MS培养基及配制注意事项

一、MS培养基母液的配制

注意：1．大量元素按照使用时高10倍的数值称取，分别将各种化合物称量后，除CaCl2·2H2O单独配制外，其余化合物混合在500ml烧杯中加适量蒸馏水溶解，用玻璃棒搅拌促溶，倒入1000ml容量瓶中用蒸馏水定容至刻度，置小口瓶中保存，贴上标签注明化合物名称（或编号），浓缩倍数，配制日期和配制者姓名，CaCl2·2H2O配制同上置于另一小口瓶中。

2．微量元素母液的配制

按要求浓缩100倍的数值称取，分别将各种化合物称量除铁盐（FeSO4·7H2O 和Na2-EDTA.2H2O）作为一组单独配制外，其余化合物可混合置于烧杯内加少量蒸馏水溶解后，定容在1000ml容量瓶中，置小口瓶中保存，贴上标签。3．铁盐配制将FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O分别溶于450ml蒸馏水中，加热，（很重要）不断搅拌，溶解后，两液混合，调PH至5.5加水定容至1000ml，置于小口瓶中，贴上标签。

4．有机物母液配制，按母液要求浓缩50倍，除蔗糖按3%单独临时称量外，其余分别称量后，溶解，定容在500ml容量瓶中，置于小口瓶中保存，贴上标签。5．母液最好在2~4℃的冰箱中贮存，特别是有机类物质，贮存时间不宜过长，无机盐母液最好在一个月内用完，如发现有霉菌和沉淀产生，就不能再使用。1．制备母液和营养培养基时，所用蒸馏水或无离子水必须符合标准要求，化学药品必须是高纯度的（分析纯）。

2．称量药物采用高灵敏度的天平，每种药品专用一药匙。

．生长调节剂母液配制：

为了操作方便，节约时间，生长调节剂也可如同配制母液一样，先配成原液，这样配制培养基时只要稍加计算，按需要量取即可。

不同药品在配制时若不溶于水，可用少量不同的溶剂先溶解，萘乙酸（NAA），吲哚乙酸（IAA）,赤霉素（GA3），2，4-D等生长素和玉米素（ZT）可先用少量95%酒精溶解，然后加水，如溶解不完全再加热。激动素（KT）和6-苄基嘌呤（BA）可溶于少量1mol/L的盐酸中，叶酸需用少量稀氨水溶解。

称取50mg生长调节物质，溶解后，在100ml的容量瓶中定容，配制的母液每毫升则含有生长调节物质0.5mg，配制后一般要求在低温（0~4℃）保存，配制培养基时如每升（1000ml）需添加的生长调节剂物质为0.5mg时，则取1ml母液即可。

二、培养基配制和灭菌

一．养培养基配制程序

(一).母液吸取量的计算

配制培养基的升数

公式1：母液吸取量= 母液体积（CC）×——————————

母液浓缩倍数

培养基要求的含量

公式2：母液吸取量= ———————————（各种生长调节剂）

母液每CC的含量

（二）各种母液按顺序编号排列

A.大量元素；

B.CaCl2.2H2O；

C.微量元素；

D.铁盐；

E.有机物；F．生长素萘乙酸（NAA）：配制0.5mg/ml的NAA称取50mg ， NAA用少量95% 酒精溶解后加蒸馏水定容至1000ml；G..细胞分裂素、激动素（KT）配制0.5mg/ml 的KT 称50mgKT用少量1N HCL溶解后,加蒸馏水定容至100ml。

(三)配制培养基（1000ml）

1.琼脂: 称取5~7g琼脂，加入300ml蒸馏水，加热溶解直至完全溶解为止.

2.蔗糖3%用质量较好的白糖代替，称取30g白糖，溶于溶有琼脂的300ml

蒸馏水中。

3.各种母液的吸取（培养基1L）

（1）用50ml量筒量取大量元素母液（A）和CaCl2·2H2O母液（B）各100ml

（2）分别用10ml移液管或吸管吸取微量元素（C），铁盐（D）母液各10ml

（3）用10ml移液管或吸管吸取有机物（H）10ml

（4）移取激素

将上述溶液全部混合于琼脂与蔗糖溶液中，混合均匀后，加热至80℃左右，用酸度计或精密PH试纸测定培养基的PH一般要求5.8~6.0，过酸过碱则用1N NaoH和1N HCL调整。

二．分装：用一个接有胶管的分装器趁热装培养基，1000ml培养基分装到25-30个三角瓶中，每个三角瓶约30ml左右（一般占试管、三角瓶容量1/4~1/3左右）注：培养基勿碰瓶壁。

三.包装：分装好的三角瓶用封口膜包扎好，标明培养基代号即可进行灭菌。

用具清理和洗涤：各种母液按原位置摆整齐，用过的量筒，移液管、烧杯、

铝锅等用水洗涤干净，然后按次序放回原处。

三、高压蒸汽灭菌锅的使用方法

具体操作步骤：

1. 高压锅放水至平把架；

2. 把包扎好的培养基装入高压锅;

3. 盖上热压锅盖,上紧螺帽(注意对角拧紧螺帽)关上气阀和安全阀.

4. 然后接通电源.

5. 压力计升至0.05MPa时，打开放气阀,排除冷空气(此步很重要)。

6. 排除冷空气后,关闭放气阀，待压力升到0.11MPa位置时，开始计算灭菌时间，具体方法：当压力锅指针升至0.12MPa时，关闭电源，待指针下降至0.11MPa 时接通电源，不断重复此操作过程，维持20分钟。

7. 灭菌时间达到20分钟后，除去电源，打开放气阀(注意要逐渐放气)待高压锅内的空气完全排除后，打开热压灭菌锅盖(注意对角扭松螺帽)稍待冷后再把培养基取出。

8.经过灭菌的营养培养基不宜放置太长，应尽早使用，但为了在使用前能检查培养基有无微生物污染，可将培养基置于25℃下保存4天，如果培养基需要贮存较长时间，可在4℃低温下保存。

灭菌高压锅有大型卧式、中型立式、小型手提式等多种型号和规格，无论哪种型号，操作的步骤都很相近。

进水→放进培养基→盖紧锅盖→关上放汽阀→检查安全阀→接上加热源→待压力升至0.05MPa时排锅内冷空气，关上放气阀→0.11MPa(121℃)下灭菌20~25分钟，保持稳定压力→除热源→逐渐打开放气阀→锅内空气排除完后→开放锅盖→稍冷后取出培养基。

四、无菌操作技术

（一）植物材料表面——消毒剂灭菌

从外界或室内选取的植物材料，都不同程度地带有各种微生物。这些污染源一旦带入培养基，便会造成培养基污染。因此，植物材料必须经严格的表面灭菌处理，再经无菌操作手续接到培养基上，这一过程叫做接种。

