分子生物学

第七篇分子生物学检验技术

第一章绪论

记忆要点：

1. 基因与疾病的关系：病毒感染，单基因病，多基因病，肿瘤

2. 分子生物学检验技术主要研究病原微生物基因，基因变异及基因多态性

模拟题

1.下列哪项属于单基因遗传病（）

A.冠心病

B.糖尿病

C.精神于神经疾病

D.原发性高血压

E.α-地中海贫血

2. 下列哪项属于多基因遗传病（）

A.糖尿病

B.血友病

C.Duchenne肌营养不良

D.脆性X综合征

E.血红蛋白病

3．癌基因激活机制包括（）

A. 点突变

B.甲基化程度降低

C.反转录酶活性增高

D.基因扩增

E.DNA连接酶活性降低

4．病毒容易发生变异是由于下列哪些酶缺乏校正功能（）

A.DNA聚合酶

B. DNA连接酶

C. RNA聚合酶

D.蛋白酶

E.反转录酶

5. 病毒感染宿主的方式主要表现为（）

A. 病毒感染宿主细胞后，病毒DNA直接在细胞内复制

B.病毒基因与宿主细胞染色体发生整合而使宿主染色体基因结构发生改变

C. 病毒基因与宿主细胞染色体结合，形成复合物

D.病毒感染宿主细胞后，病毒吞噬细胞核

E. 病毒感染宿主细胞后，病毒颗粒被宿主细胞吞噬

6．分子生物学检验技术在临床上的应用有（）

A.检测病原微生物基因

B.检测基因变异

C.器官移植配型

D.亲自鉴定

E.遗传性疾病的诊断

第二章基因组与基因组学

记忆要点：

1. 原核生物基因组中基因数目少，并且只有一个复制起始位点，是一条环状双

链DNA，形成类核，没有核膜。结构基因（无内含子）连同上游的调控区以及下

游的转录中止信号共同组成操纵子。其mRNA为多顺反子mRNA，5’端无帽子结构，3’端无多聚A尾。

质粒：共价闭合环状DNA分子(酵母杀伤质粒为RNA)

