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实验九聚乙烯醇缩甲醛(胶水)的制备

聚乙烯醇缩甲醛(胶水)的制备

一、实验目的

了解聚乙烯醇缩甲醛化学反应的原理，并制备红旗牌胶水。

二、实验原理

聚乙烯醇缩甲醛是利用聚乙烯醇与甲醛在盐酸催化作用下而制得的，其反应如下:

聚乙烯醇缩醛化机理

聚乙烯醇是水溶性的高聚物，如果用甲醛将它进行部分缩醛化，随着缩醛度的增加，水溶液愈差，作为维尼纶纤维用的聚乙烯醇缩甲醛其缩醛度控制在35%左右，它不溶于水，是性能优良的合成纤维。

本实验是合成水溶性的聚乙烯醇缩甲醛，即红旗牌胶水。反应过程中需要控制较低的缩醛度以保持产物的水溶性，若反应过于猛烈，则会造成局部缩醛度过高，导致不溶于水的物质存在，影响胶水质量。因此在反应过程中，特别注意要严格控制崐催化剂用量、反应温度、反应时间及反应物比例等因素。

聚乙烯醇缩甲醛随缩醛化程度的不同，性质和用途各有所不同，它能溶于甲酸、乙酸、二氧六环、氯化烃(二氯乙烷、氯仿、二氯甲烷)、乙醇　甲苯混合物(30∶70)、乙醇　甲苯混合物(40∶60)以及60%的含水乙醇中。缩醛度为75%~85%的聚乙烯醇缩甲醛重要的用途是制造绝缘漆和粘合剂。

三、实验仪器及试剂

三口瓶，搅拌器，温度计，恒温水浴

聚乙烯醇，甲醛（40%），盐酸，氢氧化钠

四、操作步骤

在250 mL 三颈瓶中，加入90 mL 去离子水(或蒸馏水)、7 g 聚乙烯醇，在搅拌下升温溶解。

等聚乙烯醇完全溶解后，于90℃左右加入4.6 mL 甲醛(40%工业纯)，搅拌15 min ，再加入1∶4盐酸，使溶液pH 值为1~3。保持反应温度90 ℃左右，继续搅拌，反应体系逐渐变稠，当

体系中出现气泡或有絮状物产生时，立即迅速加入1.5 mL 8%的NaOH 溶液，

同时加入34 mL 去离子水(或蒸馏水)。调节体系的pH 值为8~9。然后冷却降温出料，获得无色透明粘稠的液体，即市场出售的红旗牌胶水。

五、思考题

1. 试讨论缩醛化反应机理及催化剂的作用。

2. 为什么缩醛度增加，水溶性下降，当达到一定的缩醛度以后，产物完全不溶于水? ~~~CH 2-CH-CH 2-CH~~~ + HCHO ~~~CH 2-CH-CH 2-CH~~~ + H 2O OH OH HCl O CH 2-O （聚乙烯醇） (聚乙烯醇缩甲醛) CH 2O + H + CH 2OH 缓慢 ~~~CH 2-CH-CH 2-CH~~~ + CH 2OH

极慢 ~~~CH 22O

3. 产物最终为什么要把pH调到8~9?试讨论缩醛对酸和碱的稳定性

参考文献

1. 吉林化学工业公司设计院.聚乙烯醇生产工艺.北京:轻工业出版社，1974

2. 北京有机化工厂研究所编译. 聚乙烯醇的性质和应用.北京: 北京纺织工业出版社，1979

《物理化学实验》练习题

《物理化学实验》练习题 ●本练习题供平时练习所用，对期末考试有指导作用,望同学们认真做答. ●此次练习题需要当做一次物理化学作业一样提交. 练习题一、填空题（每空1分，共30）： 1．写出物理化学实验中所使用的两种温度计：和。 2．氧气钢瓶外表油漆的颜色是色；氢气钢瓶外表油漆的颜色是色。 3．在静态法测定乙醇饱和蒸气压的实验中，直接测量的物理量是和。 4．热分析法测定“步冷曲线”时，根据曲线上的或可以确定相变温度。 5．测定物质的磁化率所使用的磁天平有磁天平和磁天平两种。 6．测量物质的燃烧焓所需的测量仪器是，燃烧反应在内进行。 7．测量液体饱和蒸气压所依据的原理是方程，通过实验数据作直线可以求出。 8．在二组分气液平衡相图的实验中，直接测量的物理量是和。 9．物质的旋光度与和等因素有关。 10．诱导极化率（或变形极化率）由极化率和极化率两部分组成。 11．写出恒温槽构造中的两个部件：和。 12．用氧弹量热计测量得到的是恒容热Q V，则恒压热Q p= 。 13．在液体饱和蒸气压测量的实验中，若空气未被抽净，则所得蒸气压的数值偏。 14．测量电解质溶液的电导可采用电桥法，测量电池的电动势采用法。