1.接种步骤：

第一步：清理材料→→流水冲洗→→加入吐温（或洗衣粉）清洗

→→自来水冲洗

第二步：对材料的表面浸润灭菌：70%酒精浸10-30秒→→无菌水

第三步：灭菌剂处理→→0.1-1%升汞5-8 min（或其他灭菌剂）

第四步：无菌水进行冲洗

注意事项：

１.灭菌剂一般要临时配制，现配现用．升汞可以短期储存．

２.对去除较容易的灭菌剂灭菌后无菌水冲洗３-４次，升汞一般５-８次，每次不少于３min

３.灭菌时要轻轻的搅拌，消除气泡，使消毒更彻底．

４.灭菌时间是从倒入消毒液开始，至倒入无菌水时为止。

５.灭菌液要充分浸没材料

2.无菌操作可按以下步骤进行：

（1）在接种3天前用甲醛熏蒸接种室，并于接种前3小时打开其内紫外线灯进行杀菌；

（2）在接种前20分钟，打开超净工作台的风机以及台上的紫外线灯；

（3）接种员先洗净双手，在缓冲间换好专用实验服，并换穿拖鞋等；

（4）上工作台后，用酒精棉球搽拭双手，特别是指甲处。然后搽拭工作台面；（5）先用酒精棉球搽拭接种工具，再将镊子和剪刀从头至尾过火一遍，然后反复过火尖端处，对培养皿要过火烤干；

（6）接种时，接种员双手不能离开工作台，不能说话、走动和咳嗽等；

材料吸干后，一手拿镊子、一手拿剪刀或解剖刀，对材料进行适当的切割。（如叶片切成0.5cm2的小块；茎切成含有一个节的小段。微茎尖要剥成只含1-2片叶原基）在接种过程中要经常灼烧接种器械，防止交叉污染。

（7）接种完毕后要清理干净工作台，可用紫外线灯灭菌30分钟，若连续接种，每5天要大强度灭菌一次。

常用植物激素

四、常用药品的配置方法

1.1mol/L HCl的配制：根据盐酸的密度37%盐酸溶液的密度为1.19克/毫升，假设要配制1000ml 1mol/L HCl，则需要盐酸的物质的量为1mol，所以需要量取37%的盐酸为1*36.5/37%/1.19=82ml

2.1mol/L的NaOH的配制：称40gNaOH，然后融于1000ml的蒸馏水中。（定容到100ml）

3.95%的酒精配制成75%的酒精：用量筒量取750ml的95%酒精加入200ml的蒸馏水即可得到75%的酒精。

如果用无水酒精配制75%的酒精，则量取750ml的无水酒精，再加水250ml。

4.0.1%的升汞配制：先称取1克升汞粉末，然后用蒸馏水溶解最后定容到1000ml。

5. 1mg/ml的2.4-D的配制：称取0.1g2.4-D，用少量1mol/LnaOH或酒精助溶，然后定容到100ml。

6.1 mg/ml的6-BA的配制：称取0.1g6-BA，用少量1mol/L HCl或1mol/LNaOH 助溶，然后定容到100ml。

7.0.5mg/ml的NAA的配制：称取0.05gNAA，用少量95%酒精助溶，然后定容到100ml。

MS培养基的作用

MS培养基的作用 植物组织培养中常用的一种培养基是ms培养基。 ms培养基的配制步骤 这样每次使用时，取其总量的1/20(50ml)或1/200(5ml)，加水稀释，制成培养液。现将制备培养基母液所需的各类物质的量列出，供配制时使用。 大量元素(母液Ⅰ)mg/l nh4no333000 kno338000 cacl2·2h2o8800mgso4·7h2o7400kh2po43400微量元素(母液Ⅱ)ki166h3bo31240mnso4·4h2o4460znso4·7h2o1720na2moo4·2h2 o50cuso4·5h2o5cocl2·6h2o5铁盐(母液 Ⅲ)feso4·7h2o5560na2-edta·2h2o7460有机成分(母液Ⅳ)Ⅳa肌醇20000Ⅳb烟酸100盐酸吡哆醇(维生素b6)100盐酸硫胺素(维生素

b1)20甘氨酸400以上各种营养成分的用量，除了母液Ⅰ为20倍浓缩液外，其余的均为200倍浓缩液。 上述几种母液都要单独配成1l的贮备液。其中， 母液Ⅰ、母液Ⅱ及母液Ⅳ的配制方法是：每种母液中的几种成分称量完毕后，分别用少量的蒸馏水彻底溶解，然后再将它们混溶，最后定容到1l。 母液Ⅲ的配制方法是：将称好的feso4·7h2o和na2-edta·2h2o 分别放到450ml蒸馏水中，边加热边不断搅拌使它们溶解，然后将两种溶液混 合，并将ph调至5?5，最后定容到1l，保存在棕色玻璃瓶中。各种母液配完后，分别用玻璃瓶贮存，并且贴上标签，注明母液号、配制倍数、日期等，保存在冰箱的冷藏室中。 ms培养基中还需要加入：2，4-二氯苯氧乙酸(2，4-d)、萘乙酸(naa)、6-苄基嘌呤(6-ba)等植物生长调节物质，并且分别配成母液(0?1mg/ml)。其配制方法是：分别称取这3种物质各10mg，将2，4-d

植物组织培养MS培养基配方

植物组织培养MS培养基配方 （一）母液配制与保存 配制培养基时，如果每次配制都要按着杨成分表依次称量，既费时，又增加了多次称量误差。为了提高配制培养基的工作效率，一般将常用的基本培养基配制成10～200倍，甚至1000倍的浓缩贮备液，即母液。母液贮存于冰箱中，使用时，将它们按一定的比例进行稀释混合，可多次使用，并在配制较多数量的培养基时，降低工作强度，也提高试验的精度。 基本培养基的母液有四种：大量元素（浓缩20倍），微量元素（浓缩100倍），铁盐（浓缩200倍），除蔗糖之外的有机物质（浓缩100倍） 1大量元素 配制大量元素母液时要分别称量，分别溶解，在定容时按表1中的序号依次加入容量瓶中，以防出现沉淀。倒入磨口试剂瓶中，贴好标签和做好记录后，可常温保存或放入冰箱内保存。 表1大量元素母液（配1L20倍的母液） 序号成分配方浓度/（mg.L-1）称取量/mg 配1mL培养基吸取 量/mL 1 硝酸铵NH4NO3 1650 33000 50 2 硝酸钾KNO 3 1900 38000 3 磷酸二氢钾KH2PO 4 170 3400 4 七水合硫酸镁MgSO4.7H2O 370 7400 5 氯化钙无水CaCl2 440 6644 2微量元素母液 在配制微量元素母液时，也应分别称量和分别溶解，定溶时不分先后次序，可随意加入溶量瓶中定容（表2），一般不会出现沉淀现象。倒入磨口试剂瓶中，贴好标签和做好记录后，可常温保存或放入冰箱内保有存。 表2微量元素母液(配制1L100倍母液) 成分配方浓度/(mg.L-1) 称取量/mg 配制1L培养基吸取 量/mL 碘化钾KI 0．83 83 10 硫酸锰MnSO4.H2O 22．3 2230 硼酸H3BO3 6．2 620 硫酸锌ZnSO4.7H2O 8．6 860 钼酸钠Na2MoO4.2H2O 0．25 25 硫酸铜CuSO4.5H2O 0．025 2．5 氯化钴CoCl2.6H2O 0．025 2．5 3铁盐母液 由于铁盐无机化合物不易被植物吸收利用，只有基螯合物才能被植物吸收利用，因此需要单独配成螯合物母液表3）。 配制方法：称取5.56g硫酸亚铁和7.46g乙二胺乙酸二钠，分别用450ml的去离子水溶解，分别适当加热不停搅拌，分别溶解后将硫酸亚铁溶液缓缓加入到乙二胺四乙酸二钠溶液中，将两种溶液混合在一起，最后用去离子水定溶于1000mL，倒入棕色贮液瓶中，贴好标签和做好记录后放入冰箱内保存。

