滋阴明目丸对SD大鼠视网膜光损伤后氧自由基影响-颜家朝
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第19卷 第2期 2017 年 2 月
辽宁中医药大学学报
JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCM
Vol. 19 No. 2 Feb .，2017
视网膜是机体的重要结构组织之一，是接受光
刺激、形成视觉的关键因素[1]
。大量流行病学研究
认为视网膜光损伤的主要诱因与长时间承受可见光
照射或光强度过强密切相关[2]。视网膜光感受器外
滋阴明目丸对SD 大鼠视网膜光损伤后氧自由基影响
颜家朝1，胡敏娜2，李传课1，李波1，喻京生1，朱惠安1，龙达1
（1.湖南中医药大学第一附属医院，湖南?长沙?410007；2.湖南中医药大学，湖南?长沙?410208）
摘 要：
目的：观察滋阴明目丸对SD 大鼠视网膜损伤时氧自由基代谢的影响，探讨滋阴明目丸对视网膜光损伤大鼠模型的保护作用和机制。方法：SD 大鼠60只，随机分为空白对照组、模型对照组、阳性对照组、滋阴明目丸低剂量组、滋阴明目丸中剂量组、滋阴明目丸高剂量组，共6组，每组10只。空白对照组不予处理，其余组均建立自制光损伤装置模型，光照后3 d 开始灌胃，连续15 d。取大鼠视网膜组织，测定各组总超氧化物歧化酶（T-SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、过氧化氢酶（CAT）的活性变化和丙二醛（MDA）的含量。结果：T-SOD 含量和GSH-Px 含量，模型对照组及各给药组与空白对照组比较，差异有显著统计学意义（P <0.01）；滋阴明目丸中、高剂量组及杞菊地黄丸与模型对照组比较，差异有显著统计学意义（P <0.01）。CAT 含量，模型对照组及各给药组与空白对照组比较，差异有统计学意义（P <0.05）；滋阴明目丸中、高剂量组及杞菊地黄丸与模型对照组比较，差异有统计学意义（P <0.05）。MDA 含量，模型对照组及各给药组与空白对照组比较，差异有显著统计学意义（P <0.01）；滋阴明目丸中、高剂量组及杞菊地黄丸与模型对照组比较，差异有统计学意义（P <0.05）。结论：滋阴明目丸具有干预氧自由基代谢的作用，可以减少脂质过氧化物的产生，明显减轻光照引起的视网膜氧化应激损伤，对视网膜功能起保护作用。
关键词：滋阴明目丸；光损伤；氧自由基；T-SOD；GSH-Px；CAT；MDA
中图分类号：R774.1 文献标志码：A 文章编号：1673-842X (2017) 02- 0013- 03
收稿日期：2016-08-13基金项目：国家自然科学青年基金资助项目（81303007/H2713） ；全国名老中医药专家李传课传承工作室项目[国中医药人教发2013（47）号]作者简介：颜家朝（1981-），男，湖南株洲人，主治医师，硕士，研究方向：中医药防治眼底病的研究。
Effect of Yin-enriching and Eye-brightening Pill on SD Rat
Retina after Light Damage of Oxygen Free Radicals
YAN Jiazhao 1，HU Minna 2，LI Chuanke 1，LI Bo 1，YU Jingsheng 1，ZHU Hui'an 1，LONG Da 1（1. The First Affiliated Hospital of Hunan University of Chinese Medicine，Changsha 410007，Hunan，China；2. Hunan University of Chinese Medicine，Changsha 410208，Hunan，China）Abstract：Objective ：To observe the effect of oxygen free radical metabolism Yin-enriching and Eye-brightening Pill（YEP）on SD rat retina light damage. Methods ：Sixty SD rats，were randomly divided into normal control group，model control group，YEP high dose group，middle dose group，low dose group，Qiju Dihuang Pill group. To establish a model of light damage device，3 days after the start of the light，15 days. Retinal tissue was taken to determine the content of total superoxide dismutase （T-SOD），glutathione peroxidase（GSH-Px），catalase（CAT）and malondialdehyde（MDA）in rats.
Results ：The content of GSH-Px and T-SOD，the model control group and drug group compared with the control group，with significant difference（P <0.01）；YEP in high dose group and Qiju Dihuang Pill group compared with the control group，with significant difference（P <0.01）；the content of CAT，the model control group and each group compared with the control group，the difference was significant （P <0.05）；YEP in high dose group and Qiju Dihuang Pill group compared with the control group，the difference was significant（P <0.05）；the content of MDA，the model control group and each treatment group compared with the control group，the difference was significant（P <0.01）；YEP in high dose group and Qiju Dihuang Pill group compared with the control group，the difference was significant（P <0.05）.
Conclusion ：YEP has effect on interfering oxygen free radical metabolism，can reduce the generation of lipid peroxides，significantly reduce light induced retinal oxidative stress injury，has protective effect on retinal function.
