实验三 植物营养液培养技术与植物缺素观察
实验三植物营养液培养技术与植物缺素观察
一.实验目的
掌握营养液培养植物技术的全部过程和关键技术，认识和理解植物缺素症状和恢复过程的表现。
二.原理
用植物必需的矿质元素配成培养液培养植物，可使植物长得与土壤中一样好。应用营养液培养方法，所用元素的种类和用量可完全人为地加以控制，要了解某元素缺乏所引起的生理病症，可从培养液中减去该元素，以便在以后的生长过程中进行观察。
为了管理方便也常将溶液加入干净的石英砂培养植物，则称为砂基培养。
三.仪器设备
1 烧杯：250和500ml各1个。
2 刻度移液管：5ml 10支，1mI 1支。
3 量筒：l000 ml l个.
4 黑色腊光纸适量。
5 培养缸（可用1000ml广口瓶或瓷质、玻璃质培养缸）：体积为1L的陶瓷培养罐60个，并配有带6个孔的盖——使用前用2％HCl浸泡0.5-1小时，用自来水冲洗干净、用去离子水清洗。如果做铜、锰、钼、硼等微量元素，需要用重蒸水。
6 l5×15 cm 塑料纱用〈或纱布〉：l块。
7 精密pH试纸或pH计：pH 5－6或广泛pH指示剂。
8 搪瓷盘：l个。
9 石英砂适量。
l0 500ml试剂瓶：l个。
ll 通气泵、通气管、针头、海绵、电子天平、纸袋等
四.试剂
l. KNO3 2. MgSO4 3. KH2PO4 4. K2SO4 5.Na2 SO4
6.NaH2 PO4
7.NaNO3
8.Ca(NO3)2
9.CaCl210. FeSO4
11.H2BO312. MnCl2 13.CuSO414. ZnS O415. NH4MoO4
16.盐酸17. EDTA－N a2（乙二胺四乙酸二钠）
五、方法步骤
1. 种子处理与幼苗培养
小麦、玉米、棉花、豌豆种子在发芽前先用10%的H2O2消毒10分钟，清水冲洗至无泡沫，蒸馏水浸泡4小时，待其吸胀后于滤纸上，并用黑塑料布遮盖，保持水分，在25oC 下催芽。种子露白后用石英砂培养，保持一定的水分，待种子萌发至两片子叶（双）或三叶
一心（单）时小心用水洗净根系，移栽至营养液中，刚移栽的幼苗其营养液的浓度应该稀释至完全浓度的1/4或1/2。移植时注意勿损根系。
2.配制大量元素及Fe的贮备液
用去离子水按表l分别配制大量营养元素储备液，配Hoagland完全营养液时需稀释200倍。
微量元素贮备液按以下配方配制：称取H
3BO
4
2.86g, MnCl
2
·4H
2
O 1.81g,CuSO
4
·5H
2
O
0.08g，ZnSO
4·5H
2
O 0.22g , H
2
MoO
4
0.09g溶于蒸馏水中。配制完全营养液时需稀释1000
倍。
EDTA－Fe的配制：溶解FeSO
4·7H
2
O 5.57g于200ml去离子水中；然后在加热条件下加
入7.45g EDTA-Na
2
，不断搅拌，使其完全溶解，冷却后定容到1L，此溶液Fe的浓度为0.02 mol/L，配制Hoagland营养液时稀释200倍。
缺素处理的营养液配制：配合以上贮备液后，再按表2配成完全培养液和缺乏某种元素的培养液。
分别吸取各种储备液，与去离子水充分混匀，用精密pH试纸或pH计调节pH至6.5。注意：每种成分充分混匀以后再加另一种成分。
表l 大量元素配制表
试剂储备液液度（g/L）试剂储备液液度（g/L）
Ca(NO
3)
2
·4H
2
0 236 CaCl
2
111
KNO
3102 NaH
2
PO
4
24
MgSO
4·7H
2
O 98 NaNO
3
170
KH
2PO
4
27 Na
2
SO
4
21
K
2SO
4
88 EDTA-Na
2
EDTA－Fe
FeSO
4
·7H
2
O
7.45
5.57
表2 缺素培养液的配制
贮备液
每100ml培养液中贮备液的用量（ml）
完全缺N 缺P 缺K 缺Ca 缺Mg 缺Fe 缺Zn
Ca（NO
3）
2
KNO
3 MgSO
4
KH
2PO
4
0.5
0.5
0.5
0.5
-
-
0．5
0．5
0.5
0.5
0.5
-
0.5
-
0.5
-
-
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
-
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
K 2SO
4
Ca Cl
2
NaH
2PO
4
NaNO
3
Na
2SO
4
EDTA－Fe 微量元素
-
-
-
-
-
0.5
0.1
0．5
0．5
-
-
-
0．5
0．1
0.5
-
-
-
-
0.5
0.1
-
-
0.5
0.5
-
0.5
0.1
-
-
-
-
-
0.5
0.1
-
-
-
-
0.5
0.5
0.1
-
-
-
-
-
-
0.1
-
-
-
-
-
0.5
-
3.将以上配制的培养液各800ml分别加入1000 ml培养罐中，贴上标签，植株幼茎通过盖子上的小孔，用海绵固定，使整个根系浸入培养液中，接上通气管，昼夜连续通气。装好后将培养罐放在阳光充足、温度适宜的地方。为使根系生长良好，最好应在盖与溶液之间保留一定空隙，以利通气。
4.实验开始后，每天测量培养液的pH值1－2次，注意观察记录营养液pH值的变化动态。如pH值高于6，应以稀盐液调整到5～6之间。
移栽时配制的营养液浓度为各处理完全浓度的1/4。隔3天更换一次培养液，然后2分次将营养液的浓度逐渐提高到各处理完全浓度的1/2和完全浓度。
5. 待各缺素培养液中的幼苗表现出明显的症状后，将缺素培养液全部更换为完全培养液。注意记录缺乏必需元素时所表现的症状及最先出现症状的部位，观察更换为症状逐渐消失的情况，记录结果、及时拍照。
六、实验报告
介绍实验目的、步骤、结果和分析、得出实验结论（要求图文并用！）
七、注意事项
双子叶植物和单子叶植物对硼的需求量不一样，通常双子叶植物需硼多。因此，在做科
研、生长工作时，应当采用不同的浓度。双子叶植物H
3BO
3
为1×10－5mol/L，单子叶植物为