实验用培养基适用性检查标准操作规程

" 起草人Prepared by: 起草日期 Date: ` _____________________ QC 审核人Reviewed by:>审核日期 Date:_____________________ QC？ 审核人Reviewed by:审核日期Date: ： QA 批准人Approved by: 批准日期 ^ Date: 质量部QD

目的 Purpose 为保障微生物检验的准确性及相关工作特制定本规定。 范围 Scope 本程序适用于微生物限度测定培养基的适用性检查及相关工作。 职责 Responsibility ！ 分析员：严格按照本操作规程执行。及时完成各类相关记录。在主管的指导下进行任何可能的OOS及偏差调查。 主管：监督本操作规程的执行。对检验员进行必要的培训。指导任何可能的OOS和偏差调查。 内容procedure 1检验员应根据培养基配制程序或培养基各自的说明书配制培养基。 2试验用菌种及培养基 2.1菌种: 2.1.1培养基灵敏度测试所用的菌株传代次数不得超过5代，从国家药检所或菌种保藏中心购买。 2.1.2枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)[ATCC 6633] 2.1.3~ 2.1.4大肠埃希菌(Escherichia coli) [ATCC 8739] 2.1.5金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus) [ATCC 6538] 2.1.6白色念珠菌(Candida albicans) [ATCC 10231] 2.1.7黑曲霉(Aspergillus niger)[ATCC 16404] 2.1.8伤寒沙门菌(Salmonella) [ATCC 14028] 2.1.9铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa) [ATCC 9027] 2.2培养基 2.2.1按照培养基说明书进行配制灭菌。 2.2.2| 2.2.3大豆酪蛋白消化肉汤 Soybean-Casein Digest Broth 2.2.4大豆酪蛋白消化琼脂 Soybean-Casein Digest Agar 2.2.5沙氏葡萄糖琼脂 Sabouraud Dextrose Agar

MS培养基配方

MS 培养基配方 1、配置MS母液 母液配置：加热都是用温水浴加热，全部都要避光保存，用装乙醇的棕色瓶来保存在4度即可 表2.1大量元素母液 药品20x g/L 500ml（20 x）KNO338g 19g NH4NO333 g 16.5g MgSO4?7H2O7.4 g 3.7g CaCl2 6.644g 3.322g KH2PO4 3.4g 1.7g 溶于200ml蒸馏水,定容至500ml 需要加热才能完全溶解 CaCL2.2H2O 4.4g/L 表2.2微量元素母液 药品100x g/L 500ml（100x g/L） KI H3BO3 MnSO4.4H2O ZnSO4.7H2O Na2MoO4.2H2O GuSO4.5H2O CoCl2.6H2O 0.083g 0.62 22.3 g 0.86 g 0.025 g 0.0025 g 0.0025 g 0.0415 g 0.31 g 1.115 g 0.43 g 0.0125 g 0.00125 g 0.00125 g 溶于100ml蒸馏水,定容至500ml 表2.3有机母液 药品100x 1L500ml(100x)肌醇10g5g

烟酸0.05g0.025g VB60.05g0.025g VB10.1g0.05g 甘氨酸0.2g0.1g 表2.4铁盐母液 药品100x g/L500ml FeSO4?7H2O 2.78g 1.39g Na2-EDTA. 2H2O 3.73g 1.865g 铁盐配制将FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O分别溶于100ml蒸馏水中，加热，（很重要）不断搅拌，溶解后，两液混合，加水定容至500ml，置于小口瓶中，贴上标签 2、固体MS培养基材料 ?找到4种母液：大量元素，微量元素，有机微量元素，铁盐母液 ?蔗糖，琼脂锥形瓶 MS培养基配方：母液都稀释至1x MS培养基配方（1L） 母液体积或重量(1L) 200ml 大量元素20x50mL 10ml 铁盐100x 微量100x 10mL 2ml 10mL 2ml 有机100x10mL 2ml 蔗糖15g（15g/L）3g

生产用培养基制备岗位标准操作规程

黑龙江正康生物技术股份有限公司GMP管理文件 一、目的：为保证培养基能够满足生产要求，特定培养基制备岗位操作规程。 二、适用范围：适用于培养基制备岗位的操作。 三、责任者：分发部门负责人，质量监督员，工艺员，操作人员。 四、正文： 1 操作前准备： 1.1 接收指令，根据指令情况填写生产状态标识牌，标明当日生产产品的品名、规格、批号、批量、岗位名称、生产日期。 1.2 检查上批次清场情况，有上一批次生产“清场合格证”，并确认无上次生产遗留物。 1.3 检查生产现场卫生状况，有厂房“已清洁”状态标识，并在效期内。 1.4 检查设备、设施及状态情况，有设备“已清洁”状态标识，并在效期内。 1.5 检查容器具卫生状况，有容器具“已清洁”状态标识，并在效期内。 1.6 检查生产用衡器是否处于水平状态，是否归零，是否有检定合格证，并在有效期内。 1.7 检查确认批生产记录及相应的配套记录已准备齐全。 2 生产操作： 2.1 领料： 2.1.1 根据生产指令开出限额领料单，领取所需用的原辅材料，并有质量管理部的检验合格报告

单。检查报告单上的物料编码、品名、数量、规格及外观质量，合格后才能使用；如不符合要求应拒绝收料； 2.1.2 按照《物料进入生产区标准操作规程》清除原辅料外包装物表面的异物灰尘，并清洁消毒，再复核物料编码、品名，规格、检查外观、数量，避免差错，放入物料暂存间中待用。 2.2 称量： 2.2.1 称量前应核对原辅料物料编码、品名、批号、生产厂家、规格等，应与检验报告单相符。 2.2.2 原辅料的使用量应根据原料的实际含量、含水量等因素进行换算，按检验用培养基制配法或各产品的工艺规程所规定的量进行100%的投料。 2.2.3 称量时所用的取料铲必须专用，不能混用，数量应有复核人，操作人和复核人均应在称量原始记录上签名。 2.2.4 液体药品临用前单独称量，称量完毕要立即清理称量台和台秤。 2.2.5 剩余的原辅料应密封贮存，并在容器外标明物料编码、品名、批号、日期、剩余量及使用人。 2.3 配制： 2.3.1 注意事项： 2.3.1.1 根据规程，核对所用原辅料的物料编码、品名、批号、生产厂、规格等； 2.3.1.2 每一个配制器皿必须标明所配培养基的品名、规格、批号和配制量； 2.3.1.3 配制时，每一种原辅料的加入和调制必须由核对人确认并作好记录； 2.3.1.4 配制过程中的温度调节和配制的最后定量均要有复核人确认，并有操作人和复核人签字。 2.3.2 配制过程 2.3.2.1 使用市售的成品培养基的配制过程按使用说明书配制即可。 2.3.2.2 使用各种原材料配制的配制过程见附注。