Keywords：Yin-enriching and Eye-brightening Pill （YEP）；light damage；oxygen free radical；T-SOD；GSH-Px；CAT；MDA
DOI：10.13194/j.issn.1673-842x.2017.02.004
辽宁中医药大学学报 19卷
段容易受到自由基的攻击，慢性持续的光损伤或强烈的光照射会增加眼内自由基的浓度，打破原有的生理平衡[3]。视网膜产生氧化应激导致感光细胞外节盘膜的脂质过氧化，从而细胞线粒体光损伤诱发感光细胞凋亡[4]。近年来，人们在生活中与损伤性光源的接触越来越多，与光损伤密切相关的眼底疾病，如：年龄相关性黄斑变性、视网膜色素变性等有显著增多的趋势，可见，环境和人造光源等都是威胁视力的潜在因素。本文拟通过建立大鼠视网膜光损伤模型作为对象，给予滋阴明目丸治疗，观察其对大鼠视网膜光损伤后氧自由基的影响，探讨滋阴明目丸对视网膜感光细胞的保护作用和机制。
1 材料和方法
1.1?动物及分组
选取6~8周龄健康Spregue-Dawley（SD）大鼠（雌雄不论，湖南斯莱克实验动物有限公司提供，SPF级）60只，每只体重150~180 g左右。购回后，于湖南中医药大学实验动物室饲养10 d[12 h明（20~50 Lux）以及12 h暗（0~12 Lux）的循环光环境下]，随机分为空白对照组、模型对照组、阳性对照组、滋阴明目丸低剂量组、滋阴明目丸中剂量组、滋阴明目丸高剂量组，共6组，每组10只。
1.2?主要仪器及用品
视网膜组织蛋白定量测定试剂盒、总超氧化物歧化酶（T-SOD）试剂盒、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）试剂盒、丙二醛（MDA）试剂盒、过氧化氢酶（CAT）试剂盒购于南京建成生物工程研究所；TSAI-8720型数字照度计，苏州特安斯电子有限公司生产；复方托吡卡胺滴眼液（美多丽，规格10 mL，日本参天制药生产，批号M484351）；滋阴明目丸（湘药制字Z20080745，规格120 g/瓶），湖南中医药大学第一附属医院药剂科提供；杞菊地黄丸（批号201310038），长沙九芝堂集团有限公司生产，湖南中医药大学第一附属医院药剂科提供。
1.3?造模及给药
自制光损伤装置（规格：1 m×35 cm×35 cm），光照箱的垂直4个面和底箱分别安装4根15 W的白色荧光灯管，上方安装多个排风孔。光照箱中心向各方向平均照度为（1900±106.9）Lux，相当于大鼠正常活动时眼球水平各箱壁的照度为2000 Lux，光照箱内的平均温度控制在22~24 ℃，除空白对照组外，其余组大鼠于造模前暗适应24 h后分别置于乙醚麻醉缸中约5 min吸入麻醉，缝线开睑，并予复方托吡卡胺滴眼液行双眼散瞳处理后，接受3 h持续光照射。光照后立即拆除开睑缝线，送回暗环境中。
分组给药：根据体表面积计算法，计算出相当于成人等效治疗量。光照后3 d开始给药。①阳性对照组，杞菊地黄丸混悬液相当于成人等效剂量（1.62 g/kg，0.081 g/mL）灌胃；②各滋阴明目丸治疗组予滋阴明目丸混悬液灌胃，低剂量组相当于成人1/3倍（23.4 g/kg，0.46 g/mL）、中剂量组相当于成人等效剂量（7.8 g/kg，0.156 g/mL）、高剂量组相当于成人等效剂量3倍（2.6 g/kg，0.052 g/mL）；③空白对照组及模型对照组予以等量生理盐水7.8 g/kg灌胃。每天灌胃2次，上、下午各1次，每次给全日量的1/2。
1.4?指标取材
灌胃后15 d，25%乌拉坦（0.3 mL/100 g）腹腔注射麻醉，断颈处死后，冰浴下摘取眼球，赤道部剖开，弃除眼前节，剥离选取视网膜组织；指标检测方法按照试剂盒说明书进行。
1.5?统计学处理
采用SPSS17.0统计软件分析所有数据，计量资料都采用均数±标准差（x—±s）表示，采用单因素方差分析（ANOVA）进行两两比较，P<0.05表示差异有统计学意义，P<0.01表示差异有显著意义。
2 结果
2.1?各组SD大鼠视网膜组织总超氧化物歧化酶（T-SOD）含量比较
从表1中可以看出，与空白对照组比较，模型对照组、滋阴明目丸低剂量组T-SOD含量明显降低（P<0.01），有显著统计学意义；与模型组比较，空白对照组，滋阴明目丸中、高剂量组，阳性对照组T-SOD含量明显升高（P<0.01），均有显著统计学意义；与阳性对照组比较，模型对照组、滋阴明目丸低剂量组T-SOD含量明显降低（P<0.05），有统计学意义。说明视网膜光损伤后，经滋阴明目丸治疗，大鼠视网膜组织总超氧化物歧化酶活性增高，抗氧化的能力增强。
表1 各组大鼠视网膜组织总超氧化物歧
化酶（T-SOD）含量的比较（x—±s）
组别n T-SOD（NU/mgprot）空白对照组816.23±2.49△△
模型对照组8 11.34±2.23★★◇◇滋阴明目丸低剂量组8 12.44±2.22★★◇◇
滋阴明目丸中剂量组515.34±2.01△△
滋阴明目丸高剂量组715.64±2.48△△阳性对照组815.55±2.42△△
注：与空白对照组比较，★★P<0.01；与模型对照组比较，△△P<0.01；与阳性对照组比较，◇◇P<0.01。
2.2?各组SD大鼠视网膜组织谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活力比较
从表2中可以看出，与空白对照组比较，模型对照组、滋阴明目丸低剂量组T-SOD含量明显降低（P<0.01），有显著统计学意义；与模型组比较，空白对照组，滋阴明目丸中、高剂量组，阳性对照组T-SOD含量明显升高（P<0.05），有统计学意义；与阳性对照组比较，模型对照组、滋阴明目丸低剂量组T-SOD含量明显降低（P<0.05），有统计学意义。说明视网膜光损伤后，经滋阴明目丸治疗，SD大鼠视网膜组织谷胱甘肽过氧化物酶活性增高，抗氧化能力增强。
表2 各组大鼠视网膜组织谷胱甘肽过氧化
物酶（GSH-Px）活力的比较（x—±s）
组别n GSH-Px活力单位（μkatal/L）空白对照组854.04±8.65△△
