小球藻的培养和保存技术-新
小球藻的培养和保存技术
如何培养和保存小球藻，是繁殖小丑鱼的另一个关键。小球藻可以买成品的，也不贵。也可以自己培养，但比较麻烦。
下面是用小球藻培育和保存的经验。
一、小球藻种的获得
小球藻种可以从活体小球藻种液获得。初次可以从渔友那取得种液，也可从淘宝商家购买，一般一套（小球藻、小球藻、营养液）100元左右。
二、小球藻的有关知识
小球藻属于绿藻门，绿藻纲，绿球藻目，卵囊藻科，小球藻属，繁殖时，每个细胞形成2、4、8或16个似亲孢子，似亲孢子经母细胞壁破裂释放。小球藻细胞内含有丰富的叶绿素，光合作用非常强，是其他植物的几十倍。其含有丰富的蛋白质、维生素、矿物质、食物纤维、核酸及叶绿素等，特别是含有令人注目的生物活性物质糖蛋白、多糖体以及高达13％的核酸等物质。
小球藻的直径只有3～8微米，必须用600倍以上的显微镜才能看见，且形状呈圆球形，所以被称为小球藻（绿藻）。小球藻可以生息在淡海水中，它借助阳光、水和二氧化碳，以每隔20
小时分裂出4个细胞的旺盛繁殖能力，不停地将太阳能量转化生成蕴涵多种营养成分的藻体，并在增值中释放出大量的氧气。它的光合能力高于其他植物10倍以上，繁殖能力比陆地上的高等植物强100倍以上。
小球藻生于热带、温带淡水和海水中，以细胞分裂进行无性繁殖，并可产生配子进行有性繁殖。
适宜温度为20-23℃，温度过低会影响小球藻的繁殖。
海水小球藻适宜盐度20-30‰。
适宜光照5000-10000LX，太弱会抑制光合作用，影响生长和繁殖。
适宜水质为pH=8，氮磷钾、二氧化碳含量高的海水。含量太低会抑制生长和繁殖。
三、轮虫繁殖用活体小球藻的培育条件
温度与繁殖缸相近即可，我用室温8-26℃。
盐度与繁殖缸一样，我用30‰，比重1.02。
合适的光线，我用自然光，必要时加照明。
合适的营养液，可购买或自己配制（方法后面介绍）
四、准备一容器做培养缸，可以是玻璃或透明塑料的，容积可根据要繁殖的轮虫的数量确定，我是用食用油瓶改制培养缸，我繁殖轮虫只用5升的就够了。准备加热棒、照明、气泵，根据需要使用。收到活体小球藻后，测出比重（一般较低，1.01左右），然后据此比重调整培养缸的海水比重，加入合适的营养液，初次培养用新配的海水和小球藻种液。然后将种液倒入，放光亮处繁殖。每天搅拌几次，也可用气泵加气，不要加沙头，就像孵化丰年虾一样。当培养缸海水颜色从淡变深绿时（一般7天左右，生长太快的小球藻营养低）就可以使用了。倒出一部分做藻种长
期保存（方法后面介绍），剩下的添加海水继续培养3天左右（变深绿色）。
五、循环培养。正常培养缸在室温8-26℃时可不加温，不加气，用自然光，节约能源。培养完成后部分把小球藻连水抽出喂养轮虫，每天不断添加海水（可以用滤完轮虫的海水，我是用高质量的沙头过滤轮虫），一周后只剩很少的小球藻了（水变成淡绿色），喂养周期结束，然后调整好比重（一般加淡水），添加营养液，重新进入培养循环。一般5-6个循环小球藻就会遭到其他浮游生物的污染，就必须纯化藻种了（方法后面介绍），有些人藻液被蓝藻（有毒）污染，会造成轮虫和小丑鱼的死亡。
六、时间节奏的调整。小球藻培养要掌握节奏,最好轮虫重新培养时达到最深颜色（培养一周左右）。小球藻太多时可连水抽出放低温处（冰箱冷藏室）保存几十天没有问题，还可以用下面方法调整。减慢小球藻增殖的方法：减少照明，降低温度。加快小球藻增殖的方法：增加供气，增加营养液，增加照明，提高温度。一般调整得好，可以和公子小丑鱼产卵和孵化同步，我的公子小丑隔15天产卵一次，小球藻培养8天喂7天，也是15天循环一次。
七、小球藻种的保存1。
液体保存。
用第一次培养好后倒出的一部分藻液（深绿色）做藻种，用水族呼吸袋包装好后再用橡筋扎紧密封，然后放入透气的塑料盒
中，再放入冰箱的冷藏室保存即可。使用时取出摇匀（会有沉淀）让温度慢慢升到室温就可以当藻种用了。我最长保存过近一年，还可以正常繁殖。更长的时间就没有试过了。
八、小球藻种的保存2.
