生物制药工艺学
1、生物药物是以生物体、生物组织或其成份、代谢产物为原料（包括组织、细胞、细胞器、细胞成分、代谢、排泄物）综合应用生物学、物理化学与现代药学的原理与方法加工制成的药物。
2、现代生物药物分四大类：
（1）重组DNA药物（又称基因工程药物）
（2）基因药物：以遗传物质DNA、RNA为物质基础制造的药物
一般把采用DNA重组技术或单克隆抗体技术或其他生物技术制造的蛋白质、抗体或核酸类药物统称为生物技术药物，在我国又统称为生物制品。
（3）天然生物药物
（4）合成或半合成生物药物
3、生化药物分离纯化原理：
总的原则：A根据分配率不同将其分配到两个或几个物相中，再用机械法分离。B在某一相中，外加一定力（电泳、离心、超滤）使混合组分分离。具体：
（1）根据分子形状和大小不同进行分离。如差速离心与超离心、膜分离（透析，电渗析）与超滤，凝胶过滤法。
（2）根据分子电离性质的差异性进行分离。如离子交换法，电泳法，等电聚焦法。
（3）根据分子极性大小及溶解度不同进行分离。如溶剂提取法，逆流分配法，分配层析法，盐析法，等电点沉淀法，及有机溶剂分级沉淀法。
（4）根据物质吸附性质的不同进行分离。如选择性吸附法与吸附层析法。
（5）根据配体特异性进行分离—亲和层析法。
4、分离纯化早期和精制阶段使用方法的选择原则
分离纯化早期使用方法的选择：大处理量，相对低分辨率；精制阶段分离方法：高分辨率
第三章生物材料的预处理、细胞破碎和液-固分离
5.细胞培养液的预处理方法。
1）细胞及蛋白质的处理：（1）加入凝聚剂（2）加入絮凝剂（3）变性作用（4）吸附
（5）等电沉淀（6）加各种沉淀剂沉淀
2）多糖的去除可用酶解转化为单糖、黏多糖可与一些阳离子表面活性剂如十六烷基溴化铵（CTAB）和十六烷基氯化吡啶（CPC)生成季铵盐络合物沉淀去除。
3）高价金属离子的去除A离子交换法通过阳离子交换树脂。B沉淀法
6、常用的细胞破碎方法有哪些？
1）机械法：匀浆法、珠磨法、超声波
2）物理法：干燥、冻融、渗透压冲击
3）化学法：化学试剂处理、制成丙酮粉
4）生物法：酶解法、自溶
7、固液分离方法有哪些？
1）、细胞及蛋白质的处理：（1）加入凝聚剂：Al2(SO4)3218H2O、AlCl326H2O、FeCl3、ZnSO4、MgCO3；（2）加入絮凝剂絮凝剂：有机高分子，易溶，链长，活性功能基团多。影响因素：分子量、用量、pH、操作条件（搅拌）；（3）变性作用；（4）吸附加入吸附剂：活性碳除热原
加入反应剂：相互作用形成沉淀吸附蛋白质；（5）加各种沉淀剂沉淀。
2）过滤：常规和错流
3）离心：过滤式离心和沉降式离心
8掌握萃取与反萃取，分配系数与分配比的概念。
（1）萃取：料液与萃取剂接触后，料液中的溶质向萃取剂转移的过程
（2）反萃取：将萃取液与反萃取剂（含无机酸或碱的水溶液或水）相接触，使某种被萃入有机相的溶质转入水相的过程。
（3）能斯特分配定律：一定温度、一定压力下，某一溶质在互不相溶的两种溶剂间分配时，达到平衡后；在两相中的活度之比为一常数，如果是稀溶液，可以用浓度代替活度，即：
萃取相浓度/萃余相浓度=K ，称为分配系数。
9、萃取的步骤有哪些？（1）、混合；（2）、液—液两相分离；（3）、离心萃取；（4）、溶剂回收
10、固相析出分离
1）.固相析出法主要包括盐析法、有机溶剂沉淀法、等电点沉淀法、结晶法及其它多种沉淀方法等。
2）.按照一般的习惯，析出物为晶体时称为结晶法，析出物为无定形固体则称为沉淀法。
3). 结晶包括三个过程：(1) 形成飽和溶液；(2) 晶核形成；(3) 晶体生长。
4).晶体的质量主要是指晶体的大小、形状和纯度等3个方面。
11、几道选择题
1）、在一定的pH和温度下改变离子强度（盐浓度）进行盐析，称作 (A )
A．KS盐析法 B．β盐析法 C．重复盐析法 D．分部盐析法
2）、盐析法与有机溶剂沉淀法比较，其优点是（ B ）
A.分辨率高
B.变性作用小
C.杂质易除
D.沉淀易分离
3）、将配基与可溶性的载体偶联后形成载体-配基复合物，该复合物可选择性地与蛋白质结合，在一定条件下沉淀出来，此方法称为（ A ）
A．亲和沉淀 B．聚合物沉淀 C．金属离子沉淀 D．盐析沉淀
4）、影响晶体大小的主要因素与下列哪些因素无关 ( D )
A．过饱和度 B．温度 C．搅拌速度 D．饱和度
12、沉淀与结晶有何不同？常用的沉淀方法包括哪些？
结晶是指溶质自动从过饱和溶液中析出，形成新相的过程。
沉淀是溶液中难溶解的固体物质从溶液中析出的过程。
结晶法：析出物为晶体。
沉淀法：析出物为无定形固体。
沉淀方法：（1）有机溶剂沉淀法（2）等电点沉淀（3）成盐沉淀法（4）亲和沉淀（5）高分子聚合物沉淀法（6）表面活性剂沉淀法
13、何谓盐析？其原理是什么？常用的盐析方法有哪些？影响盐析的主要因素有哪些？盐析操作时常用的盐是什么？
（1）盐析法是利用各种生物分子在浓盐溶液中溶解度的差异，通过向溶液中引入一定数量的中性盐，使目的物或杂蛋白以沉淀析出，达到纯化目的的方法。
（2）原理：盐溶现象和盐析作用
破坏双电层：在高盐溶液中，带大量电荷的盐离子能中和蛋白质表面的电荷，使蛋白质分子之间电排斥作用相互减弱而能相互聚集起来。
破坏水化层：中性盐的亲水性比蛋白质大，盐离子在水中发生水化而使蛋白质脱去了水化膜，暴露出疏水区域，由于疏水区域的相互作用，使其沉淀。
14. 什么是结晶？结晶过程包括哪些？在何种条件下，溶液中才有晶体析出？
（1）溶液中的溶质在一定条件下因分子有规则的排列而结合成晶体。结晶是指溶质自动从过饱和溶液中析出，形成新相的过程。
（2）过程：①形成过饱和溶液；②晶核形成；③晶体生长
（3）条件：溶质只有在过饱和溶液中才能析出
推动力：形成新相（固体）需要一定的表面自由能。因此，溶液浓度达到饱和溶解度时，晶体尚不能析出，只有当溶质浓度超过饱和溶解度后，才可能有晶体析出。
晶核：最先析出的微小颗粒是以后晶体的中心，称为晶核。
首先形成晶核，由Kelvin公式，微小的晶核具有较大的溶解度。实质上，在饱和溶液中，晶核是处于一种形成—溶解—再形成的动态平衡之中，只有达到一定的过饱和度以后，晶核才能够稳定存在。
15、吸附分离法
1）、吸附剂按其化学结构可分为两大类：一类是有机吸附剂，如活性炭、淀粉、大孔吸附树脂等；另一类是无机吸附剂，如白陶土、氧化铝、硅胶、硅藻土等。
2）、常用的吸附剂有活性炭、硅胶和白陶土等。
3）、大孔网状聚合物吸附剂按骨架的极性强弱，可分为非极性、中等极性、极性和强极性吸附剂四类。
16选择
1）用大网格高聚物吸附剂吸附的弱酸性物质，一般用下列哪种溶液洗脱（ D ）
A.水
B.高盐
C.低pH
D. 高pH
“类似物容易吸附类似物”的原则,一般极性吸附剂适宜于从何种溶剂中吸附极性物质（ B ）2）
A.极性溶剂
B.非极性溶剂
C.水
D.溶剂
3）、活性炭在下列哪种溶剂中吸附能力最强？（A）
A.水
B.甲醇
C.乙醇
D.三氯甲烷
4）、关于大孔树脂洗脱条件的说法，错误的是：（A）
A .最常用的是以高级醇、酮或其水溶液解吸。
B. 对弱酸性物质可用碱来解吸。
C. 对弱碱性物质可用酸来解吸。
D.如吸附系在高浓度盐类溶液中进行时，则常常仅用水洗就能解吸下来。
第八章离子交换法
17、离子交换剂由载体、功能基团和平衡离子组成。平衡离子带正电荷为阳离子交换树脂，平衡离子带负电荷称阴离子交换树脂。
18、写出下列离子交换剂类型：732 强酸001x7树脂（强酸性苯乙烯系阳离子交换树脂），724 弱酸101x4树脂（阳离子型），
717强碱201x7树脂（强碱性苯乙烯系阴离子交换树脂），
CM-C 羧甲基纤维素（弱酸性阳离子交换纤维素） ,
DEAE-C 二乙基氨基乙基纤维素（强碱型阴离子交换纤维素），
PBE94 多缓冲交换剂（碱性阴离子交换剂）。
19.离子交换层析的原理
利用溶液中带电粒子与离子交换剂之间结合力的差异进行物质分离。
20.离子交换树脂的分类
分类：平衡离子带正电荷为阳离子交换树脂，分类：强酸型树脂、中酸性树脂、弱酸性树脂平衡离子带负电荷为阴离子交换树脂，分类：强碱型阴离子交换树脂、弱碱型阴离子交换树脂、中强碱性阴离子交换树脂
21、多糖基离子交换剂主要分为哪两类
离子交换纤维素和葡聚糖凝胶离子交换剂
22、CM-sephadex C-25（羧甲基纤维素）；C—阳离子
功能基团是：羧甲基；载体是：葡聚糖凝胶；型号是：G-25；类型：弱酸型阳离子交换剂DEAE-sephadex A-25（二乙胺基乙基纤维素）；A—阴离子
功能基团是：二乙基氨基乙基纤维素；载体是：葡聚糖凝胶；型号：G-25 ；
类型：强碱型阴离子交换剂
23、K值为离子交换常数，K＞1说明树脂对交换离子吸引力较大
第七章凝胶层析
24、葡聚糖凝胶的孔径大小取决于交联度，其越小，凝胶孔径越大；而琼脂糖凝胶的孔径却依赖于琼脂糖浓度。
25、琼脂糖凝胶的一个特征是分离的分子量范围非常大，其分离范围随着凝胶浓度上升而下降，颗粒强度随浓度上升而提高。
26选择：1）、凝胶层析中，有时溶质的Kd>1，其原因是（ B ）
A.凝胶排斥
B.凝胶吸附
C.柱床过长
D.流速过低
2）、凝胶层析中，有时小分子溶质的Kd<1，其原因是（A ）
A.水合作用
B.凝胶吸附
C.柱床过长
D.流速过低
3）、在凝胶层析中样品各组分最先淋出的是（A ）
A.分子量最大的
B.体积最大的
C.分子量最小的
D.体积最小的
4）、为了进一步检查凝胶柱的质量，通常用一种大分子的有色物质溶液过柱，常见的检查物质为蓝色葡聚糖，下面不属于它的作用的是（ C ）
A.观察柱床有无沟流
B.观察色带是否平整
C.测量流速
D.测量层析柱的外水体积
27.凝胶层析的原理及特点。
凝胶层析原理：是将样品混合物通过一定孔径的凝胶固定相，由于各组分流经体积的差异，使不同分子量的组分得以分离的层析方法。
特点：（1）凝胶层析操作简便、设备简单(仅需一根层析柱)。（2）分离效果较好，重复性高，样品回收率高,接近100%。（3）分离条件缓和。（4）应用广泛（5）分辨率不高，分离操作较慢。
28.柱床体积、内水体积、外水体积、基质体积、洗脱体积、分配系数、全渗入、全排阻
⑴柱体积(VA) ：柱体积是指凝胶装柱后，从柱的底板到凝胶沉积表面的体积，又称“床”体积。
⑵外水体积（Vo）：色谱柱内凝胶颗粒间隙，这部分体积称外水体积，亦称间隙体积。
⑶内水体积（Vi）：因凝胶为三维网状结构，颗粒内部仍有空间，液体可进入颗粒内部，水的总和为内水体积，又称定相体积。不包括基质的体积（Vg）。
VA= Vo +Vi+Vg V柱内空间＝Vo＋Vi
（4）（排阻系数）分配系数Kd
当Kd=1时，洗脱体积Ve=V0+Vi，为全渗入。
当Kd=0时，洗脱体积Ve=V0，为全排阻。
0＜Kd＜1时，洗脱体积Ve=Vo+KdVi，为部分渗入。
因此分子的正常Kd值0~1之间,这种由小到大的Kd值顺序决定了物质流出的顺序。
29.什么是“类分离”和“分级分离”？
(1).将分子量极为悬殊的两类物质分开，如蛋白质与盐类，称作类分离。
(2).将分子量相差不大的大分子物质加以分离，如分离血清球蛋白与白蛋白，这叫做分级分离。
30、亲和层析：利用生物大分子物质具有与某些相应的分子专一性可逆结合的特性而建立的层析技术。
31亲和层析的原理是什么？主要特点是什么？
原理:1）配基固定化：配基与载体偶联，结合成具有特异亲和性的分离介质。2）吸附样品：
亲和层析介质选择性吸附生物活性物质.3）样品解吸：选择适宜的条件使被吸附物活性物质解吸。
特点：经过一次处理可得到高纯度活性物质；设备要求不高、操作简便、特异性强、分离速度快、分离效果好、分离条件温和；亲和吸附剂通用性较差，专用的吸附剂。
32生化药物的特点？生化药物的主要资源有哪些?