15．在最大泡压法测量液体表面张力的实验中，直接测量的物理量是。 16．接触温度计是用作，而贝克曼温度计是用作。 17．热分析法所测量的“步冷曲线”是以为纵坐标，以为横坐标所得的曲线。 18．惠斯登（wheatston ）电桥法测量电解质溶液的电导时，需要作电源和作示零装置。 19．对消法测量电池电动势需要用到电池和电池。 20．在偶极矩测量实验中，介电常数是通过测量而得的。 21．在蔗糖水解反应速率常数测定的实验中，C 0/C = 。 22．乙酸乙酯皂化反应体系的电导随时间逐渐，反应体系的pH 随时间逐渐。 23．贝克曼温度计测量温度的范围为 ℃，最小分度为 ℃。 24．获得真空时所使用的仪器是；测量真空度的仪器是。 25．在测量液体表面张力的实验中，从毛细管中逸出泡的半径越，则最大液柱差△h m 越。二、单项选择题：将所选择的答案号添入括号中（每题1分，共50分）： 1. 下面四条曲线分别代表A 、B 、C 、D 四个恒温槽的灵敏度曲线，其中恒温效果最好的是（）。控温灵敏度曲线 2. 在氧弹量热计中萘的燃烧反应为： C 10H 8(s)+12O 2(g)→10CO 2(g)+4H 2O(l) 在K 2.298时，测得反应的恒容热?-=kJ 5152v Q mol -1，则萘的燃烧焓= ?m c H

水泥混凝土抗压、抗折、劈裂抗拉强度试验

实验十九水泥混凝土抗压、抗折、劈裂抗拉强度试验一、试验目的 1、测定砼抗压强度确定砼的强度等级，评定砼质量。 2、测定砼抗折强度评定道路砼施工质量，同时它是水泥砼路面设计的重要指标。 3、劈裂法测定砼抗拉强度，了解砼抗拉性能。二、仪器设备万能试验机，劈裂钢垫条，三合板垫层(或纤维板垫层)。三、试验步骤 (一) 抗压强度试验 1、从养护室取出试件，先检查其尺寸及形状，相对两面应平行，表面倾斜偏差不得超过0.5mm。量出棱边长度，精确至1mm。试件受力截面积按其与压力机上下接触面的平均值计算。试件如有蜂窝缺陷，应在试验前三天用浓水泥浆填补平整，并在报告中说明。在破型前，保持试件原有湿度，在试验时擦干试件。 2、以成型时侧面为上下受压面，将试件放在球座上，球座置于压力机中心，几何对中侧面受载。 3、加荷：砼强度等级小于C30的混凝土取0.3～0.5MP a/s的加荷速度；强度等级不低于C30时则取0.5～0.8MP a/s的加荷速度，当试件接近破坏而开始迅速变形时，应停止调整试验机油门，直至试件破坏，记下破坏极限荷载。 (二) 抗折(抗弯拉)强度试验 1、从养护室取出并检查试件，如试件中部1/3长度内有蜂窝，该试件应立即作废。 2、在试件中部量出其宽度和高度，精确至1mm。 3、安放试件，支点距试件端部各50m，侧面受载。 4、加荷：加载方式为三分点双点加荷，加荷速度为0.5-0.7MP a/s，直至试件破坏，记下破坏极限荷载。 (三) 劈裂抗拉强度试验 1、从养护室取出并检查试件。 2、量测试件尺寸，精确至1mm。 3、安放试件，几何对中，放妥垫层垫条，其方向与试件成型时顶面垂直。 4、加荷：砼强度等级低于C30时，以0.02-0.05 MP a/s的速度连续而均匀地加荷，当砼强度等级不低于C30时，以0.05-0.08 MP a/s的速度加荷，直

CRISPR-Cas9细胞-动物KOKI实验基本流程-2

一、CRISPR-Cas9 细胞基因敲除敲入实验基本操作流程 1)设计sgRNA ： 1.1、确定待敲除基因的靶位点根据提供的物种、基因名称或者基因ID在NCBI或ENSEMBLE中进行查找。找到该基因CDS 区，分析相应的基因组结构，明确CDS的外显子部分。按照基因本身的性质，选择候选的待敲除位点，确定待敲除位点。对于蛋白编码基因，如果该蛋白具重要结构功能域，可考虑将基因敲除位点设计在编码该结构域的外显子；如果不能确定基因产物性质，可选择将待敲除位点放在起始密码子A TG后的外显子上。如果是microRNA，可以将待敲除位点设计在编码成熟microRNA的外显子或在编码成熟microRNA的外显子的5’和3’侧翼序列。 1.2、设计识别靶位点的一对DNA Oligos 确定待敲除位点后，选择23-至250bp的外显子序列输入到在线免费设计sgRNA的软件Input 框中（https://www.wendangku.net/doc/d05293857.html,/），然后进行设计运算，软件会自动输出sgRNA序列（网站设计一般很慢或数据输出不完整，可使用我的内部软件，2天内输出全部结果，无物种限制）。一般地，基因特异的sgRNA模板序列为位于PAM序列（Protospacer AdjacentMotif）前间区序列邻近基序，这是一种见于crRNA分子的短核苷酸基序，可以被Cas9蛋白特异性识别并切割）的20个nt。而PAM序列的特征为NGG（其中N为任意核苷酸）。因此，sgRNA模板序列选择非常方便，即使没有软件，研究者也可手工进行选择。不过，在线软件可以给出该序列在基因组中存在相似序列的情况，即可能的脱靶位点。因此，利用在线软件可以选择脱靶机会小的序列作为sgRNA模板序列。根据选择的sgRNA模板序列，合成一对序列互补的DNA Oligos （同时设计检测目的基因的引物一起合成）。 1、https://www.wendangku.net/doc/d05293857.html,/ 2、https://www.wendangku.net/doc/d05293857.html,/mpg/crispr_design/ 3、https://www.wendangku.net/doc/d05293857.html,/~slin/cas9.html 4、https://www.wendangku.net/doc/d05293857.html,/E-CRISP/ 5、https://www.wendangku.net/doc/d05293857.html,/ 6、https://www.wendangku.net/doc/d05293857.html,/crispr/,Drosophila 7、https://www.wendangku.net/doc/d05293857.html,/index.jsp 8、https://www.wendangku.net/doc/d05293857.html,/casot/index.php 9、https://www.wendangku.net/doc/d05293857.html,/ZiFiT/ChoiceMenu.aspx 10、https://www.wendangku.net/doc/d05293857.html,/ 根据酶切方式，选择合适接头，例如，PX458等质粒sgRNA靶点oligo如下（Bbs1酶切）5‘-CACCGNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN-3’ 3‘- CNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN-CAAA-5‘ （1）对于sgRNA的长度，一般应为20 nt左右；（2）对于sgRNA序列的碱基组成，可选3'末端含GG的sgRNA，同时sgRNA种子序列尽量避免以4个以上的T结尾，GC%含量最佳为40%~60%；（3）sgRNA的种子序列与脱靶位点的匹配数尽可能低（4）如果构建U6或T7启动子驱动sgRNA的表达载体，需考虑sgRNA的5' 碱基为G或GG，以提高其转录效率；（5）对于sgRNA靶向基因的结合位置，如需造成基因移码突变，需尽量靠近基因编码区的