2．病毒：基因重叠，基因组为单倍体。HBV、HCV、HIV基因组的特点

3．真核生物基因组；二倍体，单顺反子，重复序列多，非编码序列多，基因不

连续（有内含子），基本上没有操纵子结构。

模拟题

7. 下列叙述哪项是错误的（）

A.原核生物基因组具有操纵子结构

B. 原核生物结构基因是断裂基因

C. 原核生物基因组中含有插入序列

D. 原核生物基因组中含有重复顺序

E. 原核生物结构基因的转录产物为多顺反子

8. 质粒的主要成分是（）

A.多糖

B.蛋白质

C.氨基酸衍生物

D.DNA分子

E.脂类

9. 原核生物类核结构的组成是（）

A.双链DNA

B. RNA

C.蛋白质+DNA

D.支架蛋白

E. RNA+支架蛋白+双链DNA

10. 操纵子不存在于（）

A.细菌基因组

B.病毒基因组

C. 真核生物基因组

D.大肠杆菌基因组

E.原核生物基因组

11. 病毒生物学性状及感染的致病性主要取决于（）

A.病毒早期蛋白

B.病毒表面糖蛋白

C.病毒核酸

D.病毒晚期蛋白

E.病毒衣壳蛋白

12. 有关于微卫星重复序列的描述正确的是（）

A.在群体的个体间重复簇的大小不发生变化

B.每一簇含的重复序列的数目比小卫星重复序列多

C.有一个10~15个核苷酸的核心重复序列

D.在DNA重组时不具有活性

E.以上都不对

13. 细胞器基因组是（）

A.环状的

B.不编码蛋白质产物

C.分为多个染色体

D.线状的

E.含有大量的短重复DNA序列

14. 真核生物重指导蛋白质合成的结构基因大多数为（）

A.单拷贝序列

B.中度重复序列

C.高度重复序列

D.回文序列

E.其它

15. 有关人类基因组的特点描述不正确的是（）

A.功能相关的基因常散在分布于不同的染色体上

B.含有大量的重复序列

C.基因组中各个基因的大小和内部组织差异不大

D.含有大量的非编码序列

E.每个结构基因都有单独的调控序列

16. 有关于多基因家族的描述，错误的是（）

A.由某一祖先基因经过重复合变异所产生的一组基因

B.通常由于突变而失活

C.假基因和有功能的基因是同源的

D.所有成员均产生有功能的基因产物

E.以上都正确

17. 临床上用PCR方法检测HCV，常用的扩增靶序列为（）

A.5’端非编码区

B. 3’端非编码区

C.结构蛋白区

D. 非结构蛋白区

E. 以上都不是

18. 原核生物基因组的特征包括（）

A.具有类核结构

B.具有多个DNA复制起始位点

C.有大量的基因重叠现象

D.存在可移动基因成分

E.有大量重复序列存在

19. 质粒的结构特点有（）

A.所有质粒都是超螺旋结构的DNA

B.大多数质粒为环状双链DNA

C.以环状单链DNA分子存在

D.质粒DNA有半开环结构

E. 以环状双链RNA分子存在

20 . 有关R质粒叙述正确的是（）

A. R质粒带有抗性转移因子

B. R质粒又称耐药性质粒

C. R质粒带有抗性决定因子

D. R质粒能决定细菌的性别

E. R质粒能决定细菌的大小

21. 有关病毒基因组的结构特点正确的是（）

A.多数为多倍体

B.编码区在基因组中的比例很少

C.含有大量的基因重叠现象

D.含有一种核酸

E.有操纵子结构

22-24 题共用下列选项

A. F质粒

B. R质粒

C. Col质粒

D.严密型质粒

E.松弛型质粒

22.带有耐药性基因的质粒是（）

23.可以产生大肠杆菌素的质粒是（）

24.在细胞中含量较多，且复制不受宿主严格控制的质粒是（）

第三章蛋白质组与蛋白质组学

记忆要点：

蛋白质组：一种基因组所表达的全套蛋白质。蛋白分离纯化，进行分析鉴定。

蛋白质相互作用

模拟题

25. 最能直接反映生命现象的是（）

A.蛋白质组

B.基因组

C. mRNA水平

D.糖类

E.脂类

26 . 两种等电点相近，分子量相差较大的蛋白质首选的分离方法是（）

A.电泳

B.离子交换层析

C.凝胶过滤层析

D.亲和层析

E.分配层析

27 .甲、乙、丙三种蛋白质，等电点分别为6.1，4.3和5.7。在负极点样后电泳30分钟，哪种蛋白泳东的距离最远（）

A.甲蛋白

B. 乙蛋白

C.丙蛋白

D.距离无差别

E.不一定

28. 下列哪种方法是蛋白质组研究中最有效的分析鉴定技术（）

A. 二维凝胶电泳

B. Westenr印迹

C. Edman降解法

D. 酶解分析法

E.核酸表达法

29. SDS-聚丙酰胺凝胶电泳的原理不正确的是（）

A. SDS是一种阴离子去污剂

B. SDS可以与蛋白质的疏水部分结合，从而使蛋白质获得负电荷

C.蛋白质的迁移率与分子大小相关

D. SDS使具有不同等电点的蛋白质得以分离

E. SDS与蛋白质结合后可以屏蔽没有SDS时的任何一种电荷

30. 关于滤膜结合法以下说法正确的是（）

A.硝酸纤维素法不能结合蛋白质，但可以结合双链DNA

B. 硝酸纤维素法不能结合双链DNA，但可以结合单链DNA

C. 硝酸纤维素法可以结合游离DNA片断

D.与蛋白质结合得DNA片断可以结合在硝酸纤维素膜上

E.可以将双链DNA和单链DNA分离开来

31. 关于DNase I足纹分析法，下列说法正确的是（）

A. DNase I可以随机水解核苷酸中的磷酸二酯键

B. DNase I可以水解与蛋白质结合的核苷酸

C. DNase I水解核苷酸有碱基特异性

D.末端标记的DNA经DNase I作用经放射自显影后形成以相差一个核苷酸为梯度的DNA 探针

E.当结合有蛋白质的DNA片断经DNase I作用后，在放射自显影图谱上出现一段空白区域，称之为足纹

32. 对核酸-蛋白质杂交实验的描述，正确的是（）

A.又称Southwestern杂交

B. 可以确定结合蛋白质的分子量

C.又称Southeastern杂交

D. 可鉴定蛋白质与DNA的特异性杂交

E. 蛋白质-DNA复合物经紫外线照射后导致其交联

33-35题共用下列选项

A.凝胶过滤层析

B.离子交换层析

C.亲和层析

D.SDS-PAGE

E.琼脂糖凝胶电泳

33. 根据分子大小分离蛋白质的是（）

34. 利用大分子物质与其结构相对应的专一分子发生可逆性结合来分离物质的方法是（）

35. 二维凝胶电泳中，第一向是等电聚焦凝胶电泳，第二向是（）

第四章肿瘤相关基因

记忆要点：

1. 癌基因包括病毒癌基因和细胞癌基因。细胞癌基因是正常细胞中一类编码关

键性调控蛋白的基因，又称原癌基因，在进化上高度保守。一般认为病毒癌基因

来源于细胞癌基因。一个等位癌基因的突变就可以激活细胞。

2. 抑癌基因：一类可抑制细胞过度生长和增生的基因。两个等位基因都发生突

变才能引起抑癌基因的失活，故抑癌基因又称隐性癌基因。

模拟题

36-38题共用下列选项

A. src家族

B. ras家族

C. myc家族

D. sis家族

E. erb家族

36. 其产物具有酪氨酸磷酸化的蛋白激酶活性（）

37. 产物具有GTP酶活性（）

38. 产物结构与PDGF相似（）

39. 关于p53基因的叙述，正确的是（）

A.是癌基因

B.是肿瘤转移基因

C.野生型p53是抑癌基因

D.是肿瘤转移抑制基因

E.突变型p53是抑癌基因

40. 某患者检查时见脾脏增大，白细胞增多且存在bcr-abl融合基因，提示可能

与下列哪种疾病有关？（）

A.急性T细胞白血病

B.急性粒细胞白血病

C.多发性骨髓瘤

D.慢性粒细胞白血病

E.脾功能亢进

41. 患儿，男，4岁，数月来视力明显下降，瞳孔区呈白色反光，检查可见视网

膜上有近圆形且边界不清的黄白色隆起肿块，初步诊断为视网膜母细胞瘤。表达产物异常可引起该疾病的抑癌基因是（）

A. Rb

B. p53

C. BRCA1

D. DCC

E. WT1

42. 下列关于恶性肿瘤发生发展的叙述哪项是错误的（）

A.多种因素协同作用

B. 单个基因变化即可引起细胞恶性转化

C. 某些肿瘤是基因病

D. 是多因素多阶段变化的结果

E.既有癌基因改变，也包括抑癌基因变化

43. 以下不属于细胞癌基因激活机制的是（）

A.点突变

B. 基因重排

C.基因扩增

D.染色体易位

E. 原癌基因甲基化程度增高

44. 细胞癌基因又称原癌基因，其含义是（）

A.正常情况下细胞癌基因并不致瘤

B. 细胞癌基因来源于病毒癌基因

C.病毒癌基因来源于细胞癌基因

D. 细胞癌基因是癌基因的前体

E. 细胞癌基因来源于癌基因

45. 癌基因家族有（）

A. src家族

B. ras家族

C. myc家族

D. sis家族

E. erb家族

第五章核酸的分离与纯化

记忆要点：

核酸分离、纯化的原则：保证核酸一级结构的完整性；避免污染。

基因组DNA分离方法：酚抽提法

3. 质粒DNA的提取：碱裂解法

模拟题

46. 以下哪种方法不能抑制或灭活RNase活性（）

A.实验玻璃器皿及溶液用DEPC处理

B.加入强烈的胍类变性剂

C.加入β-巯基乙醇

D.加入EDTA金属离子鳌合剂

E. 加入DTT

47. 以下属于DNA的保存方法的是（）

A.溶于TE缓冲液中在-70℃储存

B.溶于0.3mol/L的醋酸纳溶液或双蒸水中，在-70℃至-80℃保存

C.沉淀溶于70%乙醇溶液或去离子的甲酰胺溶液zhogn ，可在-20℃中长期保存

D.以DEPC水溶解保存

E.异丙醇沉淀保存

48. 下列关于紫外分光光度法用于核酸的纯度鉴定的说法正确的是（）

A.TE缓冲液中，纯RNA的A

260/A

280

值为1.8，纯DNA的A

260

/A

280

值为2.0

B.TE缓冲液中，纯DNA的A

260/A

280

值为1.8，纯RNA的A

260

/A

280

值为2.0

C.蛋白质及酚均使A

260/A

280

上升

D.比值为1.8的DNA溶液一定为纯的DNA溶液

E.比值为2.0的RNA溶液一定为纯的RNA溶液

49. 下列哪项不是保证RNA制备成功的条件（）

A.在RNA的制备过程中，排除RNase的污染及强有力地抑制其活性

B.选择性地使用针对RNase的蛋白质变性剂并联合使用RNase的特异性抑制剂，极大地防止内源性RNase对RNA的水解

C.应使用Ph4.5~5.5的水饱和酸性酚，既有利于DNA变性又有利于RNA的分离

D.在抽提过程中加入少量氯仿，目的在于消除抽提过程中因蛋白质变性而产生的

泡沫

E.低温操作

50. 纯DNA的A

260/A

280

比值为1.8，可使比值升高的是（）

A.蛋白质

B.酚

C.RNA

D.氯仿

E. Mg2+

51.完整的无降解的或降解很少的总RNA电泳图中，3个条带的荧光强度积分应呈特定的比值，下列表述错误的是（）

A.沉降系数大的核算条带分子量大，电泳迁移率低

B.分子量小，电泳迁移率高，荧光强度积分低

C.原核生物总RNA电泳结果，荧光强度由高到低为23SRNA，16SRNA ，5SRNA

D.28SRNA的荧光强度比18SRNA的荧光强度高

E. RNA中以mRNA最多

52. SDS的作用是（）

A.鳌合剂，可以抑制DNA酶的活性，同时降低细胞膜的稳定性

B.高效水解RNA

C.引起细胞膜的讲解并能乳化脂质和蛋白质，并使它们沉淀

D.增加溶液粘度，维持渗透压，防止受机械力作用而降解

E.沉淀DNA

53. RNA中数量最多的是（）

A. mRNA

B. rRNA

C. tRNA

D. hnRNA

E. snRNA

54. 核酸沉淀常用的有机溶剂有（）

A.酚

B.甲酰胺

C.氯仿

D.异丙醇

E.乙醇

55. 下列哪些可通过抑制RNA酶对RNA的水解而延长RNA的保存时间（）

A .NaOH B. DEPC C. RNasin

D. NaAc

E.VRC

56. 质粒DNA提取纯化方法的3个主要步骤（）

A.质粒DNA的扩增

B. 质粒DNA的释放

C.质粒DNA的鉴定

D. 质粒DNA的回收

E. 质粒DNA的分离纯化

第六章 DNA重组技术

记忆要点：

1. DNA重组技术常用的工具酶

2. 限制性内切酶的分类、作用特点及甲基化酶的概念

3. 常用载体的构建

4. DNA重组的过程及重组子的筛选和鉴定

5. DNA测序的方法

模拟题

57.限制性内切酶切割后产生的DNA双链末端带有（）①

A. 5’磷酸基和3’羟基

B. 5’羟基和3’磷酸基

C. 5’磷酸基和3’磷酸基

D. 5’羟基和3’羟基

E. 以上都不是

58. 与限制性内切酶一起组成II类限制-修饰系统的是（）

A.同裂酶

B.同工异源酶

C.同尾酶

D.同工异构酶

E.甲基化酶

59. 在DNA重组技术中，哪种酶催化重组DNA分子的形成（）

A.DNA聚合酶

B.Klenow片断

C.连接酶

D.末端转移酶

E.限制性内切酶

60. 在DNA重组技术中，能给DNA片断3’端加上同聚物尾的酶是（）②

A.反转录酶

B. Klenow片断

C.TaqDNA聚合酶

D. 末端转移酶

E.碱性磷酸酶

61. 装载容量最大的载体是（）

A.质粒载体

B.噬菌体载体

C.粘粒载体

D.腺病毒DNA

E.酵母人工染色体

62. 克隆质粒载体不应具备的特性有（）

A.复制子

B.筛选标记

C.多克隆位点

D.较高的拷贝数

E.分子量相对较大

63. 应用α-互不作用筛选时，阳性重组子克隆菌落为（）

A.白色

B.蓝色

C.蓝白相嵌

D.无色

E.溶菌斑

64. 质粒扩增时加入氯霉素的目的是（）

A.利用抗药性标记进行筛选

B.抑制大肠杆菌蛋白质合成，提高质粒拷贝数

C.抑制杂菌污染

D.抑制阴性克隆

E.以上都不是

65. 用下列方法进行重组体的筛选，哪一项能说明外源基因进行了表达（）

A. Southern印迹杂交

B. Northern印迹杂交

C. Western印迹杂交

D. 原位菌落杂交

E. 斑点杂交

66. 关于感受态细胞性质的描述，下列说法错误的是（）

A.具有可诱导性

B.具有可转移性

C.细菌生长的任何时期都可以出现

D.不同细菌出现感受态的比例不同

E.细菌处于对数生长期

67. 关于质粒载体的叙述正确的是（）

A.由紧密型质粒经人工改造拼接而成

B.由松弛质粒经人工改造拼接而成

C.具有自主复制能力

D.装载容量大

E.具有筛选标记

68. 下面关于多克隆位点的描述正确的是（）

A.仅位于质粒载体中

B.仅位于病毒载体中

C.不同酶的识别序列可以有重叠

D.一般是人工合成添加到载体中

E.具有多种酶的识别位点

69.质粒载体必须具备的基本特征有（）

A.独立复制

B.有选择性标记

C.有独特的酶切位点

D.有端粒

E.具有较大的分子量

70. 同聚物加尾法是一种人工粘性末端连接法，下列说法正确的是（）

A.易自身环化

B.连接效率较低

C.用任何一种方法制备的DNA都可以用该方法进行连接

D.利用末端转移酶的功能，将载体和外源性DNA的3’端加上一段寡合苷酸

E.可能会产生某种限制性酶切位点

第七章克隆基因表达及基因干扰

记忆要点：

1. 真核生物基因在原核细胞中的表达方式有非融合型表达、融合型表达以及分泌型表达。

2. 反义寡核苷酸、反义RNA、RNAi及miRNA抑制基因表达的机制

模拟题

71. 下列哪个不是目前融合型表达系统（）

A. His系统

B.GST系统

C.金黄色葡萄球菌蛋白A系统

D.半乳糖苷酶系统

E.GCT系统

72. 在His系统中主要利用His与下列哪个金属离子螯合（）

A.铝离子

B.镉离子

C.镍离子

D.铜离子

E.铁离子

73. 在Western印迹电转移时，负极到正极依次放置的顺序是（）

A.NC膜、凝胶、滤纸

B. 滤纸、NC膜、凝胶、滤纸

C.滤纸、凝胶、NC膜、滤纸

D. 凝胶、NC膜、滤纸

E.滤纸、NC膜、凝胶

74. 下列哪个是大分子核酶（）

A.锤头状RNA

B.第I类内含子

C.发夹形RNA

D.肝炎D病毒RNA

E. nuerospora Varkud satellite 核酶

75. siRNA中G+C含量一般为多少时产生的沉默效应较高（）

A.5%

B. 15%

C. 25%

D. 50%

E. 75%

76. 利用大肠杆菌表达蛋白质所使用的表达载体应具有（）

A.含大肠杆菌适宜的选择标志

B.具有能调控转录、产生大量mRNA启动子

C.无翻译起始点

D.无翻译终止序列

E.多克隆位点

77. 下列哪些材料可作为Western blot的固相膜（）

A.硝酸纤维素膜

B.尼龙膜

C.醋酸纤维素膜

D.PVDF膜

E.新华滤纸

78. siRNA的制备方法目前主要有（）

A.化学合成法

B.体外转录法

C.RNase III消化法

D. siRNA表达载体法

E.siRNA表达框架法

79. SDS-PAGE电泳中，下列哪些试剂是需要的（）

A.亚甲双丙烯酰胺

B.氧气

C.丙烯酰胺

D.过硫酸胺 E硝酸铵.