特点：1）．药理学特性：药理活性高，针对性强；毒副作用少，营养价值高；生理副作用常有发生如免疫原反应过敏反应；2）．化学特性：含量低、杂质多、工艺复杂、收率低、技术要求高；结构复杂，生物活性受空间结构严格限制，稳定性差；易染菌、腐败。3）.天然生化药物是新型生物药物的先导物：通过合理药物设计，可以创制疗效更高，作用更专一，更易为机体接受，副作用与不良反应更小的新药。
生化药物的资源：植物;动物；微生物；海洋生物；
33氨基酸有哪些生产方法？各有什么主要特点？
A目前构成天然蛋白质的20种氨基酸的生产方法有天然蛋白质水解法、发酵法、酶转化法及化学合成法等四种。
B目前蛋白质水解分为酸水解法、碱水解法及酶水解法三种。
C发酵的基本原理生物化学中称酵母无氧呼吸过程为发酵，反应过程中电子供体与受体皆为有机物，有时电子受体为电子供体的分解产物，氧化作用不完全，最终形成还原性产物。D工业上，发酵实质上是利用微生物细胞中酶的作用，将培养基中有机物转化为细胞或其它有机物的过程。目前绝大部分氨基酸皆可通过发酵法生产，其缺点是产物浓度低，设备投资大，工艺管理要求严格，生产周期长，成本高。
E酶转化法的基本原理及过程
酶转化法亦称为酶工程技术，实际上是在特定酶的作用下使某些化合物转化成相应氨基酸的技术。
酶工程法与直接发酵法生产氨基酸之反应本质相同，皆属酶转化反应，但前者为单酶或多酶的高密度转化，而后者为多酶低密度转化。
酶工程技术工艺简单，产物浓度高，转化率及生产效率较高，副产物少。
固定化酶或细胞可进行连续操作，节省能源和劳务，并可长期反复使用。
34简述用酶转化法由反丁烯二酸生产天冬氨酸，丙氨酸的过程和所用的关键酶。
35简述氨基酸输液的组方原理和原则，常用的氨基酸输液有哪几种类型？
A多种结晶L-氨基酸依特定比例混合制成的静脉内输注液谓之氨基酸输液。氨基酸输液可直接注入进食不足者的血液中，促进蛋白质、酶及肽类激素的合成，提高血浆蛋白浓度与组织蛋白含量，维持氮平衡，调节机体正常代谢。
现已有含氨基酸数目为11、14、18及20种等多种输液类型，氨基酸浓度分别有3％、5％、9％、10％及12％等多种规格。
有些氨基酸输液还加入山梨醇、木糖、维生素、Na＋、K＋、Ca2+或Mg2+等成分，以补充能量，提高氨基酸的利用率及其营养价值，也有些氨基酸输液与右旋糖酐配伍制成较理想的代血浆。
B组方原理
体内蛋白质处于连续分解与合成的动态平衡状态，故氨基酸输液以被患者的有效利用为度。目前国内外生产氨基酸输液组方多采用人乳全蛋白、FAO、FA○-WHO或血浆游离氨基酸模式。组方中必须含八种必需氨基酸和两种半必需氨基酸，所有氨基酸均为L-型。另外，组方中尚需含5％山梨醇或木糖醇，以补充能量、促进氨基酸的吸收和利用，同时加半胱氨酸作为稳定剂，由此方能构成优良的氨基酸输液。
C处方中氨基酸的组成与比例
1）、氨基酸的构型最理想的情况是全部使用L-氨基酸配制输液。
2）、必需氨基酸与非必需氨基酸的比例
非必需氨基酸可由必需氨基酸或碳水化合物转化而来，补充非必需氨基酸可减少体内必需氨基酸的消耗。输液中必需氨基酸（E）与非必需氨基酸（N）之比（E／N）依具体情况而定。一般在1：1～1：3之间；必需氨基酸（E）占总氨基酸的50％～75％；必需氨基酸（E）与总氮量（T）之比以3为宜。国内氨基酸输液的总含氮量为0.6％～0.8％。
D氨基酸输液的类型：代血浆用输液；止血用氨基酸输液；婴幼儿用氨基酸输液；治疗用氨基酸输液。
36多肽类药物可分为哪几大类？蛋白质类药有哪几大类？
多肽类药物分类：多肽激素、多肽类细胞生长调节因子、含有多肽成分的其它生化药物蛋白质类药物分类：蛋白质激素、蛋白质类细胞生长调节因子、粘蛋白、胶原蛋白、碱性蛋白质、蛋白酶抑制剂、凝集素
37在多肽的固相合成方法中，常用的氨基保护剂有哪些？
38熟悉多肽的固相合成方法的过程？
39多肽合成的主要步骤：1）氨基的保护和羧基的活化；2）羧基的保护和氨基的活化；3）接肽和去保护基
氨基保护基
苄氧羰基——强酸脱除
叔丁氧羰基（BOC）——三氟乙酸（TFA）脱除
9-芴甲氧羰基（Fmoc）——碱脱除
40多肽的固相合成(Fmoc保护法)
（1978年改进的方法，避免了强酸处理）
41分离纯化方法的选择
1)分离纯化的早期使用方法的选择
特点：提取液中的物质十分复杂，目的蛋白浓度较稀。
方法选择原则：低分辨能力到高分辨能力，而且负荷量较大为合适。
2)各种分离纯化方法的使用程序
原则：相同性质的纯化方法一般不重复使用。纯化方法顺序先后的安排上要考虑到有利于减少工序，提高效率。
3)分离纯化后期的保护性措施
4)对每一步骤方法的优势进行综合评价
每一个分离纯化步骤方法的好坏，除了从分辨本领和重现性二方面考虑外，还注意方法本身的回收率的高低。
42熟悉并理解以胰脏为原料采用“酸醇提取法“生产胰岛素的工艺。
43Ins的性质
44重组DNA技术制造人胰岛素有两种途径？
1）AB链合成法：以人工合成的人胰岛素A链和B链基因分别表达A链和B链，然后再组合起来。
2）反转录酶法：通过胰岛素原的cDNA合成，表达产物是胰岛素原，经工具酶切开，除去C-肽得人胰岛素。
45依据结构特点及临床应用核酸类药物可分为哪几类？
1）具有天然结构的核酸类物质如：肌苷、ATP、GTP、CTP、UTP、CoⅠ等；
来源：提取或发酵；特点：毒副作用小
2）自然结构碱基、核苷、核酸类结构的类似物如：巯嘌呤、阿糖胞苷、聚肌胞等
来源：以核酸类物质为前体通过“化学法”或“酶法”进行半合成；特点：毒性较大
46试述用营养缺陷型菌株发酵生产核苷及核苷酸的原理核方法。
47依据化学结构和组成分四类：核酸碱基及其衍生物、核苷及其衍生物、核苷酸及其衍生物、多核苷酸
48核苷酸的制备有水解法、发酵法、半合成法、直接提取法
酶水解: DNA或RNA为原料制备5′－核苷酸
常用的酶：橘青霉产生的5′－磷酸二酯酶
碱水解：可制备3??和2??－核苷酸
49发酵法生产核苷酸
IMP积累的主要途径（前提）
保证IMP合成路线畅通：
保证关键酶PRPP转酰胺酶的活力---解除腺嘌呤及衍生物的组遏和反馈抑制
阻断IMP的去路：
阻断SAMP合成
阻断IMP的分解
筛选获得缺乏SAMP合成酶的腺嘌呤缺陷菌株，提供亚适量的腺嘌呤。
使积累的IMP渗透到细胞外：
增大细胞膜通透性
选育Mn2+不敏感的变异株
50发酵法生产核苷
51依据功效和临床应用酶类药物可分为哪几类？
52熟悉从生物材料中提取酶的主要过程和分离纯化过程中应注意的问题？
53熟悉理解CuZn-SOD和Mn-SOD的生产工艺及测定方法。
54酶的分类
55超氧化物歧化酶（SOD）
结构特点：金属酶
Cu、Zn-SOD: Mw32000，2个亚基，每个亚基含1个Cu，1个 Zn，存在于真核细胞中
Mn-SOD: 原核细胞中，Mw40000,2个亚基，每个亚基1个Mn
真核细胞中，Mw80000，4个亚基，每个亚基1个Mn
Fe-SOD: Mw38000，2个亚基，每个亚基含1个Fe，存在于原核细胞中
酶的性质：1）稳定性
对热稳定：天然牛血SOD可75℃加热数分钟，对热稳定性与溶液离子强度有关
对pH的稳定性：一般pH5.3~9.5较稳定，猪血SOD在pH7.6～9较稳定
2)金属辅基与酶活性关系:
Cu、Zn-SOD：Zn与分子结构有关，与催化活性无关,Cu与活性有关，对酶活力是必需的
Mn-SOD：Mn对酶活力是必需的
Fe-SOD：Fe对酶活力是必需的
56.以牛血红细胞提取Cu、Zn-SOD的工艺
57.以牛肝为原料提取Mn-SOD的工艺
58粘多糖的特点？
粘多糖：是指含有氨基糖与糖醛酸或它的衍生物的多糖。
粘多糖在结构上的特点：1）粘多糖基本上是由特殊的重复双糖单位构成，在此双糖单位中包括一个N-乙酰氨基己糖；2）粘多糖的组成结构单位中有两种糖醛酸，即：D-葡萄糖醛酸和L-艾杜糖醛酸；有两种氨基己糖，即：氨基-D-葡萄糖和氨基-D-半乳糖；3）粘多糖中还有若干其它单糖作为附加成分，如半乳糖等
59简要说明多糖结构与多糖活性的关系。
60熟悉并理解盐解-离子交换法生产肝素的工艺
61术语：生化药物，粘多糖，多糖一级结构
62多糖在细胞内的存在方式
1)游离型
2）结合型:糖蛋白，如人参多糖、黄芪多糖等；脂多糖，如胎盘脂多糖、细菌脂多糖等。63粘多糖的连接方式
64多糖的结构
65多糖的构效关系
66多糖分离纯化的一般方法
67肝素的结构
68肝素的性质
1）分子量不均一，有高中低三类不同分子量组成，平均分子量12000±6000，从3000-37500。2）易溶于水，不溶于乙醇、丙酮等有机溶剂，其游离酸在乙醚中有一定溶解性。3）含硫酸基和羧基，呈强酸性，为聚阴离子。4）N-硫酸基对酸敏感，在碱性条件稳定。69肝素生产工艺
69试列举两种微生物产生的酶抑制剂和免疫调节剂。
70术语：微生物药物，抗生素，β-内酰胺酶抑制剂，β-内酰胺类抗生素，氨基糖苷类抗生素，大环内酯类抗生素
71抗生素制备的一般过程
1）培养发酵；2）发酵液预处理；3）固液分离
胞内产物->细胞破碎->固液分离->初步纯化->精制
胞外产物->初步纯化->精制
72其他微生物药物
一、微生物产生的酶抑制剂
（一）β-内酰胺酶抑制剂克拉维酸舒巴坦
克拉维酸(CVA)，又名棒酸
1976年从棒状链霉菌的代谢产物中分离得到了克拉维酸，本身抗菌活性很弱，但与羟氨
苄青霉素组成的复合剂奥格门汀、与羧噻吩青霉素组成的复合剂timentin都具有很好的协同作用，并应用于临床。
克拉维酸提取纯化工艺
工艺要点：萃取与浓缩
沉淀：与碱性有机胺成盐而沉淀析出；10℃，搅拌加入5%（2－（二甲氨基）乙基）醚的乙醇溶液转型
（二）降血脂作用的酶抑制剂：洛伐他汀
----胆固醇的生物合成途径
洛伐他汀为第一个上市的HMG-CoA还原酶抑制剂，它具有显著的降血脂效果，一般可使血浆总胆固醇下降30%~40%，低密度脂蛋白下降35%~40%，甘油三脂中等程度下降，还有升高高密度脂蛋白的作用。
洛伐他汀生产工艺
1.发酵液的预处理
发酵生成的洛伐他汀以游离酸为主，由于游离酸在水中的溶解性很小，因而大部分存在于菌丝体中。为将洛伐他汀溶出，可将发酵液调节至碱性，再过滤
2.醋酸乙酯萃取
3.硅胶柱层析
二、微生物产生的免疫调节剂
免疫抑制剂环胞菌素A
免疫增强剂乌苯美司
103、试叙述基因工程药物的一般制备过程。