田间技术试验-大豆报告

大豆调查报告一、成熟植株与经济形状考察考查指标： 1.株高：子叶节到植株顶端的高度(不包括顶花序)，以cm表示； 2.主茎节数：主茎第一真叶节到顶端节的节数，不包括子叶节及顶端花序； 3.结荚(底荚)高度：子叶节到最下部豆荚的高度,以cm表示；子叶节到主茎最低豆荚着生处的高度： a) 最低豆荚着生于主茎叶腋的花序，子叶节到花序着生处 b) 有效分枝以下的主茎无豆荚，子叶节到有效分枝着生处 4.有效分枝数：指主茎上结荚的分枝数，有效枝至少有2个节，不计二次分枝； 5.单株荚数：一株的有效荚和无效荚数之和； 6.有效荚数：指含有一粒以上饱满种子的荚数； 7.单株粒数：除未成形粒外，所有未熟粒、虫食粒、病粒的数目； 8.单荚粒数：用单株粒数除以单株有效荚数之商； 9.单株粒重：将10株豆粒筛去杂质，但包括未熟、虫食及病粒，称重，计算均重(克∕株)； 10.荚熟色：豆荚成熟时的颜色，分为灰褐、淡褐、褐、深褐、黑； 11.荚形：分为直葫芦形，弯镰形、扁平形三种； 12.粒形：指籽粒的形状，分为：圆形、椭圆形、扁椭圆形、长椭圆形、肾形； 13.粒色：分为黄、青、黑、褐、双色； 14. 脐色：分浅黄、黄、淡褐、褐、深褐、蓝、黑七种； 15.种皮光泽：分强光、微光和无光三类； 16.百粒重：随机选取完整成熟豆粒两份，每份100粒，称重(克)，若两份100粒重相差超过0.5克，重新取样称重； 17.虫食粒率、紫斑粒率、褐斑粒率：随机取豆粒300粒，各挑出以上三种病虫粒，计算出百分率。

分析：由于没有标准植株做参考，所得数据无法定性比较。但从虫食粒率、紫斑粒率、褐斑粒率三个数据均为0可以看出，大豆的品质不错；此外，25.6g的百粒重较一般的产量水平也很高。由此猜测，大豆理论亩产也应该较高。二、大豆测产 1.测产公式大豆的子粒产量=单位面积株数×单株粒重单位面积株数=单位面积÷平均行距÷平均株距单株粒重=单株有效荚数×单荚粒数×百粒重÷100 2.产量计算单位面积平均行距平均株距单株有效荚数单荚粒数百粒重667㎡46cm 28cm 63 2.41 25.6 产量=（667÷0.46÷0.28）×63×2.41×25.6÷100÷1000Kg/亩=201Kg/亩 3.产量分析通过网上搜索国家统计局发布的历年农业数据，查阅得到2014年我国大豆平均亩产为119 Kg/亩。中国种子协会理事长王连铮说，现在有一些地区大豆亩产量达到200公斤以上，个别地方达250公斤。由此，经计算得到的实验田大豆理论亩产基本可信，产量属于高产水平。大豆产量高低与产量构成因素密切相关，大豆的产量构成因素有以下几点： 1.单位面积株数：即种植密度，计算得实验田种植密度为5178株/亩； 2.结荚数：结荚数与种植密度、单株结荚数有关。计算得实验田种植密度为5178株/亩，单株有效荚数为63个，即单位面积总结荚数为326,214个；