模型对照组8 32.75±9.07★★◇◇滋阴明目丸低剂量组8 34.80±8.24★★◇◇
滋阴明目丸中剂量组545.61±4.62△△
滋阴明目丸高剂量组747.12±9.80△△
阳性对照组8 46.03±11.63△△
注：与空白对照组比较，★★P<0.01；与模型对照组比较，△△P<0.05；与阳性对照组比较，◇◇P<0.05。
2.3?各组SD大鼠视网膜组织过氧化氢酶（CAT）含量比较
从表3中可以看出，与空白组比较，模型对
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照组、滋阴明目丸低剂量组T-SOD含量明显降低（P<0.05），有统计学意义；与模型组比较，空白对照组，滋阴明目丸中、高剂量组，阳性对照组T-SOD含量明显升高（P<0.05），有统计学意义；与阳性对照组比较，模型对照组、滋阴明目丸低剂量组T-SOD 含量明显降低（P<0.05），有统计学意义。说明视网膜光损伤后，经滋阴明目丸治疗，大鼠视网膜组织过氧化氢酶活性升高，抗氧化能力增强。
表3 各组大鼠视网膜组织过氧化氢酶（CAT）
含量的比较（x—±s）
组别n CAT（NU/mgprot）空白对照组8 1.930±1.053△△
模型对照组8 0.338±0.500★★◇◇滋阴明目丸低剂量组8 0.367±0.496★★◇◇
滋阴明目丸中剂量组5 1.757±1.366△△
滋阴明目丸高剂量组7 1.808±1.473△△阳性对照组8 1.779±1.740△△
注：与空白对照组比较，★★P<0.05；与模型对照组比较，△△P<0.05；与阳性对照组比较，◇◇P<0.05。
2.4?各组SD大鼠视网膜组织丙二醛（MDA）含量比较
从表4中可以看出，与空白组比较，模型对照组、滋阴明目丸低剂量组T-SOD含量明显降低（P<0.05），有统计学意义；与模型组比较，空白对照组，滋阴明目丸中、高剂量组，阳性对照组T-SOD含量明显升高（P<0.05），有统计学意义；与阳性对照组比较，模型对照组、滋阴明目丸低剂量组T-SOD含量明显降低（P<0.05），有统计学意义。说明强光照射后视网膜组织中脂质过氧化物明显增加，经滋阴明目丸治疗后，大鼠视网膜组织MDA含量较阳性对照组比较明显降低，说明感光细胞及其他视网膜细胞氧化损伤较阳性对照组减轻。
表4 各组大鼠视网膜组织丙二醛（MDA）
含量的比较（x—±s）
组别n MDA（nmol/mgprot）空白对照组80.89±0.41△△
模型对照组8 2.08±1.14★★◇◇滋阴明目丸低剂量组8 1.96±1.49★★◇◇
滋阴明目丸中剂量组50.94±0.51△△
滋阴明目丸高剂量组70.93±0.50△△
阳性对照组80.91±0.37△△
注：与空白对照组比较，★★P<0.05；与模型对照组比较，△△P<0.05；与阳性对照组比较，◇◇P<0.05。
3 讨论
现代医学将视网膜光损伤共分为三种，分别是光化学损伤、机械损伤和热损伤[5]。物体发出的光通过屈光间质折射成像于视网膜上形成视觉，其原理是光刺激后，视网膜上的感光细胞产生兴奋，将视觉信息转变为神经信息，再通过视神经传入大脑视觉中枢。感光细胞包括视锥细胞和视杆细胞，均属于神经细胞，受损后不能再生，过量的光刺激会对视网膜造成不同程度的损伤[6]。光和氧是视觉形成所必需的条件，同时也可以成为活性氧（reactive oxygen species，ROS）产生的因素，进而导致光化学损伤的发生[7]。在正常情况下，氧从脉络膜毛细血管通过Bruch 氏膜、RPE及光感受细胞外段向内层扩散，使光感受细胞外段处于高张氧的环境中，感光细胞的外节膜盘含有高水平的长链多不饱和脂肪酸，如二十二碳六烯酸（DHA）对视网膜有保护作用，对过氧化反应极为敏感，在遭受慢性持续的光损伤等外界因素影响时，易与OH反应形成脂质自由基，并攻击其它不饱和脂肪酸引起连锁反应，打破机体内自由基产生与细胞抗氧化防御的动态平衡，最终机体受损[8]。
祖国医学将视网膜光损伤归属于“视瞻昏渺”范围，病位主要在黄斑部，黄斑归属于瞳神，瞳神属肾。肝开窍于目，肝受血而能视，肝肾同源，精血互生。慢性持续的光损害，易伤阴耗血，目窍失养，久之肝肾同亏，精血不足。故本病的病机基础主要是肝肾阴虚，精血亏损，目络瘀滞。治当滋阴活血。滋阴明目丸是李传课教授根据数十年的临床经验总结而成，具有滋补肝肾、活血化瘀明目的功效。主要药物有：熟地黄、黄精、枸杞、菟丝子、山茱萸、怀山药、茯苓、楮实子、牡丹皮、三七、丹参、牛膝、当归、石决明、川芎、羌活、石菖蒲等。方中熟地黄为君滋补肝肾；枸杞、菟丝子、山茱萸、怀山药、茯苓、楮实子、黄精为臣，具有补肾养阴、益肝明目的功效；辅以牡丹皮、三七、丹参、牛膝、当归止血养血、活血化瘀；佐以石决明平肝除障，入肝明目；羌活辛散，引药上行达目；石菖蒲开窍熏通。
机体抗氧化能力和氧化损伤的程度，通过检测T-SOD、GSH-Px、CAT等抗氧化酶的活性来表现，视网膜内MDA含量可作为氧化应激的生物标志物，提示视网膜的损伤程度。在本次实验中，模型组T-SOD、GSH-Px、CAT降低，MDA升高，提示光照后SD大鼠有自由基紊乱，证实滋阴明目丸中、高剂量组及杞菊地黄丸均能增强视网膜组织中T-SOD、GSH-Px、CAT的活性，防止自由基对细胞的进一步损伤，同时有效降低了光损伤后视网膜MDA水平，减轻了对视网膜的损伤。说明适当剂量的滋阴明目丸等药物对视网膜光损伤条件下感光细胞具有一定的保护作用，清除光损伤产生的自由基，增强视网膜抗氧化的能力，维持组织内氧化和抗氧化系统的基本平衡，抑制细胞凋亡，延缓光照对视网膜的损伤，从而达到保护视细胞的目的。◆
参考文献
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超氧自由基清除能力测定法-操作图解