104、简述疫苗的一般制备方法。
105、病毒类疫苗制备过程中，病毒的扩增方法有哪些？
106、生物制品可分为哪些类别，请举例说明之。
第一节生物制品基本概念
一、定义及概述
生物制品（biological product）是应用普通的或以基因工程、细胞工程、蛋白质工程、发酵工程等生物技术获得的微生物、细胞及各种动物和人源的组织和液体等生物材料制备，用于人类疾病预防、治疗和诊断的药品。
二、分类
1、疫苗(Vaccine)
2、抗毒素及免疫血清(Antitoxin and Antisera)
由特定抗原免疫动物所得由血浆或血清制成；称抗毒素或免疫血清。
如破伤风抗毒素、抗狂犬病血清等，用于治疗或被动免疫预防。
3、血液制品(Blood Products)
由健康人的血浆或特异免疫人血浆分离、提纯或由重组ＤＮＡ技术制成的血浆蛋白组分或血细胞组分制品,
如人血白蛋白、人免疫球蛋白、人凝血因子(天然或重组的)、红细胞浓缩物等,用于诊断、治疗或被动免疫预防。
4、细胞因子(Cytokines)及重组ＤＮＡ产品(Recombinant DNA Products)
由健康人血细胞增殖、分离、提纯或重组ＤＮＡ技术制成的多肽类或蛋白质类制剂, 如干扰素(ＩＦＮ)、白细胞介素(ＩＬ)、集落刺激因子(ＣＳＦ)、红细胞生成素(ＥＰＯ)等,用于治疗。
5、诊断制品(Diagnostic Reagents)
（1）体外诊断制品:由特定抗原、抗体或有关生物物质制成的免疫诊断试剂或诊断试剂盒,如伤寒、副伤寒、变形杆菌诊断菌液,沙门氏菌属诊断血清,ＨＢｓＡｇ酶联免疫诊断试剂盒等,用于体外免疫诊断;
（2）体内诊断制品:由变态反应原或有关抗原材料制成的免疫诊断试剂,用于皮内接种等。
如卡介菌纯蛋白衍生物(ＢＣＧ-ＰＰＤ)、布氏菌纯蛋白衍生物(ＲＢ-ＰＰＤ)、锡克实验毒素、单克隆抗体等,用于体内免疫诊断。
6、其它制品
由有关生物材料或特定方法制成,不属于上述5类的其他生物制剂,用于治疗或预防疾病。如治疗用Ａ型肉毒素制剂、微生态制剂和卡介菌多糖、核酸制剂等。
二、疫苗的种类和发展
1、常规疫苗：
活疫苗：用人工定向变异方法或从自然界筛选出的毒力高度减弱或基本无毒的活的微生物制成的预防制剂
死疫苗：收获经增殖的标准微生物株，用物理或化学方法将其杀死或灭活制成的预防制剂死疫苗与活疫苗的比较
2、亚单位疫苗：
设法去除病原体中对激发保护性免疫无用的甚至有害的成分，保留有效的免疫成分所制成的疫苗
3、合成肽疫苗：
用化学合成的能够诱发机体产生免疫保护的多肽制成的疫苗。
4、基因工程疫苗（gene engineered vaccines）
利用重组DNA技术克隆并表达保护性抗原基因，利用表达的抗原产物，或重组体本身制成的疫苗。主要有以下五种：
1）基因工程亚单位疫苗
将基因工程表达的蛋白抗原纯化后制成的疫苗，安全性高，但免疫效果一般较差。
2）载体疫苗（vector vaccine）
指利用微生物载体，将保护性抗原基因重组到微生物中，使用这种能表达保护性抗原基因的重组微生物制成的疫苗（多为活疫苗）
3）核酸疫苗（DNA 疫苗，基因疫苗）
指使用能够表达抗原的基因本身即核酸制成的疫苗。
4）基因缺失活疫苗
就是使用通过分子生物学技术去除与毒力有关基因获得的缺失突变毒株制成的疫苗5）蛋白质工程疫苗（protein engineering vaccine）
将抗原基因加以改造，以达到增强产物的免疫原性，扩大反应谱，去除有害作用或副反应的一类疫苗
核酸疫苗具体的说，DNA Vaccine是指含有编码抗原基因的真核表达质粒DNA经直接接种体内后，可被细胞摄取、并转录、翻译、表达出相应的抗原，然后通过不同的途径刺激机体产生针对此种抗原的免疫应答。
DNA疫苗的构建
DNA疫苗的制备：细菌的扩增、质粒的大量提取
体外哺育动物细胞短暂转染试验
动物免疫试验
三、病毒类疫苗的一般制造方法
（一）毒种的选择和减毒
要求：
有抗原性；
有典型形态和感染特定组织的特性；
易培养繁殖；
不产生其他毒素；
稳定，无恢复致病力现象；
未被污染
常用的细胞培养
如甲型肝炎的病原体是甲型肝炎病毒（hepatitis A virus, HAV）国外使用细胞培养来源的病毒材料研制了纯化的灭活甲肝疫苗，如史克必成的贺福立适（Havrix）和默沙东的Vaqta。
四、细菌类疫苗及类毒素的一般制备方法
细菌类疫苗
（一）菌种的选择
（二）培养基
（三）培养条件
（四）杀菌
（五）稀释、分装和冻干
如卡介苗
卡介苗（bacille calmette－guerin）是对牛型结核杆菌(M. bovis), 通过体外连续传代230次以上，历时13年获得的无致病性分支杆菌制备的。是最早的细菌性减毒活疫苗。Modification of Toxin to Toxoid
107、基因工程技术中，目的基因的获得有哪些方法？
108、基因治疗中常用的载体有哪些？
109、应用基因药物来治疗癌症可用哪些抑癌方法？
110、表达载体的一般要求是什么？
111、常用的基因工程宿主有哪些，各有什么特点？
112、PCR反应体系中，主要有哪些物质？
113、术语：基因重组，疫苗，菌苗，重组药物，基因药物，合成肽疫苗，生物制品，DNA 疫苗，亚单位疫苗，载体疫苗，细胞因子，IFN，EPO，包涵体，多克隆位点
重组DNA药物
一、重组DNA技术与基因工程的基本定义
优点：
1、可大量生产过去难以获得的生理活性蛋白和多肽；去除内源性物质的不足之处
2、提供足够数量的生理活性物质，以进行生理生化、结构的研究
3、利用基因工程技术可发现、挖掘更多内源性生理活性物质
4、获得新型化合物
DNA重组药物制造的主要步骤
二、基本过程
上游阶段：实验室
获得目的基因、酶切和酶连、插入适当载体、转入宿主细胞、复制、目的基因分析确证、表达、筛选合适表达系统等
下游阶段：将实验室成果产业化
发酵参数确定、新型生物反应器研制、高效分离介质及装置开发、生物传感器设计制造、电子计算机优化控制、产品质量控制
注意：上游DNA重组的设计必须以简化下游操作工艺和装备为指导思想；而下游过程则是上游基因重组蓝图的体现和保证，这是基因工程产业化的基本原则。
2）、表达载体
要求：
a、能独立复制
b、有灵活的多克隆位点和方便的筛选标记
c、具有有效运载外源基因的能力，能携带大小不同的外源基因
d、容易控制，在细胞内稳定性高，安全可靠。
如大肠杆菌的pBV220系统，为温度诱导表达载体，已成功用于IL-2，IL-3，IFN等
pET系统，最有潜力的系统，可用乳糖代替IPTG（异丙基硫代-β-D-半乳糖），产物可达细胞总蛋白20~30%，表达量可达总蛋白50%。
pET载体
五、重要的重组DNA药物
（一）利用重组大肠杆菌生产医用蛋白或多肽
代表产品：重组人胰岛素、重组人生长激素、重组人干扰素、重组人白细胞介素、重组人集落刺激因子、重组抗体及其片断等。
1）、干扰素（IFN-α、β、γ）
1957年Isaccs等发现病毒干扰现象，即病毒感染的细胞能产生一种因子，作用于其他细胞干扰病毒复制，因而命名为干扰素。
根据产生干扰素细胞的来源、理化性质和生物活性等差异，可分为α、β、γ等3种，其中IFN-α为多基因产物，有23种以上的亚型。
1986年，FDA批准Roch公司的重组IFN-α2a和Schering公司的重组IFN-α2b，重组IFN-β、γ分别在1990年和1993年上市。
我国中国预防医学科学院病毒学研究所侯云德等发现中国人受病毒攻击产生的干扰素主要为IFN-α1b型，1992年我国第一个基因工程药物IFN-α1b获得国家一类新药证书。
2）胰岛素(Insulin, Ins)
1921年，Banting FG等从胰脏中分离
1955年，Sanger F测序
1965年，我国完成结晶牛胰岛素全合成
1979年，Rutter W等克隆了胰岛素基因
1982年，第一个重组人胰岛素批准上市
胰岛素的结构及生物合成
胰岛素原与胰岛素
人胰岛素的生产方法
产人胰岛素大肠杆菌工程菌的构建策略
(a) AB链分别表达法体外折叠成功率低，通常只有10～20％
(b) 人胰岛素原表达法由于C肽的存在，胰岛素原在复性条件下能形成天然的空间构象，为三对二硫键的正确配对提供了良好的条件，使得体外折叠率高达80％以上目前Ely Lily 用这种工艺路线年产几十吨的重组人胰岛素，其经济效益相当可观。
(c) AB链同时表达法
3）生长激素
1944年，李卓浩等从牛垂体中分离出牛生长激素
1956年，从人垂体中分离出hGH
1969年，hGH序列报道
临床上用于垂体性侏儒症。1956~1985年，只能从人尸体垂体中分离纯化。但至1985年，共发现50多例克-雅氏症，5人病亡，研究结果证实由垂体来源的生长激素污染有朊病毒。1985年，垂体来源的被禁用，同年，rhGH上市。
1985年，美国FDA批准由大肠杆菌发酵生产的重组人生长激素上市，随后各种途径生产的重组人生长激素迅速充斥市场。1997年，仅美国Genentech和Ely Lily两家公司的重组人生长激素年产量已达20kg，年销售额超过3.5亿美元。
人生长激素的结构与性质
重组人生长激素工程菌的构建
（二）利用重组酵母生产医用蛋白
优势：
1.最简单的真核生物，基因表达调控机理较清楚，并且遗传操作相对较为简单；
2.具有原核无法比拟的真核生物蛋白翻译后修饰加工系统
3.不含有特异性的病毒，不产生毒素，有些酵母菌在食品工业当中有着几百年的应用历史，属于安全型基因工程受体系统；
4.大规模发酵工艺简单，成本低廉
5.能将外源基因表达产物分泌至培养基中
劣势：虽然拥有完整的蛋白质糖基化修饰系统，但其修饰方式不同于高等真核生物。
举例：重组乙肝疫苗重组人血清白蛋白
重组HAS的制备
人血清白蛋白HAS是血浆中的主要成分载体蛋白。成熟的人血清白蛋白为一非糖基化的单一多肽链，由585个氨基酸组成，含有17对二硫键，由此维系的空间构象是血清白蛋白的生物
功能所必需的。
巴斯德毕赤酵母是迄今为止最为优良的重组人血清白蛋白的表达分泌系统。产率可高达15g/L
（三）利用转基因动物或细胞生产生物大分子
1.利用动物乳腺组织生产蛋白药物
酪蛋白、 tPA 、 IL－2
2.利用哺乳动物细胞大规模培养技术生产复杂的人体蛋白
例如 EPO
促红细胞生成素（EPO）
由肾脏分泌的一种唾液酸蛋白，它能促进红细胞系的增值、分化和成熟 .