物理化学实验下-思考题答案

磁化率的测定 1．本实验在测定XM做了哪些近似处理? 答：（1）忽略了X反（2）X0=0（样品周围介质的体积磁化率）（3）H0=0(样品顶端磁场强度为0。近似认为样品顶端就是试管顶端) 2．为什么可以用莫尔盐来标定磁场强度？答：莫尔盐的XM仅与T有关,物质,物质稳定，组成固定，对磁场反应良好。 3.样品的填充高度和密度以及在磁场中的位置有何要求？若样品的填充高度不够，对测量结果有何影响？答：样品管与磁极中心线平齐，不与磁极接触，样品要紧密均匀填实。若样品的填充高度不够，则样品最上端处磁场强度不为零。（样品的填充高度距样品管口1-1.5cm处，样品要紧密均匀填实。将样品悬挂在天平上，样品底部处于磁场强度最大区域【H】管顶则位于场强最弱甚至为0的区域，若样品的填充高度不够，对样品处于磁场中的受力产生影响）三组分体系等温相图 1. 实验为什么根据体系由清变浑的现象即可测定相界？答：各组分彼此互溶时，体系为均相，一旦体系恰好不相容，则分相达到相界。 2.如连接线不通过物系点，其原因可能是什么？答：（1）苯水分层不彻底（2）苯、醋酸乙酸挥发（3）酚酞变色范围为碱性，通过NaOH滴定醋酸量偏高。 3. 实验根据什么原理求出苯-乙酸-水体系连接线？答：在苯和水含量确定的前提下，互溶曲线上的点与醋酸量一一对应。电极的制备与原电池电动势的测定 1. 电位差计、标准电池、检流计及工作电池各有什么作用？如何保护及正确使用？答：（1）电位差计是按照对消法测量原理设计的一种平衡式电学测量装置，能直接给出待测电池的电动势值，测定时电位差计按钮按下的时间应尽量短，以防止电流通过而改变电极表面的平衡状态。（2）标准电池是用来校准工作电流以标定补偿电阻上的电位降。（3）检流计用来检验电动势是否对消，在测量过程中，若发现检流计受到冲击，应迅速按下短路按钮，以保护检流计。检流计在搬动过程中，将分流器旋钮置于“短路”。（4）工作电池（稳压电源）电压调至与电位差计对电源的要求始终相一致。 2. 参比电极应具备什么条件？它有什么功用？答(1)装置简单、可逆性高、制作方便、电势稳定。 (2)以标准氢电极(其电极电势规定为零)作为标准，与待测电极组成一电池，所测电池电动势就是待测电极的电极电势。由于氢电极使用不便，常用另外一些易制备、电极电势稳定的电极作为参比电极，如：甘汞电极。 3. 盐桥有什么作用？选用作盐桥的物质应有什么原则？答：（1）盐桥用来减小液体接界电势。（2）作盐桥的物质正负离子的迁移数应接近；在使用温度范围内浓度要大；不能与两端电池溶液发生反应。 4. UJ34A型电位差计测定电动势过程中，有时检流计向一个方向偏转，分析原因。答：随着反应的进行，导电能力很强的OH-离子逐渐被导电能力弱的CH3COO-离子所取代，致使溶液的电导逐渐减小。电极管中有气泡；电极的正负极接反；线路接触不良；工作电源电压与电位差计对电源的要求数据不一致等。在测量金属电极的电极电势时，金属电极要加以处理，以除去氧化膜。 6. 如何使E测定准确？答：（1）电极管不能漏液。（2）准电池和待测电池极化，“标准/未知选择”旋钮在“标准”或“未知”位置的时间应尽可能的短。对“待测溶液”应将读数盘预置到理论值后再将“标准/未知选择”旋钮旋到，“未知”。（3）甘汞电极不用时浸泡在饱和氯化钾溶液中。（4对新制锌汞齐电极和新镀铜电极应及时测量，避免再度被氧化。最大泡压法 1毛细管尖端为何必须调节得恰与液面相切，否则对实验有何影响? 答：毛细管尖端若不与液面相切插入一定深度，会引起表面张力测定值偏小.用最大气泡压力法测定表面 2.张力时为什么要读最大压力差？答：若读中间某个压力差值，不能保证每次读压力差对应大小相同气泡。因为随着气泡的形成，曲率半径逐

水泥砼圆柱体劈裂抗拉强度试验作业指导书

精心整理水泥砼圆柱体劈裂抗拉强度试验作业指导书 1.目的及适用范围适用于各类水泥砼圆柱试件和现场芯样的劈裂抗拉强度。注：括号中数字为试件中集料公称最大粒径，单位：mm。标准试件的最短尺寸大于公称最大粒径4倍。 3.2本试件应同龄期者为一组，每组为3个同条件制作和养护的砼试

件。 3.3对于现场芯样，长径比大于等于1。适宜的长径比在1.9~2.1之间，最大长径比不能超过2.1。芯样最小直径为100mm，直径至少是公称最大粒径的2倍。芯样在进行强度试验前需进行调湿，一般应在标准养护室养护24h。（2）台秤。（3）盛样器（袋）或铁盘等。（4）干冰（固体CO2）。（5）试样标签。（6）其他：镐、铁锹、量尺（绳）、毛刷、硬纸、棉纱等。