干法保存。
在加过营养液的海水中加入琼脂，加热融化后冷却成果冻状，切成小块，然后放入第一次培养好后倒出的一部分藻液（深绿色）中，几天后果冻表面会长有一层小球藻，呈绿色，取出后放入透气的塑料盒中，再放入冰箱的冷藏室保存即可。使用时取出，让温度慢慢升到室温就可以当藻种用了。我最长保存过近一年，还可以正常繁殖。更长的时间就没有试过了。每次从冰箱取出一部分即可，使用和保存比液体更方便。
九、小球藻种的浓缩。
1、小球藻在光照和营养盐缺乏的情况下会产生沉淀。在培养时，当营养盐较低的时候（生长条件正常，但小球藻不增殖，即浓度不变化），把小球藻装入瓶内，放入冰箱冷藏室，1-3天后就会沉淀，倒出上层清液，即可取得浓缩小球藻液体。用前面介绍的呼吸袋效果更好，小球藻的活力更高。营养盐还可以用离子交换树脂吸附来降低。
2、用电泳或阳离子絮凝剂如明矾、聚合氯化铝、聚合硅酸硫酸铝等可以让小球藻沉淀，此方法会引入其他盐类。
3、用蛋白分离器打出浓缩小球藻，此方法容易破坏小球藻
活性，还会富集其他蛋白质。
九、营养液的配制。
配方一（适合保存藻种和精细培养）
A液：
NaNO3 150g/L
K2HPO4 4g/L
MgSO4 7.5 g/L
CaCl 3.6 g/L
Na2CO3 100g/L
B液：
Citric acid 0.6 g/500mL
Ferric ammonium citrate 0.6g/500mL
EDTANa2 0.1g/500mL
C液：
H3BO3 0.286g/100mL MnCl2·4H2O 0.186g/100mL ZnSO4·7H2O 0.022g/100mL Na2MoO4.2H2O 0.039g/100mL CuSO4. 5 H2O 0.008g/100mL Co(NO3)2.6 H2O 0.005g/100mL
使用时，每1000 mL海水添加A液10 mL，B液5mL，C液
1mL即可，即用即配，配后海水不能长期保存，否则营养会失效。
配方二（适合一般使用）
A：三氯化铁５０毫克、氯化锰１．８毫克、硼酸１６８毫克、乙二胺四乙酸四钠２２５毫克、磷酸二氢钾１００毫克、和硼酸钠５００毫克
B：氯化锌０．５克、氯化钴０．５克、钼酸铵０．２５克、和硫酸铜０．５克
将AB倒入1000毫升的海水中，再加入适量维生素Ｂ１和Ｂ１２即可配成营养液。此营养液要即用即配，不能长期保存。
配方三（适合临时添加使用）
营养液母液配方：硝酸钠５０克、磷酸二氢钾５克、柠檬酸铁铵０．５克。将以上营养盐加入1000毫升海水中即可。使用时每1000毫升海水加母液10毫升。此配方容易使小球藻产生沉淀和白化。
配方四（适合有经验的使用）
蛋分打出污水经加热冷却后使用或经过1微米的物理过滤
后使用。一般每1000毫升海水添加10毫升蛋分水（可根据蛋分水的浓度不同作适当的调整）。此配方经济环保，就是打气容易产生气泡和容易引入有害污染。
十、小球藻生长慢、沉淀、发白和突然死亡
小球藻在温度过低或过高、盐度过高、光照过低、太高或太低、营养盐太低、二氧化碳太低时生长和繁殖很慢甚至死亡。只要保持合适的条件就能保证小球藻的正常生长。
小球藻小部分沉淀是正常的，而大量沉淀一般是密度太高或温度过低，还有就是不小心混入促沉淀的化合物（如搞卫生）。一般应每天搅拌几次和加盖，但不能隔绝空气。
小球藻发白一般是营养缺乏，及时适量添加营养液即可。
小球藻突然死亡的原因一般是温度过高、盐度过高和pH值变化太大。特别是夏天，因温度高，部分小球藻死亡，然后死亡的小球藻又使水酸化，进一步加剧小球藻死亡，最后造成小球藻突然死亡的表象。故夏天温度高时要降温，并充气。
小球藻培养基.docx