80.聚丙烯酰胺凝胶电泳具有哪些效应（）

A.电荷效应

B.浓缩效应

C.离子交换效应

D.分子筛效应

E.分子螯合效应

81. 反义RNA的作用机制主要是（）

A.抑制DNA复

B.阻止目的mRNA的成熟及向细胞内转运

C.阻止mRNA在多聚核糖体上翻译

D.抑制RNA复制

E.促进DNA复制

第八章核酸分子杂交技术

记忆要点：

1. 核酸分子杂交的原理：DNA变性后，只要消除变性条件，单链核酸分子可以与碱基互补的异源性单链形成双链杂交体。

2. Southern杂交、Northern杂交及荧光原位杂交的原理

3. 核酸分子探针的分类及标记方法

4. 核酸分子杂交的过程、杂交后信号检测方法及杂交技术的临床应用

模拟题

82. DNA链的Tm值主要取决于核酸分子的（）

A.G-C含量

B.A-T含量

C.A-G含量

D.A-C含量

E.T-G含量

83. 基因芯片技术的本质就是（）

A.核酸分子杂交技术

B.蛋白质分子杂交技术

C.聚合酶链反应技术

D.基因重组技术

E.酶切技术

84. 寡核苷酸探针的最大优势是（）

A.杂化分子稳定

B.可以区分仅仅一个碱基差别的靶序列

C.易标记

D.易合成

E.易分解

85. 检测的靶序列是RNA的技术是（）

A.Southern杂交

B. Western杂交

C.Northern杂交

D. Eastern杂交

E.杂交淋巴瘤

86. 菌落杂交可以用于（）

A.快速确定是否存在目的基因

B.不仅可以检测DNA样品中是否存在某一特定的基因，还可以获得基因片段的大小及酶切位点分布的信息

C.检测目标是RNA

D.用于基因定位分析

E.阳性菌落的筛选

87. 以等位基因特异的寡核苷酸探针杂交法诊断某常染色体隐性遗传病时，若能与突变探针及正常探针结合，则该样本为（）

A.正常人

B.杂合体患者

C.纯合体患者

D.携带者

E.不能确定

88. DNA探针的优点有（）

A.制备方法简单

B.DNA探针易降解

C. DNA探针的标记方法成熟，有多种方法可以选择

D. 克隆在质粒载体中，可以无限繁殖，取之不尽

E.单链，不存在竞争性的自身复制

89. 变形的DNA会发生哪些理化性质的变化（）

A.粘度下降

B.沉降速度增加

C.浮力下降

D.紫外线吸收增加

E.紫外线吸收减少

90. 杂交技术中，预杂交的主要目的是（）

A.平衡滤膜

B.封闭非特异性杂交的位置

C.提高杂交信号的检测效率

D.便于从滤膜上除去探针

E.清除用于杂交反应检测的显色物质

91.重组DNA的筛选可用核酸分子杂交的方法，常用于检测DNA的杂交方法有（）

A.菌落印迹杂交

B. Northern印迹杂交

C.Western杂交

D.原位杂交

E.斑点杂交

92. 下列哪些可以作为核酸探针使用（）

A.microRNA

B.单链DNA

C.寡核苷酸

D.Mrna

E.双链RNA

第九章聚合酶链反应及相关技术

记忆要点：

1. PCR反应体系和反应条件

2. 荧光定量PCR的原理

3. 在PCR产物中引入突变序列的常用方法及检测PCR产物突变序列的方法

模拟题

93.下列因子不影响聚合酶链反应忠实性的是（）

A. 退火温度

B.反应pH值

C.牛血清白蛋白

E.TaqDNA聚合酶

D. MgCl

2

94. 双脱氧终止法测定核酸序列时，使用ddNTP的作用时（）

A.作为DNA合成的正常底物

B.形成特异性终止链

C.标记合成的DNA链

D.使电泳时DNA易于检测

E.使新合成的DNA链不易形成二级结构

95. 有关于PCR的描述下列哪项不正确（）

A.是一种酶促反应

B.引物决定了扩增的特异性

C.扩增的产量按Y=A(1+X)n，A是模板量，X是扩增效率，n是循环次数

D.循环次数月多产物量越大，增加循环次数可提高产物量

E.扩增的对象是DNA序列

96. 决定PCR反应特异性和PCR产物长度的是（）

A.模板

B.dNTP

C.引物

D.缓冲液

E. Taq DNA聚合酶

97. 下列关于PCR反应引物的描述，不正确的是（）

A.引物的长度一般在18-25bp

B.引物内部不能存在连续的互补序列，防止产生二聚体和发夹结构

C.引物中G+C的含量占45%-55%

D.引物的3’端可以带生物素、荧光素或酶切位点

E.两条引物的Tm值应该尽量相近

98. 下列关于Taq DNA聚合酶的描述正确的是（）

A.催化一条双链DNA 3’端羟基与另一条双链DNA5’端磷酸形成3’-5’磷酸二酯键

B. Taq DNA聚合酶具有3’ 5’外切酶活性，PCR过程中有校正功能

C.增加酶量可以提高反应速度

D.扩增的DNA片段越长，错配几率越大，每次循环移码突变率为1/8000

E.在引物的3’羟基末端加入脱氧核苷酸，形成3’-5’磷酸二酯键

99. 下列关于Ct值的描述，错误的是（）

A.是扩增曲线与荧光本底线的交叉点除相应的反应循环数

B.可以根据Ct值的大小估计模板的初始量

C. Ct值大小与模板量成正比，Ct值越大，模板量越多

D.是定量PCR外参照系统中重要的参数A.B.C.D.

E.

E. Ct值大小与模板量成反比，Ct值越小，模板量越多

100. 未知核酸点突变的检测方法有（）

A.单链构象多态性

B.生物芯片

C.RT-PCR

D.Western blot

E.变性梯度凝胶电泳

101. 实时PCR通过对荧光信号的检测实现了对PCR过程的实时检测，荧光信号检测的主要方法有（）

A.水解探针技术

B.多重PCR

C.杂交探针技术

D.分子信标

E.原位PCR

102. 以下措施可以预防PCR实验室的污染，哪些除外（）

A.严格区分标本制备区、扩增反应区和产物分析区

B.设置阴性、阳性和内对照

C.在反应体系中使用dUTIP代替Dctp

D.减少模板核酸用量

E.254nm波长紫外线近距离充分照射103. 关于PCR-RFLP的描述，不正确的是（）

A.RFLP检测的前提是点突变的位置在限制性内切酶的酶切位点

B.基因突变后只有在产生某种限制性内切酶的酶切位点时才能使用RFLP分析

C.是目前检测基因点突变的一种简单的方法

D.水解产物可以经过电泳或Southern杂交进行检测

E.PCR-RFLP可以对任何一种点突变进行检测

104. Mg2+在PCR反应中的作用，不正确的是（）

A.提高TaqDNA聚合酶的活性

B.稳定PCR反应体系

C.当dNTP的浓度为200umol/L时，MgCl

浓度一般为1.5mmol/L较宜

2

D.在PCR中发挥作用的是结合Mg2+

E. Mg2+过低使酶活力升高，浓度过低又会产生非特异性扩增。

第十章生物芯片技术

记忆要点：

1. 生物芯片的概念及其分类

2. DNA芯片的制备方法：原位合成和直接点样。表达型芯片、SNP芯片、特定突变位点芯片所用探针的设计原则及检测原理

3. 蛋白质芯片的检测原理

模拟题

105. 常见的基因芯片合成方法有（）

A.原位合成和直接点样

B.光引导原位合成和喷墨合成

C.原位合成和在片合成

D.分子印章多次压印和在片合成

E.离片合成和直接点样

106. 关于表达型芯片探针的设计，下列说法正确的是（）

A.需要知道待测样品中靶基因的精确细节

B.序列的特异性应放在首要位置

C.对于同一目的基因不可设计多个序列不相重复的探针

D.序列一般来自于已知基因的cDNA文库，但不能来自于EST库

E.表达型基因芯片对基因的表达差异不能进行定量检测

107. 设计检测DNA突变位点的探针时（）

A.检测变化点应该对应于探针的核心

B.长度为N个碱基的突变区就需要4N+1个探针

C.一组探针包括两个野生型探针和两个突变性探针

D.该探针对某一段核酸序列所有可能的SNPs位点进行扫描

E.一般采用等长移位设计法

108. 可以作为芯片的固相载体主要有（）

A.玻片、硅片等实性材料

B.没有硝酸纤维素膜、尼龙膜及聚丙烯膜等膜性材料

C.这些载体材料无需处理，其表面存在活性基团（如羟基或者氨基）

D.可以直接固定已经合成的寡核苷酸探针

E.不需对介质表面进行化学预处理-活化

109. 基因芯片的点样法合成是（）

A.将预先合成好的寡核苷酸、cDNA或基因组DNA通过特定的高速点样机直接点在芯片基片上

B.该方法技术成本高、速度快

C.构成方阵的寡核苷酸或cDNA片断不需要事先纯化

D.多用小片断DNA

E.多用于寡核苷酸和mRNA探针的芯片制备

110. 基因芯片在临床上的应用包括（）.