3.方法与步骤 3.1准备工作（1）确定路段。可以是一个作业段、一天完成的路段，或按相关规范的规定选取一定长度的检查路段。（（5）将钻取的芯样妥善盛放于盛样器中，必要时用塑料袋封装。（6）填写样品标签，一式两份。一份粘贴在试样上，另一份作为记录备查。

（7）对钻孔的路面坑洞，应采用同类型材料填补压实，但取样时留下的水分应用棉纱等吸走，待干燥后再补坑。 4.圆柱试件的劈裂试验步骤 4.1至试验龄期时，自养护室取出试件，用湿布覆盖，避免其湿度变化。测量出直径、高度并检査外形，尺寸量测至1mm。 4.2在试件中部划出劈裂面位置线，圆柱体的母线公差为0.15mm。这两条母线应位于同一轴向平面内，彼此相对，两条线的末端在试件的端面上相连，应为通过圆心的直径，以明确标明承压面。将试件、劈裂夹具、垫条和垫层如图所示放在压力机上，借助夹具两侧杆，将试件对中。开动压力机，当压力机压板与夹具垫条接近时，调整球座使压力均匀接触试件。当压力到5kN时，将夹具的侧杆抽掉。 4.3当混凝土的强度等级小于C30时，加荷速度为0.02MPa/s-0.05MPa/s；当混凝土的强度等级大于等于C30且小于C60时，加荷速度为0.05MPa/s-0.08MPa/s；当混凝土的强度等级大于等于C60时，加荷速度为0.08MPa/s-0.10MPa/s。当试件接近破坏而开始迅速变形时，不得调整试验机油门，直至试件破坏，记下破坏极限荷载F （N）。 5.试验结果

CRISPR技术操作指南

CRISPR技术操作指南十年前，当研究人员开始解析细菌和古细菌中一个称为CRISPR 结构的时候，他们并没有预料到这会给基因编辑世界带来一场风暴。在过去的这一年半时间里，CRISPR 方法已迅速席卷了整个动物王国，成为DNA 突变和编辑的一种“马上”技术——迄今为止在几乎每种实验细胞类型中都能起作用，包括人类细胞，小鼠，斑马鱼和果蝇细胞；这种技术也易于操作，已经有两个研究组利用CRISPR 分析了人类细胞中几乎每个基因单突变（详细报道Science： CRISPR/Cas9加速基因挖掘；Science：张峰建立CRISPR/Cas9 人细胞敲除体系）。就在最近，CRISPR 还帮助研究人员完成了携带特殊基因中断（gene disruptions）的工程猴，这项壮举此前曾在小鼠中实现过，但未在灵长类动物中完成过（详细报道Cell：中国科学家利用CRISPR/Cas9技术构建基因工程猴）。 CRISPR 本身是一种防御系统，用以保护细菌和古细菌细胞不受病毒的侵害。在这些生物基因组中的CRISPR 位点能表达与入侵病毒基因组序列相匹配的小分子RNA。当微生物感染了这些病毒中的一种，CRISPR RNA 就能通过互补序列结合病毒基因组，并表达CRISPR 相关酶，也就是Cas，这些酶都是核酸酶，能切割病毒DNA，阻止病毒完成其功能。将CRISPR/Cas 系统用于其它非细菌细胞需要满足两个条件：一个Cas 酶，用于切断靶标DNA，比如目的基因中的DNA 片段，

另外一个就是称为导向RNA （gRNA）的RNA 分子，这种分子能通过互补结合靶标。gRNA 也就是细菌细胞中CRISPR RNA 的一个更短的版本，它能与Cas 形成复合物，指导Cas 到达正确的剪切位点。不过研究人员也可以通过结合其它元件，或者改变Cas 活性，来调整这种工具在基因校正和基因调控方面的作用。 “目前，非传统基因编辑应用方面的生物学家利用一种新工具，分析细胞中，和整个生物机体中突变的作用”，来自加州大学伯克利分校的生物化学教授Jennifer Doudna 表示，她与她的同事解析了细菌细胞中CRISPR 的作用机制。近期，Doudna 研究组利用这种工具，首次通过小鼠受精卵基因编辑构建了敲除小鼠。不过CRISPR 技术也存在一个主要的缺点，那就是缺乏特异性：一些gRNA 分子结合的DNA 只是部分与gRNA 互补。在这一方面，其它基因编辑方法，如锌指核酸酶（ZFN）和TALENS 可能要比Cas - gRNA 更为具有优势，因为这两者需要识别更长的靶标DNA 序列。但是ZFN 和TALENS 方法在克隆和细胞表达方面要比gRNAs 难得多，而且研究人员通常还需要验证十几个不同的TALENS，以及几十个不同的ZFNs，来证明其中一个有效。近期《科学家》（The Scientist）杂志汇总了基因编辑过程中Cas 和gRNA 的处理过程及解决方案，用于帮助新接触这一技术的研究人员熟悉这项热门技术。

CRISPR-Cas9体系实验流程 (2)