由166个氨基酸残基组成的高度糖基化蛋白，其糖基对其生物活性至关重要
目前用哺乳动物细胞表达系统如CHO细胞生产。
临床为治疗肾衰导致贫血的首选药物，全世界销售额超过10亿美元。
1957年Jacobson等证实，肾脏是血清EPO的主要来源，含量极微小，无法分离纯化获得纯品。直到1985年，Jacobs等才先后成功克隆出人、猴、小鼠的EPO基因，随后重组人EPO 在CHO细胞中获得表达，并通过层析纯化技术制备出rHuEPO纯品，于1989年获得美国FDA 批准后首次投放市场。
EPO制备工艺
根据已知天然EPO的氨基酸序列，合成相应的寡聚核苷酸探针，筛选出人EPO基因，引入真核生物质粒表达载体PD11,用磷酸钙微量沉淀法转染CHO细胞，克隆培养后，检测培养上清中EPO的生物学活性，筛选出高效表达EPO的细胞株，按照《中国生物制品规程》要求建立种子库，检定合格后用于生产。
CHO工程细胞在条件培养基中培养时，表达的EPO分泌到培养上清中，上清液中除了EPO 外，还含有培养基成分和其他杂蛋白，利用EPO 本身的物理化学性质，将培养上清液加热至80℃，或用6mol/L盐酸胍、8mol/L尿素沉淀，可以除去大多数杂蛋白。上清液超滤浓缩后，经过一系列的凝胶过滤层析，如Sephadex G－25，Sephacryl S－200及Bio－gel P 等多步凝胶过滤，其EPO的纯度可达到90％以上。进一步纯化可用Sepharose 4B偶联EPO单克隆抗体或多克隆抗体亲和层析或经高压液相层析，其EPO纯度可达99％以上。
5、生物活性物质的浓缩与干燥有哪些主要方法？
6、简述生物活性物质分离纯化的主要原理。
7、怎样保存微生物菌种？何谓菌种退化？如何检查菌种退化？
8、重组DNA技术的基本原理，如何获得目的基因？
9、常见的基因载体有哪些？如何构建基因重组体？
10、DNA重组体主要有哪几种表达系统？各有什么特点？
11、生物制药工艺中试放大的目的是什么？怎样进行中试放大？
12、酶固定化的方法有哪些类别？
13、术语：诱变育种，蛋白质工程，转基因动物，蛋白质组学，酶工程，immobilized enzyme，
5、生物活性物质的浓缩与干燥有哪些主要方法？
三．浓缩与干燥
1.浓缩方法：
①盐析；
②有机溶剂沉淀；
③高分子脱水；
④超滤；
⑤真空浓缩或薄膜
浓缩
四、分离纯化
1. 生化制药工艺中分离纯化特点:
(1) 生物材料组成复杂，无固定操作方法可循
(2) 目的物含量低，分离困难，步骤多，收率低。
(3) 活性成分易变性、失活，故分离工程中应十分小心保护。
(4) 分离方法中，各参数（温度、PH、离子强度）对溶液中组分的影响存在很大变数，致许多实验理论性不强，结果有很大经验成分
(5) 分离过程步骤多，逐级分离，因此耗时较长。
(6) 产品验证与化学上纯度概念不完全相同，均一性需多角度测定，不能仅凭一种方法测得。
3.菌种保存
（1）保存目的：防止退化
（2）菌种退化检查方法：A活性物产量下降。B单菌落形态；C菌体细胞的遗传特征；D发酵液的气味、色质；E发酵过程PH变化。
（3）菌种退化防止方法
①防止基因突变：如低温保藏
②采用双重缺陷型
③制作平行的菌种斜面，少传代
④分离单菌落，自然筛选
⑤选择培养条件
（4）菌种保藏方法：
①斜面低温保存
②液体石蜡封藏法
③甘油冷冻法
④冷冻干燥法
⑤液氮保藏法
14、去除发酵液中杂蛋白有哪几种方法？
16、影响絮凝效果的主要因素有哪些？
三、细胞培养液的预处理
说明：a聚合分子分散、均匀分布于胶粒之间，b聚合分子链在胶粒表面吸附，c被吸附的链重排包围在胶粒表面起保护作用，是架桥作用的平衡构象d脱稳离子碰撞形成架桥絮凝，e
絮凝团打碎
絮凝剂包括天然和人工聚合物两大类，后者又包括有机无机两类，其特征都是分子量大的高分子聚合物。
天然高分子聚合物：多糖类物质-壳聚糖、海藻酸钠明胶和骨胶，特点是来源于天然动植物，安全无毒，适用于食品和医药。
人工合成高分子聚合物：聚丙烯酰胺类、聚苯乙烯类、聚丙烯酸类衍生物，生物活性物质中常用聚丙烯亚胺。
该类物质的特点：用量小、絮凝体粗大易沉淀、絮凝速度快、种类多，但有一定毒性，在食品医药中要考虑后续清除工艺。
无机高分子聚合物：聚合铝盐、聚合铁盐。
菌体和蛋白多带负电性，因而加入阳离子性絮凝剂会有降低粒子排斥电位和絮凝的双重效果，非离子或阴离子絮凝剂之前加入无机盐处理，促进架桥连接。
3、变性沉淀：利用物理的、化学的方法，使杂蛋白变性沉淀析出的方法，
最常用的方法是加热法。但只适用于对热稳定的目标物，而且温度和时间要严格掌握。
另外，大幅度改变PH值，加入有机溶剂、重金属盐或表面活性剂以及紫外线照射都可以。
4、等电点沉淀利用蛋白质是两性物质，等电点时水溶解度下降，可沉淀析出。如硫酸软骨素制备中，猪喉或鼻软骨提取后，盐解后调PH2-3，搅拌10分钟，杂蛋白沉淀。
还可以结合其他方法。
15、去除发酵液中钙、镁、铁离子的方法有哪些？
17、细胞破碎有哪些方法？各有什么特点？
第二节细胞破碎
二、物理法
（一）干燥法
1、空气干燥酵母菌常用，25-30℃热风吹干后，部分酵母产生自溶。
2、真空干燥适用于细菌，干燥成块易磨碎、
3、喷雾干燥如制作奶粉、
4、冷冻干燥制备不稳定的活性物质
三、化学法
20、溶剂萃取法的基本原理
21、溶剂萃取法按操作方式不同，可分为哪几类？各有什么特点？
22、乳化剂为何能使乳状液稳定？
第二节影响溶剂萃取的因素
乳化剂使乳状液稳定与以下因素有关：
（1）界面膜形成表面活性剂在分散相周围排列紧密形成，形成保护膜，不易破裂，防止液滴聚集沉淀。
（2）界面电荷的影响液珠表面吸附了电离乳化剂离子而带电荷，O/W型油珠带负电荷，W/O 型水珠带正电荷。阻止聚沉。
（3）介质黏度增加粘度可阻止聚沉。
23、破坏乳状液的方法有哪些？
（三）、乳状液的破坏
4、加热增加布朗运动、降低粘度而促凝，适用于对热稳定物质。
5、吸附法破乳将乳状液通过多孔介质，利用吸附差吸除水或油。
6、高压电破乳利用高压电场。
7、稀释法加入连续相使乳化剂浓度降低。
24、影响乳状液类型的因素有哪些？
（二）、影响乳状液类型的因素
25、影响双水相萃取的因素有哪些？
三、影响双水相萃取的因素
（二）成相聚合物浓度
——界面张力
（三）、电化学分配
——盐类的影响
（四）、疏水效应
（五）、温度及其它因素
26、影响超临界流体萃取的因素有哪些？
3.影响超临界流体萃取的因素
3.2温度的影响
3.3助溶剂，又称夹带剂。
3.4物料性质的影响
28、什么是“盐析沉淀”？盐析的基本原理？
第一节盐析法 (salt precipitation)
一、基本原理
蛋白质在水中的溶解度与其表面性质有关。
蛋白质表面有亲水基团（如氨基）和疏水基团（如烃基）。
蛋白质形成稳定胶体溶液的原因：
表面亲水基团与水形成水化膜
PH偏离等电点时带同种电荷
降低蛋白质溶解度，促使其沉淀的措施
原理
在盐析区，符合公式
?、 KS
在生产中，Ks盐析法多用于提取液的前期分离。此时，保持PH和温度不变，加入固体中性盐或其饱和溶液，这样使被盐析物质的溶解度剧烈下降而沉淀析出。但易出现共沉淀现象，故分辨率低。
β盐析法多用于分离的后期或结晶时，此时，仅改变PH和温度，溶质的溶解度变化缓慢，不同蛋白质分别沉淀，分辨率高
29、影响盐析效果的因素有哪些？
(二）溶质（蛋白质等）种类的影响
盐析分布曲线
由上图可见，蛋白质沉淀的速率开始时十分迅速，以后逐渐变慢，形成一个具有尖峰的曲线，称为蛋白质的盐析分布曲线。其峰宽由Ks决定，而在横轴上的位置则由β值和蛋白质浓度决定。利用蛋白质在横轴上的位置不同可用先后加入不同量的无机盐的办法分级沉淀蛋白质，使其分离。
（三）蛋白质浓度的影响
（四）温度的影响
（五）pH的影响
30、影响有机溶剂沉淀的因素有哪些？
二、影响沉淀效果的因素
（二）pH的影响
许多蛋白质在等电点附近时溶解度最低，溶液pH应在等电点附近，但必须首先保证蛋白质的稳定性。第二，PH须使目的蛋白和杂蛋白带同种电荷，避免出现共沉。
沉淀物要先老化0.5-2h，然后过滤或离心分离，接着真空抽出剩余溶剂或加入缓冲液稀释溶剂，以减少溶剂引起蛋白变性。
（四）无机盐的含量
低盐：有利于沉淀，还有保护蛋白质，防止变性。低浓度（0.01-0.05mol/l）的单价盐（醋酸钠、醋酸铵、氯化钠等）。
高盐：增大蛋白质在有机溶剂―水溶液中的溶解度，沉淀物中可能夹带盐。所以，盐析沉淀用有机溶剂沉淀时，需先脱盐，否则在加大溶剂用量。
（六）样品浓度
31、有哪些方法可形成过饱和溶液？
二、过饱和溶液的形成(结晶方法)
蒸发法
蒸发法是在常压或减压下加热蒸发除去部分溶剂，从而维持溶液过饱和度的结晶方法。
要求目标物对热稳定，溶解度随温度升高而降低或不变，
常于易挥发的有机溶剂中结晶目标物。如对丝裂霉素的甲醇-三氯甲烷溶液真空浓缩得到结晶；对灰黄霉素的丙酮溶液真空浓缩得到结晶。
温度诱导法-目标物随温度变化大，通过调整温度使溶液缓慢达到过饱和而产生结晶。
盐析结晶法-是蛋白质及酶类药物制备中常用方法。采用加入中性盐和冷却相结合的方法。
透析结晶法-溶解度变化缓慢，适宜结晶条件苛刻的蛋白质
有机溶剂结晶法-向结晶液中加入有机溶剂，降低溶解度的方法。
有机溶剂有：乙醇，丙酮、甲醇、丁醇、异丙醇、乙腈、2，4-二甲基戊二醇（MPO）。
如天冬酰胺酶粗品—溶解—透析（去杂）--加0.6倍体积MPO（去大分子杂质）--加0.2倍体积MPO—精品沉淀—加缓冲液溶解—滴加MPO至浑浊--4℃冰箱24h—酶结晶
如卡那霉素脱色液—加95%酒精至微混—加入晶种，30--35 ℃保温—结晶（卡那霉素易溶于水，难溶于乙醇）
32、哪些因素可影响晶体的大小？
33、等电点沉淀有哪些特点？如何应用？
第三节其它沉淀方法
注意事项：
生物高分子等电点易受离子浓度影响，
阴离子、阳离子
目的物的稳定性。
要分离物质之间的等电点差异大
35、化学吸附与物理吸附的区别？
《生物制药工艺学》复习思考题
《生物制药工艺学》复习思考题 第一章生物药物概论 1、生物药物有哪几类？DNA重组药物与基因药物有什么区别？ 2、生物药物有哪些作用特点？ 3、DNA重组药物主要有哪几类？举例说明之。 4、术语：药物与药品，生物药物，DNA重组药物，基因药物，反义药物，核酸疫苗，RNAi 第二章生物制药工艺技术基础 1、生物活性物质的浓缩与干燥有哪些主要方法？ 2、简述生物活性物质分离纯化的特点和分离纯化的主要原理。 3、怎样保存微生物菌种？何谓菌种退化？如何检查菌种退化？ 4、诱变育种的总体流程是怎样的？选择出发菌需注意哪些事项？ 5、生物制药工艺中试放大的目的是什么？ 6、酶固定化的方法有哪些类别？ 7、术语：冷冻干燥，喷雾干燥，薄膜浓缩，自然选育，诱变育种，蛋白质工程，转基因动物，蛋白质组学，酶工程，immobilized enzyme，抗体酶，模拟酶，组合生物合成，药物基因组学，DNA Shuffling，定向进化，甘油冷冻保藏法，液氮保藏法，斜面保藏法，沙土管保藏法 第三章生物材料的预处理 1、去除发酵液中杂蛋白有哪几种方法？ 2、去除发酵液中钙、镁、铁离子的方法有哪些？ 3、影响絮凝效果的主要因素有哪些？ 4、细胞破碎有哪些方法？各有什么特点？ 5、超声波破碎细胞的原理？ 6、术语：凝聚作用，絮凝作用，渗透压冲击法，错流过滤，超声波破壁，酶法破壁，高压匀浆法，高速珠磨法，反复冻融法，渗透压冲击法，液氮研磨法，丙酮粉 第四章萃取法 1、溶剂萃取法的基本原理，其特点是什么？ 2、溶剂萃取法按操作方式不同，可分为哪几类？各有什么特点？ 3、影响有机溶剂萃取的因素有哪些？萃取剂的选择需遵循哪些原则？ 4、使用有机溶剂萃取时，改变pH值将如何影响酸性或碱性抗生素的分配系数？ 5、乳化剂为何能使乳状液稳定？ 6、破坏乳状液的方法有哪些？
