MTT原理方法及操作步骤

MTT原理、步骤、结果分析方法及注意事项

MTT原理

MTT全称为3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromide，汉语化学名为 3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐，商品名：噻唑蓝。是一种黄颜色的染料。MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶

性的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞

中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范

围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗

肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。它的特点是灵敏度高、经济。缺点：由于MTT

经还原所产生的甲瓒产物不溶于水，需被溶解后才能检测。这不仅使工作量增加，也会对实验结果的准确

性产生影响，而且溶解甲的有机溶剂对实验者也有损害。

MTT 溶液的配制方法

通常，此法中的MTT 浓度为5mg/ml。因此，可以称取MTT 0.5克，溶于100 ml的磷酸缓冲液（PBS）或无酚红的培养基中，用0.22μm滤膜过滤以除去溶液里的细菌，放4℃避光保存即可。在配制和保存的过程中，容器最好用铝箔纸包住。实验的时候我一般关闭超净台上的日光灯来避光，觉得这样比较好。需要注意的是，MTT法只能用来检测细胞相对数和相对活力，但不能测定细胞绝对数。在用酶标仪检测结果

的时候，为了保证实验结果的线性，MTT 吸光度最好在0-0.7 范围内。

MTT一般最好现用现配，过滤后4oC避光保存两周内有效，或配制成5mg/ml保存在-20度长期保存，避免

反复冻融，最好小剂量分装，用避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光以免分解。我一般都把MTT粉分装在EP 管里，用的时候现配，直接往培养板中加，没必要一下子配那么多,尤其当MTT变为灰绿色时就绝对不能再用了。

MTT有致癌性，用的时候小心,有条件最好带那种透明的簿膜手套.配成的MTT需要无菌，MTT对菌很敏感；往96孔板加时不避光也没有关系，毕竟时间较短，或者你不放心的时候可以把操作台上的照明灯关掉.

配制MTT时用PBS（ph=7.4）溶解。PBS配方：Nacl 8g ＋ Kcl 0.2g ＋ Na2HPO4 1.44g ＋ KH2PO4 0.24g 调pH 7.4,定容1L。

普通MTT法实验步骤：

1：接种细胞：用含10％胎小牛血清得培养液配成单个细胞悬液，以每孔1000-10000个细胞接种到96孔板，每孔体积200ul.

2: 培养细胞：同一般培养条件，培养3-5天（可根据试验目的和要求决定培养时间）。

3：呈色：培养3-5天后，每孔加MTT溶液（5mg/ml用PBS配制，pH=7.4)20ul.继续孵育4 h，终止培养，小心吸弃孔内培养上清液，对于悬浮细胞需要离心后再吸弃孔内培养上清液。每孔加150ul DMSO，振荡10min，使结晶物充分融解。

4：比色：选择490nm波长，在酶联免疫监测仪上测定各孔光吸收值，记录结果，以时间为横坐标，吸光值为纵坐标绘制细胞生长曲线。

药物MTT法实验步骤

贴壁细胞：

1: 收集对数期细胞，调整细胞悬液浓度，每孔加入100ul,铺板使待测细胞调密度 1000- 10000 孔，（边缘孔用无菌PBS填充）。

2: 5%CO2，37℃孵育，至细胞单层铺满孔底（96孔平底板）,加入浓度梯度的药物,原则上，细胞贴壁后即可加药，或两小时，或半天时间，但我们常在前一天下午铺板，次日上午加药.一般5-7个梯度,每孔100ul,设3-5个复孔.建议设5个，否则难以反应真实情况

3: 5%CO2，37℃孵育16-48小时，倒置显微镜下观察。

4: 每孔加入20ulMTT溶液（5mg/ml，即0.5%MTT），继续培养4h。若药物与MTT能够反应，可先离心后弃去培养液，小心用PBS冲2-3遍后，再加入含MTT的培养液。

5: 终止培养，小心吸去孔内培养液。

6: 每孔加入150ul二甲基亚砜，置摇床上低速振荡10min，使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测仪OD490nm 处测量各孔的吸光值。

7: 同时设置调零孔（培养基、MTT、二甲基亚砜），对照孔（细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT、二甲基亚砜）。

悬浮细胞：

1: 收集对数期细胞，调节细胞悬液浓度1×106/ml，按次序将①补足的1640（无血清）培养基40ul ；②加Actinomycin D（有毒性）10ul用培养液稀释 (储存液100mg/ml，需预试寻找最佳稀释度，1:10-1:20)；

③需检测物10ul；④细胞悬液50ul（即5×104cell/孔），共100ul加入到96孔板（边缘孔用无菌水填充）。每板设对照（加100ml 1640）

2: 置37℃，5%CO2孵育16-48小时，倒置显微镜下观察。

3: 每孔加入10 ul MTT溶液（5 mg/ml，即0.5%MTT），继续培养4 h。（悬浮细胞推荐使用WST-1，培养4 h后可跳过步骤4），直接酶联免疫检测仪OD570nm（630nm校准）测量各孔的吸光值）

4、离心（1000转x10min），小心吸掉上清，每孔加入100 ul二甲基亚砜，置摇床上低速振荡10 min，使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测仪OD570nm（630nm校准）测量各孔的吸光值。

5、同时设置调零孔（培养基、MTT、二甲基亚砜），对照孔（细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT、二甲基亚砜），每组设定3复孔。

注意事项：

(1) 选择适当得细胞接种浓度。

(2) 避免血清干扰：一般选小于10％的胎牛血清的培养液进行试验。在呈色后尽量吸尽孔内残余培养液。

(3) 设空白对照：与试验平行不加细胞只加培养液的空白对照。其他试验步骤保持一致，最后比色以空白调零。

(4) MTT实验吸光度最后要在0-0.7之间，超出这个范围就不是直线关系。

(5) 用96孔板培养细胞做MTT测细胞活力,应该加多少1640培养基,多少MTT和DMSO合适根据书上说的加200ul1640,20ulMTT,150ulDMSO 加DMSO之前要尽量去掉培养液，便于DMSO溶解甲臜颗粒进行比色测定(6) 一般每孔4000个细胞为宜，既细胞浓度在20000个/ml，MTT加20ul，作用四小时后洗掉上清液，注意不要将甲瓉洗掉，然后每孔加150ul DMSO，在脱色摇床上振荡10分钟，然后测吸光值。

转~MTT法原理、步骤以及注意事项

MTT原理

MTT全称为3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromide，汉语化学名为 3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐，商品名：噻唑蓝。是一种黄颜色的染料。

MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在490nm波长处（也有用570nm波长的，我目前用的都是570nm)测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。它的特点是灵敏度高、经济。

缺点：由于MTT经还原所产生的甲瓒产物不溶于水，需被溶解后才能检测。这不仅使工作量增加，也会对实验结果的准确性产生影响，而且溶解甲的有机溶剂对实验者也有损害。

MTT 溶液的配制方法

通常，此法中的MTT 浓度为5mg/ml。因此，可以称取MTT 0.5克，溶于100 ml 的磷酸缓冲液（PBS）或无酚红的培养基中，用0.22μm滤膜过滤以除去溶液里的细菌，放4℃ 避光保存即可。在配制和保存的过程中，容器最好用铝箔纸包住。实验的时候我一般关闭超净台上的日光灯来避光，觉得这样比较好。

需要注意的是，MTT法只能用来检测细胞相对数和相对活力，但不能测定细胞绝对数。在用酶标仪检测结果的时候，为了保证实验结果的线性，MTT 吸光度最好在0-0.7 范围内。

MTT一般最好现用现配，过滤后4℃避光保存两周内有效，或配制成5mg/ml保存在-20度长期保存，避免反复冻融，最好小剂量分装，用避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光以免分解。我一般都把MTT粉分装在EP管里，用的时候现配，直接往培养板中加，没必要一下子配那么多,尤其当MTT变为灰绿色时就绝对不能再用了。我自己操作一般是每次配制15ml,过滤后4℃避光保存，在两周内用完。

MTT有致癌性，用的时候小心,有条件最好带那种透明的簿膜手套.配成的MTT需要无菌，MTT对菌很敏感；往96孔板加时不避光也没有关系，毕竟时间较短，或者你不放心的时候可以把操作台上的照明灯关掉.

