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借鉴-Kinin

Kininogenase activity of Thalassophryne nattereri ?sh venom

?nica Lopes-Ferreira a ,*,Jose ′Artur da Silva Emim b ,1,Vitor Oliveira c ,Luciano Puzer c ,Maria Helena Cezari c ,Mariana da Silva Arau

′jo d ,Luiz Juliano c ,Anto

?nio Jose ′Lapa b ,Caden Souccar b ,Ana Maria Moura-da-Silva a

Laboratory of Immunopathology—Instituto Butantan,Avenida Vital Brasil,1500,Butantan,

05503900Sa

?o Paulo,SP ,Brazil b

Department of Pharmacology—Natural Products Section,Escola Paulista de Medicina,

Universidade Federal de Sa

?o Paulo,R.Tre ?s de Maio 100,04044-020Sa ?o Paulo,SP ,Brazil c

Department of Biophysics,Escola Paulista de Medicina,Universidade Federal de Sa

?o Paulo,R.Tre ?s de Maio 100,04044-020Sa ?o Paulo,SP ,Brazil

Department of Biochemistry,Escola Paulista de Medicina,Universidade Federal de Sa

?o Paulo,R.Tre

?s de Maio 100,04044-020Sa ?o Paulo,SP ,Brazil Received 26April 2004;accepted 26July 2004

Abstract

Accidents caused by the venomous ?sh Thalassophryne nattereri are characterized by edema,intense pain and necrosis at the site of the

sting.This study assessed the nociceptive and edematogenic activities of T.nattereri venom after injection into the mouse hindpaw and determination of the paw licking duration and weight.Subplantar injections of the venom (0.1–6m g)induced a dose-related increase of the paw licking time and paw swelling with maximal values at 3m g (209.5?57.5s and 135.0?6.8mg,respectively).Pretreatment of mice with either indomethacin (10mg/kg,i.p.),a cyclooxygenase inhibitor,dexamethasone (1mg/kg,s.c.),a steroid anti-in?ammatory agent,cyproheptadine (1mg/kg,i.p.),antagonist of serotonin receptors or L -NAME (100mg/kg,s.c.),inhibitor of nitric oxide syntase,did not affect the venom-induced nociceptive and edematogenic responses.Injection of the opioid analgesic fentanyl (0.1mg/kg,s.c.)reduced the paw licking time induced by 1m g venom by 84%of control,without affecting the paw swelling.Both nociceptive and edematogenic responses were reduced after treatment with a speci?c tissue kallikrein inhibitor (TKI,100mg/kg,i.p.)by 78%and 24%from control values,respectively.Administration of a speci?c plasma kallikrein inhibitor (PKSI 527,100mg/kg,s.c.)did not affect the venom-induced nociceptive response,but it decreased the paw edema by 15%from control.After injection of the angiotensin-converting enzyme inhibitor captopril (100mg/kg,i.p.)the venom-induced nociceptive end edematogenic responses were increased by two-fold.The role of kallikreins possibly present in the venom was further assessed by hydrolysis of human kininogen and kininogen-derived synthetic peptides,showing the release of kallidin (Lys-bradykinin).The hydrolysis was inhibited by metal chelating agents but not by serino-,aspartyl-or cysteino-proteinase inhibitors.The data suggest that a protease with tissue-kallikrein-like activity plays a major role in nociception and edema induced by T.nattereri venom and this should be considered to achieve ef?cient treatments for human accidents with this venom.

Keywords:Thalassophryne nattereri ;Edema;Nociception;Speci?c tissue kallikrein inhibitor;Lys-bradykinin

https://www.wendangku.net/doc/bd15780563.html,/locate/biochempharm

1.Introduction

Animal venoms are usually very complex mixtures of toxic proteins and peptides that evolved in certain species all along animal phylogeny.These toxins bind with high af?nity to physiological targets of the preys/predators causing immobilization,necrosis or death.Although,?sh venoms have evolved to interact with sea animals,it is observed that human accidents also occur.The accidents caused by?shes are frequent and represent a public health problem in some regions of Brazil,particularly in the north and northeast states where the accidents are caused by Thalassophryne nattereri?sh,popularly known as ‘‘niquim’’.

Human accidents occur by contact with the?sh spines located on their dorsum and both sides of the head,and connected to the venom glands.Envenoming symptoms include severe edema and pain followed by a fast settling necrosis,both in human victims and experimental animals [1].The number of accidents occurring in Brazil is uncer-tain.It is estimated that hundreds of accidents occur every year and the incidence is underestimated because patients seldom look for medical care due to its lack of ef?cacy. Current treatment of T.nattereri accidents includes anti-in?ammatory and analgesic drugs,antibiotics and immer-sion of the lesioned tissue in warm water.These procedures do not reduce the acute symptoms of the accidents being effective only for prevention of secondary infections.Most accidents occur in the?shing communities and,due to the lack of ef?cient therapy,it may take weeks or even months for complete recovery of the victims.

T.nattereri venom is composed of proteins endowed with proteolytic and myotoxic properties,but devoid of phospholipase A2activity[2].Analysis of its local effects showed a myotoxic effect with muscle damage and dif?-cult regeneration[3].Blood?ow at microvessels was also impaired with stasis and presence of thrombi in venules, focal transient constrictions in arterioles,and increased vascular permeability.Venom lacked a direct pro-coagu-lant activity,but exerted a strong cytolytic action on platelets and endothelial cells in vitro[4].A better under-standing of the mechanisms regulating the acute-in?am-matory events could lead us to the development of ef?cient therapeutic strategies.

This study aimed to examine the nociceptive and edematogenic activities of T.nattereri venom in mice and to determine the effects of antagonists of major mediators involved in both responses.Our results showed that the venom-induced nociception and edema were not affected by either steroidal and non-steroidal anti-in?am-matory agents or a serotonin inhibitor,but they were reduced after administration of a speci?c tissue kallikrein inhibitor.We also showed the presence of tissue-kallik-rein-like activity in the venom suggesting that a protease plays a major role in edema and nociception induced by T.nattereri venom.2.Materials and methods

2.1.Animals

Male Swiss mice(18–22g)were housed in a room with controlled temperature(22?28C)and lighting(lights on from6:00a.m.to6:00p.m.),with free access to laboratory chow and tap water.All experiments were performed between10:00a.m.and5:00p.m.and the animals were cared in accordance with the ethical guidelines of the International Association for the Study of Pain[5].The experiments were conducted under approval of the Insti-tuto Butantan Animal Investigation Ethical Committee.

2.2.Venom

The venom was collected from fresh specimens of T. nattereri from the openings of the spines by applying pressure at their bases.The venom was either immediately used or kept frozen atà208C.For pharmacological tests, venom solutions were prepared in phosphate buffer saline (PBS:NaCl135mM,KCl2.7mM and phosphate buffer 10mM,pH7.2).Protein content was determined by the method of Bradford[6],using a standard curve with known concentrations of bovine serum albumin(sigma)as absor-bance reference.Venom samples were further diluted in PBS for the appropriated concentration corresponding to the dosages used in each experiment.

2.3.Evaluation of nociception and edema

For nociceptive tests,each mouse was kept in an obser-vation chamber(acrylic box,12cm?12cm?12cm) mounted with a mirror at a458angle beneath the?oor[7]. After a10min adaptation period,the animals were injected with the venom(0.1–6m g,s.c.)into the intraplantar region of the hind foot paw in a?xed volume of PBS(30m L).The contralateral paw(control)was injected with an equal volume of the vehicle.Each animal was then returned to the observation chamber and the amount of time spent licking or biting each hind paw was recorded for30min and taken as the index of nociception[8,9].After2h venom injection,the animals were killed by cervical dislocation under light ether anesthesia and both hind paws were cut off at the ankle joint and weighed.The difference in weight(milligrams)between the hind paws was used as an index of paw edema[10].

The effective anti-nociceptive dose of indomethacin was determined in the acetic acid-induced writhing test in mice as previously reported[11].Mice were treated with indo-methacin(10mg/kg,i.p.),30min before injection of1.2% acetic acid(0.1mL/10g,i.p.)[12]and the number of abdominal constrictions was counted cumulatively for 30min.The tested anti-in?ammatory dose of dexametha-sone(1.0mg/kg,s.c.)was determined after60min treat-ment of mice on the ear edema induced by topical

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application of10m L croton oil solution(2.5%)as detailed elsewhere[11].

2.4.Enzymatic assays

The peptidase activity of T.nattereri venom was deter-mined using internally-quenched?uorogenic substrates containing sequences derived from human kininogen as described previously[13].The hydrolysis of the?uoro-genic peptidyl substrates at378C in tris-buffer pH7.4 containing NaCl100mM was followed by measuring the ?uorescence at l em=420nm and l ex=320nm in a Hitachi F-2000spectro?uorometer.The1cm path-length cuvette containing2mL of the buffer was placed in a thermo-statically controlled cell compartment for5min before the venom solution was added followed by the substrate addition,and the increase in?uorescence with time was continuously recorded for5–10min.In assays using dif-ferent inhibitors,a pre-incubation time in the presence of the respective inhibitor was applied before the substrate addition.The slope was converted into mols of hydrolyzed substrate per minute based on the?uorescence curves of standard peptide solutions before and after total enzymatic hydrolysis.The concentration of the peptide solutions was obtained by colorimetric determination of2,4-dinitrophe-nyl group(17,300Mà1cmà1,extinction coef?cient at 365nm).The venom concentrations for initial rate deter-minations were chosen at a value intended to hydrolyze less than5%of the substrate present in the reaction.The inner-?lter effect was corrected using an empirical equa-tion as previously described by Araujo et al.[13].