1×10－6。
营养液的配制和保存，有两个原则：一是保证原液无沉淀，二是保证所使用的溶液不会发生化学变化。微量元素和大量元素分开配制，硫酸盐和钙盐的配制，最好分别在首尾加入。配制好的浓缩营养液，要避光保存，必须及时贴标签并标注日期。稀释液应在使用之前配制。
植物组织培养实验基本步骤。。
植物组织培养实验基本步骤 一、母液的配置 1、MS大量元素母液的配制 将大量元素配制成10倍的母液，使用时再稀释10倍。按照配方表中用量依次分别称取扩大10倍的：NH4NO3 、KNO3 、KH2PO4 、 MgSO4·7H2O 、CaCl2·2H2O ，所有药品称取完毕后用蒸馏水逐个溶解，待全部溶解后，最后定容至500ml，转入500ml细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称、放大倍数、配制日期、配制人姓名，置于4℃冰箱中保存备用。 2、MS微量元素母液的配制 将微量元素配制成100倍的母液，使用时再稀释100倍。按照配方表中用量分别依次称取：MnSO4· 4H2O 、ZnSO4·7H2O 、 H3BO3 、KI 、CuSO4·5H2O 、CoCl2·6H2O ，用蒸馏水逐个溶解，待全部溶解后，用容量瓶定容至500ml，转入500ml细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称、放大倍数、配制日期、配制人姓名，置于4℃冰箱中保存备用。 3、MS铁盐母液配制 将铁盐配制成100倍的母液，使用时再稀释100倍。按照配方表中用量分别称取扩大100倍的：称
FeSO4·7H2O 和Na2·EDTA ，把FeSO4·7H2O和Na2·EDTA·2H2O分别置于200ml蒸馏水中，加热并不断搅拌使之溶解（磁力搅拌器，边加热，边搅拌）。保持加热，把FeSO4溶液慢慢倒入Na2·EDTA溶液中并不断搅拌，接近沸腾时停止加热，待溶液冷却后加蒸馏水到最终容积500ml，置于棕色细口瓶中，用力振荡1～2min，贴上标签，注明母液名称、放大倍数、配制日期、配制人姓名。在室温下避光保存一段时间令其充分反应后，再置于4℃冰箱中保存备用。 4、MS有机化合物母液的配制 将有机化合物配制成100倍的母液，使用时再稀释100倍。按照配方表中用量分别称取扩大100倍的：肌醇、维生素B1 、烟酸、甘氨酸、维生素B6 、蔗糖，用蒸馏水依次溶解并定容至500ml后，转入500ml 细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称、配制日期、配制人姓名，置于4℃冰箱中保存备用。 二、植物激素的配置 常见激素：二氯苯氧乙酸（2，4－D）、萘乙酸（NAA）、吲哚乙酸（IAA）、吲哚－3－丁酸（IBA）、激动素（6-糠氨基嘌呤、 KT）、6－苄氨基嘌呤（6－BA）、赤霉素（GA3）、 1、生长素类： （1）、生长素类在组织培养中的主要作用是：诱导细胞的分裂和根的分化，诱导愈伤组织
(医疗药品)药用植物组织培养实验指导
甘肃农业大学农学院 药用植物组织培养实验指导 柳福智编 农学院中草药栽培与鉴定教研室 2007年8月 前言 药用植物组织培养实验是根据中草药栽培与鉴定专业的培养要求，为学生开设的一门实验课程。药用植物组织培养实验的任务是使学生加深对药用植物组织培养基本理论的理解，掌握药用植物组织培养实验的基本操作技能，学习药用植物组织培养实验的基本知识，养成严格、认真和实事求是的科学态度，提高观察、分析和解决问题的能力，为将来参加工作打下良好的基础。 编者 2007年8月 学生实验守则 1、实验前认真预习，领会实验原理，明确本次实验的目的和要求，了解实验步骤和注意事项。
2、实验时要严格按照规范操作进行，仔细观察实验现象，认真记录有关数据。 3、要认真写好实验报告，实验报告要清楚、简练、整洁。 4、学生进入实验室必须严格遵守实验室规则，服从带教老师的指导。 5、爱护实验室的仪器设备，不准将实验室的仪器设备私自带出室外。 6、严格遵守操作规程及实验时应注意的事项，在使用不熟悉其性能的仪器和药品之前，应查阅有关资料或请教指导教师，不要随意进行实验，以免损坏仪器，浪费试剂，使实验失败，更重要的是预防发生意外事故。 7、实验过程中应注意防火灾、防爆炸、防腐蚀、防污染工作，牢固树立“安全第一”意识。 8、实验结束后，一切仪器试剂应放回原处，玻璃仪器要清洗干净，一些有毒、有腐蚀性的废液应倒入废液缸内。 9、实验台面要擦试干净，由值日生负责安全卫生工作，包括清理实验室，检查水、电的开关，清除垃圾和污物，关好门窗后方可离开实验室。 药用植物组织培养实验报告一般包括以下内容和要求： （1）实验名称、实验日期。 （2）实验目的写明通过本实验要达到的训练目的。
植物组织培养实验报告
植物组织培养实验报告 Modified by JACK on the afternoon of December 26, 2020
院(系、部) 化学与生物工程学院专业生物技术（师范）年级13级学号 姓名组别第二组课程名称植物细胞工程学实验日期 指导老师实验名称植物组织培养综合实验 一、实验目的 1.熟悉MS培养基的组成，掌握贮备液的配制方法 2.学习、掌握植物组织固体培养基的配制和灭菌方法； 3.掌握超净工作台上的接种方法与注意事项，了解接种室的灭菌方法； 4.了解组织培养的基本程序； 5.掌握接种的方法和材料的培养过程； 6.掌握无菌操作技术，包括外植体除菌和接种技术； 7.观察外植体的生长状况、染菌状况，剔除染菌外植体； 8.了解MS培养基和1/2MS培养基的区别 二、实验原理 1.植物细胞的全能性 一切植物都由细胞构成，细胞是构成植物体的基本结构与功能单位。 植物细胞含有全套遗传信息，具有形成完整植物的潜能。 2.植物细胞表现出全能性的条件 1.离体状态； 2.有一定的营养物质，激素和其他外界条件（无菌、温度、pH）； 3.选择性能优良、细胞全能性表达充分的基因型 3.无菌条件