（一）淡水培养基 1．BG— 11 培养基 BG — 11 培养基 试剂名称g / L NaNO3 K2HPO4 MgSO4 ? 7H2O CaCl2 ? 2H2O Citric acid (柠檬酸) Ammonium ferric citrategreen/ (柠檬酸铁铵) /柠檬酸铁 EDTANa2 Na2CO3 A5 另取 (NO3) ，溶解在200ml纯水中，每次同A5 一起，加入1L的培养基中。灭菌后PH调至 A5 试剂名称g / L ZnSO4 ? 7H2O CuSO4 ? 5H2O MoO3（ Na2MoO4 或 H3BO3 MnCl2 ? 4H2O Na2MoO ? 2H2O ）(或) 2. Zarrouk培养基 Zarrouk培养基 试剂名称g / L NaCl CaCl2 NaNO3 FeSO4 ? 7H2O EDTA（Na）/ EDTA（Na）? 2H2O/ K2SO4 MgSO4 ? 7H2O NaHCO3 K2HPO4 / K2HPO4 ? 3H2O A5（微量元素） / 1ml
B6（微量元素）1ml B6 试剂名称g / L ˉ4 NH4VO3x 10 ˉ4 K2Cr2 （ SO4）4 ? 24H2O x 10 ˉ4 Ni2SO4 ? 7H2O x 10 ˉ4 Na2WO4 ? 2H2O x 10 ˉ4 Co（NO3）2 ? 6H2O x 10 ˉ4 Ti2 （ SO4）3x 10 注意： NH4VO3很难溶解，注意充分搅拌，B6 液使用前要充分的摇动。A5和 B6要单独配制，要低温或冷冻保存。新培养基的PH值为— 3．紫球藻培养基 紫球藻培养基 试剂名称g / L NaCl MgSO4 ? 7H2O MnCl2 ? 6H2O KNO3 CaCl2 ? 2H2O K2HPO4 / K2HPO4 ? 3H2O / NaHCO3 A5 Fe-EDTA （二）海水培养基 4．f / 2培养基 f / 2培养基（母液）（+ Si） 试剂名称g / L NaNO3 NaH2PO4 ? H2O / NaH2PO4 ? 2H2O/ EDTA（Na）? 2H2O FeCl3? 6H2O CuSO4 ? 5H2O ZnSO4 ? 7H2O CoCl2 ? 6H2O MnCl ? 4H2O Na2MoO4 ? 2H2O 维生素B1 维生素B12
小球藻的培养
一、小球藻 小球藻是单细胞植物，种类较多，多数生活在淡水中，少数生活在海洋里。按植物学分类，小球藻属于小球藻纲绿藻目原球藻科生物，其体型小，直径一般为3～5μm，在显微镜下，需要放大400～600倍才能看到，我们肉眼看到的只不过是含有小球藻的绿色的水。小球藻所含的营养成分很高，其蛋白质含量达到50%～60%（相当于花生米的2倍、鸡蛋的5倍），含脂肪10%～30%，还含有多种维生素。小球藻的生物活性物质糖蛋白和多糖体的含量也相当高，这些生物活性物质具有增强人体免疫力、抗癌、降血压、抑制血糖上升、排除体内毒素和迅速恢复机体损伤等功能。因此，小球藻的培养前景广阔。 作为培养原料的小球藻，可以到较清洁的池塘、水坑中采集绿色的水，在显微镜下鉴定，然后再用。也可以向培养它的人索取。 1 容器的准备 小规模的培养可用瓶、缸等，大规模的培养可用水泥池。首先，要对所使用的容器进行消毒，一般用100mg/L的漂白粉水溶液浸泡，再用水冲刷数次。 (100mg/L的漂白粉水溶液的配制：①天平称量5g2%漂白粉澄清液； ②定量转移至容量瓶中； ③加水至1L； ④混匀。 2％漂白粉上清液的配制法：取漂白粉2克，加少量水搅匀，再加水至100毫升，充分调匀后，待澄清后取上清液使用。） 2 培养液的准备 （1）BG11液体培养基配方： Stock1 定容100mL 柠檬酸柠檬酸铁胺 EDTANa2 Stock2 定容1000mL NaNO3 30g K2HPO4 MgSO4·7H2O Stock3 定容100mL CaCl2·2H2O Stock4 定容100mL Na2CO3 2g