超氧自由基（·O2-）的清除能力测定法（连苯三酚自氧 化法） （适用于：SOD及各种抗氧化剂） 操作图解 具体方法 1 溶液配制 1.1 Tris溶液（0.1mol/L）：1.21 gTris（三羟甲基氨基甲烷，M.W. 121.1）+100 mL蒸馏水。 1.2 HCl溶液（0.1mol/L）：取0.1 mL浓盐酸，加蒸馏水稀释到6 mL。 1.3 Tris-HCl缓冲液（0.05mol/L，pH7.4，含1mmol/L Na2EDTA） 40 mL0.1 mol/L Tris溶液+ x mL0.1 mol/L HCl溶液+15.2 mg Na2EDTA，混合，稀释到80 mL。用pH 计测量，pH应为7.4。用棕色瓶保存在冰箱内(最多保存三天) 。（以上为一个样品的用量）用前稍热至室温，再测pH值，符合要求即可。 1.4 60 mmol/L连苯三酚溶液（溶于1 mmol/L盐酸中） 取0.1mol/L HCl溶液（见1.2项）20μL，用蒸馏水稀释到2 mL，得1 mmol/L盐酸溶液（用pH计测量，pH＝2.5-3.0）。再往里加连苯三酚14.6 mg (M。W.126.1 )，即得。（当天有效,以上为1个样品的用量）。 2 测试液 2.1连苯三酚溶液：取2950μL Tris-HCl缓冲液加入到石英比色皿中，再加约50μL连苯三酚溶液，迅速混合(颠覆式)，开始计时,每隔30秒读数一次A值（325nm），至300秒（5min）时为止。（空白参比：Tris-HCl 缓冲液） ΔA＝A325nm,300s - A325nm,30s。由于ΔA值反映了生成·O2的初始浓度，所以，对于同一批实验而言，此时的ΔA值必须相等。此时的ΔA为ΔA0。 3.2 样品溶液：取xμL样品溶液加入到大石英比色皿中，再加（2950-x）μL Tris-HCl缓冲液，再加50μL 连苯三酚溶液，迅速混合(颠覆式)，开始计时,每隔30秒读数一次（A值，325nm），至300秒时为止。（空白参比：Tris-HCl缓冲液） ΔA＝A325nm,300s - A325nm,30s。此时的ΔA为ΔA样。 3 计算公式
羟基自由基清除注意事项
一般而言，对于Fenton试剂与有机化合物氧化能力的影响因素大致上可分为： A.亚铁离子浓度。 B.过氧化氢浓度。 C.溶液于反应时的反应温度。 D.溶液中的pH值。 以下将对此四项变因做详细的探讨： A.亚铁离子浓度的影响 在Fenton试剂的反应中，亚铁离子主要是扮演着催化过氧化氢的角色。因此，若溶液中没有亚铁离子当触媒，则其溶液可能就没有氢氧自由基的生成。所以，大致上分解反应会随亚铁离子的浓度增加而加快，亚铁添加量会影响脱色效率，亚铁剂量愈高效果愈佳，此原因为增加亚铁剂量将使氧化反应更加完全并且可产生混凝机制而进行脱色(26)。但亚铁离子本身会与有机物形成竞争，亚铁离子浓度过高会增加氢氧自由基的消耗，反而造成处理效果的下降，反应式如下： Fe2+ + ·OH Fe3+ + OH- 故当浓度到达某一定值时，则其分解速率便不会在随着亚铁离子浓度的增加而持续加快，且亚铁离子浓度和生成物的比值也将可能会影响生成物的分布。一般而言，亚铁离子浓度皆维持在亚铁离子与其反应物之浓度比值为1：10-50(wt/wt)。 此外，亚铁在Fenton程序中除了扮演催化过氧化氢的角色外，亦具有混凝的功能，因此过量的铁离子加入将会造成过度的混凝，降低Fenton程序处理的效果，其可能的反应如下所示: B.过氧化氢浓度的影响 反应过程中，过氧化氢的浓度会直接影响氧化有机物的效果。一般而言，随着过氧化氢添加量的增加，有机物的氧化效果亦将随之提升，并且过氧化氢的添加浓度不同，则分解反应生成的产物将会有所差异。大致而言，在过氧化氢浓度越高的情况下，则其氧化反应产物，将会更趋近于最终产物。但是，当溶液中的过氧化氢浓度过高时，反而会使过氧化氢与有机物竞争氢氧自由基，而造成反应速率的结果可能不如预期一般增加。此外，当Fenton试剂系统中过氧化氢浓度远高于亚铁离子浓度时，Fenton法所产生的氢氧自由基会与过氧化氢反应产生perhydroxyl radical (HO2．)及一系列反应，且三价铁离子会与HO2．进行氧化还原反应生成superoxide radical anion (O2．)，造成过氧化氢消耗量的增加，过量的过氧化氢加药量并不必然增加氢氧自由基的浓度，氢氧自由基达到稳定浓度所需反应时间随加药量增加而增加(27)。因此，若以连续之方式加入低浓度之过氧化氢，减少因为过氧化氢初始浓度过高所导致的抑制效应，亦可得到较好的氧化效果。 C.温度的影响 根据Arrhennius' Law：k=k0exp(-Ea/RT)可得知温度的改变会影响活化能及反应速率常数，进而影响反应速率。 对于Fenton试剂反应而言，一般若选用的反应温度条件是在小于20℃以下时，其对有机物的氧化速率将会随温度升高而加快。但是，倘若将其反应的温度升高至40-50℃时，其Fenton反应将会可能因为温度过高，进而使过氧化氢自行分解成水与氧(2H2O2 → 2H2O + O2 )，造成Fenton试剂对氧化有机物之反应速率减慢。 因此，当过氧化氢浓度超过10-20 g/L时，在其经济与安全的考量下，应谨慎选择适当的温度。在一般商业应用上，通常皆将其反应的温度设定在20-40℃之间。 D. pH值的影响 于Fenton试剂反应中，其反应溶液之pH值对Fenton法之影响，关系到铁离子错合效应、铁
蒲螨与人类疾病
蒲螨与人类疾病 崔玉宝 海南医学院检验医学系寄生虫学教研室 海口 Πψεμοτεσμιτεσανδηυμανδισεασεσ ≤∏ ≠∏ ?επαρτμεντοφΠαρασιτολογψ ΜεδιχαλΧολλεγε ∏ ≤ Αβστραχτ ≥ ∏ ∏ × ∏ × ∏ ∏ ∏ ? ∏ ∏ Κεψωορδσ 摘 要 蒲螨为一类农业害螨 部分种类可暂时性或偶然地侵袭人体?该文简要介绍了蒲螨的生物学!生态学!引起人体皮炎的蒲螨种类!皮炎的发生特点以及蒲可寄生人体内引起的疾病?并提出治疗方法和除螨措施? 关键词 蒲螨 皮炎 寄生 3∞2 收稿日期 2 2 修回日期 2 2 蒲螨属于节肢动物门 !蛛形纲 !蜱螨亚纲 !真螨总目 !前气门目° !蒲螨科 ° ?蒲螨种类较多 生境广泛 严重危害农作物 部分种类具重要的医学意义 可引起人体疾病?现就蒲螨与人类疾病简述如下? 1 蒲螨的基本概况 寄生性的蒲螨 其雌螨寄生于某些鳞翅目!
