四组分分离

四组分分析法是将沥青分离为沥青质、饱和分、芳香分和胶质。其组分性状见表6-2。

表6-2 石油沥青四组分分析法的各组分性状

按照四组分分析法，各组分对沥青性质的影响，根据科尔贝特的研究认为：饱和分含量增加，可使沥青稠度降低（针入度增大）；树脂含量增大，可使沥青的延性增加；在有饱和分存在的条件下，沥青质含量增加，可使沥青获得低的感温性；树脂和沥青质的含量增加，可使沥青的粘度提高。

焦油的分析

1）测定沥青质含量：

（1）称取焦油样1 g(W，准确到0.0001 g)于经恒重的磨口锥形瓶中，按每克试样加50mL溶剂之比例加入正庚烷。

（2）将锥形瓶1、抽提器、冷凝器相连，放到电热套上，打开冷凝水，加热回流0.5h，使样品与正庚烷混合均匀，停止加热，待溶液冷却后取下锥形瓶1，盖好塞子。在暗处静置1h，使沥青质沉淀完全。

（3）在装有定量滤纸的玻璃漏斗上过滤，先将锥形瓶 1 中上部溶液倒入，滤液收集于锥形瓶2中，最后将沉淀及溶液摇动倒入漏斗，瓶 1 中残留物用50～60℃热正庚烷30 mL分3 次洗涤，洗涤液亦倒入漏斗，滤液收集于锥形瓶2 中。

（4）折叠带有沉淀的滤纸，并放入抽提器中，将锥形瓶 2 同抽提器、冷凝器相连，在电热板上回流 1 h，除去沥青质中夹杂的油质及胶质。

（5）回流完毕后稍冷却，取下瓶2，在瓶 1 中加苯30 mL，装上抽提器和冷凝器，在电热板上回流 1 h，抽提到流下的液体无色为止。

（6）冷却后取下瓶1，在水浴上赶去大部分溶剂，放到真空烘箱内，在105～

。

110℃、53.3～66.7 KPa负压下放置1 h，取出冷到室温，称重为

1

（7）将锥形瓶 2 放在水浴上，赶去溶剂后即得脱沥青质试样。

2）测定饱和分、芳香分、胶质含量：

（1）将（7）节得到的全部脱沥青质试样加热溶解后用10 mL石油醚稀释。

（2）在吸附柱下端塞少许棉花，上部填装氧化铝40g，敲紧后加入石油醚30 mL预湿吸附柱。

（3）待预湿石油醚全部进入氧化铝后，加入稀释的试样，用10 mL (80 mL 石油醚的一部分) 分 3 次清洗锥形瓶内残留物，洗涤液亦加入吸附柱内，全部试样进入氧化铝后，再加少量氧化铝。

（4）依次加入表2-3中溶剂进行冲洗，最初流出的20 mL为纯石油醚，以后每更换溶剂时应同时更换接受瓶(接受用的锥形瓶须事先恒重)。

表2-3 各组分的冲洗溶剂及加入量

冲洗液加入量，毫升流出组分组分颜色

石油醚80 饱和分无色苯80 芳烃棕色

乙醇40 胶质黑色

（5）将收集的各组分溶液蒸出大部分溶剂后，再放到真空烘箱中在105～110℃、负压53.3～66.7KPa下干燥1 h，取出冷到室温后称重。

3）四种组分的气相色谱法—质谱联用（GC-MS）

测试条件：

（1）色谱：载气；99.999%氦气；进样口：300℃，传输线：280℃；色谱柱：HP-5MS弹性石英毛细柱（60m×0.25mm×0.25μm）；柱温：初温40℃保持10min，4℃/min升温至300℃，保持30min；载气流速：恒流1mL/min，分流100:1。

（2）质谱：EI源，70eV；灯丝电流：100μA；倍增器电压：1200V；质量扫描范围：35～420 amu。

化沥青回流时间可延长至1h)，待溶液冷却后，取下瓶1，盖好瓶塞，在暗

处静置沉降1h。在不产生摇动的条件下，尽可能地将上部清夜慢慢倒入装有定量滤纸的漏斗中，最后将剩余的少量溶液和沉淀摇动并倒入滤纸，注意勿使沥青质升至滤纸的上缘。瓶1中残留物用60~70℃的热正庚烷30ml分多次洗涤，洗涤液亦倒入滤纸中，全部滤纸收集于瓶2中.瓶1不必洗涤，留待6.2.5使用。

③折叠带有沉淀的滤纸，放入抽提器中，将瓶2与抽提器、冷凝器组装好，加热回流1h，回流完毕，稍冷却，取下瓶2以后按6.3.1进行。

④往瓶1中加60ml甲苯，装上抽提器，冷凝器，回流至少1h，抽提至液滴无色，滤纸基本无色为止。

⑤冷却后取下瓶1，蒸出甲苯后，放入真空烘箱中，在105~110℃，93±1kPa 的条件下，保持1h，取出后在干燥器中冷却至室温，称量值为沥青质质量m

1

。

(2)测定饱和分、芳香分、胶质(或胶质加沥青质)含量

①回收瓶2中大部分正庚烷，使容颜浓缩至约10mL。对沥青质含量低于10%的样品，直接称取0.5±0.01g试样，称量至0.001g，加10mL正庚烷溶解稀释。

②吸附柱与超级恒温水浴连接，保持循环水温为50±1℃。

③在洗净干燥的吸附柱下端塞少许脱脂棉，从上端加入40g备用的氧化铝，同时用包有橡皮的细棒，轻轻敲打柱子，使氧化铝紧密均匀后立即加入30mL正庚烷预湿吸附柱。

④待预湿正庚烷全部进入氧化铝吸附剂底层时，立即加入浓缩溶液(或溶解稀释的试样)，取10mL正庚烷(为冲洗饱和分80mL正庚烷的一部分)分多次将三角瓶中的残留物洗至柱中，柱下放一量筒，接受首先流出的正庚烷，当全部试样进入氧化铝顶层时，即可再加少许备氧化铝覆盖。

⑤依次加入表2-1中的溶剂进行冲洗，最初流出20mL为纯正庚烷，可作为表2-1中80mL正庚烷的一部分循环使用，以后用已恒重过的磨口三角瓶作接受瓶，每更换冲洗剂时，应更换接受瓶。