2.5.Peptide synthesis

The internally quenched?uorogenic(IQF)peptides containing EDDnp attached to glutamine and ortho-ami-nobenzoyl/dinitrophenol groups as donor–acceptor pairs were synthesized by solid-phase strategy.An automated bench-top simultaneous multiple solid-phase peptide synthesizer(PSSM eight system from Shimadzu)was used for the synthesis of all the peptides by the Fmoc-procedure. The?nal de-protected peptides were puri?ed by semi-preparative HPLC using an Econosil C-18column(10m m, 22.5mm?250mm),and a two-solvent system:(A)TFA/ H2O(1:1000)and(B)TFA/acetonitrile(ACN)/H2O (1:900:100).The peptide was eluted at a?ow rate of 5mL/min with a10–60%gradient of solvent B over30 or45min.Analytical HPLC was performed using an Ultrasphere C-18column(5m m,4.6mm?150mm)with solvent systems A and B at a?ow rate of1mL/min and a 10–80%gradient of B over20min.The HPLC column eluates were monitored by their absorbance at220nm (Shimadzu UV–vis detector)and by?uorescence emission at420nm following excitation at320nm(Shimadzu RF-353?uorescence detector).The molecular weight and purity of synthesized peptides were checked by MALDI-TOF mass spectrometry(TofSpec-E,Micromass) and/or peptide sequencing using a protein sequencer PPSQ-23(Shimadzu Tokyo,Japan).

2.6.Determination of cleaved bonds

The cleaved bonds were identi?ed by isolation of the fragments by HPLC and either by comparing the retention times of the produced fragments with synthetic peptides encompassing the expected hydrolysis products or by molecular mass determined by MALDI-TOF mass spectro-metry.

2.7.Bradykinin detection by radioimmunoassay(RIA) T.nattereri venom(3m g)was incubated with human high or low molecular mass kininogen(200nM)in50mM tris-buffer,pH7.41,0.1M NaCl in a?nal volume of 100m L for10min at378C.Kinin was extracted in ethanol (four times the reaction’s?nal volume)for10min at708C. Solutions were freeze-dried and dissolved in200m L of egg albumin buffer(0.1%egg albumin in0.01M phosphate buffer,pH7.0,0.14M NaCl,0.1%NaN3,30mM EDTA, 3mM ortho-phenantroline).Aliquots(50m L)were incu-bated with100m L of antibody anti-Bradykinin(1:80,000) [14]and100m L of[125I]-labeled Tyr-bradykinin for20h at48C.Four hundred microliters of0.1%bovine g-glo-bulin in0.01M phosphate buffer,pH7.0,0.14M NaCl, 0.150.1%NaN3and800m L of25%polyethyleneglycol 6000solution were added to the samples,which were incubated for10min at48C.Finally,the samples were centrifuged at2000?g for20min at48C;the super-natants were removed and the pellets submitted to radiation counting[15].

2.8.Drugs and chemicals

The following drugs were used:fentanyl(Jassen Farm-ace?utica),dexamethasone(Decadron–Prodome),indo-methacin(Indocid–MSD),cyproheptadine,L-NAME, and https://www.wendangku.net/doc/bd15780563.html,I was obtained by peptide synthesis in solution using anhydride procedures and tert-butyloxycar-bonyl-amino acids,puri?ed in silica gel and characterized by HPLC as previously described[16,17].PKSI527was provided by Dr.Yoshio Okada,Faculty of Pharmacy Sciences,Kobe-Gakuin University,Kobe,Japan.Drugs solutions were administered30min before the venom, except dexamethasone and captopril,which were given, 60and120min,respectively,before venom injections.All drugs were dissolved in sterile saline(NaCl0.9%),except indomethacin and cyproheptadine which were dissolved in sodium bicarbonate(5%)and dimethyl sulfoxide(DMSO), respectively;TKI was dissolved in Tween80(40:1)and further diluted in saline.In enzymatic assay,the following inhibitors were used:trypsin-like serine proteases(TLCK), chymotrypsin-like serine proteases(TPCK),all serine

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proteases (PMSF),cysteine proteases (E-64),aspartyl proteases (pepstatin A),and metalloproteinases (EDTA and o -phenantroline).2.9.Statistical analysis

All results were presented as means ?S.E.M.of at least six animals in each group.Differences among data were determined using one way analysis of variance (ANOV A)followed by Dunnett ’s test.Differences between two means were determined using unpaired student ’s t -test.Data were considered different at p <0.05.

3.Results

3.1.Nociceptive and edematogenic effects of T.nattereri venom

Plantar injection of T.nattereri venom (0.1–6m g)into the mouse right hind-paw induced a dose-related increase of the paw licking duration that reached its maximum at 3m g (209.5?13.9s),and was slightly diminished at the highest dose (Fig.1a).After 30min treatments,the mean paw weights increased proportionately to the dose up to 3m g (from 35.0?6.0to 135.0?2.8mg)and stabilized

thereafter,re ?ecting the associated venom-induced noci-ception and paw edema (Fig.1b).

To assess the mechanisms involved in both nociceptive and edematogenic responses,the venom effect was tested at a dose (1m g)that induced submaximal levels of noci-ceptive response and paw edema,in the presence of antagonists of the major related pharmacological path-ways.These antagonists were tested at doses effective as anti-nociceptive and anti-in ?ammatory in the same animal model [11].

3.2.Effects of antagonists of nociceptive and in?ammatory mediators

Previous treatment of mice with the opioid analgesic fentanyl (0.1mg,s.c.,dorsal region)reduced the paw licking time induced by injection of 1m g of T.nattereri venom by 84%of control (from 185.0?21.0to 29.6?3.6s,n =6),without changing the paw swelling (from 128.1?7.5to 129.2?9.7mg,n =6).

In those mice treated with indomethacin (1mg/kg,s.c.),a non-steroidal anti-in ?ammatory agent,the venom-induced paw licking time (218.0?40.6s,n =6)and swelling (117.7?9.1mg)induced by 1m g venom were not signi ?cantly different compared to control values (181.0?18.7s and 122.8?6.2mg,respectively).At the same dose indomethacin reduced the acetic acid-induced writhing in mice by 52%of control (from 18.5?3.0to 8.8?2.1writhes/30min (n =6).

Treatment of mice with dexamethasone (1mg/kg,s.c.),a steroidal anti-in ?ammatory drug did not in ?uence the venom-induced nociceptive response (207.0?23.7s)or the paw edema (114.8?10.9mg).An equal dose of dexamethasone,however,was effective in reducing the mouse ear edema induced by croton oil by 82%(from 8.8?1.0to 1.6?0.6mg,n =6).

The paw licking time and edema induced in mice by 1m g venom were not either affected by treatment of mice with cyproheptadine (1mg/kg,i.p.),an antagonist of ser-otonin receptors (124.5?13.6s;107.8?7.6mg,n =6),or L -NAME (100mg/kg,s.c.),a nitric oxide synthase inhibitor,(145.8?8.3s;96.1?7.3mg,n =6)compared to control values (149.0?16.5s and 106.2?4.9mg,respectively).

3.3.Effects of kallikrein inhibitors

Treatment of mice with a speci ?c tissue kallikrein inhibitor (TKI,100mg/kg,i.p.),at a dose previously shown to reduce the formalin-induced neurogenic and in ?ammatory pain in mice [11],reduced the venom-induced paw licking time and edema by 78%and 24%from control values (162.7?38.4s and 105.5?19.9mg,n =12),respectively (Fig.2).In contrast,pretreatment with PKSI 527(100mg/kg,s.c.),a plasma kallikrein speci ?c inhibitor did not affect the paw licking time,while it

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2154Fig.1.Dose –response relationships of the nociceptive effect (a)and paw swelling (b)induced in mice by subplantar injections of single doses of T.nattereri venom (0.1–6m g)into the hindpaw.Symbols and vertical bars are means ?S.E.M.of the effects recorded in 6–10animals for each dose.

slightly reduced the paw edema(15%)induced by T. nattereri venom compared to control(106.2?4.9mg) (Fig.2).A lower dose of TKI(30mg/kg,i.p.)did not change the venom-induced nociceptive(147.0?26.2s) and in?ammatory responses(89.2?6.1mg).

To evaluate a possible involvement of the kallikrein-kinin system in the venom-induced local effects,mice were pretreated with the angiotensin-converting enzyme inhibi-tor,captopril(100mg/kg,i.p.).This inhibitor prevents degradation of bradykinin,thus inducing potentiation of kallikrein effects.As shown in Fig.2,administration of captopril(3mg/kg,s.c.)increased the paw licking time and paw swelling induced by0.1m g T.nattereri venom in mice by two-fold(Fig.2).

