方法，或做清洁处理；遇有病原微生物污染时，针对所污染的病原微生物种类选择有效的消毒方法 根据物品上污染微生物的种类、数量选择消毒或灭菌的方法： 1) 对收到致病菌芽孢、真菌孢子、分枝杆菌和经学传播病原体污染的物品，应采用高水平消毒或灭菌； 2）对受到真菌、亲水病毒、螺旋体、支原体、衣原体等病原微生物污染的物品，应采取中水平以上的消毒方法； 3）对受到一般细菌和亲脂病毒等污染的物品，应采用达到中水平或低水平的消毒方法； 4）杀灭被有机物保护的微生物时，应加大消毒剂的使用剂量和/或延长消毒时间；5）消毒物品上微生物污染特别严重时，应加大消毒剂的使用剂量和/或延长消毒时间；[2]
BOD测定中微生物传感器法与稀释接种法的比较
收稿日期:2006-06-20 作者简介:丛丽(1956-),女,辽宁沈阳人,实验师。 ?监测与分析? BOD 测定中微生物传感器法与稀释接种法的比较 Comparison of Tiny -Organism Sensor Analysis Method and Dilution and Seeding Method in Determination of BOD 丛 丽 胡新萍 (沈阳市环境监测中心站 沈阳 110015) 摘要 用微生物传感器快速法和稀释接种法对地表水和污水处理厂出水中的生化需氧量(BOD )进行了测定,用数理统计的方法对两种方法测定的结果进行了比较。 关键词 生化需氧量 微生物传感器法 稀释接种法 方法比较 Abstract This thesis describes the determination of Biochemical Oxygen Demand (BOD )in surface water and sewage works effluent by tiny -organism sensor analysis rapid method as well as the dilution and seeding method ,and it makes comparisons between the two results by means of mathematical statistics. Key words Biochemical Oxygen Demand T iny -Organism Sensor Analysis Method Dilution and Seeding Method Comparison 生化需氧量(BOD 5)是指在规定的条件下,微生 物分解水中的可氧化物质所消耗的溶解氧的量。此生物氧化过程进行的时间很长,如在20℃培养,完成此过程需要100多d 。测定水中生化需氧量的经典方法是稀释与接种法,该方法规定在20℃±1℃培养5d ,分别测定水样培养前后溶解氧的量,二者之差即为生化需氧量(BOD 5)。由于BOD 5测定时间冗长,不能迅速反映环境污染状况,给环境监测工作带来诸多不便。作为污水处理的调控指标,就更缺乏实际意义。我国于2002年颁布了微生物传感器快速测定法(HJ/T 86-2002),该方法简便、快速,每次测定仅需要20min 。本文用微生物传感器快速法和稀释接种法对地表水和污水处理厂水中的生化需氧量(BOD )进行了测定,用数理统计的方法对两种方法测定的结果进行了比较,并提出使用微生物传感器快速法的注意事项。 1 实验部分 1.1 微生物传感器快速方法原理 测定水中BOD 的微生物传感器是由氧电极和 微生物菌膜构成,其原理是当含有饱和溶解氧的样品进入流通池中与微生物传感器接触,水样中可生化降解的有机物受到微生物菌膜中菌种的作用,使扩散到氧电极表面上氧的质量减少。当水样中可生化降解的有机物向菌膜扩散的速度(质量)达到恒定时,此时扩散到氧电极表面上氧的质量也达到恒定,因此产生了一个恒定电流。由于恒定电流与水样中可生化降解的有机物浓度的差值与氧的减少量存在定量关系,据此可换算出水中生物化学需氧量。1.2 仪器 220B 型微生物电极法BOD 快速测定仪;微生 物菌膜。1.3 主要试剂 (1)磷酸盐缓冲使用溶液:01005mol/L ;(2)葡萄糖-谷氨酸(BOD )标准溶液,2500mg/L :称取在103℃烘干后的无水葡萄糖和 谷氨酸各11705g 溶于磷酸盐缓冲使用溶液中,并用此溶液稀释至1000mL 。 — 15—BOD 测定中微生物传感器法与稀释接种法的比较 丛 丽
实验方案的格式