把植物的组织、器官等，使其在人工控制的无菌条件下，使植物在人工培养基上繁殖。用于进行组织培养的组织、器官和细胞称为外植体。在组培中外植体都死带菌的，在接种前必须进行表面消毒，这时取得培养成功的最基本和重要的前体。组织培养的主要过程都是在无菌条件下进行的，所以所有的器材、植物体、接种室都应是无菌的。 4.脱分化与愈伤组织 已有特定结构与功能的植物组织，在一定条件下，其细胞被诱导改变原来的发育途径，逐步逆转其原有的分化形态，转变为具有分生能力的胚细胞的过程称为脱分化。脱分化所用的化学物质与MS培养基的区别是需要激素诱导。所以脱分化培养需在MS培养基上添加激素进行愈伤组织诱导。 5.培养基 植物组织培养常用的培养基为MS培养基。常用的凝固剂是琼脂,它的主要作用是使液体培养基凝固，琼脂本身并不提供任何营养，它只是一种高分予的碳水物从海藻中提取出来，仅溶解于热水，成为溶胶，冷却后(40℃以下)即凝固为固体状凝胶。琼脂的用量一般在4—10克／升之间。琼脂的凝固能力除与原料、厂家的加工方式等有关外，还与高压灭菌时的温度、时间、pH值等因素有关，长时间的高温会使凝固能力下降，过酸过碱加之高温会使琼脂发生水解而丧失凝固能力，存放时间过久，琼脂变褐，也会逐失去凝固能力。MS培养基属于富盐平衡培养基，特点是：无机盐浓度较高，元素间的比例适当，离子平衡性好，具有较强的缓冲性，因而在培养的过程中可维持较好的稳定性；营养丰富，在一般培养中无须额外加
植物组织培养实验室 组培室 规划设计
植物组织培养实验室组培室规划设计 一、实验室要求理想的组织培养实验室应该建立在安静、清洁、远离污染 源的地方，最好在常年主风向的上风方向，尽量减少污染。规模化生产的组织 培养实验室最好建在交通方便的地方，便于培养产品的运送。实验室的建设均 需考虑两个方面的问题：一是所从事的实验的性质，即是生产性的还是研究性的，是基本层次的还是较高层次的；二是实验室的规模，规模主要取决于经费 和实验性质。无论实验室的性质和规模如何，实验室设置的基本原则是：科学、高效、经济和实用。一个组织培养实验室必须满足3个基本的需要：实验准备(培养基制备、器皿洗涤、培养基和培养器皿灭菌)、无菌操作和控制培养。此外，还可根据从事的实验要求来考虑辅助实验室及其各种附加设施，使实验室 更加完善。在进行植物组织培养工作之前，首先应对工作中需要哪些最基本的 设备条件有个全面的了解，以便因地制宜地利用现有房屋，或新建、改建实验室。实验室的大小取决于工作的目的和规模。以工厂化生产为目的，实验室规 模太小，则会限制生产，影响效率。在设计组织培养实验室时，应按组织培养 程序来没计，避免某些环节倒排，引起日后工作混乱。植物组织培养是在严格 无菌的条件下进行的。要做到无菌的条件，需要一定的设备、器材和用具，同 时还需要人工控制温度、光照、湿度等培养条件。二、实验室组成(一)基本实 验室基本实验室包括准备室、洗涤灭菌室、无菌操作室、培养室、缓冲间，是 组织培养实验所必须具备的基本条件。如进行工厂化生产，年产4万-20万， 需3-4间实验用房，总面积60平方米。1、准备室(化学实验室)功能：又叫化 学实验室，进行一切与实验有关的准备工作：完成所使用的各种药品的贮备、 称量、溶解、器皿洗涤、培养基配制与分装、培养基和培养器皿的灭菌、培养 材料的预处理等。要求：最好有20平方米左右。要求宽敞明亮、以便于放置多个实验台和相关设备，方便多人同时工作；同时要求通风条件好，便于气体交换；实验室地面应便于清洁，并应进行防滑处理。分类：分体式-研究性质实验室，分开的若干房间将准备室分解为药品贮藏室、培养基配制与洗涤室和灭菌 室等，功能明确，便于管理，但不适于大规模生产。通间式-规模化实验室，准备室一般设计成大的通间，使试验操作的各个环节在同一房间内按程序完成。 准备试验的过程在同一空间进行，便于程序化操作与管理，试验中减少各环节 间的衔接时间，从而提高工作效率。此外还便于培养基配制、分装和灭菌的自
参考答案：实验报告单：观察叶片的结构
莒县桑园镇中心初级中学生物学科学生分组实验报告单 20____级____年级____班____组实验组长：_____ 实验合作者：___ 实验名称：观察叶片的结构 实验目的： 1、练习用徒手切片的方法制作叶片的临时切片。 2、认识叶片的结构。 3、观察叶片的表皮细胞、保卫细胞和气孔；画出叶片下表皮的一对保卫细胞。 材料用具：新鲜叶片、显微镜、双面刀片、镊子、载玻片、盖玻片、叶片的永久切片、培养皿、清水、滴管、吸水纸、碘液、纱布、毛笔、小木板。 实验步骤： 1、检查材料用具是否完好、齐全。 2、制作叶片横切面的临时切片： （1）将新鲜的叶片平放在小木板上。 （2）右手捏紧并排的两片刀片，沿着如图所示的虚线方向，迅速切割。 （3）刀片的夹缝中存有切下的薄片，将刀片蘸一下水，把切下的薄片放入水中，重复几次。 （4）用毛笔蘸出最薄的一片，制成临时切片。 3、观察临时装片： （1）用显微镜先观察叶片横切面的临时切片，再观察叶 片横切面的永久切片。 （2）对照图示，在显微镜下分清叶的表皮、叶肉和叶脉。 4、观察叶片的下表皮： （1）用镊子撕下一小块叶片的下表皮，制成临时装片。 （2）用显微镜进行观察，找出一对保卫细胞及其构成的气孔，并观察保卫细胞周围的表 皮细胞。 5、画图： 画出下表皮上一对保卫 细胞及其周围的几个 表皮细胞。 5、整理还原： 实验完毕，清洁桌面，清点实验材料并摆放整齐；将显微镜外表擦拭干净放进镜箱，送 回原处。 讨论：1、叶片上下表皮的结构有什么不同？ 答：一般情况下,植物叶片下表皮的气孔比上表皮多,既保证了气体顺利进出叶片,又减少了水分的散失。 2、保卫细胞和表皮细胞在结构上有什么不同？ 答：保卫细胞呈半月形,含有叶绿体，细胞壁厚薄不均匀,靠近气孔的外壁厚,背气孔的内壁薄。当保卫细胞吸水膨胀时,气孔张开;当保卫细胞失水收缩时,气孔闭合；表皮细胞形状不规则，无色透明，不含叶绿体。 实验日期：20____年____月____日
植物组织培养实验设计及.doc