Stock5 定容1000mL H3BO3 MnCl2·4H2O ZnSO4·7H2O Na2MnO4·2H2O CuSO4·5H2O Co(NO3)2·6H2O Stock1 取用2mL Stock2 取用20mL Stock3 取用2mL Stock4 取用1mL Stock5 取用 1mL 总定容 1000mL （2）购买 2000元/套，九种原液各200ml（稀释1000倍），10瓶。培养基各取1ml。 联系电话： 3 藻种 购买：淘宝轮虫小球藻套装。40元/一套 4 接种 选取生活力强、生长旺盛的藻种，在天气晴朗的上午接种。一般情况下，作为第1级培养，可按藻液与培养液1∶2的比例进行接种。接种的量大，可使藻种迅速成为培养液中的 优势种，利用生物间的拮抗作用，减少了污染机会，缩短了小球藻的培养时间。待扩大培养时，可按藻液与培养液1∶4的比例进行接种。 5 管理 搅拌由于小球藻不能游动，只能浮在水中生活，所以必须对培养液进行搅拌，让藻体 不断变换位置，使光照、养料和水温均衡，这样有利于藻体的迅速生长和繁殖。常用的搅拌 工具有玻璃棒、竹棒，每天搅拌3次，每次1分钟。 光照小球藻的培养要有充分的光照，阴雨天光线不足时，可在培养室内用人工光源进 行补充，通常用冷白荧光灯，光照强度为2000～3000Lx；但在光线强烈的夏天，要用遮阳 网等进行适当避光。 温度及pH 温度保持在25～30℃，最适宜生长温度为26℃。pH保持在6～8。
固定化小球藻培养条件的实验研究
固定化小球藻培养条件的实验研究 摘要：本文为固定化小球藻培养条件的实验研究。采用细胞固定化的方法，选取五种培养液固定化培养小球藻，用紫外分光光度计在470nm的紫外可见光下定期测量其培养液的pH值和叶绿素含量，分析数据，从而得出培养小球藻的最适条件和培养液。实验结果表明培养小球藻的最适pH在4.5-5.4之间。海藻肥培养液为最适合的培养液 关键词：小球藻、固定化、叶绿素、含量、测定 前言 微藻生物技术属于生命科学研究领域的一个重要分支，是目前国内外的研究热点和前沿。小球藻是人类最早分离培养的一种绿藻，属于具有真核细胞的最简单光合作用有机体，小球藻生息在淡水中，它借助阳光、水和二氧化碳，以每隔20小时分裂出4个细胞的旺盛繁殖能力，不停地将太阳能量转化生成蕴涵多种营养成分的藻体，并在增值中释放出大量的氧气；而它的光合能力高于其他植物10倍以上。基于这种生命活力及产生的高能营养物质，人们赞美它是“罐装的太阳”。有望成为减排C02的先锋物种。小球藻的固定化即将小球藻与海藻酸钠溶液混合，在CaCl2的作用下形成固体小球。此包埋制得的小球体可使其内的小球藻有较好的机械性能和防破坏能力而周围营养源可与其内的藻体进行正常接触。但是，固定化小球藻的培养条件和生长情况报道很少，本实验首先固定化小球藻，然后在不同的液体营养环境中培养，定期测量其培养液的pH值和叶绿素含量，分析数据，从而得出培养小球藻的最适条件和培养液，为固定化小球藻的利用提供基础数据。 1 材料与方法： 1.1 实验仪器：超净工作台、高压蒸汽箱、分光光度计、试管、电子秤、移液管、量筒、烧杯 1.2配制药品溶液 配制五种培养液各200ml 1号SE 溶液（药品加蒸馏水） 2号（土壤浸出液）用水浴加热土壤水溶液过滤。 3号（硝酸钠60mg/L,尿素1.8mg/L,磷酸二氢钾2mg/L)， 4号复合肥溶液l 5号海藻肥 配制固定化小球藻试剂4%海藻酸钠200ml，5%氯化钙溶液2000ml 以上溶液均加入高压蒸汽箱灭菌。灭菌半个小时。灭菌完后，1号、2号、3号、4号、5号溶液和氯化钙溶液均放入冰箱中保存。
中篇蛋白核小球藻的实际功效