生物制药工艺学
三、名词解释 1. 生物制品（Biological Products）生物制品是以微生物、细胞、动物或人源组织和体液等为原料，应用传统技术或现代生物技术制成，用于人类疾病的预防、治疗和诊断。人用生物制品包括：细菌类疫苗(含类毒素) 、病毒类疫苗、抗毒素及抗血清、血液制品、细胞因子、生长因子、酶体内以及体外诊断制品，以及其他生物活性制剂，如毒素、抗原、变态反应原、单克隆抗体、抗原抗体复合物、免疫调节剂及微生态制剂等。 2. 分叉中间体在微生物代谢过程中，一些中间代谢产物既可以被微生物用来合成初级代谢产物，也可以被用来合成次级代谢产物，这样的中间体被称为分叉中间体。 3. 热阻和相对热阻热阻是指微生物在某一种特定条件下（温度和加热方式）的致死时间。 相对热阻是指某一种微生物在某一条件下的致死时间与另一种微生物在相同条件下的致死时间之比。 4. 种子（广义和狭义）广义种子: 从菌种开始，到发酵罐接种之前的所有生产过程。 狭义种子：种子罐中的种子。 5. 摄氧率单位体积发酵液每小时消耗氧的量。 6. 呼吸强度单位重量的菌体（折干）每小时消耗氧的量。 7. 呼吸临界氧浓在溶氧浓度低时，呼吸强度随溶氧浓度增加而增加，当溶氧浓度达到某一值后，呼吸强度不再随溶氧浓度的增加而变化，此时的溶氧度称为呼吸临界氧浓度。影响因素：微生物的种类、培养温度以及生长阶段。 8. 凝聚价或凝聚值电解质的凝聚能力可用凝聚价或凝聚值表示，定义为使胶粒产生凝聚作用的最小电解质浓度。化合价越高，凝聚能力越强。凝聚能力：Al3+>Fe 3+>H+>Ca2+>Mg2+>K+ >Na+>Li+ 常用的凝聚剂：Al 2(SO 4 ) 3 ·18H 2 O、AlCl 3 ·6H 2 O、FeCl 3 、ZnSO 4 、MgCO 3 等 9. 凝聚作用在某些电解质作用下，使扩散双电层的排列电位降低，破坏胶体系统的分散状态，而使之凝聚的过程。影响凝聚作用的主要因素是无机盐的种类、化合价以及无机盐的用量。 10. 絮凝作用某些高分子絮凝剂存在下，在悬浮粒子之间产生架桥作用而使胶粒形成粗大的絮凝团的过程。 11. 多级错流萃取料液经萃取后的萃余液再用新鲜萃取剂进行萃取的方法。 12. 多级逆流萃取在第一级中加入料液，萃余液顺序作为后一级的料液，而在最后一级加入萃取剂，萃取液顺序作为前一级的萃取剂。 13. 超临界流体抗溶剂法（Supercritical Fluid Anti-solvent，SAS）先用有机溶剂溶解溶质，再加入超临界流体作抗溶剂，使溶质的溶解度大大下降，溶质从溶液中结晶析出。 14. 超临界溶液快速膨胀法（Rapid Expansion of Supercritical Solution, RESS）是利用高密度的超临界流体溶解固体溶质，通过喷嘴快速泄压至1个大气压的低密度气体，溶质的溶解度急剧减小至万分之一以下，造成固体溶质结晶析出。 15. 道南电位由于带电荷粒子在不同相间的分布不同而产生的相间电位差即为道南电位。 16. 吸附等温线当固体吸附剂从溶液中吸附溶质达到平衡时，其吸附量与溶液浓度和温度有关。当温度一定时，吸附量与浓度之间的函数关系称为吸附等温线。 17. 批一次性投入料液，不补料，直到放罐。(或许） 18. 浓差极化当溶剂透过膜而溶质留在膜上时，它使得膜面上溶质浓度增大而高于主体中溶质浓度，这种现象称为浓差极化。为避免浓差极化现象，通常采用错流过滤。 19. 亲和色谱（Affinity Chromatography）具有很高的选择和分离性能以及较大的载量，纯化倍数高，并能保持较高的活性。 20. 疏水相互作用色谱（Hydrophobic Interaction Chromatography）利用蛋白质表面存有的疏水性部位，与带有疏水性配基的载体在高盐浓度时结合，洗脱时将盐浓度逐渐降低，蛋白质因疏水性不同而逐个地先后被洗脱而分离。该法中蛋白质与固定相结合力较弱，利于保持活性。 21. 膨胀床色谱传统色谱的最大缺点是不能处理含固体颗粒的料液。色谱吸附剂直接与原料液在搅拌罐中混合来吸附目标产物或流化床吸附。膨胀床色谱操作过程：被处理的料液从膨胀床底部泵入，床内的吸附剂将不同程度地向上膨胀，料液中的固体颗粒可以顺利地通过床层，目标产物在膨胀床内可被吸附剂吸附，从而可达到从料液中吸附和初步纯化目标化合物的目的。原理：吸附介质颗粒在向上流动液体的作用下膨胀起来，液体中的目
生物制药工艺学实验
生物制药工艺学实验指导 （12个实验，36学时） 焦飞 生物技术教研室
实验一健胃消食片配方及片剂的制备 一、实验目的 1.掌握压片机压片的方法及影响片剂成型的主要因素； 2.学会片剂处方的调配。 二、实验材料和仪器 太子参，陈皮，山药，麦芽（炒），山楂，蔗糖粉，糊精，硬脂 酸镁，粉碎机，干燥箱，制片机 三、实验原理 健胃消食片为内科伤食类非处方药品，主治健胃消食，用于 脾胃虚弱，消化不良，脾胃虚弱所致的食积，症见不思饮食，暖 腐酸臭，脘腹胀痛。健胃消食片的配方如下，太子参228.6g，陈皮22.9g，山药171.4g，麦芽（炒）171.4g，山楂114.3g，蔗糖糊精适量，值得片剂为淡棕黄色的片或薄薄膜片，气略香，味微甜，酸。制作方法：太子参半量与山药粉碎成细粉，其余陈皮三味药 及剩余的太子参置于烧杯，加3倍量水，煎煮1小时，滤过，合并两次煎液，减压浓缩至浸膏，干燥。将蔗糖粉糊精和生药粉以 3：1：1的混合粉与浸膏混合制成软材，软材的软硬应适当，以“手握成团，轻压则散”为宜。采用挤出制粒的方法制成颗粒， 颗粒在60-80摄氏度干燥，干燥时应逐渐升温，以免因颗粒表面 干燥过快结成硬壳而影响内部水分的蒸发。颗粒整粒后加入1％硬脂酸镁混合后压片。 四、实验步骤
1.称取太子参2 2.8g，陈皮 2.3g，山药17.1g，山药17.1g，麦芽 17.1g，山楂11.4g 2.太子参山药用粉碎机粉成细粉。 3.将上述药材放入烧杯中，加入3倍量的水，煎煮半小时，重复 两次，将上清液合并，减压浓缩至浸膏，将所得浸膏放入烘 箱中80度干燥。 4.将蔗糖粉糊精和干燥后的粉末以3：1：1的比例混合制成颗粒 软材，将软材放入烘箱中逐渐升温干燥。 5.干燥后的软材加入1％硬脂酸镁放入压片机中压片。 实验二溶菌酶结晶的制备 一、实验目的 1.掌握盐析法提取蛋白质的原理和过程； 2.学会溶菌酶的结晶和精制方法。 二、实验材料与仪器 新鲜鸡蛋，氯化钠， 1 氢氧化钠溶液，醋酸缓冲液，烧杯，玻璃棒，布氏漏斗，干燥箱。 三、实验原理 溶菌酶又称细胞壁质酶或N—乙酰胞壁质聚糖水解酶，是一种国内外很紧销的生化物质，广泛应用于医学临床。具有多种药理作用，能抗感染、消炎、消肿、增强体内免疫反应等，有抗菌 的作用，常用于五官科多种粘膜炎症，皮肤带状疮疹等疾病。是
现代生物制药工艺学
第一章绪论 1、生物药物（biopharmaceuticals）利用生物体、生物组织或其成分（初级代谢和次级代谢产物），综合应用多门 学科的原理和方法进行加工、制造而成的一大类药物。 2、生物药物的特性1）药理学特性：在化学构成上十分接近于体内的正常生理物质，容易为机体吸收利用。（1） 治疗的针对性强、药理活性高、疗效高细胞色素c用于治疗组织缺氧所引起的一系列疾病（2）毒副作用小、营养价值高注射用的纯ATP可以直接供给机体能量；蛋白质、核酸、糖类、脂类等生物药物本身就直接取自体内（3）生理副作用时有发生（缺点）生物体之间的种属差异或同种生物体之间的个体差异都很大，所以用药时会发生免疫反应和过敏反应。2）原料的生物学特性（1）原料中的有效物质含量低，杂质多激素、酶在体内含量极低。（尿激酶）（2）原料的多样性（来源多样性）（3）易腐败（缺点）生物药物营养价值高，易染菌、腐败。生产过程中应低温、无菌。（4）注射用药有特殊要求生物药物易被肠道中的酶所分解，所以多采用注射给药，注射药比口服药要求更严格（均一性、安全性、稳定性、有效性）（理化性质、检验方法、第二章生物药物的质量管理与控制 1、生物药物质量检验的程序与方法 基本程序：取样→鉴别→检查→含量测定→写出检验报告 1）取样：均匀、合理、有代表性。 2）药物的鉴别试验：化学反应法、紫外分光光度法、色谱法、酶法、电泳法等。 3）药物的杂质检查：分为一般杂质（如酸、碱、水分、氯化物、硫酸盐、砷盐、重金属）和特殊杂质；检查方法：对照法、灵敏度法、比较法。 4）药物的安全性检查(安全性)：热源检查、药物的降压物质检查 5）药物含量（效价）测定（有效性）： ? 含量表示方法：有效物质的百分数表示，此百分数均系指重量百分数 ? 生物效价或者酶活力单位（对照或标准比对） ? 另外对于制剂，含量（效价）的限度一般用含量占标示量的百分率来表示 6）检验报告的书写 2、中华人民共和国药典 根据药物自身的理化与生物学特性，按照批准的处方来源、生产工艺、贮藏运输条件等所制定的、用以检测药品质量是否达到用药要求并衡量其质量是否稳定均一的技术规定。 3、1）药品生产质量管理规范（GMP） ? GMP是Good Manufacturing Practice，即药品生产质量管理规范。 ? 对药物的生产实行全面管理，是全员全过程的管理。 ?GMP的三大要素：人为产生的错误减小到最低；防止对医药品的污染和低质量医药品的产生；保证产品高质量的系统设计。 2）药品安全试验规范（GLP） ? GLP：Good Laboratory Practice，即药品安全试验规范；非临床研究质量管理规范 ? 主要内容是在规定试验条件下，进行药效、毒性动物试验的准则：对急性，亚急性，慢性毒性试验，生殖试验，致癌，致畸，致突变以及其它毒性试验等临床前安全试验作出规定，是保证药品安全有效的法规 ? 目的：实验研究的质量可靠；实验数据的可信 3）药物临床试验管理规范（GCP） ? GCP：Good Clinical Practice，药物临床试验管理规范 ? 药品临床试验是指在任何人体（健康的志愿者或病人）进行的药品系统性研究，以证实或揭示试验用药品的作用及不良反应等 ? 目的：保证临床试验过程规范，结果科学可靠；保证受试者的权益并保障其安全。 4、加速试验：对药物短时间内施加强应力，促使药物加速反应，按照一定的方法推测其有效期。低温观测法、恒 温法和变温法 第二章抗生素概述 1、抗生素定义: 生物细胞产生的能以低浓度抑制其他生物细胞生长或功能的化学物质。 1）药理活性物质:作用于动植物体本身的生理功能（如免λ疫调节、降血脂、降血糖、降血压、抗炎、减肥、动植物生长促进、植物生长抑制等） 2）抗生素:作用于动植物体内的寄生（或赘生）生物（细λ菌、真菌、病毒、癌细胞等）瓦克斯曼创造了新
