日本光电MEK-7222KSOP文件.

日本光电MEK-7222K血液分析仪

标准操作规程（SOP）

一、测定原理

MEK-7222K五分类血液分析仪采用半导体激光法进行白细胞五分类的仪器，白细胞分类检测原理是：根据白细胞的大小、核的形状、颗粒的复杂程度对白细胞进行分类。白细胞总数、红细胞总数、血小板总数是根据血细胞相对非导电的性质，悬浮有电解质溶液中的血细胞颗粒，在通过计数小孔时可引起电阻的变化为基础，对血细胞进行计数和体积测定。

1、检测原理：将等渗电解质溶液（被称为稀释液,diluents）稀释的细胞悬液置入一个不导电的容器中，将小孔管(也称传感器transducer)插到细胞悬液中。小孔管是电阻抗法细胞计数的一个重要的组成部分，其内侧充满了稀释液，并有一个内电极，外侧细胞悬液中有一个外电极。检测期间，当电源接通后，位于小孔两侧的电极产生稳定的电流；稀释液通过小孔的管壁上固有的小孔（直径一般<100μm.厚度为75μm左右）向小孔内部流动。此时，小孔周围充满了具有导电性的液体，其电子脉冲是稳定的。如果供给电流I和阻抗R是稳定的，根据欧姆定律通过小孔的电压V是不变的（这时V=IR）。当有细胞通过小孔时，由于细胞的导电性质比稀释液要低，在电路中小孔感应区内的电阻的增加，于是瞬间引起了电压变化而出现一个脉冲信号。电压增加的变化的程度取决于非传导的细胞占据小孔感应区的体积，即细胞体积越大，引起的脉冲越高，产生的脉冲振幅越高，测定脉冲的大小即可测出细胞体积大小，记录脉冲的数量就可测定细胞的数量。。脉冲信号经过下列步骤，得出细胞计数结果。

（1）信号发生器：通过小孔的各种血细胞都能产生电阻信号，信号电平的高低与细胞的大小成正比。

（2）放大：由于血细胞通过微孔时产生的脉冲讯号非常微弱，不能直接触发计数电路，因此必须通过电子放大器，将微伏讯号放大为伏级脉冲讯号。

（3）阈值调节：在计数不同细胞时，应调节阈值电平，以给出合适的阈值度，使计数结果尽量符合实际水平。

（4）甄别：通过微孔时的各种微粒（血细胞、细胞碎片、杂质等）均可产生相应脉冲讯号，讯号电平（脉冲幅度）与微粒大小成正比。因除血细胞外，血中细胞外，血中细胞碎片、稀释液中杂质微粒均可产生假讯号，使计数结果偏高。所谓甄别就是利用甄别器根据阈值调节器提供的参考电平，将低于参考电平的假讯号去掉，以提高细胞计数的准确性。

（5）整形器：经过放大和甄别后的细胞脉冲讯号波形尚不一致必须经过整形器作用，修整为形伏一致标准的平顶波后，才能触发电路。

（6）计数：血细胞的脉冲信号，经过放大、甄别、整形后，送入计数系统；仪器对大小不同的脉冲进行选择，区分出不同类型的细胞并分别进行计数。

2、白细胞计数和分类计数原理：白细胞总数计数根据电阻抗的原理，不同体积的白细胞通过小孔时产生的脉冲大小有明显的差异，依据这些脉冲的大小，可对白细胞进行计数。

白细胞五分类计数是经过溶血剂处理后的白细胞可以保持形态不变，利用鞘流技术使细胞成单列逐个通过激光鞘流池，采用先进可靠的多角度激光散射技术对白细胞进行分类，前向小角获得细胞大小信息，前向大角获得细胞核结构和复杂程度信息，侧向角获得细胞内颗粒状况和复杂性信息，经日本光电专业软件分析出的3D成像信息和清晰的细胞分类组群进行分类并显示出散射