表2-1 冲洗溶剂及流出组分

瓶号冲洗剂加入量，mL 流出组分组分颜色

3 正庚烷80 饱和分无色

4 甲苯80 芳香分黄~深棕色

5 甲苯—乙醇（1：1体积比）40 胶质或胶质加沥青质深褐~黑色

甲苯40

乙醇40

⑥将收集的各组分回收溶剂后，放入真空烘箱，在105~110℃，93±1kPa条件下，保持

1h，取出后，在干燥器中冷却至室温，称量，分别得到饱和分m

2、芳香分m

3

、胶

质m

4(或胶质加沥青质m

5

)的质量，由于少量甲苯不容无未计量，还有少量胶质不

能完全脱附，因此总收率一般为90%~97%，胶质含量可有减差法计算。

实验四 线粒体的分离与观察

实验八线粒体的分离与观察 实验目的 用差速离心法分离动、植物细胞线粒体。 实验原理 线粒体(mitochondria)是真核细胞特有的，使能量转换的重要细胞器。细胞中的能源物质——脂肪、糖、部分氨基酸在此进行最终的氧化，并通过耦联磷酸化生成ATP，供给细胞生理活动之需。对线粒体结构与功能的研究通常是在离体的线粒体上进行的。 制备线粒体采用组织匀浆在悬浮介质中进行差速离心的方法。在一给定的离心场中(对于所使用的离心机，就是选用一定的转速)，球形颗粒的沉降速度取决于它的密度、半径和悬浮介质的粘度。在一均匀悬浮介质中离心一定时间内，组织匀浆中的各种细胞器及其它内含物由于沉降速度不同将停留在高低不同的位置。依次增加离心力和离心时间，就能够使这些颗粒按其大小、轻重分批沉降在离心管底部，从而分批收集。细胞器中最先沉淀的是细胞核，其次是线粒体，其它更轻的细胞器和大分子可依次再分离。 悬浮介质通常用缓冲的蔗糖溶液，它比较接近细胞质的分散相，在一定程度上能保持细胞器的结构和酶的活性，在pH7.2的条件下，亚细胞组分不容易重新聚集，有利于分离。整个操作过程应注意使样品保持4℃，避免酶失活。 线粒体的鉴定用詹纳斯绿活染法。詹纳斯绿B(Janus green B)是对线粒体专一的活细胞染料，毒性很小，属于碱性染料，解离后带正电，由电性吸引堆积在线粒体膜上。线粒体的细胞色素氧化酶使该染料保持在氧化状态呈现蓝绿色从而使线粒体显色，而胞质中的染料被还原成无色。 I．鸡肝线粒体的分离 实验用品 一、材料 鸡肝脏 二、试剂 1. 生理盐水 2．1％詹纳斯绿B染液，用生理盐水配制。 3. 0. 25 mol／L蔗糖+0.01mol／L Tris-盐酸缓冲液（ph7.4）：

细胞和细胞器及间质的分离

第一篇组成人体的细胞 第三章亚细胞结构的分离与鉴定 细胞山各种亚细胞结构组成。其重要的研究手段之一是分离纯化亚细胞组分，观察它们的结构或进行生化分析。离心技术是实现这一日标的基本手段。一般认为，转速为10?25Kr/mm的离心机称为高速离心机；转速超过25Kr/min,离心力大于89Kg者称为超速离心机。U前超速离心机的最高转速可达lOOKr/min, 离心力超过500Kg。 第一节亚细胞结构分离的技术 分离亚细胞组分的第一步是制备组织匀浆或细胞匀浆。匀浆 (Homogenization)是在低温条件下，将组织或细胞放在匀浆器中加入等渗匀浆 介质(即0?25moLZL蔗糖-0.003mol/L氯化钙溶液)研磨，使细胞被机械地研碎成为各种 亚细胞组分和包含物的混合物。 分离亚细胞组分的第一步是分级分离。它通过山低速到高速离心技术，使非均一混合体中的颗粒按其大小轻《分批沉降到离心管的不同部位，再分部收集, 即可得到各种亚细胞组分。山于样品中各种大小和密度不同的颗粒在离心开始时是均匀分布于整个离心管中，故每级分离得到的第一次沉淀必然不是纯的最巫的颗粒，须经反复悬浮和离心加以纯化。分离亚细胞组分主要离心技术是差速离心和密度梯度离心。 差速离心(differential centrifugation)是在密度均一的介质中山低速到高速逐级离心，用于分离不同大小的细胞和细胞器。在差速离心中细胞器沉降的顺序依次为：细胞核、线粒体、溶酶体与过氧化物酶体、内质网与高尔基体、最后为核糖体。山于各种细胞器在大小和密度上相互重叠，一般重复2?3次效果会好一些。通过差速离心可将细胞器初步分离，但常需进一步通过密度梯离心再行分离纯化。 密度梯度离心(density gradient centrifugation)是用一定的介质在离心管内 形成一连续或不连续的密度梯度，将细胞混悬液或匀浆置于介质的顶部，通过? 力或离心力场的作用使细胞分层、分离。这类分离乂可分为速度沉降和等密度沉降两种。密度梯度离心常用的介质为氯化锂，蔗糖和多聚蔗糖。分离活细胞的介质要求：能产生密度梯度，且密度高时，粘度不商；pH中性或易调为中性；浓度大时渗透圧不大；对细胞无毒。①速度沉降(velocity sedimentation)主要用于分离密度相近而大小不等的细胞或细胞器。这种方法所采用的介质密度较低，介质的最大密度应小于彼分离生物颗粒的最小密度。生物颗粒(细胞或细器)在十分平缓的密度梯度介质中按各自的沉降系数以不同的速度沉降而达到分离：②等密度沉降(isopycnic sedimentation)适用于分离密度不等的颗粒。细胞或细胞器在连续梯度的介质中经足够大离心力和足够长时间则沉降或漂浮到与自身密度相等的介质处，并停留在那里达到平衡，从而将不同密度的细胞或细胞器分离。 等密度沉降通常在较高密度的介质中进行。介质的最高密度应大于被分离组分的最大密度。再者，这种方法所需要的力场通常比速度沉降法大10、100倍，故往往需要高速或超速离心，离心时间也较长。大的离心力、长的离心时间都对细胞不利。因此，这种方法适于分