中篇蛋白核小球藻的实际功效 小球藻（小球藻）含丰富的蛋白质、脂类、多糖、食用纤维、维生素、微量元素和活性代谢产物，具有防治消化性溃疡、抗?[瘤、增强免疫、抗辐射、抗病原微生物、防治贫血、降血脂和抗动脉样硬化等保健和药理作用。 小球藻门小球藻属Chlorella Beij.为普生性单细胞小球藻，种类繁多。小球藻能适应于不同的生长环境，在人工培养基中生长良好，除能利用光能自养外，还可以利用机碳源进行异养生长。小球藻含丰富的蛋白质、多糖、脂质、叶绿素、维生素、微量元素和一些生物活性代谢产物。 自1962年日本学者Yamagishi报道小球藻对胃溃疡有治疗作用以来，人们对小球藻的药理作用进行了广泛的研究，发现小球藻具有防治消化性溃疡、抗肿瘤、增强免疫、抗辐射、抗病原微生物、防治贫血、降血脂和抗动脉样硬化等药理作用，在日本已经用于临床作为辅助治疗药物[1]。现将小球藻的保健和药理作用研究状况作一综述。 1.防治消化性溃疡 小球藻对消化性溃疡的作用在动物实验已得到证实[2]。经口给予实验鼠普通小球藻干粉，对水浸应激反应诱导和半胱胺诱导的消化性溃疡模型有明显的预防作用，能增强防溃
疡形成的保护因素。作用机制可能是通过“免疫-脑-肠”轴阻止溃疡形成和通过自身特点保护胃粘膜。 2.抗肿瘤 小球藻抗肿瘤的机制有：1）抑制致癌物的诱变性和基因毒性；2）使多形核细胞（PMN）增生，与宿主或受体一起作用；3）通过抗原专一性免疫，使T细胞增殖和活化等。Nomoto 等[3]研究了从普通小球藻S-50抽提的水溶物质PCM-4对移植鼠肿瘤的抗肿瘤活性。经口和腹腔给予 PCM-4后，S180和Meth A 的生长以及腹水肝癌AH44、AH41C的生长均受到抑制。体外实验表明，PCM-4的抗肿瘤作用是从宿主调节反应系统引出的。 Konishi 等[4]给接种了Meth A 肿瘤细胞的BALB/c 小鼠腹腔注射普通小球藻热水抽提物（CVE）后，小鼠的生存时间显著延长。用正常受体的Winn 型检测，发现给予CVE后24h 腹腔渗出液细胞（PEC）含大量多形核细胞（PMN），具有抗肿瘤作用。他们发现CVE诱导的抗肿瘤作用是由PMN 与宿主或受体一起作用而表达的。 经口给予带Meth A 瘤的BALB/c 小鼠或CDF1 小鼠普通小球藻或其丙酮提取物，Meth A 肿瘤生长也受到显著抑制，这种抑制是通过抗原专一性方式发生的[5]。 Tanaka 等[6]经研究发现普通小球藻CK22 藻株的一种糖蛋白提取物CVS 对小鼠实验和自发肿瘤转移有显著的抑
小球藻大规模培养研究的进展
小球藻大规模培养研究的进展 ① 李师翁 (庆阳师范高等专科学校生物系 甘肃西峰 745000)李虎乾 张建军 (深圳益兴光合有限公司 深圳 518008) 摘要 小球藻是被人类研究并开发利用的单细胞藻类之一。本文就小球藻大规模培养中产量、质量、培养方式、培养基与经济上的可行性之间的关系;气候因子、二氧化碳补加、搅拌、分离、收获与干燥等技术条件及其研究的进展进行了综述,认为未来的发展趋势将是光合生物反应器培养。文中也讨论了小球藻大规模培养中生长量以及限制生长量的主要因素与太阳能转换率之间的关系。 关键词 小球藻,大规模培养,生长量 PROGRESS IN STU DIES ON LARGE 2SCAL E CU L TURE OF CHLORELLA LI Shi 2Weng (Department o f Biology ,Qingyang Teacher ’s College ,X iFeng G anSu 745000) LI Hu 2Qian ZH ANGJian 2Jun (Shenzhen Yixing Photosynthesis Limited Company ,Shenzhen 518008) Abstract Chlorella is one of the single 2cell algae that was studied ,cultured and used for human.The current reiew of the interrelationship