配制MTT时用PBS（ph=7.4）溶解。PBS配方：Nacl 8g ＋ Kcl 0.2g ＋ Na

2HPO

4

1.44g ＋ KH

2PO

4

0.24g调pH 7.4,定容1L。

普通MTT法实验步骤：

1：接种细胞：用含10％胎小牛血清得培养液配成单个细胞悬液，以每孔

1000-10000个细

胞接种到96孔板，每孔体积200ul.

2: 培养细胞：同一般培养条件，培养3-5天（可根据试验目的和要求决定培养时间）。

3：呈色：培养3-5天后，每孔加MTT溶液（5mg/ml用PBS配制，pH=7.4)20ul.继续孵育4 h，

终止培养，小心吸弃孔内培养上清液，对于悬浮细胞需要离心后再吸弃孔内培养上清液。

每孔加150ul DMSO，脱色摇床振荡10min，使结晶物充分融解。

4：比色：选择490nm（570nm）波长，在酶联免疫监测仪上测定各孔光吸收值，记录结果，以时间为

横坐标，吸光值为纵坐标绘制细胞生长曲线。

药物MTT法实验步骤

贴壁细胞：（我的主要操作是贴壁细胞）

1: 收集对数期细胞，调整细胞悬液浓度，每孔加入100ul,铺板使待测细胞调密度 1000-

10000 孔，（边缘孔用无菌PBS填充）。

，37℃孵育，至细胞贴壁，加入浓度梯度的药物,原则上，细胞贴壁后2: 5%CO

2

即可加药，或两小时，或半天时间，但我们常在前一天下午铺板，次日上午加药.一般5-7个梯度,每孔100ul,设3-5个复孔.建议设5个，否则难以反应真实情况。

3: 5%CO2，37℃孵育24-72小时，倒置显微镜下观察。

4: 每孔加入20ulMTT溶液（5mg/ml，即0.5%MTT），继续培养4h。若药物与MTT 能够反应，

可先离心后弃去培养液，小心用PBS冲2-3遍后，再加入含MTT的培养液。

5: 终止培养，小心吸去孔内培养液。

6: 每孔加入150ul二甲基亚砜，置摇床上低速振荡10min，使结晶物充分溶解。在酶联免

疫检测仪OD490nm（570nm)处测量各孔的吸光值。

7: 同时设置调零孔即空白组（培养基、MTT、二甲基亚砜），对照孔（细胞、相同浓度的药物溶解介

质、培养液、MTT、二甲基亚砜）。

悬浮细胞：

1: 收集对数期细胞，调节细胞悬液浓度1×106/ml，按次序将①补足的1640（无血清）培养基40ul ；②加Actinomycin D（有毒性）10ul用培养液稀释 (储存液100mg/ml，需预试寻找最佳稀释度，1:10-1:20)；③需检测物10ul；④细胞悬液50ul（即5×104cell/孔），共100ul加入到96孔板（边缘孔用无菌水填充）。每板设对照（加100ml 1640）。

2: 置37℃，5%CO2孵育16-48小时，倒置显微镜下观察。

3: 每孔加入10 ul MTT溶液（5 mg/ml，即0.5%MTT），继续培养4 h。（悬浮细胞推荐使用WST-1，培养4 h后可跳过步骤4），直接酶联免疫检测仪OD570nm （630nm校准）测量各孔的吸光值）

4、离心（1000转x10min），小心吸掉上清，每孔加入100 ul二甲基亚砜，置摇床上低速振荡10 min，使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测仪OD570nm（630nm 校准）测量各孔的吸光值。

5、同时设置调零孔（培养基、MTT、二甲基亚砜），对照孔（细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT、二甲基亚砜），每组设定3复孔。

注意事项：

(1)选择适当得细胞接种浓度。每孔1000-10000个，但是也要看细胞种类和状态。我做的是药物抑制肿瘤细胞生长和增殖，铺过2000至8000个每孔。2000太低，8000过高，对于阴性组高于5000个吸光值就很大，大于1.5。所以对于我自己的A549实验一般选用3000-5000。一般每孔4000个细胞为宜

(2) 避免血清干扰：一般选小于10％的胎牛血清的培养液进行试验。在呈色后尽量吸尽孔内残余培养液。

(3) 设空白对照：与试验平行不加细胞只加培养液的空白对照。其他试验步骤保持一致，最后比色以空白调零。

(4) MTT实验吸光度最后要在0-0.7之间，超出这个范围就不是直线关系。（阴性组在0.8-1.2，加药组在0-0.7.）

(5) 用96孔板培养细胞做MTT测细胞活力,应该加多少1640培养基,多少MTT 和DMSO合适根据书上说的加200ul1640,20ulMTT,150ulDMSO。加DMSO之前要尽量去掉培养液，便于DMSO溶解甲臜颗粒进行比色测定

(6) MTT加20ul，作用四小时后洗掉上清液，注意不要将甲瓉洗掉，然后每孔加150ul DMSO，在脱色摇床上振荡10分钟，然后测吸光值。

(7) 铺板时要保证每孔铺的细胞数目均匀一致，一般每加几孔就混匀一下。我一般是加完一排复孔就混匀一次

分子生物学实验室常用仪器及使用方法

实验指导 目录 实验一分子生物学实验室常用仪器及使用方法实验二质粒DNA的提取－碱裂解法 实验三琼脂糖凝胶电泳 实验四限制性内切核酸酶的酶切与鉴定 实验五大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 实验六动物组织细胞基因组 DNA提取 实验七 DNA的定量 实验八 PCR基因扩增 实验九琼脂糖凝胶电泳分离与纯化目的DNA 实验十 DNA重组 实验十一动物组织细胞总RNA的提取 实验一分子生物学实验室常用仪器及使用

事实证明，在科学飞速发展的今天，无论从事哪个领域的研究，要想突破，除了有良好的理论基础外，更重要的是依赖于先进的技术和优良的仪器设备以及良好的研究环境。一个标准的分子生物学实验室除了具有一般生物学实验室的常规仪器设备外，还具有一些特殊用途的仪器，这些仪器一般较精密，价格昂贵。下面介绍这些仪器的使用方法和注意事项。 一、冷冻离心机 低温分离技术是分子生物学研究中必不可少的手段。基因片段的分离、酶蛋白的沉淀和回收以及其它生物样品的分离制备实验中都离不开低温离心技术，因此低温冷冻离心机成为分子生物学研究中必备的重要仪器。在国内，有多个厂家生产冷冻离心机，本实验室的高速冷冻离心机为GL-20G-Ⅱ型（上海安亭），落地式。配有角式转头：6×50ml、12×10ml和12×1.5ml。极限转速20000rpm。 1. 安装与调试 离心机应放置在水平坚固的地面上，应至少距离10cm以上且具有良好的通风环境中，周围空气应呈中性，且无导电性灰尘、易燃气体和腐蚀性气体，环境温度应在0～30℃之间，相对湿度小于80%。试转前应先打开盖门，用手盘动转轴，轻巧灵活，无异常现象方可上所用的转头。转子准确到位后打开电源开关，然后用手按住门开关，再按运转键，转动后立即停止，并观察转轴的转向，若逆时针旋转即为正确，机器可投入使用。 2. 操作程序 （1）插上电源，待机指示灯亮；打开电源开关，调速与定时系统的数码管显示的闪烁数字为机器工作转速的出厂设定，温控系统的数码管显示此时离心腔的温度。 （2）设定机器的工作参数，如工作温度，运转时间，工作转速等。 （3）将预先平衡好的样品放置于转头样品架上，关闭机盖。 （4）按控制面板的运转键，离心机开始运转。在预先设定的加速时间内，其运速升至预先设定的值。 （5）在预先设定的运转时间内（不包括减速时间），离心机开始减速，其转速在预先设定的减速时间内降至零。 （6）按控制面板上的停止键，数码管显示dedT，数秒钟后即显示闪烁的转速值，这时机器已准备好下一次工作。 3. 注意事项 （1）离心机应始终处于水平位置，外接电源系统的电压要匹配，并要求有良好的接地线，机器不使用，要拔掉电源插头。

