蟾蜍坐骨神经干标本的制备

蟾蜍坐骨神经干标本的制备

121140066 许克波 B3

一、实验目的

1、离体标本实验（与在体标本实验的区别）

2、掌握锌铜弓导致生物电产生的原理

3、掌握离体标本的制备及手术训练

4、掌握剪刀的技用和双毁髓的意义

二、实验原理

1、锌铜弓的作用及原理

锌铜弓：在生理学实验中，锌铜弓是检验标本机能活性最常用而简易的刺激器。由铜片和锌片两种金属制成。锌铜弓具有刺激作用，是因为金属与溶液之间产生电位差，即电极电位。

通常将金属浸入电解质溶液中，如Zn便溶解而成Zn离子。而在Zn的里面则形成负离子。Cu在溶液中则相反，金属与溶液之间便产生了电位差——电极电位。如果将Zn和Cu一端接触，则在接触部位电流由Cu向Zn方向流动；而在溶液中则相反，由Zn向Cu流动。当锌铜弓接触组织时（注意：表面必须湿润），电流便沿Zn→可兴奋组织→Cu方向流动，而产生流动作用。这样，锌铜弓好像一个电池，Zn如同其阳极，Cu好像阴极而发挥作用。神经或肌肉的电刺激阈值非常小，所以仅用锌铜弓接触，即可构成刺激，以便检验组织的机能活性。

2、蟾蜍的毁髓及单毁髓和双毁髓及双毁髓的意义

蟾蜍破坏脑脊髓：取蟾蜍一只，用自来水冲洗干净。右手握住蟾蜍，用食指压住头部前端使头前俯，中指、无名指捏住两前腿，无名指以及小指捏住两后腿，左手持针，当触及到两耳中间的凹陷处时，持针手即感觉针尖下陷，此处即是枕骨大孔的位置。左手持针从枕骨大孔向前刺入颅腔，左右搅动捣毁脑组织，然后将刺蛙针退到枕骨大孔，不拔出而是将其尖转向后插入脊柱管中捣毁脊髓，插入椎管时，蟾蜍后肢立即失去紧张性，多数情况出现尿失禁。若脑脊髓破坏完全，可见蟾蜍四肢松弛，呼吸消失。

单毁髓：如毁髓针确在颅腔内，实验者可感到针尖触及颅骨。

双毁髓：再将毁髓针退至枕骨大孔，针尖转向后方，与脊柱平行刺入椎管，以捣毁脊髓。彻底捣毁脊髓时，可看到动物的后肢突然蹬直，而后瘫软如棉。双毁髓的意义：这个实验主要是探讨神经纤维冲动产生、兴奋传递和肌肉收缩之间的关系，与神经中枢无关。为了制备这个标本需要首先处死青蛙，双毁髓的意义就在于此，这种双毁髓的处死方法，简单易行，关键是相对比较人道。

3、坐骨神经干标本的制备和缝匠肌神经标本制备

坐骨神经干标本的制备：蟾蜍下肢背面向上置于蛙板上，剪去尾椎；标本腹面向上，用玻璃分针分离脊柱两侧神经丛，用线在近脊柱处结扎，剪断神经；将神经干从腹面移向背面。标本背面向上固定，从大腿至跟腱分离坐骨神经。坐骨神经标本置任氏液中备用。

三、实验器材及动物

蟾蜍、解剖器材、棉线、锌铜弓等。

四、实验结果

游离出来的蟾蜍坐骨神经干：

五、注意事项

（1）、避免蟾蜍体表毒液和血液污染标本，不可用金属器械触碰神经干。（2）、在操作过程中，应防止标本表面干燥，用水或任氏液润湿，以免影响标本的兴奋性。

（3）、标本制成后放在任氏液中浸泡数分钟,使标本兴奋性稳定,再开始实验效果会较好。

（3）、锌铜弓使用前应适当润湿，但锌、铜两极不可直接或间接接触，形成闭合回路。

坐骨神经

坐骨神经的“根性卡压”与“干性卡压” 西安市周至县丰融医院 包小清编 坐骨神经痛是以坐骨神经径路及分布区域疼痛为主的综合征。坐骨神经痛的绝大多数病例是继发于坐骨神经局部及周围结构的病变对坐骨神经的刺激压迫与损害，称为继发坐骨神经痛；少数系原发性，即坐骨神经炎。 坐骨神经由腰L4、L5~骶S1-S3组成。经骨盆的骶髂关节前面斜着往外下方行走，出梨状肌下孔，在臀大肌深面，坐骨结节和大转子之间至大腿后面下降，至腘窝上角分为胫神经和腓总神经，腓总神经又分为腓浅神经和腓深神经。按病损部位分“根性”和“干性”坐骨神经痛两种，“根性”多见与坐骨神经痛病变位于椎管内，以腰L4、L5椎间盘突出多见，（椎管内肿瘤、腰椎结核、腰骶神经根炎等）。“干性”坐骨神经痛的病变主要是在椎管外坐骨神经行程上，病因有骶髂关节炎，及骶髂关节错位（盆腔内肿瘤、妊娠子宫压迫）臀部外伤及梨状肌综合症。 腰L4、L5椎间盘突出是导致坐骨神经的“根性卡压”主要原因。 腰椎间盘突出是指腰椎间盘纤维 环破裂、刺激或压迫邻近的脊神经根 所产生的症状。 疼痛常自腰部向一侧臀部、大腿 后，腘窝、小腿外侧及足部放射，呈 烧灼样或刀割样疼痛，咳嗽及用力的 疼痛可加剧。为避免坐骨神经牵拉、 受压，患者常取特殊的减痛姿势，如 睡时卧向健侧，屈髋、屈膝。同时脊 椎旁可有压痛和放射性疼痛，患肢小腿外侧和足背常有麻木及感觉减退。臀肌张力松弛，伸拇及屈拇肌力减弱。跟腱反射减弱或消失。严重者脊柱生理弯曲改变，并有侧弯，生理前凸度变小或消失，直腿抬高试验和加强实验阳性，影像显示腰椎间盘突出。 梨状肌综合症是导致坐骨神经“干性卡压”的常见病。 梨状肌综合症是指，坐骨神经从梨状肌肌腹中穿出或，腓总神经高位分支，自梨状肌肌束间穿出。当梨状肌受到损伤，发生充血、水肿、痉挛、粘连和挛缩时，该肌间隙或该肌上、

