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非变性非还原蛋白凝胶电泳

A: Loading buffer for gel:

From Dr. Chen Q. (6X)

Glycerol 20%

Bromophenol blue small bit (0.1%) 0.2%

Do not boil the samples!

C: SDS-PAGE Stacker Gel

D: SDS Running buffer for 1 liter (10X)pH 8.3

Tris 30 g

Glycine 188 g

SDS 10 g

Bring up to 1 L with dH2O

Dilute to 1x with dH2O when used.

E: PAGE Program

(1)Assemble the gel kit

(2)Pour the separating gel mixture between the plates ( about 2/3 of the way up) and overlay

with water or isobutanol (better than water，异丁醇)(异丙醇也可)

(3)Leave to set and then wash off the water

(4)Pour on the stacking gel mix and insert the comb then leave to set

(5)Transfer to the running apparatus and pour in the running buffer

(6)Remove the comb and load the sample (20 μg/lane)

(7)Run the gel @ 50V through the stacking gel, then 100V through the separating gel.

D: staining:

凝胶用考马斯亮蓝染液室温温和摇动染色0.5个小时，然后经脱色液脱色2小时，去离子水洗净余液即可。

RNA的变性电泳原理

RNA的琼脂糖凝胶电泳实验原理 RNA电泳可以在变性及非变性两种条件下进行。非变性电泳使用1.0%--1.4%的凝胶，不同的RNA条带也能分开，但无法判断其分子量。只有在完全变性的条件下，RNA的泳动率才与分子量的对数呈线性关系。因此要测定RNA分子量时，一定要用变性凝胶。在需快速检测所提总RNA样品完整性时，配制普通的1%琼脂糖凝胶即可。基本过程同DNA电泳一样，但应明确一点的是，因为RNA分子对RNA酶的作用非常敏感，因此必须用对RNA酶有抑制作用DEPC水来配置所有溶液，所有与RNA接触的仪器和装置都要严格处理以尽量减少RNA酶对样品的降解；另外，因为RNA分子有二、三级结构可以影响其电泳结果，因此电泳时应在变性剂存在下进行，常用的变性剂为甲醛和戊二醛。 RNA非变性琼脂糖凝胶检测实验材料、器具及药品蘑菇的总RNA溶液。电泳仪，电泳槽，电子天平，移液器，枪头，微波炉，紫外透射检测仪等。琼脂糖，1XTAE电泳缓冲液，0.5μg/ml溴化乙锭（EB）10X载样缓冲液。实验步骤（1）用1×TAE电泳缓冲液制作琼脂糖凝胶，加1×TAE电泳缓冲液至液面覆盖凝胶。（2）在超净工作台上，用移液器吸取总RNA样品4 ul于封口膜上。在实验台上再加入5 ul 1×TAE电泳缓冲液及1 ul 的10X载样缓冲液，混匀后，小心加入点样孔。（3）打开电源开关，调节电压至100V，使RNA由负极向正极电泳，约30min后将凝胶放入EB染液中染色5min,用清水稍微漂洗。在紫外透射检测仪上观察RNA电泳结果。

非变性电泳：上样量超过3ug，电压超过6V/cm，电泳缓冲液时间太长，均可能导致28S 和18S 条带分不开。使用2ug 上样量，电压小于6V/cm，使用新鲜的电泳缓冲液并且频繁混匀两极的缓冲液，是获得好的电泳结果的前提。(以DNA 标准为参照，28S 和18S 分别位于2.0kb 和0.9kb 左右。) 变性电泳条带变淡：EB 与单链的结合能力要差一些，故同样的上样量，变性电泳比非变性电泳要淡一些。另外的可能是甲醛的质量不高。 RNA的变性琼脂糖凝胶检测试剂：（1）MOPS缓冲液（10*）:0.4mol/L 吗啉代丙烷磺酸（MOPS）(PH7.0)，0.1mol/L NaAc, 10mol/L EDTA。（2）上样染料：50%甘油，1mmol/L EDTA ,0.4%溴酚蓝，0.4%二甲苯蓝。（3）甲醛。（4）去离子甲酰胺。