微生物实验操作步骤

微生物试验操作步骤 1.前期准备工作（红色字体需要购买） 10ml离心管（80管）、培养皿（预实验36板，正式试验648板，共计684板）、EP管（预实验36管，正式试验108管，144管）、枪头（5ml、1ml、200ul）、生理盐水现配现用（0.85）2.，灭菌处理 将离心管、枪头、生理盐水、培养基放入高压灭菌锅中灭菌处理后待用。 3.制备不同梯度的样品溶液 预实验 a.梯度稀释试验前一天晚上取置于-80℃盲肠食糜样品于4℃冰箱融化，将需要用到的离心管和EP管分别编号待用。试验期间取盲肠食糜0.5~1g于灭菌后的10ml离心管中，按1：10比例加入生理盐水，制成10-1浓度的样品溶液。然后取0.5ml10-1浓度的样品溶液于下一离心管，按1：10比例加入生理盐水，制成10-2浓度的样品溶液。然后然后取0.1ml10-2浓度的样品溶液于EP管中，按1：1010-3比例加入生理盐水，制成10-3浓度的样品溶液。然后依次如上分别配制10-4、10-5、10-6、10-7、10-8样品溶液。每一次取样前离心管和EP管都要在微型振荡器上震荡混匀。 b.接种和培养：按照平板涂布法进行。分别取各稀释管溶液100μl接种到选择性培养基，大肠杆菌选择性培养基置普通培养箱，37℃培养24h。乳酸菌选择性培养基置5%CO2培养箱，37℃培养48h。双歧杆菌选择性培养基置厌氧发酵罐内，37℃培养48h。沙门氏菌选择性培养基置普通培养箱，37℃培养24h。 c. 微生物计数与鉴定：采用常规微生物平板菌落计数法，选择长有30-300个菌落的平板较为合适，用每克肠道内容物中细菌个数的对数表示( 1gCFU /g) 正式试验 按照预实验操作步骤及适宜梯度进行试验。 4.培养基 总需氧菌营养琼脂（NA）34567 乳酸菌MRS琼脂碱性厌氧234567 双歧杆菌BL琼脂厌氧234567产气袋 大肠杆菌麦康凯需氧234567 沙门氏菌XLD 需氧2345

生物实验操作步骤

生物实验操作步骤 一、安装显微镜和对光： A 、操作步骤： 1.一手握住镜臂，一手托住镜座，把显微镜轻轻地放在实验台上，镜臂靠近身体略偏左，镜座距实验台边缘约5厘米。安装好目镜和物镜。 2.转动转换器，使低倍物镜对准通光孔。转动遮光器，使最大的光圈对准通光孔。 3、左眼注视目镜内，同时双手转动反光镜（光强用使用平面镜、光弱使用凹面镜），使光线反射到镜筒里，直到整个视野呈雪白色为止。 4.整理复位：把显微镜的外表擦拭干净。取下镜头放入镜盒内，并将镜筒缓缓下降到最低处。最后把显微镜放进镜箱里，放回原处。 B 、去年考卷： C 、评分标准： （1）安装好物镜和目镜（1分） （2）能将显微镜对好光观察（2分） 记录：雪白色或亮白色（1分） （3）整理器材（1分） 二、制作并观察洋葱鳞片叶临时玻片标本： A 、操作步骤： 1、用干净的纱布把载玻片和盖玻片擦干净。 2、用滴管在载玻片中央滴一滴清水。 3、用刀片在洋葱内表面划一个“井”字，用镊子撕下表皮，然后把它放在载玻片中央的水滴中，用解剖针轻轻地将其展平； 4、用镊子夹起盖玻片，使其一边接触载玻片上面的液滴，然后缓缓地盖在液滴上，盖片时要防止装片上出现气泡； 5、在载玻片的一侧滴一滴碘液，在另一侧用吸水纸吸引，重复几次，使染液浸润到整个标本； 6、安装显微镜和对光； 7、将制作的装片安放在显微镜的载物台上，然后将镜筒缓缓下降直到物镜接近玻片； 8、用左眼注视目镜，调节粗准焦螺旋使镜筒缓缓上升，直到在视野中看到细胞图像，然后旋转细准焦螺旋，使物像更清晰； 9、移动装片，在视野中找到一个完整的细胞进行仔细观察； 10、整理复位：取下玻片标本，平移方式（防止折断盖玻片）取下盖玻片并连同载玻片一起放回原处。取下镜头放入镜盒内，将镜筒下降到最低处，然后把显微镜放进镜箱里。把其他废弃物放入垃圾桶并把实验桌抹干净。 B 、去年考卷： C 、评分标准： （1）用纱布将载玻片、盖玻片擦拭干净（1分） （2）在载玻片中央滴一滴清水（1分） （3）用刀片切取一块洋葱鳞片叶，用镊子撕取鳞片叶的内表皮置于载玻片上清水中并用解剖针将表皮展平，盖上盖玻片（1分） （4）将一滴碘液滴在盖玻片的一侧，用吸水纸从对侧引流使碘液扩散到整个标本（1分） （5）将制作好的临时装片放在显微镜下观察（1分） 记录：气泡（1分） 细胞核（1分） 细准焦螺旋（1分） 左上方（1分） （6）整理器材（1分） 三、制作并观察口腔上皮细胞临时玻片标本： A 、操作步骤： 1、用干净的纱布把载玻片和盖玻片擦干净； 2、用滴管在载玻片中央滴一滴生理盐水； 3、用清水漱口，清除口腔中食物碎屑，用消毒牙签粗的一端在口腔侧壁上轻轻刮几下； 4、将牙签上附着的碎屑放在载玻片的生理盐水中涂抹几下； 用镊子夹起盖玻片让一侧先接触生理盐水在轻轻放平，避免出现 。 你观察到的细胞内染色最深的结构是 如果想让物像更清晰，应转动 。如果物像在视野的左上方，应将玻片标本向 移动，才能使物像移到视野中间。

初中生物实验操作步骤

实验名称：观察植物细胞 1、用洁净的纱布把载玻片和盖玻片擦拭干净 2、把载玻片放在试验台上，用滴管在载玻片的中央滴一滴清水。 3、①用镊子从洋葱鳞片叶内侧撕取一小块透明薄膜内表皮。②把撕下的内表皮浸入载玻片的水滴中，用镊子把它展平。 4、用镊子夹起盖玻片，使它的一边先接触载玻片上的水滴，然后缓缓地放下，盖在要观察的材料上。 5、把一滴稀碘液滴在盖玻片的一侧。染 6、用吸水纸从盖玻片的另一侧吸引，使染液浸润标本的全部。 观察人的口腔上皮细胞 1、用干净的纱布把载玻片和盖玻片擦拭干净。 2、把载玻片放在实验台上，用滴管在载玻片的中央滴一滴生理盐水 3、用凉开水把口漱净。用消毒牙签从口腔侧壁处轻轻刮几下，牙签上就附着了一些碎屑。把牙签放在载玻片的生理盐水滴中均匀地涂抹几下。 4、用镊子夹起盖玻片，使它的一侧先接触载玻片上的液滴，然后缓缓放平。 5、在盖玻片的一侧滴加稀碘液（染），另一侧用吸水纸吸引，使染液浸润到标本的全部。 观察鸡卵的结构 1.取一个鸡卵，观察其外部形态。（放大镜，气孔） 2.将鸡卵的钝段轻轻敲出裂纹，将碎裂的卵壳连同紧贴壳的膜除去，观察鸡卵的气室。（镊子，卵壳，外卵壳膜和气室） 3.用剪刀将气室下的内卵壳膜剪破。（剪刀） 4.将卵壳膜内的卵白和卵黄转移到培养皿中，卵黄完整。（培养皿） 5.观察鸡卵的结构。若未见胚盘，可用镊子夹起细系带把卵黄轻轻翻转。 观察种子的结构 1.观察菜豆种子的结构 ⑴取一粒浸软的菜豆种子，观察它的外形[来源:学|科|网Z|X|X|K] ⑵剥去种子最外面的一层薄皮-------种皮，分开合拢着的两片子叶。 ⑶用放大镜仔细观察子叶.胚根.胚轴和胚芽，看看它们各有什么特点？ 2观察玉米种子的结构 ⑵一粒浸软的玉米种子，观察它的外形。 ⑵用刀片将这粒种子从中央纵向剖开。 剖面上滴一滴碘液，在用放大镜仔细观察被碘液染成蓝色的胚乳以及未被染成蓝色的果皮和种皮，胚芽，胚根，胚轴和子叶，看看它们各有什么特点？ 测定某种食物中的能量 1．取一只锥形瓶（50毫升），量筒量取30毫升水注入其中，再将它固定在铁架台上。 2.再锥形瓶里放入一支温度计（温度计下端要浸入水中，但不要接触锥形瓶的瓶底） 3.参照右图安装好试验装置，并测定水温。 4.称出一粒干燥花生种子的质量，将这粒种子放倒火焰上点燃， 5.将刚刚燃烧的花生种子尽快放倒锥形瓶底部。待这粒花生种子完全燃烧后，测量水温。 6.计算：Q=CM△T=30×4.2×（t2－t1）(把测量的温度代入，得出数据)

