逍遥散抗抑郁有效部位最佳配伍筛选及谱效关系研究

逍遥散抗抑郁有效部位最佳配伍筛选及谱效关系研究

【摘要】:选题依据:抑郁症是一种常见的精神疾病,预测其到2020年将要成为世界第二大疾病负担源,其危害越来越引起医药卫生界的高度重视。逍遥散是治疗抑郁症最常用的经典名方之一,临床及实验研究均显示该方有确切的抗抑郁作用,目前对逍遥散作用机制研究一直是中医药研究的热点,但是对逍遥散抗抑郁作用的药效物质基础的研究尚未见文献报道。逍遥散抗抑郁的药效物质基础是指其复方中发挥抗抑郁作用的化学成分群,因此阐明其药效物质基础,不仅对揭示其抗抑郁的有效性、多成分多靶点作用的整体性与复杂性以及配伍科学性具有重要意义,而且为该方的质量控制提供科学依据,同时为从中药中研发疗效更佳的抗抑郁新药奠定基础,也为其他中药复方的药效物质基础研究提供借鉴。“中药谱效关系”是中药药效物质基础研究的新思路,其目的是通过谱效相关来揭示中药所含的化学成分与药效之间的相互关系,从而阐明与药效之间相关的化学物质基础。本课题组前期已经对逍遥散做了大量的工作,已经从该复方中筛选出具有明显抗抑郁作用的的有效部位,并采用小鼠绝望模型(小鼠的强迫游泳实验和小鼠悬尾实验)初步筛选出逍遥散抗抑郁有效部位的最佳的配伍比例,并初步寻找到与抑郁症密切相关的化学成分,然而,对单一小鼠模型得出的实验结果还有待更一进步的验证,本研究在小鼠模型研究基础上采用CUMS大鼠模型行为学及代谢组学对逍遥散的抗抑郁活性成分进行更加深入探讨。目的:基于慢性温和不可预知应激(CUMS)大鼠

模型的行为学及代谢组学技术验证前期通过小鼠绝望模型寻找到的逍遥散抗抑郁活性部位的最佳配伍比及与抗抑郁活性密切相关的化学成分,以进一步阐明逍遥散抗抑郁作用的药效物质基础。方法:将逍遥散抗抑郁有效部位XY-A和XY-B采用两因子(有效部位XY-A和XY-B为两因素)三水平(最佳剂量0、1、3倍为三水平)实验设计配伍,以配伍后的组份、逍遥散组、前期通过小鼠绝望模型初步筛选的最佳配伍组份(XY-A:XY-B=2:2)及文拉法幸(阳性组)为干预药物,采用CUMS模型结合孤养模型综合考察逍遥散抗抑郁有效配伍组份对大鼠的平行格数、直立次数、糖水偏爱率、体重及血浆内代谢物的影响,确定最佳配伍比例及最佳给药剂量。采用GC-MS方法建立逍遥散抗抑郁有效部位配伍组份指纹图谱,用多种关联分析法(主成分分析、相关分析、多元回归分析等),客观准确寻找与治疗抑郁症有关的特征峰,并对从图谱中确定的对药效贡献大的化学成分进行定性识别。结果:1.行为学及代谢组学分析结果正常组和模型组在行为学上有显著性的差异,在代谢轮廓上能够明显的分开,说明造模成功。结合相应的载荷图和独立样本t检验,找到了13个引起差异的潜在生物标志物。基于CUMS模型的行为学及血浆代谢组学结果显示逍遥散抗抑郁有效部位各配伍组对CUMS引起的变化起到不同的干预作用,其中XY-A2B2(XY-A:XY-B=2:2)组与其他组相比,在行为学(平行格数、直立次数、大鼠体重和糖水偏爱率)方面提高的最为显著,在血浆内代谢组学方面XY-A2B2组离正常对照组最近,离模型组最远,表明其有明显的抗抑郁效果最佳,且优于逍遥散组和文拉法辛组。因此本研究筛

选出了最佳的抗抑郁有效部位配伍组份,即当有效部位按生药量计,XY-A、XY-B均为92.6g/kg时,抗抑郁作用最佳。2.谱效相关的结果(1)基于谱效关系研究思路,应用GC-MS色谱分析方法对逍遥散抗抑郁有效部位配伍组份的化学成分进行“谱”分析。通过对各项指标的考察表明,本研究建立的分析方法均能达到指纹图谱分析技术要求,所获得的GC-MS指纹图谱能够全面、有效地反应有效部位配伍组份的的内在主要化学成分。与此同时,对指纹图谱中的特征峰进行了峰面积的测定。(2)结合各配伍组图谱分析和相应药效结果,应用相关分析、回归分析等多种关联分析法,相互佐证,建立谱效相关,寻找并指认出了一些与治疗抑郁症有关的化学成分,共寻找到11个活性成分,其中指认出6个(莰烯、苍术酮、藁本内酯、棕榈酸、白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅱ),未知化合物5个。部分化学成分的抗抑郁活性已被文献所证实,一定程度上证明了本研究所采用的谱效分析方法的客观性与准确性。结论:1本研究发现有效部位配伍后形成的配伍组份优于单独的有效部位XY-A、XY-B,并筛选出了最佳的抗抑郁配伍组份,即当有效部位按生药量计,XY-A、XY-B均为92.6g/kg时,抗抑郁效果最佳。本研究为基于有效部位配伍的谱效关系研究奠定了基础,同时,本研究结果为新型抗抑郁组分中药的研发提供了一定的参考价值。2.基于谱效关系研究思路,运用GC-MS色谱分析方法及多种关联分析法,成功寻找到11个抗抑郁的活性成分(莰烯、苍术酮、藁本内酯、棕榈酸、白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅱ等),从而为逍遥散的质量控制与药效物质基础研究提供了有价值的参考。3.本研究在小鼠绝望模型基础上采用