大学《生物化学》蛋白质习题参考答案复习课程

精品文档精品文档《第五章蛋白质》习题一、单选题 1.某一溶液中蛋白质的百分含量为55% ，此溶液的蛋白质氮的百分浓度为( A ) (A) 8.8% (B) 8.0% (C) 8.4% (D) 9.2% (E) 9.6% 2.属于碱性氨基酸（即R基团带正电的氨基酸）的是( C ) (A) 天冬氨酸 (B) 异亮氨酸 (C) 组氨酸 (D) 苯丙氨酸 (E) 半胱氨酸 3.维系蛋白质二级结构稳定的作用力是( E ) (A) 盐键 (B) 二硫键 (C) 肽键 (D) 疏水键 (E) 氢键 4.下列有关蛋白质一级结构的叙述，错误的是( B ) (A) 多肽链中氨基酸的排列顺序 (B) 多肽链的空间构象 (C) 包括二硫键的位置 (D) 蛋白质一级结构并不包括各原子的空间位置 5.下列有关谷胱甘肽的叙述正确的是( B ) (A) 谷胱甘肽中含有胱氨酸 (B) 谷胱甘肽中谷氨酸的α- 羧基是游离的 (C) 谷胱甘肽是体内重要的氧化剂 (D) 谷胱甘肽是二肽 6.关于蛋白质二级结构错误的描述是( D ) (A) 蛋白质局部或某一段肽链有规则的重复构象 (B) 二级结构是蛋白质分子中多肽链的折叠方式 (C) β-转角属二级结构范畴 (D)二级结构是指整条多肽链中全部氨基酸的空间位置 7.有关肽键的叙述，错误的是( D ) (A) 肽键属于一级结构内容 (B) 肽键中C-N键所连的四个原子处于同一平面 (C) 肽键具有部分双键性质 (D) 肽键旋转而形成了β-折叠 (E) 肽键中的C-N键长度比C-N单键短 8.有关蛋白质三级结构描述，错误的是( A ) (A) 具有三级结构的多肽链都有生物学活性 (B) 亲水基团多位于三级结构的表面 (C) 三级结构的稳定性由次级键维系 (D) 三级结构是单链蛋白质或亚基的空间结构 9.正确的蛋白质四级结构叙述应该为( C ) (A) 蛋白质四级结构的稳定性由二硫键维系 (B) 蛋白质变性时其四级结构不一定受到破坏 ( C) 蛋白质亚基间由非共价键聚合 (D) 四级结构是蛋白质保持生物活性的必要条件 (E) 蛋白质都有四级结构 10.蛋白质α-螺旋的特点有( C ) (A) 多为左手螺旋 (B) 螺旋方向与长轴垂直 (C) 氨基酸侧链伸向螺旋外侧 (D) 肽键平面充分伸展 (E) 靠盐键维系稳定性 11.蛋白质分子中的无规卷曲结构属于( A ) (A) 二级结构 (B) 三级结构 (C) 四级结构 (D) 结构域 12.有关蛋白质β-折叠的描述，错误的是( C ) (A) 主链骨架呈锯齿状 (B) 氨基酸侧链交替位于扇面上下方 (C)由氢键维持稳定，其方向与折叠的长轴大致水平(D) β-折叠有反平行式结构，也有平行式结构 (E) 肽链几乎完全伸展 13.常出现于肽链转角结构中的氨基酸为( E ,) (A) 脯氨酸 (B) 半胱氨酸 (C) 谷氨酸 (D) 甲硫氨酸 (E) 甘氨酸 14.在各种蛋白质中含量相近的元素是( B ) (A) 碳 (B) 氮 (C) 氧 (D) 氢 (E) 硫 15.下列氨基酸中含有羟基的是( B ) (A) 谷氨酸、天冬酰胺 (B) 丝氨酸、苏氨酸 (C) 苯丙氨酸、酪氨酸 (D) 半胱氨酸、蛋氨酸 16.蛋白质吸收紫外光能力的大小，主要取决于( D ) (A) 含硫氨基酸的含量 (B) 肽键中的肽键 (C) 碱性氨基酸的含量 (D) 芳香族氨基酸的含量 (E) 脂肪族氨基酸的含量

非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Native-PAGE)

非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Native-PAGE)的分类有三种常用的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳方法：blue native（BN-PAGE），clear native （CN-PAGE），quantitative preparative native continuous（QPNC-PAGE）。在一个典型的native PAGE方法中，复合物被CN-PAGE或BN-PAGE分离。然后可以用其它分离方法如SDS-PAGE或等电聚焦做进一步分离。随后切割凝胶，蛋白复合物每一个部分都被分开。蛋白的每个条带可以消化后做肽链指纹图谱或重新测序。这样就可以提供一个蛋白复合物中单个蛋白的重要信息。 1. Blue Native PAGE Blue Native PAGE是最古老的Native-PAGE技术。是以考马斯亮蓝作为电泳分离后蛋白质鉴定染料的一种电泳方法。这种方法的缺点是：考马斯亮蓝与蛋白的结合起到了去垢剂的作用，可能导致复合物的分离；并对化学发光或蛋白质辅基的荧光或荧光染料的标记具有潜在的猝灭作用。 Blue Native PAGE在分析蛋白质-蛋白质相互作用以及膜蛋白复合物方面有很大的优势，其分离范围在100KDa-10MDa。在Blue native PAGE过程中，最重要的化合物就是考马斯亮蓝，除了增溶作用以外，蛋白质表面结合了大量的考马斯亮蓝染料而带上负电荷，这会导致即使碱性蛋白在pH7.5条件下也会向阴极迁移。但是，蛋白质虽然带有大量的负电荷，然而其分离依据的根本还是根据不连续的凝胶梯度-凝胶孔径的逐渐减小，蛋白质最终迁移到其自身大小与凝胶孔径相近似的位置而停止。并且在分离膜蛋白的过程中，由于带有负电荷，而不会引起蛋白聚合，与酸性染料的结合，膜蛋白也由疏水性变成亲水性，溶解性大大提高。 1.2 Clear Native PAGE Clear Native PAGE是通过除染色以的其它方法如SLS鉴定蛋白的电泳技术。然而，这种方法最大的应用还是研究蛋白质-蛋白质相互作用，特别是和质谱联用。 Clear Native PAGE是在聚丙烯酰胺凝胶中分离酸性水溶性蛋白和膜蛋白（PI<7）的电泳