生物实验操作步骤

生物 一、A类实验操作练习题 1.用显微镜观察洋葱鳞片叶表皮细胞 实验器材及设置：显微镜、载玻片、盖玻片、吸水纸、纱布、滴管、单面刀片、镊子、清水、稀碘液、解剖针、小块木板、洋葱鳞片叶、擦镜纸（备用）。 [附]显微镜状态:目镜已安装好，最大光圈对准通光孔，转换器上两个物镜位于通光孔两侧，呈外八字形，镜筒降到最低处。 实验要求：（1）制作洋葱鳞片叶表皮细胞临时装片； （2）用显微镜观察洋葱鳞片叶表皮细胞。 方法步骤： （一）、制作洋葱鳞片叶表皮细胞临时装片 1. 准备用洁净的纱布把载玻片和盖玻片擦拭干净；用滴管在载玻片中央滴1-2滴清水。 2. 取材用刀片切取一块洋葱鳞片叶（大约0.5cm2），用镊子撕取洋葱鳞片叶的内表皮；把撕取的表皮浸入载玻片上的水滴中，并展平。 3.盖盖玻片用镊子夹起盖玻片，使它的一边先接触载玻片上

的水滴，然后缓缓地放下，盖在要观察的材料上。 4.染色把一滴碘液滴在盖玻片的一侧，用吸水纸从盖玻片的另一侧吸引，使染液浸润标本全部。 （二）、用显微镜观察洋葱鳞片叶表皮细胞 1.取镜与安放一手握镜臂，一手托镜座，把显微镜放在实验台中央略偏左，距实验台边缘约7cm。 2.对光上升镜筒，转动转换器，使低倍物镜对准通光孔；一只眼注视目镜，另一只眼睁开，同时转动反光镜，使视野明亮。 3.安放玻片将玻片轻放载物台上，标本正对通光孔的中心，用压片夹压住玻片的两端。 4.调焦双手转动粗准焦螺旋，使镜筒缓缓下降，同时眼睛从侧面看着物镜下降，直到物镜接近玻片；一只眼注视目镜，同时转动粗准焦螺旋，使镜筒缓缓上升至视野中出现物像，微调细准焦螺旋使物像清晰。 5.观察移动玻片，将物像移到视野中央，在低倍镜下观察洋葱鳞片叶表皮细胞。 2.用显微镜观察人的口腔上皮细胞 实验器材及设置：显微镜、载玻片、盖玻片、吸水纸、纱布、滴

2017年河南省理化生实验生物实验练习题操作步骤及评分标准

2017年河南省理化生实验生物实验练习题操作步骤及评分标准

生物：A类实验题 1、生物实验题：用显微镜观察洋葱鳞片叶表皮细胞（16分） 实验器材：显微镜（目镜已安装好，最大光圈对准通光孔，转换器上两个物镜位于通光孔两侧，呈外八字形，镜筒降到最低处）、载玻片、盖玻片、吸水纸、纱布、滴管、单面刀片、镊子、解剖针、清水、稀碘液、小块木板、洋葱鳞片叶、污物杯、擦镜纸（备用）。 评分要点分值扣分 （1）准备和取材用洁净的纱布把载玻片和盖玻片擦拭干净（不擦拭扣2分）；用滴管在载 玻片中央滴1-2滴清水（不滴或滴错溶液扣2分）；用刀片切取一块洋葱鳞 片叶或用刀片在洋葱鳞片叶上划“井”字（大约0.5cm2）（在小木块上进 行），用镊子撕取洋葱鳞片叶的内表皮；把撕取的表皮浸入载玻片上的水滴 中，并展平。 4 （2）盖盖玻片用镊子夹起盖玻片，使它的一边先接触载玻片上的液滴，然后缓缓地放下， 盖在要观察的材料上（盖玻片平放扣2分）。 2 （3）染色把1-2滴碘液滴在盖玻片的一侧，用吸水纸从盖玻片的另一侧吸引，使染 液浸润标本的全部（不染色或方法错误扣2分）。 2 （4）取镜与安放一手握镜臂，一手托镜座，把显微镜放在实验台上，距实验台边缘约7cm （单手取镜扣2分）。 2 （5）对光上升镜筒，转动转换器，使低倍物镜对准通光孔（扳物镜转动或用高倍镜 对光均扣2分）；一只眼注视目镜，另一只眼睁开，同时转动反光镜，使视 野明亮。 2 （6）安放玻片 并调焦 将玻片正面朝上轻放载物台上，标本正对通光孔的中心，用压片夹压住玻 片的两端；转动粗准焦螺旋，使镜筒缓缓下降，同时眼睛从侧面看着物镜 下降，直到物镜镜头接近玻片（眼睛不从侧面看着物镜或玻片被压碎均扣 2分）；一只眼注视目镜，同时转动粗准焦螺旋，使镜筒缓缓上升至视野中 出现物像，微调细准焦螺旋使物像清晰。 2 （7）观察移动玻片，将物像移到视野中央，在低倍镜下观察洋葱鳞片叶表皮细胞（看 不到洋葱表皮细胞物像的扣2分）。 2 2、生物实验题：用显微镜观察人的口腔上皮细胞（16分） 实验器材：显微镜（目镜已安装好，最大光圈对准通光孔，转换器上两个物镜位于通光孔两侧，呈外八字形，镜筒降到最低处）、载玻片、盖玻片、吸水纸、纱布、滴管、镊子、消毒牙签(一端尖，一端钝)、一次性杯子、生理盐水（0.9%氯化钠溶液）、稀碘液、污物杯、擦镜纸（备用）。 评分要点分值扣分 （1）准备和取材用洁净的纱布把载玻片和盖玻片擦拭干净；用滴管在载玻片中央滴1-2滴清 水（不擦拭扣2分，不滴或滴错溶液扣2分）；清水漱口后，用消毒牙签在口 腔内侧壁上轻轻刮几下（刮牙缝处的扣一分），把牙签上附有碎屑的一端，放 在载玻片上的生理盐水中涂抹几下 4 （2）盖盖玻片用镊子夹起盖玻片，使它的一边先接触载玻片上的液滴，然后缓缓地放下， 盖在要观察的材料上（盖玻片平放或者未用镊子夹盖玻片均扣2分）。 2 （3）染色把1-2滴碘液滴在盖玻片的一侧，用吸水纸从盖玻片的另一侧吸引，使染液 浸润标本的全部（不染色或方法错误扣2分）。 2 （4）取镜与安放一手握镜臂，一手托镜座，把显微镜放在实验台上，距实验台边缘约7cm（单 手取镜扣2分）。 2 （5）对光转动转换器，使低倍物镜对准通光孔（扳物镜转动或用高倍镜对光均扣2分）； 一只眼注视目镜，另一只眼睁开，同时转动反光镜，使视野明亮。 2