同翅目!鞘翅目!双翅目及膜翅目的幼虫或蛹体上 并刺吸其体液为食?雄螨则终生寄生于母体膨胀的末体上?蒲螨对宿主的选择并不严格 大多数粮仓害虫及农林物昆虫都可被寄生 以球腹蒲螨Πψεμοτεσ?εντριχοσυσ为例 其常见自然宿主有麦蛾!桃枝麦蛾!谷象!棉铃象!四纹豆象!绿豆象!胡椒象!麦茎小蜂!棉斑实蛾!莲纹夜蛾!绵红铃虫!苹果食心虫等 余种?麦蒲螨Πψεμοτεστριτιχι是粮仓中鳞翅目昆虫幼虫及蛹的天敌 其注入毒素于昆虫体内 使其麻痹 甚至死亡 由于其数量的迅速增加和具有毒性的特异性毒液 可引起人类疾病?麦蒲螨与茨氏蒲螨Πψεμοτεσζωοελφερι往往同时出现≈ ?此外 有学者在广州检查屋尘样本时发现赫氏蒲螨 说明蒲螨亦可孳生于人类生活环境中≈ ?蒲螨体甚小 如球腹蒲螨未孕时为 Λ ? Λ 卵圆形 躯体的后半部分节 前足体前缘无悬垂于颚体的板状延伸物?雌螨 足与 足构造相同 各足由 或 节组成 末端有膜质前跗节及爪 个?雌螨妊娠后 末体膨大如球 内含大量同时发育的卵? 蒲螨是胎生螨类 卵!幼螨!若螨都在体内发育 直至成熟后自母体产出?其性别可通过母体透明几丁质体壁观察到的特征而鉴别?母体内发育成熟的雄螨自行移动至母体生殖孔处爬出?产出的雄螨不离开母体 附着于母体膨大的末体上刺吸寄生?子雌螨在母体内移动到生殖孔附近即将产出时 母体外的雄螨以强有力的第 足抓住子雌螨 将其拖出生殖孔 完成生产?一旦雌螨产出生殖孔 母体外的雄螨即与其交尾 行有性生殖?若将所有雄螨都从受孕雌螨的末体移去 雌螨则进行孤雌生殖 产出的螨均为雄性? 2蒲螨性皮炎 蒲螨寄生于昆虫体表 人类受其骚扰是偶然和暂时的?蒲螨叮咬人体后约 被叮咬处即出现持续性剧痒 继而出现皮疹 以丘疹或丘疱疹为主要特征 亦可有荨麻疹或紫红色斑丘疹?皮疹呈圆形或椭圆形 直径 1 ? 1 皮疹上常可见螨叮咬的痕迹 中央有水泡 由于抓挠水泡易被破坏?少数患者可出现全身症状 可有发热!全身不适!乏力!恶心!心动过速!头痛!关节痛等?甚至尿中出现少量蛋白 局部淋巴结肿胀 血检有白细胞增高 诱发哮喘和出现继发感染等?如果患者连续接触蒲螨 则皮炎反复出现症状加重?如无重复接触一般 ? 日后痒感渐退 ? 日后消失?皮炎好发部位为背部!腹部和前臂屈侧等裸露部位 严重者可遍及全身 但以躯干居多 面部较少≈ ?在欧洲 ∏ 地区某农场的猪舍 名工作因接触猪饲料被赫氏蒲螨Πψεμοτεσηερφσι感染引起皮炎?除手和脸外 身体其他部位均有丘疹出现?当患者停止接触该饲料 丘疹迅速消失≈ ?由于蒲螨体小 肉眼难于观察 临床医生检查时常难发现?且当痒状开始时 蒲螨通常已离开宿主?因此 对于不明原因皮炎 检查其环境中体外寄生虫的存在非常重要?在英国 关于蒲螨引起皮炎的报道始于 年 一位渔夫因接触陈旧的樱桃木材发生了急性皮炎 随后在该木材中发现的一种螨 形态学鉴定为博氏蒲螨Π βεχκερι 是导致患者皮炎的原因≈ ? 年 月 法国 2 数人因接触来自南斯拉夫的一种持久开放的Ηελιχηρψσιυμανγυστιφολιυμ花发生瘙痒症?患者第 周即出现红斑样皮损 且中央有水泡 此症状至第 周尚未消失?在那些永久开放美丽的花内发现数不清的!移动迅速的雌性茨氏蒲螨Πψεμοτεσζωοελφερι≈ ?自 至 年得克萨斯州暴发了 次谷痒症 年暴发的第 次皮炎事件起源于工作人员暴露在被球腹蒲螨Πψεμοτεσ?εντριχοσυσ侵袭的小麦 该小麦正被销往一个现代化的大型购物中心?大多数患者出现丘疹症状 另有一员工出现寒战!发热!全身不适!腹泻!食欲不振等症状? 等人提出当临床发现水痘样或恙螨叮咬样皮炎 应考虑蒲螨叮咬的可能性 尤其是患者居所或工作环境有蒲螨孳生物品时≈ ?佛罗里达大学曾发生一起由蒲螨侵袭马及其接触人群引起的皮炎 检查周围环境发现苜蓿草内孳生有大量的麦蒲螨
有关抗氧化能力分析
有关抗氧化能力分析 ORAC (Oxygen radical absorbance capacity) 即抗氧化能力指数，是目前抗氧化研究领域一个重要的评价方法。该方法以偶氮类化合物AAPH作为过氧自由基来源，以荧光素Fluorescence为荧光指示剂，维生素E水溶性类似物Trolox为定量标准，使用荧光微孔板分析仪进行分析。与其他抗氧化能力分析方法相比, ORAC方法具有诸多显著的优点。该方法自1993年建立以来，经过不断发展和完善，可以说ORAC方法是目前评价抗氧化物质的抗氧化活性的最为简单、准确、灵敏度高、应用范围广和最具影响力的抗氧化能力研究方法之一。目前，ORAC方法已成功应用于生物样品、植物或食品提取物和纯化合物等多种样品的体内外抗氧化能力分析。 科标检测，其团队通过多年的研究沉淀，通过模拟各种氧自由基在人体内的产生机制产生各种氧自由基，而这些自由基可破坏荧光探针的结构从而造成荧光信号的衰减。当具有抗氧化活性的样品加入到实验体系中时，可以不同程度的保护荧光探针不被氧自由基所损坏，因而通过检测荧光信号的不同，便可以计算出某种样品的抗氧化活性。在ORAC实验中，以水溶性维生素E(Trolox)为标准品，因此最终样品的抗氧化实验结果最终以每克或是每毫升样品含有多少Trolox当量的形式表示。通过ORAC5.0检测样品的抗氧化活性,为抗氧化食品、保健品、化妆品以及药品的研发提供了有效的检测手段。 ORAC（Oxgen Radical Absorbance Capacity）指氧自由基吸收能力，即测试食品药品中抗氧化物的含量的国际通用标准单位。ORAC的含量超高，抑制自由基的抗氧化能力就越强。 对于一个未知样品，ORAC化学方法测试出样品的理论抗氧化值，并测出对各种自由基作用的具体数值，以寻找研发方向。然后通过ORAC生物细胞方法测试其生物利用度（被人体细胞所吸收的值），以验证其真实的效果。最后进行动物临床或人体临床，证实样品（产品）的实际效果。通过这种循序渐进、符合逻辑的研发方案步骤，企业可以安全、有效的研发出符合预期的新产品，建立起一套扎实的数据支撑体系。ORAC已建立从化学层面、生物细胞层面、临床层面纵向立体的分析方法。 常见蔬菜或水果的ORAC： "ORAC-total"是指总抗过氧化自由基能力值；“ORAC-5.0”是指总抗自由基能力值； 芦荟： ORAC-total ：2737 μmol TE/g ORAC-5.0 ：135,647 μmol TE/g
超氧阴离子清除实验