图，具体把白细胞分为淋巴（LY%），单核（MO%）嗜中性粒细胞（NE%），嗜酸性粒细胞（EO%）嗜碱性粒细胞（BA%）。。

3、红细胞数和血细胞比容测定：血液分析仪使用电阻抗法进行红细胞计数和红细胞比积测定，其原理同白细胞一样。红细胞通过小孔时，形成的相应的脉冲的多少即红细胞的数目，脉冲的高度代表单个脉冲细胞的体积。脉冲高度叠加经换算即可得到红细胞的比容。稀释的血液进入红细胞检测通道时，其中含有白细胞，因此，红细胞检测的各项参数均含有白细胞因素，但正常血液有形成分中白细胞比例很少约为500：1-700：1，故其影响可忽略不计，但在病理情况下，如白血病，白细胞数明显增加而又伴严重贫血时，即可使所得各项参数产生明显误差。血细胞比容，通常用红细胞平均体积（MCV）与红细胞相乘得出红细胞比积HCT=MCV×RBC。

4、血红蛋白测定：当稀释的血液加入溶血剂后，红细胞溶解并释放血红蛋白，Hb与溶血剂中的某些成分结合形成血红蛋白衍生物，进入血红蛋白测试系统，在特定波长（540nm）下比色；吸光度的变化与液体中Hb含量成比例，仪器便可显示HGB浓度。

5、红细胞其他参数的检测：红细胞平均值，如红细胞平均体积（MCV）、平均红细胞血红蛋白量（MCH）、平均红细胞血红蛋白浓度（MCHC）、均是根据仪器检测导出（MCV），或由检测的红细胞数和血红蛋白含量的检测数据，经计算得到，MCH=HGB÷RBC MCHC=HGB÷HCT HCT=MCV×RBC。红细胞体积分布宽度（RDW）则是由血液分析仪测量细胞体积后获得的，是反映外周血红细胞体积异质性的参数，即反映红细胞大小不等的客观指标。当红细胞通进小孔的一瞬间，计数电路得到一个相应的大小的脉冲，脉冲的高度是由细胞体积大小决定的，不同大小的脉冲的信号分别贮存在仪器内装计算机

的不同通道内，计算出相应的体积及细胞数后，统计处理而得RDW 值。由于RDW 来自十几秒内近万个红细胞的检测数据，不但可以克服测量红细胞直径时人为制片因素和主观因素等影响。

6、电阻抗法血小板检测原理血小板（platelet, PLT）随红细胞一起在一个系统中进行检测，当各种细胞引起电阻变化，产生的脉冲经数字化后，根据不同的阈值，计算机分别给出血小板和红细胞数目。血小板分别储存于256个通道，直方图范围在2-28fl，。血小板平均体积（mean platelet volume, MPV）就是PLT体积分布的直方图的产物。

二、样本收集

生化检验标本的采集规则

1. 目的

规范生化检验标本的采集方法，减少分析前因素对检验结果的影响，保证检验质量。

2. 范围

适用于各种临床生化标本来集。临床标本包括血液，尿液、胸腹水等各种体液等。

3. 职责

3．1 门诊和临床各科护士、门诊检验人员负责标本的采集。

3．2 护工或其他经过相应培训人员负责标本的转运。

3．3 检验科负责标本的接收和处理，负责指导临床各科和病人如何正确采集标本。

1、静脉血：用注射器将血液收集在有抗凝剂K2EDTA（0.07mol/ml血）

的度管；停留15分钟进行分析标本采集后应8小时内进行分析。注意：8小时内进行分析！

2、毛细血管血：使用微量吸管收集手指10或20μl，并立即放入2ml的

稀释液中混匀。60分钟内进行分析分析。

三、操作流程

（一）准备开机检查。

1.试剂是否充足，废液桶是否倒空。

2.管道连接良好，打印机有足够的打印纸。

3.电源电压正常。

（二）开机。

1.打开后面板上的开关，前面板主电源灯亮；

2.按前面板电源开关，电源灯亮。仪器自动完成清洗管道，充液和电路自检。如无故障，屏幕上显示下列信息：灌注——排空——检查溶血剂——检查稀释液——检查清洗液——灌注