石油炼制过程和主要工艺简介

石油炼制的主要过程和工艺简介 石油、天然气是不同烃化合物的混合物， 简单作为燃料是极大的浪费，只有 通过加工处理，炼制出不同的产品，才能充分发挥其巨大的经济价值。 石油经过 加工，大体可获得以下几大类的产品：汽油类（航空汽油、军用汽油、溶剂汽油）； 煤油（灯用煤油、动力煤油、航空煤油）；柴油（轻柴油、中柴油、重柴油）；燃 料油；润滑油；润滑油脂以及其他石油产品（凡士林、石油蜡、沥青、石油焦炭 等）。有的油品经过深加工，又获得质量更高或新的产品。 石油加工，主要是指对原油的加工。世界各国基本上都是通过一次加工、 次加工以生产燃料油品，三次加工主要生产化工产品。原油在炼厂加工前，还需 经过脱盐、脱水的预处理，使之进入蒸馏装置时，其各种盐类的总含盐量低于 5mg/L ,主要控制其对加工设备、管线的腐蚀和堵塞。 原油一次加工，主要采用常压、减压蒸馏的简单物理方法将原油切割为沸点 范围不同、密度大小不同的多种石油馏分。各种馏分的分离顺序主要取决于分子 大小和沸点高低。在常压蒸馏过程中，汽油的分子小、沸点低（50?200C ）,首 先馏出，随之是煤油（60?5C ）、柴油（200?0C ）、残余重油。重油经减压蒸 馏又可获得一定数量的润滑油的基础油或半成品 （蜡油），最后剩下渣油（重油）。 一次加工获得的轻质油品（汽油、煤油、柴油）还需进一步精制、调配，才可做 为合格油品投入市场。我国一次加工原油， 20%左右的蜡油。 原油二次加工，主要用化学方法或化学 转化，以提高某种产品收率，增加产品品种， 艺很多，要根据油品性质和设计要求进行选择。主要有催化裂化、催化重整、焦 化、减粘、加氢裂化、溶剂脱沥青等。如对一次加工获得的重质半成品（蜡油） 进行催化裂化，又可将蜡油的40%左右转化为高牌号车用汽油，30%左右转化为 柴油，20%左右转化为液化气、气态烃和干气。如以轻汽油（石脑油） 为原料， 采用催化重整工艺加工，可生产高辛烷值汽油组分（航空汽油）或化工原料芳烃 （苯、二甲苯等），还可获得副产品氢气。 石油三次加工是对石油一次、二次加工的中间产品（包括轻油、重油、各种 石油气、石蜡等），通过化学过程生产化工产品。如用催化裂化工艺所产干气中 的丙稀生产丙醇、丁醇、辛醇、丙稀腈、腈纶；用丙稀和苯生产丙苯酚丙酮；用 碳四（C4）馏分生产顺酐、顺丁橡胶；用苯、甲苯、二甲苯生产苯酐、聚脂、 只获得25%?40%的直馏轻质油品和 -物理方法，将原油馏分进一步加工 提高产品质量。进行二次加工的工

现代分离分析法期末复习题 2.

期末复习题 一、最佳选择题，每题2分，共20分。每题的备选项中只有一个最佳答案。 1. 分离化学中的纯度概念是( ) A. 分离过程中目标化合物浓度增加 B. 溶液中溶剂蒸发掉，溶液中所有组分浓度同程度增加的过程 C. 通过分离操作使产物纯度增加的过程。 D. 表示纯化产物主组分含量高低或杂质多少 2. 在常量分离中，当溶液中的金属离子还剩下( )时，即可认为沉淀完全。 A. 10-3mol/L B. 10-4 mol/L C. 10-5 mol/L D. 10-6 mol/L 3. 用8-羟基喹啉从水溶液中萃取Al3+，组成的萃取体系是( ) A. 简单分子萃取体系 B. 中性络合萃取体系 C. 螯合萃取体系 D. 离子缔合萃取体系 4. 下列体系中，形成协萃体系的是( ) A. 乙酰基丙酮为萃取剂，萃取Al3+ B. 用乙醚萃取FeCl3 C. 形成高分子胺盐的萃取体系 D. HTTA与2,2-联吡啶为萃取剂，萃取La3+ 5. 下列属于阴离子交换树脂的是( ) A. RSO3H B. ROH C. RNH2(CH3)OH D. RCO2H 6.可以作为离子交换树脂合成中的交联剂的是( ) A. 苯乙烯

B. 丙烯酸 C. 甲基丙烯酸 D. 二乙烯苯 7. 吸附层析分离是利用( ) A. 利用吸附剂表面对不同组分吸附性能的差异 B. 利用不同组分在流动相和固定相之间的分配系数不同 C. 利用不同组分对离子交换剂亲和力的不同 D. 利用某些凝胶对于不同分子大小的组分阻滞作用的不同 8. 层析用硅胶有不同标号，硅胶GF254代表( ) A. 硅胶中不含粘合剂 B. 由硅胶和煅石膏混合而成 C. 硅胶中既含有煅石膏又含荧光指示剂 D. 硅胶中只含有荧光指示剂 9. 依据样品组分的分配系数和电泳速度的差别而分离的是( ) A. 毛细管区带电泳 B. 毛细管凝胶电泳 C. 毛细管等点聚焦电泳 D. 毛细管电色谱 10.过滤粒径由小到大顺序排列正确的是( ) A. 反渗透＜超滤＜微滤＜一般过滤 B. 反渗透＜微滤＜超滤＜一般过滤 C. 微滤＜超滤＜反渗透＜一般过滤 D. 超滤＜反渗透＜微滤＜一般过滤 11. 分离化学中的纯化是( ) A. 分离过程中目标化合物浓度增加 B. 溶液中溶剂蒸发掉，溶液中所有组分浓度同程度增加的过程 C. 通过分离操作使产物纯度增加的过程。 D. 表示纯化产物主组分含量高低或杂质多少 12. 下列哪一项不是有机共沉淀的特点

流式细胞分离细胞

流式细胞仪分离原理和步骤 流式细胞术（flow cytometer,FCM）是一种在功能水平上对单细胞或其他生物粒子进行定量分析和分选的检测手段，它可以高速分析上万个细胞，并能同时从一个细胞中测得多个参数，具有速度快、精度高、准确性好等优点，已成为当代最先进的细胞定量分析技术。本实验以间接免疫荧光标记法为例。 实验原理 因淋巴细胞表面有特征性的抗原或受体表达，故先用特异性鼠源性单克隆抗体与细胞表面相应抗原结合，再用荧光标记的第二抗体结合，经流式细胞仪测定荧光强度和阳性百分率，即可知相应抗原的密度和分布。细胞的分选是通过分离含有单细胞的液滴而实现的。在流动室的喷口上配有一个超高频电晶体，充电后振动，使喷出的液流断裂为均匀的液滴，待测定细胞就分散在这些液滴之中。将这些液滴充以正负不同的电荷，当液滴流经带有几千伏特的偏转板时，在高压电场的作用下偏转，落入各自的收集容器中，不予充电的液滴落入中间的废液容器，从而实现细胞的分离。 材料和仪器 1 特异性鼠抗人单克隆抗体（McAb）（如抗CD3、抗CD4等）、荧光标记的羊抗鼠或兔抗鼠第二抗体、灭活正常兔血清，含10％FBS的FBS的RPMI-1640溶液、DPBS、洗涤液、固定液等。 2 玻璃管、塑料离心管、离心机、流式细胞仪、倒置显微镜。 实验方法 1 制备活性高的外周血单个核细胞悬液，用含有10％FCS的RPMI-1640溶液调整细胞浓度为5×106~1×107/mL。 2 取40μL细胞悬液加入预先有特异性鼠抗人McAb 5~50μL的小玻璃管或塑料离心管中，再加50μL 1：2（用DPBS稀释）灭活正常兔血清，4℃，30min。 3 用洗涤液洗涤2次，每次加液2mL左右，1000r/min，离心5min，弃去上清液。 4 加入50μL工作浓度的羊抗鼠(或兔抗鼠)荧光标记二抗，充分振荡，4℃，30min。 5 用洗涤液洗涤2次，每次加液2mL左右，1000r/min，离心5min。 6加1mL固定液，混匀，上流式细胞仪分选细胞。标本在试管中可保存5~7天。