·O2ˉ自由基清除实验 (1) 实验原理 黄嘌呤氧化酶 黄嘌呤＋H2O+O2尿酸＋H2O2+·O2ˉ 即黄嘌呤氧化酶在有氧条件下催化黄嘌呤转化为尿酸，同时产生超氧阴离子自由基(·O2ˉ)。·O2ˉ与NBT结合后呈蓝色，样品清除能力越大，与NBT结合的·O2ˉ越少，溶液的颜色越浅。 (2)试剂 Xanthine(黄嘌呤): (C5H4N4O2 ), MW=152.1, 6.084mg/100mL(0.4mmol/l) 实际配制：1.216mg/10mL，与NBT等体积混合使用 Xanthine oxidase(黄嘌呤氧化酶)贮液: 1 unit/mL , (溶解酶的溶液要高压灭菌！防止蛋白酶对酶的降解！) 0.05 unit/mL，每次取200uL稀释到4mL(PBS溶解) NBT: (Nitro blue tetrazolium chloride氯化硝基四氮唑蓝), MW=817.65, 黄色19.6236mg/100mL(0.24mmol/l) 实际配制3.925mg/10mL，与Xanthine等体积混合使用 PBS(0.01mol/L,pH=8.0): NaCl 8g, KCl 0.2g, Na2HPO4(无水) 1.44g, KH2PO4 0.24g, 800mL水，用NaOH(1M)调pH到8.0，定容到1000mL。 实际配制500mL。高压灭菌，室温保存。 PBS(0.01mol/L,pH=7.4): 配制同上 Ascorbic acid: MW=176.12 母液为1mg/mL 先两倍逐级稀释5个浓度 实际配制见记录本！ HCl(1M): MW=36.5 310ul/10ml.(36% HCl密度1.18g/ml) 实际配制：800uL浓盐酸+9mL水，于塑料管中4℃保存。 NaOH(1M): MW=40 0.4g/10mL, 存于冰箱 (3) 测定方法 超氧阴离子自由基清除能力的测定参照Bae等人的方法略加改进。样品溶液1-5mg/ml 起始浓度，用于水或50%乙醇溶液。 Bae, S.W., Suh, H.J., 2007. Antioxidant activities of ve different mulberry cultivars in Korea.
活性氧自由基与疾病的关系研究进展
活性氧自由基与疾病的关系研究进 展 内江师范学院毕业论文(设计) 中英文摘要............................................................... . (2) 1 前言............................................................... ..................................................................... ...... 3 2 氧自基............................................................... ..................................................................... .. 3 氧自基的种类............................................................... ......................................................... 3 超氧化物自基[O2]............................................................. ............................................ 4 过氧化氢自基源...............................................................
清除自由基能力的研究概况
清除自由基能力的研究概况 陶涛 （西南林业大学林学院农学（药用植物）昆明 650224） 摘要：自由基及其诱导的氧化反应是导致生物衰老和某些疾病如癌症、糖尿病、一心血管疾病等的重要因素。乳酸茵作为一种高效、低毒的生物源天然抗氧化荆，正逐步受到食品、制药、化工等领域的广泛关注。就目前国内外常用的乳酸茵抗氧化活性的筛选方法、乳酸茵抗氧化机理的国内外研究进展及未来的发展趋势作一综述。 关键词：自由基；乳酸茵；抗氧化． Study on the scavenging ability of lactic acid bacteria on free radical bstract：Free radical and its inducing oxiditative reaction may CaUSe biological doat and certain diseases such as Cancers，diabetes and the cat- diovascular．The lactic acid baaeria as one ofbiological SOUrCeS oxidation inhibitor is becoming more and more popular in the fields offood．，drug manufacture and chemical industry．This article mainly reviews the screening methods for antioxidative of lactic add bacteria among domestic and foreign countries，the advance of the research progress in lactic add bacteria antioxidative and r∞earch trends in future． 引言 氧化过程可以提供能量．对大多数生物体来说，是维持生命必不可少的一个能量转化过程。但过多的氧化过程会对生物大分子引起损伤．氧化损伤主要是由于自由基和过氧化产物作用于人体而产生的。 自由基(free radicals)27．．称游离基．为人体氧化代谢过程中形成含有一个不成对电子的原子或原子团。人体的自由基主要包括超氧阴离子自由基(o2)、
氧自由基与氧自由基清除剂依达拉奉
氧自由基与氧自由基清除剂依达拉奉 山东大学齐鲁医院麻醉科（250012）于金贵 一、氧自由基 （一）自由基的概念 自由基（free radical，FR）是指外层轨道上有未配对电子的原子、原子团、分子或离子的总称。因其含有未配对的电子，故化学性质非常活泼，极易与其生成部位的其他物质发生反应，而这种反应的最大特点是以连锁反应的形式进行。氧原子上有未配对电子的自由基称为氧自由基。人体吸入的分子氧，在正常状态下绝大多数（98%）都连接4个电子，它们最终与H+结合，代谢还原为H2O。但有极少数氧（1~2%）在代谢过程中被夺去或接受一个电子而形成活性氧，即氧自由基。 （二）氧自由基的生理作用 氧自由基在生理上是必需的物质，如合成ATP 和前列腺素、中性粒细胞杀灭细菌、酸性粒细胞杀灭寄生虫等过程都必须有氧自由基参与。氧自由基在体内的生成与清除保持动态平衡，且在体内存在时间甚短。由于其化学性极强，反应剧烈，过量产生会对机体造成极大危害。 （三）氧自由基的种类及其作用