植物组织培养实验设计及 常用设备的使用与维护 一．实验目的 1.熟悉植物组织培养实验室的组成及设备 2.掌握植物组织培养实验室的设计要求 3.熟悉植物组织培养所需的仪器设备 二．实验原理 植物组织培养是通过无菌操作，在人工控制条件下进行培养以获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其他产品的技术。要达到无菌操作和无菌培养，就需要人为创造无菌的环境，使用无菌的器皿及器械，同时还需要人工控制的温度,光照，湿度等培养条件。无菌环境和培养条件的创造需要一定的设施及设备。 三．实验步骤 1.实验室的设计要求 功能齐全、布局合理、环境清洁、易于灭菌 2.实验室的组成及功能 实验室的组成： 洗涤室、药品室、称量室、培养基配制室、灭菌室、接种室、培养室、观察记录室、储藏室、移苗室 实验室的功能： 洗涤室用于玻璃器皿、实验用具的清洗、干燥、培养材料清洗、预处理也可在本室完成。室内应建造大型水槽和一个或几个浸泡
池，水槽最好上一内衬白瓷片的水泥槽，为防止碰坏玻璃器皿，下面可铺一活动的橡胶板。备有晾瓶架，用于放置刷净的培养器皿，配备有一定数量的周转盘或小推车，用于运输培养器皿。地面要注意防滑，排水通畅，墙壁要有耐湿、防潮功能。 药品室用于存放各种药品试剂。室内要求干燥、通风，避免光照，配有药品柜、冰箱等设备。化学试剂物品分类存放于柜中，有毒物质如升汞需要专人密封保存。原药可室温下存放，配好的母液，宜置于4℃冰箱中保存。药品室紧邻称量室较好，便于工作。 称量室进行化学药品的称量。要求干燥、密闭，无直射光照，避免腐蚀性药品和水气直接接触。有固定的水磨石平台，安放普通天平、精密天平和分析天平，要有电源插座，最好设计在阴面的房间，这样对怕光药品的保存和称量有利，称量室紧邻培养基配制室较好，以方便配制母液和培养基。房间较少时，可以与药品室合二为一。 培养基配制室主要进行母液的配制，培养基的配制、分装、包扎和灭菌前的暂时存放。在条件允许下，面积宜大不宜小，室内应有大型实验台。配有电炉、锅子、量具、培养基分装器具、吸管、培养容器、水浴锅和酸度计等。如规模较小，可与洗涤室、灭菌室合并在一起。
植物组织培养实验报告
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植物组织培养实验室(组培室)规划设计
植物组织培养实验室 (组培室规划设计 2009年 05月 31日星期日 10:18一、实验室要求 理想的组织培养实验室应该建立在安静、清洁、远离污染源的地方, 最好在常年主风向的上风方向, 尽量减少污染。规模化生产的组织培养实验室最好建在交通方便的地方, 便于培养产品的运送。 实验室的建设均需考虑两个方面的问题:一是所从事的实验的性质, 即是生产性的还是研究性的, 是基本层次的还是较高层次的; 二是实验室的规模, 规模主要取决于经费和实验性质。 无论实验室的性质和规模如何,实验室设置的基本原则是:科学、高效、经济和实用。一个组织培养实验室必须满足 3个基本的需要:实验准备 (培养基制备、器皿洗涤、培养基和培养器皿灭菌、无菌操作和控制培养。此外,还可根据从事的实验要求来考虑辅助实验室及其各种附加设施,使实验室更加完善。 在进行植物组织培养工作之前,首先应对工作中需要哪些最基本的设备条件有个全面的了解, 以便因地制宜地利用现有房屋, 或新建、改建实验室。实验室的大小取决于工作的目的和规模。以工厂化生产为目的,实验室规模太小,则会限制生产,影响效率。在设计组织培养实验室时, 应按组织培养程序来没计, 避免某些环节倒排, 引起日后工作混乱。植物组织培养是在严格无菌的条件下进行的。要做到无菌的条件, 需要一定的设备、器材和用具, 同时还需要人工控制温度、光照、湿度等培养条件。 二、实验室组成 (一基本实验室 基本实验室包括准备室、洗涤灭菌室、无菌操作室、培养室、缓冲间,是组织培养实验所必须具备的基本条件。如进行工厂化生产,年产 4万 -20万, 需 3-4间实验用房,总面积 60平方米。
观察叶下表皮结构 实验报告单
初中生物实验报告单 请同学们认真预习实验报告单，本次实验将成为你成长和进步的真实记录，相信通过你自己努力、同学帮助、老师指导，你的实验会获得成功，胜利属于你！
注：实验过程中你是否按要求进行操作呢？请根据你的实际操作情况进行评价。请各组组长时刻检查你组成员的操作情况，并进行评价。 ①制作叶表皮的临时装片 在载玻片中央滴一到两滴清水，放在一旁。取插入水中(或干瘪)的青菜叶片，分别从背面向里折叠，然后从折叠处轻轻撕拉，折断处有白色薄膜（即下表皮），用镊子夹取一小片白色薄膜，放在载玻片的水滴中，展平，盖上盖玻片。制成临时装片。 ②用显微镜观察叶表皮 取镜、对光。将制好的临时装片放在低倍镜下观察，除可以看到许多形状不规则的表皮细胞外，还可看到成对的半月形的保卫细胞，以及由保卫细胞间隙所形成的气孔。在观察插入水中的叶表皮临时装片时，会发现气孔大大张开；当观察用干瘪叶表皮临时装片时，会发现气孔闭合。从而区分气孔何时张开，何时闭合。(若视野中气孔较小,可换用40×的高倍镜观测) ③画图 用铅笔画出4-5个相连的叶表皮细胞和一个由2个保卫细胞围成的气孔，并注明各部分的名称。