生物实验课流程

生物实验探究课教学环节 (一)自主学习 1．明确目的：在实验前应充分了解设计本实验的背景和原因，让学生明确所做实验要达到的目的是什么。 2．了解原理：通过学习，了解实验依据的原理，并能够在教材中找到理论依据。 3．熟悉实验：熟悉实验步骤、材料和器材，初步弄清设计该实验过程的目的以及在实验过程中应注意的问题等。 (二)合作探究(共六个环节) 1．明确任务，强化要求：实验前教师首先让学生明确本节课应完成的实验任务。进一步强调实验中应注意的问题。 2.组内交流，明确分工：学生在自主学习过程中，对于实验过程中的许多问题存在疑问，教师可引导学生通过小组合作学习进一步明确设计该实验的目的是什么？该实验是教材中哪一部分知识的具体体现？设计某一步骤、某一环节的目的是什么？解决了上述问题后，组内成员可进一步规划好实验程序并做好分工。 3.掌握要点，完成操作：要求学生根据所掌握的实验步骤，结合实验过程中应注意的问题，按程序逐步完成整个实验操作。教师应做巡回指导

4.记录结果，得出结论：采用合适的方式、方法记录每步实验的数据、现象等，实验完成后，归纳形成完整的实验记录。要以实事求是的科学态度正确对待实验结果，得出实验结论。 5.交流体会，升华提高：就学生对实验目的、实验原理和实验过程的理解和把握，特别是通过实验操作过程中成功与失败的分析，进一步明确实验过程中应注意的相关问题。 6.清洁整理，还原环境：将实验用的仪器、药品等整理归位。清除杂物及垃圾，还原实验室的待使用状态。 (三)巩固提升 1.完成实验报告：根据实验过程、结果、结论完成实验报告。 2.拓展思考训练：教师设计少量与本实验相关的拓展性思考题和实验类训练题要求学生限时完成，及时批阅。

生物实验室操作规程

实验室操作规程 一、净化工作台 A：操作步骤 1、使用工作台时，应提前50分钟开机，同时开启紫外杀菌灯，处理操作区内表面积累的微生物，30分钟后关闭杀菌灯（此时日光灯即开启），启动风机。 2、对新安装的或长期未使用的工作台，使用前必需对工作台和周围环镜先用超静真空吸尘器或用不产生纤维的工具进行清洁工作，再采用药物灭菌法或紫外线灭菌法进行灭菌处理。 B：注意事项 1、操作区内不允许存放不必要的物品，保持工作区的洁净气流流型不受干扰。 2、操作区内尽量避免作用明显扰乱气流流型的动作。 3、操作区的使用温度不可以超过60℃。 4、根据环境的洁净程度，可定期（一般2～3个月）将粗滤布（涤纶无纺布）拆下清洗或给予更换。 5、定期（一般为一周）对环境周围进行灭菌工作，同时经常用纱布沾酒精或丙酮等有机溶剂将紫外线杀菌灯表面擦干净，保持表面清洁，否则会影响杀菌效果。 6、定期（一般二月一次）用QDF-2型热球式电风速计测量工作区平均风速，如发现不符合要求，可调节风机供电电压，使工作台处于最佳工况。

二、立式压力蒸汽灭菌器 A:操作步骤 1、旋转手轮拉开外桶盖，取出灭菌网篮，取出档水板关紧放水阀，每次灭菌前必须加入蒸馏水至刚浸到灭菌器内的筛板底部为准。 2、放回档水板和灭菌网篮，将被灭菌物品包扎好后，顺序地放在灭菌器内的筛板上。 3、推进外桶盖，顺时针方向旋转手轮旋紧外桶盖，使盖与桶体密合，注意不宜旋得太紧，以免损坏橡胶密封垫圈。 4、用橡胶管一端连接在放气管上，另一端插入装有冷水的容器里，关紧手动放气阀 (顺时针关紧，逆时针打开)。 5、开启电源开关接通电源，数显控制仪显示。此时可开始设定温度和灭菌时间，设定方法：按一下“设定"键，用▲▼设定温度值(℃)，再按一下“设定”键，用▲▼设定定时时间(分钟)，再按一下“设定”键，用▲▼校正温度，可输入密码，再按“设定”键即可进入修改校正温度值，如果不输入密码或密码有误，再按一下“设定”键，自动返回到温度显示，完成设定；按一下“工作”键，“工作”指示灯亮，系统正常工作，进入自动控制灭菌过程；若门未关闭，按“工作”键，加热器电源不工作。 6、在加热升温过程中，当温控仪显示温度小于102度时，由温控仪控制的电磁阀将自动放汽，排除灭菌桶内的冷空气，大于102度时，自动停止放气，此时如还在大量放气，则手动放气阀未关紧，应及时把

中考生物实验操作步骤

中考生物实验操作步骤 1、手持载玻片两端，用洁净的纱布将载玻片和盖玻片擦拭干净。放置桌面。《洋葱表皮细胞》《番茄细胞》《人的口腔上皮细胞》 2、用滴管在载玻片中央滴一滴清水。 3、用刀片在洋葱内侧画出“井”，用镊子取薄而透明的内表皮。 4、将私下的内表皮浸入载玻片的水滴中，并用镊子展平。 2、用滴管在载玻片中央滴一滴清水， 3、用解剖针在番茄果肉上挑取。 4、将解剖针上的果肉涂抹在载玻片的水滴中。 2、用滴管在载玻片中滴一滴生理盐水。 3、用牙签的钝头轻挂口腔内壁。 4、将牙签钝头涂抹在载玻片的水滴中 5、用镊子夹取盖玻片，使他的一边先接触水滴，然后再缓缓放下。如有小气泡，用镊子轻轻按压盖玻片赶走小气泡。 6、在盖玻片的一侧滴一滴稀碘液，用吸水纸在另一侧吸，让稀碘液浸透整个标本。这一步骤可重复三次。 7、用吸水纸吸走多余的水。使用显微镜： 1、右手握住镜臂，左手托住镜座。把显微镜放在桌上偏左的位置。

2、选择（*10）的目镜安放。转动转换器，选择（*10）物镜对准通光孔。 3、转动遮光器，使大光圈对准通光孔。 4、眼睛看目镜，双手转动反光镜，看到一片白亮的视野 5、做好的标本放到载物台，用压片夹夹住标本。 6、双眼睛看物镜，双手旋转粗准焦螺旋向下，将物镜降到最低。 7、左眼看目镜，双手缓慢旋转粗准焦螺旋向上，直到看见标本细胞。在调节细准焦螺旋，使图像更加清晰。 8、双手慢慢移动拨片标本，选取最清楚最完整气泡较少的图像。 9、举手示意老师看图像。画图：（用铅笔） 1、左眼看显微镜，右眼看试卷，用铅笔绘出细胞外形。内壁结构全用点“、”表示。 2、用尺子打出向右的横线，对齐。标出格结构名称。 3、在画图的正下方表明结构图总体名称（看试卷题目） ****细胞结构简图整理： 1、双手取下标本，冲洗载玻片和盖玻片，用纱布擦干，放回原处。 2、转动转换器，使两个物镜均朝外。转动粗准焦螺旋，镜筒降到最低，反光镜垂直桌面。放回原处。

实验室分子生物学实验基本操作要求规范及注意事项

实验室分子生物学实验基本操作规范及注意事项 一、酶与载体的分装 酶类与载体：T载体(50 ng/μl)用灭菌水稀释4倍（12.5 ng/μl）后分装成10 μl或20 μl； 连接酶（solutionΙ）按5 μl分装； dNTP（10 mM）分装成50 μl； 无菌水分装成1 ml； 注意：（1）所有分装都必须用已灭菌的管。 （2）所有工具酶和载体的使用过程均在冰浴中进行。 （3）工具酶、载体以及试剂盒等实验室共用物品，用完后必须及时放回原处，以免耽误他人使用。 （4）当你发现你使用的是最后一管（盒）公用物品时，请马上告知负责人购买，以免耽误使用。 （5）感受态，氨苄青霉素和IPTG由研究生轮流负责制备。每人负责六个月。其他试剂则由第一位使用新包装的同学分装。由于分子实验工具酶比较容易失活，必须在冰上进行分装。 二、常见抗生素及IPTG的配置 以氨苄青霉素为例： 1．准备足够量的1.5 ml的EP管、两个100 ml的离心管、0.22 μm水系滤器、注射器、蒸馏水，以上用品均要进行高压灭菌。 2. 洁净工作台紫外灭菌，然后进行以下操作。 3．称取2 g的氨苄青霉素粉末于离心管中，加入灭菌水至总体积为20 ml，轻摇离心管，至氨苄青霉素粉末完全溶解，以免过滤时堵塞滤膜。 4．用注射器吸取配制好的溶液，然后把滤器安在注射器上，缓缓推动注射器活塞，把溶液经滤膜推至100 ml的离心管中。 注意：动作要缓和，使滤出液出口正对着离心管，还要防止染菌。