生物制药工艺学思考题和答案解析
抗生素发酵生产工艺 1. 青霉素发酵工艺的建立对抗生素工业有何意义？ 青霉素是发现最早，最卓越的一种B-内酰胺类抗生素，它是抗生素工业的首要产品，青霉素是各种半合成抗生素的原料。青霉素的缺点是对酸不稳定，不能口服，排泄快，对革兰氏阴性菌无效。青霉素经过扩环后，形成头孢菌素母核，成为半合成头孢菌素的原料。2. 如何根据青霉素生产菌特性进行发酵过程控制？ 青霉素在深层培养条件下，经历7个不同的时期，每个时期有其菌体形态特性，在规定时间取样，通过显镜检查这些形态变化，用于工程控制。 第一期：分生孢子萌发，形成芽管，原生质未分化，具有小泡。 第二期：菌丝繁殖，原生质体具有嗜碱性，类脂肪小颗粒。 第三期：形成脂肪包含体，积累储蓄物，没有空洞，嗜碱性很强。 第四期：脂肪包含体形成小滴并减少，中小空泡，原生质体嗜碱性减弱，开始产生抗生素。 第五期：形成大空泡，有中性染色大颗粒，菌丝呈桶状。脂肪包含体消失，青霉素产量提高。 第六期：出现个别自溶细胞，细胞内无颗粒，仍然桶状，释放游离氨，pH上升。 第七期：菌丝完全自溶，仅有空细胞壁。一到四期为菌丝生长期，三期的菌体适宜为种子。 四到五期为生产期，生产能力最强，通过工艺措施，延长此期，获得高产。在第六期到来之前发束发酵。 3. 青霉素发酵工程的控制原理及其关键点是什么？ 控制原理：发酵过程需连续流加葡萄糖，硫酸铵以及前提物质苯乙酸盐，补糖率是最关键的控制指标，不同时期分段控制。在青霉素的生产中，及时调节各个因素减少对产量的影响，如培养基，补充碳源，氮源，无机盐流加控制，添加前体等；控制适宜的温度和ph，菌体浓度。最后要注意消沫，影响呼吸代谢。 4. 青霉素提炼工艺中采用了哪些单元操作？ 青霉素不稳定，发酵液预处理、提取和精制过程要条件温和、快速，防止降解。提炼工艺包括如下单元操作： ①预处理与过滤：在于浓缩青霉素，除去大部分杂质，改变发酵液的流变学特征，便于后续的分离纯化过程。 ②萃取：其原理是青霉素游离酸易溶于有机溶剂，而青霉素易溶于水。 ③脱色：萃取液中添加活性炭，除去色素，热源，过滤，除去活性炭。 ④结晶：青霉素钾盐在乙酸丁酯中溶解度很小，在乙酸丁酯萃取液中加入乙酸钾-乙醇溶液，青霉素钾盐可直接结晶析出。 氨基酸发酵工艺 1. 如何对谷氨酸发酵工艺过程进行调控？ 发酵过程流加铵盐、尿素、氨水等氮源，补充NH4+；生物素适量控制在2-5μg/L；pH 控制在中性或微碱性；供氧充足；磷酸盐适量。 2. 氨基酸生产菌有什么特性，为什么？ L-谷氨酸发酵微生物的优良菌株多在棒状杆菌属、小短杆菌属、节杆菌属和短杆菌属中。具有下述共同特性：①细胞形态为短杆至棒状；②无鞭毛，不运动；③不形成芽孢；④革兰氏阳性；⑤生物素缺陷型；⑥三羧酸循环、戊糖磷酸途径突变；⑦在通气培养条件下产生大量L-谷氨酸。 3. 生物素在谷氨酸发酵过程中的作用是什么？
生物制药工艺学_吴晓英_思考题
生物制药工艺学思考题 总论部分： 一、简述生物制药工艺学的性质与任务。 二、谈谈生物制药工业的重点研究方向。 三、谈谈生物药物的特点。 四、简述生物药物的研究发展趋势。 五、简述生物材料的来源。 六、简述生物活性物质的存在特点。 七、生物活性物质主要有哪些提取方法？举例说明萃取技术的应用 八、生物活性物质有哪些主要的浓缩、干燥方法？ 九、生物大分子分离纯化的主要原理。 十、生物大分子常用的纯度鉴定方法有哪些？ 十一、已经上市或研究热点的基因工程药物主要有哪些？ 十二、简述酶工程技术、细胞工程技术和基因工程技术等现代生物技术在生物制药工业中的应用。 十三、名词解释： 提取，萃取，浓缩，干燥，均一性，上游工艺，下游工艺, 单克隆抗体，PCR，生物合成技术，半合成药物 抗生素部分： 一、抗生素的定义、常用分类法、应用。 二、评价医用抗生素应包括哪些主要要求。 三、抗生素工业生产的主要方法，抗生素发酵生产的特点。 四、简述抗生素发酵中温度、pH、溶氧、基质浓度、菌体浓度、二氧化碳和泡沫等因素的影响及控制。 五、发酵生产庆大霉素的工艺路线及注意问题。 手性药物部分： 一、什么是手性？什么是手性药物？ 二、手性药物的主要制备技术？ 三、用于制备手性药物的主要的生物催化反应包括哪些？ 多肽类和蛋白类药物： 一、了解多肽药物的分类与重要的多肽类药物（包括名称，来源，作用与用途）。 二、了解胸腺素组分5的性质和工艺路线。 三、了解蛋白类药物的分类与重要的蛋白类药物（包括名称，来源，作用与用途）。 四、了解白蛋白的制备工艺要点。 五、了解胰岛素的结构与性质、作用与用途、提取法制备胰岛素的生产工艺要点、以及基因工程技术生产人胰岛素的途径。 酶类药物： 一、酶类药物的分类与重要的酶类药物的名称、来源、作用与用途及对酶类药物的要求。 二、了解L-天门冬酰胺酶和超氧化物歧化酶的性质、作用、工艺路线和工艺要点。
中医药大学生物制药工艺试卷
山东***大学 专业 年级（ 科） 《生物制药工艺学》期末考试试卷（A 卷） 姓 名： 学 号： 班 级: 考试时间： 补（重）考：（否） 题号 一 二 三 四 五 六 七 八 总分 核分人 得分 －－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－ 说明：本试卷总计100分，全试卷共5页，完成答卷时间2小时。 －－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－ 一、填空题（本大题共10题，每题1分，共10分） 1．微生物的诱变育种常用的诱变剂有物理诱变剂、化学诱变剂和 。 2．工业生产中对大量培养基和发酵设备的灭菌，最有效最常用的方法是 。 3．微生物菌种的 是指利用微生物在一定条件下产生自发突变的原理，通过 分离、筛选排除衰退型菌株，选择维持原有生产水平的菌株的过程。 4．在超临界流体萃取过程中，为提高溶解度小的物质的溶解能力，常加入 。 5．采用液氮超低温保藏法保藏菌种时，应将盛装菌种的安瓿管保藏在 ℃液 氮管中进行保存。 6．高分子聚合物沉淀法中应用最多的沉淀剂是 。 7．疏水相互作用色谱常用的分离载体为多聚糖和 。 8．较纯的固体一般有 和无定形沉淀两种状态。 9．抗生素包括天然抗生素、半合成抗生素和 。 10．需要通过工业发酵生产的维生素为 和 。 得分 阅卷人 （签全名）
二、单项选择题（本大题共10 题，每题1分，共10分） 1．采用冷冻干燥法保存菌种时常用的保护剂是（ ）。 A ．乙醇 B ．甘油 C.脱脂牛奶 D ．液体石蜡 E ．蛋白胨 2．蛋白质盐析常用的中性盐是（ ）。 A ．碳酸钙 B ．磷酸钠 C.氯化钠 D ．硫酸镁 E ．硫酸铵 3．采用有机溶剂沉淀法时，最重要的因素是（ ）。 A ．温度 B ．湿度 C.压力 D ．pH E ．金属离子 4．次级代谢产物的产生菌一般是（ ）。 A ．细菌 B ．放线菌 C.霉菌 D ．噬菌体 E ．真菌 5．利用物质在互不相溶的两水相间分配系数的差异来进行萃取的方法，称为（ ）。 A ．离子交换法 B ．等电点沉淀法 C.亲和色谱法 D ．双水相萃取法 E ．吸附法 6．聚电解质沉淀法中应用较多的沉淀剂为（ ）。 A ．聚乙二醇 B ．酸性多糖 C.EDTA D ．EDTA-Na E ．硫酸铅 7．下面属于β-内酰胺类抗生素的是（ ）。 A ．青霉素 B ．链霉素 C.红霉素 D ．土霉素 E ．金霉素 8．目前分辨率和选择性最好的凝胶过滤介质为（ ）。 A ．聚丙烯酰胺凝胶 B ．葡聚糖凝胶 C.琼脂糖凝胶 D ．聚丙烯酰胺葡聚糖凝胶 E ．葡聚糖琼脂糖凝胶 9．结晶过程的推动力是（ ）。 A ．温度 B ．pH C.溶质溶度 D ．过饱和度 E ．时间 10．链霉素发酵生产的菌种为（ ）。 A ．产黄青霉菌 B ．灰色链霉菌 C.红色链霉菌 D ．金色链霉菌 E ．土壤细菌 三、多项选择题（本大题共10题，每题1分，共10分） 得分 阅卷人 （签全名） 得分 阅卷人 （签全名）
生物制药工艺学名词解释
生物制药工艺学名词解释： 第一章： 1.药品：一定剂型和规格的药物并赋予一定的形式（如包装），而且经过有关部门的批准，有明确的作用用途。 药物：能影响机体生理、生化和病理过程，用以预防、诊断、治疗疾病和计划生育的化学物质。 2.生物药物Biopharmaceuticals：以生物体、生物组织或其成份为原料综合应用生物学、物理化学与现代药学的原理与方法加工制成的药物。 3.生物活性Biologicalactivity,Bioactivity：对活组织如疫苗有影响的特性。 4.酶工程enzymeengineering：酶学与工程学互相渗透结合，发展形成的生物技术，它是从应用目的出发，研究酶和应用酶的特异催化功能，并通过工程化过程将相应原料转化成所需产物的技术。 5.固定化酶immobilizedenzyme：是指借助于物理和化学的方法把酶束缚在一定空间内并具有催化活性的酶制剂。 6.组合生物合成combinatorialbiosynthesis（组合生物学combinatorialbiology）：应用基因重组技术重新组合微生物药物的基因簇，产生一些非天然的化合物。 7.药物基因组学：一门研究个人的基因遗传如何影响身体对药物反应的科学。
8.凝聚作用coagulation：指在电解质作用下，胶粒粒子的扩散双电子层排斥电位降低，破坏了胶体系统的分散状态，使胶体粒子发生聚集的过程。 9.萃取extraction：将物质从基质中分离出来的过程。一般指有机溶剂将物质从水相转移到有机相的过程。 10.反萃取stripping/backextraction：将萃取液与反萃取剂相接触，使某种被萃入有机相的溶质转入水相的过程。 11.萃取因素/萃取比：萃取溶质进入萃取相的总量与该溶质在萃余相中总量之比。 12.分离因素separationfactor：在同一萃取体系内两种溶质在同样条件下分配系数的比值。 13.双相萃取技术two-aqueousphaseextraction：利用不同的高分子溶液相互混合可产两相或多相系统，静置平衡后，分成互不相溶的两个水相，利用物质在互不相溶的两水相间分配系数的差异来进行萃取的方法。 14.超临界流体萃取技术：利用处于临界压力和临界温度以上的一些溶剂流体所具有特异增加物质溶解能力来进行分离纯化的技术。 15.固相析出分离法solidphasecrystallization：通过改变溶液条件，使溶质以固体形式从溶液中分出的操作技术。 16.盐析法saltprecipitation：利用各种生物分子在浓盐溶液中溶解度的差异，通过向溶液中引入一定数量的中性盐，使目的
生物制药工艺学