亚细胞结构分离的技术

亚细胞结构分离的技术 分离亚细胞组分的第一步是制备组织匀浆或细胞匀浆。匀浆（Homogenization）是在低温条件下，将组织或细胞放在匀浆器中加入等渗匀浆介质（即0.25moL/L蔗糖一0.003mol/L氯化钙溶液）研磨，使细胞被机械地研碎成为各种亚细胞组分和包含物的混合物。 分离亚细胞组分的第二步是分级分离。它通过由低速到高速离心技术，使非均一混合体中的颗粒按其大小轻重分批沉降到离心管的不同部位，再分部收集，即可得到各种亚细胞组分。由于样品中各种大小和密度不同的颗粒在离心开始时是均匀分布于整个离心管中，故每级分离得到的第一次沉淀必然不是纯的最重的颗粒，须经反复悬浮和离心加以纯化。分离亚细胞组分主要离心技术是差速离心和密度梯度离心。 差速离心（differential centrifugation）是在密度均一的介质中由低速到高速逐级离心，用于分离不同大小的细胞和细胞器。在差速离心中细胞器沉降的顺序依次为：细胞核、线粒体、溶酶体与过氧化物酶体、内质网与高尔基体、最后为核糖体。由于各种细胞器在大小和密度上相互重叠，一般重复2～3次效果会好一些。通过差速离心可将细胞器初步分离，但常需进一步通过密度梯离心再行分离纯化。 密度梯度离心（density gradient centrifugation）是用一定的介质在离心管内形成一连续或不连续的密度梯度，将细胞混悬液或匀浆置于介质的顶部，通过重力或离心力场的作用使细胞分层、分离。这类分离又可分为速度沉降和等密度沉降两种。 密度梯度离心常用的介质为氯化铯，蔗糖和多聚蔗糖。分离活细胞的介质要求：能产生密度梯度，且密度高时，粘度不高； pH中性或易调为中性；浓度大时渗透压不大；对细胞无毒。 ①速度沉降（velocity sedimentation）主要用于分离密度相近而大小不等的细胞或细胞器。这种方法所采用的介质密度较低，介质的最大密度应小于被分离生物颗粒的最小密度。生物颗粒（细胞或细器）在十分平缓的密度梯度介质中按各自的沉降系数以不同的速度沉降而达到分离； ②等密度沉降（isopycnic sedimentation）适用于分离密度不等的颗粒。细胞或细胞器在连续梯度的介质中经足够大离心力和足够长时间则沉降或漂浮到与自身密度相等的介质处，并停留在那里达到平衡，从而将不同密度的细胞或细胞器分离。等密度沉降通常在较高密度的介质中进行。介质的最高密度应大于被 100分离组分的最大密度。再者，这种方法所需要的力场通常比速度沉降法大10 ~倍，故往往需要高速或超速离心，离心时间也较长。大的离心力、长的离心时间都对细胞不利。因此，这种方法适于分离细胞器，而不太适于分离和纯化细胞。 分离亚细胞组分的第三步是对分级分离得到的组分进行分析，以确认。常要的分析方法包括形态和功能鉴定。

分析化学中常用的分离富集方法

分析化学中常用的分离富集方法 思考题 11-1 在分析化学中，为什么要进行分离富集？分离时对常量和微量组分的回收率要求如何？答：在定量分析，对于一些无法通过控制分析条件或采用掩蔽法来消除干扰，以及现有分析方法灵敏度达不到要求的低浓度组分测定，必须采用分离富集方法。换句话说，分离方法在定量分析中可以达到消除干扰和富集效果，保证分析结果的准确性，扩大分析应用围。在一般情况下，对常量组分的回收率要求大于99.9%，而对于微量组分的回收率要求大于99%。样品组分含量越低，对回收率要求也降低。 11-2 常用哪些方法进行氢氧化物沉淀分离？举例说明。 答：在氢氧化物沉淀分离中，沉淀的形成与溶液中的[OH-]有直接关系。因此，采用控制溶液中酸度可使某些金属离子彼此分离。在实际工作中，通常采用不同的氢氧化物沉淀剂控制氢氧化物沉淀分离方法。常用的沉淀剂有： a 氢氧化钠：NaOH是强碱，用于分离两性元素（如Al3+，Zn2+，Cr3+）与非两性元素，两性元素的含氧酸阴离子形态在溶液中，而其他非两性元素则生成氢氧化物胶状沉淀。 b 氨水法：采用NH4Cl-NH3缓冲溶液（pH8-9），可使高价金属离子与大部分一、二金属离子分离。 c 有机碱法：可形成不同pH的缓冲体系控制分离，如pH5-6六亚甲基胺-HCl缓冲液，常用于Mn2+，Co2+，Ni2+，Cu2+，Zn2+，Cd2+与Al3+，Fe3+，Ti（IV）等的分离。 d ZnO悬浊液法等：这一类悬浊液可控制溶液的pH值，如ZnO悬浊液的pH值约为6，可用于某些氢氧化物沉淀分离。 11-3 某矿样溶液含Fe3+，A13+，Ca2+，Mg2+，Mn2+，Cr3+，Cu2+和Zn2+等离子，加入NH4C1和氨水后，哪些离子以什么形式存在于溶液中？哪些离子以什么方式存在于沉淀中？分离是否完全？ 答：NH4Cl与NH3构成缓冲液，pH在8-9间，因此溶液中有Ca2+，Mg2+,，Cu(NH3)42-、Zn(NH3)42+等离子和少量Mn2+，而沉淀中有Fe(OH)3，Al(OH)3和Cr(OH)3和少量Mn(OH)2沉淀。试液中Fe3+，A13+，Cr3+可以与Ca2+，Mg2+，Cu2+和Zn2+等离子完全分开，而Mn2+分离不完全。 11-4 如将上述矿样用Na2O2熔融，以水浸取，其分离情况又如何？ 答：Na2O2即是强碱又是氧化剂，Cr3+、Mn2+分别被氧化成CrO42-和MnO4-。因此溶液有AlO22-，ZnO22-，MnO4-和CrO42-和少量Ca2+，在沉淀中有：Fe(OH)3，Mg(OH)2和Cu(OH)2和少量Ca(OH)2或CaCO3沉淀。Ca2+将分离不完全。