1. 超氧化物阴离子：氧自由基连锁反应的启动者，使生物膜、激素和脂肪酸过氧化。 2. 羟自由基（OH∙）：作用最强的自由基，可破坏氨基酸、蛋白质、核酸和糖类。 3. 过氧化氢（H2O2）：过渡型氧化剂，主要使巯基氧化，可氧化不饱和脂肪酸。 4. 单线态分子氧（1O2）：氧分子的激发状态，亲电子性强，在光作用下可由O2直接产生，对细胞有杀伤作用。 5. 其他含氧的自由基如脂质过氧化物（ROOH）：易于分解再产生自由基，腐化脂肪，破坏DNA，可与蛋白质交联使之形成变性交聚物。 （四）机体抗氧化机制 机制一：直接提供电子，以确保氧自由基还原；机制二：增强抗氧化酶的活性，以有效地消除或抵御氧自由基的破坏作用如酶类抗氧化剂超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）；非酶类抗氧化剂如维生素E、维生素C、辅酶Q、还原型谷胱甘肽（GSH）、葡萄糖、含硫氨基酸和不饱和脂肪酸等。 SOD多存在于细胞的线粒体内，作用是将氧自由基歧化，将其一半转变成H2O，另一半转变成O2，从而清除氧自由基。CAT是血红蛋白酶类之一，作用是分解H2O2，并将其清除之。
自由基清除剂
第五章自由基清除剂 本章要点 1.自由基理论的产生机理及来源 2.自由基对机体活动的影响 3.自由基清除剂的基本概念 随着生命科学的飞速发展，英国人Harman于1956年提出了自由基学说。该学说认为，自由基攻击生命大分子造成组织细胞损伤，是引起机体衰老的根本原因，也是诱发肿瘤等恶性疾病的重要起因，其中的观点被越来越多的实验所证明。 自由基（Free radical）是人体生命活动中各种生化反应的中间代谢产物，具有高度的化学活性，是机体有效的防御系统，若不能维持一定水平则会影响机体的生命活动。但自由基产生过多而不能及时地清除，它就会攻击机体内的生命大分子物质及各种细胞器，造成机体在分子水平、细胞水平及组织器官水平的各种损伤，加速机体的衰老进程并诱发各种疾病。 近年来，国内外对自由基及自由基清除剂的研究十分活跃，在各类食品科学、生命科学及医学书籍上都有许多关于自由基及其清除剂的研究报道，自由基清除剂作为功能性食品的重要原料成分之一，通过人们日常消费的食品来调节人体内自由基的平衡，已受到食品营养学家的广泛重视。 第一节自由基理论 一、自由基的产生机理及来源 自由基又叫游离基，它是由单质或化合物的均裂（Homdytic Fission）而产生的带有未成对电子的原子或基团。它的单电子有强烈的配对倾向，倾向于以各种方式与其他原子基团结合，形成更稳定的结构，因而自由基非常活泼，成为许多反应的活性中间体。 人体内的自由基分为氧自由基和非氧自由基。氧自由基占主导地位，大约占自由基总量的95%。氧自由基包括超氧阴离子（O2－·）、过氧化氢分子（H2O2）、羟自由基（OH·）、氢过氧基（HO2－·）、烷过氧基（ROO·）、烷氧基（RO·）、氮氧自由基（NO·）、过氧亚硝酸盐（ONOO－）、氢过氧化物（ROOH）和单线态氧（1O2）等，它们又统称为活性氧（reactive oxygen species，ROS），都是人体内最为重要的自由基。非氧自由基主要有氢自由基（H·）和有机自由基（R·）等。 （一）自由基的产生 人体细胞在正常的代谢过程中，或者受到外界条件的刺激（如高压氧、高能辐射、抗癌剂、抗菌剂、杀虫剂、麻醉剂等药物，香烟烟雾和光化学空气污染物等作用），都会刺激机体产生活性氧自由基。 人体内酶催化反应是活性氧自由基产生的重要途径。人体细胞内的黄嘌呤氧化酶、髓过氧化物酶和NADPH氧化酶等在进行酶促催化反应时，会诱导产生大量的自由基中间产物。除酶促反应外，生物体内的非酶氧化还原反应，如核黄素、氢醌、亚铁血红素和铁硫蛋白等单电子氧化反应也会产生自由基。外界环境，如电离辐射和光分解等也能刺激机体产生自由基反应，如分子中的共价键均裂后即形成自由基。 自由基反应包含3个阶段，即引发、增长和终止阶段。反应之初，引发阶段占主导地位，反应体系中的新生自由基形成许多链的开端，反应物浓度高。引发后的扩展阶段为反应的主体，若起始有几个引发自
活性氧自由基与疾病的关系研究进展样本
中英文摘要........................................ 错误!未定义书签。 1 前言............................................ 错误!未定义书签。2氧自由基.......................................... 错误!未定义书签。 2.1氧自由基的种类.................................. 错误!未定义书签。 2.1.1 超氧化物自由基[O2-] .......................... 错误!未定义书签。 2.1.2 过氧化氢自由基源.............................. 错误!未定义书签。 2.1.3 羟基自由基[HO·].............................. 错误!未定义书签。 2.1.4 单线态氧...................................... 错误!未定义书签。 2.1.5 过氧化脂质.................................... 错误!未定义书签。 2.2氧自由基的相互作用原理.......................... 错误!未定义书签。3氧自由基对人类造成的危害及防治手段................ 错误!未定义书签。 3.1氧自由基会造成什么样的危害...................... 错误!未定义书签。 3.2活性氧自由基的清除和对疾病的减缓................ 错误!未定义书签。 3.2.1 微量元素对活性氧自由基的清除.................. 错误!未定义书签。 3.2.2 药用植物中存在的天然抗氧化剂.................. 错误!未定义书签。 3.2.3 具有抗氧化作用的植物.......................... 错误!未定义书签。 3.2.4 具有抗氧化性的酶.............................. 错误!未定义书签。 3.2.5 化学合成药作为抗氧化剂........................ 错误!未定义书签。4总结.............................................. 错误!未定义书签。参考文献.......................................... 错误!未定义书签。声明........................................... 错误!未定义书签。致谢.............................................. 错误!未定义书签。
活性氧与人体的衰老机制