3.完成灌注操作后显示准备信息，仪器可用于计数。

4.按计数键，计数空白。（不需要通过吸样管稀释液）屏幕上显示结果；确定

测定数据。低于或等于以下数值：WBC：≤0.2，RBC：≤0.05，HGB≤：

1.0，PLT：≤10；TOC≤100；如超过数值，重复此步骤。

（三）操作：

A测定静脉血样本

1.在含有EDTA-2K抗凝剂的采血瓶中采集2ml全血（不能使用其它抗凝剂，

采血量适采血管定），轻轻地上下颠倒管子30次以上进行混匀（不能剧烈混匀，否则将产生气泡和引起溶血）。

2.检查仪器设置在静脉血模式；（即仪器前面板上毛细血管血模式灯未

亮）

3.证实屏幕显示的ID编号。吸样管伸入已混匀的采血瓶底部，使吸样针

尖轻触到采血瓶底部；

4.按仪器前面板上计数键，完成标本吸样和计数；计数过程中屏幕显示“正在计

数”信息；计数后，结果被储存，屏幕上显示直方图。当设置自动打印时，右侧打印灯亮，结果将自动打印；否则，按右侧打印机，手动打印结果；

B测定毛细血管样本

1.在设置屏幕模式上选择毛细血管血体积（10或20μl）装机时工程师已设置；

（详见说明书第三章）

2.证实屏幕显示的ID编号，修改 ID编号参见说明书第三章；

3.按仪器前面板上“毛细血管模式”键，检查毛细血管模式灯亮，显示“毛细

血管模式”屏幕；

4.将样本杯倾斜，使吸样针进入样本杯内，按放液键。将2ml稀释液放入样本杯

内；（当需要制多份液稀释液时，重复此步骤即可）

5.用微量毛细血管吸取10或20μl末梢血置于样品管瓶盖，轻轻颠倒样品

管，混匀10次以上；

6.检查毛细血管血模式灯已亮，将吸样管伸入样品管底部，使吸样针尖轻

触管底；

7.按仪器前面板上计数健，完成样本吸样和计数。计数过程中屏幕显示“正在计

数”信息，计数后，结果被储存和记忆，屏幕上显示直方图，同时测定模式毛

细血管血改变为静脉血模式（即毛细血管血模式灯灭）；若长期采用毛细血管

血模式，需在设置模式中设置，详见说明书第三章；否则重复第3步，打印

结果同静脉血模式一样。

（四）关机。

关机：按仪器前面板上的电源开关，关闭电源，仪器自动完成清洗后关闭电源。

按仪器后面板上的主电源开关，关闭电源，检查主电源指示灯熄灭。

四、仪器的校准

1、仅在必需时校准，在校准前保证校准品和仪器没有问题

仪器出现下述情况时应重新校准仪器：

1.新装机时

2. 连续三次分析两个试管中任何参数的平均值超出设定的范围时2、校准步骤

首先对仪器进行大清冼。单一计数PLT<10、空白WBC、RBC均为“0”，TOC≤100，无错误代码提示

(1)进入校准菜单。选择全血校准模式。

(2)连续测定5次校准物。打印出报告单. 注意：测试前应充分混匀全

血校准品，并确保加样（20微升）准确无误！

(3)在5个测试结果中,选取3个最相近的数报,求取项目的平均值.

(4)按[菜单]键返回到主菜单,再次进入校准菜单。

(5)将各处项目的平均值输入校准菜单中的相应项目上.

退出菜单, 再次测定校准品；符合要求即可，即完成全血校准工作.

注:预稀释血的校准同全血校准步骤相同,但应进入预稀释血校准菜单,同时确保加样（20微升）准确无误！

五、仪器的保养

1、每天用完仪器后。

应执行关机程序,按关机键,仪器开始自动清洗仪器,时间约2分钟,清洗完成后,再关闭左后方电源开关,如果每天测试量大于50个样本,应在50个样本完成后,执行一次清冼程序.