石油溶剂知识

馏程：纯化合物都有一定的沸点，但石油及其产品则是一个主要由多种烃类及少量烃类衍生物组成的复杂混合物，其沸点表现为一很宽的范围，是沸点连续的多组分的混合物，因而石油产品没用一个确定的沸点，通常以该产品的沸点范围或馏程表示。当加热石油产品时，首先蒸发出来的主要是分子量小的，沸点低的组分，随着加热温度的升高，分子量大的，沸点高的也逐渐蒸发出来，直到最后高沸点的物质全部蒸发出来为止。油品在规定条件下，蒸馏所得到的以初馏点和终馏点表示其蒸发特征的温度范围叫馏程。馏程规定的实质是将一定体积或重量的油品加热蒸馏，测出各溜出量的相应温度，或相当于一定馏出温度的馏出量。初馏点：在恩氏蒸馏设备里，当油品加热蒸馏出来第一滴油品时，记录下来的油蒸汽温度。 终馏点：当油品基本上全部蒸馏出来时，油蒸汽温度达最高温度叫油品的干点又叫终馏点。 闪点：又叫闪燃点，是指可燃性液体表面上的蒸汽和空气的混合物与火接触而初次发生闪光时的温度。各种油品的闪点可通过标准仪器测定。闪点温度比着火点温度低些。液体闪点就是可能引起火灾的最低温度。闪点越低，引起火灾的危险性越大。 燃点：又叫着火点，是指可燃性液体表面上的蒸汽和空气的混合物与火接触而发生火焰能继续燃烧不少于5s时的温度。可在测定闪点后继续在同一标准仪器中测定。可燃性液体的闪点和燃点表明其发生爆炸或火灾的可能性的大小，对运输、储存和使用的安全有极大关系。 倾点:是指油品在规定的试验条件下，被冷却的试样能够流动的最低温度。 凝点：是指油品在规定的试验条件下，被冷却的试样油面不再移动时的最高温度，都以℃表示。是用来衡量润滑油低温流动性的常规指标，同一油品的倾点比凝点略高几度，过去常用凝点，现在国际通用倾点。倾点或凝点偏高，油品的低温流动性就差。人们可以根据油品倾点的高低，考虑在低温条件下运输、储存、收发时应该采取的措施，也可以用来评估某些油口的低温使用性能。 苯胺点：在标准试验条件下石油产品与等体积的苯胺，在互相溶解成为单一液相的最低温度叫苯胺点。基于石油产品中各种烃类在极性溶剂中有不同的溶解度，当在油品中加入同体积苯胺时，两者在试管内分为两层，然后对混合物加热至层次消失，呈现透明，再冷却至透明溶液刚开始呈现混浊，并不再消失的一瞬间，此时的温度为所测得的苯胺点。 溴值：在规定条件下,10克试样所消耗溴用克为单位的数值。是一种表示物质不饱和度的指标。用纯数表示。 粘度是指液体受外力作用移动时，分子间产生的内磨擦力的量度。 运动粘度：是动力粘度与同温度下该流体密度P之比。单位为m2/s 动力粘度：面积各为1m2并相距1m的两层流体，以1m/s的速度作相对运动时所产生的内摩擦力。单位：Pa.S(帕.秒) kb叫沸点升高系数。它与溶剂的性质有关，而与溶质性质无关。 ASTM系美国材料与试验协会的英文缩写，其英文全称为American Society for Testing and Materials. MSDS为物料安全数据表，其英文全称为Material Safety Data Sheet. 溶剂油：由石油分馏得到的烃类混合物溶剂叫石油溶剂油，简称溶剂油；溶剂是由化工原料合成或精制得到的成分单一烃类溶剂是烃的纯溶剂。

石油炼化常用的工艺流程

石油炼化常用的工艺流程为常减压蒸馏、催化裂化、延迟焦化、加氢裂化、溶剂脱沥青、加氢精制、催化重整。 （一）常减压蒸馏 １.原料：原油等。 ２.产品:石脑油、粗柴油（瓦斯油)、渣油、沥青、减一线。 ３.基本概念: 常减压蒸馏是常压蒸馏和减压蒸馏的合称，基本属物理过程:原料油在蒸馏塔里按蒸发能力分成沸点 范围不同的油品（称为馏分),这些油有的经调合、加添加剂后以产品形式出厂,相当大的部分是后续 加工装置的原料。 常减压蒸馏是炼油厂石油加工的第一道工序,称为原油的一次加工,包括三个工序:a.原油的脱盐、脱水；ｂ.常压蒸馏;ｃ.减压蒸馏。 4．生产工艺： 原油一般是带有盐份和水,能导致设备的腐蚀,因此原油在进入常减压之前首先进行脱盐脱水预处理, 通常是加入破乳剂和水。 原油经过流量计、换热部分、沏馏塔形成两部分，一部分形成塔顶油，经过冷却器、流量计,最后进 入罐区,这一部分是化工轻油（即所谓的石脑油）；一部分形成塔底油，再经过换热部分，进入常压炉、常压塔,形成三部分，一部分柴油,一部分蜡油，一部分塔底油；剩余的塔底油在经过减压炉，减 压塔，进一步加工，生成减一线、蜡油、渣油和沥青。

各自的收率:石脑油(轻汽油或化工轻油)占1％左右，柴油占2０%左右，蜡油占3０％左右,渣油和沥青约占42％左右，减一线约占5%左右。 常减压工序是不生产汽油产品的，其中蜡油和渣油进入催化裂化环节，生产汽油、柴油、煤油等成品油；石脑油直接出售由其他小企业生产溶剂油或者进入下一步的深加工,一般是催化重整生产溶剂油或提取萃类化合物；减一线可以直接进行调剂润滑油。 5.生产设备: 常减压装置是对原油进行一次加工的蒸馏装置，即将原油分馏成汽油、煤油、柴油、蜡油、渣油等组分的加工装置。原油蒸馏一般包括常压蒸馏和减压蒸馏两个部分。 a.常压蒸馏塔 所谓原油的常压蒸馏,即为原油在常压(或稍高于常压）下进行的蒸馏,所用的蒸馏设备叫做原油常压精馏塔（或称常压塔）。 常压蒸馏剩下的重油组分分子量大、沸点高，且在高温下易分解，使馏出的产品变质并生产焦炭，破坏正常生产。因此,为了提取更多的轻质组分，往往通过降低蒸馏压力,使被蒸馏的原料油沸点范围降低。这一在减压下进行的蒸馏过程叫做减压蒸馏。 b．减压蒸馏塔 减压蒸馏是在压力低于100ＫPa的负压状态下进行的蒸馏过程。减压蒸馏的核心设备是减压塔和它的抽真空系统。 减压塔的抽真空设备常用的是蒸汽喷射器（也称蒸汽吸射泵）或机械真空泵。其中机械真空泵只在一些干式减压蒸馏塔和小炼油厂的减压塔中采用，而广泛应用的是蒸汽喷射器。