of product ,quality ,culture type ,and media type for eco 2nomically feasible system ;the technical condition on climatological factors ,carbonating ,the need for mixing ,seperating ,harvesting and drying ;and the progress of mass culture on Chlorella was sum 2marized in this paper.The future development trends of mass culture will be automatic photosynthe tic reactor culture.The relationship of productivity and the s olar energy conversion efficiency which is one of the main limitations on productivity was discussed als o. K ey w ords Chlorella ,Large 2scale culture ,Productivity 小球藻为绿藻门小球藻属(Chlorella )普生性单细胞绿藻,以光合自养生长繁殖,分布极广,尤以淡水水域种类多,生物量大。对生长条件要求简单,环境耐受性强,繁殖速率高,人工培养较易,单位光照面积的水域培养小球藻的生物量是高等植物的数倍。人类对小球藻的研究开发已有半个世纪的历史。二战期间,由于粮食的缺乏,如何利用水生藻类生物作为人类的食物资源开始成为研究课题,单细胞藻类的培养逐渐被重视起来,许多国家先后进行了培养和营养价值的研究。小球藻是最早被开发研究的对象之一。该属种类较多,其中以蛋白核小球藻(Chlorella pyrenoidosa )蛋白质含量高而受到重视。 现在知道,小球藻作为人类理想的营养源健康食品,在于它具有极其丰富均衡的营养成分和优良的医疗保健作用。蛋白质50～67%,含有人体所需的20种氨基酸、多种维生素和微量元素,以及亚麻酸、亚油酸、胡萝卜素等成分。研究证明小球藻细胞糖蛋白具有①甘肃省教委资助项目。 植物学通报 1998,15(4):45～50 Chinese Bulletin of Botany
小球藻的培养和保存技术-新
小球藻的培养和保存技术 如何培养和保存小球藻，是繁殖小丑鱼的另一个关键。小球藻可以买成品的，也不贵。也可以自己培养，但比较麻烦。 下面是用小球藻培育和保存的经验。 一、小球藻种的获得 小球藻种可以从活体小球藻种液获得。初次可以从渔友那取得种液，也可从淘宝商家购买，一般一套（小球藻、小球藻、营养液）100元左右。 二、小球藻的有关知识 小球藻属于绿藻门，绿藻纲，绿球藻目，卵囊藻科，小球藻属，繁殖时，每个细胞形成2、4、8或16个似亲孢子，似亲孢子经母细胞壁破裂释放。小球藻细胞内含有丰富的叶绿素，光合作用非常强，是其他植物的几十倍。其含有丰富的蛋白质、维生素、矿物质、食物纤维、核酸及叶绿素等，特别是含有令人注目的生物活性物质糖蛋白、多糖体以及高达13％的核酸等物质。 小球藻的直径只有3～8微米，必须用600倍以上的显微镜才能看见，且形状呈圆球形，所以被称为小球藻（绿藻）。小球藻可以生息在淡海水中，它借助阳光、水和二氧化碳，以每隔20 小时分裂出4个细胞的旺盛繁殖能力，不停地将太阳能量转化生成蕴涵多种营养成分的藻体，并在增值中释放出大量的氧气。它的光合能力高于其他植物10倍以上，繁殖能力比陆地上的高等植物强100倍以上。