培养基配制及适用性检查标准操作规程

培养基配制及适用性检查标准操作规程 Document number：NOCG-YUNOO-BUYTT-UU986-1986UT

建立培 养基配 制及适 用性检 查的标 准操作 规程， 规范实验人员的操作流程。 范围： 适用于微生物检验人员对培养基的规范管理。 依据： 《药品生产质量管理规范（2010年修订）》、《中华人民共和国药典》2015年版第四部 职责： 1.微生物检验员：负责实验室所需求的培养基管理工作，使日常检验可以顺利进行。 2.微生物检验主管：负责对日常配制培养基的规范操作进行监督。 内容 1 培养基的申购 根据检验项目、工作量和工作进度的需求，提前一个月进行所需的培养基申购。申购时需指定培养基供应商，必要时进行供应商审计。 2 培养基的验收 培养基到货后，微生物室检验员应进行验收。验收内容包括核对品名、数量、规格、生产厂商， 应与申购单一致；检查培养基包装有无破损、包装是否完整、产品是否在有效期内。

验收合格后，登记于《培养基领用台账》（附记录文件编号：SMP-10-QC-009-02（00））。 3 培养基的贮藏 未开封的脱水培养基贮存于阴凉室，使培养基处于低温、干燥、和避光条件下。已开封的脱水培养基应盖紧，贮存于阴凉库。 灭菌好的培养基应进行预培养72h检查无菌后，置4～8℃冷藏保存待用。灭菌后培养基储存期为7天。 4 培养基的配制 培养基的配制和使用应填写《培养基配制及使用记录》（附记录文件编号：SMP-10-QC-009-02（00））。 培养基配制批号原则：原材料批号-配制日期：比如2011年1月1日配制的培养基，培养基干粉批号000000，配制批号为:000000-110101。配制好的培养基贴《培养基标签》（附记录文件编号：R-SMP-10-QC-009-03）。（注：同一天同一培养基配置多次的，在原批号后加“-”加“数字”表示，如000000-110101-01） 培养基配制方法 使用商品化脱水合成培养基时，应严格按照厂商提供的使用说明配制，如重量/体积、pH、灭菌条件和操作步骤等。实验室使用各种基础成分制备培养基时，应按照配方准确配制，并记录相关信息如：培养基名称和类型及试剂级别，每个成分物质含量、制造商、批号，pH值，培养基体积/分装体积，灭菌条件（灭菌方式、温度及时间），配制日期、人员等，以便溯源。 水、容器具要求：培养基配制均采用纯化水，特殊说明时采用去离子水和蒸馏水。培养基配制所用容器和配套器具应洁净。对热敏感的培养基如糖发酵培养基其分装容器应先进行预灭菌，以保证培养基的无菌性。 称量与分装：快速称量所需量的脱水合成培养基（必要时佩戴口罩或在通风柜中操作，以防吸入含有有毒物质的培养基粉末）。以免吸潮。先加入适量的水，充分混合。注意避免培养基结块，然后加水至所需的量。根据说明书要求选择是否加热。分装体积不超过容器体积的2/3。配制斜面等含琼脂的培养基也需加热煮沸至完全溶解后分装。 pH 值的测定和调整

MS培养基配方及培养基简介

MS培养基成分(1962)（单位：mg/L) 无机盐含量有机物含量 PH值NH4NO4 1650 肌醇 100 5.8 KNO3 1900 烟酸 0.5 CaCl2·2H2O 440 盐酸吡哆醇 0.5 MgSO4·7H2O 370 甘氨酸 2 KH2PO4 170 盐酸硫胺素 0.1 KI 0.83 蔗糖 30g/L H3BO3 6.2 琼脂 4~8g/L MnSO4·4H2O 22.3 ZnSO4·7H2O 8.6 Na2MoO4·2H2O 0.25 CuSO4·5H2O 0.025 CoCl2·6H2O 0.025 FeSO4·7H2O 27.8 Na2·EDTA·2H2O 37.3

一个完善的培养基配方中，应该包括一下几个部分，分别为：无机营养成分、有机营养成分、植物激素，琼脂，其他成分。 大量元素：氮，磷，钾，硫，钙，镁等。（1）无机营养成分： 微量元素：硼，锰，锌，钼，铜，铁，钴等。（国际植物生理学会建议，植物所需要的元素浓度大于0.5mmol/L的为大量元素，而小于0.5mmol/L的则为微量元素） （a）维生素类：如：硫胺素（维生素B1）, 吡哆醇（维生素B6),烟酸（维生素B3） 抗坏血酸（维生素C) (b) 氨基酸类：如甘氨酸，丙氨酸，谷氨酸等 （2)有机营养成分：(c) 复杂的天然混合物：如：椰乳（CM）， 水解络蛋白（CH）,麦芽浸出物（ME), 番茄汁等 （d)作为碳源的糖：常用的碳源为蔗糖， 葡萄糖和果糖也是较好的碳源。 （e) 肌醇：肌醇在糖类的相互转化中起作 用，是细胞壁的构建材料。肌醇参与碳水化合物，磷脂代谢及离子平衡等生理活动，具有帮助活性物质发挥作用的效果，能促进愈伤组织生长，对胚状体和芽的形成也有良好的促进作用。肌醇一般用量为：50~100mg/L，在培养基中加入少量肌醇就能促进维生素B1效应的发挥。但肌醇常可由磷酸葡萄糖转变二次，并进 一步转化为果胶物质，因此，在快速繁殖中有时也可省去不用。

无菌检查用培养基的适用性检查标准操作规程

无菌检查用培养基的适用性检查标准操作规程 目的：建立无菌检查用培养基适用性检查标准操作规程。 范围：适用于无菌检查使用培养基的适用性检查。 依据：中国药典》2015年版 《药品生产质量管理规范》2010年修订 《中国药品检验标准操作规程》2010年版 责任：QC化验员对实施本规程负责。 内容: 1、概要：无菌检查用的硫乙醇酸盐流体培养基和胰酪大豆胨液体培养基等应符合培养基的无菌检查及灵敏度检查要求。本检查可在供试品的检查前或与供试品的检查同时进行。 2、材料及设备 2.1 生化培养箱 2.2 生物安全柜 2.3 中国浊度标准管（由中国药品生物制品检定所提供） 2.4 灭菌试管、灭菌注射器 2.5 0.9%无菌氯化钠溶液 2.6 0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液：取聚山梨酯80 0.05ml，加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%氯化钠至100ml，混匀，灭菌即可。3、无菌检查培养基的适用性检查 3.1无菌性检查 取新鲜配制灭菌的培养基各5瓶，硫乙醇酸盐流体培养基置30～35℃，胰酪大豆胨液体培养基置20～25℃，培养14天，应无菌生长。 3.2灵敏度检查 3.2.1菌种 培养基灵敏度检查所用的菌株传代次数不得超过5代（从菌种保存中心获得的干燥菌种为第0代），