A.遗传性疾病的诊断

B.肿瘤的诊断和治疗

C.感染性疾病的诊断

D.不可对药物进行大规模的筛选

E.不可进行产前筛查和诊断

111. 下列关于蛋白质芯片的叙述，哪些是正确的（）

A.将大量蛋白质分子按预先设置的排列，有序地固定于载体表面形成微阵列

B.蛋白芯片与基因芯片的原理完全不同

C.蛋白芯片上固定的分子是蛋白质

D.检测的原理是依据蛋白质分子之间的相互作用

E.不能检测蛋白与核酸、蛋白与其它分子之间的相互作用

112. 在蛋白质芯片的制备中（）

A.常用的固相载体有硅片、云母、各种膜片等

B.在将探针固定在载体上之前，不需对这些固相载体进行特殊处理修饰

C.探针包括特定的抗原、抗体

D.探针不包括酶、吸水或疏水物质

E.探针包括结合某些阳离子或阴离子的化学基团

第十一章分子生物学检验技术的临床应用

记忆要点：

分子生物学检验技术在临床上的应用主要有：各种病源微生物的检测；耐药检测及分子流行病学调查；人类基因组相关疾病的检测；器官移植配型及亲子鉴定等。

模拟题

113. 被称为第三代DNA遗传标志的是（）

A.RFLP

B.VNTR

C.SNP

D.STR

E.EST

114. 有关SNP位点的描述，不正确的是（）

A.单个SNP位点遗传信息含量大，因此具有广泛的应用前景

B.被称为第三代DNA遗传标志

C.在整个基因组中大约有300万个SNP位点

D.生物芯片技术可以提高SNP位点的检测

E.SNP位点存在单个核苷酸的变异

115. HBV DNA定量达到多少以上可以提示复制活跃（）

A.107copies/ml

B. 106copies/ml

C. 105copies/ml

D. 108copies/ml

E. 104copies/ml

116. 拉米夫定耐药性突变基因位于HBV DNA哪个区（）

A.S区

B.P区

C. C区

D.X区

E.前C区

117. 下列哪个不属于染色体以外的遗传因子（）

A.真核生物的线粒体

B.病毒核酸

C.细菌的质粒

D.转位因子

E.叶绿体

118-119题共用下列选项

A.荧光定量PCR技术

B.PCR-RFLP技术

C.PCR微卫星检测技术

D.原位杂交技术

E.cDNA表达芯片技术

118. 用于基因定位的技术是（）

119. 用于基因突变检测技术的是（）

120. 亲子鉴定中目前应用最广泛的方法是（）

A.基因测序

B.多个SNP位点检测

C. PCR-RFLP技术

D.PCR-SSCP技术

E. 不同染色体上STR（短串联重复序列）位点基因扫描

121. 下列属于原发性高血压相关基因的是（）

A.血管紧张素原基因

B.线粒体基因

C.血管紧张素转换酶基因

D.肾素基因

E.葡萄糖激酶基因

122. 下列哪些技术可以用于检测结核分枝杆菌利福平耐药基因突变（）

A.RFLP

B.SSCP

C.DNA探针

D.Spoligotyping

E.ELISA

分子生物学检验技术参考答案与解析

1 E

2 A

3 ABD解析：癌基因通过点突变、甲基化程度降低、基因扩增等使基因编码产物的结构和功能发生变化和（或）表达量增加，导致细胞恶性增生。

4 CE

5 AB

6 ABCD 6

7 B

8 D

9 E 10 C 11 C 12 C 13 A 14 A 15 C 16 D 17 A解析：5’端非编码区是整个HCV基因组中最保守的区域18 ADE 19 BD 20 ABC 21 CDE 22 B 23 C 24 E 25 A 26 C 27 B 28 A 29 A 30 D 31 ABDE解析：DNase I随机水解核苷酸中的磷酸二酯键，无碱基特异性，而DNA结合蛋白可保护相应的DNA位点不受DNase I水解。 32 ABD 33 A 34 C 35 D 36 A 37 B 38 D解析：src家族的癌基因产物具有使酪氨酸磷酸化的蛋白激酶活性；ras家族所编码的蛋白为P21，可与GTP结合，并具有GTP酶活性；sis家族所编码的蛋白为P28，其结构与血小板衍生生长因子（PDGF）相似。

39 C 40 D 41 A 42 B 43.E解析：肿瘤发生时，基因的甲基化是降低的

44.AC 45.ABCDE 46.D 47.A 48.B解析：核酸纯度检定常用A

260/A

280

比值来

测定。蛋白质和酚分别在280nm、270nm处有吸收峰，可使比值降低。纯DNA的比值为1.8，纯RNA的比值为2.0，但受核酸污染后比值为1.8的DNA制品不一定为纯DNA。

49.D 50.C 51.E 52.C 53.B 54.DE 55.BCE 56.ABE 57.A 58.E 59.C 60.D 61.E 62.E 63.A 64.B 65.C 66.C解析：对数生长期的细菌可以诱导成为感受态细胞，并且重组DNA进入感受态细胞后，细菌恢复原状并繁殖。

67.BCE 68.CDE 69.ABC 70.CDE 71.E 72.C 73.C 74.B 75.D 76.ABE 77.ABD 78.ABCDE 79.ACD 80.ABD 81.ABC解析：反义RNA与引物RNA前体互补结合，抑制DNA复制；在转录后，影响mRNA5’端加帽，影响mRNA的剪接；阻止mRNA在核糖体上翻译。

82.A 83.A 84.B 85.C 86.E 87.D 88.ACD 89.ABD 90.AB解析：预杂交主要是为了平衡滤膜并封闭薄膜上可能与探针发生非特异性杂交的部位。

91.ADE 92.BCD 93.C 94.B 95.D 96.C 97.D 98.E 99.C 100.ABE 101.ACD 102.CD 103.BE解析：RFLP是根据PCR产物的突变序列是否位于限制性内切酶的酶切位点而设计的，由于突变造成酶切位点的产生或消失，从而经酶切后产生不同长度的片断。 104.DE 105.A 106.B 107.A解析：突变位点位于探针中心时，探针的辨别能力较强。以突变区域的每一个碱基为中心左右两侧各取15-25bp的靶序列，合成野生型探针，然后将中心为点的碱基分别用其它3种碱基替换，得到三个突变性探针，这样就构成针对该位点的一组探针（一个野生型，三个突变型）。长度为N个碱基的突变区，就需要4N个探针。

108.A 109.A 110.ABC 111.ACD 112.ACE 113.C 114.A 115.A 116.B 117.B 118.D 119.B 120.E 121.ACD 122.ABC解析：A、B、C均可用于基因突变的检测，而D可用于病原体的基因分型。

医学分子生物学讲义复习重点

分子生物学 1.ORF 答:ORF是open reading frame的缩写，即开放阅读框架。在DNA链上，由蛋白质合成的起始密码开始，到终止密码为止的一个连续编码列，叫做一个开放阅读框架。 2.结构基因 答：结构基因（structural genes）可被转录形成mRNA,并翻译成多肽链，构成各种结构蛋白质或催化各种生化反应的酶和激素等。 3.断裂基因 答：基因是核酸分子中贮存遗传信息的遗传单位，一个基因不仅仅包括编码蛋白质或 RNA 的核酸序列，还包括保证转录所必需的调控序列、位于编码区 5 ' 端与 3 ' 端的非编码序列和内含子。真核生物的结构基因，由若干个编码区和非编码区互相间隔开但又连续镶嵌而成，去除非编码区再连接后，可翻译出由连续氨基酸组成的完整蛋白质，这些基因称为断裂基因（split gene）。 4.选择性剪接 答：选择性剪接（也叫可变剪接）是指从一个mRNA前体中通过不同的剪接方式（选择不同的剪接位点组合）产生不同的mRNA剪接异构体的过程，而最终的蛋白产物会表现出不同或者是相互拮抗的功能和结构特性，或者，在相同的细胞中由于表达水平的不同而导致不同的表型。 5.C值 答：基因组的大小通常以其DNA的含量来表示，我们把一种生物体单倍体基因组DNA的总量成为C值（C value）。 6.生物大分子 答：生物大分子指的是作为生物体内主要活性成分的各种分子量达到上万或更多的有机分子。常见的生物大分子包括蛋白质、核酸、脂类、糖类。 7.酚抽提法 答：酚抽提法最初于1976年由Stafford及其同事提出，通过改良，以含EDTA、SDS及无DNA酶的RNA酶裂解缓冲液破碎细胞，经蛋白酶K处理后，用pH8.0的Tris饱和酚抽提DNA，重复抽提至一定纯度后，根据不同需要进行透析或沉淀处理获得所需的DNA样品。 8.凝胶过滤层析 答：凝胶过滤层析也称分子排阻层析或分子筛层析，利用凝胶分子筛对大小、形状不同的分子进行层析分离，是根据分子大小分离蛋白质混合物最有效的方法之一。 9.多重PCR 答：多重PCR技术是在一个反应体系中加入多对引物，同时扩增出多个核酸片段，由于每对引物扩增的片段长度不同，可用琼脂糖凝胶电泳或毛细管电泳等技术加以鉴别。 10.荧光域值 答：荧光阈值是在荧光扩增曲线上人为设定的一个值，它可以设定在荧光信号指数扩增阶段任意位置上，一般荧光阈值的设置是基线荧光信号的标准偏差的10倍。 11.退火 答：温度突然降至37-58℃时，变性的DNA单链在碱基互补的基础上重新形成氢

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现代分子生物学 复习提纲 第一章绪论 第一节分子生物学的基本含义及主要研究内容 1 分子生物学Molecular Biology的基本含义 ?广义的分子生物学：以核酸和蛋白质等生物大分子的结构及其在遗传信息和细胞信息传递中的作用为研究 对象，从分子水平阐明生命现象和生物学规律。 ?狭义的分子生物学：偏重于核酸（基因）的分子生物学，主要研究基因或DNA的复制、转录、表达和调控 等过程，也涉及与这些过程相关的蛋白质和酶的结构与功能的研究。 1.1 分子生物学的三大原则 1) 构成生物大分子的单体是相同的 2) 生物遗传信息表达的中心法则相同 3) 生物大分子单体的排列（核苷酸、氨基酸）的不同 1.3 分子生物学的研究内容 ●DNA重组技术（基因工程） ●基因的表达调控 ●生物大分子的结构和功能研究(结构分子生物学） ●基因组、功能基因组与生物信息学研究 第二节分子生物学发展简史 1 准备和酝酿阶段 ?时间：19世纪后期到20世纪50年代初。 ?确定了生物遗传的物质基础是DNA。 DNA是遗传物质的证明实验一：肺炎双球菌转化实验 DNA是遗传物质的证明实验二：噬菌体感染大肠杆菌实验 RNA也是重要的遗传物质-----烟草花叶病毒的感染和繁殖过程 2 建立和发展阶段 ?1953年Watson和Crick的DNA双螺旋结构模型作为现代分子生物学诞生的里程碑。 ?主要进展包括： ?遗传信息传递中心法则的建立 3 发展阶段 ?基因工程技术作为新的里程碑，标志着人类深入认识生命本质并能动改造生命的新时期开始。 ? 第三节分子生物学与其他学科的关系 思考 ?证明DNA是遗传物质的实验有哪些？ ?分子生物学的主要研究内容。 ?列举5～10位获诺贝尔奖的科学家，简要说明其贡献。