植物体内的亚细胞组分分离

植物体内的亚细胞组分分离 步骤:准确称取植株鲜样0.5000 g,加入20 mL提取液(0.25 mmol/L蔗糖+50 m mol/L Tris HCl缓冲液(pH 7.5)),研磨匀浆,用尼龙纱布过滤,滤渣为细胞壁部分;滤液在600 r/min下离心10min,沉淀为细胞核部分;上清液在2000 r/min下离心15 min,沉淀为叶绿体部分;上清液在10000 r/min下离心20 min,沉淀为线粒体部分;上清液为含核糖体的可溶部分,每组两次离心,全部操作在4下进行。 植物亚细胞组分的分离 步骤:准确称取鲜样0.5000 g,加入20 mL提取液[0.25mol·L-1蔗糖+50 mmol·L-1 Tris-HCl缓冲液(pH7.5)+1mmol·L-1二硫赤鲜糖醇,研磨匀浆,匀浆液在冷冻离心机300×g下离心30 s,沉淀为细胞壁组分;上清液在2000×g下离心15 min,沉淀为细胞核和叶绿体组分;上清液在10000×g下离心20 min,沉淀为线粒体组分;上清液为含核糖体的可溶组分。全部操作在4℃下进行。 Fractionation of Leaves and Roots.Leaves and roots were homogenized using a mortar and pestle in a medium containing 0.25 M sucrose,50 mM Tris-HCl(pH 7.5),and 1 mm

dithioerythritol.All steps were performed at 4 C.The resulting brei was strained through eight layers of cheesecloth,and liquid was expressed from the residue.The residue was washed twice with the grinding medium.The pooled washes,together with the first filtrate,were centrifuged at 300g for 30 s.The resulting pellet combined with the residue of the cheesecloth filtration contained mainly cell walls and cell wall debris and was designated as cell wall fraction(I).The supernatant of the first centrifugation step was then centrifuged at 20,000g for 45 min to sediment cell organelles.The pellet was taken as organelle fraction(II).The resultant supernatant solution referred to as soluble fraction(III)was employed in subsequent characterization studies as described.Fractions I and II were analyzed for their Cd content.The supernatant,fraction III,was further fractionated by gel filtration ，using Sephadex G-100,G-25,and G-10(Pharmacia Fine Chemicals, Uppsala,Sweden).An aliquot of fraction III was applied to a column(100 x 2.6 cm)of G-100 using 50 mm Tris-HCl(pH 7.5) and 0.1 mM dithioerythritol as eluting buffer.Fractions containing Cd were pooled and chromatographed on calibrated G-25(roots) or G-10(leaves)columns(70 x 2.3

细胞核与线粒体的分级分离

细胞核与线粒体的分级分离 一、原理 细胞内不同结构的比重和大小都不相同，在同一离心场内的沉降速度也不相同，根据这一原理，常用不 同转速的离心法，将细胞内各种组分分级分离出来。 分离细胞器最常用的方法是将组织制成匀浆，在均匀的悬浮介质中用差速离心法进行分离，其过程包括 组织细胞匀浆、分级分离和分析三步，这种方法已成为研究亚细胞成分的化学组成、理化特性及其功能的 主要手段。 匀浆(Homogenization)低温条件下，将组织放在匀浆器中，加入等渗匀浆介质(即 0.25mol／L 蔗糖一 0.003mol／L氯化钙)进行破碎细胞使之成为各种细胞器及其包含物的匀浆。 分级分离(Fractionation)由低速到高速离心逐渐沉降。先用低速使较大的颗粒沉淀，再用较高的转速，将 浮在上清液中的颗粒沉淀下来，从而使各种细胞结构，如细胞核、线粒体等得以分离。由于样品中各种大 小和密度不同的颗粒在离心开始时均匀分布在整个离心管中，所以每级离心得到的第一次沈淀必然不是纯 的最重的颗粒，须经反复悬浮和离心加以纯化。 分析 分级分离得到的组分，可用细胞化学和生化方法进行形态和功能鉴定。 二、细胞核的分离提取 (一)操作步骤 1．用颈椎脱位的方法处死小白鼠后，迅速剖开腹部取出肝脏，剪成小块(去除结缔组织)尽快置于盛有 0.9％NaCl的烧杯中，反复洗涤，尽量除去血污，用滤纸吸去表面的液体。 2． 将湿重约1g的肝组织放在小平皿中，用量筒量取8ml预冷的0.25mol／L蔗糖一0.003mol／L氯化钙 溶液，先加少量该溶液于平皿中，尽量剪碎肝组织后，再全部加入。 3．剪碎的肝组织倒入匀浆管中，使匀浆器下端浸入盛有冰块的器皿中，左手持之，右手将匀浆捣杆垂 直插入管中， 上下转动研磨3～5次， 用3层纱布过滤匀浆液于离心管中， 然后制备一张涂片①， 做好标记， 自然干燥。 4．将装有滤液的离心管配平后，放入普通离心机，以2500rpm，离心15分钟；(1)缓缓取上清液，移入 高速离心管中， 保存于有冰块的烧杯中， 待分离线粒体用； (2)同时涂一张上清液片②做好标记， 自然干燥； (3)余下的沉淀物进行下一步骤。 5．用6ml0.25mol/L蔗糖一0.003mol／L氯化钙溶液悬浮沉淀物，以2500rpm离心15分钟弃上清，将残 留液体用吸管吹打成悬液，滴一滴于干净的载玻片上，涂片③，自然干燥。 6．将①、②、③涂片用l％甲苯胺兰染色后盖片即可观察。 (二)结果 分别于高倍镜下观察三张涂片，描述镜下所见。 三、高速离心分离提取线粒体 (一)操作步骤 1．将装有上清液的高速离心管，从装有冰块的烧杯中取出，配平后，以 17000rpm 离心 20 分钟，弃上 清，留取沉淀物。 2．加入0．25mol／L蔗糖一0．003mol／L氯化钙液lml，用吸管吹打成悬液，以17000rpm离心20分 钟，将上清吸入另一试管中，留取沉淀物，加入0.1ml 0．25mol／L蔗糖一0.003mol／L氯化钙溶液混匀成 悬液(可用牙签)。 3．取上清液和沉淀物悬液，分别滴一滴于干净载玻片上(分别标记④、⑤涂片)，各滴一滴0.02％詹纳斯 绿B染液盖上盖片染20分钟。 (二)结果 油镜下观察，颗粒状的线粒体被詹纳斯绿B染成蓝绿色。