实验方案 一.【实验题目】： 土壤中细菌的分离纯化实验 二.【实验设计思想】： 细菌是具有很高实用价值的一类微生物, 世界各国对其研究与资源开发极为重视. 目前, 国内有关细菌的区系调查及资源开发虽然有一些报道, 但对不同作物根际细菌的研究很少. 甘肃天水麦积山海拔1742m , 属黄土高原潮湿区, 植物生长土壤区有机质含量丰富,本次实验将以该地区的落叶松、马尾松、白岩松、野豌豆等作物生长地区的土壤为材料, 分离鉴定其中的细菌, 探讨不同作物根际土壤中细菌分布数量及种类的差异, 并且分析每一种菌种在植物生长过程中所起的作用，最后以此为依据来推断麦积山大片地区内土壤中微生物的分布丰富情况和它们对植物生长作出的巨大贡献. 三.【实验目的】： 1.学会培养基最基本的制备方法。 2.学会最基本的微生物灭菌、接种等基本操作过程。 2.掌握最基本的分离、纯化微生物的一系列操作操作。 四.【试验方法】： 取天水麦积山不同植物根部的土壤作为土样，通过对其土壤中微生物的一系列培养、分离、筛选最终分离出细菌得菌株，并稀释平板菌落计数法进行数量测定四．实验原理: 1.菌种来源：由于各种细菌对营养物质需求不同，在不同地方采样对选取所要的细菌含量和其它杂菌含量的多少直接有关，所以选择微生物含量有可能丰富的土壤（天水麦积山植物根区）中采样。 2.培养基的选取：为了使所要的细菌能很好的生长，其它微生物生长受到一定的抑制，要用选择培养基。还要把细菌与其他微生物相区别，还要用鉴别培养基。为了达到既是选择培养基又是鉴别培养基，选取牛肉膏蛋白胨培养基。 3.培养及分离纯化：通过涂布培养法、平板划线法等方法达到分离纯化的目的。 4.保藏：通过分离纯化得到的菌种，接种与斜面培养基上，到一定时间后进行传代培养保藏，使其不死亡、减少突变所引起的生物学性状的改变。
大肠杆菌微生物培养实验报告及评价标准
实验1 微生物的分离、培养及计数 实验原理 纯化分离：人为提供适宜的菌落生长的条件（包括营养、温度、Ph等）。用平板划线法，通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。在数次划线后培养，可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞菌落。 筛选：转基因大肠杆菌有抗氨苄青霉素基因，所以在含有氨苄青霉素的LB培养基中可以正常繁殖长成菌落。而普通的大肠杆菌没有抗氨苄青霉素基因，咋含有氨苄青霉素的LB培养基中不能繁殖。由此可进行大肠杆菌的筛选。 梯度稀释并计数：通过浓度梯度稀释把液体培养基培养的大肠杆菌稀释到一定浓度，用稀释涂布平板法，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养。在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落。由此可计数计算大肠杆菌的数量。 实验目的 1.通过制备LB固体培养基，对平板进行划线等，学会使用固体LB 平板。 2.通过用液体培养基，学会对微生物进行扩大培养。 3.通过稀释，学会用计数器对微生物进行计数。
实验材料和药品 待分离的大肠杆菌菌液、高压蒸汽灭菌锅、LB 固体培养基、LB 液体培养基、接种环、玻璃涂布器、培养皿、恒温培养箱、摇床、酒精灯、无菌水、移液枪、EP 管 实验步骤（用简单的流程图表示） 实验数据的记录与分析（如照片、表格等）
稀释倍数104105 大肠杆菌单个菌落个 837799111812数 平均数 浓度×107×107 实验结果与讨论 结果：稀释了105计算出来的结果约为×107ml/cm^3
稀释接种法测定水质BOD实验过程的若干注意事项
龙源期刊网 http://www.qikan.com.cn 稀释接种法测定水质BOD实验过程的若干注意事项 作者：黄志清 来源：《科技传播》2012年第04期 泉州市丰泽区环境监测站，福建泉州362000 摘要本文主要阐述了如何运用稀释接种法准确地测定水质BOD，介绍了采样、样品保存、试剂配制、方法选择、实验分析、数据报告及废液处理整个过程需要注意的若干方面。 关键词水质监测；释接种法；测定；BOD；注意事项 中图分类号X8 文献标识码A 文章编号 1674-6708（2012）61-0153-01 0 引言 所谓的BOD是生化需氧量（也称生化耗氧量）的英文单词（biochemical oxygen demand）的缩写，是指在一定条件下，微生物氧化分解水中的有机物所进行的生物化学过程中所消耗的氧的量，以氧的mg/L表示。