实验十人类染色体g显带技术及g带核型分析

实验十人类染色体G显带技术及G带核型分析 实验目的 1、初步掌握染色体G带标本的制备技术。 2、了解人类染色体的G显带的带型特征。 实验用品 1、材料：常规方法制备的中期人类染色体标本（标本片龄不超过30天为宜）。 2、器材：显微镜、恒温培养箱、烤箱、恒温水浴箱、冰箱、染色缸、小镊子、玻片架、香柏油、二甲苯、擦镜纸、吸水纸。 3、试剂：％胰蛋白酶溶液、％EDTA溶液、胰蛋白酶一EDTA混合液、％生理盐水、蒸馏水、Giemsa原液、Giemsa稀释液、1／15mol ／L磷酸缓冲液。 实验原理 人们将用各种不同的方法，以及用不同的染料处理染色体标本后，使每条染色体上出现明暗相间，或深浅不同带纹的技术称为显带技术（banding technique）。本世纪70年代以来，显带技术得到了很大发展，且在众多的显带技术中（Q带、G带、C带、R带、T带），G带是目前被广泛应用的一种带型。因为它主要是被Giemsa染料染色后而显带，故称之为G显带技术，其所显示的带纹分布在整个染色体上。 研究发现，人染色体标本经胰蛋白酶、Na0H、柠檬酸盐或尿素等试剂处理后，再用Giemsa 染色，可使每条染色体上显示出深浅交替的横纹，这就是染色体的G带。每条染色体都有其较为恒定的带纹特征，所以G显带后，可以较为准确的识别每条染色体，并可发现染色体上较细微的结构畸变。关于G显带的机理目前有多种说法，例如，Lee等（1973）认为染色体上与DNA结合疏松的组蛋白易被胰蛋白酶分解掉，染色后这些区段成为浅带，而那些组蛋白和DNA结合牢固的区段可被染成深带。有人认为，染色体显带现象是染色体本身存在着带的结构。比如用相差显微镜观察未染色的染色体时，就能直接观察到带的存在。用特殊方法处理后，再用染料染色，则带更加清楚，随显带方法不同，显出来的带特点也不一样，说明带的出现又与染料特异结合有关。一般认为，易着色的阳性带为含有AT多的染色体节段，相反，含GC多的染色体段则不易着色。总的来说，G显带的机理还未搞清。 内容与方法 一、人类染色体G显带标本制备 1、胰蛋白酶法 ①将常规制备的人染色体玻片标本（未染色的白片）置70℃烤箱中处理2小时，然后转入37℃培养箱中备用，一般在第3～7天进行显带。 ②取％的胰蛋白酶原液加生理盐水至50ml，配成％的工作液并用NaHCO3调pH值至7左右。 ③将配好的胰蛋白酶工作液放入37℃水浴箱中预热。 ④将玻片标本浸入胰蛋白酶中，不断摆动使胰蛋白酶的作用均匀，处理1～2分钟（精确的时间自行摸索）。 ⑤立即取出玻片，放入生理盐水中漂洗两次。 ⑥染色。将标本浸入37℃预温的Giemsa染液（1:10的Giemsa原液和的磷酸缓冲液）

蟾蜍坐骨神经干动作电位传导速度和兴奋性不应期的测定实验报告

实验二蟾蜍坐骨神经干动作电位传导速度和兴奋性不应期的测定 一、蟾蜍坐骨神经干动作电位引导及传导速度测定 实验目的：加强理解兴奋传导的概念，掌握测定神经干动作电位传导速度的方法。 熟悉仪器设备的操作。 实验原理：通过测出示波器上动作电位传导的距离和传导所需的时间，计算传导速度，可以了解神经的兴奋状态。 1.潜伏期法：测量第一个通道动作电位潜伏期的时间t，输入刺激电极到第一个引导电极间的距离s，v=s/t。 2.潜峰法：测量两个通道的动作电位波峰间的时间差和两对引导电极间的距离，v=(s2-s1)/(t2-t1)。 实验步骤：1.制备坐骨神经-腓神经标本，放入神经屏蔽盒。 2.连接仪器，引导动作电位波形。 3.剪裁编辑图形，计算传导速度。 实验结果：1.（见图） 2.计算 S=10mm,t=0.33ms,v=10mm/0.33ms=33m/s 分析讨论： 1.我们通过对潜伏期法和潜峰法测定结果的比较，结合神经干的特性进行分析：动作电位的起点本质是神经干中传导速度最快的一类神经纤维传导兴奋到达记录点引起的，潜伏期法测量的速度本质是此类神经纤维的传导速度。而潜峰法的形成本质是各种神经纤维兴奋相互叠加后最强的部分。如果采用潜峰法

测量，由于“迁延效应”代表的时间不够准确，不能代表神经干的传导速度，故应该采用潜伏期测量才更准确。 2,.兴奋以局部电流的方式沿着神经干表面传导,兴奋传播过程中造成引导电极下电位改变,故可记录到双相动作电位.通过两对引导电极可观察到兴奋由一对引导电极下传至另一对引导电极下所需时间,根据兴奋传播的距离和所需时间即可计算出传导速度. 实验结论：本实验中测出神经干动作电位的传导速度为33m/s。由实验可知，神经纤维在静息状态下受到有效刺激可产生动作电位，同一条神经干中不同的神经纤维兴奋性不完全相同，且在一次兴奋后兴奋性发生改变，兴奋以一定的速度在神经干表面传导，神经兴奋的传导依赖于神经纤维的完整性。 二、兴奋性不应期的测定 实验目的：了解测定不应期的方法和原理，并加深对兴奋性在兴奋过程中的变化过程的理解。 实验原理：神经纤维受到适宜刺激后，产生兴奋，即动作电位。一次兴奋产生后，必须经绝对不应期、相对不应期、超常期等变化后，兴奋性才能恢复。本实验中先给一个条件刺激，再用另一个检验刺激在兴奋的不同时期给予刺 激，检查神经对检验性刺激反应的兴奋阈值及所引起动作电位的幅度。即可观察到神经组织兴奋性的变化过程。 实验步骤： 1．制备坐骨神经-腓神经标本，并浸在任氏液中，待其兴奋性稳定后实验。 2.连接仪器，设置实验参数，观察并测量神经干的不应期。 实验结果：（见图） 分析讨论：

坐骨神经痛-鉴别诊断13页word

坐骨神经痛－鉴别诊断 坐骨神经痛--鉴别诊断之一 周围神经疾患(干性坐骨神经痛) ：创伤、卡压、缺血、肿瘤浸润或压迫、感染、炎症等均可累及神经引起疼痛, 麻痹、肌肉萎缩、感觉异常或反射改变、疼痛特征及物理检查有助于诊断, 并可结合神经电生理或影像学检查。 一、神经卡压：周围神经远端卡压可表现为无痛、进行性肌肉无力或以根性疼痛假象出现。Saal 等报道一组因下肢周围神经卡压引起腿痛但初诊时考虑为神经根损害的病例, 将其称为假性根痛综合征。经肌电图诊断, 根据病因分为股神经、隐神经、腓总神经或胫神经卡压。其中44 %的患者表现为阳性神经根牵拉征及脊柱 1、闭孔神经卡压：多由较大的闭孔疝引起, 表现为大腿内侧疼痛或感觉异常, 疼痛特征为因腹压升高或大腿后伸而加重, 可为两侧性。肌肉无力不常见, 可累及髋内收肌, 表现为两下肢交叉困难、站立不稳。应注意与高位腰椎间盘突出症鉴别, 后者也可表现为屈髋或大腿内收无力。当耻骨上支骨折时也可损伤闭孔神经。 2、隐神经卡压：表现为大腿内侧、小腿前内侧及足痛, 因行走及上坡而加重, 休息后可缓解。伸膝及大腿内收时于筋膜出口处(股骨内髁上方5～6 cm) 压迫隐神经可引起疼痛。有学者报道, 隐神经卡压时肌电图检查可无异常, 而诱发电位检查则更有价值。