5．把100 ml离心管中已除菌的氨苄青霉素溶液分装到1.5 ml的EP管中，每管 0.5 ml。在EP管上做好标记，包括名称、浓度、日期等。 6．把做好标记的盛有氨苄青霉素的EP管于-20℃保存。 注意：当你发现你使用的是最后一管抗生素时，请马上告知有关人员及时配制，以免耽误使用。 表1.常见抗生素的储存浓度及工作浓度 名称储存浓度工作浓度 氨苄青霉素（ampicillin）100 mg/ml 50 μg/ml～100 μg/ml 卡那霉素（kanamycin）10 mg/ml 10 μg/ml～50 μg/ml 氯霉素（chloramphenicol）25 mg/ml 12.5 μg/ml～25 μg/ml 链霉素（streptomycin）50 mg/ml 10 μg/ml～50 μg/ml 四环素（tetracyyline）10 mg/ml10 μg/ml～50 μg/ml IPTG 1 M 0.05-0.6 mM

中考生物实验操作

中考生物实验操作 一、认识显微镜的结构 目的要求:1,认识显微镜的结构2,按正确的操作步骤练习使用显微镜 方法步骤:1,打开镜箱,右手握住镜臂,左手托住镜座,从镜箱中取出显微镜,小心地置于实验桌偏左侧,依次辨认各部分结构名称: (1)支持部分:镜座,镜柱,镜臂、载物台,镜筒,转换器 (2)光学部分:遮光器、反光镜、物镜,目镜 (3)调节部分:粗准焦螺旋,细准焦螺旋 2,按下列操作要领进行显微镜操作: (1)安放(同1)。(2)对光①转动转换器,使低倍物镜正对通光孔。②转动粗准焦螺旋,使物镜与载物台距离约2厘米。③转动遮光器,让一个较大的光圈对准通光孔,让反光镜朝向光源。④用左眼向目镜里注视,可见一个明亮的圆形视野。 (3)观察①低倍观察: 把装片或切片放在载物台上,使标本正对通光孔,用压片夹压住。两眼注视着物镜,慢慢地转动粗准焦螺旋;使镜筒下降直到物镜接近装片为止。用左眼向目镜里注视(右眼也要睁开),同时反方向转动粗准焦螺旋,使镜筒徐徐上升,直到看清物象为止。转动细准焦螺旋调至物象清晰,调节光圈至视野亮度适宜。 ②高倍观察: 移动装片或切片,把选好欲再放大的部分(目标)移到视野正中央, 转动转换器,让高信物镜对准通光孔;调节细准焦螺旋至物象清晰. 备注说明: 1、使用显微镜应注意保护好镜头,不要用手抚摸透镜,载物台应保持清洁,不要随意转动准焦螺旋和转换器。 2,观察完毕,小心移出装片,转动换转器将物镜偏至两侧,使镜筒垂直下降,小心放入镜箱中固定好,以备下次实验用。 二、洋葱表皮细胞临时装片的制作 目的要求 1、初步训练制作临时装片及简单的染色方法2,初步学会画细胞简图 材料用具:显微镜,刀子、镊子,载玻片、盖玻皮、碘液,吸水纸,滴管,纱布,洋葱头 方法步骤 1、制作临时装片 ①把载玻片、盖玻片用纱布擦干净。 ②用滴管在载玻片中央滴一滴清水。 ③用刀片在洋葱鳞片叶的内表面划一个小方块。 ④用镊子撕下这方表皮,平展在载玻片的水滴中。 ⑤用镊子夹起盖玻片,一侧先接触载玻片后轻放平,以免产生气泡。 2、显微镜下低倍观察,辨认出细胞的主要组成结构 3、染色观察 ①在盖玻片的一侧滴加碘液,另一侧用吸水纸吸水,使染色液浸入标本之中②置于显微镜下观察。 4、绘出细胞简图,注明结构名称。 实验现象1、观察可见,洋葱表皮细胞排列整齐,每个细胞都有明显的细胞壁、细胞质、细胞核和液泡2、染色后观察可见,液泡,细胞核等结构更加清楚。 结果分析植物细胞是由细胞壁、细胞膜(紧贴在细胞壁上不易辨认),细胞质内有大的液泡)和细胞核组成的。 三、、种子成分的测定

2018年六安市中考生物实验操作考试试题及实验报告评分标准(含步骤).doc

实验步* 1.制作人的口腔上皮细 胞临时装片 ③用消毒牙签在已漱净的口腔内侧壁上轻刮几下 ④把牙签附有碎屑的一端在生理盐水中轻涂几下 2.用显微镜观察人的口 腔上皮细胞 ①对光正确 ②会使用粗准焦螺旋和细准焦螺旋，看清物像 3.绘图与记录 绘制人的口腔上皮细胞图，标注各部分名称 4.清洁实验桌 实验完毕把显微镜整理好放回原处，清洗、整理材料用具 评分细则 实验步骤 操作过程和记录 分值 1.制作人的口腔 上 皮细胞临时装片 ③用消毒牙签在巳漱净的口腔内侧壁上轻刮几下 ④把牙签附有碎屑的一端在生理盐水中轻涂几下 2.用显微镜观察 人 的口腔上皮细胞 ①对光正确 ②会使用粗准焦螺旋和细准焦螺旋，看清物像 3.绘图与记录 绘制人的口腔上皮细胞图，标注各部分名称 4.清洁实验桌 用显微镜观察人的口腔上皮细胞 材料用具：显微镜，载玻片，盖玻片，镇子，消毒牙签，滴管，纱布，生理盐水，稀 碘液, 吸水纸。 实验步骤: 操作过程和记录 ①用洁净的纱布擦拭载玻片和盖玻片 ②用滴管在载玻片中央滴一滴生理盐水 ⑤正确盖上盖玻片 ⑥正确染色 ①用洁净的纱布擦拭载玻片和盖玻片 ②用滴管在载玻片中央滴一滴生理盐水 ⑤正确盖上盖玻片 ⑥正确染色 实验完毕把显微镜整理好放回原处，清洗、整理材料用具

题目：用显微镜观察洋葱表皮细胞 实验内容要点： 1?制作临时装片；2.用显微镜观察细胞的结构 实验材料用具：洋葱、显微镜(安装好放在实验台上)、洁净的载玻片和盖玻片、锡子、滴管、碘液、刀片、吸水纸、清水、干净的妙布。 实验要求： L制作洋葱表皮细胞的临时装片 (1 )用滴管吸取清水，在载玻片中央滴一滴清水； (2 )在洋葱鳞片叶上用刀片划一边长约为0.5cm的小方块，用锡子撕取表皮； (3)将洋葱表皮放在水滴中，用锡子展平； (4 )盖上盖玻片，并用碘液染色。 2、用低倍镜观察洋葱表皮细胞 (1 )正确对光； (2)安放临时装片，调节粗准焦螺旋找到物像； (3)调节细准焦螺旋，观察洋葱表皮细胞。 3、绘图根据所观察的物像，在下面空白处按照生物图的常规要求绘制洋葱表皮细胞简图(绘图结束后请举手示意考评教师查看显微镜下的图像) (实验完毕，清洁整理材料用具、实验台) B卷■■观察洋葱表皮细胞 考核点分值准备用洁净纱布擦拭清洁载玻片和盖玻片，在载玻片中央滴一滴清水1分 制作装片 1 .在洋葱鳞片叶上用刀片划出一边长约为0.5cm的小方块，用撮子撕取表皮，将洋葱表皮放在水滴中，用锡子展平 2.用锡子夹住盖玻片一端，使另一端先接触水滴，并缓缓盖上，无气泡 4 染色用滴管滴一滴碘液在盖玻片一侧，用吸水纸从盖玻片的另一侧吸引，使染色液浸润全部标本，重复2?3次 1 用低倍镜观察细胞1. 对光方法正确，视野明亮 2. 安放装片正确,调节粗准焦螺旋，在视野中央能找到物像 3. 调节细准焦螺旋，使物像清晰，能分辨细胞结构 6 绘图根据所观察的物像，绘制一个洋葱表皮细胞结构简图，各结构标注正确 2