一、材料试剂准备 1）质粒： pSpCas9(BB)-2A-GFP (Addgene plasmid ID: 48138)，用于转染cas9，该质粒含有Cas9与GFP，Cas9的nickase活性将用于特定目的基因的ko，GFP可做为转染标签。 pSpCas9(BB) (Addgene plasmid ID: 42230)，若实验用sgRNA为PCR扩增纯化产物，则需要该质粒做为U6的模版。 pUC19(Invitrogen, cat.no.15364-011)可用于构建sgRNA，若用PCR产物进行转染，则需要该质粒来进行共转染，做为DNA carrier。上述三种质粒，根据实验选择sgRNA的表达方式（PCR产物/ 单载体系统/ 双载体系统）来确定具体使用哪种。 2）超纯水，DNase/RNase-free (Life Technologies, cat. no. 10977-023) 3）高保真聚合酶，Kapa HiFi (Kapa Biosystems), PfuUltra (Agilen)，Herculase II fusion polymerase 均可，只需保真效果好，扩增过程不产生突变。 4）Taq DNA polymerase with standard Taq buffer (NEB, cat. no. M0273S)用于一般检测。 5）QIAquick gel extraction kit (Qiagen, cat. no. 28704) 6）QIAprep spin miniprep kit (Qiagen, cat. no. 27106) 7）Fast Digest BbsI (BpiI) (Fermentas/Thermo Scientific, cat. no. FD1014)，如需要将sgRNA构建到pSpCas9(BB)-2A-GFP质粒上，则需要该酶。 8）T7 DNA ligase with 2× rapid ligation buffer (Enzymatics, cat. no. L602L). 或者T4 DNA ligase，二者无区别。 9）Stbl3 chemically competent E. coli (Life Technologies, cat. no. C7373-03) 10）dNTP solution mix, 25 mM each (Enzymatics, cat. no. N205L) 11）MgCl2, 25 mM (Thermo Scientific, cat. no. R0971) 12）T4 polynucleotide kinase (New England BioLabs, cat. no. M0201S) 13）Plasmid Safe ATP-dependent DNase (Epicentre, cat. no. E3101K) 14）Adenosine 5′-triphosphate, 10 mM (New England BioLabs, cat. no. P0756S) 15）SOC medium (New England BioLabs, cat. no. B9020S) 二、实验流程 1）确定target site。根据CRISPR在线设计工具https://www.wendangku.net/doc/d05293857.html,/设计sgRNA，（还有其他设计工具，推荐该软件）。将目的基因250bp以内的核苷酸序列输入，避免内含子，约10min将会给出备选的target site。或者人工手动选择，在目的区域5′-NGG（即PAM）上游20bp片段均可做为target site，一般target site可选在正义链或者反义链，二者均可。 2) 准备sgRNA表达体系。三种方案可选：a, 直接使用PCR扩增纯化产物，该产物片段含有U6+sgRNA，约370bp；b, 将sgRNA载体构建到 pSpCas9(BB)-2A-GFPpUC19质粒当中，即单载体系统；c, sgRNA载体构建到构

混凝土的劈裂抗拉强度.doc

附件：国家级工法文本范例混凝土的劈裂抗拉强度混凝土是一种脆性材料，在受拉时很小的变形就要开裂，它在断裂前没有残余变形。图 4-12 混凝土劈裂抗拉试验示意图 1-上压板2-下压板3-垫层4- 垫条混凝土的抗拉强度只有抗压强度的 1/10～1/20，且随着混凝土强度等级的提高，比值降低。混凝土在工作时一般不依靠其抗拉强度。但抗拉强度对于抗开裂性有重要意义，在结构设计中抗拉强度是确定混凝土抗裂能力的重要指标。有时也用它来间接衡量混凝土与钢筋的粘结强度等。混凝土抗拉强度采用立方体劈裂抗拉试验来测定，称为劈裂抗拉强度

f ts。该方法的原理是在试件的两个相对表面的中线上，作用着均匀分布的压力，这样就能够在外力作用的竖向平面内产生均布拉伸应力（图4-12），混凝土劈裂抗拉强度应按下式计算：式中 f ts——混凝土劈裂抗拉强度，MPa； P——破坏荷载， N； A——试件劈裂面面积， mm 2。混凝土轴心抗拉强度f t可按劈裂抗拉强度f ts换算得到，换算系数可由试验确定。各强度等级的混凝土轴心抗压强度标准值f ck、轴心抗拉强度标准值 f tk 应按表 4－1７采用。表 4－17混凝土强度标准值（N/mm2）强混凝土强度等级

度 C C C C C C C C C C C C C C 种类15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 70 7580 f 1 1 1 2 2 2 2 3 3 3 4 4 4 5 ck 0.0 3.4 6.7 0.1 3.4 6.8 9.6 2.4 5.5 8.5 1.5 4.5 7.4 0.2 f 1 1 1 2 2 2 2 2 2 2 2 2 3 3 tk .27 .54 .78 .01 .20 .39 .51 .64 .74 .85 .93 .99 .05 .11 还需注意的是，相同强度等级的混凝土轴心抗压强度设计值f c、轴心抗拉强度设计值f t低于混凝土轴心抗压、轴心抗拉强度标准值 f ck、f tk。