它是反映水体需氧污染物质含量的一个综合指标，也是评价水质好坏的一项重要参数，其值越高，说明水中耗氧性有机污染物质越多，污染程度也就越严重。制糖、食品、造纸、皮革、纤维等工业废水及生活污水中存在的大量碳氢化合物、蛋白质、油脂、木质素等均为有机污染物，可经好氧菌的生物化学作用而分解。若这类污染物质未经妥善处理大量排入水体，将造成水体严重贫氧，同时，有机物又可通过水中厌氧菌的分解引起腐败现象，产生甲烷、硫化氢、硫醇和氨等恶臭气体，使水体发臭变质，导致严重污染。污水中各种有机物得到完会氧化分解的时间，总共约需一百天，为了缩短监测时间，一般将待测水样在20℃左右恒温培养，五天内的耗氧量为代表，称其为五日生化需氧量。测定水质BOD的经典方法是稀释接种法，该法准确度高，但对测试条件的要求较高，实验时间长，实验步骤也较多，需要分析人员具备一定的操作经验。 1 内容 1）采样;：（1）取样之前应按规范将采样器和采样瓶等玻璃器皿彻底清洗，先用洗涤剂浸泡清洗，再用稀盐酸浸泡，最后用自来水、蒸馏水多次冲洗；（2）准备几套专用容器，分
平板划线法
平板划线法操作步骤 1.操作前准备： 将接种环2支，酒精灯2个，打火机2个，无菌平板两包，酒精棉球2瓶，镊子2个，洁净烧杯2个置于超净工作台，打开紫外灯，灭菌30分钟。取待纯化菌种2支放入超净工作台。操作者直立坐于操作台前，打开操作台玻璃，高度可供双手顺利出入即可。 2.擦拭： 用镊子取酒精棉球擦拭双手，在超净工作台门口处，并将台面擦出与肩同宽的正方形区域，此区域即为操作区域。将用毕的棉球放入烧杯中。 3.物品摆放： 将酒精灯放于擦拭区域的中心，将接种环放于酒精灯的右侧，将菌种放于酒精灯的左侧，将无菌平板的包装除去，包装置于操作区外，无菌平板置于酒精灯左侧。 4.点燃酒精灯： 打开酒精灯盖，将盖扣于离开操作区的台面上，点燃酒精灯，酒精灯周围3-5cm之内即为无菌区。 5.灼烧接种环： 右手持接种环，将接种环的金属丝直立于酒精灯外焰处，灼烧至红透，然后略倾斜接种环，灼烧金属杆，注意灼烧时要将金属丝与金属杆的连接部分充分灼烧。 6.取菌种： 左手持斜面的底部，将管口置于火焰的无菌区，右手小指打开试管塞，将接种环的接种丝放于外焰处再次灼烧至红透，然后将其深入试管内部，稍微凉一下，轻轻取一环，勿划破培养基，将接种环从试管中取出，注意取时勿碰触试管壁。将试管塞灼烧一圈，塞于试管上。因试管口一直在火焰的外焰处，故其温度较高，塞试管塞时注意勿烫手。 7.接种： 左手取无菌平板一个，用拇指和食指控制皿盖，其余几指控制皿底，打开皿盖，使开口角小于30°，将接种环上的菌种按图示进行划线，一区法要求连续划线，且线的边缘应划至培养皿的内缘，线要紧密但不相连。三区或四区法要求每划完一区，都应灼烧接种环，后一区要求与前一区首尾相连，但不得与其他区域搭在一起。 8.培养：
水质-五日生化需氧量(BOD5)的测定稀释与接种法培训讲学
水质五日生化需氧量（BOD5）的测定稀释与接种法HJ505-2009 1. 适用范围 1.1 本方法适用于地表水、工业废水和生活污水中五日生化需氧量（BOD5）的测定。 1.2 本方法的检出限为0.5mg/L，方法的测定下限为2 mg/L，非稀释法和非稀释接种法的测 定上限为6mg/L，稀释与接种法的测定上限为6000mg/L。 2. 术语和定义 五日生化需氧量是指在规定条件下，微生物分解存在水中的某些可氧化物质，特别是分解有机物所进行的生物化学过程中消耗溶解氧的量。条件为（20±1）℃培养5天，分别测定样品培养前后的溶解氧，两者之差即为BOD5值，以氧的毫克/升表示。 3. 方法原理 将水样充满完全密闭的溶解氧瓶中，在（20±1）℃的暗处培养5d±4h或（2+5）d±4 [先在0~4℃的暗处培养2d，接着在（20±1）℃的暗处培养5d，即培养（2+5）d]，分别测定培养前后水样中溶解氧的质量浓度，由培养前后溶解氧的质量浓度之差，计算每升样品消耗的溶解氧量。 若样品中的有机物含量较多，BOD5的质量浓度大于6mg/L，样品需适当稀释后测定； 对不含或含微生物少的工业废水，如酸性废水、碱性废水、高温废水、冷冻保存的废水或经过氯化出力等的废水，在测定BOD5时应进行接种，以引进能分解废水中有机物的微生物。当废水中存在难以被一般生活污水中的微生物以正常的速度降解的有机物或含有剧毒物质是，应将驯化后的微生物引入水样中进行接种。 