2、大保养每月一次

(1)将稀释管\清洗液管移入约1000ml的10%次氯酸钠溶液清洗一

次后测量2次。

(2)当第2次测屏幕上显示测试结果时,马上按停止键

(3)让仪器保持此状态30分钟

(4)重新把稀释液管液移入稀释液中，把清洗液管移入到清洗液

(5)清洗仪器3次，进行5次空白计数。低于或等于以下数值：WBC：

≤0.2，RBC：≤0.05，HGB≤：1.0，PLT：≤10；TOC≤100

适用日本光电MEK-7222 试剂

名称规格

稀释液20L

溶血剂610 500ml

溶血剂910 500ml

冲洗液520 5.0L

强力清洗液620 5.0L

沈阳世华东科商贸有限公司024-********

室内质控的实际操作

设定靶值：

各实验室应对新批号的质控品的各个测定项目自行确定靶值。

使用现行的测定方法。

定值质控品的标定值只能做为确定靶值的参考。

（一般应使用稳定性较长的质控品

暂定靶值的设定

新批号的质控品与当前使用的质控品一起进行测定。

根据20或更多独立批获得的至少20次质控测定结果，计算出平均数，作为暂定靶值，作为下一个月室内质控图的靶值

以上暂定靶值作为下一个月室内质控图的靶值进行室内质控；

一个月结束后，将该月的在控结果与前20个质控测定结果汇集在一起，计算累积平均数（第一个月），以此累积的平均数做为下一个月质控图的靶值。

重复上述操作过程，连续三至五个月。

常用靶值的设立

设定控制限控制限通常以标准差倍数表示。

暂定标准差的设定：同暂定靶值的设定。

常用标准差的设定：同常用靶值的设定。

对于标准差，使用的数据量越大，其标准差估计值将更好。

稳定性较差的质控品

对于不是每天开展的项目、检测次数较少或有效期较短的项目可先作“即刻法”质控（Crubbs氏法）进行，待累积达20次数据后进行常规控制。

采用Crubbs氏法，只需连续测定3次，即可对第3次检验结果进行检验和控制

Crubbs氏法具体计算方法

计算出测定结果（至少3次）的平均值（x）和标准差（s）。

计算SI上限值和SI下限值：

将SI上限、SI下限与SI值表（表）中的数字比较。

（1）当SI上限和SI下限

（2）当SI上限和SI下限有一值处于n2s~n3s值之间时说明该值在2s3s 范围，处于“告警”状态

（3）当SI上限和SI下限有一值> n3s值时说明该值已在3s范围之外，属“失控”。数值处于“告警”和“失控”状态应舍去，需重新测定该质控血清和病人样品。舍去的只是失控的这次数值，其它测定值仍可继续使用。

质控规则

WESTGARD规则：目前我们所用新和质控系统中所有定量检测全部用此规则。

免疫ELISA法用S/CO值。

使用以下规则，一般可使误差率控制在2%以内。

2S：为警告规则，提示有一水平质控值超出±2S，发出警告，由随机或系统误差引起。

13S：失控规则，提示有一水平质控值超出±3S，提示随机误差或系统误差增大造成的失控

22S：失控规则，是系统误差，有二种表现①同一个水平的质控品连续2次控制值同方向超出+2S或-2S限值；②在1批检测中，2个水平的质控值同方向超出+2S或-2S限值。

R4S：失控规则，提示随机误差增大造成的失控。

①同一个水平的质控品连续2次质控值一正一负SD值相距超过4SD的情况。

（如：②在同1批检测中，两个水平质控值一正一负SD值相距超过4SD的情况。

1个水平质控品的控制值超出+2S限值，另1个水平控制品超出-2S限值）

41S：失控规则，有连续4次的控制值超出+1S或-1S限值，是系统误差。

①1个水平控制品连续4次控制值超出+1S或-1S限值；

②2个水平控制品连续2次控制值同方向超出+1S或-1S限值。

7 X：失控规则，有连续7次控制值在均数的一侧，是系统误差，连续7次质控值在均值的一侧。

7 T：失控规则，提示趋势性变化，属系统误引起。质控值出现连续七次逐渐减低或升高的趋势。

失控判断流水线：

(用12S警告规则启动）

失控情况处理

首先要尽量查明导致的原因，然后再随机挑选出一定比例（例如5%或10%）的患者标本进行重新测定，最后根据既定标准判断先前测定结果是否可接受，对失控做出恰当的判断。

对判断为真失控的情况，应该在重做质控结果在控以后，对相应的所有失控患者标本进行重新测定。如失控信号被判断为假失控时，常规测定报告可以按原先测定结果发出，不必重做。