3.4.T.nattereri venom cleaves synthetic substrates from human kininogen

To verify the presence of kinin releasing enzymes in the venom of T.nattereri,the enzymatic activity of the venom on synthetic substrates derived from human kininogen sequences was evaluated.Three internally quenched ?uorescent peptides containing the sequence related to the bradykinin region of human kininogen were used to assess the substrate speci?city requirements:(1)Abz-MISLMK RPQ-EDDnp,(Abz-Met-Ile-Ser-Leu-Met-Lys-Arg-Pro-Gln-EDDnp)corresponding to bradykinin N-terminal,(2)Abz-GFSPFR SSRQ-EDDnp(Abz-Gly-Phe-Ser-Pro-Phe-Arg-Ser-Ser-Arg-Gln-EDDnp),corre-sponding to bradykinin C-terminal,and(3)Abz-LGMISLMK RPPGWSPFR SSRIW-NH2(Abz-Leu-Gly-Met-Ile-Ser-Leu-Met-Lys-Arg-Pro-Pro-Gly-Trp-Ser-Pro-Phe-Arg-Ser-Ser-Arg-Ile-Trp-NH2)peptide containing the entire bradykinin sequence.Hydrolysis of the two?rst peptides was observed by increase in?uorescence levels. Furthermore,HPLC analysis of the reaction products revealed fragments with the same retention time as the authentic synthesized fragments correspondent to cleavage of peptide(1)at the M–K bonds,the peptide(2)in R–S bond,and peptide(3)releasing KRPPGWSPFR(Lys-Arg-Pro-Pro-Gly-Trp-Ser-Pro-Phe-Arg),which corresponds to Lys-bradykinin or Kallidin(Table1).The last fragment (from peptide3)was detected using tryptophane(W)as ?uorescent group and further analyzed by mass spec-troscopy,con?rming the molecular mass of Kallidin (Table1).

The hydrolysis of the synthetic peptides1,2and3was evaluated as described above in the presence of inhibitors of the major groups of proteolytic enzymes.The enzymatic activity was inhibited by metal-chelating agents(EDTA

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2155 Fig.2.Effects of speci?c inhibitors of tissue kallikrein(TKI,100mg/kg,

i.p.,injected30min before),plasma kallikrein(PKSI527,100mg/kg,s.c.,

injected30min before)and the angiotensin-converting enzyme inhibitor

captopril(Capt,100mg/kg,i.p.,120min before)on the nociceptive

response in(a),and paw swelling in(b),induced by subplantar injections

of T.nattereri venom(Tn1–0.1m g)in mice.Columns and vertical bars are

means?S.E.M.of six animals in each group.(*)Different from corre-

sponding control(C)(p<0.05).

Table1

Cleavage sites of the hydrolysis by T.nattereri venom of the synthetic substrates derived from human kininogen sequence,determined by high performance liquid chromatography(HPLC)and by mass spectrometry(MS)

Substrate Detected fragments

(HPLC retention time)

MW(calculated)Observed ion(m/z)

Abz-LGMISLM#KRPQ-EDDnp Abz-LGMISLM a––

KRPQ-EDDnp a––

Abz-GFSPFR#SSRQ-EDDnp Abz-GFSPFR a––

SSRQ-EDDnp a––

Abz-LGMISLM#KRPPGWSPFR#SSRI-NH2c KRPPGWSPFR b1226.71227

Abz-LGMISLM a

(#)Indicates the cleavage site.

a Cleavage sites determined by comparison of the retention time in the HPLC analysis of the reaction products with the corresponding synthetic fragments (Abz-LGMISLM,KRPQ-EDDnp,SSRQ-EDDnp,etc.).

b Fragment isolated in the HPLC analysis and submitted to MS analysis.

c To facilitate the detection(following the triptofan?uorescence)an

d th

e isolation o

f this fragment the Phe residue at this position(in the natural kininogen sequence)was replaced by a Trp residue(underlined residue)in the synthetic peptide assayed.

and o-PHE).In contrast,PMSF,TLCK,TPCK,E-64,and Pepstatin-A did not present inhibitory effect on action of whole venom.

3.5.Kinin release by T.nattereri venom

The ability of the venom to generate kinins from natural kininogen was evaluated by radioimmunoassay,incubating the venom with human high or low molecular mass kinino-gen.The results presented in Table2show that incubation of the venom with high molecular mass kininogen resulted in kinin levels similar to controls.In contrast,when incubated with human low molecular mass,kininogen venom induced the release of kinin(6300pg compared to13,500pg released by tissue-kallikrein enzyme),thus, con?rming the existence of venom peptidases with sub-strate speci?city and activity similar to tissue-kallikrein enzymes.

4.Discussion

The main symptoms of T.nattereri envenomation include local edema and excruciating pain that develop a few minutes after the accident.Current treatment for T. nattereri accidents using anti-in?ammatory drugs is inef-fective[1].Thus,a better understanding of the mechanisms regulating the acute in?ammatory events could lead us to the development of more ef?cient therapeutic strategies. This study investigated the nociceptive and edematogenic activities of the poisonous?sh T.nattereri in mice and the in?uence of major nociceptive and in?ammatory mediators on both responses.

Injection of T.nattereri venom into the mouse foot paw reproduced the edema and nociception observed in human accidents.Signi?cant inhibition of the nociceptive response was obtained after treatment with the opioid analgesic fentanyl.These drugs are known to produce analgesic effect as k and m agonists at spinal and suprasp-inal levels[18].

Pretreatment with the anti-in?ammatory agents dexa-methasone(steroidal)or indomethacin(non-steroidal)was ineffective on the venom-induced nociception and edema, indicating that eicosanoids generated from the arachidonic acid are not involved.These results may explain why the clinical use of these drugs has never led to any effect on patients stung by T.nattereri.Moreover,pretreatment with either cyproheptadine,a serotonin antagonist,or L-NAME, a nitric oxide synthase inhibitor,did not affect the noci-ceptive and edematogenic responses,excluding thus a major role of serotonin and nitric oxide as in?ammatory mediators in the local effect of T.nattereri venom.In addition,in?ammatory signs measured by cytokine release and cell migration in the response to T.nattereri venom injury in mouse foot paw were very discrete[19],suggest-ing a dissociation of classical in?ammatory response and the symptoms of envenomation,including edema and nociception.

Both nociceptive and edematogenic responses of the venom were reduced by the tissue kallikrein inhibitor phenylacetyl-FSR-EDDnp(TKI),an antagonist previously shown to exert anti-nociceptive and anti-in?ammatory actions in experimental models involving injuries related to kinin formation by tissue kallikrein[11].In contrast,the plasma kallikrein inhibitor PKSI527did not in?uence the venom-induced nociceptive response,but it slightly decreased the paw edema.These?ndings indicated that pain and edema induced by T.nattereri venom could be associated with the kallikrein products.The role of kinins was further con?rmed after inhibition of the angiotensin-converting enzyme with captopril,which increased both edema and nociceptive responses induced by the venom. Kinins are well known mediators of in?ammation.In this report,we show that kallikreins appear to be major mediators of nociception and important components on edema,independently of classical in?ammatory pathways. The role of kinins in venom-induced edema was suggested previously for wasp stings.However,in this case,hista-mine,serotonin and lipoxigenases derivatives were involved[20].Kinins were also reported to induce hyper-algesia after injection of Bothrops asper snake venom,and the effect was also inhibited by dexamethasone,suggesting the participation of arachidonic acid derivatives[21]. Rocha e Silva et al.and coworkers[22]described for the ?rst time a kinin-releasing enzyme using as model the venom of Bothrops jararaca.Since then,the presence of kallikrein-like enzymes has been extensively described in a large number of different animal venoms[23].Most of these studies,however,are related to the hypotensive effects of bradykinin.Recent studies also reported the presence of kallidin-releasing enzymes from Bitis arietans, Trimeresurus elegans,and Phoneutria nigriventer[24–28]. In this study,we also characterized the presence of a tissue-kallikrein-like enzyme in T.nattereri https://www.wendangku.net/doc/bd15780563.html,ing in vitro enzymatic assays,venom samples hydrolyzed the human kininogen-derived synthetic peptides releasing Lys-brady-kinin;additionally,it also released kinins when pre-incu-bated with low molecular weight kininogen.

A series of protease inhibitors were used to verify the nature of the kinin-releasing enzyme presented in

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Table2

Kinin-release by T.nattereri venom measured by radioimmunoassay

Sample Kininins(pg)

HK200

HK+Plasma kallikrein16,000

HK+T.nattereri venom240

LK530

LK+Tissue kallikrein13,500

LK+T.nattereri venom6,300

T.nattereri venom(3m g)was incubated with human high(HK)or low(LK)

molecular mass kininogen(200nM)in50mM tris-buffer,pH7.41,0.1M

NaCl for10min at708C.

T.nattereri venom.Surprisingly,the classical serinopro-teinase inhibitors did not interfere with peptide cleavage. Aspartyl and cysteine-peptidase inhibitors also failed in reducing enzyme activity.On the other hand,metal-chelat-ing agents as EDTA and ortho-Phenanthroline inhibited the hydrolysis of kininogen-derived peptides.This suggests that the kallikrein-like activity of T.nattereri venom could be attributed to metalloproteinases.However,this is in disagreement with the current classi?cation of kallikreins, which are classi?ed as serinoproteinases.The effect of chelating agents could also be explained by the necessity of metal ions for stabilization of the enzyme structure,which may occur independently of the class of proteinase.In order to characterize the T.nattereri venom tissue-kallik-rein-like enzyme,the component is currently being iso-lated and sequenced in our laboratory and this further work will certainly explain the nature of the enzyme.

In conclusion,the presented data indicate that nocicep-tion and edema induced by T.nattereri venom follow a peculiar in?ammatory mechanism where kallikrein pro-ducts play an important role and classical in?ammatory pathways appear to exert minor in?uence.These?ndings must be considered in order to achieve ef?cient treatment for human victims of this?sh.

Acknowledgments

This work was supported by Fundac?a?o de Amparo a` Pesquisa do Estado de Sa?o Paulo(FAPESP)and Brazilian Research Council(CNPq).