原代细胞培养：原代细胞分离培养鉴定以及检测等整体课题

Case：新生SD大鼠原代心房肌细胞分离与药物刺激培养冰检测相关蛋 白与基因 实验设计 一、细胞：分离大鼠原代心房肌细胞 二、细胞培养分组： a)对照组：正常大鼠原代心房肌细胞72h培养 b)高糖72h培养 c)高糖+氧化应激抑制因子72h培养 d)正常培养48h+氧化应激刺激因子再培养24h e)高糖培养48h+氧化应激抑制因子再培养24h f)正常培养48h+（氧化应激刺激因子+氧化应激抑制因子）共同培养24h 三、蛋白检测：WB检测各组培养细胞中A蛋白与B蛋白的表达。 四、荧光定量检测：荧光定量PCR方法检测各组培养细胞中A基因与B基因的表达。 实验报告 一、新生SD大鼠心房肌细胞的分离与培养： 1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小； 2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置； 3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织完全被消化； 4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃，5％CO2 培养箱中培养； 5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养； 二、新生SD大鼠心房肌细胞的α-actin免疫荧光鉴定： 1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min； 2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min； 3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min； 4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗（Abbioscience公司），然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜； 5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗（嘉美生物公司）， 37℃条件下放置1h； 6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜(Leica公司)下观察图像并拍照。

中性粒细胞分离实验步骤

一、中性粒细胞初步分选 试剂与耗材：人淋巴细胞分离液、RP1640、15ml离心管4支，棉球，止血带、碘伏、采血针，5mlEDTA抗凝采血管2支。1ml枪及枪头。 分离步骤： 1.所有试剂恢复至室温； 2.EDTA抗凝采血管收集人外周血10ml; 3.分别将5ml外周血加入5ml人淋巴细胞分离液中（15ml离心管中进行）；注 意动作轻柔缓缓加入； 4.500g离心，30-35分钟，室温； 5.离心后收集低带中性粒细胞，分两层，第一层为单核细胞，第二层为中性粒 细胞；（若离心后分层不明显则多离心5-10分钟） 6.将RP1640用纯水稀释为50%RP1640用于重悬中性粒细胞，恢复细胞活性。 （5-10分钟） 7.400g离心10分钟，去上清，收集中性粒细胞，重悬于RP1640中，细胞计 数。 二、中性粒细胞磁珠分选 试剂耗材及设备：磁力分选器，磁柱，CD15磁珠试剂盒，磁珠分选缓冲液50ml，RP1640，1ml枪及枪头，20微升枪与枪头，15ml离心管4支，细胞计数板。步骤： 1.制冰，保证磁力分选器可以放入冰盒内操作，在4-8℃内进行分选； 2.配液磁珠分选缓冲液（50ml PBS液中含2mmol/L EDTA，0.5%BSA， PH=7.2）； 3.将上步初步分选的中性粒细胞悬液300g离心10分钟，去上清； 4.细胞重悬于磁珠分选缓冲液中，107细胞重悬于80微升缓冲液中；（如细胞 数多按倍数增加） 5.107细胞中加入20微升CD15磁珠；充分混匀放入2-8℃避光孵育15分钟； 6.用1-2ml缓冲液洗涤细胞/107细胞，300g离心10分钟，去上清； 7.重悬细胞于缓冲液中，108细胞重悬于500微升缓冲液中； 8.将磁力分选器置于冰盒中，用3ml缓冲液冲洗磁柱； 9.将含有中性粒细胞的缓冲液加入磁柱中； 10.用缓冲液冲洗磁柱，每次3ml，冲洗3次； 11.除去磁场，把磁柱放置于15ml离心管上，用5ml缓冲液加压快速冲洗磁柱； 12.离心管中收集的便是中性粒细胞； 13.300g离心去上清，重悬细胞于10ml细胞培养液中，细胞计数。

石油蜡分离纯化方案

溶剂萃取法精制石油蜡 ——实验方案 一、问题的提出 石油蜡是石油炼制过程中的副产品，由于我国原油中石蜡含量偏高，我国的石蜡资源丰富，同时我国也是世界上石蜡生产和出口最大的国家，石蜡成为我国很有竞争优势的产品。石蜡用途广泛，如用于包装工业、汽车防护防腐、炸药生产、板材生产、印刷油墨、橡胶工业、热熔胶、医药工业等，农业中植物保水、水果保鲜等，蜡烛及日化产品等。此外，由于石蜡本身所具有的特性，目前石蜡作为相变储能材料的研究已成为很多专家学者的热点。 因而，生产出高质量的石蜡，为石蜡的应用，特别是深加工方向的应用提供基础，具有重大意义。 石蜡主要来源于润滑油的生产过程，部分来自于航空煤油、柴油等燃料油的生产过程中，主要通过溶剂脱蜡得到。但由溶剂脱蜡和其他过程生产的石蜡原料，一般含油较多并有稠环芳烃，烯烃，硫、氮、氧化合物等杂质，必须进行精制，才能得到合格产品。 石油蜡的精制工艺有：石蜡发汗精制、溶剂脱油精制、白土吸附精制和加氢精制等。 石蜡发汗精制蜡发汗精制就是将固体蜡在温度逐渐上升的过程中，使其中的油和低熔点蜡逐渐液化排出，以提高蜡的凝固点。该工艺虽然具有投资少、操作简单、安全可靠、加工费用和加工成本低等优点。但对原料油的适应性差，石蜡收率低，劳动环境和工业卫生状况恶劣等原因，已逐步被淘汰。 溶剂脱油精制该工艺就是选用适当的溶剂，通常是酮苯混合溶剂，要求在低温下对石蜡溶解能力小，对油溶解能力大，有利于石蜡结晶析出，再经过滤以分离得到石蜡。该方法精制效果较好，目前应用较广。但由于精制过程中引入大量混合溶剂（通常溶剂比为3:1到6:1），且精制过程中涉及到冷冻过滤，这使得冷冻负荷及溶剂回收需要消耗大量能耗。 白土吸附精制该工艺利用活性白土吸附极性物质的方法除去石蜡中的极性物质。活性白土具有很强的吸附能力，吸附具有选择性，对极性物质吸附能力强，而对非极性的烷烃吸附能力弱，从而达到精制油品的作用。但该方法脱除杂质不彻底，精制损失较高，因而老式的白土精制已逐步被加氢精制所取代。 加氢精制这是目前生产时应用最多的石蜡精制工艺。该方法精制产品质量好，脱除含硫化合物效果好，非常适合产量大的企业使用。但该工艺脱氮效果