并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。 金黄色葡萄球菌[Staphylococcus aureus CMCC(B) 26003] 铜绿假单胞菌[Pseudomonas aeruginosa CMCC(B) 10104] 枯草芽孢杆菌[Bacillus subtilis CMCC(B) 63501] 生孢梭菌[Clostridium sporogenes CMCC(B) 64941] 白色念珠菌[Candida albicans CMCC(F) 98001] 黑曲霉[Aspergillus niger CMCC(F) 98003] 3.2.2菌液制备 3.2.2.1 金黄色葡萄球菌菌悬液制备 3.2.2.1.1 取金黄色葡萄球菌的新鲜培养物至胰酪大豆胨液体或胰酪大豆胨琼脂培养基上，30～35℃培养18～24小时，取新鲜传代菌种一支待用。取一支灭菌中试管，加入3ml 0.9%无菌氯化钠溶液，把新鲜传代菌种培养物用接种环轻轻刮取，在加入pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液的试管壁上研磨，使之成为均匀悬液。 3.2.2.1.2 取菌悬液1ml于比浊管中，用0.9%无菌氯化钠溶液逐步稀释至与标准管的浊度一致。记录下所加入的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液的量，余下的2ml菌液盖上试管塞以备用。 3.2.2.1.3 打开试管塞，取1ml菌液于中试管中，加入比浊时所需的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液的量一致的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液，此时试管中的细菌浓度与标准比浊管相一致。根据细菌浊度标准菌数表的菌数，将菌悬液用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9％无菌氯化钠溶液系列稀释至不大于100cfu/ml。 3.2.2.1.4 铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的菌悬液制备方法同金黄色葡萄球菌。 3.2.2.2 生孢梭菌菌悬液的制备 3.2.2.2.1取生孢梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基上，30～35℃培养18～24小时，取一支灭菌中试管，用灭菌注射器吸取硫乙醇酸盐流体培养基中底部三分之二处的新鲜菌液1ml，加入

培养基配制标准操作规程

1.目的： 建立本规程旨在为培养基配制提供操作标准。 2.范围： 公司培养基配制 3.责任： 质量管理科、菌检员对实施本SOP负责。 4.检验依据： 《中国药典》2015年版四部。 5.内容： 5.1 营养琼脂 ◆称本品34g，置三角烧瓶中，加1升纯化水，加热溶解、分装，用牛皮纸包扎好，高压灭菌121℃30分钟，室温下冷却至45℃（PH应为7.2±0.2范围内），放于冰箱内保存，备用。 5.2 玫瑰红钠琼脂培养基 ◆用于霉菌总数测定。 称本品30g，置三角烧瓶中，加1升纯化水，加热溶解、分装，用牛皮纸包扎好，高压灭菌121℃30分钟，室温下冷却至45℃（PH应为6.4±0.2范围内），放于冰箱内保存，备用。

5.3 普通琼脂斜面培养基 ◆称本品33g，置三角烧瓶中，加1升纯化水，加热溶解、分装，用牛皮纸包扎好，高压灭菌121℃30分钟，室温下冷却至45℃（PH应为8.0～8.2），放入冰箱内保存、备用。 5.4 胆盐乳糖培养基 ◆称本品36g，置三角烧瓶中，加1升纯化水，加热溶解、分装，用牛皮纸包扎好后高压灭菌121℃30分钟，室温下冷却至45℃（PH应为7.2～7.4），放入冰箱内保存、备用。 5.5 营养肉汤培养基 ◆适用于一般细菌的培养。 称取本品19g，加纯化水1000ml，煮沸到完全溶解后分装，高压灭菌121℃ 30分钟备用。 5.6 伊红美兰琼脂培养基 ◆用于大肠杆菌及肠道致病菌的分离鉴别。 称取本品36g，加纯化水1000ml，浸泡10分钟，煮沸至完全溶解，高压灭菌115℃30分钟，冷至55℃左右，振摇培养基，倾注灭菌平皿备用。 5.7 室温菌种保存培养基 ◆用于常用菌种的保存。 称取本品28g，加纯化水1000ml，浸泡10分钟，加热煮沸，高压灭菌121℃30分钟,备用。 6.文件变更历史：

MS培养基及配制注意事项

一、MS培养基母液的配制 注意：1．大量元素按照使用时高10倍的数值称取，分别将各种化合物称量后，除CaCl2·2H2O单独配制外，其余化合物混合在500ml烧杯中加适量蒸馏水溶解，用玻璃棒搅拌促溶，倒入1000ml容量瓶中用蒸馏水定容至刻度，置小口瓶中保存，贴上标签注明化合物名称（或编号），浓缩倍数，配制日期和配制者姓名，CaCl2·2H2O配制同上置于另一小口瓶中。 2．微量元素母液的配制 按要求浓缩100倍的数值称取，分别将各种化合物称量除铁盐（FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O）作为一组单独配制外，其余化合物可混合置于烧杯内加少量蒸馏水溶解后，

定容在1000ml容量瓶中，置小口瓶中保存，贴上标签。 3．铁盐配制将FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O分别溶于450ml蒸馏水中，加热，（很重要）不断搅拌，溶解后，两液混合，调PH至5.5加水定容至1000ml，置于小口瓶中，贴上标签。4．有机物母液配制，按母液要求浓缩50倍，除蔗糖按3%单独临时称量外，其余分别称量后，溶解，定容在500ml容量瓶中，置于小口瓶中保存，贴上标签。 5．母液最好在2~4℃的冰箱中贮存，特别是有机类物质，贮存时间不宜过长，无机盐母液最好在一个月内用完，如发现有霉菌和沉淀产生，就不能再使用。 1．制备母液和营养培养基时，所用蒸馏水或无离子水必须符合标准要求，化学药品必须是高纯度的（分析纯）。 2．称量药物采用高灵敏度的天平，每种药品专用一药匙。 ．生长调节剂母液配制： 为了操作方便，节约时间，生长调节剂也可如同配制母液一样，先配成原液，这样配制培养基时只要稍加计算，按需要量取即可。 不同药品在配制时若不溶于水，可用少量不同的溶剂先溶解，萘乙酸（NAA），吲哚乙酸（IAA）,赤霉素（GA3），2，4-D等生长素和玉米素（ZT）可先用少量95%酒精溶解，然后加水，如溶解不完全再加热。激动素（KT）和6-苄基嘌呤（BA）可溶于少量1mol/L的盐酸中，叶酸需用少量稀氨水溶解。 称取50mg生长调节物质，溶解后，在100ml的容量瓶中定容，配制的母液每毫升则含有生长调节物质0.5mg，配制后一般要求在低温（0~4℃）保存，配制培养基时如每升（1000ml）需添加的生长调节剂物质为0.5mg时，则取1ml母液即可。 二、培养基配制和灭菌 一．养培养基配制程序 (一).母液吸取量的计算 配制培养基的升数 公式1：母液吸取量= 母液体积（CC）×—————————— 母液浓缩倍数 培养基要求的含量 公式2：母液吸取量= ———————————（各种生长调节剂） 母液每CC的含量 （二）各种母液按顺序编号排列 A.大量元素； B.CaCl2.2H2O； C.微量元素； D.铁盐； E.有机物；F．生长素萘乙酸（NAA）：配制0.5mg/ml的NAA称取50mg ， NAA用少量95% 酒精溶解后加蒸馏水定容至1000ml；G..细胞分裂素、激动素（KT）配制0.5mg/ml的KT 称50mgKT 用少量1N HCL溶解后,加蒸馏水定容至100ml。 (三)配制培养基（1000ml） 1.琼脂: 称取5~7g琼脂，加入300ml蒸馏水，加热溶解直至完全溶解为止. 2.蔗糖3%用质量较好的白糖代替，称取30g白糖，溶于溶有琼脂的300ml蒸馏水中。 3.各种母液的吸取（培养基1L） （1）用50ml量筒量取大量元素母液（A）和CaCl2·2H2O母液（B）各100ml （2）分别用10ml移液管或吸管吸取微量元素（C），铁盐（D）母液各10ml