3、股神经卡压：常见原因为髂腰肌损伤或血肿, 疼痛多位于腹股沟区、股前以及小腿内侧呈放射性,也可包括下腹部、阴囊及股内侧。如有髂窝部疼痛及压痛诊断并不困难。有时可与隐神经卡压混淆。此外还可有屈髋或伸膝无力致行走及上坡困难、股神经牵拉征阳性及Tinel 征阳性等表现。有时腹股沟疝也可引起股神经卡压。 4、髂腹股沟神经卡压：表现为腹股沟部疼痛, 易与高位腰椎间盘突出所致L1 或L2 神经根损害混淆。 5、髂腹下神经卡压表现为大腿上外侧疼痛。 6、股外侧皮神经卡压：表现为大腿前外侧疼痛及感觉异常, 长时间行走或站立引起,坐位减轻。感觉减退区位于大腿前外侧, 相当于裤袋位置。Tinel 征可为阳性。Edelson和Nathan 报道51 %成人在腹股沟下方股外侧皮神经形成膨大即假性神经节, 显微镜检查示结缔组织增厚, 而在胎儿未见此异常, 提示为获得性。常见原因包括肥胖、慢性咳嗽、长期佩戴围腰、裤子过紧等。应与股神经卡压或高位腰椎间盘突出症鉴别,肌电图检查有一定价值。保守治疗包括减肥及避免局部磨擦等。 7、坐骨神经卡压：可发生于坐骨神经行程中任一部位, 表现为屈膝或小腿、足肌无力, 临床表现为多神经根受累, 而椎间盘突出时多为单一神经根受累。多神经根受累常表现为不同神经支配的肌肉肌电图异常。坐骨神经卡压也可见于肌纤维化、肌筋膜束带以及腘窝囊肿。梨状

坐骨神经腓肠肌实验--教案

课程名称：坐骨神经腓肠肌实验教研室：生理学教研室任课教师：朱亮授课章节：细胞的基本功能授课专业和年级：医疗06级 授课学时：4学时授课时间： 坐骨神经腓肠肌实验 一、坐骨神经腓肠肌标本制备 【实验原理与目的】 蛙类的一些基本生命活动和生理功能与温血动物相似，而其离体组织所需的生活条件比较简单，易于控制和掌握。因此在实验中常用蟾蜍或蛙的坐骨神经腓肠肌标本来观察兴奋和兴奋性、刺激与肌肉收缩等基本生理现象和过程。所制备坐骨神经腓肠肌标本是生理学实验中必须掌握的一项基本技能。 本实验目的在于学习破坏蛙类脑脊髓法，掌握坐骨神经腓肠肌标本的制备技术、并获得兴奋性良好的标本，为以后有关实验打下基础。 【实验对象】 蛙或蟾蜍。 【实验器材和药品】 1．器械蛙类动物手术器械一套，包括普通剪刀、小手术剪刀、镊子、探针、锌铜弓、玻璃分针、蛙板、玻璃板、固定针等。 2．药品任氏液。 3．其它瓷盘、培养皿、小烧杯、棉花、棉线、纱布、滴管等。 【实验步骤和观察指标】 1.破坏脑和脊髓取蟾蜍一只，用布包裹蟾蜍四肢躯干露出头部，用左手握住蟾蜍，并用食指按压头部前端，拇指按压背部，使头部前俯；右手持金属探针由头前端沿中线向尾方划触、触及凹陷处即枕骨大孔的所在。将探针由凹陷处垂直刺入，刺破皮肤即入枕骨大孔，这时将探针尖端转向头方，向前探入颅腔内，然后向各方搅动探针，以捣毁脑组织。如探针确在颅腔内，术者可感觉出针在四面皆壁的腔内。脑组织捣毁后，将探针退出；再由枕骨大孔刺入，并转向尾方，与脊髓平行刺入脊管，以破坏脊髓。脑和脊髓是否完全破坏，可检查动物四肢肌肉的紧张性是否完全消失。拔出探针后，同一干棉球压迫针孔，以止其出血（见图3-1-1-1）。另一方法是去脑后再捣毁脊髓。

植物浸制标本的制作--实验指导.ppt

实验七植物浸渍标本的制作 植物浸制标本是将新鲜的植物材料，浸制保存在化学药品配制的溶液里，使其保持原有的形态结构及固有颜色的一种植物形态保存方法。植物浸制标本具有本色泽鲜艳,立体感强, 形态逼真等特点, 是植物分类和植物区系研究必不可少的科学依据，也是植物资源调查、开发利用和保护的重要资料。 一、实验目的 1、学习植物浸渍标本制作的基本原理。 2、学习植物浸渍标本的采集和制作方法。 二、实验设备与材料 1、主要设备与用具：天平、水浴锅、标本瓶（15cm*25cm）、大烧杯（用来煮绿色标本用）、量筒、载玻片（用来固定标本）、白线（固定标本用）、剪刀、玻棒、标签纸等。 2、药品与试剂：酒精、甲醛（或福尔马林）、醋酸铜（或硫酸铜）、冰醋酸、硼酸、亚硫酸、氯化钠、石蜡等。 3、植物材料：新鲜完整的草本植株；木本植物绿色叶枝（枝条长度取 25cm-30cm）；成熟的新鲜红色果蔬（如小番茄、樱桃、红枣、红色小萝卜等）；新鲜黄色果蔬（如姜、梨、金橘、黄番茄等）。每小组准备一种颜色的植物材料。 三、实验步骤 植物浸渍标本一般经过采集、制作、记载等一系列步骤来完成。 1、植物标本的采集 自然界植物种类繁多，采集标本要根据使用目的而定。 采集标本时应注意以下几点： ①必须采集完整的标本。被子植物尽量采到花、果和种子，草本植物要求尽量根、茎、叶、花、果实和种子采全。对一些有地下茎的种类，必须采集这些植物的地下部分，否则将难以鉴定。 ②雌雄异株的植物，应分别采集雌株和雄株。 ③乔木、灌木或特别高大的草本植物，只能采取其植物体的一部分。但必须注意采集该植物具有代表性的部分。 ④对寄生植物的采集，应注意连同寄主一起采下，并要分别注明。 ⑤采集标本的份数，一般要采2-3份，给以同一个编号。 ⑥采集标本时应注意爱护资源，特别是稀有植物。 ⑦必须认真做好野外记录。 主要内容包括植物的产地、生长环境、性状、花的颜色和采集日期等。2、标本的清理