氧化还原反应方程式的书写完整版

氧化还原反应方程式的书写 HEN system office room 【HEN16H-HENS2AHENS8Q8-HENH1688】

如何书写氧化还原方程式对于许多学生来说，化学反应真得好难，一个方程式写上很多遍，第二天就遗忘得无影无踪，特别是氧化还原反应的方程式。究其原因，是没有掌握其规律。那么氧化还原反应的规律是什么呢？怎样才能轻松自如地写出这些反应方程式？氧化还原反应的规律有好多，但以下几个知识点你必须要熟练掌握：一、常见氧化剂和还原剂对于许多学生来说，化学反应真得好难，一个方程式写上很多遍，第二天就遗忘得无影无踪，特别是氧化还原反应的方程式。究其原因，是没有掌握其规律。那么氧化还原反应的规律是什么呢？怎样才能轻松自如地写出这些反应方程式？氧化还原反应的规律有好多，但以下几个知识点你必须要熟练掌握：一、常见氧化剂和还原剂二、常见物质的氧化性和还原性强弱三、氧化还原反应的规律 1．价态变化规律同一元素不同价态之间转化时，价态只靠近不交叉，相邻价态不反应。 2．优先规律当存在多种还原剂(氧化剂)时，氧化剂(还原剂)通常先和还原性(氧化性)最? ? ? ? ? ?强的还原剂(氧化剂)反应。 3．守恒规律氧化剂得到电子的总数等于还原剂失去电子的总数四、溶液中反应要注意应用微粒观进行分析，同时要多注意溶液的环境，酸性溶液还是碱性溶液。以上是氧化还原反应的书写必备知识，是最基础的知识，非常重要。一个氧化还原反应可以分成三步完成，下面就以Cu 与稀硝酸反应为例谈谈书写方法：（1）写出氧化剂、还原剂、氧化产物、还原产物根据前面知识可知：Cu 是还原剂，对应的产物为Cu 2+，硝酸在溶液中电离出H +和NO 3-离子，二者都可以得电子被还原，但NO 3-氧化性强于H +,因而NO 3-是氧化剂，对应产物为NO 。 Cu + NO 3- = Cu 2+ + NO (2)根据电子守恒，配平氧化剂、还原剂、氧化产物、还原产物的系数 3Cu + 2NO 3- = 3 Cu 2+ + 2NO （3）观察溶液的酸碱性，配平非氧化还原部分。在酸性溶液中，多”O ”的一方加H +，少“O ”的一方加H 2O ，并且多一个O 加两个H + 在碱性溶液中，多”O ”的一方加H 2O ，少“O ”的一方加OH -，并且多一个O 加一个H 2O 3Cu + 2NO 3- +8H + = 3 Cu 2+ + 2NO + 4H 2O （如果写化学方程式补上对相应的离子）练习

生物化学--蛋白质部分习题及答案

第四章蛋白质化学一、单项选择题 1．蛋白质分子的元素组成特点是 A．含大量的碳B．含大量的糖C．含少量的硫D．含少量的铜E．含氮量约16% 2．一血清标本的含氮量为5g/L，则该标本的蛋白质浓度是 A．15g/L B．20g/L C．31/L D．45g/L E．55g/L 3．下列哪种氨基酸是碱性氨基酸？ A．亮氨酸B．赖氨酸C．甘氨酸D．谷氨酸E．脯氨酸 4．下列哪种氨基酸是酸性氨基酸？ A．天冬氨酸B．丙氨酸C．脯氨酸D．精氨酸E．甘氨酸 5．含有两个羧基的氨基酸是 A．丝氨酸B．苏氨酸C．酪氨酸D．谷氨酸E．赖氨酸 6．在pH6.0的缓冲液中电泳，哪种氨基酸基本不移动？ A．丙氨酸B．精氨酸C．谷氨酸D．赖氨酸E．天冬氨酸 7．在pH7.0时，哪种氨基酸带正电荷？ A．精氨酸B．亮氨酸C．谷氨酸D．赖氨酸

E．苏氨酸 8．蛋氨酸是 A．支链氨基酸B．酸性氨基酸 C．碱性氨基酸D．芳香族氨酸 E．含硫氨基酸 9．构成蛋白质的标准氨基酸有多少种？ A．8种B．15种 C．20种D．25种 E．30种 10．构成天然蛋白质的氨基酸 A．除甘氨酸外，氨基酸的α碳原子均非手性碳原子 B．除甘氨酸外，均为L-构型C．只含α羧基和α氨基D．均为极性侧链E．有些没有遗传密码11．天然蛋白质中不存在的氨基酸是 A．瓜氨酸B．蛋氨酸 C．丝氨酸D．半胱氨酸 E．丙氨酸 12．在中性条件下大部分氨基酸以什么形式存在？ A．疏水分子B．非极性分子 C．负离子D．正离子 E．兼性离子 13．所有氨基酸共有的显色反应是 A．双缩脲反应B．茚三酮反应 C．酚试剂反应D．米伦反应 E．考马斯亮蓝反应 14．蛋白质分子中的肽键 A．氨基酸的各种氨基和各种羧基均可形成肽键 B．某一氨基酸的γ-羧基与另一氨基酸的α氨基脱水形成 C．一个氨基酸的α-羧基与另一氨基酸的α氨基脱水形成 D．肽键无双键性质

氧化还原反应方程式的书写

氧化还原反应方程式的书写 1．氧化还原反应中实际上包含氧化和还原两个过程。下面是一个还原过程的反应式： NO3－+4H++3e－→NO+2H2O；KMnO4、Na2CO3、Cu2O、Fe2(SO4)3四种物质中的一种物质（甲）能使上述还原过程发生。（1）物质甲为，在该反应中作剂。（2）写出并配平该氧化还原反应的离子方程式：。（1）Cu2O ，还原剂（2）3Cu2O+14 H++2NO3—===6Cu2+++2NO↑+7H2O 2．在氧化还原反应中，氧化过程和还原过程是同时发生的。Cu2O-2e-+2H+=2Cu2++H2O是一个氧化过程的反应式，下列五种物质FeSO4、Fe2(SO4)3、CuSO4、Na2CO3、KI中的一种能使上述氧化过程顺利发生。（2）向（1）中反应后的溶液里，加入酸性高锰酸钾溶液，反应的离子方程式为； 2Fe3++Cu2O+2H+=2Fe2++Cu2++H2O 5Fe2++MnO4-+8H+=5Fe3++Mn2++4H2O 3．某反应体系中共有6种物质，KClO3、KCl、HCl、Cl2、ClO2、H2O，请你设计同位素示踪法确定反应的方程式并配平： _ 2K37ClO3+4HCl= 2KCl+Cl2+237ClO2+2H2O 4．过二硫酸钾(K2S2O8)具有强氧化性，可将I－氧化为I2：S2O-2 8+2I－＝2SO-2 4 +I2 通过改变反应途径，Fe3+、Fe2+均可催化上述反应。试用离子方程式表示Fe3+对上述反应的 5．根据事实完成下列反应的化学方程式：（1）AsH3是一种很强的还原剂，室温下，它能在空气中自燃，其氧化产物为As2O3,该反应的化学方程式为______________________________________________________；（2）NaNO3与氢碘酸作用，放出NO气体并有单质I2生成____________________；（3）砷为氮族元素，其氧化物As2O3俗称砒霜，可用马氏试砷法来检验，其原理是将Zn、盐酸和试样混合，若含有砒霜，则生成AsH3气体，这一反应的离子方程式为。 2AsH3+3O2=As2O3+3H2O ，2NO3—+8H+ +6I—=2NO+3I2+4H2O