失控原因分析

操作上的失误

试剂、校准物失效

质控品的失效

仪器维护不良

采用的质控规则、控制限范围

偶然因素等等。

失控原因查找步骤

先回顾整个过程，思考会有哪个环节出现问题，然后作出相应初步处理。如未找到明显问题再如下操作。

重测同一质控品。此步是主要是用以查明人为误差，每一步都认真仔细得操作，以查明失控的原因；另外，这一步还可以查出偶然误差，如是偶然误差，则重测的结果应在允许范围内（在控）。如果重测结果仍不在允许范围，则可以进行下步操作

进行仪器维护，重测失控项目。检查仪器状态，查明光源是否需要更换，比色杯是否需要清洗或更换？对仪器进行清洗等维护。另外还要检查试剂，此时可更换试剂以查明原因。如果结果仍不在允许范围，则进行下一步。

重新校准，重测失控项目。用新的校准液校准仪器，排除校准液的原因。

请专家帮助。如果前五步都未能得到在控结果，那可能是仪器或试剂的原因，只有和仪器或试剂厂家联系请求他们的技术支援了。

OCV的概念

表示本实验室在目前最佳条件下某项目所能达到的最好精密度水平。

其基本原则是，OCV测定需采用与常规工作相同的试剂、仪器及检测方法。实验室都用OCV测定来确定本室新开展的一项新项目的精密度，如果数值偏大，则说明该测定方法可能不稳定，不成熟，应该尽量避免在本实验室使用该方法。

RCV的概念

表示本实验室在目前条件下，常规工作中某项目检验的精密度水平。

是室内质控中靶值和允许误差范围确定的依据。每更换一次质控血清批号后，均应对新质控血清进行RCV测定。

一般实验室的质控工作都是以RCV为标准的。

尿液室内质控判断规则

半定量质控。

阴阳性判断错误或超出正负一个量级为失控。

每月室内质控数据统计处理

（1）当月每个测定项目原始质控数据的平均数、标准差和变异系数。

（2）当月每个测定项目除外失控数据后的平均数、标准差和变异系数。（3）当月及以前每个测定项目所有质控数据的累积平均数、标准差和变异系数。

每月室内质控数据的保存

（1）当月所有项目原始质控数据。

（2）当月所有项目质控数据的质控图。

（3）所有计算的数据(包括平均数、标准差、变异系数及累积的平均数、标准差、变异系数等)。

（4）当月的失控报告单（包括违背哪一项失控规则，失控原因，采取的纠正措施）。

每月上报的质控数据图表

每个月的月末，将当月的所有质控数据汇总整理后，应将以下汇总表上报实验室负责人：

（1）当月所有测定项目质控数据汇总表。

（2）所有测定项目该月的失控情况汇总表。

室内质控数据的周期性评价

每个月的月末，都要对当月室内质控数据的平均数、标准差、变异系数及累积平均数、标准差、变异系数进行评价，查看与以往各月的平均数之间、标准差之间、变异系数之间是否有明显不同。如果发现有显著性的变异，就要对质控图的均值、标准差进行修改，并要对质控方法重新进行设计。