生物制药工艺学：对生物药物进行研究、生产和制剂的一门综合学科。 生物制药是把生物体内的具有生物活性的基本物质，保持原来的结构和功能，又能在含多种物质的液相或固相中较高纯度的分离出来，它是一项严格，细致，复杂的工艺过程，涉及物化生工程等方面的知识和操作技术。 遗传与变异：是生命的基本特征，也是菌种选育的理论基础。 杂交育种：是指将两个基因型不同的菌株经吻合（或接合）使遗传物质重新结合，从只能分离和筛选出具有新性状菌株的过程。 原生质体融合：是指把两个亲株的原生质体混合在一起，在融合剂ＰＥＧ和Ｇａ离子的作用下，发生原生质体的融合，促使两亲本的遗传物质进行交换，从而实现遗传重组。 分批灭菌：将配置好的培养基输入发酵罐内，经过间接蒸汽预热，然后直接通入饱和蒸汽加热，使培养基和设备仪器灭菌，达到要求的温度和压力后维持一定时间，在冷却至发酵要求的温度，这一工艺过程称为。 连续灭菌：培养基在发酵罐外经过一套灭菌设备连续加热灭菌，冷却后送入已灭菌的发酵罐内，这种工艺称为。 萃取：液料与萃取剂接触后，液料中的溶质向萃取剂转移的过程。 超临界流体萃取技术是利用处于临界压力和临界温度以上的一些溶剂流体所具有特意增加物质溶解能力来进行分离纯化技术（温度３１.０６Ｃ，压力７３.９，密度０.４４８） 双水相萃取法又称水溶液两相分配技术，它是不同的高分子溶液相互混合产生两相或多项系统，利用物质在互不相容的两水相间分配系数的差异来进行萃取的方法。 吸附法：是利用适当的吸附剂，在一定Ｐｈ条件下，吸附生物样品中的生物药物，然后再以适当的洗脱剂将吸附的药物从吸附剂上解吸下来，达到浓缩和提纯的目的。 高分子聚合物沉淀法：某些水溶性非离子型高分子聚合物，如聚乙二醇等能使蛋白质水合作用减弱而发生沉淀。 过饱和溶液：溶液浓度等于溶解度时，该溶液称为饱和溶液。溶质只有在过饱和溶液中才有可能析出。 生物药物：是以生物体、生物组织、或其成分为原料（包括组织、器官、细胞器、细胞成分、代谢排泄物）综合应用生物学、物理化学与现代药学原理与方法加工制成的药物 现代生物技术药物：将生物体内生理活性物质的基因分离或人工合成，利用重组DNA技术加以改造，使其在细菌、酵母、动物细胞、转基因动物中间大量表达，通过这种方式获得的药物。 固体培养基：是加入一定量的凝固剂的培养基，适用于菌种的培养、分离、无菌试验、和菌种保藏工作。液体培养基是未加任何凝固剂的培养基 现代生物技术体系：主要的生物技术包括重组DNA技术、原生质体制备与原生质体融合技术、突变生物合成、组合生物合成、选择性生物催化合成、代谢途径工程、淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体、组织培养技术、基因治疗等。 微生物的初级代谢产物：包括氨基酸、蛋白质、核苷酸、核酸、酶类、糖类、脂类等 微生物的次级代谢产物：包括抗生素，色素，生物碱、酶的抑制剂、植物生长素等初级代谢：指的是与微生物的生长繁殖有密切关系的代谢活动，初级代谢产物指的是与微生物的生长繁殖有密切关系的代谢产物。 次级代谢：指的是与微生物的生长繁殖无关的代谢活动，次级代谢产物指的是与微生物的生长繁殖无关的代谢产物。 培养基：是人工配制的、供微生物生长繁殖和生物合成各种代谢产物所需要的多种营养物质的混合物。 前体：在微生物药物的生物合成过程中，有些化合物能直接被微生物利用构成产物分子结构的一部分，而化合物本身的结构没有大的变化，这些物质称为前体。 生长因子：是微生物生长代谢必不可少，但不能用简单的碳源或氮源生物合成的一类特殊的营养物质。 促进剂：在发酵培养基中加入某些微量的化学物质，可促进目的代谢产物的合成，这些物质被称为促进剂。 抑制剂：在发酵过程中加入某些化学物质会抑制某些代谢途径的进行，同时会使另一代谢途径活跃，从而获得人们所需的某种代谢产物，或使正常代谢的中间产物积累起来，这种物质被称为抑制剂。 诱导物：一般是指一些特殊的小分子物质，在微生物发酵过程中添加这些小分子物质后，能够诱导代谢产物的生物合成，从而显著提高发酵产物的产量。 生理酸性物质：经微生物代谢作用后，能产生酸性物质的营养成分称为生理酸性物质。 生理碱性物质：经微生物代谢作用后，能产生碱性物质的营养成分称为生理碱性 物质。 速效碳源、迟效碳源：根据微生物利用碳 源速度的快慢可将碳源分为速效碳源和 迟效碳源。葡萄糖和蔗糖等被微生物利用 的速度较快，它们是速效碳源，而乳糖、 淀粉等被利用的速度相对较为缓慢，它们 是迟效碳源。 葡萄糖效应：在发酵过程中，如果葡萄糖 浓度过高会加快菌体的代谢，以致培养基 中的溶解氧不能满足菌体进行有氧呼吸 的需要，葡萄糖分解代谢就会进入不完全 氧化途径，一些酸性中间产物如丙酮酸、 乳酸、乙酸等积累在菌体或培养基中导致 Ｐｈ降低，影响某些酶的活性，从而抑制 微生物的生长和产物的合成，产生葡萄糖 效应。 生产种子的制备：指的是由保藏的菌种开 始，经过不断的扩大培养，使菌体数量达 到能满足发酵罐接种量的需要所涉及的 生产过程。 种子的制备：是将固体培养基上培养好的 孢子或菌体转入到液体培养基中培养，使 其繁殖成大量菌丝或菌体的过程。 诱变育种的基本过程：选择合适的出发菌 株→制备待处理的菌悬液→诱变处理→ 筛选→保藏和扩大试验 常用的诱变剂：1紫外线2亚硝基胍3硫 酸二乙酯4亚硝酸 杂交育种是将孢子（或摇瓶菌丝）接入的 体积较小的种子罐中，经培养后形成大量 的菌丝，该种子称为一级种子，把一级种 子转入到发酵罐内发酵称为二级发酵，如 果将一级种子接入到体积较大的种子罐 内，经过培养形成更多的菌丝体，这样制 备的种子称为二级种子，将二级种子转入 到发酵罐内发酵，称为三级发酵，同样道 理，使用三级种子的发酵称为四级发酵。 代谢曲线：根据发酵过程中代谢参数变化 绘制出的曲线，作用：可清楚的说明发酵 过程中的代谢变化，并反映出碳源，氮源 的利用和Ｐｈ、菌体浓度和产物浓度等参 数之间的相互关系。 为什么要绘制代谢曲线？分析研究代谢 曲线，有利于掌握发酵代谢变化的规律和 发现工艺控制中存在的问题，有助于改进 工艺，提高产物的产量。 膜分离法：又称为超滤法，包括微滤，超 滤和反渗透，是利用可截留一定分子量的 超滤膜进行溶质分离或浓缩。 渗透压冲击法：将细胞置于高渗溶液中 （例如一定浓度的蔗糖或甘油溶液中）， 由于渗透压的作用，细胞内的水分便向外 渗出，细胞发生收缩，当达到平衡后，将 介质快速稀释或将细胞转入缓冲溶液中， 由于渗透压发生变化，胞外的水分迅速渗 入胞内，是细胞快速膨胀而破裂，使产物 释放到溶液中。 离子交换法：是应用合成的离子交换树脂 作为吸着剂，将溶液中的物质，依靠库伦 力吸着在树脂上，然后用合适的洗脱剂将 吸着物从树脂上洗脱下来，达到分离，浓 缩，提纯的目的。 离子交换树脂：是一种具有网状立体结构 的，含有活性基因而能与溶液中其他物质 进行交换或吸着的聚合物。 交换容量：是表征树脂活性基数量——交 换能力的重要参数，其表示方法有重量交 换容量交换容量体积法。 沉淀法：是利用某种沉淀剂或改变条件， 使所需提取的目的物在溶液中的溶解度 降低而形成无定形固体沉淀从而进行分 离的一种技术方法。 等电点沉淀法：利用大分子两性电解质在 等电点时溶解度最低的原理而建立的分 离法称为～ 凝胶层析（色谱）：是指以各种多孔凝胶 为固定相，利用流动相中所含各种组分的 相对分子质量不同而达到物质分离的一 种技术。 亲和层析（色谱法）：是利用生物大分子 与某些对应的专一特意识别和可逆结合 的特性而建立起来的一种分离生物大分 子的色谱方法。 重结晶：即将晶体用合适的溶剂溶解再次 结晶，能使纯度提高，因为杂质和结晶物 质不在同溶剂和不同温度下的溶解度不 同。 结晶：是制备纯物质的有效方法，溶液中 的溶质在一定条件下，因分子有规则的排 列而结合成晶体。 晶核：最先析出的微小颗粒是以后结晶的 中心，称为。 自然选育：是利用微生物在一定条件下产 生自发突变的原理，通过分离，筛选排除 衰退型菌株，从中选出维持或高于原有生 产水平菌株的过程。 诱变育种：是利用物理或化学诱变剂处理 均分散的微生物细胞群体，促使其突变率 大幅提高，然后采用简便，高效的筛选方 法，从中选出少数具有优良性状的突变菌 体。 孢子制备：一般采用琼脂斜面或其他固体 培养基，使菌种经过培养得以活化，并产 生数量足够，质量合格的孢子。 英汉互译：抗生素anti bioti cs 氨基酸 amino acid 维生素vitamin 多肽 polype ptide 蛋白质pr otein 蛋白质 的等电点isoelectric point pi 蛋白质的 变性denaturation 胸腺肽al thymosin al 人绒毛膜促性腺激素 human chorionic gonadotropin （HCG）生 物转化biotra nsformati on 基因工程 genetic engineering 基因工程药物 genetically engineered drug 简答： 生物制药的工艺过程？菌种→斜面培养 →种子制备→发酵→发酵液预处理→提 取→精制→成品检验→成品→包装 生物制药产品的类别包括哪些？举例说 明：（一）微生物发酵产物1.微生物菌体 药物：如，酵母菌体，单细胞蛋白，灵芝， 冬虫夏草，茯苓菌等2.微生物酶抑制：如 蛋白酶，淀粉酶，糖化酶，青霉素酰化酶 3.酶活性调节剂：包括酶激活剂和酶的抑 制剂，如血管紧张素转化酶抑制剂，胆固 醇合成酶抑制剂4.微生物代谢产物：如初 级代谢产物氨基酸，次级代谢产物抗生素 等（二）生物转化药物，如激素，维生素， 抗生素，生物碱（三）基因工程药物：如 人胰岛素，人生长因子，白介素，干扰素 （四）动植物细胞培养药物。 生物制药与中医药的关系：①中药鉴定、 识别假冒伪劣药材（DNA芯片技术）②发 现新中药品种③发酵液中提取中药（高效、 结构改善）④利用基因工程产生之植物此 生代谢产物（黄酮素，糖苷，生物碱等） ⑤利用转基因动物生产动物类药材（基因 芯片植入动物→表达→从分泌物（麝香） 或组织中（鹿茸）提取活性物质。 培养基的组成、分类方法、设计注意问题： 培养基成分主要包括碳源、氮源、磷源、 硫源、无机离子（包括微量元素）、生长 因子、前体、促进剂、抑制剂和水分。分 类方法：按培养基组成物质的来源，可分 为合成培养基和复合培养基（天然培养基） 按物理状态可分为固体培养基和液体培 养基及半固体培养基；按工业发酵中的用 途可分为孢子培养基、种子培养基、发酵 培养基和补料培养基。注意问题：①确定 培养基的基本组成②确定培养基成分的 基本配比和浓度（a碳源和氮源的配比和 浓度b生理酸性物质和生理碱性物质的 比例c无机盐浓度d其他培养基成分的浓 度）③具有经济性。 培养基筛选方法：①单因子实验法②正交 试验和均匀设计试验等数学方法。 影响培养基的因素：原材料质量、水质、 培养基的灭菌（一般在121度下灭菌20 到30分钟，含糖培养基112度灭菌15到 30分钟）和黏度 菌种保藏的目的、原理及方法：菌种保藏 的目的是尽可能保持菌种的存活率和优 良性能，保证菌种经过较长时间的保藏后 仍保持存活和生产能力。菌种保藏对于基 础研究和实际应用具有重要意义。 菌种保藏的原理：是根据微生物的生理特 性，人为地创造条件，使微生物处于代谢 不活跃，生长繁殖受抑制的休眠状态，以 减少菌种的变异。