胶粘剂拉伸强度试验标准

胶粘剂拉伸强度试验标准在胶接接头受拉伸应力作用时，有三种不同的接头受力方式。 (1)拉伸应力和胶接面互相垂直，并且通过胶接面中心均匀地分布在整个胶接面上，这一应力均匀拉伸应力，又称正拉伸应力。 (2)拉伸应力分布在整个胶接面上，但力呈不均匀分布，此种情况称为不均匀拉伸。 (3)和不均匀拉伸相比，它的力作用线不是捅咕试样中心，而偏于试样的一端；它的受力面不是对称的，而是不对称的，这种拉伸叫不对称拉伸，人们有时将这一试验叫撕离试验或劈裂试验，以示和剥离相区别。一.拉伸强度试验(条型和棒状) 拉伸强度试验又叫正拉强度试验或均匀扯离强度试验。 1.原理由两根棒状被粘物对接构成的接头，其胶接面和试样纵轴垂直，拉伸力通过试样纵轴传至胶接面直至破坏，以单位胶接面积所承受的最大载荷计算其拉伸强度。 2.仪器设备拉力试验机应能保证恒定的拉伸速度，破坏负荷应在所选刻度盘容量的1 0%-90%范围内。拉力机的响应时间应短至不影响测量精度，应能测得试样断裂时的破坏载荷，其测量误差不大于1%。拉力试验机应具有加载时可和试样的轴线和加载方向保持一致的，自动对中的拉伸夹具。固化夹具，能施加固定压力，保证正确胶接和定位。 3.试验步骤 (1)试棒和试样试棒为具有规定形状，尺寸的棒状被粘物。试样为将两个试棒通过一定工艺条件胶接而成的被测件。除非另有规定，其试棒尺寸见表8-4。其试样尺寸的选择视待测胶黏剂的强度，拉力机的满量程，试棒本身材质的强度以及试验时环境因素而定。表8-4 圆柱形和方形试棒尺寸试棒直径和边长a/mm 直径/ L/mm 胶接面表面粗糙

b/mm mm 度Ra/um 10±0.1 15±0.1 25±0.1 10 12 15 5 7 9 30 45 50 0.8 0.8 0.8 用于试棒加工的金属材料有45号钢，LY12CZ铝合金，铜，H62黄铜等。非金属材料有层压塑料等。层压制品试棒，其层压平面应和试棒一个侧面平行，试棒上的销孔应和层压平面垂直。试棒的表面处理，涂胶及试样制备工艺，应符合产品标准规定。胶接好试样，以周围略有一圈细胶梗为宜，此时不必清除，若需清除余胶，则应在固化后进行。 (2)试验在正常状态下，金属试样从试样制备完毕到测试之间，最短停放时间为16h，最长为1个月，非金属试样至少停放40h。试样应在试验环境下停放30min以上，将它安装在拉力试验机夹具上，测试其破坏负荷，对电子拉力机试验机应使试样在(60±20)s内破坏；有时对机械式拉力机则采用10mm/min拉伸速度。 4.结果评定试验结果以5个试样拉伸强度算术平均值表示，取3位有效数字。同时应记下每个试样的破坏类型，如界面破坏，胶层内聚破坏，被粘物破坏和混合破坏。 5.影响因素 (1)应力分析粘接接头在受到垂直于粘接面应力作用时，应力分布比受剪切应力要均匀得多，但根据理论推测和应力分布试验证实，在拉伸接头边缘也存在应力集中。为证实这一点，有人采用一定厚度的橡胶胶接在试样中以代替胶黏剂，发现试样在拉伸时，橡胶中部有明显收缩。说明在接头受正拉伸应力作用，剪切应力则集中在试样胶黏剂-空气-被粘体的三者边界处最大，也就是说在这一点上应力最集中。如果我们胶接后两半圆柱体错位大，则试样的轴线偏离了加载方向中心线，这是经常会发生的。那么，就存在有劈应力，而使边缘应力集中急剧增加。当边界应力大到一个临界值时，胶层边缘就发生开裂，裂缝迅速地扩展到整个胶接面上。从对拉伸试样的应力分布进行分析表明，胶接试件的尺寸和模量，胶层的厚度，胶黏剂的模量都影响接头边缘的应力分布系数大小，因此也必然会影响它的强度值。和拉伸剪切试样一样，加载速度和试样温度也影响拉伸强度。 (2)试样尺寸

CRISPR操作-在线设计gRNA教程

CRISPR操作-gRNA设计教程我们都知道一个基因（一个基因ID）往往可以编码多个转录本（多个NM 号），相应的也对应多个蛋白质（多个NP号）。一条mRNA上编码蛋白质的区域称为CDS（coding sequence）。一个基因产生的多个mRNA往往有部分区域是重叠的（图4a红框内的区域），这部分重叠的区域叫做保守的CDS （consensus CDS），简称CCDS。我们通过基因组编辑破坏一个基因，往往需要破坏所有的mRNA编码的蛋白，因此，我们选择编辑的位点通常位于CCDS区域的上游位置（靠近起始密码子ATG的位置）。编辑的目的是在CDS区域随机引入碱基的缺失或插入（indels），如此可以破坏三联密码子的阅读框，产生移码突变(图4b)。图4CCDS和移码突变示意图。a，方框代表外显子组织情况，黑色方框代表CDS区，红色框内是该基因对应的CCDS；b，移码突变。一个T碱基的插入改变了阅读框，最终导致终止密码子的提前出现，蛋白质翻译提前终止。移码突变往往导致蛋白质功能丧失。 SgRNA设计的站点介绍如下：着重推荐Lei Stanley Qi Lab的 https://www.wendangku.net/doc/d05293857.html,/index.jsp （打不开请复制到浏览器地址栏）这个在线站点功能比第一个丰富，可以选择基因编辑工具的其他用途