分子生物学

分子标志物：指可以反映机体生理、病理状态的核酸、蛋白质（多肽）、代谢产物等生物分子。 DNA结构： DNA的二级结构是双螺旋结构：DNA分子由两条相互平行但走向相反的脱氧多核苷酸链组成，两链以-脱氧核糖-磷酸-为骨架，以右手螺旋方式绕同一公共轴盘。螺旋直径为2nm，形成大沟(major groove) 及小沟(minor groove)相间。碱基垂直螺旋轴居双螺旋内側，与对側碱基形成氢键配对（互补配对形式：A=T;G=C）。相邻碱基平面距离0.34nm，螺旋一圈螺距3.4nm，一圈10对碱基。 DNA的三级结构是超螺旋结构：DNA双螺旋链再盘绕即形成超螺旋结构。正超螺旋(positive super coil)盘绕方向与DNA双螺旋方同相同负超螺旋(negative super coil)盘绕方向与DNA双螺旋方向相反。 原核生物DNA的是环状超螺旋结构 核小体(nucleosome) 是染色质的基本组成单位，由DNA和蛋白质构成。组蛋白：H1、H2A、H2B、H3、H4 RNA结构： 一级结构：核苷酸连接方式同DNA。RNA的一级结构即指核苷酸的连接方式、数量和排列 方式。 主要结构特征：①含有稀有碱基（修饰碱基）；②不遵守Char gaff原则；③多数为单链分子，形成链内双链二级结构（发夹结构）；④碱基配对：A-U，G-C。 t RNA二级结构：DHU环反密码环额外环 TΨC环氨基酸臂 t RNA的三级结构是倒L型 t RNA的功能：活化、搬运氨基酸到核糖体，参与蛋白质的翻译。 m RNA的结构与功能: 1）基本特点：含量低（约占总RNA的1%～5%）；种类多（上万种）；分子大小差异大（几百～约2万个核苷酸）；半衰期短。 2）结构特点：编码区——决定蛋白质的一级结构，包括起始密码子、终止密码子、外显子。非编码区——与蛋白质生物合成的调控有关，包括5′非编码区（帽结构、核蛋白体识别结合位点等）、3′非编码区（多聚腺苷酸尾）、间隔序列（内含子）。大多数真核m RNA 的5′末端均在转录后加上一个7-甲基鸟苷，同时第一个核苷酸的C′2甲基化，形成帽子结构m7GpppN-。大多数真核m RNA的3′末端有一个多聚腺苷酸(poly A)结构，称为多聚A尾3）功能：作为蛋白质合成的模板。 帽子结构和多聚A尾的功能：m RNA核内向胞质的转位、m RNA的稳定性维系、翻译起始的调控 增色效应：核酸分子在变性过程中，其溶液的A260会增大，此现象称为增色效应。 融解温度（Tm）：DNA分子热变性程度达到50%时所对应的温度，称为融解温度或解链温度。 Tm的影响因素： ①DNA分子的碱基组成Tm与DNA分子碱基组成的关系 AT富集区先解链，GC富集区后解链。 ②溶液的离子强度一般情况下，在低离子强度溶液中，DNA的Tm较低， 且解链温度范围较宽；在高离子强度溶液中，Tm较高，解链温度范围较窄。 ③ pH 一般情况下，核酸溶液的pH在5~9范围内，DNA的Tm变化不明显；当溶液的pH<4或>11时，DNA的Tm会降低。

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分子生物学试题及答案 一、名词解释 1．cDNA与cccDNA：cDNA是由mRNA通过反转录酶合成的双链DNA；cccDNA是游离于染色体之外的质粒双链闭合环形DNA。 2．标准折叠单位：蛋白质二级结构单元α－螺旋与β－折叠通过各种连接多肽可以组成特殊几何排列的结构块，此种确定的折叠类型通常称为超二级结构。几乎所有的三级结构都可以用这些折叠类型，乃至他们的组合型来予以描述，因此又将其称为标准折叠单位。 3．CAP：环腺苷酸（cAMP）受体蛋白CRP（cAMP receptor protein ），cAMP与CRP结合后所形成的复合物称激活蛋白CAP（cAMP activated protein ） 4．回文序列：DNA片段上的一段所具有的反向互补序列，常是限制性酶切位点。 5．micRNA：互补干扰RNA或称反义RNA，与mRNA序列互补，可抑制mRNA的翻译。 6．核酶：具有催化活性的RNA，在RNA的剪接加工过程中起到自我催化的作用。 7．模体：蛋白质分子空间结构中存在着某些立体形状和拓扑结构颇为类似的局部区域 8．信号肽：在蛋白质合成过程中N端有15~36个氨基酸残基的肽段，引导蛋白质的跨膜。 9．弱化子：在操纵区与结构基因之间的一段可以终止转录作用的核苷酸序列。 10．魔斑：当细菌生长过程中，遇到氨基酸全面缺乏时，细菌将会产生一个应急反应，停止全部基因的表达。产生这一应急反应的信号是鸟苷四磷酸(ppGpp)和鸟苷五磷酸（pppGpp）。PpGpp与pppGpp的作用不只是一个或几个操纵子，而是影响一大批，所以称他们是超级调控子或称为魔斑。 11．上游启动子元件：是指对启动子的活性起到一种调节作用的DNA序列，-10区的TATA、-35区的TGACA 及增强子，弱化子等。 12．DNA探针：是带有标记的一段已知序列DNA，用以检测未知序列、筛选目的基因等方面广泛应用。13．SD序列：是核糖体与mRNA结合序列，对翻译起到调控作用。 14．单克隆抗体：只针对单一抗原决定簇起作用的抗体。 15．考斯质粒：是经过人工构建的一种外源DNA载体，保留噬菌体两端的COS区，与质粒连接构成。16．蓝-白斑筛选：含LacZ基因（编码β半乳糖苷酶）该酶能分解生色底物X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷)产生蓝色，从而使菌株变蓝。当外源DNA插入后，LacZ基因不能表达，菌株呈白色，以此来筛选重组细菌。称之为蓝-白斑筛选。 17．顺式作用元件：在DNA中一段特殊的碱基序列，对基因的表达起到调控作用的基因元件。18．Klenow酶：DNA聚合酶I大片段，只是从DNA聚合酶I全酶中去除了5’→3’外切酶活性 19．锚定PCR：用于扩增已知一端序列的目的DNA。在未知序列一端加上一段多聚dG的尾巴，然后分别用多聚dC和已知的序列作为引物进行PCR扩增。 20．融合蛋白：真核蛋白的基因与外源基因连接，同时表达翻译出的原基因蛋白与外源蛋白结合在一起所组成的蛋白质。 二、填空 1． DNA的物理图谱是DNA分子的（限制性内切酶酶解）片段的排列顺序。 2． RNA酶的剪切分为（自体催化）、（异体催化）两种类型。 3．原核生物中有三种起始因子分别是（IF-1）、（IF-2）和（IF-3）。 4．蛋白质的跨膜需要（信号肽）的引导，蛋白伴侣的作用是（辅助肽链折叠成天然构象的蛋白质）。5．启动子中的元件通常可以分为两种：（核心启动子元件）和（上游启动子元件）。 6．分子生物学的研究内容主要包含（结构分子生物学）、（基因表达与调控）、（DNA重组技术）三部分。7．证明DNA是遗传物质的两个关键性实验是（肺炎球菌感染小鼠）、（ T2噬菌体感染大肠杆菌）这两个实验中主要的论点证据是：（生物体吸收的外源DNA改变了其遗传潜能）。 8．hnRNA与mRNA之间的差别主要有两点：（hnRNA在转变为mRNA的过程中经过剪接，）、 （mRNA的5′末端被加上一个m7pGppp帽子，在mRNA3′末端多了一个多聚腺苷酸(polyA)尾巴）。 9．蛋白质多亚基形式的优点是（亚基对DNA的利用来说是一种经济的方法）、（可以减少蛋白质合成过程中随机的错误对蛋白质活性的影响）、（活性能够非常有效和迅速地被打开和被关闭）。 10．蛋白质折叠机制首先成核理论的主要内容包括（成核）、（结构充实）、（最后重排）。 11．半乳糖对细菌有双重作用；一方面（可以作为碳源供细胞生长）；另一方面（它又是细胞壁的成分）。所以需要一个不依赖于cAMP—CRP的启动子S2进行本底水平的永久型合成；同时需要一个依赖于cAMP—CRP的启动子S1对高水平合成进行调节。有G时转录从（ S2）开始，无G时转录从（ S1）开

分子生物学--名词解释(全)

1. 半保留复制（semiconservative replication）：DNA复制时，以亲代DNA的每一股做模板，以碱基互补配对原则，合成完全相同的两个双链子代DNA，每个子代DNA中都含有一股亲代DNA链，这种现象称为半保留复制。 2.复制子replicon：由一个复制起始点构成的DNA复制单位。 57. 复制起始点(Ori C)DNA在复制时，需在特定的位点起始，这是一些具有特定核苷酸序列顺序的片段，即复制起始点。 24.（35）复制叉（replication fork）是DNA复制时在DNA链上通过解旋、解链和SSB蛋白的结合等过程形成的Y字型结构称为复制叉。 3. Klenow 片段klenow fragment：DNApol I（DNA聚合酶I）被酶蛋白切开得到的大片段。 4. 外显子exon、extron：真核细胞基因DNA中的编码序列，这部分可转录为RNA，并翻译成蛋白质，也称表达序列。 5.（56）核心启动子core promoter：指保证RNA聚合酶Ⅱ转录正常起始所必需的、最少的DNA序列，包括转录起始位点及转录起始位点上游TATA区。（Hogness区） 6. 转录（transcription）：是在DNA的指导下的RNA聚合酶的催化下，按照硷基配对的原则，以四种核苷酸为原料合成一条与模板DNA互补的RNA 的过程。 7. 核酶（ribozyme）：是具有催化功能的RNA分子，是生物催化剂，可降解特异的mRNA序列。 8.（59）信号肽signal peptide：常指新合成多肽链中用于指导蛋白质的跨膜转移（定位）的N-末端的氨基酸序列（有时不一定在N端）。 9.顺式作用元件（cis-acting element）：真核生物DNA中与转录调控有关的核苷酸序列，包括增强子、沉默子等。 10.错配修复（mismatch repair，MMR）：在含有错配碱基的DNA分子中，使正常核苷酸序列恢复的修复方式；主要用来纠正DNA双螺旋上错配的碱基对，还能修复一些因复制打滑而产生的小于4nt的核苷酸插入或缺失。修复的过程是：识别出正确的链，切除掉不正确的部分，然后通过DNA聚合酶III和DNA连接酶的作用，合成正确配对的双链DNA。 直接修复direct repair：是将被损伤碱基恢复到正常状态的修复。有三种修复方式：1光复活修复2、O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶修复3单链断裂修复。