4. 试剂和材料 分析时，只采用公认的分析纯试剂和蒸馏水或同等纯度的水（在全玻璃装置中蒸馏的水或去离子水），水中含铜不应高于0.01mg/L，并不应有氯、氯胺、苛性碱、有机物和酸类。 4.1 接种液 取POLYSEED 胶囊1 粒溶于装有250ml稀释水的烧杯中。将烧杯置于磁力搅拌器上搅 拌曝气1h。曝气结束，放置0.5h后倾出全部清液，将该清液置于磁力搅拌器上搅拌，此接种液最多能放置二天。其它获得接种液的途径见如下。 4.1.1 未受工业废水污染的生活污水：化学需氧量不大于300mg/L，总有机碳不大于100 mg/L； 4.1.2 含有城镇污水的河水或湖水； 4.1.3 污水处理厂的出水； 4.1.4 分析含有难降解物质的工业废水时，在其排污口下游适当处取水样作为废水的驯化接种液。也可取中和或经适当稀释后的废水进行连续曝气，每天加入少量该种废水，同时加入少量生活污水，使适应该种废水的微生物大量繁殖。当水中出现大量的絮状物时，表明微生物已繁殖，可用作接种液。一般驯化过程需3~8天。 4.2 盐溶液 4.2.1 磷酸盐缓冲溶液 将8.5g磷酸二氢钾（KH2PO4）、16.6g磷酸氢二钾（K2HPO4·3H2O）、17.7g七水合磷 酸氢二钠（Na2HPO4）和1.7g氯化铵（NH4Cl）溶于约500ml水中，稀释至1000ml 并混合均匀。此缓冲溶液的pH 应为7.2。 4.2.2 七水合硫酸镁 将22.5g的七水合硫酸镁（MgSO4·7H2O）溶于水中，稀释至1000ml 并混合均匀。 4.2.3 氯化钙 将27.5g的无水氯化钙（CaCl2）溶于水，稀释至1000ml 并混合均匀。 4.2.4 六水合氯化铁 将0.25g六水合氯化铁（FeCl3·6H2O）溶解于水中，稀释至1000ml 并混合均匀。
实验具体方案的格式
一.【实验题目】： 土壤中细菌地分离纯化实验 二.【实验设计思想】： 细菌是具有很高实用价值地一类微生物, 世界各国对其研究与资源开发极为重视. 目前, 国内有关细菌地区系调查及资源开发虽然有一些报道, 但对不同作物根际细菌地研究很少. 甘肃天水麦积山海拔, 属黄土高原潮湿区, 植物生长土壤区有机质含量丰富,本次实验将以该地区地落叶松、马尾松、白岩松、野豌豆等作物生长地区地土壤为材料, 分离鉴定其中地细菌, 探讨不同作物根际土壤中细菌分布数量及种类地差异, 并且分析每一种菌种在植物生长过程中所起地作用，最后以此为依据来推断麦积山大片地区内土壤中微生物地分布丰富情况和它们对植物生长作出地巨大贡献.个人收集整理勿做商业用途 三.【实验目地】： .学会培养基最基本地制备方法. .学会最基本地微生物灭菌、接种等基本操作过程. .掌握最基本地分离、纯化微生物地一系列操作操作. 四.【试验方法】： 取天水麦积山不同植物根部地土壤作为土样，通过对其土壤中微生物地一系列培养、分离、筛选最终分离出细菌得菌株，并稀释平板菌落计数法进行数量测定个人收集整理勿做商业用途 四．实验原理: .菌种来源：由于各种细菌对营养物质需求不同，在不同地方采样对选取所要地细菌含量和其它杂菌含量地多少直接有关，所以选择微生物含量有可能丰富地土壤（天水麦积山植物根区）中采样.个人收集整理勿做商业用途 .培养基地选取：为了使所要地细菌能很好地生长，其它微生物生长受到一定地抑制，要用选择培养基.还要把细菌与其他微生物相区别，还要用鉴别培养基.为了达到既是选择培养基又是鉴别培养基，选取牛肉膏蛋白胨培养基.个人收集整理勿做商业用途 .培养及分离纯化：通过涂布培养法、平板划线法等方法达到分离纯化地目地. .保藏：通过分离纯化得到地菌种，接种与斜面培养基上，到一定时间后进行传代培养保藏，使其不死亡、减少突变所引起地生物学性状地改变.个人收集整理勿做商业用途 .通过形态与染色鉴定：由于各种微生物有其特定地菌落形态特征和单细胞形态特征，可通过这些形态进行鉴定.还由于细胞壁组成不同可进行鉴别染色法进行鉴定，也可用产生不产生芽孢进行芽孢染色.通过以上方法可对所分离纯化地菌种进行初步地鉴定.个人收集整理勿做商业用途 .通过生理生化反应进行鉴定：各种微生物在代谢类型上表现了很大地差异，如表现在对对大分子糖类和蛋白质地分解能力，以及分解代谢地最终产物地不同，反映出他们有不同地酶系.我们在实验室允许地条件下做了糖类发酵与氧化、是否能产生过氧化氢酶以及是否含有细胞色素氧化酶等生理生化试验，进行再次鉴定.个人收集整理勿做商业用途 五【.实验材料】： .器材：玻璃烧杯、天平、搪瓷烧杯、三角瓶、量筒、漏斗、试管、培养皿、吸管、培养基分装器、电炉、接种环、移液枪、试纸（—）、牛角匙、牛皮纸、棉花、纱绳、高压蒸汽灭菌锅等.个人收集整理勿做商业用途 .牛肉膏、蛋白胨、、、. 六．实验步骤： .配置牛肉膏蛋白胨培养基： ().配方及其配量：