血琼脂培养基配制标准操作规程

血琼脂培养基配制标准操作规程 1．目的 规范血琼脂培养基配制标准操作规程，保证培养基质量。 2．原理 羊血或兔血等是细菌生长繁殖的良好营养物质。在45～50℃的基础培养基中加入血液可以完好保存血液中某些不耐热的生长因子，同时血细胞不被破坏。若将NaCl浓度提高到0.85%，可使血平皿在35℃培养18～24小时后色泽仍然新鲜。 3．用途 供一般病原菌的分离培养、溶血性鉴别及保存菌种用。 4．配方 特殊蛋白胨23g、淀粉1g，氯化钠5g、琼脂10g、无菌脱纤维羊血（或兔血）5%～10%，pH7.1～7.5。 5.操作步骤

将上述成分混合，溶于1000ml蒸馏水中，加热溶化，校正pH，121℃高压灭菌15分钟。冷却至50℃加入无菌血液，充分摇匀后倾注平板，待凝固后冷藏备用。血琼脂层厚4mm。 6.储存条件 2～8℃冰箱。 7.有效期 实验室自行规定，确保培养基质量。 8. 质量控制 8.1 质控频度每次新配制时做质控 8.2 质控方法及结果见表5-18. 表5-18 配制血琼脂培养基质量控制方法及结果 试验方法结果 无菌试验<100块抽检5%，>100块随机取10 块，35℃培养，观察有无细菌生长 化脓性链球菌ATCC19615，35℃，培 无细菌生长

生长试验 平行试 验 养18～24小时 肺炎链球菌ATCC6305，35℃，培养 18～24小时 金黄色葡萄球菌ATCC25923， 35℃，培养18～24小时 大肠埃希菌ATCC25922，35℃，培养 18～24小时 做质控时，取新旧批号的培养基同时 做 生长良好，β溶血 生长良好，a溶血 生长良好，β溶血 生长良好， 9.注意事项 倾注时温度不易过高，否则血细胞易被破坏而溶血；若 温度过低，琼脂易凝固。 参考文献 [1] 周庭银编著.临床微生物学诊断与图解.第二版.上海： 上海科学技术出版社，2007

培养基配制作业指导书

版本:A/2 日期:2013-07-25 页数: Page 1 of 6 标题： 培养基配制作业指导书 文件修改记录 分发号 : ______(仅适用于控制文件) (仅盖有红色印章的文件才有效) 版本 修订 次数 修订日期 修 订 内 容 0 0 2011-02-14 A 1 2012-05-25 修订 A 2 2013-07-25 增加6.9营养琼脂

版本:A/2 日期:2013-07-25页数: Page 2 of 6标题：培养基配制作业指导书 1.0目的 规定了培养基配制的基本要求及方法。 2.0范围 适用于大肠菌群、细菌总数、霉菌及酵母菌检测时用培养基配制。 3.0术语 无 4.0职责 微生物检验员负责对培养基的正确配制。 5.0工作流程图 无 6.0内容及要求 6.1乳糖胆盐发酵培养基 6.1.1 用途：用于测定大肠菌群的乳糖发酵实验； 6.1.2 成分（g/l）：蛋白胨（20g）、乳糖（10g）、猪胆盐（5g）、溴甲酚紫（0.01g）； 6.1.3 配制方法：称取乳糖胆盐发酵培养基35g，加入1000ml蒸馏水中，加热煮沸溶解， 分装于有倒立发酵管的试管中，115℃高压灭菌15min，备用； 6.1.4 注意事项：灭菌后应在无菌环境下操作，出现结块严禁继续使用。 6.1.5储存条件：常温、密封、干燥处。 6.2 平板计数琼脂 6.2.1 用途：用于细菌总数测定；

版本:A/2 日期:2013-07-25页数: Page 3 of 6标题：培养基配制作业指导书 6.2.2 成分（g/l）：胰蛋白胨（5g）、酵母浸粉（2.5g）、葡萄糖（1g）、琼脂（15g）； 6.2.3 配制方法:称取本品23.5g，加入1000ml蒸馏水中，加热煮沸溶解，分装，121℃高 压灭菌15min后备用； 6.2.4 注意事项：灭菌后应在无菌环境下操作，出现结块严禁继续使用。 6.2.5储存条件：常温、密封、干燥处。 6.3 月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤 6.3.1 用途：用于大肠菌群、大肠杆菌、粪大肠菌群的初发酵试验及大肠杆菌（MPN）计 数； 6.3.2 成分（g/l）：胰蛋白胨（20g）、月桂基硫酸钠(0.1g)、乳糖（5g）、硫酸氢二钾 （2.75g）、氯化钠（5g）、磷酸二氢钾（2.75g）； 6.3.3 配制方法:称取本品35.6g，加入1000ml蒸馏水中，加热煮沸溶解，分装到有玻璃小 导管的试管中，每管10ml，121℃高压灭菌15min后备用； 6.3.4 注意事项：灭菌后应在无菌环境下操作，出现结块严禁继续使用。 6.3.5储存条件：常温、密封、干燥处。 6.4煌绿乳糖胆盐肉汤 6.4.1用途：用于大肠菌群复发酵试验，（MPN）计数及证实试验。 6.4.2成分：蛋白胨10g,牛胆粉20g，乳糖10g，煌绿0.0133g. 6.4.3配制方法：称取本品40克，加入1000ML蒸馏水中，加热煮沸溶解，分装到有玻璃小 导管的试管中，每管10ml，121℃高压灭菌15min后备用；