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分子生物学 第一章绪论 分子生物学研究内容有哪些方面？ 1、结构分子生物学； 2、基因表达的调节与控制； 3、DNA重组技术及其应用； 4、结构基因组学、功能基因组学、生物信息学、系统生物学 第二章DNA and Chromosome 1、DNA的变性：在某些理化因素作用下，DNA双链解开成两条单链的过程。 2、DNA复性：变性DNA在适当条件下，分开的两条单链分子按照碱基互补原则重新恢复天然的双螺旋构象的现象。 3、Tm(熔链温度)：DNA加热变性时，紫外吸收达到最大值的一半时的温度，即DNA分子内50%的双链结构被解开成单链分子时的温度） 4、退火：热变性的DNA经缓慢冷却后即可复性，称为退火 5、假基因：基因组中存在的一段与正常基因非常相似但不能表达的DNA序列。以Ψ来表示。 6、C值矛盾或C值悖论:C值的大小与生物的复杂度和进化的地位并不一致，称为C值矛盾或C值悖论(C-Value Paradox)。 7、转座：可移动因子介导的遗传物质的重排现象。 8、转座子：染色体、质粒或噬菌体上可以转移位置的遗传成分 9、DNA二级结构的特点：1）DNA分子是由两条相互平行的脱氧核苷酸长链盘绕而成；2）DNA分子中的脱氧核苷酸和磷酸交替连接，排在外侧，构成基本骨架，碱基排列在外侧；3）DNA分子表面有大沟和小沟；4）两条链间存在碱基互补，通过氢键连系，且A=T、G ≡ C（碱基互补原则）；5）螺旋的螺距为3.4nm，直径为2nm，相邻两个碱基对之间的垂直距离为0.34nm，每圈螺旋包含10个碱基对；6）碱基平面与螺旋纵轴接近垂直，糖环平面接近平行 10、真核生物基因组结构：编码蛋白质或RNA的编码序列和非编码序列，包括编码区两侧的调控序列和编码序列间的间隔序列。 特点：1）真核基因组结构庞大哺乳类生物大于2X109bp；2）单顺反子（单顺反子：一个基因单独转录，一个基因一条mRNA，翻译成一条多肽链；）3）基因不连续性断裂基因（interrupted gene）、内含子(intron)、外显子(exon)；4）非编码区较多，多于编码序列(9:1) 5）含有大量重复序列 11、Histon(组蛋白)特点：极端保守性、无组织特异性、氨基酸分布的不对称性、可修饰作用、富含Lys的H5 12、核小体组成：由组蛋白和200bp DNA组成 13、转座的机制：转座时发生的插入作用有一个普遍的特征，那就是受体分子中有一段很短的被称为靶序列的DNA会被复制，使插入的转座子位于两个重复的靶序列之间。 复制型转座：整个转座子被复制，所移动和转位的仅为原转座子的拷贝。 非复制型转座：原始转座子作为一个可移动的实体直接被移位。 第三章DNA Replication and repair 1、半保留复制：DNA生物合成时，母链DNA解开为两股单链，各自作为模板(template)按碱

分子生物学基础知识要点

Northern blot：是DNA/RNA的杂交，它是一项用于检测特异性RNA的技术，RNA混合物首先按照它们的大小和相对分子量通过变性琼脂糖凝胶电泳加以分离，凝胶分离后的RNA 通过southern印迹转移到尼龙膜或硝酸纤维素膜上，再与标记的探针进行杂交反应，通过杂交结果分析可以对转录表达进行定量或定性。它是研究基因表达的有效手段。与Southern blot 相比，它的条件更严格些，特别是RNA容易降解，前期制备和转膜要防止Rnase的污染。实验步骤：1.用具的准备2．用RNAZaP去除用具表面的RNase酶污染3．制胶4. RNA样品的制备5.电泳6.转膜7.探针的制备8.探针的纯化及比活性测定9．预杂交10．探针变性11．杂交12．洗膜13．曝光14．去除膜上的探针15．杂交结果 半定量PCR要求比普通PCR更严格一些，另外往往通过转膜后的同位素杂交检测或凝胶成像后的灰度测定比较样品间的差异。 半定量RT-PCR一般是在没有条件做实时PCR 的情况下使用，用于测定体内目的基因的表达增加减少与否，即通过目的基因跑出来的电泳带与管家基因（如β-actin）的电泳带的相对含量比较，观测目的基因表达增减，另外还要做一个β-actin的内参照对照。 实时荧光定量PCR技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。 1．实时荧光定量PCR无需内标 2．内标对实时荧光定量PCR的影响 Sybr green（荧光染料掺入法）和Taqman probe（探针法） 检测两种蛋白质相互作用方法 1共纯化、共沉淀，在不同基质上进行色谱层析 2蛋白质亲和色谱基本原理是将一种蛋白质固定于某种基质上（如Sepharose），当细胞抽提液经过改基质时，可与改固定蛋白相互作用的配体蛋白被吸附，而没有吸附的非目标蛋白则随洗脱液流出。被吸附的蛋白可以通过改变洗脱液或者洗脱条件而回收下来。 3免疫共沉淀免疫共沉淀是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。改法的优点是蛋白处于天然状态，蛋白的相互作用可以在天然状态下进行，可以避免认为影响；可以分离得到天然状态下相互作用的蛋白复合体。缺点：免疫共沉淀同样不能保证沉淀的蛋白复合物时候为直接相互作用的两种蛋白。另外灵敏度不如亲和色谱高4 Far-Western 又叫做亲和印记。将PAGE胶上分离好的凡百样品转移到硝酸纤维膜上，然后检测哪种蛋白能与标记了同位素的诱饵蛋白发生作用，最后显影。缺点是转膜前需要将蛋白复性。 1.酵母双杂交 2.GSTpull-down实验 3.免疫共沉淀 4.蛋白质细胞内定位 RACE是基于PCR技术基础上由已知的一段cDNA片段，通过往两端延伸扩增从而获得完整的3'端和5'端的方法 1.此方法是通过PCR技术实现的，无须建立cDNA文库，可以在很短的时间内获得有 利用价值的信息 2.节约了实验所花费的经费和时间。 3.只要引物设计正确，在初级产物的基础上可以获得大量的感兴趣基因的全长 基因特异性引物（GSPs）应该是： 23－28nt 50－70％GC Tm值≥65度，Tm值≥70度可以获得好的结果 注意事项 1.cDNA的合成起始于polyA+RNA。如果使用其它的基因组DNA或总RNA，背景会很高

分子生物学与基因工程复习资料

分子生物学与基因工程 绪论 1、分子生物学与基因工程的含义 从狭义上讲，分子生物学主要是研究生物体主要遗传物质-基因或DNA的结构及其复制、转录、表达和调节控制等过程的科学。 基因工程是一项将生物的某个基因通过载体运送到另一种生物的活体细胞中，并使之无性繁殖和行使正常功能，从而创造生物新品种或新物种的遗传学技术。 2、分子生物学与基因工程的发展简史，特别是里程碑事件，要求掌握其必要的理由 上个世纪50年代，Watson和Crick提出了的DNA双螺旋模型； 60年代，法国科学家Jacob和Monod提出了的乳糖操纵子模型； 70年代，Berg首先发现了DNA连接酶，并构建了世界上第一个重组DNA分子； 80年代，Mullis发明了聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction，PCR）技术； 90年代，开展了“人类基因组计划”和模式生物的基因组测序，分子生物学进入“基因组时代” 3、分子生物学与基因工程的专业地位与作用。 核酸概述 1、核酸的化学组成 2、核酸的种类与特点：DNA和RNA的区别 （1）DNA含的糖分子是脱氧核糖，RNA含的是核糖；

（2）DNA含有的碱基是腺嘌呤（A）、胞嘧啶（C）、鸟嘌呤（G）和胸腺嘧啶（T），RNA含有的碱基前3个与DNA完全相同，只有最后一个胸腺嘧啶被尿嘧啶（U）所代替； （3）DNA通常是双链，而RNA主要为单链； （4）DNA的分子链一般较长，而RNA分子链较短。 3、DNA作为遗传物质的直接和间接证据； 间接： （1）一种生物不同组织的细胞，不论年龄大小，功能如何，它的DNA含量是恒定的，而生殖细胞精子的DNA含量则刚好是体细胞的一半。多倍体生物细胞的DNA含量是按其染色体倍数性的增加而递增的，但细胞核里的蛋白质并没有相似的分布规律。 （2）DNA在代谢上较稳定。 （3）DNA是所有生物的染色体所共有的，而某些生物的染色体上则没有蛋白质。（4）DNA通常只存在于细胞核染色体上，但某些能自体复制的细胞器，如线粒体、叶绿体有其自己的DNA。 （5）在各类生物中能引起DNA结构改变的化学物质都可引起基因突变。 直接：肺炎链球菌试验、噬菌体侵染实验 4、DNA的变性与复性：两者的含义与特点及应用 变性：它是指当双螺旋DNA加热至生理温度以上（接近100oC）时，它就失去生理活性。这时DNA双股链间的氢键断裂，最后双股链完全分开并成为无规则线团的过程。简而言之，就是DNA从双链变成单链的过程。

分子生物学总结完整版

分子生物学总结完整版 1、结构分子生物学； 2、基因表达的调节与控制； 3、DNA重组技术及其应用； 4、结构基因组学、功能基因组学、生物信息学、系统生物学 第二章DNA and Chromosome 1、DNA的变性：在某些理化因素作用下，DNA双链解开成两条单链的过程。 2、 DNA复性：变性DNA在适当条件下，分开的两条单链分子按照碱基互补原则重新恢复天然的双螺旋构象的现象。 3、 Tm(熔链温度)： DNA加热变性时，紫外吸收达到最大值的一半时的温度，即DNA分子内50%的双链结构被解开成单链分子时的温度） 4、退火：热变性的DNA经缓慢冷却后即可复性，称为退火 5、假基因：基因组中存在的一段与正常基因非常相似但不能表达的DNA序列。以Ψ来表示。 6、 C值矛盾或C值悖论:C值的大小与生物的复杂度和进化的地位并不一致，称为C值矛盾或C值悖论(C-Value Paradox)。 7、转座：可移动因子介导的遗传物质的重排现象。 8、转座子：染色体、质粒或噬菌体上可以转移位置的遗传成分

9、 DNA二级结构的特点：1）DNA分子是由两条相互平行的脱氧核苷酸长链盘绕而成；2）DNA分子中的脱氧核苷酸和磷酸交替连接，排在外侧，构成基本骨架，碱基排列在外侧；3）DNA分子表面有大沟和小沟；4）两条链间存在碱基互补，通过氢键连系，且A=T、G ≡ C（碱基互补原则）；5）螺旋的螺距为 3、4nm，直径为2nm，相邻两个碱基对之间的垂直距离为0、34nm，每圈螺旋包含10个碱基对；6）碱基平面与螺旋纵轴接近垂直，糖环平面接近平行 10、真核生物基因组结构：编码蛋白质或RNA的编码序列和非编码序列，包括编码区两侧的调控序列和编码序列间的间隔序列。特点：1）真核基因组结构庞大哺乳类生物大于2X109bp；2）单顺反子（单顺反子：一个基因单独转录，一个基因一条mRNA，翻译成一条多肽链；）3）基因不连续性断裂基因（interrupted gene）、内含子(intron)、外显子(exon)；4）非编码区较多，多于编码序列(9:1) 5）含有大量重复序列1 1、Histon(组蛋白)特点：极端保守性、无组织特异性、氨基酸分布的不对称性、可修饰作用、富含Lys的H5 12、核小体组成： 由组蛋白和200bp DNA组成 13、转座的机制：转座时发生的插入作用有一个普遍的特征，那就是受体分子中有一段很短的被称为靶序列的DNA会被复