生物实验报告-坐骨神经腓肠肌标本制备

坐骨神经腓肠肌标本的制备和神经干动作电位 的观察与传导速度的测定 一、实验目的： 1.学习蛙类动物双毁髓的实验方法。 2.学习并掌握坐骨神经-腓肠肌标本的制备方法。 3.观察蛙坐骨神经干复合动作电位的基本波形，并了解其产生的原理。 4.学习蛙和蟾蜍离体神经干上神经冲动传导速度的方法和原理。 二、实验材料： 1.实验对象：蟾蜍 2.实验器材：常规手术器械（粗剪刀、手术剪、眼科剪、手术镊、眼科镊）蛙板、蛙钉、探针、锌铜弓、玻璃分针、培养皿、任氏液、滴管、手术线、PC机、信号采集处理系统、神经屏蔽盒等。 三、实验原理： 神经干在受到有效刺激以后可以产生复合动作电位，标志着神经发生兴奋。如果在离体神经干的一段施加刺激，从另一端引导传来的神兴奋冲动，可以记录出双相电位，加入在引导的两个电极之间将神经干麻醉或损伤，阻断其兴奋传导能力，这时候记录出的动作电位就成为单相电位。神经细胞的动作电位是以全或无的方式产生的。但是，复合动作电位的幅值在一定刺激强度下是随刺激强度的增加而增大的。

如果在远离刺激点的不同距离处分别引导离体神经干动作电位，两引导点之间的距离为m，在两引导点分别引导出的动作电位的时相差为s。即可按照公式v=m/s来计算出兴奋的传导速度。蛙类的坐骨神经干属于混合性神经，其中包含有粗细不等的各种纤维，其直径一般为3-29um,其中直径最粗的有髓纤维为A类纤维，传导速度在正常室温下为35-40 m/s。 神经每兴奋一次极其在兴奋以后的回复过程中，其兴奋性都要经历一次周期性的变化，其全过程依次包括绝对不应期、相对不应期、超常期和低常期4个时期。为了测定坐骨神经在发生一次兴奋以后兴奋性所发生的周期性变化，首先要给神经施加一个条件性刺激引起神经兴奋，然后在前一兴奋及其恢复过程不同时相再施加一个测试性刺激，用于检查神经的兴奋阈值和所引起的动作电位的幅度，以判定神经兴奋性的变化。 四、实验方法及步骤： 1、坐骨神经干标本制备 （1）破坏脑与脊髓： 取蛙一只，用自来水冲洗干净，左手持蛙，用食指下压其吻部，拇指按压在其骶髂关节下方，使其头尽量前俯，右手持探针沿两眼之间中线向后方轻划，至触及头颈部正中的凹陷处，即为枕骨大孔的位置。用探针在凹陷处垂直刺入枕骨大孔，再将其针尖转向前刺入颅腔，左右搅动探针，彻底捣毁脑组织；然后缓慢地把探针退至枕骨大孔处，将其转向后方，与脊柱平行捻动探针使其刺入整个椎管，彻底捣毁脊

人体机能 蟾蜍坐骨神经干动作电位传导速度和兴奋性不应期的测定实验报告

神经干双向动作电位的引导传导速度及不应期的测定作者：2011222681宋利婷组员：2011222702曾惜2011222709张芮2011222698杨袁虹 一、实验对象：蟾蜍 二、实验目的：观察蟾蜍坐骨神经动作电位的基本波形，掌握坐骨神经制备方法与引导动作电位的方法，理解与刺激和最大刺激强度的概念测定潜伏期时程和波幅，学会通过潜伏期法和潜峰法测定神经冲动的传导速度，通过测定神经干不应期理解兴奋性在兴奋过程中的变化过程。 三、实验内容 图一：阈刺激和最大刺激强度的测定 由上图可知，以0.100v为起始刺激强度，在0.100到0.300v的刺激时，不产生动作电位，

逐渐增大强度，一直到当刺激强度为0.4V时，刚好引产生动作电位，即阈刺激为0.4V，当刺激强度达到1.4V后，即使再增加刺激强度，动作电位的幅也不再改变，即最大（适）刺激强度为1.4V. 图二：潜伏期波幅时程及速度的测定 由在最适刺激强度时动作电位原图上进行区间测量可知，潜伏期为0.60ms，时程t1为2.84ms ，波幅为2.72mV，输入刺激电极到第一个引导电极间距离s＝1.3cm,以传导速度和根据速度的公式计算传导速度v1=s/t1,求得的速度v1=45m/s 图三：潜峰法测量速度

如图是通过测量两个通道的动作电位波峰间的时间差，为（t1-t2）,测量并输入两对引导电极间的距离为（s2-s1），s2=4.7cm,s1=3.8cm,t1-t2=0.28ms,由传导速度和用公式计算传导速度：v2=(s2-s1)/(t1-t2),v2=321m/s 图四：绝对不应期和相对不应期的测定

脊椎动物浸制标本的制作

（二）脊椎动物浸制标本的制作 1．鱼类的浸制标本制作 （1）整理姿态：将新鲜的鱼用纱布包好，干燥致死。然后用清水将鱼体表的粘液冲洗干净（勿损伤鳞片）。用注射器从腹部向鱼体内注射10%的福尔马林溶液，以固定内脏，防止腐烂。然后，将鱼的背鳍、臀鳍和尾鳍展开，用纸板及曲别针加以固定。把整理好的标本侧卧于解剖盘内。鱼体向解剖盘一侧可适量放些棉花衬垫，特别是尾柄部要垫好，以防标本在固定时变形。 （2）防腐固定：加入10%的福尔马林溶液至浸没标本，作为临时固定，待鱼硬化后取出。 （3）装瓶保存：用适当大小的标本瓶（标本瓶要长于鱼体6cm 左右，以便贴上标签后仍能从瓶外看到标本全貌），将固定好的鱼类标本，头朝下放入。或根据标本瓶的内径和高度截一玻璃片，将标本用两条丝线分别从鳃盖骨后缘体侧和尾柄部穿入，缚扎在玻璃片上。用橡胶瓶塞或软木塞剔好小槽做成4个玻片固定脚，分别嵌在玻片两侧，将玻片和标本缓缓装入标本瓶内。最后，将10%福尔马林倒入瓶内至满，盖严瓶盖。 （4）贴标签：将注有科名、学名、中名、采集地、采集时间的标签贴于瓶口下方。标签贴好后，可在标签上用毛笔刷一层石蜡液，以防字迹褪色。 2．两栖、爬行类浸制标本制作：

（1）整理姿态：把活的蛙、蜥蜴、蛇、龟等动物放入大小适宜的标本缸或厚塑料袋内，用脱脂棉浸透乙醚或氯仿放入其中，盖严缸盖或封紧袋口，使动物麻醉。待致死后，立即进行整形，按它们生活的姿态，用大头针固定在蜡盘上。体形大的标本应事先在体内注射10%的福尔马林溶液。 （2）固定保存：与鱼类标本的固定保存方法相同。个体中等或较小的标本应头朝上绑于玻璃板上，再放入瓶中保存，使外形结构更易观察且展示性更强。 3．解剖标本的浸制制作：解剖标本的制作目的是观察内脏，应按解剖的一般方法除去体壁，以露出内脏。如要展示某一器官系统时，还须小心地除去不需要的部分，展示部分的各器官仍保持其自然位置，然后浸泡于10%福尔马林液中。如为标明各器官名称，可用打印好的名词签（或用铅笔书写），用水胶贴在各器官上，待粘牢晾干后，浸入保存液中即可。 （三）浸制标本长期保存时应注意的问题 1．某些新制作的浸制标本，经过一段时间，溶液会变黄或混浊，是动物体内的浸出物所造成。标本在浸泡1～3个月后，根据情况更换固定液2～3次，直到浸液不再发黄为止。 2．瓶口应密封，以防药液挥发。当标本不能全部淹没在保存液中时，应及时添加药液，否则露出部分会变干、变形，甚至发霉变质。