生物化学题库及答案

生物化学试题库蛋白质化学一、填空题 1．构成蛋白质的氨基酸有 20 种，一般可根据氨基酸侧链（R）的大小分为非极性侧链氨基酸和极性侧链氨基酸两大类。其中前一类氨基酸侧链基团的共同特怔是具有疏水性；而后一类氨基酸侧链（或基团）共有的特征是具有亲水性。碱性氨基酸（pH6～7时荷正电）有两3种，它们分别是赖氨基酸和精。组氨基酸；酸性氨基酸也有两种，分别是天冬氨基酸和谷氨基酸。 2．紫外吸收法（280nm）定量测定蛋白质时其主要依据是因为大多数可溶性蛋白质分子中含有苯丙氨基酸、酪氨基酸或色氨基酸。 3．丝氨酸侧链特征基团是－OH ；半胱氨酸的侧链基团是－SH ；组氨酸的侧链基团是。这三种氨基酸三字母代表符号分别是 4．氨基酸与水合印三酮反应的基团是氨基，除脯氨酸以外反应产物的颜色是蓝紫色；因为脯氨酸是 —亚氨基酸，它与水合印三酮的反应则显示黄色。 5．蛋白质结构中主键称为肽键，次级键有、、

氢键疏水键、范德华力、二硫键；次级键中属于共价键的是二硫键键。 6．镰刀状贫血症是最早认识的一种分子病，患者的血红蛋白分子β亚基的第六位谷氨酸被缬氨酸所替代，前一种氨基酸为极性侧链氨基酸，后者为非极性侧链氨基酸，这种微小的差异导致红血蛋白分子在氧分压较低时易于聚集，氧合能力下降，而易引起溶血性贫血。 7．Edman反应的主要试剂是异硫氰酸苯酯；在寡肽或多肽序列测定中，Edman反应的主要特点是从N-端依次对氨基酸进行分析鉴定。 8．蛋白质二级结构的基本类型有α-螺旋、、β-折叠β转角无规卷曲和。其中维持前三种二级结构稳定键的次级键为氢键。此外多肽链中决定这些结构的形成与存在的根本性因与氨基酸种类数目排列次序、、有关。而当我肽链中出现脯氨酸残基的时候，多肽链的αa-螺旋往往会中断。 9．蛋白质水溶液是一种比较稳定的亲水胶体，其稳定性主要因素有两个，分别是分子表面有水化膜同性电荷斥力和。

聚丙烯酰胺凝胶电泳

聚丙烯酰胺凝胶电泳 (Polyacrylamide gel electrophoresis,PAGE) 聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺(acrylamide,Acr)单体相互聚合成多条长链，再与N,N-甲叉双丙烯酰胺(methylene-bisacrylamide,Bis)在引发剂和加速剂的作用下交联而成的凝聚胶多孔聚合物。凝胶孔径的大小可通过控制单体和交联剂的浓度来调节，从而满足不同分子量物质的分离要求。不同浓度的聚丙烯酰胺非变性凝胶的有效分离范围如表所示：表1 DNA在聚丙烯酰胺凝胶中的有效分离范围丙稀酰胺[%(w/v)]a有效分离范围（bp）二甲苯青FF b溴酚蓝b 3.51000－2000 460 100 5.080－500 260 65 8.060－400 160 45 12.040－200 70 20 15.025－150 60 15 20.0 6－100 45 12 a．N,N′-亚甲双丙稀酰胺占丙稀酰胺浓度的1/30 b．给出的数字是迁移率与染料相同的双链DNA片段的粗略大小（核苷酸对）。聚丙烯酰胺凝胶的制备和电泳都比琼脂糖凝胶更为费事。聚丙烯酰胺凝胶几乎总是铺于两块玻璃板之间，两块玻璃板由间隔片隔开冰封以绝缘胶布。在这种配置形式下，大多数丙烯酰胺溶液不会与空气接触，所以氧对聚合的抑制仅限于凝胶顶部的一个窄层里。聚丙烯酰胺凝胶一律是进行垂直电泳，根据分离的需要，其长度可以在10-100cm之间。聚丙烯酰胺凝胶与琼脂糖凝胶相比有3个主要优点：（1）分辨力强，长度仅仅相差０.2%（即500bp中的1bp）的DNA分子即可分开;(2)所能装载的DNA分子量远远琼脂糖凝胶：多达10μg的DNA可以加样于聚丙烯酰胺凝胶的一个标准样品槽（1cm×1mm）而不致显著影响分辨力；(3)从聚丙烯酰胺凝胶中回收的DNA纯度很高，可适用于要求最高的实验（如鼠胚胎微注射）。常用的是两种聚丙烯酰胺凝胶：（1）用于分离和纯化双链DNA片段非变性聚丙烯酰胺凝胶（2）用于分离、纯化单链DNA的变性聚丙烯酰胺凝胶非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳【原理】非变性聚丙烯酰胺凝胶用于分离和纯化小分子双链DNA片段（<1 000bp），多数双链DNA在此胶中的迁移率大略与其大小的对数值成反比，但迁移率也受碱基组成和序列的影响，同等大小的DNA分子可能由于空间结构的不同而使迁移率