MS培养基的配制

MS培养基的配制 1、配制几种母液 （1）配制MS大量元素母液 一般将大量元素分别配制成100倍的母液，使用时再分别稀释100倍。 分别称取 名称重量名称重量 NH4NO3165g KH2PO4 17g KNO3190g CaCl2·2H2O 44g MgSO4·7H2O 37g 各自配成1L的母液。各自倒入1L试剂瓶中，存放于冰箱中。 （2）配制MS微量元素母液 一般将微量元素配制成100倍母液。 依次称取（注：溶好一个后，再加下一个） 名称重量名称重量 KI 0.083g Na2MoO4·2H2O 0.025g H3BO3 0.62g CuSO4·5H2O 0.0025g MnSO4·H2O 1.69g CoCl2·6H2O 0.0025g ZnSO4·7H2O 0.86g 配成1L母液，倒入1L试剂瓶中，存放于冰箱中。 注：CuSO4·5H2O和CoCl2·6H2O 由于称取量很小，如果天平精确度没有达到万分之一，可先配成调整液。 分别称取CuSO4·5H2O 0.05g，CoCl2·6H2O 0.05g 各自配成100ml的调整液，然后取5ml就还有0.0025g的量。 （3）配制MS有机母液 一般配制成100倍MS有机母液。 依次称取（注：溶好一个后，再加下一个） 名称重量名称重量 肌醇10g 盐酸硫胺素（VB1）0.01g 烟酸0.05g 甘氨酸0.2g 盐酸吡哆醇（VB6） 0.05g 配成1L母液，倒入1L试剂瓶中，存放于冰箱中。 （4）配制MS铁盐母液 一般配制成100倍MS铁盐母液。 依次称取EDTA二钠 3.73g，FeSO4·7H2O 2.78g（注：溶好一个后，再加下一个） 配成1L母液，倒入1L试剂瓶中，存放于冰箱中。 所以MS母液有5种大量元素母液，加上MS微量元素母液、MS有机母液和MS铁盐母液，共8种母液。

MS培养基配方

MS培养基母液的配制： 20×MS大量元素(1 L)：38 g KNO3，33 g NH4NO3，8.8 g CaCl2·2H2O，7.4 g MgSO4·7H2O，3.4 g KH2PO4。 200×MS微量元素(1 L)：0.166 g KI，1.24 g H3BO3，4.46 g MnSO4·4H2O，1.72 g ZnSO4·7H2O，0.05 g Na2MoO4·2H2O，0.005 g CuSO4·5H2O，0.005 g CoCl2·6H2O。 200×MS维生素和氨基酸(1 L)：20 g肌醇，0.1 g烟酸，0.1 g盐酸吡哆醇(VB6)，0.02 g盐酸硫胺素(thiamine hydrochloride, VB1)，0.4 g甘氨酸。 200×MS铁盐(1 L)：5.56 g FeSO4· 7H2O，7.46 g Na2EDTA· 2H2O，先溶于500 mL ddH2O，加热，调pH至5.5，定容至1 L。 注意： 配制大量元素母液时，为避免产生沉淀，要用纯度高的重蒸馏水溶解，药品采用分析纯。化学药品先以少量重蒸馏水充分溶解后然后混合，混合时需注意边搅拌边混合。CaCl2·2H2O要在最后单独加入，在溶解CaCl2·2H2O 时，蒸馏水需加热沸腾，除去水中的CO2，以防沉淀。 配制铁盐母液时，FeSO4和Na2-EDTA 应分别加热溶解后混合，并置于磁力搅拌器上不断搅拌至溶液呈金黄色(约加热20-30 min)，调pH值至5 .5，室温放置冷却后，再冷藏。 使用上述配好的母液，按照稀释倍数，配制基础MS培养液： 1×MS大量元素，1×MS微量元素，1×MS维生素和氨基酸，1×MS铁盐，蔗糖30 g/L，定容后调节pH至5.8，高温高压灭菌。固体培养基含植物凝胶3.5 g/L或琼脂9 g/L。 另MS基本培养基可用Murashige and Skoog Basal Salt Mixture (Sigma-Aldrich)快速配制。 播种方法： 将烟草种子在自然条件下进行浸种处理（无菌水中浸泡100h），自然晾干后依次用酒精（70%）和汞（0.1%）进行消毒处理，最后用无菌水洗涤3-5次，彻底清除残留于种子表面的汞。将消毒后的种子在无菌条件下播于MS固体培养基上，放入(25±2)℃的光照培养箱中培养。培养30d后取样测定。

培养基配制标准操作规程

范围：培养基 职责：检验室对本规程的实施负责 正文： 1.培养基的制备 1.1需气菌、厌气菌培养基（硫乙醇酸盐液体培养基） 酪胨（胰酶水解） 15g 氯化钠 2.5g 葡萄糖 5g 新鲜配制的0.1%刃天青溶液 1.0ml L—胱氨酸 0.5g (或新鲜配制的0.2%亚甲蓝溶液 0.5ml) 硫乙醇酸钠 0.5g 琼脂 0.5～0.7g (或硫乙醇酸 0.3ml) 水 1000ml 酵母浸出粉 5g ——除葡萄糖和刃天青溶液外，取上述成分加入水内，微温溶解后，调节pH为弱碱性，煮沸，滤清，按量加入葡萄糖和刃天青溶液，摇匀，调节pH值使灭菌后为7.1±0.2，分装，115℃灭菌30分钟。 ——在无菌检查接种前，培养基指示剂氧化层的颜色不得超过培养基深度约1/5。否则，须经水浴煮沸加热，只限加热一次。 1.2霉菌培养基 胨 5g 磷酸氢二钾（K 2HPO 4 ） 1g 酵母浸出粉 2g 硫酸镁（MgSO 4·7H 2 O） 0.5g 葡萄糖 20g 蒸馏水 1000ml ——除葡萄糖外，取上述成分加入水内，微温溶解后，调节pH值约为6.8,煮沸，加葡萄糖溶解后，摇匀，滤清，调节pH值使灭菌后为6.4±0.2，分装，115℃灭菌20分钟。 1.3选择性培养基 1.3.1对氨基苯甲酸培养基(用于磺胺类药物的无菌检查) 照上述需气菌、厌气菌培养基及霉菌培养基的处方制法，各加对氨基苯甲酸0.125g，溶解后摇匀，分装，115o C灭菌30分钟。 1.3.2吐温培养基（用于油剂药品的无菌检查）照上述需气菌、厌气菌培养基及霉菌培养基的处方及制法，各加10ml的吐温80，摇匀后，分装，115℃灭菌30分钟。 1.4营养肉汤培养基 1.4.2处方 胨 10g 肉浸液 1000ml 氯化钠 5g ——取胨与氯化钠，加入肉浸液内，微温溶解后，调节pH为弱碱性，煮沸，滤清，调节pH值使灭菌后为7.2±0.2，分装，115℃灭菌30分钟。 第1页共3页