常用免疫接种方法及注意事项
常用免疫接种方法及注意事项 一滴鼻、点眼、滴口免疫法 1 配兑稀释 分别开启盛有疫苗和稀释液或灭菌生理盐水的瓶子。为防止两瓶在空气中互相倾倒受污染或将疫苗洒落瓶外，一般用塑料接头连接再倾倒，然后轻轻旋转摇晃至疫苗完全溶解，将其移到滴瓶中或直接加上滴嘴。配兑溶液量根据滴瓶和滴管的大小差异而有变化，可根据1ml水有几滴来推算。由于活毒疫苗配后1小时活力即有较大降低，在2小时后或在高温育雏等环境下活力将大大降低，故应坚持现用现配原则，一般配制1小时内使用完的疫苗量。 2 滴瓶操作 五指分开捏着，将装有疫苗的滴瓶滴头朝上掌心向天，轻捏瓶身，挤出一部分空气，然后倒转过来，使滴头朝下掌心向地，即可开始接种。在操作过程中始终保持该姿势。若滴头自然滴液，可稍松手指让其吸回。 3 滴鼻点眼法 将一滴疫苗溶液自1cm高处，垂直滴入 一侧眼睛或鼻孔里，等疫苗扩散到整个角膜 或被吸入鼻孔后才可放鸡，否则滴入的疫苗 易被甩丢，影响免疫效果。若疫苗停在鼻孔 处，可按压对侧鼻孔，让其吸进。在接种过 程中，严禁攀比速度、马虎了事，若没有滴 中应补滴。禁止将滴头伸入眼结膜内滴液， 不仅易损伤结膜，而且滴液大小不一。 4 滴口法 鸡腹部朝天，食指托住头颈后部，大拇指轻按前面头颈处，待张口后在口腔上方1cm 处滴下1滴疫苗溶液。在滴口免疫前后24小时内停饮任何有消毒剂的水。 二翼翅刺种法 1 该方法多用于鸡痘接种，配有专用稀释液 用塑料接头对接后，溶解摇匀。为防被打翻，可将疫苗瓶放在木块或泡沫上的小孔中。拉开一侧翅膀，抹开翼翅上的绒毛，刺种者将蘸有疫苗的刺种针从翅膀内侧对准翼膜用力快速穿透，使针上的凹槽露出翼膜。 2 注意事项 每次剌种针蘸苗都要保证两凹槽能浸在疫苗液面以下，出瓶 时将针在瓶口擦一下，将多余疫苗擦去。在针刺过程中，要避免 针槽碰上羽毛以防疫苗溶液被擦去，也应避免刺伤骨头和血管。 为防止传播疾病，每剌种完一群鸡要更换刺种针。在接种后6～8 天，接种部位可见到或摸到1～2个谷粒大小的结节，中央有一干 痂。若反应灶大且有干酪样物，则表明有污染；若无反应出现， 则可能是由于：鸡群已有免疫力，或接种方法有误，疫苗保存运 输不当，曾受阳光暴晒或受热，以及疫苗本身质量问题。一般至 少应有2％的鸡只有局部红肿反应现象。 三颈部皮下注射法 本方法较多的是使用灭活苗。灭活苗在用前应使疫苗温度升至室温，并摇匀。注射器具严格消毒，剔除钝卷针头。一般使用18号针头，若针头孔径太小，会影响疫苗质量。针头长短根据接种鸡群个体大小而异。检查连续注射器密封性能，有无滴漏现象。
送检样品抑菌实验报告
检测报告 检测项目：抗生素抑菌实验送检日期：2012-09- 10 送检单位： 检验员：周俊
实验材料与方法 1．1 实验材料 指示菌、TSB肉汤、麦氏比浊管、LB平板培养基、MRS肉汤、L型波棒、牛津杯、灭菌陶瓷盖、灭菌试管、微量移液器、密封发酵管、磷酸缓冲液等。 2．1 实验方法 2.1.1 指示菌 使用大肠杆菌O157，O139，K88，K99型、金色葡萄球菌与沙门氏菌。 2.1.2 指示菌菌悬液的准备 （1）细菌复苏：菌种平板划线，36℃培养20h；挑取单菌落于TSB肉汤，置37℃振荡培养16h；接种TSB肉汤，置37℃振荡培养16h。 （2）采用直接菌落悬液法，将培养好的菌液调整到5个麦氏浓度(也就是细菌数为1×108 cfu/ml)。此时指示菌菌悬液制备完毕。（注：在调整过程中需使用PH 7.2的磷酸缓冲液进行菌液的麦氏浓度调整） 2.1.5 LB检测平板的制备的准备 将LB肉汤培养基加入琼脂后，溶解均匀，在高压灭菌釜中。121℃，高温灭菌20min。将已灭菌的琼脂培养基倒在玻璃培养皿内，每皿15ml（下层），待其凝固。再继续将灭好的LB琼脂培养基再次加固在已凝固的培养基上待凝固（上层）。使LB平板增厚。凝固后并使培养皿中水份干燥透，取100μl的指示菌菌悬液在平板上用L型波棒均匀涂布，涂布后以平板无可见水滴为准，此时的平板立刻进行抑菌试验。 2.1.6 样品原粉在培养基上的放置 精确秤取样品0.05克轻轻放入培养皿中，在水平放置的平皿中均匀地放置。2.1.7 样品抑菌扩散及指示菌的培养 将加入样品原粉的平皿放置37℃的恒温培养箱内，培养16h~24h后，进行拍照记录。 结果：