（激活，抑制基因表达等）（图5）。下一步就是选择物种（图6）。但只有常见的9种。再下一步就是直接输入基因的名称（或序列）即可（图7）。图5选择编辑类型

图6选择物种图7选择基因名称。我们以人的LDLR基因作为例子说明，输入“LDLR“，然后点击“CRISPR-ERA search”，会出来很多设计好的sgRNA（图8），ID编号#1-N（紫色框），后面一系列参数代表sgRNA对应的mRNA、基因组位置等。绿色框里代表打分，简而言之是E+S分越高越好。但这个不是很直观，我们可以切换到图示模式，请点击红色框的链接查看排名前50位的sgRNA在基因组上对应的位置（图9）。图示模式是兼容在UCSC基因组浏览器中的，这一工具包含的信息特别丰富，大家可以自己探索探索其他好玩的功能。

田间试验答案--植物保护

6.24.46、单尾测验：否定区位于分布在一尾的测验。 7.*29.47、接受区：接受无效假设0H 的区间。 9.45.60、相关系数; 反映变数间相关密切程度及其性质的统计数， r =。 19.*30.49、乘积和: X 的离均差与Y 的离均差乘积之和，()()S P X x Y y =--∑。 13.33、置信度：若使总体参数θ在区间[]12,L L 中的概率为1α-，即：{}121P L L θα≤≤=-，则称1α-为参数θ在区间[]12,L L 的置信概率和置信度。 14.23、试验误差：在试验中由于非处理因素的影响，使实际观察值与处理真值之间发生了差异，这种差异称为试验误差。 15.35、回归系数：X 每增加1个单位，Y 平均地将要增加（0b >）或减小（0b <）的单位数。X S P b S S = 3.43、置信区间：若使参数θ在[]12,L L 中的概率为1α-，即：{}121P L L θα≤≤=-，则区间[]12,L L 叫做参数θ的1α-的置信区间。 28.41、决定系数：变数X 或Y 的总变异中可以相互以线性关系说明的部分所占的比率，22X Y S P r S S S S = 。（在依变数Y 的变异中，因自变数X 的改变而引起Y 线性改变的平方和在Y 变异中所占的比例。定义为2/Y X Y U r S S =。） *20.*40、多元相关：在1M m =+个变数中，m 个变数的综合和1个变数的相关，叫做多元相关或复相关。 4.44、唯一差异原则：除了处理因素具有的不同水平外，其余的各种环境因素均应保持在特定的水平上。 8.48、无偏估值：参数估计的期望值与参数的真值相等，称为无偏估计值。 1、标准差：变数变异程度的度量，总体标准差：()N Y ∑-=2μσ，样本标准差：()12 --=∑n y Y s 。（变数的平均变异量。 42、小概率事件原理：统计学上，把小概率事件在一次试验中看成是实际不可能发生的事件, 称为小概率事件实际不可能性原理，亦称为小概率原理。 51.随机误差：由于无法控制的偶然因素的影响造成的试验结果与真实结果之间的误差。 52.二项总体：由非此即彼事件组成的总体，常用B （n ，p ）来表示。由对立事件构成的总体，称为二项总体 53.试验因素：将作为试验研究对象的因素称试验因素。 54.系统误差：系统误差(systematic error)是指由于仪器未校正、测量者感官的某种偏差、医生掌握疗效标准偏高或偏低等原因，使观察值不是分散在真值的两侧，而是有方向性、系统性或周期性地偏离真值。系统误差可以通过实验设计和完善技术措施来消除或使之减少。 55.无偏估计值：在统计上，若所有可能样本的某一统计数的平均数等于总体的相应参数，则称该统计数为总体相应参数的无偏估值。 56.第一类(α)错误：如果无效假设是正确的，但是通过假设测验否定了无效假设，这样犯的错误叫做第一类错误。 57.试验效应：试验因素对试验指标所起的增加或减少的作用。 5、回归截距：线性回归中直线在Y 轴上的截距，a y bx =- 2、样本：从总体中抽出的若干个样本的集合。 58 离回归平方和： 59 回归平方和：SS 回即 ( ) ? -2? Y Y ，它反映由于X 与 Y 的直线关系而使Y 的总变异所减小的部分，也就是在总平方和中可以用X 解释的部分。回归平方和越大，说明回归效果越好。 10、偏回归系数： 11、方差：变数变异程度的度量，对于总体()2 2 i Y N μσ-=∑，对于样本22()1 Y y s n -=-∑ 12、总体：指在同一组条件下所有成员的某种状态变量的集合；或者说是某一变数的全部可能值的集合；或性质相同的个体组成的整个集团。 16、两尾测验：有两个否定区，分别位于分布的两尾的测验。 17、否定区：否定无效假设0H 的区间。 18、随机抽样：保证总体中的每一个体，在每一次抽样中都有同等的概率被取为样本。 21、统计数：由样本获得的代表样本的特征数。（描述样本的特征数。）