在质控评价中记录每月质控过程中出现的问题情况。如出现趋势性、定向变化的原因分析、更换主要检测元件、进行了重要的保养措施等。

. 目的1

规范生化组质控品和校准品的采购、运输、验收、使用和保管程序，以保证其量值准确和可溯源性，从而保证检验结果准确可靠。

2. 范围

适用于生化组生化分析仪、血气分析仪、电泳分析仪等系列仪器所用的质控品和校准品。

3. 职责

3．1 生化组组长负责本组质控品和校准品的请购，科主任负责请购单的审批，设备部负责统一采购。

3．2 生化组试剂管理员负责质控品、校准品的验收和保存。

4. 工作程序

4．1 质控品和校准品的请购和验收

4．1．1 生化组长根据本组所需质控品和校准品，按《服务及供用品的采购管理

程序》进行申购。

4．1．2 校淮品必须使用仪器设备配套或仪器生产商指定的产品，并能溯源到国

家或国际标准；仪器若无配套的校准品，则可应用试剂盒配套的校准品(或标准

品)，但必须有FDA 或SFDA 批准文号。

4．1．3 质控品最好使用仪器配套或仪器生产商指定的产品，并能溯源到国家或

国际标准；仪器若无配套的质控品，则可采用国际或国内公认的质控品，但必须

有FDA 或SFDA 批准文号。

4．1．4 由卫生部临床检验中心或其他单位组织发放的室间质评质控样品由组长

负责按照要求妥善保管，并按卫生部临床检验中心规定日期检测、填写报表，经

检验科质量负责人审批后寄出，原始资料由组长保管。

4．1．5 对采购来的质控品、校准品或室间质评质控样品在进行验收时，应注意

其运送是否符合要求、外包装是否完好、物品是否损坏、使用说明书、保存条件

以及其有效期是否满足相关要求。若存在疑问，需要及时处理，并做出相应的记

录。在接收室间质评质控样品时，还应注意其建议的测定日期。

4．2 标准品和质控品按规定要求存储，并记录保存的环境条件，保证在有效期内使用。如发现过期、失效时，必须及时清理，以防止误用。标准品和质控品的报废和退货同试剂的处理程序。

5.支持性文件

《服务及供应品的采购管理程序》

《设施和环境的管理程序》

6. 质量1 己录

见上述支持性文件相应记录

批准人质量负责人编写人

临检组的职责

规范临检组组长的职责范围，保证本专业组的各项工作按照既定的质量体系

正常运行。

2. 范围

适用于临检专业组。

3 .职责

3．1临检组组长为本专业实验室的学科带头人，在科主任领导下，负责本专业的全面质量管理，科研、教学和部分行政管理工作。

3．2 负责本组人员的工作安排、业务学习、继续教育和技术考核等工作，规划及落实本专业的发展计划，负责组织编写本组的标准操作规程(SOP)，经常检查执行情况。

3．3 负责制定本专业的室内质量控制方案，每日检查各检验项目的室内质控状态，分析质控数据，对失控项目提出纠正办法，填写月质控报告。

3．4 积极参加各临床检验中心组织的室间质量评价活动，审查签发室间质评回报表，分析质评成绩，提出改进措施，填写室间质评总结报告。

3．5 亲自参加检验工作并掌握特殊检验技术，解决本专业的复杂疑难问题。

3．6 经常深入临床科室征询对检验质量的意见，介绍新的检验项目及临床意义，

有条件时参加临床疑难病例讨论，主动配合临床医疗工作。

3．7 结合临床医疗，制定本专业的科研计划，并不断引进国内外的新成果、新技术、新方法，开展新项目，提高本专业的技术水平。

3．8 检查督促本组检验人员贯彻执行各项规章制度的情况，进行考勤考绩、人员安排。3．9 负责本专业仪器设备和各种设施的管理；负责制定本专业试剂和实验用品的请购计划，负责本专业范围内试剂和低耗品的保管。

3．10 专业组长外出前，应向科主任提出申请，临时指定人员负责代理。

及时监测和有效控制生化组的环境条件，保障生化检验工作顺利开展，确保

检测结果准确可靠。

2. 范围

临检组环境温度与湿度，试剂与标本冰箱温度，等。

3.环境监测程序

3．1 环境条件：室内温度、湿度，每天一次，上午记录。

3．2 恒温设备：普通冷藏、冷冻冰箱温度，每天一次，上午记录。

4 .环境失控处理程序

4．1 记录人员发现环境温度与温度失控时，及时通知组长协助解决。

4．2 冰箱温度超出规定要求时，首先将标本或试剂取出，放入符合温度要求的其他冰箱内，然后对失控原因进行分析，一般可按以下程序进行分析：温度计是否准确，冰箱门是否关严，电源是否有故障，制冷剂是否过少，压缩机工作是否正常等，针对上述失控原因及时进行处理。

4．3 不能解决时应及时通知设备科，与有关厂商联系解决。

4．4 及时填写失控报告，记录处理过程。

5.支持性文件

LAB—PF—016《设施和环境的管理程序》

6.质量记录

LAB—PF—016—05《室内温度湿度记录表》