分子生物学大实验报告
分子生物学实验 ： 专业： 学号：
目录 实验一细菌培养 实验二质粒DNA提取 实验三琼脂糖凝胶电泳 实验四质粒DNA酶切及琼脂糖电泳分析鉴定 实验五聚合酶链式反应（PCR）技术体外扩增DNA 实验六地高辛标记的Southern杂交
实验一细菌的培养 一、目的 学习细菌的培养方法及培养基的配置。 二、原理 在基因工程实验和分子生物学实验中，细菌是不可缺少的实验材料。质粒的保存、增殖和转化；基因文库的建立等都离不开细菌。特别是常用的大肠杆菌。 大肠杆菌是含有长约3000kb的环状染色体的棒状细胞。它能在仅含碳水化合物和提供氮、磷和微量元素的无机盐的培养基上快速生长。当大肠杆菌在培养基中培养时，其开始裂殖前，先进入一个滞后期。然后进入对数生长期，以20~30min复制一代的速度增殖。最后，当培养基中的营养成分和氧耗尽或当培养基中废物的含量达到抑制细菌的快速生长的浓度时，菌体密度就达到一个比较恒定的值，这一时期叫做细菌生长的饱和期。此时菌体密度可达到1×109~2×109/mL。 培养基可以是固体的培养基，也可以是液体培养基。实验室中最常用的是LB培养基。 三、实验材料、试剂与主要仪器 （一）实验材料 大肠杆菌 （二）试剂 1. 胰蛋白胨 2. 酵母提取物 3. 氯化钠 4. 1mol/L NaOH 5. 琼脂粉 6. 抗生素（氨苄青霉素、卡那霉素等） （三）仪器 1. 培养皿 2. 带帽试管 3. 涂布器 4. 灭菌锅 5. 无菌操作台（含酒精灯、接种环、灭菌牙签等） 6. 恒温摇床 四、操作步骤 （一）LB培养基的配制 配制每升培养基，应在950m1去离子水中加入： 细菌培养用胰蛋白胨10g 细菌培养用酵母提取物5g NaCl 10g 摇动容器直至溶质完全溶解，用1mol/L NaOH调节pH位至7.0。加入去离子水至总体积为lL，在15 lbf／in2 (1.034×105Pa)高压下蒸气灭菌20分钟。 这样得到是LB液体培养基。LB固体培养基是在其液体培养基的基础上另加琼脂粉15g/L。 （二）细菌的培养 （１）在液体培养基中培养
微生物接种方法
常用的几种微生物接种方法 接种细菌应用接种针（环）来沾取细菌标本，进行接种。接种环与接种针为用白金丝或合金丝所制，亦可用电炉丝代替，因它能耐高热且散热快，便于接种前后通过火焰灭菌（整个接种环烧红即达到灭菌目的）。在使用接种环时一般用右手持笔式较为方便，左手可持培养基进行配合，其接种程序可分为：灭菌接种环→稍冷→沾取细菌样品→进行接种（包括：启盖或塞、接种划线、加盖或塞）→进行接种环灭菌等五个程序。不同培养基，接种方法也不同，分述如下： 一、平板划线接种法（分离培养法） 是将细菌分离培养的常用技术，其目的是将混有多种细菌的培养物，或标本中不同的细菌（病原菌与非病原菌）使其分散生长，形成单个菌落或分离出单一菌株，便于识别鉴定。平板划线接种方法较多，其中以分段划线法与曲线划线法较为常用。 （一）分段划线法 平板分段划线(左)及培养后菌落分布图 本法多用于含菌量较多的标本。方法是以接种环沾取少许样品先涂布于平板培养基表面一角作为第一段划线（划线时接种环与培养基表面呈45度角），然后将接种环置火焰上灭菌，俟冷（可接触平板试之，如不融化琼脂，即已冷却），于第二段处再作划线，且在开始划线时与第一段的划线相交接数次，以后划线不必再相接，待第二段划完时，再如上法灭菌，接种划线，依次划至最后一段，灭菌接种环。这样每一段划线内的细菌数逐渐减少，即以获得单个菌落，划线接种完毕，盖好平皿盖，倒置（平板底部向上）于37℃温箱中培养。 （二）连续划线法：此法多用于接种材料中含菌数量不太多的样品或培养物。方法是先将样品或培养物涂于平板表面的一角，然后用接种环自样品涂擦处开始，向左右两侧划开并逐渐向下移动，连续划成若干条分散的平等线。
HJ505-2009 水质 五日生化需氧量(BOD5)的测定 稀释与接种法
中华人民共和国国家环境保护标准 HJ 505—2009 代替GB/T 7488-1987 水质 五日生化需氧量（BOD5）的测定 稀释与接种法 Water quality—Determination of biochemical oxygen demand after 5 days (BOD5) for dilution and seeding method （发布稿） 本电子版为发布稿。请以中国环境科学出版社出版的正式标准文本为准。