干制标本制作

干制标本制作 干制标本是指以干燥方法制成的标本，其优点是制做简单，勿须其它溶液或容器保存，但干制标本由于脱水容易收缩变形，且容易虫蛀霉变。现以昆虫成虫为例对干制标本加以说明。 （一）采集昆虫 1.使用工具 捕虫网：活泼的昆虫一般适宜用网来捕捉。所以采集昆虫必须要有捕网、扫网及水网。捕网通常用纹帐或白尼龙纱制成网圈，用粗铁丝制成环形，直径约30厘米左右，底袋呈圆锥形。网柄长约1米左右。扫网主要适于在草丛中捕捉昆虫。可用麻布或亚麻布制成，比捕网略小一些。网柄要短（长约一尺半左右）而粗，网要坚固。此外，扫网是网底开。水网和捕网大致相同，但是用细布制成，并且网比较浅，而网柄较长。 毒瓶：采集时，一般应带两个毒瓶，一个瓶毒杀蝴蝶及蛾类昆虫，另一瓶毒杀其它类的昆虫。毒瓶可用直筒形瓶制成，也可用广口瓶或平底试管等制成。毒杀剂可采用氰化钠或氰化钾等，也可用敌敌畏、氨水、乙醚等。 三角纸包：外出采集，采到昆虫不能立即做成标本，可先用三角纸包包好，编号记载后，带回驻地或学校制做。三角纸包的大小可由昆虫的大小决定。取较柔软难透水的纸一张折成三角袋。 采集箱：野外采集时，有些标本需要当时就进行针插，所以要有一个放标本的盒子。一般用保存针插标本的木标本盒就可以，另外也可以用轻的木料作成采集箱（见图7）。箱盖和箱底高度一样（约4厘米），都贴上软木板便于插标本。箱的大小关系不大，也可分为几格放其它物品，除针插标本外，可把纸三角袋和纸包标本放在箱内，以免压坏。 2.采集昆虫的方法 网捕：网捕主要用来捕捉会飞的昆虫，或停在植物上的昆虫。网捕的方法如下：当昆虫飞来，迎面用网捕捉，当虫子入网后，使网底向上甩，连虫子同网底一齐翻到上面来，然后再用手或试管伸入网内将虫子取出来。 扫捕：此法主要用在大片的草丛和茂密的灌木中。当采集者走到茂密的藏有虫子的草丛中时，用扫网在上面左右摆动，一面扫一面前进，将有许多小虫子集中到网底，或者被甩入网底，连接着胶管中。尤其在途中采集而时间仓促的时候，边扫边走也可以得到许多标本。 灯光诱集：夜间，灯下会有许多昆虫飞来，停在窗上，墙上，或绕灯而飞，所以在灯下常常能采到许多昆虫标本。方法如下：野外采集可以临时拉线挂一盏200瓦电灯或点一盏汽油灯，在灯的后面张开一块白布，下面用石头压住。这样可以诱来非常多的各种昆虫，最多的是大小不一的蛾类，它们多停在白布上。这时，只要多备几个毒瓶就可以大量收集昆虫。 （二）制作标本 1.标本制作前需要准备的工具

蟾蜍坐骨神经-腓肠肌标本的制备 坐骨神经干标本的制备、缝匠肌神经标本制备

实验六蟾蜍坐骨神经-腓肠肌标本的制备 坐骨神经干标本的制备、缝匠肌神经标本制备 一、实验目的 1、急性动物实验（与慢性动物实验的区别） 2、离体标本实验（与在体标本实验的区别） 3、掌握锌铜弓导致生物电产生的原理 4、掌握离体标本的制备及手术训练 5、掌握剪刀的技用和双毁髓的意义 二、实验原理 1、急性动物实验与慢性动物实验，在体实验与离体实验 急性动物实验可分为离体和在体实验两种方法。 离体实验：是从活着的或刚处死的动物身上取出所需要的器官、组织、细胞或细胞中的某些成分。置于一个能保持其正常功能活动的人工环境中，观察某些人为的干预因素对其功能活动的影响。例如，对离体蛙心或动物血管条进行灌流，可用于研究某些生物活性物质或药物对心肌或血管平滑肌收缩力的影响；应用膜片钳技术可研究细胞小片膜上单个离子通道的电流特性。 在体实验：是在动物麻醉条件下，手术暴露某些所需研究的部位，观察和记录某些生理功能在人为干预条件下的变化。例如，以动脉插管记录动物血压，可用于观察某些神经或体液因素对血压的影响；将玻璃微电极插入脑内某些部位进行细胞外或细胞内记录，观察神经元在接受某些刺激时放电活动的变化，以了解这些神经元的生理功能。急性动物实验的优点是实验条件比较简单，条件较易控制，便于进行直接的观察和细致的分析；离体实验则更能深入到细胞和分子水平，有助于揭示生命现象中最为本质的基本规律。但急性动物实验的结果可能与生理条件下完整机体的功能活动有所不同，尤其是离体实验的结果，此时被研究的对象，如器官、组织、细胞或细胞中的某些成分已经脱离整体，它们所处的环境已发生很大的改变，实验结果与在整体中的真实情况相比，可能会有很大的差异。慢性动物实验：慢性动物实验以完整、清醒的动物为研究对象，且尽可能保持外界环境接近于自然，以便能在较长时间内观察和记录某些生理功能的改变。实验前一般需对动物作某些预处理，待动物康复后再进行观察。例如，研究唾液的分泌调节时，可预先将唾液腺导管开口移至颊部体表，观察时就能方便地从体表收集到唾液腺分泌的纯净唾液；研究某种内分泌功能时，常先摘除动物某个内分泌腺，以便观察这种内分泌激素缺乏时以及人为替代后的生理功能改变，用以了解这种内分泌激素的生理作用。慢性动物实验适用于观察某一器官或组织在正常情况下的功能以及在整体中的作用地位，但不宜用来分析某一器官或组织细胞生理功能的详细机制。与急性动物实验相比，慢性动物实验的干扰因素较多，实验条件较难控制。 2、锌铜弓的作用及原理 锌铜弓：在生理学实验中，锌铜弓是检验标本机能活性最常用而简易的刺激器。由铜片和锌片两种金属制成。锌铜弓具有刺激作用，是因为金属与溶液之间产生电位差，即电极电位。