小球藻生于热带、温带淡水和海水中，以细胞分裂进行无性繁殖，并可产生配子进行有性繁殖。 适宜温度为20-23℃，温度过低会影响小球藻的繁殖。 海水小球藻适宜盐度20-30‰。 适宜光照5000-10000LX，太弱会抑制光合作用，影响生长和繁殖。 适宜水质为pH=8，氮磷钾、二氧化碳含量高的海水。含量太低会抑制生长和繁殖。 三、轮虫繁殖用活体小球藻的培育条件 温度与繁殖缸相近即可，我用室温8-26℃。 盐度与繁殖缸一样，我用30‰，比重1.02。 合适的光线，我用自然光，必要时加照明。 合适的营养液，可购买或自己配制（方法后面介绍） 四、准备一容器做培养缸，可以是玻璃或透明塑料的，容积可根据要繁殖的轮虫的数量确定，我是用食用油瓶改制培养缸，我繁殖轮虫只用5升的就够了。准备加热棒、照明、气泵，根据需要使用。收到活体小球藻后，测出比重（一般较低，1.01左右），然后据此比重调整培养缸的海水比重，加入合适的营养液，初次培养用新配的海水和小球藻种液。然后将种液倒入，放光亮处繁殖。每天搅拌几次，也可用气泵加气，不要加沙头，就像孵化丰年虾一样。当培养缸海水颜色从淡变深绿时（一般7天左右，生长太快的小球藻营养低）就可以使用了。倒出一部分做藻种长
小球藻常用培养基 SE培养基
SE (Brostol’s solution) Component Amount Stock Solution (1) NaNO3 1 mL/L 25 g/100mldH2O (2) K2HPO4 1 mL/L 7.5 g/100 mL dH2O (3) MgSO4·7H2O 1 mL/L 7.5 g/100 mL dH2O (4 ) CaCl2·2H2O 1 mL/L 2.5 g/100 mL dH2O (5 ) KH2PO4 1 mL/L 17.5 g/100 mL dH2O (6 ) NaCl 1mL/L 2.5g/100ml dH2O (7) FeCl3. 6H2O 1mL/L 0.05g/100ml dH2O (8) EDTA-Fe 1mL/L 1N HCl: 取4.1ml浓盐酸用蒸馏水稀释至50ml 1N EDTA-Na 2称取0.9306g 溶解至50ml 蒸馏水中 称取FeCl3. 6H2O 0.901g 溶于10ml以上步骤已经配制完成的1N HCl 中,然后 与10ml已经配制完成的0.1N EDTA-Na 2混合，加入蒸馏水稀释至1000ml。 (9) Trace mental solution 1ml/L H3BO3 2.86g/L dH2O MnCl2·4H2O 1.86g/L dH2O ZnSO4·7H2O 0.22g/L dH2O Na2MoO4.2H2O 0.39g/L dH2O CuSO4. 5 H2O 0.08g/L dH2O Co(NO3)2.6 H2O 0.05g/L dH2O （10）土壤提取液40 mL/L 土壤提取液配制方法: 取花园土未施过肥200g置于烧杯或三角瓶中，加入蒸馏水1000毫升，瓶口 用透气塞封口，在水浴中沸水加热3小时，冷却，沉淀24小时，此过程连续进行3次，然后过滤，取上清液，于高压灭菌锅中灭菌后于4℃冰箱中保存备用。
小球藻培养基配方
2(Guillard.1962)改良配方（海水） 工作液(mg/L) 母液(g/L) NaNO3 75mg 75g NaH2Po4.H2O 5mg 5g Na2SiO3.9H2O 20mg 20g Na2EDTA 4.36mg 4.36g FeCl3.6H2O 3.16mg 3.16g CuSO4.5H2O 0.01mg 0.01g ZnSO4.7H2O 0.023mg 0.023g CoCL2.6H2O 0.012mg 0.012g MnCL.4H2O 0.18mg 0.18g Na2MoO4 2H2O 0.07mg 0.07g 维生素B1 0.1mg 0.1mg 维生素B12 0.5mg 0.5mg 生物素 0.5mg 0.5mg 自然海水（0.4 m孔径滤膜过滤）1升 自己养的可以用蒸馏水来配在121oC下灭菌20分钟。 