References

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M.Lopes-Ferreira et al./Biochemical Pharmacology68(2004)2151–21572157

成功案列的借鉴与分析

郑州交通职业学院毕业论文（设计）论文（设计）题目：成功营销案例的借鉴与分析所属系别经济管理系专业班级姓名陈健敏学号 0503…… 指导教师 xxx 撰写日期 2011 年 3 月

随着社会的不断的进步，市场经济也不断的在发生变化，教学方法也不断的在调整，现在案例教学法是一种融入现代教学理念的教学方法,选择适当的案例是案例教学法成功的关键,进一步完善高职院校市场营销案例库势在必行。本文结合市场经济具体案例，从市场营销成功案例导入、案例论证、案例讨论、案例练习、案例收尾等方面，探讨了案例教学法在市场营销教学中的具体应用。通过对成功案例的借鉴和分析，我们会在以后的创业生涯中，不走弯路，能够更快的带我们走想成功。当然通这些过案列的分析，我们将会明白市场经济的机构和市场经济的分析，能够好的定一个合理的营销方案。从本文中我们就能，我们将对市场经济的了解以及对未来市场变化的分析。关键词：营销案例、市场营销、市场经济、案例教学法

With the constant social progress, market economy also constantly changing in the teaching method is also constantly adjust, now in case teaching is a kind of into the modern teaching philosophy teaching method, choose the appropriate case is the key to the success of case teaching in higher vocational colleges, and further perfect marketing putted forward is imperative. Based on the specific case of market economy, from marketing successful cases import, case demonstrates, case discussion, case exercises, case studies, this paper discusses such as ending up in case teaching marketing teaching in the specific application. Based on the successful case of reference and analysis, we will in future business career, not detours, can bring us walk faster to success. Of course the case analysis of these had listed, we will understand market economy's institutions and the analysis of the market economy, can good for a rational marketing scheme. From this article, we can, we will be in the market economy as well as of future market change analysis. Keywords: marketing case, marketing, and market economy, case teaching method

实验思考题参考答案

实验思考题参考答案实验Fe(OH)3胶体的制备、破坏、分离 1.常压过滤时滤纸为什么要撕去一角？答：使滤纸紧贴玻璃漏斗，有利于排出滤纸与玻璃漏斗之间气泡，形成液柱。 2.抽滤时剪好的滤纸润湿后略大于布氏漏斗的内径、或剪的不圆周边凸出部分贴在布氏漏斗内壁上，对抽滤有何影响？为什么？答：会造成漏虑。滤纸大于布氏漏斗内径会造成滤纸折叠，不能紧贴布氏漏斗。 3.抽滤时，转移溶液之前为什么要先稍微抽气，而不能在转移溶液以后才开始抽气？答：使滤纸紧贴布氏漏斗，以免造成漏虑。 4. 沉淀物未能铺满布氏漏斗底部、滤饼出现裂缝、沉淀层疏松不实，对抽干效果有什么影响？为什么？如何使沉淀抽得更干爽？答：固液分离效果不好；漏气使压差变小；用药勺铺平、压实沉淀物再抽滤。由胆矾精制五水硫酸铜 1.结晶与重结晶分离提纯物质的根据是什么？如果被提纯物质是NaCl 而不是CuSO4·5H2O，实验操作上有何区别？答：根据物质溶解度随温度变化不同。NaCl 的溶解度随温度变化很小不能用重结晶的办法提纯，要用化学方法除杂提纯。 2.结晶与重结晶有何联系和区别？实验操作上有何不同？为什么？答：均是利用溶解度随温度变化提纯物质；结晶浓缩度较高（过饱和溶液），重结晶浓缩度较低（饱和溶液），且可以进行多次重结晶。结晶一般浓缩到过饱和溶液，有晶膜或晶体析出，冷却结晶；重结晶是在近沸状态下形成饱和溶液，冷却结晶，不允许浓缩。

3.水浴浓缩速度较慢，开始时可以搅拌加速蒸发，但临近结晶时能否这样做？答：搅拌为了加快水分蒸发；对于利用晶膜形成控制浓缩程度，在邻近结晶时不能搅拌。否则无法形成晶膜。 4.如果室温较低，你准备采用什么措施使热过滤能顺利进行？答：预热漏斗、分批过滤、保温未过滤溶液。 5.浓缩和重结晶过程为何要加入少量H2SO4？答：防止防止Fe3+水解。粗盐提纯 1.为什么说重结晶法不能提纯得到符合药用要求的氯化钠？为什么蒸发浓缩时氯化钠溶液不能蒸干？答：NaCl 的溶解度随温度变化很小不能用重结晶的办法提纯，药用氯化钠不仅要达到纯度要求，还要符合药用要求。不能浓缩至干NaCl 溶液，是为了除去KCl。 2.用化学法除去SO42-、Mg2+ 、Ca2+的先后顺序是否可以倒置过来？为什么？答：不能，除杂要求为除去杂质引入的离子必须在后续的除杂过程中除去，先除去Mg2+ 、Ca2+后除SO42-，无法除去Ba2+。 3.用什么方法可以除去粗盐中不溶性杂质和可溶性杂质？依据是什么？答：不溶性杂质用过滤方法；可溶性杂质用化学方法除杂。依据：溶度积。醋酸解离度和电离常数测定 1.不同浓度的HAc 溶液的溶解度α是否相同？为什么？用测定数据说明弱电解质解离度随浓度变化的关系。答：不同，因K a,θ AH 。c↑,α↓。 c 2.测定不同浓度的HAc 溶液的pH 值时，为什么按由稀到浓的顺序？答：平衡块，减小由于润洗不到位而带来的误差。

2018年高考语文语言表达之语言得体分类汇编含答案

2018年高考全国百强校分类汇编 1．【2018届山西太原市高三模拟试题（二）】下列各句中，表达得体的一句是 A．昨日收到您的来信，十分高兴。好久不见，甚是想念；我现在工作、身体、家庭都很好，承蒙垂念，本人不胜感激。 B．汉献帝在历代帝王中也可算得上是中上水平了，如果按照大众对贤君的惯常定义，汉献帝也完全可以忝列其中。 C．像孙老师这样快要退休的老师仍在为培养我们而尽绵薄之力，我们这些年轻人没有理由贪图享受，不尽心尽力。 D．我反复挑选、试穿，售货员不厌其烦，还给我端来茶水，服务真是热情周到，像这样的商店，以后我还会惠顾。【答案】A 【解析】试题分析：本题考查的是语言的得体类试题，考生要注意语言的环境、身份地位、谦敬得当。B．忝列其中谦辞，表示辱没他人，自己有愧。本处使用不当。C．绵薄之力，指尽自己的努力去帮助别人，本处属于用错了对象。惠顾，光临惠临，多用于商店对顾客。 2．【2018届山西孝义市高三下学期一模考试】下列各句中，表达得体的一句是 A．您都退休了，还在为学校尽绵薄之力，让我们这些当领导的实在惭愧呀！ B．我的导师桃李满天下，我水平不高，能忝列其中也是我的光荣！ C．我现在因为买房子手头紧，以前我借给你5000元钱，请您奉还好吗？ D．再次莅临二中听课，我很高兴，上一次来还是三年前，你们请我来当评委。【答案】B 3．【2018届陕西宝鸡市高三教学质量检测（三）】下列各句中，表达得体的一句是 A．我每次去西安，都要光临古城的标志大雁塔，凭栏远眺，饱览大好风光。 B．听说我们要去他家拜访，李老师特别激动，在家充分准备，已经恭候多时了。 C．贤弟，犬子在贵公司工作，愚兄就把他托付于你，还望你多多照顾。 D．你身为名师的弟子，竟然弄虚作假，真是忝列门墙，有辱师门。

企业文化适合的才是最好的

管理是一门实践科学，讲究从实践中来，到实践中去。近来，有关管理的各种理论、实践、学说、案例、方法、西方的、中国式的，层出不穷，对于正在成长中的中小企业而言，似乎每种都是公说公有理、婆说婆有理，左右为难，或者觉得外来的方法不适合自己，或者不管什么照单全收。从《谁动了我的奶酪》到《没有任何借口》，管理仿佛是那么简单，其实又是那么难以掌握。笔者对于成长中的中国企业该学什么以及如何学习，提出自己的观点和实践方法，供读者参考。学习的误区从二十多年前中国管理科学理论和实践的极度匮乏，到现在的百花齐放百家争鸣，中国的管理科学有了质的飞跃。对于管理是个啥东西，我们有了更多的认识和活生生的案例。海尔、蒙牛、联想等在引领中国企业走向正规化、科学化的同时，也非常好地彰显了企业的学习意识和能力。企业不学习，就无法进步，就无法在当今各行各业日益激烈的市场竞争环境中存活。在新理念和思想变化越来越快、信息传播越来越迅速的当今，有一些中小企业经常陷入学习的误区：不学习有一些企业，凭借着当时特定的市场机遇和企业家自身的聪明才智，在风起云涌的市场大潮中披荆斩棘，杀出了一条极具自身特色的成长之路。当该企业到达一定规模和行业地位后，企业家陶醉于成功后的自我满足，不屑于虚心学习和创新，固步自封，结果企业停滞不前乃至迅速进入衰退期。学习，但没有明确的目的记得几年前，笔者在中国的很多城市里看到这样一则标语：向济南交警学习！因为这句标语中没有宾语，当时笔者就曾暗自琢磨，济南交警怎么了？他们有什么先进事迹？各个城市要像济南交警学习什么？为什么要学习济南交警？无独有偶，现在的很多中小民营企业，自己深知管理水平的不足，非常如饥似渴地拜师学艺，不管什么理论、主张和方法，只要企业家觉得好，就组织大家学习。学习态度固然好，但问题是企业并没有清楚地认识到学习的目的和意义是什么？在没有明确目的前提下，为了学习而学习，学习流于形式化，并不能解决什么实际问题。