分子生物学期末考试重点

1.定义重组DNA技术 将不同的DNA片段按照人们的设计定向连接起来，然后在特定的受体细胞中与载体同时复制并得到表达，产生影响受体细胞的新的遗传性状。 2.说出分子生物学的主要研究内容 1.DNA重组技术 2.基因表达研究调控 3.生物大分子的结构功能研究 4.基因组、功能基因组与生物信息学研究 3.简述DNA的一、二、三级结构 一级：4种核苷酸的连接及排列顺序，表示了该DNA分子的化学成分 二级：2条多核苷酸连反向平行盘绕所形成的双螺旋结构 三级：DNA双螺旋进一步扭曲盘绕所形成的特定的空间结构 4.原核生物DNA具有哪些不同于真核生物DNA的特征？ ①DNA双螺旋是由2条互相平行的脱氧核苷酸长链盘绕而成，多核苷酸的方向由核苷酸间的磷酸二酯键的走向决定，一条是5---3，另一条是3---5②DNA双螺旋中脱氧核糖和磷酸交替连接，排在外侧构成基本骨架，碱基排在内侧③两条链上的碱基通过氢键相结合，形成碱基对 5.DNA双螺旋结构模型是由谁提出的？沃森和克里克 6.DNA以何种方式进行复制，如何保证DNA复制的准确性？ 线性DNA的双链复制：将线性复制子转变为环状或者多聚分子，在DNA末端形成发卡式结构，使分子没有游离末端，在某种蛋白质的介入下在真正的末端上启动复制。环状DNA 复制：θ型、滚环型、D型 ①以亲代DNA分子为模板进行半保留复制，复制时严格按照碱基配对原则 ②DNA聚合酶I 非主要聚合酶，可确保DNA合成的准确性

③DNA修复系统：错配修复、切除修复、重组修复、DNA直接修复、SOS系统 7.简述原核生物DNA复制特点 只有一个复制起点，复制起始点上可以连续开始新的DNA复制，变现为虽只有一个复制单元，但可以有多个复制叉 8.真核生物DNA的复制在哪些水平上受到调控？ 细胞生活周期水平调控；染色体水平调控；复制子水平调控 9.细胞通过哪几种修复系统对DNA损伤进行修复？ 错配修复，恢复错配；切除修复，切除突变的碱基和核苷酸片段；重组修复，复制后的修复；DNA直接修复，修复嘧啶二聚体；SOS系统，DNA的修复，导致变异 10.什么是转座子？分为哪些种类？ 是存在于染色体DNA上可自主复制和移动的基本单位。可分为插入序列和复合型转座子11.什么是编码链？什么是模板链？ 与mRNA序列相同的那条DNA链称为编码链，另一条根据碱基互补配对原则指导mRNA 合成DNA链称为模板链 12.简述RNA的种类及其生物学作用 mRNA：编码了一个或多个多肽链序列。 tRNA：把mRNA上的遗传信息变为多肽中的氨基酸信息。 rRNA：是核糖体中的主要成分。 hnRNA：由DNA转录生成的原始转录产物。 snRNA：核小RNA，在前体mRNA加工中，参与去除内含子。 snoRNA：核仁小RNA，主要参与rRNA及其它RNA的修饰、加工、成熟等过程。scRNA：细胞质小RNA在蛋白质合成过程起作用。

分子生物学复习题(有详细答案)

绪论 思考题：（P9） 1.从广义和狭义上写出分子生物学的定义？ 广义上讲的分子生物学包括对蛋白质和核酸等生物大分子结构与功能的研究，以及从分子水平上阐明生命的现象和生物学规律。 狭义的概念，即将分子生物学的范畴偏重于核酸（基因）的分子生物学，主要研究基因或DNA结构与功能、复制、转录、表达和调节控制等过程。其中也涉及与这些过程相关的蛋白质和酶的结构与功能的研究。 2、现代分子生物学研究的主要内容有哪几个方面？什么是反向生物学？什么是 后基因组时代？ 研究内容： DNA的复制、转录和翻译；基因表达调控的研究；DNA重组技术和结构分子生物学。 反向生物学：是指利用重组DNA技术和离体定向诱变的方法研究已知结构的基因相应的功能，在体外使基因突变，再导入体内，检测突变的遗传效应，即以表型来探索基因结构。 后基因组时代：研究细胞全部基因的表达图式和全部蛋白质图式，人类基因组研究由结构向功能转移。 3、写出三个分子生物写学展的主要大事件（年代、发明者、简要内容） 1953年Watson和Click发表了?脱氧核糖核苷酸的结构?的著名论文，提出了DNA的双螺旋结构模型。 1972~1973年，重组DNA时代的到来。H.Boyer和P.Berg等发展了重组DNA 技术，并完成了第一个细菌基因的克隆，开创了基因工程新纪元。 1990~2003年美、日、英、法、俄、中六国完成人类基因组计划。解读人类遗传密码。 4、21世纪分子生物学的发展趋势是怎样的？ 随着基因组计划的完成，人类已经掌握了模式生物的所有遗传密码。又迎来了后基因组时代，人类基因组的研究重点由结构向功能转移。相关学说理论相应诞生，如功能基因组学、蛋白质组学和生物信息学。生命科学又进入了一个全新的时代。 第四章 思考题：（P130） 1、基因的概念如何？基因的研究分为几个发展阶段？ 概念：基因是原核、真核生物以及病毒的DNA和RNA分子中具有遗传效应的核苷酸序列，是遗传的基本单位和突变单位以及控制形状的功能单位。 发展阶段：○120世纪50年代以前，主要从细胞的染色体水平上进行研究，属于基因的染色体遗传学阶段。 ○220世纪50年代以后，主要从DNA大分子水平上进行研究，属于分

分子生物学知识点归纳

分子生物学 1．DNA的一级结构：指DNA分子中核苷酸的排列顺序。 2．DNA的二级结构：指两条DNA单链形成的双螺旋结构、三股螺旋结构以及四股螺旋结构。3．DNA的三级结构：双链DNA进一步扭曲盘旋形成的超螺旋结构。 4．DNA的甲基化：DNA的一级结构中，有一些碱基可以通过加上一个甲基而被修饰，称为DNA的甲基化。甲基化修饰在原核生物DNA中多为对一些酶切位点的修饰，其作用是对自身DNA产生保护作用。真核生物中的DNA甲基化则在基因表达调控中有重要作用。真核生物DNA中，几乎所有的甲基化都发生于二核苷酸序列5’-CG-3’的C上，即5’-mCG-3’. 5．CG岛：基因组DNA中大部分CG二核苷酸是高度甲基化的,但有些成簇的、稳定的非甲基化的CG小片段,称为CG岛,存在于整个基因组中。“CG”岛特点是G+C含量高以及大部分CG二核苷酸缺乏甲基化。 6．DNA双螺旋结构模型要点： （1）DNA是反向平行的互补双链结构。 （2）DNA双链是右手螺旋结构。螺旋每旋转一周包含了10对碱基，螺距为3.4nm. DNA 双链说形成的螺旋直径为2 nm。每个碱基旋转角度为36度。DNA双螺旋分子表面 存在一个大沟和一个小沟，目前认为这些沟状结构与蛋白质和DNA间的识别有关。（3）疏水力和氢键维系DNA双螺旋结构的稳定。DNA双链结构的稳定横向依靠两条链互补碱基间的氢键维系，纵向则靠碱基平面间的疏水性堆积力维持。 7．核小体的组成： 染色质的基本组成单位被称为核小体，由DNA和5种组蛋白H1,H2A,H2B,H3和H4共同构成。各两分子的H2A,H2B,H3和H4共同构成八聚体的核心组蛋白，DNA双螺旋缠绕在这一核心上形成核小体的核心颗粒。核小体的核心颗粒之间再由DNA和组蛋白H1构成的连接区连接起来形成串珠样结构。 8．顺反子（Cistron）：由结构基因转录生成的RNA序列亦称为顺反子。 9．单顺反子（monocistron）：真核生物的一个结构基因与相应的调控区组成一个完整的基因，即一个表达单位，转录物为一个单顺反子。从一条mRNA只能翻译出一条多肽链。10．多顺反子(polycistron): 原核生物具有操纵子结构，几个结构基因转录在一条mRNA 链上，因而转录物为多顺反子。每个顺反子分别翻译出各自的蛋白质。 11．原核生物mRNA结构的特点: (1) 原核生物mRNA往往是多顺反子的，即每分子mRNA带有几种蛋白质的遗传信息。 （2）mRNA 5‘端无帽子结构，3‘端无多聚A尾。 （3）mRNA一般没有修饰碱基。 12．真核生物mRNA结构的特点： （1）5‘端有帽子结构。即7－甲基鸟嘌呤－三磷酸鸟苷m7GpppN。 （2）3‘端大多数带有多聚腺苷酸尾巴。 （3）分子中可能有修饰碱基，主要有甲基化。 （4）分子中有编码区和非编码区。 14．tRNA的结构特点 （1）tRNA是单链小分子。 （2）tRNA含有很多稀有碱基。 （3）tRNA的5‘端总是磷酸化，5’末端核苷酸往往是pG. （4）tRNA的3‘端是CCA－OH序列。是氨基酸的结合部位。 （5）tRNA的二级结构形状类似于三叶草，含二氢尿嘧啶环（D环）、T环和反密码子环。