目 次 前 言....................................................................II 1 适用范围 (1) 2 规范性引用文件 (1) 3 方法原理 (1) 4 试剂和材料 (2) 5 仪器和设备 (3) 6 样品 (4) 7 分析步骤 (5) 8 结果计算 (8) 9 质量保证和质量控制 (9) 10 精密度和准确度 (10) 附 录A本标准章条编号与ISO5815-1、2：2003章条编号对照 (11)
前 言 为贯彻《中华人民共和国环境保护法》和《中华人民共和国水污染防治法》，保护环境，保障人体健康，规范水中五日生化需氧量（BOD5）的测定方法，制定本标准。 本标准规定了地表水、工业废水、生活污水中五日生化需氧量（BOD5）的稀释与接种的测定方法。 本标准是对《水质五日生化需氧量（BOD5）的测定稀释与接种法》（GB 7488-87）的修订。 本标准修改采用ISO5815-1：2003《水质n日生化需氧量（BODn）的测定第一部分：加丙烯基硫脲的稀释与接种法》和ISO5815-2：2003《水质n日生化需氧量（BODn）的测定第二部分：非稀释法》（英文版）。为了方便比较，在资料性附录A中列出了本标准的章条编号与ISO5815-1、2：2003章条编号的对照一览表，以供参考。 本标准首次发布于1987年，原标准起草单位为北京建筑工程学院，本次为第一次修订。修订的主要内容有： ——增加了检出限； ——方法原理部分明确规定培养温度和时间，增加（2+5）天培养时间的内容； ——增加了接种液的选择； ——增加了样品前处理方法内容； ——增加了稀释接种法稀释倍数的确定方法内容； ——细化了五日生化需氧量的测定方法； ——增加了质量保证和质量控制章节。 自本标准实施之日起，原国家环境保护局1987年3月14日批准、发布的国家环境保护标准《水质五日生化需氧量（BOD5）的测定稀释与接种法》（GB 7488-87）废止。 本标准附录A为资料性附录。 本标准由环境保护部科技标准司组织制订。 本标准主要起草单位：沈阳市环境监测中心站。 本标准环境保护部2009年10月20日批准。 本标准自2009年12月1日起实施。 本标准由环境保护部解释。
实验报告2
微生物实验个人报告 班级：09环工2班姓名：刘人豪学号：200930230215 组别：第五组 一．实验目的： 1.培养基的配制和灭菌 （1）熟悉玻璃器皿的洗涤和灭菌前的准备工作 （2）了解配制微生物培养基的基本原理，掌握配制、分装培养基的方法 （3）学会各类物品的包装、配制（稀释水等）和灭菌技术 2．细菌当然纯种分离、培养和接种技术 （1）从环境（土壤、水体、活性污泥、垃圾、堆肥等）中分离、培养细菌，掌握一些常用的分离和纯化微生物的方法 （2）掌握细菌纯种分离的方法（平板划线法、浇注平板法） （3）学会几种接种技术（斜面接种技术、穿刺接种、稀释平板涂布法等） 3.纯培养菌种的菌体、菌落形态的观察 （1）观察通过实验分离出来的几种细菌相应的菌落形态特征 二．实验仪器和材料： 1.培养基的配制和灭菌：高压蒸汽灭菌器、干燥箱、煤气灯、培养皿（10套）、试管（20 支）、移液枪和1mL枪头、锥形瓶（2个）、烧杯（一大一小）、量筒（200mL一个、10mL 一个）、药物天平、玻璃棒、玻璃珠（30个）、石棉网、药匙、铁架、表面皿、PH试纸和棉花等；牛肉膏、蛋白胨、NaCl、NaOH和琼脂等 2.上述实验所准备的无菌物品（包括各种玻璃器皿、培养基、稀释水等）；活性污泥、土 壤或湖水一瓶；接种环、酒精灯或煤气灯、恒温培养箱等 三．实验原理： 1. 培养基的配制原理：培养基是微生物生长的基质，是按照微生物营养、生长繁殖的需要，由碳、氢、氧、氮、磷、硫、钾、钙、镁、铁及微量元素和水，按一定的体积分数配制而成。调节合适的PH值，经 高温灭菌后以备培养微生物之用。本实验配制固体培养基 2. 灭菌的原理：灭菌是用物理、化学等因素杀死全部微生物的营养细胞和它们的芽孢（或孢子）的过程，灭菌法有干热灭菌、加压蒸汽灭菌、间歇灭菌、气体灭菌和过滤除菌等。本实验使用加热灭菌，高温杀死细菌 3. 细菌的纯种分离原理：细菌的纯种分离是从混杂的微生物群体中分散成能再培养基上 长成单个菌落的分离方法。有平板划线法、平板表面涂布法和浇注平板法等 4. 细菌培养的原理：根据该微生物对营养、酸碱度、氧等条件要求不同，而供给它适宜 的培养条件，或加入某种抑制剂造成只利于此菌生长，而抑制其他细菌生长的环境，从而淘 汰其他一些不需要的微生物，再用稀释涂布平板法、稀释混合平板法或平板划线分离法等分 离、纯化该微生物，直至得到纯菌株 5. 细菌接种的原理：接种就是将一定量的微生物在无菌操作条件下转移到另一无菌的并合 适该细菌生长繁殖所需要的培养基中的过程。接种技术有斜面接种技术、穿刺接种、稀释平 板涂布法等 6. 菌体、菌落形态的观察原理：由于微生物个体表面结构、分裂方式、运动能力、生理