借鉴大家理论“近五年中考题型分析”

即可。4分）（3）未成年人应该怎样自觉抵制互联网低俗之风？（两个方面即可。4分）起”，为什么“更是精神的崛起”？（两点即可。6分）中有关内容重复者不得分）（3）在展板结尾部分，你班准备以“爱祖国就要从爱家乡做起，我为家乡添光彩”为主题向全校同学发出倡议，请完成下列倡议内容。（三条即可。6分） B 2010年A (1)镜头一、镜头二共同．．说明了什么?(4分) (2)针对上述现象，你有哪些感悟?(三个方面即可。6分) (1)建设繁荣富裕和谐稳定的社会主义新疆，让新疆各族群众生活越来越美好。请谈谈实现这一奋斗目标的信心来源。(三个方面即可。6分) (2)维护民族团结，人人有责。对此，你准备怎样做?(两个方面即可。4 分) (1)列举近年来，国家和我省开展了哪些有利于加强社会主义核心价值体系建设的相关评选活动?(两种活动的名称即可。2分) (2)请参照示例，列举两位在相关活动中评选出的我省英雄模范人物。(4分) 示例：县委书记的好榜样——焦裕禄(友情提示：与示例重复者不得分) (3)作为中原儿女，你准备怎样以实际行动成为“三平”精神的践行者?(两个方面即可。4分) (1)请谈谈我国举办2010年上海世博会的重要意义。(两个方面即可。4分) (2)请推荐两种独具我省特色的展品或项目参加河南活动周。(2分) (友情提示：可从历史文化类、土特产类、民俗类、知名品牌类等方面入手) (3)如果有幸参观世博会，你将如何向世人展示中国当代中学生的风采?(两个方面即可。4分) B （1）列举河南领跑中部崛起，有哪些可圈可点的特色与优势？（三个方面即可。6分）（2）作为未来的建设者，你准备为中原崛起做些什么？（两个方面即可。4分）（1）请谈谈你对开展“红段子” 活动的认识。（两个方面即可。4分）（2）请你编写一条红色短信，并对所编短信进行简要解析。(要求：主题鲜明，观点正确，积极向上，语言简练。6分) （1）请你谈谈弘扬“三平”精神对河南振兴的重要意义。(两个方面即可。4分）（2）新中国成立以来，我省涌现出了大批英雄模范人物，他们都是践行“三平”精神的典范，请你写出其中的四位。（2分）（3）作为中原儿女，弘扬“三平”精神，你会有哪些实际行动？（两个方面即可。4 分）（1）为吸引八方游客参观中国馆，请你设计一条宣传标语。(要求：主题鲜明，观点正确，语言简练。 4分) （2）中国一定会让世界各国人民共享一届成功、精彩、难忘的世博盛会！请你探究：这种信心来自哪些方面？（三个方面即可。6分） 2011年A （1）从毁灭走向新生，从悲壮走向豪迈，走过风，走过雨，四川依（1）中原崛起，文以化之；河南振兴，文以铸之。在历史长河中，中原（1）请为本次专题报告会拟定两条宣传标语。（与材料重复者不得分。4分）（1）读—品读红色经典：请写出两部红色经典的名称。（2分）

国外思想政治教育方法的借鉴与思考

国外思想政治教育方法的借鉴与思考学院：马克思主义学院专业：思想政治教育姓名：林美学号：2009822081

国外思想政治教育方法的借鉴与思考林美（吉林大学马克思主义学院、思想政治教育专业、林美、2009822081）摘要：思想政治教育是我们党的优良传统，但它并非我国独创在中外文化相互激荡科技突飞猛进竞争日益激烈的今天，其作用引起了世界各国的普遍重视有比较才能有鉴别，有鉴别才能有优化和提高因此，在新的历史条件下，研究与比较世界各国思想政治教育方法，为加强和改进我国思想政治教育工作提供借鉴和启示，无疑具有十分重要的现实意义。关键词：国外思想政治教育、方法、借鉴、思考一、借鉴国外思想政治教育方法的重要性思想政治教育是我党的优良传统和政治优势，是我国进行革命和建设的传家宝。但实际上思想政治教育从来就不是社会主义的专有，也不是到了近现代才出现的社会活动。作为人类阶级社会普遍存在的一种教育实践活动，它在世界各国普遍存在。在不同的国家和地区虽然其名称和形式有所不同，但实质上都是为统治阶级服务的。所以，思想政治教育活动不仅近现代有，古代也有；不仅我国有，国外也有。并且这其中有很多共同之处，只是名称和形式不同而已。在我国，思想政治教育在各个领域都占有举足轻重的地位，不仅有着优良的传统和丰富经验，在理论水平方面也取得了很大的成绩。然而面对世界多极化，经济全球化的国际背景和我国社会主义市场经济体制的逐步建立，人们的思想观念随之发生深刻的变化，思想政治教育也面临新的挑战。早在十多年前，当沃恩党内出现埋首经济工作、忽视思想政治教育的倾向时，邓小平就告诫我们，要坚持物质文明和精神文明两手都要抓，两手都要硬。他多次提出：思想政治教育和思想政治教育队伍都要加强，决不能削弱。江泽民通知也强调说：随着改革开放的深入和经济关系的调整，出现了不少新情况新问题，要深入实际，调查研究，做好思想着教育工作。而反观我国当前的思想政治教育工作的实际情况，时效性、针对性、和创新性有待于进一步加强和提高，还有很多方面的工作要做。需要做出更多更大的努力来迎接不断出现的新挑战。西方发达国家在二战后进行的一系列自我改革和调整中，思想政治教育在保证其改革和调整的顺利进行和成功方面功不可没。并且在当前全球化一体化进程不断加快和网络技术迅速发展的条件下，世界各国都高度重视本国的思想政治教育，并且有很多值得借鉴的经验和做法。所以在新的的历史条件下，面临国内外的新形势和我国思想政治教育面临的

第三章思考题及答案

第三章思考题刚体一般是由n （n 是一个很大得数目）个质点组成。为什么刚体的独立变量却不是3n 而是6或者更少何谓物体的重心他和重心是不是总是重合在一起的试讨论图形的几何中心，质心和重心重合在一起的条件。简化中心改变时，主矢和主矩是不是也随着改变如果要改变，会不会影响刚体的运动已知一匀质棒，当它绕过其一端并垂直于棒的轴转动时，转动惯量为23 1 ml ，m 为棒的质量，l 为棒长。问此棒绕通过离棒端为l 41且与上述轴线平行的另一轴线转动时，转动惯量是不是等于2 24131?? ? ??+l m ml 为什么如果两条平行线中没有一条是通过质心的，那么平行轴定理式（3.5.12）能否应用如不能，可否加以修改后再用在平面平行运动中，基点既然可以任意选择，你觉得选择那些特殊点作为基点比较好好处在哪里又在（3.7.1）及（）两式中，哪些量与基点有关哪些量与基点无关转动瞬心在无穷远处，意味着什么刚体做平面平行运动时，能否对转动瞬心应用动量矩定理写出它的动力学方程为什么当圆柱体以匀加速度自斜面滚下时，为什么用机械能守恒定律不能求出圆柱体和斜面之间的反作用力此时摩擦阻力所做的功为什么不列入是不是我们必须假定没有摩擦力没有摩擦力，圆柱体能不能滚圆柱体沿斜面无滑动滚下时，它的线加速度与圆柱体的转动惯量有关，这是为什么但圆柱体沿斜面既滚且滑向下运动时，它的线加速度则与转动惯量无关这又是为什么刚体做怎样的运动时，刚体内任一点的线速度才可以写为r ω?这时r 是不是等于该质点到转动轴的垂直距离为什么刚体绕固定点转动时，r ω ?dt d 为什么叫转动加速度而不叫切向加速度又()r ωω??为什么叫向轴加速度而不叫向心加速度在欧勒动力学方程中，既然坐标轴是固定在刚体上，随着刚体一起转动，为什么我们还可以用这种坐标系来研究刚体的运动欧勒动力学方程中的第二项()21I I -y x ωω等是怎样产生的它的物理意义又是什么第三章思考题解答答：确定一质点在空间中得位置需要3个独立变量，只要确定了不共线三点的位置刚体的位置也就确定了，故须九个独立变量，但刚体不变形，此三点中人二点的连线长度不变，即有三个约束方程，所以