④收镜、清理桌面 试题六观察叶下表皮结构实验报告单 学校：班级：姓名： 一、实验目的 1、制作叶下表皮临时装片。 2、观察叶下表皮细胞、保卫细胞、气孔的形态结构特点。 二、检查实验用品 1、实验用品：新鲜菠菜、蚕豆或芥蓝叶片，显微镜，载玻片，盖玻片，镊子，滴管，吸水纸，刀片，清水。 2、检查实验用品是否完备，举手向监考老师示意，经老师同意后开始实验。 三、实验步骤、结果 1、制作叶下表皮临时装片。 2、用低倍镜观察临时装片。 3、实验结果：绘制叶下表皮细胞、保卫细胞和气孔的镜像图并注明。 四、整理实验器材 试题六观察叶下表皮结构 考查项目操作标准满分 检查实验材料用品（10分）检查实验用品是否完备，举手向监考老师示意，经老师同意后开始实验。 10 实验操作步骤、实验现象、结果（80分） 1、制片 （1）用洁净的纱布把载玻片和盖玻片擦拭干净，平放在实验台上，在载玻片中央滴一滴清水。 （2）撕取一小块叶下表皮，放在载玻片的水滴中并展平。 （3）用镊子夹起盖玻片，使它的一边先接触载玻片，然后慢慢放平，避免出现气泡。 30 2、用显微镜观察叶下表皮细胞 取镜—对光—安放玻片标本—调焦—看清物像 30 3、实验结果；绘制叶下表皮细胞、保卫细胞和气孔的镜像图并注明 （1）用铅笔画图。（用铅笔画出4-5个相连的叶表皮细胞和一个由2个保卫细胞围成的气孔，并注明各部分的名称。） （2）各结构的引线统一画到图旁右侧并标出各部分名称。 （3）图像名称书写在图的正下方。 （4）图像比例适当，在纸上位置要适中，一般稍偏左上方。 （5）所画图像为镜像图，图中比较暗的地方，用铅笔点上细点表示。 20 整理实验用品 （10分） 1、将显微镜复原，安放好。 2、把用过的实验材料放到指定地点，材料用具摆放整齐，桌面保持整洁。
植物组织培养实验参考答案9
植物组织培养实验复习题 一、名词解释 1、大量元素:指含量占生物总重量万分之一以上的元素，包括C、H、O、N、P、S、K、C、Mg等。 2、微量元素:含量占生物总重量万分之一以下的元素。 3、植物生长调节剂:人工合成的对植物的生长发育有调节作用的化学物质。 4、外植体：把由活植物体上切取下来以进行培养的那部分组织或器官 5、细胞全能性：植物体的每个细胞都含有该植物全部的遗传信息。 6、基础培养基：根据植物营养原理和植物组织离体培养的要求而人工配置的营养基质。 7、愈伤组织:人工培养基上由外植体组织的增生细胞产生的一团不定形的疏松排列的薄壁细胞。 8、褐变:植物组织中多酚氧化酶被激活，使酚类物被氧化成醌类物，可抑制其他酶活性，毒害外植体。 9、茎尖脱毒:茎尖分生区的病毒传播速度很慢，利用茎尖组培获得无病毒苗，来达到脱毒的目的。 10、不定芽：凡从叶、根或芽节间或是离体培养的愈伤组织上等通常不形成芽的部位生出的芽。 11、污染率：污染数除以接种数，再乘以100%。 12、诱导率：愈伤数除以未污染数，再乘以100%。 13、成活率：成活数除以未污染数，再乘以100%。 14、接种：将表面消毒的外植体转接到无菌的培养基上的过程。 15、消毒：消灭材料上的病菌（不损伤植物材料）。 16、灭菌：利用物理或化学的方法，达到组织培养所学的无菌环境。 17、母液：欲配培养液的浓缩液。 18、无病毒苗：指不含该种植物的主要危害病毒，即经检测主要危害病毒在植物内的存在表现为阴性反应的苗木。 19、植物组织培养：在无菌条件下，将离体的植物器官、组织、细胞以及原生质体，培养在无菌培养基上和人工控制的环境中，使其生长、分化、增殖，甚至长出新的植株的过程和技术。 20快速繁殖：采取培养基配制，材料灭菌，无菌培养，幼苗转移到苗床，成苗转至大田栽种五步走的繁殖培养方式 21、继代培养：继代培养是指愈伤组织在培养基上生长一段时间后，营养物枯竭，水分散失，并已经积累了一些代谢产物，此时需要将这些组织转移到新的培养基上的培养方式。 22、生根培养：将长到一定长度的微枝（>10mm）转移到生根培养基上培养。 23、玻璃化现象：试管苗的茎叶变成透明水渍状，生长畸形，增殖系数明显下降，难以诱导生根，即使诱导生根，其根系质量极差，移栽成活率极低。 24、暗培养： 25、液体培养：将所需培养物的悬浮液在液体培养基中培养的方法。 26、脱分化：一个成熟细胞回复到分生状态或胚性细胞状态的现象。 27、分化：由于细胞的分工而导致的细胞结构和功能的改变或发育方式改变的过程。 28、热处理脱毒：利用高温下使植物组织中的病毒部分钝化或完全失去活性的方法。 1 / 6 29、微尖嫁接技术：把极小（<0.2mm）的茎尖作为接穗嫁接到实生砧木上（无菌种子培养获无菌
第五章 植物组织培养技术实验方案
第五章植物组织培养技术 一、植物组织培养中的基本概念 (1) 植物组织培养技术: 在无菌培养的条件下，将离体的植物器官（根，茎，叶，花，果实等）、组织（形成层，花药组织等）、细胞（体细胞，生殖细胞等）以及原生质体等培养在人工配制的培养基上，并给予适当的培养条件，使其长成完整植株的过程。 (2) 理论依据： 植物细胞的全能性，即指植物机体的每个细胞都含有该物种全套的基因组，具有发育成完整个体的潜力。 (3) 外植体： 从活体植株上切下的，用于组织培养的细胞、组织和器官。一般包括茎尖、根、茎、叶、花、种子等器官以及他们形成的体细胞胚等材料。 (4) 分化： 在个体发育过程中，由一种相同的细胞类型经细胞分裂后逐渐在形态、结构和功能上形成稳定性差异，产生不同的细胞类群的过程称为细胞分化。 (5) 脱分化： 已经高度分化的植物器官、组织或细胞，在切割损伤和培养物内外因素的共同作用下，逐渐丧失原来的分化结构和功能，最后形成无组织的细胞团或愈伤组织的过程。 (6) 愈伤组织： 在人工培养基上由外植体脱分化形成的一团无序生长的薄壁细胞。（具有细胞分裂能力）。 (7) 再分化： 已经脱分化的细胞在一定条件下，又可经过愈伤组织或胚状体，再分化出根和芽，形成完整植株，这一过程叫作再分化。 (8) 不定芽： 在高等植物正常的个体发育中，芽一般是只从茎尖或叶腋等的一定位置生出。所以这种象顶芽、腋芽、副芽等均在一定部位生出的芽，称为定芽。与此相反，凡从叶、根、或茎节间等通常不形成芽的部位生出的芽，则统称为不定芽。 (9) 胚状体： 在离体植物细胞、组织或器官培养过程中，由一个或一些体细胞，经过胚胎发生和发育过程，形成的与合子胚相类似的结构。 二、植物组织培养过程（菊花为例） 1、培养基的配制: 方法：培养基干粉配制法 称取培养基干粉42g加水加热煮沸溶解后定溶至1L，按照需要的浓度分别加入激素。 （其中生根用的植物激素NAA为0.2mg/1000ml） 用1mol/L NaOH和1mol/L HCl调节pH至5.8。将配好的培养基迅速分装至150ml组培瓶中，拧上盖子，放入灭菌锅121℃，灭菌20min。 2、菊花接种与培养：