CUMS大鼠模型行为学及代谢组学研究逍遥散抗抑郁的活性成分。研究结果表明,苍术酮、藁本内酯、棕榈酸、白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅱ为小鼠绝望模型和CUMS大鼠模型中共有的逍遥散的抗抑郁活性成分。4.基于有效部位配伍的谱效关系的研究思路体现了中药配伍的整体观,为其它中药复方的药效物质基础研究提供了新的思路和方法。【关键词】:逍遥散抑郁症药效物质基础有效部位谱效关系

【学位授予单位】:山西大学

【学位级别】:硕士

【学位授予年份】:2013

【分类号】:R289.1;R285.5

【目录】:中文摘要11-14ABSTRACT14-18第一章引言18-221.1立题背景和意义18-191.2本课题的研究思路、技术流程图、研究内容及创新点19-221.2.1本课题研究思路、技术流程图和研究内容19-201.2.2本课题主要创新点20-22第二章文献综述22-402.1抑郁症及抑郁动物模型22-232.1.1抑郁症222.1.2抑郁症动物模型22-232.2代谢组学232.3基于CUMS模型分析抑郁症病理机制研究进展23-312.4逍遥散抗抑郁作用研究进展31-332.5中药有效部位及有效部位配伍概述33-342.5.1中药有效部位33-342.5.2中药有效部位配伍342.6中药及复方药效物质基础研究34-352.7中药谱效关系研究概述35-402.7.1中

药指纹图谱35-362.7.2中药药效学362.7.3中药谱效关系36-40第三章基于CUMS模型行为学筛选逍遥散抗抑郁有效部位最佳配伍比例40-523.1引言403.2实验材料40-413.2.1实验动物403.2.2实验仪器403.2.3试剂与试药40-413.3实验方法41-463.3.1因素水平的确定41-433.3.2动物分组及给药43-443.3.3实验进程及日程安排44-463.4统计学处理46-473.5实验结果47-503.5.1对大鼠体重和糖水偏爱率的影响47-493.5.2对旷场试验的影响49-503.6结论与讨论50-52第四章基于GC-MS代谢组学技术筛选逍遥散抗抑郁有效部位最佳配伍比例52-644.1引言524.2实验材料524.2.1仪器524.2.2试剂524.3实验方法52-534.3.1GC-MS条件52-534.3.2血浆样品的制备534.4数据统计与分析534.5实验结果与讨论53-624.5.1血浆GC-MS总离子流图53-554.5.2血浆GC-MS代谢轮廓分析55-594.5.3抗抑郁有效组的生物标志物的调节与分析59-624.5.4生物标志物代谢途径的分析624.5.5GC-MS代谢组学的分析结果与CUMS行为学结果比较624.6结论与讨论62-64第五章逍遥散抗抑郁有效部位配伍的谱效关系研究64-805.1引言645.2实验材料645.2.1仪器与试剂645.2.2试药645.2.3多元统计软件645.3实验方法与结果64-715.3.1复方抗抑郁有效部位配伍组份的GC-MS分析64-675.3.2特征峰峰面积的测定与指认67-715.4逍遥散抗抑郁有效部位配伍的谱效关系研究71-785.4.1主成分分析(PCA)71-745.4.2Hierarchical(HCA)聚类分析745.4.3谱效双变量相关分析74-765.4.4谱效多元回归分析76-785.5结论与讨论78-80第六章基于谱效关系综合分析逍遥散抗抑郁药效物质基础80-846.1

引言806.2谱效相关的原则性80-816.2.1谱的可靠性806.2.2效的真实性80-816.2.3谱效相关的依据性816.3综合分析逍遥散抗抑郁药效物质基础81-826.3.1基于小鼠绝望模型分析逍遥散抗抑郁药效物质基础816.3.2基于大鼠CUMS模型分析逍遥散抗抑郁药效物质基础81-826.4结果与讨论82-84第七章总结与展望84-867.1研究工作的总结84-857.2展望857.3学习心得85-86参考文献86-94攻读学位期间取得的研究成果94-96致谢96-98个人简况及联系方式98-102 本论文购买请联系页眉网站。

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