分子生物学终极复习资料汇总

《分子生物学》复习题 1、染色体：是指在细胞分裂期出现的一种能被碱性染料强烈染色，并具有一定 形态、结构特征的物体。携带很多基因的分离单位。只有在细胞分裂中才可见的形态单位。 2、染色质：是指细胞周期间期细胞核内由DNA、组蛋白、非组蛋白和少量RNA 组成的复合结构，因其易被碱性染料染色而得名。 3、核小体：染色质的基本结构亚基，由约200 bp的DNA和组蛋白八聚体所组 成 4、C值谬误：一个有机体的C值与它的编码能力缺乏相关性称为C值矛盾 5、半保留复制：由亲代DNA生成子代DNA时，每个新形成的子代DNA中， 一条链来自6、亲代DNA，而另一条链则是新合成的，这种复制方式称半保留复制 6、DNA重组技术又称基因工程，目的是将不同的DNA片段（如某个基因或基 因的一部分）按照人们的设计定向连接起来，在特定的受体细胞中与载体同时复制并得到表达，产生影响受体细胞的新的遗传性状。 7、半不连续复制：DNA复制时其中一条子链的合成是连续的，而另一条子链的 合成是不连续的，故称半不连续复制。 8、引发酶：此酶以DNA为模板合成一段RNA,这段RNA作为合成DNA的引 物（Primer)。实质是以DNA为模板的RNA聚合酶。 9、转坐子：存在与染色体DNA上可自主复制和位移的基本单位。 10、多顺反子：一种能作为两种或多种多肽链翻译模板的信使RNA，由DNA 链上的邻近顺反子所界定。 11、基因：产生一条多肽链或功能RNA所必需的全部核甘酸序列。 12、启动子：指能被RNA聚合酶识别、结合并启动基因转录的一段DNA序列。 13、增强子：能强化转录起始的序列 14、全酶：含有表达其基础酶活力所必需的5个亚基的酶蛋白复合物，拥有σ因子。 （即核心酶+σ因子） 15、核心酶：仅含有表达其基础酶活力所必需亚基的酶蛋白复合物，没有σ因子。 16、核酶：是一类具有催化功能的RNA分子 17、三元复合物：开放复合物与最初的两个NTP相结合，并在这两个核苷酸之间形成磷酸二酯键后，转变成包括RNA聚合酶，DNA和新生的RNA的三元复合物。 18、SD序列：mRNA中用于结合原核生物核糖体的序列。30S亚基通过其

分子生物学习题与答案

第0章绪论 一、名词解释 1.分子生物学 2.单克隆抗体 二、填空 1．分子生物学的研究内容主要包含（）、（）、（）三部分。 三、是非题 1、20世纪60年代，Nirenberg建立了大肠杆菌无细胞蛋白合成体系。研究结果发现poly(U)指导了多聚苯丙氨酸的合成，poly(G)指导甘氨酸的合成。（×） 四、简答题 1. 分子生物学的概念是什么？ 2. 你对现代分子生物学的含义和包括的研究范围是怎么理解的？ 3. 分子生物学研究内容有哪些方面？ 4. 分子生物学发展前景如何？ 5. 人类基因组计划完成的社会意义和科学意义是什么？ 6．简述分子生物学发展史中的三大理论发现和三大技术发明。 7. 简述分子生物学的发展历程。 8. 二十一世纪生物学的新热点及领域是什么？ 9. 21世纪是生命科学的世纪。20世纪后叶分子生物学的突破性成就，使生命科学在自然科学中的位置起了革命性的变化。试阐述分子生物学研究领域的三大基本原则，三大支撑学科和研究的三大主要领域？ 答案： 一、名词解释 1.分子生物学：分子生物学就是研究生物大分子之间相互关系和作用的一门学科，而生物大分子主要是指基因和蛋白质两大类；分子生物学以遗传学、生物化学、细胞生物学等学科为基础，从分子水平上对生物体的多种生命现象进行研究。

2.单克隆抗体：只针对单一抗原决定簇起作用的抗体。 二、填空 1.结构分子生物学，基因表达与调控，DNA重组技术 三、是非题 四、简答题 1. 分子生物学的概念是什么？ 答案： 有人把它定义得很广：从分子的形式来研究生物现象的学科。但是这个定义使分子生物学难以和生物化学区分开来。另一个定义要严格一些，因此更加有用：从分子水平来研究基因结构和功能。从分子角度来解释基因的结构和活性是本书的主要内容。 2. 你对现代分子生物学的含义和包括的研究范围是怎么理解的？ 分子生物学是从分子水平研究生命本质的一门新兴边缘学科，它以核酸和蛋白质等生物大分子的结构及其在遗传信息和细胞信息传递中的作用为研究对象，是当前生命科学中发展最快并正在与其它学科广泛交叉与渗透的重要前沿领域。狭义：偏重于核酸的分子生物学，主要研究基因或DNA的复制、转录、表达和调节控制等过程，其中也涉及与这些过程有关的蛋白质和酶的结构与功能的研究。分子生物学的发展为人类认识生命现象带来了前所未有的机会，也为人类利用和改造生物创造了极为广阔的前景。所谓在分子水平上研究生命的本质主要是指对遗传、生殖、生长和发育等生命基本特征的分子机理的阐明，从而为利用和改造生物奠定理论基础和提供新的手段。这里的分子水平指的是那些携带遗传信息的核酸和在遗传信息传递及细胞内、细胞间通讯过程中发挥着重要作用的蛋白质等生物大分子。这些生物大分子均具有较大的分子量，由简单的小分子核苷酸或氨基酸排列组合以蕴藏各种信息，并且具有复杂的空间结构以形成精确的相互作用系统，由此构成生物的多样化和生物个体精确的生长发育和代谢调节控制系统。阐明这些复杂的结构及结构与功能的关系是分子生物学的主要任务。 3. 分子生物学主要包含以下三部分研究内容：A.核酸的分子生物学，核酸的分子生物学研究核酸的结构及其功能。由于核酸的主要作用是携带和传递遗传信息，因此分子遗传学（moleculargenetics）是其主要组成部分。由于50年代以来

基础分子生物学(生物科学专业用)

基础分子生物学 三、选择题 1、RNA 合成的底物是------ ---------。 A dATP, dTTP , dGTP , d CTP BATP, TTP , GTP , CTP C ATP ,GTP, CTP,UTP D 、GTP, CTP,UTP，TTP 2．模板DNA的碱基序列是3′—TGCAGT—5′，其转录出RNA碱基序列是：A．5′—AGGUCA—3′ B．5′—ACGUCA—3′ C．5′—UCGUCU—3′ D．5′—ACGTCA—3′ E．5′—ACGUGT—3′ 3、转录终止必需。 A、终止子 B、ρ因子 C、DNA和RNA的弱相互作用 D上述三种 4、在转录的终止过程中，有时依赖于蛋白辅因子才能实现终止作用，这种蛋白辅因子称为---- -----。 A σ因子 B ρ因子 C θ因子 D IF因子 5．识别RNA转转录终止的因子是： A．α因子 B．β因子 C．σ因子 D．ρ因子 E．γ因子 6．DNA复制和转录过程有许多异同点,下列DNA复制和转录的描述中错误的是： A．在体内以一条DNA链为模板转录，而以两条DNA链为模板复制 B．在这两个过程中合成方向都为5′→3′ C．复制的产物通常情况下大于转录的产物 D．两过程均需RNA引物 E．DNA聚合酶和RNA聚合酶都需要Mg2+ 7、核基因mRNA 的内元拼接点序列为。 A、AG……GU B、GA……UG C、GU……AG D、UG……GA 8、真核生物mRNA分子转录后必须经过加工，切除---------，将分隔开的编码序列连接在一起，使其成为蛋白质翻译的模板，这个过程叫做RNA的拼接。 A 外显子 B 启动子 C 起始因子 D 内含子 9、在真核生物RNA polⅡ的羧基端含有一段7个氨基酸的序列，这个7肽序列为Tyr-Ser-Pro-Thr-Ser-Pro-Ser ,被称作。 A C末端结构域 B 帽子结构 C Poly(A)尾巴 D 终止子 10．真核生物RNA的拼接需要多种snRNP的协助，其中能识别左端（5’）拼接点共有序列的snRNP 是： A．U1 snRNP B．U2 snRNP C．U5 snRNP E．U2 snRNP+ U5 snRNP 四、是非题 1、所有的启动子都位于转录起始位点的上游。（ X ） 2、RNA分子也能像蛋白酶一样，以其分子的空间构型产生链的断裂和和合成所必须的微环境。（对） 3、真核生物的mRNA中的poly A 尾巴是由DNA编码，经过转录形成的。（ X ） 4、在大肠杆菌RNA聚合酶中，β亚基的主要功能是识别启动子。（ X ） 5、所有起催化作用的酶都是蛋白质。（ X ） 五、问答题

分子生物学试验基础知识

分子生物学实验基础知识 分子生物学是在生物化学基础上发展起来的，以研究核酸和蛋白质结构、功能等生命本质的学科，在核酸、蛋白质分子水平研究发病、诊断、治疗和预后的机制。其中基因工程（基因技术，基因重组）是目前分子生物学研究热点，这些技术可以改造或扩增基因和基因产物，使微量的研究对象达到分析水平，是研究基因调控和表达的方法，也是分子水平研究疾病发生机制、基因诊断和基因治疗的方法。转化（trans formation）、转染、转导、转位等是自然界基因重组存在的方式，也是人工基因重组常采用的手段。基因重组的目的之一是基因克隆（gene clone），基因克隆可理解为以一分子基因为模板扩增得到的与模板分子结构完全相同的基因。使需要分析研究的微量、混杂的目的基因易于纯化，得以增量，便于分析。 外来基因引起细胞生物性状改变的过程叫转化（transformation），以噬菌体把外源基因导入细菌的过程叫转染（transfection）。利用载体（噬菌体或病毒）把遗传物质从一种宿主传给另一种宿主的过程叫转导（transduction）。一个或一组基因从一处转移到基因组另一处的过程叫转位（transposition），这些游动的基因叫转位子。 一、基因工程的常用工具 （一）载体 载体（Vector）是把外源DNA（目的基因）导入宿主细胞，使之传代、扩增、表达的工具。载体有质粒（plasmid）、噬菌体、单链丝状噬菌体和粘性末端质粒（粘粒）、病毒等。载体具有能自我复制；有可选择的，便于筛选、鉴定的遗传标记；有供外源DNA插入的位点；本身体积小等特征。 质粒存在于多种细菌，是染色体（核）以外的独立遗传因子，由双链环状DNA组成，几乎完全裸露，很少有蛋白质结合。质粒有严紧型和松弛型之分。严紧型由DNA多聚酶Ⅲ复制，一个细胞可复制1-5个质粒。而松弛型由DNA多聚酶Ⅰ复制，一个细胞可复制30-50个质粒，如果用氯霉素可阻止蛋白质合成，使质粒有效利用原料，复制更多的质粒。质粒经过改造品种繁多，常用的有pBR322、pUC系列等。这些质粒都含有多个基本基因，如复制起动区（复制原点Ori），便于复制扩增；抗抗生素标记（抗氨芐青霉素Ap r、抗四环素Tc r等）或大肠埃希菌部分乳糖操纵子（E.coli LacZ）等，便于基因重组体的筛选；基因发动子（乳糖操纵子Lac、色氨酸操纵子Trp等）和转录终止序列，便于插入的外源基因转录、翻译表达。质粒上还有许多限制性内切酶的切点，即基因插入位点，又叫基因重组位点，基因克隆位点。 常用噬菌体载体有单链噬菌体M13系统；双链噬菌体系统。噬菌体应和相应的宿主细胞配合使用。以上载体各有特点，便于选择，灵活应用。 （二）工具酶