初中生物：实验操作步骤

生物实验名称：观察植物细胞 1、用洁净的纱布把载玻片和盖玻片擦拭干净 2、把载玻片放在试验台上，用滴管在载玻片的中央滴一滴清水。 3、①用镊子从洋葱鳞片叶内侧撕取一小块透明薄膜内表皮。②把撕下的内表皮浸入载玻片的水滴中，用镊子把它展平。 4、用镊子夹起盖玻片，使它的一边先接触载玻片上的水滴，然后缓缓地放下，盖在要观察的材料上。 5、把一滴稀碘液滴在盖玻片的一侧。染 6、用吸水纸从盖玻片的另一侧吸引，使染液浸润标本的全部。 观察人的口腔上皮细胞 1、用干净的纱布把载玻片和盖玻片擦拭干净。 2、把载玻片放在实验台上，用滴管在载玻片的中央滴一滴生理盐水 3、用凉开水把口漱净。用消毒牙签从口腔侧壁处轻轻刮几下，牙签上就附着了一些碎屑。把牙签放在载玻片的生理盐水滴中均匀地涂抹几下。 4、用镊子夹起盖玻片，使它的一侧先接触载玻片上的液滴，然后缓缓放平。 5、在盖玻片的一侧滴加稀碘液（染），另一侧用吸水纸吸引，使染液浸润到标本的全部。 观察鸡卵的结构 1.取一个鸡卵，观察其外部形态。（放大镜，气孔） 2.将鸡卵的钝段轻轻敲出裂纹，将碎裂的卵壳连同紧贴壳的膜除去，观察鸡卵的气室。（镊子，卵壳，外卵壳膜和气室） 3.用剪刀将气室下的内卵壳膜剪破。（剪刀） 4.将卵壳膜内的卵白和卵黄转移到培养皿中，卵黄完整。（培养皿） 5.观察鸡卵的结构。若未见胚盘，可用镊子夹起细系带把卵黄轻轻翻转。 观察种子的结构 1.观察菜豆种子的结构 ⑴取一粒浸软的菜豆种子，观察它的外形[来源:学|科|网Z|X|X|K] ⑵剥去种子最外面的一层薄皮-------种皮，分开合拢着的两片子叶。 ⑶用放大镜仔细观察子叶.胚根.胚轴和胚芽，看看它们各有什么特点？ 2观察玉米种子的结构 ⑵一粒浸软的玉米种子，观察它的外形。 ⑵用刀片将这粒种子从中央纵向剖开。 剖面上滴一滴碘液，在用放大镜仔细观察被碘液染成蓝色的胚乳以及未被染成蓝色的果皮和种皮，胚芽，胚根，胚轴和子叶，看看它们各有什么特点？ 测定某种食物中的能量 1．取一只锥形瓶（50毫升），量筒量取30毫升水注入其中，再将它固定在铁架台上。 2.再锥形瓶里放入一支温度计（温度计下端要浸入水中，但不要接触锥形瓶的瓶底） 3.参照右图安装好试验装置，并测定水温。 4.称出一粒干燥花生种子的质量，将这粒种子放倒火焰上点燃， 5.将刚刚燃烧的花生种子尽快放倒锥形瓶底部。待这粒花生种子完全燃烧后，测量水温。

免疫共沉淀Co-IP实验操作步骤教学内容

免疫共沉淀Co-IP实验操作步骤 一、原理： 免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。其原理是：当细胞在非变性条件下被裂解时，完整细胞内存在的许多蛋白质－蛋白质间的相互作用被保留了下来。如果用蛋白质X的抗体免疫沉淀X，那么与X在体内结合的蛋白质Y也能沉淀下来。目前多用精制的prorein A预先结合固化在argarose的beads 上，使之与含有抗原的溶液及抗体反应后，beads上的prorein A就能吸附抗原达到精制的目的。这种方法常用于测定两种目标蛋白质是否在体内结合；也可用于确定一种特定蛋白质的新的作用搭档。 其优点为：（1）相互作用的蛋白质都是经翻译后修饰的，处于天然状态；（2）蛋白的相互作用是在自然状态下进行的，可以避免人为的影响；（3）可以分离得到天然状态的相互作用蛋白复合物。缺点为：（1）可能检测不到低亲和力和瞬间的蛋白质－蛋白质相互作用；（2）两种蛋白质的结合可能不是直接结合，而可能有第三者在中间起桥梁作用；（3）必须在实验前预测目的蛋白是什么，以选择最后检测的抗体，所以，若预测不正确，实验就得不到结果，方法本身具有冒险性。 二、准备工作： 预冷PBS，RIPA Buffer，细胞刮子（用保鲜膜包好后，埋冰下），离心机 1. 用预冷的PBS洗涤细胞两次，最后一次吸干PBS；

2. 加入预冷的RIPA Buffer(1ml/107个细胞、10cm培养皿或150cm2培养瓶， 0.5ml/5×106个细胞、6cm培养皿、75cm2培养瓶) 3. 用预冷的细胞刮子将细胞从培养皿或培养瓶上刮下，把悬液转到1.5EP管中，4℃，缓慢晃动15min（EP管插冰上，置水平摇床上） 4. 4℃，14000g离心15min，立即将上清转移到一个新的离心管中 5. 准备Protein A agarose，用PBS 洗两遍珠子，然后用PBS配制成50%浓度，建议减掉枪尖部分，避免在涉及琼脂糖珠的操作中破坏琼脂糖珠 6. 每1ml总蛋白中加入100μl Protein A琼脂糖珠（50%），4℃摇晃10min（EP管插冰上，置水平摇床上），以去除非特异性杂蛋白，降低背景 7. 4℃，14000g离心15min，将上清转移到一个新的离心管中，去除Protein A珠子 8. (Bradford 法)做蛋白标准曲线，测定蛋白浓度，测前将总蛋白至少稀释1：10倍以上，以减少细胞裂解液中去垢剂的影响（定量，分装后，可以在-20℃保存一个月） 9. 用PBS将总蛋白稀释到约1 μg/μl，以降低裂解液中去垢剂的浓度，如果兴趣蛋白在细胞中含量较低，则总蛋白浓度应该稍高（如10 μg/μl） 10. 加入一定体积的兔抗到500μl总蛋白中，抗体的稀释比例因兴趣蛋白在不同细胞系中的多少而异 11. 4℃缓慢摇动抗原抗体混合物过夜或室温2h，激酶或磷酸酯酶活性分析建议用2 h 室温孵育

初中生物实验操作考查说明)

通知 各中学、陈利学校、安溪茶校： 现将修定后的《安溪县初中生物实验操作考查说明》 发给你们，请遵照执行。 安溪县招生考试中心 二○一二年二月十四日

安溪县初中生物实验操作考查说明 （试行） 安溪县教育局 2012年2月

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安溪县初中生物实验操作考查标准 （试行） 一、实验考查说明 1．实验考查的范围。根据教育部《全日制义务教育生物课程标准（实验稿）》、福建省教育厅《2011年福建省初中学业考试大纲》和泉州市教育局《2011年福建省泉州市初中毕业、升学考试 说明》，结合我县初中教学实际，确定考查范围，具体如下：（1） 练习使用显微镜；（2）制作洋葱表皮临时装片；（3）观察解剖鸡翅；（4）观察种子的结构；（5）观察猪小肠的结构；（6）观察血细胞；（7）探究骨的成分和特性；（8）观察鸡卵的结构。 2．实验操作着重考查学生的观察技能和实验操作技能。 3．实验操作每个考查要点都是实验操作中的具体细节要求。 4．实验操作考查评分时，实验习惯占10%。实验习惯，是学 生应有的基本实验素质，也是每次实验中必须做到的基本要求，具 体为：（1）应以严谨认真、实事求是的科学态度对待实验，有条不 紊地进行操作；（2）爱护实验仪器、爱惜实验材料等实验用品；（3）实验完毕后应将所用材料用具进行整理，保持实验桌面整洁；（4）遵守实验室纪律等。 二、实验考查实施 1.每位考生只需参加一个实验考查，实验操作考查时考生凭准 考证进入考场，按单人单桌进行，独立完成操作、记录和简单处理 实验数据，考查的时间为15分钟。