语言运用之得体答案

语言运用——语言表达得体编者：周莉莉审核：罗兴一、课前小故事从前有个知县好巴结上司。一天，知府到他这儿巡视，在宴会上，知县一边劝酒，一边套近乎。“大人几位公子呀？”知府伸出两个指头回答，“有两个犬子。”说完反问知县：“大人有令郎几位呀？”不问则已，一问把知县问傻眼了。知县心想：知府大人称自己的儿子为犬子，我该怎么称呼我的儿子呢？他想了好半天，才毕恭毕敬的回答说：“回禀大人，卑职只有一个5岁的王八羔子！” 二、考点解说 1.高考关于语言表达的要求简明、连贯、得体、准确、鲜明、生动 2.何谓得体能够根据交际的语境选用恰当的语言来表情达意，符合语境和语体的要求。 ★得体的语言表达常常也体现了简明、连贯、准确、鲜明、生动等要求。三、考题形式 “语言运用得体”是高考语言运用题的一个考点，通常以选择题、改错题和主观表述题的形式来考查。试题设计选用来自生活的语言材料，侧重从语言的动态运用角度来检测考生的表达能力。四、语言表达得体原则总结题目答案原则归纳一1.校学生会拟开展“如何与陌生人交往” 的主题活动，为学习交往经验，将对某老师进行访谈，请你设计三个访谈问题。要求：①紧扣访谈目的，问题步步深入； ②语言表达简明、得体。 ①在和陌生人的交往中，您印象最深的事是什么？ ②从这些事例中，您总结出了哪些与陌生人交往的技巧？ ③为帮助我们更好地与陌生人交往，您还有哪些建议？目的用语要看目的，有的放矢有什么事说什么话

二2．请根据不同的告知对象，将“请对方按时参加”的意思告诉他们。（1）在给下级的通知里：（2）在给兄弟单位的请柬里：（3）在商店门口的广告里：（4）为家宴，父母给子女的口头通知里：（1）务必准时出席（2）敬请届时光临指导（3）欢迎您届时惠顾（4）到时候一定要回来对象说话写文章首先要看对象，即考虑谁是听话者、阅读者，要充分考虑对象的特征。由于人们的社会地位、职业、年龄、性别、性格、文化水平、心理情绪、生活经验等不同，人际关系又有亲疏、长幼之分，针对这些交际对象的差别要选用不同的表达方式和语言形式。 3.假如你是广播电台少儿栏目的主持人，请根据少儿听众的特点，重新表述下面一段文字的划线部分。不得改变原意。不超过80个字。蔚蓝的天空，万里无云。碧绿的草地上，一条小溪潺潺流过，水中的卵石清晰可见。溪边坐着一位长髯老者，面容清瘦，双目炯炯有神。一条小溪哗哗地流着，水里有好些圆溜溜的石头，像鸡蛋似的，看得可清楚了。溪边坐着一位长胡子的老爷爷，脸瘦瘦的，胡子长长的，那双眼睛亮亮的可有神了。三4.下列标语与张贴场合相协调的项是： A、敬老院：少壮不努力，老大徒伤悲。 B、考场门口：失败乃成功之母。 C、陡坡，慢！（某盘山公路下山方向） D、某一交叉路口：多拉快跑，争分夺秒！ C 场合场合有种种不同，或悲痛，或欢乐；或正式，或随意；或紧张繁忙，或轻松愉快等等。不同的场合，对语言运用有不同的要求。一般说来，在悲痛的场合，应该严肃、庄重，不能尽说些无关痛痒的笑话；在欢乐的场合，应该轻松、愉快，不能尽唠叨自己的苦恼、不满，如此等等。语言表达要与环境气氛相协调。 5．法院在审理一案件时，需传证人即罪犯的妻子到庭。审判员说哪句话才比较得体？[ ] A、传证人XXX到庭 B、把罪犯XXX的老婆带上来。 C、传证人XXX到这里来 D、叫罪犯XXX的妻子来。 A

借鉴日本经验思考工匠精神

借鉴日本经验思考工匠精神到底什么是工匠精神笔者理解，工匠精神包括而不局限于以下信念：热爱自己的工作；每临工作现场，必有庄敬之意；长期探寻此业之精髓，力求达到更高之境界；产品和服务讲究品质，质量是生命也是道德和人品；祈望自己的所为对后人的价值超出价格，作品能比自己的寿命更长。手工业时代没有“工匠精神”一说，就像吃不饱饭的时代很少讨论“孩子为什么不愿吃饭”一样。那个时期的工匠一般自视为手艺人。工匠们一生搂住一件事做透，也是自然而然的，多数工匠还以之传宗接代。那个时代，工匠讲得最多也最为自豪的一句话是：“活干不好，丢不起人”。师傅们手艺当然有高有低，但粗制滥造几乎是不可想象的。随着工业时代的到来，分工越来越细，合作越来越强。工作岗位被不断细分，工匠类别在快速扩展。譬如日本有家庭妇女琢磨家庭杂物的收捡而成就了“收纳师”职业，其中一位名叫山下英子的收纳师还因其专门研究成果成为收纳咨询师，出版了专著《断舍离》，书中的人生思考接近于哲学境界。工匠精神的实质虽然工匠的类别在扩展，工匠的队伍在扩大，但工匠精

神却同时被逐渐丢弃。到底什么是工匠精神笔者理解，工匠精神包括而不局限于以下信念：热爱自己的工作，绝无高低贵贱之虑；每临工作现场，必有庄敬之意；长期探寻此业之精髓，力求达到更高之境界；产品和服务讲究品质，质量是生命也是道德和人品；以业为生，但不为钱而放弃标准；一旦结识高手，必敬慕之，学习之；祈望自己的所为对后人的价值超出价格，作品能比自己的寿命更长。首先来看工匠精神之对所从事的工作的热爱。全世界最长寿的企业、超过1400岁的金刚组，从日本飞鸟时代（公元600～710年）世代传承下来，小川三夫的《长短木头的组合》记述了金刚组第40代当家人金刚正和说过的一段话：“等到两三百年以后，把这些建筑物拆开时，负责拆房子的木匠会想起我们这些匠人来的。他们会感叹说，瞧这活儿，干得真棒！” 同样的情感，400年老店日本HIGETA酱油公司的常务董事山下启义则这样表达：“我们有时还是会在工作中对微生物说话，比如会对那些小家伙们打招呼，说：‘好嘞！今儿在这给你们加点儿空气，给你们搅拌搅拌怎么样啊’我们不仅重视微生物，而且对它们充满了敬意。” 田中贵金属集团公司资历尚浅，但也有130年，它的老本乡主任说的跟山下启义几乎一样：“好像贵金属在向我们

第三章习题和思考题参考答案

第三章习题和思考题一、填空题 1、对于指令XCHG BX, [BP+SI]，如果指令执行前，(BX)=6F30H,(BP)=0200H,(SI)=0046H,(SS)=2F00H,(2F246H)=154H,(2F247H)=41 H,则执行指令后：(BX)=__4154H__，(2F246H)=___30H______，(2F247H)=___6FH____。 2、指令LOOPZ/LOOPE是结果_为零_且_相等发生转移的指令；而指令LOOPNZ/LOOPNE则是结果__不为零__且____不相等___发生转移的指令。 3、串操作指令规定源串在____数据_____段中，用__SI___来寻址源操作数；目的串在__附加__段中，用__DI__来寻址目的操作数。 4.、中断返回指令IRET后，从堆栈顺序弹出3个字分别送到___IP____、__CS_____、____标志寄存器FR____。 5、设(SS)=0FFA0H,(SP)=00B0H,(AX)=8057H,(BX)=0F79H，执行指令PUSH AX 后，(SP)=__00AEH________;若再执行指令： PUSH BX POP AX 后，(SP)=__00AEH________，(AX)=____0F79H________，(BX)=___0F79H_____。 6、设(SS)=2250H，(SP)=0140H，若在堆栈中存入5个数据，则栈顶的物理地址为___22636H________，如果再从堆栈中取出3个数据，则栈顶的物理地址为_____2263CH____。 7、M OV AL, ‘A’指令的源操作数的寻址方式为__立即寻址方式________。 8、指出下列指令源操作数的寻址方式： (1).MOV AX, BLOCK[SI] 寄存器相对寻址方式 (2).MOV AX, [SI] 寄存器间接寻址方式 (3).MOV AX, [6000H] 直接寻址 (4).MOV AX, [BX+SI] 基址变址寻址 (5).MOV AX, BX 寄存器寻址 (6).MOV AX, 1500H 立即寻址 (7).MOV AX, 80[BX+DI] 相对基址变址 (8).MOV AX, [DI+60] 寄存器相对寻址 9、以CX寄存器内容为计数对象的指令有循环控制指令和串操作重复指令。

语言运用得体练习(含标准答案)

语言运用得体练习一、选择题（本大题共30小题，共90.0分） 1.下列各句中，语言表达得体的一句是( ) A. 可能是一时疏忽，你的稿子有几个不大通畅的语句，我斗胆作了斧正。 B. 学生会经过调查研究，写出了《我校食堂服务质量调查报告》，文中提出改进意见，并且责成学校领导研究落实。 C. 尽管只是绵薄之力，但他费了很大的劲，我们应该感谢。 D. 学生给一位刚刚病愈后的老师写的信，最后的致敬语是：敬祝痊安。 2.下列各句中，表达得体的一句是（） A. 我年轻识浅，说话办事考虑不周，可能对您有所冒犯，望您海涵。 B. 他不过是个孩子，不与他一般见识，我是长辈，还没有这点雅量？ C. 临别时，他将自己的一张照片送给我：我很感动，决心一定要好好惠存。 D. 这次出差在火车上遇到您的舍侄，我俩交流了很久，很投缘。 3.下列交际用语使用得体的一项是（） A. 今天下午，我将去贵处洽谈我班同学光临贵馆参观的事宜。 B. 我们将在提供投资策略方面大力相助，并惠赠《实用投资指南》一册。 C. 一位初次给报刊编辑投搞的作者，在所寄稿件中附了一封短函：谨将拙稿寄上，敬请审阅，欢迎斧正。 D. 您的管见让我获益良多，在此谨表谢意。 4.下列交际用语使用不得体的一项是 A. 还书用语：大作拜读完毕，兹原物璧还。 B. 请柬用语：6月16日是小女满月之喜，本人略备菲酌，敬请各位光临…… C. 情景对话：“令郎贵庚？”“犬子今年14岁。” D. 回函用语：如不出意外，本人届时定当拨冗出席。 5.下列各句中，表达得体的一句是（） A. 这篇文章是我刚完成的，无论观点还是文字都不够成熟，请您不吝赐教。 B. 他是个可怜的孤儿，小时候承蒙我父母照顾，所以现在经常来看望我们。