1坐骨神经腓肠肌标本

观察结果： 用已经湿润的铜锌弓两端先后接触坐骨神经，可观察到腓肠肌产生一次收缩。 并且课观察到先用铜极接触，后用锌极接触时坐骨神经的收缩强度大于先用锌极接触后用铜极接触的收缩强度。 讨论分析： 铜锌弓在溶液中沾湿以后，锌的表面店里出正离子，里面形成负离子，而铜的表面电离出负离子，里面形成正离子。当铜锌弓接触或组织时，电流便沿着锌片，活组织，铜片的方向流动产生刺激反应。所以锌相当于正极，而铜相当于负极。正极的电势高于负极。所以锌极后接触坐骨神经时，收缩的强度比较大。 任氏液的组成模拟了两栖动物的血浆成分，含有神经传导所需的钠离子钾离子葡萄糖等物质，并起维持渗透压的作用。 神经与肌肉是可兴奋组织，神经细胞的静息膜电位为外正内负，坐骨神经接受一次刺激时，膜对钠离子的通透性增加，细胞外的任氏液中的钠离子顺浓度梯度内流，导致膜内负电位减小，当达到阈电位时，钠离子通道全部开放，钠离子大量内流，细胞内正电荷增加，膜内负电位从减小到消失，进而出现膜内正电位。动作电位产生。由于任氏液是导电的，于是在膜的兴奋段和未兴奋段之间，会由于电位差的存在而产生电荷的移动。于是刺激就顺着坐骨神经传导。 当传递到腓肠肌时，即由神经兴奋到肌肉收缩，这个过程就是神经传导电信号，电信号传导至神经-肌肉节点即为突触，轴突末梢膜的钙离子通道开放，膜对钙离子的通透性增加，钙离子就由细胞外进入轴突内。钙离子浓度增高可促进大量囊泡向接头前膜靠近，囊泡膜与接头前模发生融合而破裂，囊泡中的递质乙酰胆碱通过胞作用释放入接头间隙，电信号转化为了化学信号，递质作用于突触后膜（也就是肌肉细胞膜），产生胞内信号，使储存于肌质网中的钙离子释放，引起肌肉收缩。 整个标本包括了神经中枢，传出神经即坐骨神经，效应器即腓肠肌。缺少接收器和传入神经。 结论： 整个标本不是一条完整的反射弧，不是一次反射，只能算为反应。 电刺激可以通过坐骨神经传导并能是腓肠肌产生收缩。说明标本制备成功。

浙江大学生理学实验坐骨神经

蟾蜍坐骨神经干复合动作电位特性 目的：应用微机生物信号采集处理系统记录蟾蜍坐骨神经干复合动作电位（compound action potention，CAP），观察刺激、神经损伤、药物对神经兴奋性、兴奋传导的影响并探讨其机制。 1.材料和方法(materials and methods) 1.1 实验动物： 蟾蜍（中华蟾蜍指名亚种，Zhuoshan Toad） 1.2 药品： 任氏液、3 mol/L 氯化钾 1.3器材： RM6240微机生物信号处理系统（成都仪器厂）、神经干标本盒、包括器械方盘、蛙板等实验器械材料一套。 1.4 坐骨神经干制备： 蟾蜍毁脑脊髓，去上肢和内脏，下肢剥皮浸于任氏液中。 蟾蜍下肢背面向上置于蛙板上，剪去尾椎；标本腹面向上，用玻璃分针分离脊柱两侧神经丛，用线在近脊柱处结扎，剪断神经；将神经干从腹面移向背面。标本背面向上固定，从大腿至跟腱分离坐骨神经。 坐骨神经标本置任氏液中备用。 1.5 仪器连接和参数： 神经干标本盒两对引导电极分别接微机生物信号处理系统1、2通道。 仪器参数：1、2通道时间常数0.02s、滤波频率3KHz、灵敏度5mV，采样频率：100KHz，扫描速度：0.2ms/div。单刺激激方式，刺激幅度1.0V，刺激波宽0.1ms，延迟2ms，同步触发。 1.6 动作电位引导： 神经干标本置于标本盒的电极上，神经与电极接触良好，调节刺激电压，记录动作电位。 2.观察（observations） 2.1 中枢端引导的双向动作电位（biphasic action potential，BAP）： 用1.0V电压，波宽0.1ms方波刺激神经干末梢端，观察动作电位波形。 2.2 测定末梢端引导的双向动作电位： 用1.0V电压，波宽0.1ms的单个方波刺激神经干中枢端，测定动作电位正、负向振幅和时程。 2.3 兴奋传导速度测定： 用1.0V电压，波宽0.1ms的单个方波激刺激神经干中枢端，测定第1和第2对引导电极引导CAP起点的时间差Δt ，根据υ＝S R1- R2- / Δt 计算出AP的传导速度。 2.4 测定单相动作电位（monophasic action potential，MAP）： 用镊子夹伤对1对引导电极间的神经干，然后用1.0V电压，波宽0.1ms的单个方波刺激神经干中枢端，测定末梢端MAP振幅和时程。 2.5观察刺激强度（U）与动作电位振幅的关系：

人体外周血淋巴细胞染色体制备与观察实验方案

实验方案 实验外周血淋巴细胞培养及染色体标本制备，染色体组型分析 一、实验目的 1、了解动物细胞培养的方法。掌握人体外周血淋巴细胞培养与染色体标本制备。 2、初步掌握人类染色体G－带的显示方法及人类染色体G－带在染色体识别中的意义。 3、熟悉人类染色体的镜下检查和核型分析方法。初步掌握人类染色体G带的特征及其 识别。 二、实验原理 所谓外周血培养即是将外周血接种在适当的培培养物中加入适量的秋水仙素，使纺锤体微管解聚，这样细胞停留在中期，可以获得大量的分裂细胞。用低渗盐溶液（一般是0.075mol/L的KCl）处理，使其中的红细胞及分裂相细胞膜和一部分细胞质除去，最后以气干法制片，可获得较好的染色体养基中进行培养。人类外周血细胞本来是终末分化细胞，一般没有分裂能力，但经PHA（植物血球凝集素）或ConA等药物刺激后，转变成可分裂的转化细胞。 染色体显带是将染色体标本经过一定程序处理，并用特定染料染色，使染色体沿其长轴显现明暗或深浅相间的横行带纹――染色体带，这种技术，称为染色体显带技术。通过显带，人们可以准确地识别每一条染色体及染色体上的各个区段，并可发现染色体上较细微的结构变化。 在所有的显带技术中，G显带（G banding）是最常见的显带技术，它是将染色体标本用碱、胰蛋白酶或其它盐溶液处理后，再用Giemsa染液染色，在普通显微镜下，可见深浅相间的带纹，称G带（G band）。G显带方法简便，带纹清晰，染色体标本可以长期保存，因此被广泛用于染色体病的诊断和研究。 正常人类染色体的数目为46条(23对)，1960年的Denver会议和1963年的London会议制定了统一的人类染色体命名体制：按照染色体的相对长度、臂比和着丝粒指数，将常染色体（22对）按大小用阿拉伯数字标记，顺次排列为1～22号，性染色体用X和Y标记；并按染色体大小和着丝粒位置，把人类染色体分为七个组，用大写字母A～G表示。 染色体经显带处理后，每条染色体都显示出其特定的带纹特征（见下表）。根据这些特征，可以准确地识别每条染色体，检出染色体数目或结构畸变。 表1 人染色体组型及其特征