(完整word版)陌生氧化还原反应方程式的书写

陌生氧化还原反应方程式的书写 1、+6价铬的化合物毒性较大，常用NaHSO3将废液中的Cr2O72?还原成Cr3+，反应的离子方程式为_______ _ 。 2、向盛有H2O2溶液的试管中加入几滴酸化的FeCl2溶液，溶液变成棕黄色，发生反应的离子方程式为 _________________________________________________________________________。 3、将20mL 0.5mol·L-1 K2SO3溶液逐滴加入到20 mL 0.2mol·L-1 KMnO4溶液（硫酸酸化）中，溶液恰好褪为无色。写出反应的离子方程式：___________________________________________。 4、在氢氧化钠的环境中，氯气与碘化钠反应，每1mol碘化钠完全反应转移6mol电子，反应化学方程式为。 5、氮气的实验室制法是用氯化铵(NH4Cl)与亚硝酸钠(NaNO2)反应，同时生成氯化钠和水。写出该反应的化学方程式：。 6、某反应中反应物与生成物有AsH3、H2SO4、KBrO3、K2SO4、H3AsO4和一种未知物X。已知0.2 mol KBrO3在反应中得到 1 mol电子生成X，则X的化学式为________，试写出该反应的化学方程式：_______________________________________________________。 7、已知在过量的FeSO4溶液中滴入几滴NaClO溶液，并加入过量H2SO4，溶液立即变黄，试写出该反应的离子方程式：________________________________________。 8、NaClO可以将MnSO4氧化成MnO2沉淀，试写出该反应的离子方程式：____________________________。 9、NaClO2是一种重要的杀菌消毒剂，也常用来漂白织物等，其一种生产工艺如下：硫酸、SO 2 产品422 写出“反应”步骤中生成ClO2的化学方程式。 10、根据下列框图回答问题（答题时，方程式中的M、E用所对应的元素符号表示）： ⑴写出M溶于稀H2SO4和H2O2混合液的化学方程式：。 ⑵某同学取X的溶液，酸化后加入KI、淀粉溶液，变为蓝色。写出与上述变化过程相关的离子方程

变性梯度凝胶电泳(DGGE)

变性梯度凝胶电泳(DGGE)实验【实验目的】掌握变性梯度凝胶电泳检测新的突变，以及测定高度多态基因的基因型的技术方法。【实验原理】在现代遗传学中DNA 序列突变的分析占有十分重要的地位。由于在较大DNA 序列中检测一个细微的突变非常困难，因而现在人们建立了几种方法来解决这一难题。变性梯度凝胶电泳(DGGE)能把长度相同而核苷酸顺序不同的双链DNA 片段分开。这种方法利用了DNA 分子从双螺旋型变成局部变性型时电泳迁移率会下降的现象。不同的DNA 片段发生这种变化所需梯度不同。DGGE 的凝胶中沿电场方向变性剂(甲醛和尿素)含量递增，当DNA 片段通过这种变性剂递增的凝胶时，不同分子的电泳迁移率在不同区域会发生降低。这就可使核苷酸顺序不同DNA 片段分开。此方法可作为测序的初始步骤在杂合个体中分离等位基因。许多研究表明变性递度凝胶电泳分离能力很强，它可以把相差仅1bp 的DNA 片段分开。【仪器、材料与试剂】 1.50×TAE 缓冲液(2mol/LTris 乙酸盐，0.05mol/L EDTA pH8.0)1L 体积：242gTris碱，57.1mL 冰醋酸，100mL 0.5mol/L EDTA pH8.0，加水至lL。 2.丙烯酰胺贮存液：40%丙烯酰胺(38:2 丙烯酰胺:双丙烯酰胺)。 3.过硫酸铵贮存液(10%)：10mL 配制：1g 过硫酸铵加水至10mL。TEMED(N，N，N＇，N＇，—四甲基乙二胺)。 4.变性剂贮存液：(0%)6%丙烯酰胺TAE 溶液。250mL 溶液：37.5mL 丙烯酰胺贮存液，5mL50×TAE 缓冲液，加水至250mL，过滤和排气。 5.变性剂贮存液(100%)：6%丙烯酰胺，7mol/L 尿素，40%甲醛TAE 溶液。250mL配制：37.5mL 丙烯酰胺贮存液，5mL50×TAE 缓冲液，105g 尿素，100mL 甲醛，加水至250mL，过滤并排气。 6.染料：40%(W/V)蔗糖，0.25%溴酚蓝，0.25%二甲苯青和30%甘油。 7.塑料胶框、梳子和垫片，两个用于固定胶框中玻璃片的塑料支架。 8.一有柄和一无柄的两片玻璃板(尺寸：17.78cm 宽×20.32cm 长×0.635cm 厚)，有柄的玻璃板有一个13.97cm 宽，2.54cm 厚的突出。

非变性凝胶电泳技术

Native-PAGE原理非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Native-PAGE)是在不加入SDS 疏基乙醇等变性剂的条件下，对保持活性的蛋白质进行聚丙烯酰胺凝胶电泳，常用于同工酶的鉴定和提纯。未加SDS的天然聚丙烯酰胺凝胶电泳可以使生物大分子在电泳过程中保持其天然的形状和电荷，它们的分离是依据其电泳迁移率的不同和凝胶的分子筛作用，因而可以得到较高的分辨率，尤其是在电泳分离后仍能保持蛋白质和酶等生物大分子的生物活性，对于生物大分子的鉴定有重要意义，其方法是在凝胶上进行两份相同样品的电泳，电泳后将凝胶切成两半，一半用于活性染色，对某个特定的生物大分子进行鉴定，另一半用于所有样品的染色，以分析样品中各种生物大分子的种类和含量。实验方法非变性聚丙烯酰胺凝胶和变性sds-page电泳在操作上基本上是相同的，只是非变性聚丙烯酰胺凝胶的配制和电泳缓冲液中不能含有变性剂如SDS等。一般蛋白进行非变性凝胶电泳要先分清是碱性还是酸性蛋白。分离碱性蛋白时候，要利用低pH凝胶系统，分离酸性蛋白时候，要利用高pH凝胶系统。酸性蛋白通常在非变性凝胶电泳中采用的pH是8.8的缓冲系统，蛋白会带负电荷，蛋白会相阳极移动；而碱性蛋白通常电泳是在微酸性环境下进行，蛋白带正电荷，这时候需要将阴极和阳极倒置才可以电泳分离酸性蛋白。工作液配制 1.40%胶贮液(Acr:Bis=29：1）； 2.4×分离胶Buf(1.5 M Tris-HCl，pH 8.8)：18.2 g Trisbase 溶于ml 水，用浓HCl调pH 8.8，加水定容到100ml，4℃贮存； 3. 4×堆积胶Buf(0.5 M Tris-HCl，pH 6.8)：6g Trisbase 溶于80ml 水，用浓HCl调pH 6.8，加水定容到100ml，4℃贮存； 4.10×电泳Buf（pH8.8 Tris-Gly）:30.3 g Trisbase，144g 甘氨酸，加水定容到L，4℃贮存； 5.2×溴酚蓝上样Buf:1.25ml pH 6.8, 0.5M Tris-Cl，3.0ml甘油，.2ml 0.5% 溴酚蓝，5.5ml dH2O；-20℃贮存；