微生物实验报告模板
微生物实验报告模板 淀粉与微生物篇一：实验十分离产淀粉酶的微生物 第十次实验分离产淀粉酶微生物 学院：生命科学学院 专业：生物科学类 年级：20XX级 姓名： 学号：1007040085 20XX年XX月XX日 实验十分离产淀粉酶的微生物 一、实验目的 1、熟悉常用微生物培养基（牛肉膏蛋白胨培养基）的配制方法。 2、学习各种无菌操作技术，并用此技术进行为微生物稀释分离、划线分离接种。 3、用平板划线法和稀释涂布平板发分离微生物。 4、认识为微生物存在的普遍性，体会无菌操作的重要性。 5、掌握分离产淀粉酶微生物的试验方法和步骤，了解产淀粉酶的微生物种类及形态。 二、实验原理
土壤是微生物生活的大本营，是寻找和发现有重要应用潜力的微生物的主要菌源。不同土样中各类微生物数量不同，一般土壤中细菌数量最多，其次为放线菌和霉菌。一般在较干燥，偏碱性、有机质丰富的土壤中放线苗数量较多；酵母菌在一般土壤中的数量较少，而在水果表皮、葡萄园、果园土中数量多些。本次实验从土壤中分离产淀粉酶的微生物，应该取那些富含产淀粉酶的微生物的土样。从复杂的微生物群体中获得只含有一种或某一类型微生物的过程称为微生物的分离与纯化。常用的方法有 1、简单单细胞挑取法 2、平板分离法和稀释涂布平板法 此次实验采取的是平板分离法和稀释涂布平板法结合，该方法操作简单，普遍用于微生物的分离与纯化。其原理包括： 1)稀释后的细胞悬液图不在平板上可以分离得单个菌株 2)在适合于待分离微生物的生长条件（如营养、酸碱度、温度与氧等）下培养微生物，或加入某种抑制剂造成只利于待分离微生物的生长，而抑制其他微生物生长的环境，从而淘汰一些不需要的微生物。 3)微生物在固体培养基上生长形成的单个菌落可以是由一个细胞繁殖而成的集合体。因此可通过挑取单菌落而获得纯培养。获得单菌落的方法可通过稀释涂布平板或平板划线等方法完成。 以淀粉作为惟一碳源的培养基培养未分离细菌，能产淀粉酶的细菌能生长，且菌落周围出现透明圈（淀粉不透明，被消化后
细菌的接种与培养方法操作规程
细菌的接种与培养方法操作规程 一、细菌的接种 根据待检标本的来源、培养目的及所用培养基的性状，采用不同的接种方法。 l、平板画线分离法 （1）、连续画线分离法此法主要用于杂菌不多的标本。用接种环取标本少许，于平板l/5处密集涂布，然后回来作曲线连续划线接种，线与线间有一定距离，划满平板为止。 （2）、分区画线分离法此法适用于杂菌较多的标本。先将标本均匀涂布于平板边缘一小区(约占平板1/5)，再在二、三区依次连续画线，每画线一区均将接种针灭菌一次。每一区的划线均接触上一区的接种线1～2次。以获得单个菌落。 2、斜面接种法 该法主要用于单个菌落的纯培养。用灭菌接种针取菌少许，从培养基斜面底部向上划一直线，然后从底部向上作连续曲线画线。一直画到斜面顶端。 3、液体接种法 多用于一些液体生化试验管的接种。用灭菌接种环取菌少许，在试管内壁与液面交接处的管壁上轻轻
研磨，使细菌混合于液体中。 4、穿刺接种法 主要用于半固体培养基、明胶及双糖铁的接种。用接种针取菌少许，从半固体培养基中央，平行于管壁垂直刺入，接近管底但不可接触管底，然后接种针原路退出。 5、倾注平板法 临床上主要用于尿液等标本的细菌计数。将标本经适当稀释后，取一定量加入已灭菌的平皿内，倾入已经溶化并冷却至45℃左右的定量培养基，混匀，待凝固后倒置、培养。 6、涂布接种法 常用于纸片药物敏感性测定，也可用于被检标本的细菌计数。加定量的被检菌液于琼脂平板表面，然后用灭菌的棉签反复涂布几次，使被检菌均匀分布在琼脂平板表面。然后贴上药敏纸片培养，或直接培养观察结果。 二、细菌培养方法 根据临床初步诊断及待检细菌的种类，可选用不同的环境进行培养。常用的有需氧培养法、二氧化碳培养法和厌氧培养法。 1、需氧培养法