浸制标本的制作

浸制标本的制作 方法1 (1)、绿色植物标本的浸制 用50 ml冰醋酸和50ml水配成50%醋酸溶液，在溶液中慢慢加入醋酸铜粉末，不断搅拌，直到饱和为止，配成醋酸铜溶液。 取醋酸铜原液1份，加水4份稀释，将溶液倒入大烧杯内加热至70—85?，然后将新鲜绿色植物放入烧杯内，不久材料变成黄绿色，继续加热直至材料又变成跟原来的色泽相似时停止加热，取出绿色标本，在清水里漂洗干净，浸入5%的福尔马林溶液瓶中保存。 还可用硫酸铜代替醋酸铜，配成饱和的硫酸铜溶液，用硫酸铜溶液同上述方法一样处理绿色植物。 有一些特别幼嫩的植物，不宜加热，可浸入5%硫酸铜溶液里，直至材料由绿变黄，再由黄变绿时取出。浸泡时间约5天左右。标本经清水漂洗后，浸入5%的福尔马林溶液里保存。 标本处理后装瓶时，最好将标本用线轻轻地缚在透明的玻璃片上，连同玻璃片一起浸入5%的福尔马林保存液中保存，保存液一定要没过标本。 (2)、红色标本的浸制。 取4ml福尔马林、4g硼酸、400ml水配置成处理液。选择完整成熟的新鲜果实(如番茄、樱桃等)，洗净后浸入处理液中，当果实由红色转为深褐色时取出。浸泡时间一般为1—3天，但要视果实的大小、颜色深浅而定。果实取出后直接浸入亚硫酸硼酸保存液(100ml1%亚硫酸、2g硼酸、100ml水配成)中保存，可保持果实原有色泽。 (3)、黄绿色标本的浸制。

将黄绿色的果实或植物黄绿色部分(如梨、金橘、甜瓜等)洗干净，浸入5%硫酸铜溶液1—3天，取出后漂洗干净，浸入亚硫酸甘油酒精保存中保存，保存液用 20ml10%亚硫酸、20ml甘油和20ml95%的酒精，加水600ml配成。也可用50ml10%亚硫酸和50ml95%酒精，加水400ml配成亚硫酸酒精保存液，同样能达到保存的目的。 (4)、紫色标本的浸制。 用10ml40%的福尔马林、12ml95%酒精加入200ml配成福尔马林酒精溶液，将洗净的紫色果实，直接浸入上述溶液中保存。如果是紫色的浆果(如葡萄)时必须先浸入福尔马林食盐溶液(12ml40%福尔马林、24ml12%食盐水、水200ml配成)内，选取即将成熟的果实洗净，浸入上述液中2—3月，然后取出，保存在2%的福尔马林溶液瓶中，这样处理后，果实的原有色泽可保持较长时间。 (5)、白色或淡绿色标本的浸制。 取氯化锌10g，加入300ml水中，充分搅拌，溶解后再加入40ml 95%的酒精，静置沉淀后，取上面的澄清液。将白色植物(如银耳、慈菇等)洗干净后浸入上述溶液中保存。也可取15g氯化锌，溶解在300ml水中，再加入8ml40%福尔马林和8ml 甘油，搅匀后静置沉淀，取上层澄清液。 植物浸制标本装瓶后，瓶口要加盖，若观察约两周后，保存液没有变浑浊或产生沉淀，可用熔化的石蜡在瓶口接缝处封口，存放在阴凉处，避免阳光直射，使标本原有的色泽保持时间较长。 方法2 液浸法保存植物标本，关键在于保色、防腐。植物标本浸液有以下几种: 1(普通标本液浸法 用福尔马林50ml、酒精300ml，加蒸馏水2000ml配制而成。这种浸液可使植物标本不腐烂、不变形，但不能保色。

坐骨神经腓肠肌标本制备

坐骨神经-腓肠肌标本制备 一、实验目的要求 1、学习蛙类动物单毁髓与双毁髓的方法。 ２、学习并掌握坐骨神经-腓肠肌标本及腓肠肌标本的制备方法。 3、了解电刺激的极性法则。 二、实验原理 １、蛙或蟾蜍等两栖类动物的一些基本生命活动与生理功能与温血动物相似,而其离体组织生活条件易于掌握,在任氏液的浸润下,神经肌肉标本可较长时间保持生理活性。因此,在生理学实验中常用蛙或蟾蜍坐骨神经腓肠肌离体标本来观察神经肌肉的兴奋性、兴奋过程以及骨骼肌收缩特点等。 ２、细胞的静息膜电位为外正内负,电刺激可改变可兴奋细胞的膜电位差。膜电位减小时,细胞去极化,细胞兴奋;膜电位增大时,细胞超极化,细胞兴奋性被抑制。蘸有任氏液的锌铜弓接触活组织时,可产生沿锌片—活组织—铜片流向的电流对细胞产生刺激效应。 三、实验材料与仪器 1、实验材料:牛蛙 ２、实验器材:手术剪、手术镊、手术刀、眼科剪、眼科镊、毁髓针、蛙板、固定针、滴管、培养皿、玻璃分针锌铜弓、污物缸、粗棉线、任氏液 四、实验步骤 1、洗净实验动物→毁髓→剥制后肢→分离坐骨神经→游离腓肠肌→游离股骨头→标本检验→电刺激极性法则的验证 2、双毁髓 一只手握住牛蛙,使其背部向上。用拇指压住牛蛙背部,食指按压其头部前端,另一只手持毁髓针,由两眼之间沿中线向下触划,触及凹陷处即为枕骨大孔。将毁髓针垂直刺入枕骨大孔。将针尖向前刺入颅腔内搅动,此时为单毁髓;将毁髓针退回枕骨大孔,针尖转向后方,与脊椎平行刺入椎管内捣毁脊髓,完成双毁髓。 3、坐骨神经-腓肠肌标本制备 （1）剥制后肢标本:轻提双毁髓蛙,自背面耻骨联合上方约1公分处横向剪断脊柱。轻轻托起后肢,瞧清坐骨神经位置,沿脊柱两侧横向切口剪断体壁,去除断口以上肢体与内脏放入污物缸。剥去后肢皮肤后放入任氏液中备用。 （2）分离两后肢:用粗剪刀纵向剪开脊柱,并剪断两后肢相连的肌肉,一只用于剥制标本,一只放入任氏液中保存。 （3）分离坐骨神经:将后肢标本脊柱端腹面向上,趾端向外侧用蛙钉将标本固定在蛙板上。先在腹腔面用玻璃分针沿脊柱游离坐骨神经,然后在标本的背侧于股二头肌与半膜肌的肌肉缝内将坐骨神经与周边的结缔组织分离直到腘窝,但不要伤及神经,其分支待以后用手术剪剪断肌肉。 （4）游离腓肠肌:同样用玻璃分针将腓肠肌与其下的结缔组织分离并在其跟腱处穿线、结扎; （5）分离股骨头:捏住股骨,剪去并刮净周围肌肉,保留股骨的后2/3,剪断股骨; （6）检验标本:用手术镊轻提标本的脊椎片,再用经任氏液蘸湿的锌铜弓接触坐骨神经,如腓肠肌发生收缩,则表示标本机能正常。轻提腓肠肌上的结扎线,将标本放入任氏液中保存１5-2０分钟后进行实验。 （7）电刺激的极性法则验证:用棉线在神经干中间部位进行结扎,以阻断神经传导兴奋的能力。用锌铜弓跨越结扎线刺激坐骨神经干。使锌极在腓肠肌一端刺激,观察腓肠肌收缩发生在通电(接触神经干)时还就是断电(离开神经干)时;调转锌铜弓的极性,使铜极在腓肠肌一端