氧化还原反应离子方程式的书写

氧化还原反应离子方程式的书写范例指导向白色微溶物CuCl中滴加稀硝酸有NO生成，写出其离子方程式。过关练习 1、H2S使酸性KMnO4溶液褪色，且有浅黄色沉淀生成 2、SO2使酸性KMnO4溶液褪色 3、甲酸钠溶液使酸性KMnO4溶液褪色 4、向CS2（无色液体）滴入酸性KMnO4溶液，生成单质硫，并放出CO2。 5、H2O2能使酸性KMnO4溶液褪色。 6、N a2S2O3常用做脱硫剂。N a2S2O3和氯气反应，氯水颜色变浅 7、向F e(N O3)2溶液中滴加稀硫酸 8、向Fe2(SO4)3溶液中通入SO2，溶液由黄色变浅绿色 9、利用H2SO4、KI和淀粉溶液，检验食盐中是否含有KIO3 10、FeI2溶液与足量的Br2水反应 11、酸性重铬酸钾溶液与乙醇反应生成乙酸 12、氢碘酸（HI）与F e(O H)3反应，写出反应的离子方程式。 13、硝酸铁溶液与足量的HI反应，写出反应的离子方程式。 14、羟胺（NH2OH）可除去Fe2＋中的Fe3＋能力提升 1、下列表示溶液中发生反应的化学方程式错误的是( ) A.2Al+2NaOH+2H2O=2NaAlO2+3H2↑ B.2KMnO4+HCOOK+KOH=2K2MnO4+CO2↑+H2O C.MnO2+4HCl(浓) MnCl2+Cl2↑+2H2O D.K2Cr2O7+6FeSO4+7H2SO4=Cr2(SO4)3+3Fe2(SO4)3+K2SO4+7H2O 2、锂离子电池的广泛应用使回收利用锂货源成为重要课题：某研究性学习小组对废旧锂离子电池正极材料（LiMn2O4、碳粉等涂覆在铝箔上）进行资源回收研究，设计实验流程如下：第③步反应的离子方程式是。答案：4 LiMn2O4 + 4H+ + O2 = 8MnO2 + 4Li + + 2H2O 3、二氧化氯（ClO2）是一种在水处理等方面有广泛应用的高效安全消毒剂。工业以CH3OH与NaClO3为原料在酸性条件下制取ClO2，同时产生CO2气体，已知该反应分为两步进行，第一步为2ClO- 3 + 2Cl-+ 4H+=2ClO2↑+ Cl2↑+ 2H2O。（1）写出第二步反应的离子方程式。生产时需在反应物中加少量Cl-，其作用是。（2）上述工业生产中会发生副反应ClO- 3 + Cl- + H+- Cl2↑+ H2O（未配平），若测得反应后的混合气体中Cl2的体积分数为3/73，则起始投料时CH3OH与NaClO3的物质的量之比为。答案：（1）CH3OH + 3Cl2 + H2O = 6Cl- + CO2 + 6H+ 催化剂（2）1︰6.1 4、氯化亚铜在有机合成工业中常作催化剂．它是一种白色，微溶于水、不溶于酒精，易溶于酸．见光易分解，易与空气中氧气反应的物质．国家标准规定合格的CuCl产品的主要质量指标为CuCl的质量分数大于96.5% 。（1）以下是从含Cu2+、Fe3+等的电镀废水中制备氯化亚铜的工艺流程图．下图是滤液中Cu2+的含量与pH的关系及CuCl产率与pH的关系图． ①反应①在隔绝空气条件下进行时CuCl产率较高的原因是。

变性聚丙烯酰胺凝胶电泳及银染实验

变性聚丙烯酰胺凝胶电泳及银染实验一变性聚丙烯酰胺凝胶电泳配制溶液： 1、30% Acrylamide（14.5 g 丙烯酰胺，0.5g 双丙烯酰胺，加水溶解，定容至50 ml，4℃，棕色瓶中储存） 2、10% 过硫酸铵（0.5g APS，溶于5ml 去离子水中，4℃可储存数个月） 3、10 ×TBE 缓冲液（10.8g Tris,0.744g EDTA,5.5g 硼酸，定容到100ml） 4、TEMED 5、20-200 DNA marker 6、尿素实验步骤： 1、配置10%的胶10ml：8M*10ml*60g/mol=4.8g 尿素 6.1ml water 3.3ml 30% Acrylamide 1ml 10 ×TBE 0.11ml APS 0.01mlTEMED 2、立即将胶倒入两块板间并插好梳子，放置，待凝固30min，时间可以适当延长。 3、向电泳槽加入1×TBE，拔出梳子并用注射针筒多次洗涤点样孔，尽可能排除未聚合的丙烯酰胺。 4、将DNA marker 加到点样孔中，以120V（10V/cm）进行电泳直到燃料走到靠近底部的三分之一处，大约需要60-90分钟。二银染实验银染溶液的配置：实验之前准备4℃水 1、固定液（10%醋酸）：20ml冰醋酸，180mlddH2O混匀（通风厨中进行） 2、染色液：将0.1g AgNO3溶解于100 ml ddH2O中，使用前加1.5ml37%甲醛溶液，必须储存于避光瓶中，防止接触皮肤（通风厨中进行） 3、显影液：将30gNa2CO3溶解于ddH2O中，冷却至4℃，使用前加1.5ml37%甲醛溶液（通风厨中进行），0.1M五水硫代硫酸钠150μl；（0.1M Na2S2O3。5H2O：将2.48g Na2S2O3。5H2O溶于100mlddH2O）。注意事项： 1、染色液和显影液要现用现配； 2、显影液必须在4℃使用且必须保存在4℃； 3、甲醛蒸汽致癌，在通风厨内操作； 4、实验室中柔和的背景光线有利于降低背景颜色； 5、显色不能在透光的盒子中进行； 6、溶液不能直接倒在胶面上，应使盘倾斜后将溶液倒在盘的角上，或者将每种溶液各方一盘，然后将胶从一个盘转到另一个盘； 7、溶液的体积必须足够将胶全部浸没；

