鼠尾DNA提取

实验步骤:

取14日龄小鼠,无菌剪鼠尾1cm,加入0.5ml组织裂解液

剪碎鼠尾,加入蛋白酶K至终浓度为100ug,55℃水浴过夜

消化产物10000rpm离心10分钟

取上清,加等体积饱和酚(属于Tris饱和酚,应避光保存,另应抽取液面下液体),翻转若干次,10000rpm,离心5min

取上清加氯仿:异戊醇(24:1)溶液250ul,饱和酚250ul,翻转若干次,10000rpm,5min

取上清加等体积氯仿:异戊醇,10000rpm,5min

取上清加1/10体积NaAc(醋酸钠)(3mol/L,PH4.8)和2倍体积预冷无水乙醇,翻转若干次,—20℃1~2小时

12000rpm,15min,去上清,收集管底白色沉淀,70%乙醇洗涤,空气干燥

将沉淀溶于100ulTE或无菌ddH2O,—20℃保存。

组织裂解液

EDTA 5mmol/L

Tris-HCL 100mmol/L

NaCl 200mmol/L

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