坐骨神经-腓肠肌标本实验报告

华南师范大学实验报告 一、实验题目：坐骨神经-腓肠肌标本制备、 骨骼肌单收缩及其总和以及Powerlab实验系统的使用 二、实验目的： 1. 学习蛙类动物单毁髓与双毁髓方法，并掌握坐骨神经-腓肠肌标本的制备方法。 2. 了解电刺激的极性法则和方法，学习肌肉收缩的记录方法。 3. 观察刺激强度与肌肉收缩反应的关系、骨骼肌的单收缩过程和肌肉收缩的总和以及强直收缩现象, 了解肌肉收缩过程的时相变化以及刺激频率对骨骼肌收缩形式的影响。 三、实验原理： 腓肠肌由许多肌纤维组成，刺激腓肠肌时，不同的刺激强度会引起肌肉的不同反应。当刺激强度过小时，不引起肌肉发生收缩反应，此时的刺激为阈下刺激。而能引起肌肉发生收缩反应的最小刺激强度，为阈刺激。当全部肌纤维同时收缩时，则出现最大的收缩反应。这时，即使再增大刺激强度，肌肉收缩的力量也不再随之加大，该刺激强度为最适刺激强度。 肌肉组织对于一个阈上强度的刺激，发生一次迅速的收缩反应，称为单收缩。单收缩一般要经历潜伏期、收缩期和舒张期三个过程。 当同等强度的连续阈上刺激作用于标本时，则出现多个收缩反应的叠加，叫做强直收缩。当后一收缩发生在前一收缩的舒张期，即发生不完全强直收缩；当后一收缩发生在前一收缩的收缩期，各自的收缩则完全融合，肌肉出现持续的收缩状态，即产生完全强直收缩。 四、实验材料：青蛙 五、实验步骤： 1. 制备坐骨神经-腓肠肌标本： 1)洗干净实验动物 2)双毁髓，剥制后肢，分离两后肢 3)分离坐骨神经 4)游离腓肠肌 5)分离股骨头 6)标本检验

7)电刺激极性法则的验证 2. 连接实验装置： 将换能器的输出线接至RM6240生理记录装置的2通道，电刺激信号接至肌槽的电极上。然后把制备好的坐骨神经-腓肠肌标本股骨固定在肌槽上。将固定肌肉的棉线另一端接在张力换能器上，保持适度松紧，将坐骨神经搭在肌槽的电极上。 3. 设置通道放大器和刺激器： 1)打开PowerLab电源，检查USB线连接 2)打开Chart5中文版 3)设置通道数为2 4)设置通道2-桥式放大器：量程5mV,低通10Hz，调零 5)设置刺激器：刺激方式选脉冲，脉冲数1，手动方式，量程10V,振幅100mV,标记通 道1，频率1Hz,持续时间1mS, 4. 开始测试： 1)打开刺激器面板和点右下角”开始“按钮 2)点右上角调节采样速度（“走纸速度”） 3)菜单打开设置刺激器的脉冲数2个或5个，重新打开刺激器面板 4)调节走纸速度为400 六、实验结果： （一）坐骨神经-腓肠肌标本制备 股骨 脊柱骨 坐骨神经 腓肠肌 图1. 蛙坐骨神经—腓肠肌标本图 （二）坐骨神经-腓肠肌标本在Powerlab实验系统中所记录下的数据 1.通过不断调整刺激强度，使肌肉收缩的幅度适中，记录单收缩的曲线（图2-1 ）。当

实验五 人类染色体标本制备

实验五人类染色体标本制备 【目的要求】 1．熟悉人外周血淋巴细胞培养的原理。 2 3 【实验原理】 人类间期细胞核中的遗传物质染色质，在细胞进入分裂期时，经逐级螺旋形成染色体。 在分裂期的中期，染色体达到最大程度的凝集，表现为短而粗的典型结构。人外周血的有形 成分中，只有白细胞有核，而白细胞中只有淋巴细胞(主要是小淋巴细胞)具有潜在的细胞分 裂能力。 培养液中加入有丝分裂刺激剂植物血凝素(PHA)可使处于G0期、具有潜在分裂能力的淋 巴细胞转化为具有分裂能力的淋巴母细胞，并进入旺盛的有丝分裂周期；加入纺锤体抑制剂 秋水仙素可使处于分裂过程的淋巴细胞停滞在分裂中期，在收获细胞时，用低渗剂0.075 mol/L KCl对细胞进行低渗处理，可使胞膜胀破，染色体均匀分散；经离心、固定、制片等 过程，最终可获得便于观察分析的染色体标本。 制备的染色体标本片，不经特殊处理，直接染色，在显微镜下观察识别，并进行核型分 析的过程称为染色体非显带核型分析。 【实验用品】 (一) 材料：人外周静脉血。 (二) 器材：吸管、刻度离心管、量筒、5ml注射器、6号针头、台式离心机、试管架、 冷藏载玻片（一端磨砂）、铅笔、酒精灯、超净工作台、恒温水浴箱、载玻片、止血带、酒 精棉球、显微镜、废液缸。 (三)试剂 1. RPMI1640培养液 (1) RPMI1640：RPMI1640固体培养基10.4 g,溶于1000 ml双蒸水中，抽滤除菌。 (2) RPMI1640培养液：每100 ml RPMI1640培养液中含RPMI 1640 80 ml、灭活的小牛血 清20 ml、PHA 50 mg、青霉素(终浓度100 U/ml)、链霉素10000 μg (终浓度100 μg /ml)， 15磅、20min高压灭菌的NaHCO3调pH至7.2～7.4，分装20小瓶，每瓶5 ml。 (3) 配制方法 配制过程所需的玻璃器具先用浅水洗刷干净，烘干，放入清洁液中浸泡2 d，取出后用自来水冲洗15次，蒸馏水冲洗3次，双蒸水冲洗1次，烤干后包装，15磅20 min高压灭菌。 新瓶塞等橡胶类制品用水洗刷后，用0.5mol/L NaOH煮沸20min，自来水冲洗；用0.5mol/L HCl煮沸20 min，自来水冲洗，蒸馏水冲洗，在双蒸水中浸泡24h；浸泡后取出晾干，包装后高