品牌文化与企业文化之异同

品牌文化与企业文化之异同是自身的品牌文化和企业文化的统一，品牌文化是企业整体社会形象的外在表现形式，是定位于目标消费市场的需求，服务于消费者的需要，目的是要与既定的目标消费者产生对于品牌文化认同的共鸣，进而促进其产品的销售。企业文化是企业整体社会形象的内在体现,是企业凝聚力的核心,是企业发展的原动力,目的是为了提高企业的管理水平和生产效率。两种统一于一体的文化又针对不同的群体宣传，所以在营销中应该予以恰当的区分使用，即品牌文化是面向现有或潜在的目标消费者，而企业文化大多是面对企业及行业或相关群体作宣传。从现在大量的媒体广告中不难看出一种误区，把自身的企业文化当成企业的品牌文化大加宣传不在少数，而且其投放密度和费用支出都相当可观，当然不能说没有效果，但对于品牌文化在目标消费者心目中的树立可以说作用甚微，最多也只是提高了品牌的知名度。准确的品牌性格定位首先要分析产品的目标消费群体的性格特征，这应该从该群体的性别，年龄，知识结构，文化背景，心理状态，收入层次，消费观念，消费偏好和消费能力等多方面进行综合分析，评价。找出其共性，并以此共性为依据，确定产品的性格特征。更重要的是要保持这两者之间的一致性,即：该品牌所代表的精神文化是目标消费群乐于并且是易于接受的。不仅是通俗的而且具备了较强的渗透力.我们以宁波卷烟产生产的“大红鹰”品牌为例,该品牌的形象代言为一只展翅高飞的雄鹰，代表了不畏艰险，百折不挠的奋斗精神，这也正是新时代下中国人的精神风貌，更为不俗的是该品牌的销售额已跃居国内烟草业第三，仅次于“中华”和“红塔”。只有让消费者首先接受产品和服务当中所承载的文化精神，消费者才会对产品和服务产生感情认同，这样能够被动之以“情”的消费者，最终成为了该品牌的忠实用户，其忠诚度也最高，同时也成为了该品牌和服务的口碑宣传媒介。树立鲜明的品牌性格鲜明的品牌个性是品牌定位的需要，也是目标消费者区别同类产品的重要心理特征，以鲜明的品牌个性吸引消费者的注意力，进而使消费者偏好承载该品牌性格的产品，这样的营销方法在商品同质化差异越来越小的今天，已逐步凸显其独特的功效。品牌性格是在表述该品牌所代表的精神，而这种精神通常需要用某种行为或具备某种行为的物（品牌形象代言）来演绎和表达，这种品牌性格的传播途径和手段则往往是直接通过媒体，或能代表该精神行为的活动来进行。以生产“万宝路”香烟而驰名全球的菲利浦·莫里斯公司（Philip Morris）为例,该公司一直都积极赞助各项国际体育活动，尤以国际一级方程式车赛最有声望，这是莫里斯公司最有影响、最重要的赞助活动之一。在大众心目中，一级方程式赛车被视为自由、奔放、竞争、极具挑战性的运动。一级方程式赛车

对“新公共管理”的总结、反思与借鉴分析

对“新公共管理”的总结、反思与借鉴分析摘要：新公共管理是20世纪70年代末以来全球兴起的政府改革理论及运动，是公共管理领域一场新的革命，对各国行政改革的理论和实践产生了深远的影响。本文旨在通过阐述新公共管理的基本内涵及其缺陷所在，对其进行总结与反思；并进一步根据我国具体国情，分析将其引入我国公共管理领域所受的制约因素，及其对于现今我国行政改革的借鉴意义。关键词：新公共管理；新公共行政；行政改革 1、引言： 20世纪70年代末80年代初，以英国撒切尔内阁和美国里根政府为代表的西方发达国家均出现了大规模的政府再造运动，到20世纪90年代，这一运动已经成为席卷欧美主要发达国家以及其他发展中国家和转型国家的一场声势浩大的世界性行政改革浪潮。这一运动被冠以不同的称号，如管理主义（managerialism）、以市场为基础的公共管理（market-based Public administration）、企业型政府（entrepreneurial government），新右派（New Right）、新治理（New Governance）等[1]，其中以新公共管理（New public management）最为代表。尽管名称不同，但它都旨在反思和批判传统公共行政以及兴起于上世纪60年代末的新公共行政所主张的理念和行为，在公共部门管理中建立起新的范式。 2、新公共管理的基本内涵：对于新公共管理的内涵，很多公共管理学者和实践者们做了不同的概括和阐述。依据OECD（经济合作与发展组织）的界定，西方国家行政改革的共同内涵包括以下几个方面：①企业管理技术的采用；②服务及顾客导向的强化；③公

日本房地产借鉴和思考

日本房地产的思考和借鉴日本至今都还没有走出20余年前那场房地产泡沫的阴影。今天我们在此做一个总结以期真实地还原当年的那段疯狂。虽然中国目前不可能发生那样的情况，但人类的贪婪所导致的“市场的均衡是短暂的”这一点是一致的。日本房地产泡沫的特征：2007年底，六大城市土地价格仅相当于1991年高点的27.7%。绝对价格也只相当于25年前，也即1982年的水平；日本房地产泡沫发生时的背景：日本的城市化进程已经接近尾声；与快速城市化相伴的是土地价格快速上涨所导致的所谓的“土地神话”；宏观经济增速下降，经济增长方式也转为“出口主导型”；日元的国际化和金融自由化于1980年代加速；日本房地产泡沫的形成及扩大：日元国际化和低通胀导致扩性货币政策的实施；期间金融机构行为、企业行为都发生了严重扭曲；企业购买大量土地并作为资产保有而脱离交易市场，导致有效供给不足，土地价格持续上升；金融加速器机制起到推波助澜的作用；日本房地产泡沫期间的调控政策：1990年3月大藏省推出了不动产贷款总量控制政策，即规定银行对不动产贷款时，增长率不能超过其贷款总量增长率。控制贷款政策效果非常显著，其成为了房地产泡沫破灭的诱导因素之一；日本房地产泡沫的启示： 1）中国房地产不会发生日本式的泡沫。中国和日本当年最主要的区别就是“城市化进程”。在城市化进程中，城市房价，尤其是核心城市房价总体会快速上涨。85年，日本的城市化率为76.7%，城市化进程已经接近尾声；而目前中国的城市化率仅为45%，城市化进程正在处于加速阶段。我们认为，中国城市化总体每年还将继续快速提高，中国城市的房价总体是处于上涨过程中的，紧缩性政策导致的房价回调只能是短期的； 2）本币升值并不一定导致房地产价格上涨。85年“广场协议”后，主要发达国家的货币均对美元升值，这些国家并没有发生像日本那样严重的泡沫经济；就中国来看，现在人民币依然在而且还会继续升值，而股票和房地产却早已下跌；本币升值也只是为房地产价格的上涨提供了充裕资金的可能，房地产价格的最终上涨还需要市场一致预期上涨这一重要条件；3）人是理性的，更是贪婪的。当市场的均衡一旦被打破，若没有有效的调控措施，市场会加速上涨或下跌。日本当年房地产泡沫时，房价的上涨和下跌如此；前期中国的房价上涨也如此。目前中国房价下跌依然如此：在紧缩性的货币政策下，市场的参与者都预期房价要调整，开发商在降价，居民在观望。市场的均衡同样被打破。而政府认为还需要继续宏观调控，还没出手。前言、日本房地产泡沫的基本特征 1、日本人文地理概况如图所示，日本由1都1道2府43县组成。日本有三大都市圈，即东京圈（包括东京都，琦玉县，千叶县和神奈川县），大阪圈（包括大阪府，京都府和兵库县）和名古屋圈（包括爱知县和三重县）。三大都市圈囊括了六个最大的工业城市，即东京市、横滨市（属于东京圈）、大阪市、京都市、神户市（属于大阪圈）和名古屋市（属于名古屋圈）。

网络安全思考题参考答案完整版

网络安全思考题参考答案集团标准化办公室：[VV986T-J682P28-JP266L8-68PNN]

网络安全思考题答案第一章 1.什么是osi安全体系结构？为了有效评估某个机构的安全需求，并选择各种安全产品和策略，负责安全的管理员需要一些系统性的方法来定义安全需求以及满足这些安全需求的方法，这一套系统体系架构便称为安全体系架构。 2.被动和主动威胁之间有什么不同？被动威胁的本质是窃听或监视数据传输，主动威胁包含数据流的改写和错误数据流的添加。 3.列出并简要定义被动和主动安全攻击的分类？被动攻击：消息内容泄漏和流量分析。主动攻击：假冒，重放，改写消息和拒绝服务。 4.列出并简要定义安全服务的分类认证，访问控制，数据机密性，数据完整性，不可抵赖性。 5.列出并简要定义安全机制的分类。特定安全机制：为提供osi安全服务，可能并到适当的协议层中。普通安全机制：没有特定osi安全服务或者协议层的机制。第二章 1.对称密码的基本因素是什么？明文，加密算法，秘密密钥，密文，解密算法。