实验一MS培养基的配制

实验一MS培养基的配制 一、实验目的： 了解MS培养基的配制原理和方法，掌握其配制过程和分装方法。 二、实验材料与仪器： 电子天平、量筒、烧杯、玻璃棒、组培瓶、移液器、6种母液、白沙糖、琼脂、氢氧化钠、盐酸、酸度计或pH试纸。 三、实验方法与步骤 1、母液配制 （1）大量元素(母液Ⅰ) (2) 微量元素(母液Ⅱ) (3) 铁盐(母液Ⅲ) (4) 有机成分(母液Ⅳ) ⅣA 和ⅣB (5) 植物生长调节物质(6－BA，NAA)以上各种营养成分的用量，除了母液Ⅰ为20倍浓缩液外，其余的均为100倍浓缩液。 2、1 L固体MS培养基配制 （1）用电子天平称出8 g琼脂粉和 30 g蔗糖放在烧杯中，加入少量的蒸馏水在微波炉中加热使之溶解。 （2）用量筒从各种母液中分别取出所需的用量：母液Ⅰ为50 ml，母液Ⅱ、Ⅲ、ⅣA和ⅣB 各10ml。 （3）最后用蒸馏水定容到1 L；用 2 mol/L NaOH 或 2 mol/LHCL 溶液调节培养基的 pH 值至 5.8～6.0。 （4）用量筒量取100ml液体培养基分装在组培瓶里，再用移液器取适量的6－BA和NAA放入组培瓶里。 （5）在 1.1kg/cm2 压力（约 121℃）高压灭菌锅中灭菌 15～20 min；灭菌后，放置于室温自然冷却凝固待用。 3、实验分组 本实验分五组，每组负责配制一组培养基组合： （1）MS+0.1mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA （2）MS+0.5mg/L 6-BA+0.5mg/L NAA （3）MS+1mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA （4）MS+2mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA （5）MS+3mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA 4、其他需要灭菌的实验材料 剪刀、镊子、蒸馏水、滤纸、培养皿、组培瓶。 四、分析 1.MS母液分得更加细，一般实验室只分大量元素、微量元素、铁盐、有机成分四大类。这里将大量元素中钙离子与硫酸根离子分开配，避免产生不溶物，将硼酸也单独列出来。另外，培养基中各营养物质之间的浓度配比也直接影响微生物的生长繁殖和(或)代谢产物的形成和积累。 2. 配固体MS培养基时一定要调pH值，如果pH值较小，培养基不易凝固。 3. 有些激素可以高压灭菌，如6-BA和NAA，有些则不能高压灭菌，如IAA 和玉米素(ZT)。

控制菌检查用培养基适用性检查操作规程Word版

1目的 建立一个控制菌检查用培养基检查操作程序。 控制菌检查中用的培养基。检查项目包括培养基的促生长、指示和抑制特性能力。3发放范围 质量部 4职责 5.1菌种和菌液制备 5.1.1控制菌检查用培养适用性检查试验用菌株。 大肠埃希菌（Escherichia coli) [CMCC(B0 44102] 金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus) [CMCC(B0 26003 乙型副伤寒沙门菌 铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa) [CMCC(B) 10104 生孢梭菌(Clostridium sporgenes) [CMCC(B) 64941] 白色念珠菌Candida albicans) [CMCC(B) 98001] 5.1.2将金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、沙门菌分别接种于胰酪大豆胨液体培养基中或在胰酪大豆胨琼脂培养基上，30-35℃培养18-24小时，将白色念珠菌接种于沙氏葡萄糖琼脂培养基上或沙氏葡萄糖液体培养基中，20-25℃培养2-3天，将生孢梭菌接捉于梭菌增菌培养基中置厌氧条件下30-35℃培养24-48小时或接种于硫乙

醇酸盐液体培养基中30-35

℃培养18-24小时。 5.2各种培养基需要测试的能力及判断指标 5.2.1液体培养基促生长能力检查，取不大于100cfu的试验菌分别接种于被检查培养基和对照培养基中，在相应控制菌检查规定的培养温度及不大于规定的最短培养时间下培养。增菌培养基多澄清液体培养基，与对照培养基比较，被检查培养基中试验菌应生长良好，表现为液体培养基浑浊。 固体培养基促生长能力检查：取试验菌液（含菌数不大于100cfu）分别涂布于被检查培养基和对照培养基上，在相应控制菌检查规定的培养温度及不大于规定的最短时间下培养，与对照培养基比较，被检查培养基与对照培养基上生长的菌落大小、形态特征应一致。若被检查培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落数的比值应在50-200%，且菌落形态、大小与对照培养基上的菌落一致，则判断该培养基的适用性检查促生长能力符合规定。 5.2.2培养基抑制能力检查：取不少于100cfu的试验菌分别接种于被检查培养基和对照培养基，在相应控制菌检查规定的培养温度及不不小于规定的最长培养基时间下培养，试验菌应不得生长。 5.2.3液体培养基指示能力检查：取不大于100cfu的试验菌分别接种于被检培养基和对照培养基中，在相应控制菌检查规定的培养温度及不大于规定的最短培养时间下培养。与对照培养基比较，被检查培养基中试验菌应生长情况/指示剂反应等应与对照培养基一致。 固体培养基指示能力检查：取试验菌液（含菌数不大于100cfu）分别涂布于被检查培养基和对照培养基上，在相应控制菌检查规定的培养温度及不大于规定的时间下培养，与对照培养基比较，被检查培养基与对照培养基上生长的菌落大小、形态特征、菌落颜色及指示剂反应等应一致。 5.3控制菌检查用培养基能力测试列表 控制菌检查涉及的14种培养基特点各异味，表中概述培养基检查的具体项目，具体操作在其后说明。 表1 控制菌检查用培养基的促生长能力、抑制能力和指示特征

培养基配制标准操作规程【新版】

培养基配制标准操作规程 1.0目的 本规程规范了微生物实验室培养基的配制操作规程。 2.0范围 本规程适用于微生物实验室检验用的所有培养基 3.0职责 微生物检验员对本标准的实施负责，品管部经理负责监督。 4.0内容 4.1培养基定义 指人工配制的生物营养物质，即用人工方法将多种物质按各种微生物生长繁殖的需要配成的一种混合营养物。通常指干粉培养基和配制好的琼脂、肉汤、稀释液等等。

4.2培养基制备前准备工作 制备培养基所用的玻璃器皿，如吸管、试管、三角瓶和平皿等，新的玻璃器皿(首次使用)和再次使用的玻璃器皿分别按各自批准的规程洗涤、干燥。 4.3培养基的制备 4.3.1检验人员必须依据培养基生产厂家的操作说明进行配制，并填写《培养基配制记录》， 配制记录上注明所用培养基的批号;盛装配制好的培养基的容器外应贴《培养基标 签》，标签应注明:名称、批号、配制人、配制日期、有效期至等信息。 4.3.2配制好的培养基依据说明书规定时间进行灭菌，避免微生物滋生。 4.3.3必要时，灭菌后的培养基在配制后必须进行pH值

的测定以确保符合药典及生产厂家 的规定。 4.3.4倒平板用培养基温度应控制在50度。 4.3. 5.培养基的制备和使用应由专人进行。 4.3.6.培养基的使用尽量做到现配现用，剩余的培养基应放在冰箱中保存。 4.4培养基的保存 4.4.1环境条件:应在洁净的普通冰箱内冷藏保存，温度控制在2-25度。否则，融化后常 因理化条件改变而不能再用。 4.4.2按时检查培养基的外观，如失水、沉淀、过期等异常情况应及时处理。

4.5培养基配制清单 5.0附件 《培养基配制记录》《灭菌记录》 6.0修改历史