2.试题确定 考前半天，测试组从本材料提供的样题中随机抽取3个试题，并通知学校和考点；考前30分钟，由考生随机抽取1个试题参加 考查。 3.监考教师由教育局统一抽调，每一位监考教师一次负责4-6 位考生的监考，并依据评分标准当场评定成绩。 4．成绩评定：试题满分10分，每道试题有4-7个评分点，监考教师根据考生的完成情况按评分点给分。得分达6分（含6分）以上者为：“合格”，5分（含5分）以下者为“不合格”。

微生物实验中的接种分离和培养操作步骤

微生物实验中的接种、分离和培养操作步骤 微生物实验中的接种、分离和培养操作步骤 一、目的要求 1、掌握各种分离、接种方法。 2、掌握无菌操作基本环节。 二、实验说明 微生物在自然界中呈混杂状态存在，要获得所需菌种，必需从中把它们分离出来。在保存菌种时不慎受到到污染也需予以分纯。微生物分离和纯化的方法很多，但基本原理却是相似的，即将待分离的样品进行一定的稀释，并使微生物的细胞（或孢子）尽量以分散状态存在，然后使其长成一个个纯种单菌落。然而上述工作又离不开接种，即将一种微生物移到另一灭过菌的培养基上的过程。 三、实验材料 1、恒温培养箱。 2、接种环、玻璃棒、吸管、酒精灯。 3、培养基（上次实验配制的）。 4、大肠杆菌、枯草杆菌、金黄色葡萄球菌、酵母菌。 四、方法步骤

（一）接种的操作 1、斜面接种（接金黄葡萄球菌） （1）操作前，先用75%酒精擦手，待酒精挥发后点燃酒精灯。 （2）将菌种管和斜面握在左手大姆指和其它四指之间，使斜面和有菌种的一面向上，并处于水平位置。 （3）先将菌种和斜面的棉塞旋转一下，以便接种时便于拔出。 （4）左手拿接种环（如握钢笔一样），以火焰上先将环端烧红灭菌，然后将有可能伸入试管其余部位也过火灭菌。 （5）用右手的无名指、小指和手掌将菌种管和待接斜面试管的棉花塞或试管帽同时拔出，然后让试管口缓缓过火灭菌（切勿烧过烫）。 （6）将灼烧过的接种环伸入菌种管内，接种环在试管内壁或未长菌苔的培养基上接触一下，让其充分冷却，然后轻轻刮取少许菌苔，再从菌种管内抽出接种环。 （7）迅速将沾有菌种的接种环伸入另一支待接斜面试管。从斜面底部向上作“Z”形来回密集划线。有时也可用接种针仅在培养基的中央拉一条线来作斜面接种，以便观察菌种的生长特点。。 （7）迅速将沾有菌种的接种环伸入另一支待接斜面试管。从斜面底部向上作“Z”形来回密集划线。有时也可用接种针仅在培养基的中央拉一条线来作斜面接种，以便观察菌种的生长特点。 （8）接种完毕后抽出接种环灼烧管口，塞上棉塞。 （9）将接种环烧红灭菌。放下接种环，再将棉花塞旋紧。 2、液体接种

生物实验操作步骤

1.用显微镜观察洋葱鳞片叶表皮细胞 实验器材及设置：显微镜、载玻片、盖玻片、吸水纸、纱布、滴管、单面刀片、镊子、清水、稀碘液、解剖针、小块木板、洋葱鳞片叶、擦镜纸（备用）。 [附]显微镜状态:目镜已安装好，最大光圈对准通光孔，转换器上两个物镜位于通光孔两侧，呈外八字形，镜筒降到最低处。 实验要求：（1）制作洋葱鳞片叶表皮细胞临时装片； （2）用显微镜观察洋葱鳞片叶表皮细胞。 方法步骤： （一）、制作洋葱鳞片叶表皮细胞临时装片 1. 准备用洁净的纱布把载玻片和盖玻片擦拭干净；用滴管在载玻片中央滴1-2滴清水。 2. 取材用刀片切取一块洋葱鳞片叶（大约2），用镊子撕取洋葱鳞片叶的内表皮；把撕取的表皮浸入载玻片上的水滴中，并展平。 3.盖盖玻片用镊子夹起盖玻片，使它的一边先接触载玻片上的水滴，然后缓缓地放下，盖在要观察的材料上。 4.染色把一滴碘液滴在盖玻片的一侧，用吸水纸从盖玻片的另一侧吸引，使染液浸润标本全部。 （二）、用显微镜观察洋葱鳞片叶表皮细胞 1.取镜与安放一手握镜臂，一手托镜座，把显微镜放在实验台中央略偏左，距实验台边缘约7cm。 2.对光上升镜筒，转动转换器，使低倍物镜对准通光孔；一只眼注视目镜，另一只眼睁开，同时转动反光镜，使视野明亮。 3.安放玻片将玻片轻放载物台上，标本正对通光孔的中心，用压片夹压住玻片的两端。 4.调焦双手转动粗准焦螺旋，使镜筒缓缓下降，同时眼睛从侧面看着物镜下降，直到物镜接近玻片；一只眼注视目镜，同时转动粗准焦螺旋，使镜筒缓缓上升至视野中出现物像，微调细准焦螺旋使物像清晰。 5.观察移动玻片，将物像移到视野中央，在低倍镜下观察洋葱鳞片叶表皮细胞。

实验室分子生物学实验基本操作要求规范及注意事项

实验室分子生物学实验基本操作规及注意事项 一、酶与载体的分装 酶类与载体：T载体(50 ng/μl)用灭菌水稀释4倍（12.5 ng/μl）后分装成10 μl或20 μl； 连接酶（solutionΙ）按5 μl分装； dNTP（10 mM）分装成50 μl； 无菌水分装成1 ml； 注意：（1）所有分装都必须用已灭菌的管。 （2）所有工具酶和载体的使用过程均在冰浴中进行。 （3）工具酶、载体以及试剂盒等实验室共用物品，用完后必须及时放回原处，以免耽误他人使用。 （4）当你发现你使用的是最后一管（盒）公用物品时，请马上告知负责人购买，以免耽误使用。 （5）感受态，氨苄青霉素和IPTG由研究生轮流负责制备。每人负责六个月。其他试剂则由第一位使用新包装的同学分装。由于分子实验工具酶比较容易失活，必须在冰上进行分装。 二、常见抗生素及IPTG的配置 以氨苄青霉素为例： 1．准备足够量的1.5 ml的EP管、两个100 ml的离心管、0.22 μm水系滤器、注射器、蒸馏水，以上用品均要进行高压灭菌。 2. 洁净工作台紫外灭菌，然后进行以下操作。 3．称取2 g的氨苄青霉素粉末于离心管中，加入灭菌水至总体积为20 ml，轻摇离心管，至氨苄青霉素粉末完全溶解，以免过滤时堵塞滤膜。 4．用注射器吸取配制好的溶液，然后把滤器安在注射器上，缓缓推动注射器活塞，把溶液经滤膜推至100 ml的离心管中。 注意：动作要缓和，使滤出液出口正对着离心管，还要防止染菌。

5．把100 ml离心管中已除菌的氨苄青霉素溶液分装到1.5 ml的EP管中，每管 0.5 ml。在EP管上做好标记，包括名称、浓度、日期等。 6．把做好标记的盛有氨苄青霉素的EP管于-20℃保存。 注意：当你发现你使用的是最后一管抗生素时，请马上告知有关人员及时配制，以免耽误使用。 表1.常见抗生素的储存浓度及工作浓度 名称储存浓度工作浓度 氨苄青霉素（ampicillin）100 mg/ml 50 μg/ml～100 μg/ml 卡那霉素（kanamycin）10 mg/ml 10 μg/ml～50 μg/ml 氯霉素（chloramphenicol）25 mg/ml 12.5 μg/ml～25 μg/ml 链霉素（streptomycin）50 mg/ml 10 μg/ml～50 μg/ml 四环素（tetracyyline）10 mg/ml10 μg/ml～50 μg/ml IPTG 1 M 0.05-0.6 mM