石油炼化七种常用工艺流程

石油炼化七种常用工艺流程，全面了解原油到石油的生产过程 2015－１0－２0山东地炼商圈从原油到石油要经过多种工艺流程,不同的工艺流程会将同样的原料生产出不同的产品,小编今天带大家逐一了解每一个工艺流程,从原料、产品、基本概念到生产工艺和生产设备都有细致的讲解。 从原油到石油的基本途径一般为: ①将原油先按不同产品的沸点要求，分割成不同的直馏馏分油,然后按照产品的质量标准要求,除去这些馏分油中的非理想组分; ②通过化学反应转化,生成所需要的组分，进而得到一系列合格的石油产品。 石油炼化常用的工艺流程为常减压蒸馏、催化裂化、延迟焦化、加氢裂化、溶剂脱沥青、加氢精制、催化重整。 (一）常减压蒸馏 1.原料: 原油等。 2.产品: 2.石脑油、粗柴油（瓦斯油)、渣油、沥青、减一线。 3.基本概念: 常减压蒸馏是常压蒸馏和减压蒸馏的合称,基本属物理过程:原料油在蒸馏塔里按蒸发能力分成 沸点范围不同的油品（称为馏分）,这些油有的经调合、加添加剂后以产品形式出厂，相当大的部分是后续加工装置的原料。 常减压蒸馏是炼油厂石油加工的第一道工序，称为原油的一次加工,包括三个工序：a.原油的脱 盐、脱水；ｂ．常压蒸馏;ｃ.减压蒸馏。 4.生产工艺: 原油一般是带有盐份和水，能导致设备的腐蚀,因此原油在进入常减压之前首先进行脱盐脱水预处理,通常是加入破乳剂和水。 原油经过流量计、换热部分、沏馏塔形成两部分，一部分形成塔顶油，经过冷却器、流量计，最后进入罐区,这一部分是化工轻油(即所谓的石脑油);一部分形成塔底油，再经过换热部分，进入常压炉、常压塔,形成三部分,一部分柴油,一部分蜡油，一部分塔底油;剩余的塔底油在经过减压炉，减压塔,进一步加工，生成减一线、蜡油、渣油和沥青。

复旦大学免疫实验小鼠脾脏单个核细胞分离及细胞计数

小鼠脾脏单个核细胞分离及细胞计数 实验时间：实验地点：实验人： 1实验原理 小鼠脾脏位于上腹部左后侧，体积较大，长条形，属于外周免疫器官。 外周血中淋巴细胞可经再循环驻如脾脏等外周免疫器官的特定区域，所以富含各类免疫细胞。 免疫细胞的分离：采用红细胞裂解法，是根据细胞对渗透压变化的敏感度。红细胞由于细胞结构较为简单，仅有细胞膜结构，对于膨胀的耐受能力较差，因此绝大部分就会涨破，受到破坏。是一种比较温和的去除红细胞最简便易行的方法。 2实验材料： 1)健康小鼠 2)手术器械（剪刀、镊子）、解剖板 3)70%乙醇 4)PBS缓冲液、红细胞裂解液（ACK） 5)0.2%台盼蓝 6)细胞计数板、计数器 7)离心机 8)显微镜 3实验方法： 3.1取小鼠脾脏 ●将小鼠颈椎脱位处死，用酒精消毒。 ●用剪刀剪开背部皮肤，再找到脾脏，用镊子夹出脾脏并剪除周围组织。 3.2制备单个核细胞悬液 ●将取出的脾脏置于盛有3mlPBS缓冲液的平皿中，然后再置于尼龙指套中，

用针芯轻轻碾压使得单个核细胞悬浮于平皿中。 ●吸取平皿中细胞悬液置于刻度离心管（15ml）中，以1500rpm离心10min， 弃去上清液，加入ASK至2-3ml，轻轻吹打混匀并放置2min，以破坏红细胞。 然后加入PBS缓冲液至10ml，以1500rpm离心10min。 ●弃去上清液，用PBS缓冲液定容至2ml，吹打混匀即为小鼠脾脏单个核细胞 悬液。 3.3计算细胞浓度 稀释十倍，随机选取一个大方格计数 细胞计数为324个，计算细胞浓度为324×104×10=3.24×107/ml 3.4计算细胞活力 在总计为324个细胞中计数，死亡细胞有16个，计算细胞活力为： 324-16/324×100%=95.1% 在理论范围之内 4实验结果 4.1研磨脾脏得到细胞悬液 本实验中将小鼠的脾脏放入尼龙指套内，置于少量PBS液中缓慢研磨，获得细胞悬液。实验中，我们发现尼龙指套不能滤去所有结缔组织，操作中会有结为絮状团块的结缔组织。这些结缔组织在离心后会和细胞绞缠在一起，去除十分麻烦，而且会损失细胞。应该在离心之前尽早用吸管吹打后小心弃去（这样损失的细胞比较少，造成较小的误差）。 研磨脾脏时的力度、时间、温度都会影响细胞的活性。所以应置于冰上快速、轻柔地研磨，置于液体中避免干磨。我们在实验室室温下碾磨，造成细胞破碎较多，影响最终实验结果。 4.2白细胞计数 在使用血球计数板时，遇到了镜下看不到计数板格子线的问题:起初，我们小组能够在镜下观察到细胞，但是细胞清晰时无法找到计数板格子线。后来我们

细胞核和叶绿体的分级分离及观察

细胞核和叶绿体的分级分离及观察 一、实验目的 1、了解细胞器分离的一般原理与方法 2、掌握分级分离的原理和注意事项 3、观察叶绿体的自发荧光和次生荧光 二、实验原理 将组织研磨成匀浆后，悬浮在等渗介质中进行差速离心，是分离细胞器的主要方法。细胞的各组分在等渗溶液（0.35M NaCl或0.4M蔗糖溶液）中进行离心可达到被分离开来的目的。将匀浆液在1000 r/min 条件下离心2 min可去除组织残渣及未破碎的细胞。在3000 r/min条件下离心5 min，即可获得沉淀的叶绿体（混有部分的细胞核）。 三、实验材料、试剂及仪器 1、实验材料：新鲜菠菜叶 2、实验试剂：0.35M NaCl、0.01%吖啶橙。 3、实验器材：光学显微镜、荧光显微镜、载玻片、研钵、胶头滴管、纱布等。 四、实验步骤 1、选取新鲜菠菜叶，洗净后去除叶梗和粗脉，称30g进行研磨。 2、在研钵中加入150 ml 0.35M的NaCl溶液，研磨成匀浆。 3、将匀浆用6层纱布过滤于烧杯中。 4、每小组取滤液于4 ml在1000 r/min的条件下离心2 min 5、取上清夜在3000 r/min的条件下离心5 min，沉淀即为叶绿体（混有部分细胞核），上清液转入干净的离心管中用于后续线粒体的分离。 6、叶绿体的观察： 将沉淀用少量的0.35 M NaCl溶液悬浮。（浓度不要太高，易观察）取叶绿体悬浮液一滴于载玻片上，加盖玻片即可在普通显微镜下观察叶绿体形态。取叶绿体一滴于载玻片上，再滴加一滴0.01%吖啶橙，加盖玻片即可在荧光显微镜下观察。 五、实验结果

绘制在光学显微镜下所观察到细胞核、叶绿体的形态结构图。 六、思考题 为什么要加0.35 M的等渗溶液悬浮细胞器？