蛋白质试题

1．组成蛋白质的氨基酸中，除哪个氨基酸外，都可以存在D-型和L-型两种异构体A．丙氨酸B．谷氨酸C．甘氨酸 D．脯氨酸E．半胱氨酸 2．下列含有两个羧基的氨基酸是 A．组氨酸B．谷氨酸C．甘氨酸 D．丝氨酸E．赖氨酸 3．组成蛋白质的基本单位是 A．L-α-氨基酸B．D-α-氨基酸 C．L-β-氨基酸D．D-β-氨基酸 E．L、D-α-氨基酸 4．维持蛋白质二级结构的主要化学键是 A．盐键B．疏水键C．肽键 D．二硫键E．氢键 5．蛋白质分子的β-转角属于蛋白质的几级结构 A．一级结构B．二级结构C．三级结构 D．四级结构E．超二级结构 6.关于蛋白质分子三级结构的叙述，错误的是: A．天然蛋白质分子均具有这种结构 B．具有三级结构的多肽链不一定都具有生物学活性 C．三级结构的稳定性主要是次级键维系 D．决定三级结构盘曲折叠的因素是氨基酸残基 E．亲水基团多聚集在三级结构的内部 7．关于蛋白质等电点的叙述下列哪项是正确的 A．蛋白质溶液的pH等于7.0时溶液的pH值 B．等电点时蛋白质变性沉淀 C．在等电点处，蛋白质的稳定性增加 D．在等电点处，蛋白质分子所带净电荷为零 E．蛋白质溶液的pH等于7.4时溶液的pH值 8．蛋白质溶液的稳定因素是 A．蛋白质溶液有分子扩散现象 B．蛋白质分子表面带有水化膜和同种电荷 C．蛋白质溶液粘度大 D．蛋白质分子带有电荷 9．蛋白质变性不包括 A．氢键的断裂B．盐键的断裂 C．肽键的断裂D．疏水键的断裂 E．二硫键的断裂 10．蛋白质分子结构中起决定作用的是 A．一级结构B．二级结构C．三级结构 D．四级结构E．超二级结构 11．蛋白质变性是由于 A．氨基酸排列顺序的改变 B．氨基酸组成的改变C．蛋白质的水解

琼脂糖凝胶电泳技术

电泳检测技术是指利用带电颗粒在电场中能向异性电极泳动这一现象来分离、纯化或分析检测供试品的一种生物化学技术。原理：许多生物分子都带有电荷，在电场作用下可发生移动，由于混合物中各组分所带电荷性质、数量以及相对分子质量各不相同，使在同一电场作用下，各组分的泳动方向和速率也各有差异，所以在一定时间内，它们移动距离不同，从而可达到分离鉴定的目的。 DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时，包括电荷效应和分子筛效应。琼脂糖是由天然的琼脂加工制得，是一种直链杂聚多糖，溶于热水，形成溶胶，冷却后成为孔径范围从50nm到大于200nm的大网孔径凝胶。由于孔径较大，对一般蛋白质不起分子筛作用，该电泳技术是目前分离、分析DNA片段的标准方法。 DNA琼脂糖凝胶电泳的原理 DNA 分子是两性电解质，在高于其等电点的溶液（pH8.0~pH8.3 DNA分子本身的大小和构型、凝胶浓度决定了DNA分子的迁移速度。）中，碱基几乎不解离，磷酸基团全部解离，DNA 分子带负电荷，在电场中向正极移动。 DNA分子大小对迁移速率的影响：相对分子质量大，迁移慢；相对分子质量小，迁移快。DNA分子构型对迁移速率的影响：迁移速度：闭环﹥直链DNA﹥开环DNA。琼脂糖凝胶浓度的影响：同样大小的线性DNA片段，在不同浓度的琼脂糖凝胶中的迁移速度不同，浓度越大，迁移的越慢常用的电泳上样缓冲液含溴酚蓝，有的还含有二甲苯青，这些指示剂可以指示电泳的速度。溴化乙淀（EB）是核酸的染色剂，能插入DNA分子中形成荧光结合物，EB在紫外线照射下的发射荧光。荧光的强度与DNA的含量成正比，从而可以确定DNA片段在凝胶中的位置及估计出待测样品的浓度。 EB是强致癌剂。电泳操作步骤(整个过程要求带一次性手套 1、胶槽准备 ①将凝胶托盘放入制胶盒中; ②将加样梳垂直插入到制胶盒的小凹槽内，梳齿底端和凝胶托盘有1mm的间隙; ③将制胶盒放在调整好的水平台上。 2、凝胶准备用1×TAE配制1％琼脂糖凝胶。 ①称0.15g琼脂糖置三角瓶中，加15ml 1×TAE; ②微波炉加热大约1分钟，熔化琼脂糖; ③熔化的琼脂糖自然冷却到60～70℃时，加入DNA染料，并轻轻混匀。 3、倒胶：将冷却致60℃的凝胶倒入准备好的制胶盒内，凝胶厚度3～5mm,室温下静置半小时左右冷却，凝胶固化。 4、轻轻拔出固定在凝胶中的加样梳。将带凝胶的凝胶托盘置于电泳槽中，并使样品孔位于电场负极，向电泳槽中加入1×TAE电泳缓冲液，越过凝胶表面即可,出去样品孔的气泡。 6、样品准备：向核酸样品中加入约为样品体积1/10的上样缓冲液，用加样器轻轻混匀。 7、上样：用加样器吸取样品，轻轻的加入到凝胶的样品孔中。加样量一般5-7μl。 8、盖上电泳槽，接通电源，开始电泳。开始电泳前，再次确认凝胶样品孔处于电场的负极。电泳条件：5v/cm；时间20-30分钟左右 9、电泳结束后，切断电源，取出凝胶。

