肌酸激酶(Creatine Kinase, CK)测定试剂盒说明书

肌酸激酶(Creatine Kinase, CK)测定试剂盒说明书

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货号:QS1107 规格:50管/48样

肌酸激酶(Creatine Kinase, CK )测定试剂盒说明书

紫外分光光度法

注意:正式测定之前选择2-3 个预期差异大的样本做预测定。

测定意义:

CK(EC 2.7.3.2)主要存在于心脏、肌肉以及脑等组织中,能可逆地催化肌酸与ATP 之间的转磷酰基反应,在能量运转、肌肉收缩和ATP 再生中有重要作用,是临床诊断心脑疾病的一个重要指标。

测定原理:

CK 催化磷酸肌酸和ADP 生成肌酸和ATP ,己糖激酶催化ATP 与葡萄糖形成6-磷酸葡萄糖,6-磷酸葡萄糖脱氢酶催化6-磷酸葡萄糖与NADP+生成NADPH ,导致340nm 光吸收值增加。 自备实验用品及仪器:

天平、低温离心机、恒温水浴锅、紫外分光光度计、1 mL 石英比色皿和蒸馏水。

试剂组成和配制:

提取液:液体60mL×1瓶,4℃保存。

试剂一:粉剂×1瓶,4℃避光保存,使用前加15mL 蒸馏水溶解。

试剂二:液体15mL×1瓶,4℃保存。

工作液:临用前根据用量将试剂一和试剂二以1:1混合。使用前37℃温育2min 。

粗酶液提取:

1. 组织样本:按照组织质量(g ):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g 组织,

加入1mL 提取液)进行冰浴匀浆,然后10000g ,4℃离心15min ,取上清,置冰上待测。

2. 血清样本:直接测定。

CK 活性计算公式:

1、按组织蛋白含量计算

酶活定义:37℃,pH7.0时,每毫克蛋白质1min 内催化产生1nmol NADPH 为一个酶活单位。

CK 活性(nmol/min / mg prot )=d

A ⨯∆ε×V 反总÷(V 样×Cpr)= 804×△A ÷Cpr 2、按组织样本质量计算:

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