f / 2中 (Guillard和Ryther 1962,Guillard 1975) 这是一个常见的和广泛使用的通用丰富了海水介质专为日益增长的沿海海洋藻类,尤其是硅藻。最初形成的浓度,称为“f介质”(Guillard和Ryther 1962)已经减少了一半。 准备,开始与950毫升的过滤天然海水并添加以下组件。 摘要微量元素和维生素的解决方案下有提供。把最后一卷到1升天然海水与过滤。如果藻类生长不需要硅,那么建议硅是省略了,因为它增强了降水高压。 成分浓度数量 NaNO 375 g/L dH 2 O 1mL NaH 2PO 4 H 2 O 5 g/L dH 2 O 1mL Na 2SiO 3 9H 2 O 30 g/L dH2O 1mL 微金属溶液1mL 维生素溶液0.5mL f / 2维生素的解决方案 首先,准备主要股票的解决方案。准备最后的维生素的解决方案,开始与950毫升的dH2O,解散这个硫胺素加1毫升的主要股票和带来最终卷,1升与dH2o .过滤消毒。存储在冷藏或冷冻。 成分浓度数量 维生素B1 200mg 维生素H 1.0 g/L dH 2 O 1mL 维生素B12 1.0 g/L dH 2 O 1mL
小球藻培养基
（一）淡水培养基 1．BG—11 培养基 BG—11 培养基 试剂名称g / L NaNO3 1.5000 K2HPO40.0400 MgSO4 ? 7H2O0.0750 CaCl2 ? 2H2O0.0360 Citric acid ( 柠檬酸 )0.0060 Ammonium ferric citrategreen 0.006 / 0.004 ( 柠檬酸铁铵 ) / 柠檬酸铁 EDTANa20.0010 Na2CO30.0200 A5 1.0ml 另取0.10gCo(NO3)2.6H2O，溶解在200ml纯水中，每次同A5一起，加1.0ml入 1L的培养基中。灭菌后PH调至7.1 A5 试剂名称g / L ZnSO4 ? 7H2O0.222 CuSO4 ? 5H2O0.079 0.015 ( 0.21 或 0.39 ) MoO3（Na2MoO4或Na2MoO ? 2H2O ） H3BO3 2.86
MnCl2 ? 4H2O 1.81 2. Zarrouk 培养基 Zarrouk 培养基 试剂名称g / L NaCl 1.00 CaCl20.04 NaNO3 2.50 FeSO4 ? 7H2O0.01 0.08 / 0.08857 EDTA（Na）/ EDTA（Na）? 2H2O K2SO4 1.00 MgSO4 ? 7H2O0.20 NaHCO316.80 K2HPO4 / K2HPO4 ? 3H2O0.50 / 0.655 A5（微量元素）1ml B6（微量元素）1ml B6 试剂名称g / L NH4VO3229.6 x 10 ˉ4
K2Cr2 （SO4）4 ? 24H2O960.0 x 10 ˉ4 Ni2SO4 ? 7H2O478.5 x 10 ˉ4 Na2WO4 ? 2H2O179.4 x 10 ˉ4 Co（NO3）2? 6H2O439.8 x 10 ˉ4 Ti2（SO4）3400.0 x 10 ˉ4 注意：NH4VO3很难溶解，注意充分搅拌，B6液使用前要充分的摇动。A5和B6要单独配制，要低温或冷冻保存。新培养基的PH值为8.2—8.5 3．紫球藻培养基 紫球藻培养基 试剂名称g / L NaCl27.000 MgSO4 ? 7H2O 6.600 MnCl2 ? 6H2O 5.600 KNO3 1.450 CaCl2 ? 2H2O 1.500 K2HPO4 / K2HPO4 ? 3H2O0.0700 / 0.0917 NaHCO30.040 A5 1.0ml