植物组织培养实验报告
植物组织培养实验报告 一实验目的 让植物组织经过脱分化作用，形成愈伤组织，经过再分化作用，愈伤组织又能重新分化为有结构的组织和器官，最终形成完整的植株。 二实验原理 植物组织培养是把植物的器官，组织以至单个细胞，应用无菌操作使其在人工条件下，能够继续生长，甚至分化发育成一完整植株的过程。植物的组织在培养条件下，原来已经分化停止生长的细胞，又能重新分裂，形成没有组织结构的细胞团，即愈伤组织。这一过程称为“脱分化作用”，已经“脱分化”的愈伤组织，在一定条件下，又能重新分化形成输导系统以及根和芽等组织和器官，这一过程称“再分化作用”。植物激素在此过程中起着重要的作用，吲哚乙酸（IAA ）和 6 –苄基氨基腺嘌呤（6 – BA ）的比例，决定了根和芽的分化。 三实验器材 （一）试剂 乙醇、IAA 或 2 ，4 – D 、HgCl 2 （或次氯酸钠）、6- 苄基氨基腺嘌呤（6-BA ） MS 培养基 （二）仪器设备 培养室，高压灭菌锅，水浴锅，解剖刀，三角烧瓶（100mL ），烧杯，量筒，培养皿，超净工作台，分析天平，长镊子，剪刀，橡皮筋等 三实验步骤 1. 配制培养基 （1 ）愈伤组织诱导培养基：MS 培养基（蔗糖含量为10 g/L ，2,4 – D 含量为 2 mg/L ，琼脂10 g/L ）。 （2 ）试验培养基：在MS 培养基中按表33 – 1 加入IAA 和6–BA 。 吲哚乙酸先用少量0.1 mol/L NaOH 溶解，6- 苄基氨基腺嘌呤先用少量0.1 mol/L HCl 溶解，然后用蒸馏水稀释，再加入培养基中。 2. 培养基灭菌 将配好的培养基加入琼脂加热溶解，调至pH 5.8 ，趁热分装于100 mL 三角烧瓶中，每瓶约20 mL 。待培养基冷却凝固后，用两层称量纸包扎瓶口，并用橡皮筋扎牢，然后在高压灭菌锅中121 ℃（ 1 kg/cm 2 ）下灭菌20 min 。取出三角烧瓶放在台子上，
植物组织培养技术实验
《植物组织培养技术》课程 实验实训教学大纲 (2004级食用菌与蔬菜专业适用) 生物工程与农业经济系 濮阳职业技术学院 2005年9月
说明 本大纲是根据2004级三年制食用菌与蔬菜专业教学计划而制订的。一、课程性质和任务 植物组织培养技术实验实训课程是食用菌与蔬菜专业专业的主要专业基础课程之一。 植物组织培养是在无菌条件下，利用人工培养基对植物的器官、组织、细胞和原生质体进行培养的技术，是现代生物技术的核心技术之一。在植物的优良品种快速繁殖，脱毒苗木生产、缩短育种进程、种质资源保存等方面具有其它技术无法比拟的优势。 植物组培实验实训课程的教学任务在于使学生掌握组织培养的基本操 作技能和技巧，为进一步开展组培实训及从事组织培养工作奠定基础。 为适应高职高专教育改革的要求、突出高职高专教育的特点，适应本地农村产业结构调整的需要，本大纲以2003年的教学大纲为蓝本，在教学内容上进行了调整。 2、本课程教学的基本内容： 本课程是一门理论性、技术性和实践性强的的课程，通过本课程的学习，要求学生掌握植物组织培养基础知识、基本理论和基本技术。重点是植物的快速繁殖技术和组培苗工厂化生产技术。并紧紧围绕培养高等应用型技术人才，以强化技术应用能力培养为主线，着眼于培养学生应职岗位综合能力和创新精神，提高学生实践动手能力、科学实验能力、技术推广与市场开拓能力和组培苗工厂化生产经营与组织管理能力。 3、内容安排与学时分配 本大纲将教学内容分为实验教学、实训教学两个模块。实验教学结合理论讲授，在第三学期开设，共22学时。实训教学在第三、四学期开设，每学期为期一周。具体教学内容和学时分配见下表：
植物组织培养实验报告
院(系、部) 化学与生物工程学院专业生物技术（师范）年级13级学号17130208 姓名组别第二组课程名称植物细胞工程学实验日期2016.3-6 指导老师实验名称植物组织培养综合实验 一、实验目的 1.熟悉MS培养基的组成，掌握贮备液的配制方法 2.学习、掌握植物组织固体培养基的配制和灭菌方法； 3.掌握超净工作台上的接种方法与注意事项，了解接种室的灭菌方法； 4.了解组织培养的基本程序； 5.掌握接种的方法和材料的培养过程； 6.掌握无菌操作技术，包括外植体除菌和接种技术； 7.观察外植体的生长状况、染菌状况，剔除染菌外植体； 8.了解MS培养基和1/2MS培养基的区别 二、实验原理 1.植物细胞的全能性 一切植物都由细胞构成，细胞是构成植物体的基本结构与功能单位。植物细胞含有全套遗传信息，具有形成完整植物的潜能。 2.植物细胞表现出全能性的条件 1.离体状态； 2.有一定的营养物质，激素和其他外界条件（无菌、温度、pH）； 3.选择性能优良、细胞全能性表达充分的基因型 3.无菌条件 把植物的组织、器官等，使其在人工控制的无菌条件下，使植物在人工培养基上繁殖。用于进行组织培养的组织、器官和细胞称为外植体。在组培中外植体都死带菌的，在接种前必须进行表面消毒，这时取得培养成功的最基本和重要的前体。组织培养的主要过程都是在无菌条件下进行的，所以所有的器材、植物体、接种室都应是无菌的。 4.脱分化与愈伤组织 已有特定结构与功能的植物组织，在一定条件下，其细胞被诱导改变原来的发育途径，逐步逆转其原有的分化形态，转变为具有分生能力的胚细胞的过程称为脱分化。脱分化所用的化学物质与MS培养基的区别是需要激素诱导。所以脱分化培养需在MS培养基上添加激素进行愈伤组织诱导。 5.培养基 植物组织培养常用的培养基为MS培养基。常用的凝固剂是琼脂,它的主要作用是使液体培养基凝固，琼脂本身并不提供任何营养，它只是一种高分予的碳水物从海藻中提取出来，仅溶解于热水，成为溶胶，冷却后(40℃以下)即凝固为固体状凝胶。琼脂的用量一般在4—10克／升之间。琼脂的凝固能力除与原料、厂家的加工方式等有关外，还与高压灭菌时的温度、时间、pH值等因素有关，长时间的高温会使凝固能力下降，过酸过碱加之高温会使琼脂发生水解而丧失凝固能力，存放时间过久，琼脂变褐，也会逐失去凝固能力。MS培养基属于富盐平衡培养基，特点是：无机盐浓度较高，元素间的比例适当，离子平衡性好，具有较强的缓冲性，因而在培养的过程中可维持较好的稳定性；营养丰富，在一般培养中无须额外加入复杂的有机成分；微量元素种类全，浓度高。这类培养基是目前使用最广泛的培养基。 6.生长调节物质 包括天然植物激素额人工激素类似物。植物激素是一类植物自身合成、同时对其生长发育具有重要调节作用的有机化合物。生长调节物质对于离题培养中的细胞分裂分化、器官形成和个体再生等均起着重要而明显的调节作用。一般来说，基本培养基只能保证培养物的生存，维持其最低的生理活动，而只有植物激素的配合使用，才能完成离体培养物中按照需要设计的各个调节环节。常用的植物组培激素种类主要有生长素类、细胞分裂素类、赤霉素。