有利于微生物休眠的条 件是低温、干燥、缺氧和缺乏营养物质等。 菌种保藏的方法： 1）斜面保藏法，广泛应用于细菌、放线 菌、酵母菌等菌种的短期保存。为了长期 保持菌体存活，每间隔一定时间需重新移 植培养一次。 该方法的优点是简便易行，成本低，能随 时观察菌株是否死亡、变异、退化或染菌。 缺点是由于斜面含有营养和水分，菌种生 长和繁殖还没有完全停止，代谢活动尚能 微弱进行，因此存在自发突变的可能；短 期内多次传代易引起菌种发生变异和引 起退变，污染杂菌的机会也会随之增多。 2）液体石蜡保藏法：在无菌条件下，将 液体石蜡倾注或用无菌吸管移入生长成 熟、丰满的斜面菌种上，使液体石蜡高出 斜面顶端1cm左右，加塞并用固体石蜡封 口，将其直立放在试管架上低温保藏。 3）沙土管保藏法：孢子或芽孢，在干燥 环境中抵抗力强，不易死亡。干燥能使这 些微生物的代谢活动水平降低但不会死 亡，而处于休眠状态。保藏时间可达数年。 4）麸皮保藏法： 5）冷冻干燥法：目前较理想的保藏方法， 也是各类菌种保藏机构广泛采用的主要 保藏方法。最常用的保护剂是脱脂牛奶， 脱脂牛奶可由新鲜的牛奶制备。 6）液氮超低温保藏法：该法保藏菌种的 效果好，方法简单，保藏对象也最为广泛， 几乎所有微生物及动植物细胞等均可采 用该方法。该法的另一优点是可利用各种 培养形式的微生物进行保藏，不论使用孢 子或菌体、液体培养物或固体培养物均可 采用该法。因此被认为是当前最有效、最 可靠的一种长期保存菌种的方法之一。 7）甘油保藏法 8）孢子滤纸保藏法 菌种选育目的：①生产方面：a提高发酵 产量b改进菌种的性能c产生新的发酵产 物d去除多余的组分②科研方面：a了解 菌种遗传背景b提供分子遗传学研究材 料c获得带遗传标记的菌株d生物合成途 径的研究e生物合成机制的研究 发酵过程工艺参数有哪些？（1）物理参 数：①温度②压力③搅拌转速④搅拌功率 ⑤空气流量⑥表观粘度（2）化学参数： ①Ph②基质浓度a糖浓度的测定b氮浓度 的测定c磷酸盐含量的测定d产物浓度的 测定e溶解氧浓度的测定f废气中氧含量 g废气中二氧化碳含量（3）生物参数： ①菌体浓度②菌丝形态 微生物的发酵类型：（1）按投料方式分类： ①分批发酵②补料分批发酵③连续发酵 （2）按与氧的关系分类：①需氧发酵② 厌氧发酵（3）按发酵动力学参数的关系 分类：①生长偶连型②部分生长偶连型③ 非生长偶连型 细胞破碎的方法：一机械法：①液体裁切： 超声波，机械搅拌，压力②固体裁切：研 磨，压力。二非机械法：①干燥：空气干 燥，真空干燥，冷冻干燥，喷雾干燥②溶 胞：物理法，化学法，酶法。 沉淀法有哪些？盐析法；有机溶剂沉淀法； 等电点沉淀法；高分子聚合物沉淀法；聚 电解质沉淀法；不可逆的沉淀去除法 温度对发酵的影响：1温度影响酶的活性 2温度影响发酵液的物理性质3温度影响 代谢产物的合成方向；PH对发酵的影响 1PH影响酶的活性2PH影响基质或中间产 物的解离状态3PH影响发酵产物的稳定 性 育种方法：自然育种，诱变育种，杂交育 种，原生质体融合育种。 主要灭菌和除菌方式：高温灭菌：A1干 热灭菌2湿热灭菌B过滤灭菌C化学物质 消毒和灭菌D其他方式灭菌1辐射灭菌2 臭氧灭菌3静电除菌 生产种子的制备：两个阶段：实验室种子 制备和生产车间种子制备 消除泡沫的方法：机械消除和消沫剂消除 影响孢子质量的因素：培养基、培养温度、 温度、培养时间、冷藏时间、接种量 分离纯化的特点：培养液（或发酵液）中 所含欲分离的生物物质浓度很低；欲分离 的生物或新物质通常很不稳定；发酵或培 养都是分批操作、生物变异性大，各批发 酵液不尽相同，这要求分离有一定弹性， 发酵液的放罐时间、发酵过程中泡沫剂的 加入对分离都有影响；用作医药的生物产 物与人类生命息息相关 影响溶剂萃取的因素：①PH的影响2温 度与萃取时间的影响3盐析作用的影响4 溶剂种类、用量及萃取方式的选择 离子交换速度的影响因素：1颗粒大小2 交联度3温度4离子化合物5离子大小6 搅拌速度7溶液浓度 影响吸附过程的因素：1吸附剂的性质2 被吸附物的性质3溶剂的影响4溶液PH 值的影响5温度的影响6其他组分的影响 常用吸附剂按其化学结构可分为两大类： 一类是有机吸附剂，如活性炭、维生素、 大孔吸附树脂等。另一类是无机吸附，如 白土、氧化铝、硅胶、硅藻土等。 盐析法的影响因素：1盐的性质2PH值3 盐的饱和度4蛋白质浓度5温度 有机溶剂沉淀法的影响因素：1温度2PH 值3蛋白质浓度4无机盐离子的强度5金 属离子 膜分离机制:利用可截留一定分子量的超 滤膜进行溶质的分离或浓缩，小于截留值 的分子能通过膜，而大于截留值的分子不 能通过膜，因而达到分离。 凝胶色谱分离法的原理：凝胶色谱柱中， 当含有各组分的混合溶液流经凝胶层析 住时，各组分在层析柱内同时进行两种不 同的运动，一种是随着溶液流动而进行的 垂直直下的移动，另一种是不定向的分子 扩散运动（布朗运动）。大分子物质由于 分子直径较大，不能进入凝胶的微孔，只 能分布于凝胶颗粒的间隙中，已较快的速 度流过凝胶剂；较小的分子能进入凝胶的 微孔中，不断地进出于一个个颗粒的微孔 内外，这就使小分子物质向下移动的速度 比大分子的速度慢，从而使混合溶液中各 组分按照Mr由大到小的顺序先后流出层 析柱，大到分离的目的。 凝胶色谱分离法的特点：操作条件温和， 简单易行；分离Mr范围广；离效果一般 不受缓冲液组成的影响；进行一次操作后 无需再生处理就可进行下一次的分离 凝胶色谱分离法的应用：1盐脱2分级分 离3大分子物质的分子量测定 亲和色谱的操作：吸附、冲洗、洗脱、平 衡 饱和溶液形成的条件：蒸发法、冷却法、 化学反应结晶法、盐析结晶法、等电点法、 复合法、共沸蒸馏结晶法 影响晶体大小的因素：过饱和度、温度、 搅拌速度、晶种 改变晶体形状的方法：控制晶体生长速度、 过饱和度、结晶温度、选择不同的溶剂、 调节溶液的PH值和有目的的加入某种能 改变晶形的杂质 工业生产实例：1化学反应结晶2利用温 度差结晶3利用湿度差结晶4盐析结晶5 利用等电点结晶6盐析和冷却结晶7冷却 和化学反应并结晶8共沸蒸馏结晶9重结 晶 氨基酸的制备方法:1水解法a酸水解法b 碱水解法c酶水解法2微生物发酵法3化 学合成法4酶促合成法 氨基酸的分离方法：1基于溶解度或等电 点不同分离2加入特殊沉淀剂沉淀分离3 用离子交换剂分离4用电渗析法分离 维生素的发酵生产工艺路线：1斜面种子 培养2一级种子培养3二级种子培养4发 酵培养
生物制药工艺处理学考试2013-12(A卷)
中国药科大学 生物制药工艺学 期末试卷A卷 2013-2014学年第一学期 专业班级学号姓名 题号一二三四总分 得分 核分人： 得分评卷人一、填空题（每空0.5分，共30分） 1、细胞破碎包括哪三大类方法、和。 2、萃取因素也称萃取比，其定义为被萃取溶质进入的总量与该溶质在 中总量之比。 3、晶体的质量主要是指晶体的大小、形状和纯度，其中影响晶体大小的主要因素有 ， ， ， 。 4、大孔网状聚合物吸附剂是在树脂聚合时加入 致孔剂，待网格骨架固化和链结构单元形成后，用溶剂萃取或蒸馏水洗将致孔剂去掉，形成不受外界环境条件影响的 ，其孔径远大于2～4nm，可达 ，故称“大孔”。 5、在作分级分离时，为了提高分辨率，多采用比样品体积大倍的柱体积， 的柱比，较吸液量、较粒的凝胶固定相。 6、写出下列离子交换剂类型：732 ，724 ，717 ，CM-C , DEAE-C ，PBE94 。 7、请写出下列药物英文的中文全称：IFN（Interferon）、 第1页（共8页）
IL(Interleukin) 、 CSF（Colony Stimulating Factor）、rhGH（Recombinant Human Growth Hormone）、Ins（Insulin）。 8、生物药物的分类：、、、 。 9、在生化制药工艺中干燥的方法主要包括：、 、。 10、疫苗制备时，可用 、 和 方法扩增病毒。 11、各向异性膜分为两层，一层是，厚度为0.1~1μm，决定了膜的 性质，另一层是，厚度约0.1mm，作用是。 12、制备型高效液相色谱的重要参数有、、 、。 13、密度梯度离心常用的介质有、 、。 14、用100μmol/L NADH使乳酸脱氢酶吸附在固定化丙酮酸类似物上，若NADH从洗脱液中去除，则脱氢酶被洗脱，这种洗脱方法称为。 15、生化药物的主要资源有 、 、 和 。 16、粘多糖是一类含有 和 的多糖。 17、铜绿假单胞菌(绿脓杆菌)脂质是 ，临床应用效果 ，原因是 。从发现年代上看,该物质 于青霉素被发现。 第2页（共8页）
生物制药工艺学试题4参考答案
湖南城市学院生物工程专业 《现代生物制药工艺学》考试试卷标准答案及评分细则考核方式: 闭卷考试时量：120 分钟试卷类型：A 一、名词解释（每题2分，共16分分） 01、用于预防、治疗人类疾病，有目的的调节人体生理功能，并规定有适应症和用法、用量的物质。 02、利用抗生素对敏感菌的杀死或抑制程度作为客观指标来衡量抗生素的效力。 03、有些抗生素如四环素，在弱酸性条件下不对称碳原子可逆的发生异构化，形成差向四环素。 04、一种生物制药中的温和”多阶式”分离，即将药物中的杂质一级一级分离。 05、在压力差的驱动下用可以阻挡不同大小分子的滤板或滤膜将液体过滤的方法。 06、药物从片剂或胶囊等固体口服制剂，在规定的介质中在一定条件下，溶出的速度和程度。 07、是指接入的种子液体积和接种后的培养液总体积之比。 08、以多肽激素和多肽细胞生长调节因子为主的一大类内源性成分。 二、选择题（每题2分，共20分） 题09 10 11 12 13 14 15 16 17 18 答 案 B B A C B B C A D C 三、填空题（每空1分，共15分） 答案 19、砂土管冷冻管 20,、四并苯 21、对数生长期 22、微生物发酵工程、基因工程、细胞培养工程 23、链霉二糖胺 24、阳离子交换纤维素阴离子交换纤维素 25、丙酮 26、青霉素酸 27、羟基 28、供体，受体载体 四、回答题：（每题6分，共24分） 29、简述胸腺素的生产工艺流程。 答：胸腺（绞碎）→胸腺碎块（生理盐水）→提取液组分1（加热去蛋白）→上清液组分2（丙酮、-10°C）→丙酮粉组分3（磷酸盐缓冲液、硫酸铵饱和度0.25）→上清液组分4（硫酸铵饱和度0.50）→盐析物（tris-HCl缓冲液）→超滤液（脱盐、干燥）→胸腺素 30、请简述生物药物质量检验的程序。 答：①药物的取样，取样应具有科学性、真实性、代表性。②药物的鉴别试验检验其是否为此品③杂质检查④药物的安全性保证药物无毒无菌等⑤药物的含量测定⑥检验报告的书写必须真实和有原始记录。 31、如何减少四环素成品的差向四环素和ADT的含量？ 答：首先四环素发酵液通过加入草酸除去钙离子和促使蛋白质凝固等手段进行预处理，为了使差向四环素和ADT的含量降低，此过程应在低温、短时下进行。此外，还可此外还可在母液中加尿素，使其与四环素形成复合物而纯化；也可加入丁醇：乙醇（3:1）混合溶剂，加入乙醇可降低母液四环素损失；但降低成品中的ADT含量的最有效方法是筛选不产生ADT的菌株。