2.加密算法使用的两个基本功能是什么？替换和排列组合 3.分组密码和流密码区别是什么？流密码是一个比特一个比特的加密，分组时若干比特同时加密。比如DES是64bit的明文一次性加密成密文。密码分析方面有很多不同。比如说密码中，比特流的很多统计特性影响到算法的安全性。密码实现方面有很多不同，比如流密码通常是在特定硬件设备上实现。分组密码可以在硬件实现，也可以在计算机软件上实现。 4.攻击密码的两个通用方法是什么？密码分析与穷举法（暴力解码） 5.为什么一些分组密码操作模式只使用了加密，而其他的操作模式使用了加密又使用了解密答：出于加密与解密的考虑，一个密码模式必须保证加密与解密的可逆性。在密码分组链接模式中，对明文与前一密文分组异或后加密，在解密时就要先解密再异或才能恢复出明文；在计数器模式中，对计数器值加密后与明文异或产生密文，在解密时，只需要相同的计数器加密值与密文异或就可得到明文。 6.为什么3DES的中间部分是解密而不是加密？ 3DES加密过程中使用的解密没有密码方面的意义。唯一好处是让3des使用者能解密原来单重des使用者加密的数据。第三章

企业文化与公共关系

企业文化与公共关系陈万松企业文化是一门塑造良好企业形象、提高企业凝聚功能和管理能力的学科。企业文化构建一.企业文化的概念和特点 1.什么是企业文化? 企业在创业和发展过程中形成、并为员工所共同遵守的企业最高目标、价值标准和行为规范的总和。 2.企业文化的产生上个世纪70年代中后期，日本经济的崛起震惊了世界，美国在震惊后进行了反思，诞生了引起美国企业管理改革的“新潮四重奏”：《日本的管理艺术》1981. 《Z理论——美国怎样迎接日本的挑战》1981. 《追求卓越》1982. 《企业文化》1982. 3.中、日、美企业文化比较美国：重视建立共同的价值观、个人能力主义和软硬结合的管理；偏重于市场营销导向的视觉识别，将视觉识别作为核心来设计。日本：和魂洋才是核心、家族主义是特色；偏重于企业理念与企业精神，以企业理念为核心，强调以人为本。中国：二者的结合，但在理念提炼上不足，在文化内涵的发掘上不够。

二、企业文化的内容及设计要素 1.理念识别系统__企业文化的核心和灵魂（1）主要内容：企业目标企业经营理念和宗旨企业价值观和道德规范企业精神和风貌几所高校后勤企业文化的理念设计：福建高校后勤：大千世界学无止境生机勃勃沈阳高校后勤集团有限公司：投身高校后勤服务万千学子南京师范大学后勤实业集团、江苏师豪高校实业有限公司：塑造关爱后勤、温馨后勤、服务后勤、人文后勤的企业形象培育“立足现在，开拓未来”的危机发展意识；树立“大家满意，我们快乐”的教育服务理念：提供全面、细致、温馨的家庭式服务，让广大的师生享受生活的轻松。提升“制度化、流程化、互动化”的企业管理水平：塑造“诚实正直、敬业创新、舍弃小我成就大我”的团队精神（2）设计原则：实践性：来源于对组织文化的深入了解和发掘独特性：企业独特个性的反映系统性：精神、价值观等浑然一体稳定性：形成文化沉淀

对借鉴先进教学模式的几点思考

对借鉴先进教学模式的几点思考宁县中村初中秦杰在近些年，全国各地涌现出了不少先进的教学模式，在所在校也取得了令人瞩目的成绩。如：山东杜郎口中学自主创新的“三三六”自主学习模式；江苏洋思中学的“先学后教，当堂训练”教学模式；河北衡水中学的“三转五让”教学模式；江苏东庐中学的“教学合一”的“讲学稿”模式；永威中学课堂教学模式；兖州一中“三步六段”教学法和“35+10”课堂循环教学模式等等。面对这些新颖而卓有成效的教学模式，学习者蜂拥而至。但我们发现，一些学校去各地“拜师取经”，但回到家里依然“涛声依旧”；或者照搬过去发现效果不佳，半途而废，不了了之；还有一些学校盲目追求模式，标新立异，迷失了自己，更迷失了改革的方向，这其中的问题值得我们去深深的思考。学习先进的教学模式是大势所趋，是教育发展的必然，也是教育工作者所必须做的事情。但如何科学合理的学习并运用这些先进的教学模式，是摆在我们教育工作者面前的一个急需解决的课题。需要引起我们教育工作者注意的是：某一种教学模式之所以能出现好的效果，并非教学模式本身单一的因素所能决定的，它必然要涉及学校的办学理念、教学管理、激励评价机制以及校本教研等诸多方面的因素，只有各种因素共同作用，才能使教学模式产生最大化的效

果。因此，我们必须在学习先进模式的基础上，结合自身校情、学情，进行分析研究，做出科学合理的选择、借鉴，做到创新性使用，并辅之以其他因素，才能有所用，不然会劳心劳力，徒劳无功。一、制定合乎自身的办学理念作为学校管理者，要结合具体的校情制定合乎自身发展的办学理念。只有理念有可达性，学校的发展才会成为一种可能。脱离具体实际的办学理念只能成为镜中花、水中月。办学理念，从某种意义上说，就是学校生存理由、生存动力、生存期望的有机构成。从内容来说，包括学校理念、教育目的理念、教师理念、治校理念等；从结构来说，包括办学目标、工作思路、办学特色等要素。办学理念的功能就是要回答学校的全部活动所涉及的三个基本问题：为什么？做什么？怎么做？洋思中学之所以有今天的辉煌业绩，其根本原因是它有先进的办学理念："没有教不好的学生，让每位家长满意"。蔡校长常说："后进生并不是因为脑了笨，而是因为这个、那个非智力因素造成缺课太多，逐步失去学习能力而形成的。只要从实际出发，讲究实效，不停地引导他们自己查漏补缺，熟能生巧，他们就会好起来"。杜郎口中学的办学理念是“以人为本，关注生命”。用崔其升校长的话来说就是：“相信学生，发动学生，利用学生，发展学生。”即相信每一个杜郎口的学生都能成才，确立面向全体，从最后一名学生抓起的教育理念。办学理念不仅仅是一个口号，不仅仅是一个概念，而是沉淀了学

01章思考题参考答案

第一章思考题 1、维持温度不变，将压力相同、体积不同的气体混合，混合后保持压力不变，总体积与各组分体积之间是什么关系？答：总体积是各组分体积之和混合前：pV1=n1RT, pV2=n2RT, …, pV k=n k RT 混合后：pV总=n总RT=(n1+n2+…+n k)RT=n1RT+n2RT+…+n k RT=pV1+pV2+…+pV k=p(V1+V2+…+V k) ∴V总=V1+V2+…+V k 2、根据什么选择R的取值与单位？R有哪几种单位？答：根据理想气体状态方程pV=nRT，其中单位n为mol、T单位为K，R的取值与单位则由p、V的单位来确定。R的常用取值与单位见书第10页，有8.31 kPa·dm3·mol-1·K-1, 0.0831 bar·dm3·mol-1·K-1, 0.0821 atm·dm3·mol-1·K-1, 62.4 mmHg·dm3·mol-1·K-1, 8.31 J·mol-1·K-1, 1.99 cal·dm3·mol-1·K-1等。其中最常用的R值取8.31，相应的单位为kPa·dm3·mol-1·K-1或J·mol-1·K-1。 3、在一个密闭容器中含有1mol H2和2mol O2，哪种气体的分压力大？答：p1V=n1RT, p2V=n2RT ∴ 在定容、恒温的条件下，分压的大小与分子的种类和分子量无关，只与分子的数量有关，所以1 mol H2与2 mol O2相比，氧气的分压更大。 4、“在沸点以上的液体不能存在”这句话对么？答：不对。温度超过沸点的液体叫做“过热液体”，液体沸腾时，液体的内部必须有许多小气泡使液体在其周围气化，即小气泡起着“气化核”的作用，在纯净液体内小气泡不容易形成，因此容易出现过热现象。另一方面，沸点与外界压力有关。只有临界温度以上时，无论如何加压都不能使气体液化。而临界温度以下的沸点，可以通过加压使气体液化。比如，在一个大气压和105℃时（高于水的正常沸点100℃）的水蒸气，通过加压到一定程度，可以使水蒸气液化。 5、什么是临界温度？它和液体的正常沸点有何区别？答：①临界温度，使物质由气体变为液体的最高温度。每种物质都有一个特定的温度，在这个温度以上，无论怎样加多大的压力都不能使气体液化，这个温度就是临界温度。 ②液体的蒸汽压随着温度的升高而增大，当温度升高到蒸气压等于外界压力时，液体就沸腾了，这个温度就是液体的沸点。而液体的正常沸点是外界压力为101.33kPa（1atm）时液体的沸点。如表1-3所示，对于永久气体，不存在正常沸点Tb，其临界温度Tc低于室温；对于可凝聚气体，Tb低于室温而Tc高于室温；而对于常温常压下的液体，其Tb和Tc都高于室温。 6、在什么条件下，理想气体状态方程可以用于液体蒸汽压的计算？答：当液体的蒸汽可以看作理想气体时，即压力不很高、温度不很低的情况下，可以使用理想气体状态方程来计算。