植物组织培养试验
《植物组织培养技术》实验指导 实验一组培室设备参观及器皿的洗涤和灭菌 一、目的要求： 1．通过参观，了解组织培养室的几个主要组成部分和各部分应有的基本设备以及有关仪器的用途与功能。 2．通过实际操作，学会洗涤剂的配制和各种器皿的清洗和灭菌方法。 二、材料用具： 高压灭菌锅、烘箱、超净工作台、双筒解剖镜、酸度测定仪、空调机、控温仪、百分之一与万分之一天平、电炉、玻璃器皿（试管、三角瓶、移液管、漏斗、烧杯、容量瓶、试剂瓶、量筒酒精灯），以及镊子、解剖刀、解剖针、手术剪，肥皂、洗衣粉、重铬酸钾、浓硫酸等。三、说明： 在进行各类具体的组培实验前，首先了解组培室的结构及主要设备的用途和性能是十分必要的，总体上的了解有利于以后各实验的进行以及正确的使用各种仪器和设备。 植物组织培养是一项十分细致的工作，为了保证植物外植体不受污染，第一关就是要对各种器皿进行清洗和消毒，使它们保持无菌状态，
做这些工作同样有一套科学的方法和需要熟练的技巧，因此每个学生必须学好这套基本功。 四、方法和步骤： 首先在老师带领下参观组培室，并听取讲解，然后配制洗液，称取工业用重铬酸钾40克，溶解在500ml在水中，然后徐徐加入450ml 粗制浓硫酸（或废硫酸）配好的溶液呈红色，铬酸洗液是一种强氧化剂，去污能力强，但玻璃器皿上沾有油脂、凡士林、石蜡等则用此液无效，铬酸洗液可反复使用，直到溶液呈青褐色为止。此溶液腐蚀性强，洗涤时需注意。 每人清洗部分玻璃器皿，方法：清水洗净→泡入洗衣粉水溶液中进行洗刷→清水反复冲洗→蒸馏水淋一遍→烘干备用。 然后清洗部分较脏的玻璃器皿，方法：采用先碱后酸，即用洗衣粉洗刷后冲洗干净→晾干→侵入酪酸洗液，浸泡时间视器皿的肮脏程度而定→清水反复冲洗干净→蒸馏水淋洗一遍→烘干备用。 带有石蜡或胶布的器皿：先将其除去，再用常规洗涤，石蜡用水煮沸数次即可去掉，胶布粘着物则需用洗衣粉液煮沸数小时，再用水冲洗，凉干后浸入洗液，以后的步骤同前。 对器皿和用具进行高压灭菌，即用手提式高压灭菌锅，在1.1个大气压下保持15~20分钟。解剖刀、手术剪、解剖针、镊子等用具在接
植物组织培养技术实验指导
T 植物细胞组织培养技术 实验指导书 中国计量学院生命科学学院 二零零六年七月 《植物细胞组织培养》实验指导 目录 实验一、植物组织培养培养基母液的配制 实验二、植物组织培养的培养基配制 实验三、康乃馨的离体快繁 实验四、胡萝卜愈伤组织的建立 实验五、组织培养物的继代培养 实验一组织培养基母液的配制 一、仪器及药品 冰箱、天平（0.0001g） 容量瓶: 1000 ml, 500 ml、250 ml、100 ml、25 ml
广口储液瓶：500 ml、250 ml、50 ml、25 ml 烧杯：1000 ml 、500 ml 、250 ml、100 ml 、50 ml 数十根玻璃搅棒、大药勺、小药勺或挖耳勺 标签纸、胶水、50%酒精、95%酒精、1 mol/L盐酸、1 mol/L NaOH 几种常用的培养基所需的大量元素、微量元素、有机物、激素、铁盐等药品 蒸馏水 二、方法和步骤： 按照培养基配方,把大量元素、微量元素、铁盐、有机物、植物激素分类,每一类中各种药品分别称量,如N6培养基各种母液的配制步骤如下： 大量元素母液：包括用量较大的几种化合物〈见N6培养基配方〉，按表中排列顺序,将每种药品的用量扩大10倍，分别称取，分别溶解，然后按照顺序混合在一起。如钙盐等易发生沉淀的药品不能混合，应单位定容，最后加上蒸馏水，定容至1升或500毫升。在定容时注意用蒸馏水洗净烧杯和玻璃搅棒以减少误差。定容后的溶液为大量元素母液，配制培养基时，每配1 L培养基需吸取该母液l00 ml 或50 ml。 微量元素母液：因用量少，为了称量精确和方便,常配成 100倍或1000倍的母液，即每种药品扩大l00倍或者l000倍。逐个溶解，混合在一起成为微量元素母液，每配1 L N6培养基需吸取该母液10 ml或者1 ml。 铁盐：在N6培养基中需要单独配制，它是由硫酸亚铁（FeSO4?7H2O）2.78 g 和乙二氨四乙酸二钠（Na2-EDTA）3.73 g，分别溶解，混合后，用酒精灯加热半小
观察根毛和根尖的结构实验报告单(建文)
观察根毛和根尖的结构 班级姓名日期 一、追求要求 用放大镜观察根尖外形及根毛。用显微镜观察根尖纵切面，认识根尖各部分的结构特点及其功能。 二．材料用具： 三方法步骤 （一）、用肉眼和放大镜观察根毛及根尖外形 ．结合（图培养豆类根毛的装置），对着光线先用肉眼观察试管内种子的幼根，找到着生在幼根上的白色“绒毛”，这就是根毛。再用放大镜仔细观察根毛。 ．用肉眼和放大镜观察根尖外形 （二）、用显微镜观察根尖纵切面切片。 对照（图根尖纵切结构模式图），在低倍或高倍显微镜下，从根尖的最前端向上仔细辨认出根冠、分生区（生长点）、伸长区和成熟区（根毛区）四个部分。识别每一部分细胞结构有何特点。根尖由、、、四部分组成。 、根冠：位于(根尖\根毛)的顶端,细胞体积较(大\小),排列(不规则\规则).根冠具有（保护\支持)分生区的作用. 、分生区：大部分被(根尖\根冠)包围.细胞体积较(大\小),排列(紧密\疏松),具有很强的(分裂\分生)能力,能不断产生新细胞. 、伸长区：位于(分生区\根冠)上方.