氧化还原方程式书写

1、（2014上海高考）硫在自然界中以游离态和多种化合态形式出现。硫的化合物大多具有氧化性或还原性。许多金属硫化物难溶于水。完成下列填空：（1）硫化氢具有还原性，可以和许多氧化剂反应。在酸性条件下，H 2S和KMnO 4 反应生成S、MnSO 4、K 2 SO 4 和H 2 O，写出该反应的化学方程式。 ________________________________________________________ （2）石油化工的废气中有H 2 S。写出从废气中回收单质硫的两种方法（除空气外，不使用其他原料），以化学方程式表示。 _________________________________ （3）室温下，0.1 mol/L的硫化氢溶液和0.1 mol/L的碳酸钠溶液，碱性更强的是___________，其原因是___________________________。已知：H 2S：K i1 ＝1.3×10-7 K i2 =7.1×10-15 H 2CO 3 ：K i1 ＝4.3×10-7 K i2 =5.6×10-11 （4）向ZnSO 4溶液中滴加饱和H 2 S溶液，没有沉淀生成，继续滴加一定量的氨水后，生成ZnS沉淀，用电离平衡原理解释上述现象。 _______________________________________。（5）将黑色的Fe 2S 3 固体加入足量盐酸中，溶液中有浅黄色固体生成，产物有 ___________、______________。过滤，微热滤液，然后加入过量氢氧化钠溶液，可观察到的现象是___________________________。 2、（2014年江苏高考）硫化氢的转化是资源利用和环境保护的重要研究课题。由硫化氢获得硫单质有多种方法。（1）将烧碱吸收H2S后的溶液加入到如题20图—1所示的电解池的阳极区进行电解。电解过程中阳极区发生如下反应：S2－—2e－＝S；（n—1）S+S2－＝S n 2－①写出电解时阴极的电极反应式：。 ②电解后阳极区的溶液用稀硫酸酸化得到硫单质，其离子方程式可写成。（2）将H 2S和空气的混合气体通入FeCl 3 、FeCl 2 、CuCl 2 的混合溶液中反应回收S，其物质转化如题20图—2所示。 ①在图示的转化中，化合价不变的元素是。 ②反应中当有1molH 2 S转化为硫单质时，保持溶液中Fe3＋的物质的量不变，需要消耗O 2 的物质的量为。 ③在温度一定和不补加溶液的条件下，缓慢通入混合气体，并充分搅拌。欲使生成的硫单质中不含CuS，可采取的措施有。（3）H 2S在高温下分解生成硫蒸汽和H 2 。若反应在不同温度下达到平衡时，混合气体中各组分的体积分数如题20图—3所示，H 2 S在高温下分解反应的化学方程式为。

DNA非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳银染配方及步骤

DNA非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳银染配方及步骤最近需要做DNA非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,需要用银染显示条带,但是找不到具体的配方和步骤,不知和蛋白PAGE电泳银染有什么差别,哪位师兄师姐有配方可否发一份,十分感谢!一、电泳试剂： 1、30％聚丙烯酰胺(29:1) 丙稀酰胺29克，Bis1克，水100ml。 2、10％过硫酸胺过硫酸胺1克，水10ml。 3、TEMED 4、5xTBE Tris 27克，硼酸13.75克，0.5M EDTA(pH 8.0) 10ml，定容至500ml。二、银染试剂 1、固定液：100ml无水乙醇，5ml冰醋酸，定容至1000ml。 2、0.2% AgNO3：AgNO3 1克，水500ml。 3、1.5% NaOH：NaOH 7.5克，水500ml。 4、37％甲醛。三、配胶(6%)： 30％聚丙烯酰胺(29:1) 8ml，5xTBE 8ml，定容至40ml，加10％过硫酸胺 200ul；T EMED 20ul。室温凝固时间>1小时。四、银染： 1、固定液固定10m。 2、水洗2m x3次。 3、0.2% AgNO3 100ml ＋37％甲醛50ul，混匀，避光染色30～50m。 4、水洗 20秒x2次。 5、1.5% NaOH 100ml，加37％甲醛 0.5ml，混匀，显色3～10m。 6、水洗若干次，终止显色。电泳时间：150v x 3h，溴酚兰的位置相当于40bp。银染后胶面积将膨胀10％。在终止显色过程中，将依惯性继续显色，所以不等显色到位即可进行终止显色。显色到位后立即拍摄，水浸泡过夜将使背景加深转贴！！！聚丙烯酰胺凝胶电泳是分子生物学常用的一种技术。我们实验室应用该项技术进行基因组甲基化的筛选，取得了一定结果。因为全基因组的筛选需要很高的灵敏度，背景干扰降到最低，因此在对凝胶进行染色时，往往采用同位素法或银染法，而且配制的胶往往很大，我们配制的是大约40×35cm的胶，0.4mm厚。同位素十分灵敏，特异，但是由于其操作的复杂性，许多实验室开展有一定困难。银染法相对简便易行，便于一般的实验室开展。需要指出的是，应用与筛选基因组的银染往往采用测序胶的染色方法，这样才能保证灵敏性，我们在长期的工作中积累了一些银染的经验，与大家分享。下面是网上的一个银染方法，我们使用后觉得效果不错，然后以此为基础，介绍一下我们的经验测序凝胶的银染