细胞能(迅速\缓慢)伸长，几小时能伸长为原来的倍以上，是根生长最（快、慢）的部分。根能不断向土壤深处生长，是与（伸长区、分生区）细胞迅速伸长分不开的。伸长区也能吸收少量水分和矿物质。 、成熟区：位于（伸长区\分生区）上方.细胞(停止\继续)伸长,细胞内有很(大\小)的液泡,液泡里充满(细胞液\细胞质).表皮细胞向外突起形成(根毛\表皮),表皮以内的细胞开始(分化\分裂)形成组织.例如,位于中心部分的某些细胞,细胞质和细胞核消失,上下相邻细胞的横壁也消失,形成了导管. 成熟区以上部位：根毛消失，根内形成导管、帅管。 五．[讨论]：.移栽幼苗,为什么带土移栽容易成活? 提示：幼苗的根系尚不发达,根尖比较柔弱,生有大量的根毛.根尖及根毛与土粒紧紧连在一起.移栽幼苗时若除去根部土壤,就会伤及根尖及根毛,因而会使幼苗根部吸收水分和矿物质的功能减弱,降低了移栽幼苗的成活率. .根的吸收功能主要在根尖的哪一部分? 提示：成熟区生有大量的根毛,使表皮细胞的吸收面积大大增加,是吸收水分和无机盐的主要部位. 六、绘图：在显微镜下，选取有代表性的根尖各部分细胞绘制细胞图（包括根冠、分生区、伸长区、成熟区细胞，在图的右侧标注根尖各部分名称。注意各部分细胞的大小及形状） 观察叶片结构 班级姓名日期 一、追求要求 、练习徒手切片 、认识叶片的结构 、画叶片的表皮细胞和保卫细胞图
植物组织培养实验指导
植物组织培养实验指导 2013.3
附录培养基母液的配制（实验老师准备） 一、实验目的：掌握培养基母液配制的方法。 二、实验原理：配制培养基时，为了使用方便和用量准确，通常采用母液法进行配制，即将所选培养基配方中各试剂的用量，扩大若干倍后再准确称量，分别先配制成一系列的母液置于冰箱中保存，使用时按比例吸取母液进行稀释配制即可。以MS培养基为例，所需配制的母液可分为：MS大量元素母液、MS微量元素母液、MS铁盐母液和MS有机化合物母液等。另外，还要配制生长物质母液，在不同类型的培养基中使用。 三、实验器具与药品： 电子分析天平、托盘天平、烧杯（50ml, 100ml, 500ml, 1000ml）、量筒（1000ml,100ml, 25ml）、容量瓶（1000ml,500ml,100ml）、药勺、称量纸、玻璃棒、滴管、电炉、冰箱。 配制MS培养基所需药品按培养基的配方准备。植物生长调节物质，2,4-D, NAA, 6-BA等。 四、培养基母液的配制过程 首先，按下表“MS培养基母液的配制”，将各种母液根据各自的扩大倍数，计算出扩大后的称取量，然后，分别进行药品称取和母液配制。
（1）MS大量元素母液的配制 按照MS培养基配方的用量扩大20倍，将大量元素配制成20倍的母液。配制时先用量筒量取蒸馏水800ml，放入1000ml的烧杯中，依次分别称取KNO3 38g; NH4NO3 33g, MgSO4·7H2O 7.4g, KH2PO4 3.4g, CaCl2·2H2O 8.8g，按顺序先后倒入烧杯中，用玻璃棒搅动，待第一种化合物溶解后再加入第二种化合物，当最后一种化合物完全溶解后，将溶液倒入1000ml的容量瓶，用蒸馏水定容至1000ml,然后，倒入细口磨砂试剂瓶中，贴上标签，注明配制日期、扩大倍数、配制人姓名、置于4℃冰箱保存备用。配制培养基时每升MS培养基吸取该母液量为50ml。（2）MS微量元素母液的配制 将MS培养基配方中微量元素的无机盐用量分别扩大1000倍，用电子天平分别依次称取MnSO4·4H2O 22.3g，ZnSO4·7H2O 8.6g , H3BO3 6.2g，KI 0.83g，Na2MoO4·2H2O 0.25g，CuSO4·5H2O 0.025g，CoCl2·6H2O 0.025g，并用重蒸水逐个溶解，待全部溶解用容量瓶定容后，装入1000ml倒入细口磨砂试剂瓶中，贴上标签，注明配制日期、扩大倍数、配制人姓名、置于4℃冰箱保存备用。配制培养基时每升MS培养基吸取该母液量为1ml。 ( 3 ) 铁盐母液的配制 在电子天平上准确称量 2.78g硫酸亚铁(FeSO4·7H2O)和3.73g乙二胺四乙酸钠(Na-EDTA),分别倒入盛有400ml蒸馏水的烧杯中，微加热并不断搅拌使之全部溶
植物组织培养实验
实验一MS培养基（芽诱导）的配制与茎段培养 一、 MS芽诱导培养基的合成 （一）、仪器设备 电子分析天平（精确称量）、灭菌器（主要为高压灭菌锅）、精密PH试纸、电炉、烧杯（1000ml）；量简（100ml）、移液枪（0.01-1ml）、培养瓶（500ml）、包口塑料及线绳若干，记号笔，培养箱、超净工作台、接种工具。 （二）、试剂 （MS）培养基的配制试剂 大量元素（母液）；微量元素（母液） 铁盐（母液）有机物（母液） 琼脂蔗糖 激素 IAA BA等；酸碱调解物质 NaOH(0.1N) HCl(0.1N) （三）（MS）培养基的合成(配制1L) 1烧杯体积标定------用量简取1000毫升倒入烧杯，用记号笔标出液面位置 2化琼脂-----烧杯中加入水约400-600毫升，加琼脂7克，加热溶化 3加母液-----大量元素母液50ml，微量元素母液1ml． 铁盐母液10m1．有机物母液10ml、 4加蔗糖-----30g 5加激素（根据培养基的用途，按要求加入本实验中，BA2.0+NAA0.05） 6定容---加水至1000刻度线 7调PH----5.8(冷却后，用0.1N的NaOH或0.1N的HCl调整Ph至5.8) （四）、培养基的分装 将MS培养基的合成搅拌均匀后、分装到三角瓶中，每瓶约30m1．用一层聚丙烯塑料薄膜包上瓶口，用线绳扎口、写上标号 （五）培养基灭菌 按灭面器使用力法对培养基灭菌、高压保持20分钟，灭菌完毕后取出培养基，放在平台上冷凝。 （六）培养基灭菌后，原则上2~3天后使用 （七）母液在不取用时，存放在4℃冰箱中； 复习思考题： (1)能不能把所有母液置于一个瓶里当作—种母液用于配制？ (2)分析导致固体培养基冷却后不能凝固的原因? (3)为什么新配制的培养基不能即时使用？ 实验总结：