生老病死是人的客观规律 人们常说：“生老病死，人之常情。”但同时，这种司空见惯和豁达洒脱的口吻在每个人真正直面时显得单薄而寡淡。新生命的降生让人热泪满襟，疾病的折磨让人痛苦不堪，日复一日的衰老让人无力悲凉，死亡让人徒留多少遗憾。“生如夏花般灿烂，死如秋叶般静美”，这是泰戈尔的生与死；“人生自古谁无死，留取丹心照汗青”，这是文君的慷慨赴死；“老骥伏枥，志在千里，”这是曹操的壮士暮年—— 人生的必然过程被千古风流人物演绎得隽永而灿烂。而如今，随着科学技术迅猛发展，人们对生老病死的认识也越加客观，研究也越发主动。经过前辈的刻苦钻研，我们得以站在巨人的肩膀上，对“生老病死”认识、了解，从而强壮其体魄，认真工作五十年，健康生活一百。 首先，我们要对在自然界中扮演了重要角色的自由基加以了解。什么是“自 由基”？自由基是指外层轨道中具有奇数电子的原子、原子团、分子。正是这些 数量级仅在原子、分子水平的小东西却对生命进程起了至关重要的作用。自由基的化学性质是活性强，结构不稳定,存在的时间短暂，一旦发生反应，常呈链锁 式反应。 在化学上，自由基的产生方法主要有三种：一、光照法，具有一定能量的光 辐照某些化合物时，使化学键断裂，生成自由基；二、氧化还原法，通过电子转 移生成自由基；三、热均裂法，很多过氧化物和偶氮化合物受热时均裂，生成自 由基，这是最方便而且用途最多的方法。而在实际生活中，则例如，外界环境中 的阳光辐射、电脑辐射、空气污染、吸烟、农药、X 射线、电磁波、酒精、一些
药物和污染物质等。而且，医学研究指出，人类在极端不良情绪下，如愤怒、紧张、恐惧时会产生自由基——所以各位，就算为了自己的性命着想，也要修身养性才是。 自由基就像空气一样无处不在：化妆品里，吸烟做饭时，化学制剂中，工业 废气中，汽车尾气中。人体里的自由基可以帮助传递维持生命活力的能量，也可以被用来杀灭细菌和寄生虫，还能参与排除毒素。受控的自由基对人体是有益的。但当人体中的自由基超过一定的量，并失去控制时，这种自由基就会给我们的生命带来伤害——正所谓是过犹不及。而伴随着生态环境形势日益严峻，自由基数目也与日剧增。 自由基对人体的损害主要有三个方面：一、使细胞膜被破坏；二、使血清抗 蛋白酶失去活性；三、损伤基因导致细胞变异的出现和蓄积。自由基不仅存在于人体内，也来自于人体外。因此，降低自由基危害的途径也有两条：一、利用内 源性自由基清除系统清除体内多余自由基；二、发掘外源性抗氧化剂--自由基清除剂，阻断自由基对人体的入侵。大量研究已经证实，人体内本身就具有清除多余自由基的能力，这主要是靠内源性自由基清除系统，它包括超氧化物歧化酶（SOD ）、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化酶等一些酶和维生素C、维生素E、还原性谷胱甘肽、胡萝卜素、硒等一些抗氧化剂。酶类物质可以使体内的活性氧自由基变为活性较低的物质，从而削弱它们对肌体的攻击力。酶的防御作用仅限于细胞内，而抗氧化剂有些作用于细胞膜，有些则是在细胞外就可起到防御作用。 这些物质就深藏于我们体内，只要保持它们的量和活力它们就会发挥清除多余自 由基的能力，使我们体内的自由基保持平衡。我们生物体系主要遇到的是氧自由
清除氧自由基
1、超氧负离子 黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶系统产生超氧负离子产生超氧负离子 黄嘌呤、黄嘌呤氧化酶、 清除超氧自由基负离子O2- 徐艳,曲婷婷. 甘草消除氧自由基的体外研究[J]. 食品研究与开发,2006,(8). 2、1.2.2NBT 光还原反应中主要试剂的配制 1.2.2.1 测试缓冲液: 0.026 mol/LMet- 磷酸钠缓冲液具体配制方法: 首先配制0.1 mol/LpH7.8Na2HPO4- NaH2PO4缓冲液 a 称取Na2HPO4·12H2O( MW=358.14) 3.581 4 g 于100 mL 小烧杯中, 加少量蒸馏水溶解后, 移入100 mL容量瓶中, 用蒸馏水定容至刻度。 b 称取NaH2PO4·2H2O(MW=156.01)0.780 g 于50 mL小烧杯中, 加少量蒸馏水溶解后, 移入50 mL 容量瓶中, 用蒸馏水定容至刻度。 c 量取91.5 mL a 液与8.5 mL b 液混合后, 该液即为0.1 mol/LpH7.8 磷酸钠缓冲液。 d 称取L- Met( MW=149.2) 0.194 1 g 于50 mL 小烧杯中, 用少量0.1 mol/LpH7.8 磷酸钠缓冲液溶解后, 移入50 mL 容量瓶中, 用0.1 mol/LpH7.8 磷酸钠缓冲液定容至刻度。 1.2.2.2 NBT( 氯化硝基四氮唑蓝) 的配制(7.5×10-4mol/L) 称取NBT( MW=817.7) 0.061 3 g 于50 mL 小烧杯中, 用少量蒸馏水溶解后, 移入100 mL 容量瓶中, 用蒸馏水定容至刻度。 1.2.2.3 核黄素溶液(2×10-5 mol/L) a.称取EDTA( MW=292) 0.002 92 g 于50 mL 小烧杯中, 用少量蒸馏水溶解。 b.称取核黄素( MW=376.36) 0.073 5 g 于50 mL 小烧杯中, 用少量蒸馏水溶解。合并 a 液和 b 液, 移入100 mL 容量瓶中, 用蒸馏水定容至刻度( EDTA0.1 mmol,核黄素2 mmol)。贮于冰箱中, 避光保存, 用时稀释100 倍。 1.2.3 甘草提取物溶液的配制 1.2.3.1 甘草酸溶液的配制 称取甘草酸0.05 g 用少量稀醇(10 %乙醇溶液)溶解后, 移入50 mL 容量瓶中, 用稀乙醇定容至刻度, 即为 1 g/ mL 的甘草酸溶液。 1.2.3.2 甘草次酸溶液的配制 称取甘草次酸0.05 g 用少量稀醇(10 %乙醇溶液)溶解后, 移入50 mL 容量瓶中, 用稀乙醇定容至刻度,即为 1 g/mL 的甘草次酸溶液。 1.2.3.3 甘草总黄酮组溶液的配制
如何清除体内自由基
如何清除体内自由基 消除体内自由基，应该要了解自由基的来源，从外界到身体内部的代谢一起中和性的描叙不要单方面的讲叙体内各种酶与自由基之间的关系 人体内的自由基有两个来源：其一是来自环境，如环境污染、食品污染、过度的紫外线照射和各种辐射、杀虫剂、室内外废气、吸烟、二手烟、酗酒、工作压力、生活不规律等等，都会直接导致人体内产生过多的自由基（活性氧）；食品添加剂、食用脂肪和熏炸烤肉、某些抗癌药物、安眠药、抗生素、有机物腐烂物、塑料用品制造过程、油漆干燥挥发、石棉粉尘、空气污染、化学致癌物、大气中的臭氧等也都能诱发人体内产生自由基。 其二是来自体内，人体内组织细胞的新陈代谢也会产生自由基，这是人体代谢过程的正常产物，十分活跃又极不稳定，它们会附着于健康细胞之上，再慢慢瓦解健康细胞，而被破坏的细胞则又再转而侵害更多健康的细胞，如此恶性循环从而导致人体的衰老和疾病的发生。另外，组织器官损伤后的缺血一段时间后又突然恢复供血(即重灌流)，如心肌梗塞、脑血栓、外伤、外科手术后，自由基会大量生成。正常人体有一套清除自由基的系统，但这个系统的力量会因人的年龄增长及体质改变而减弱，致使自由基的负面效应大大增强，引起多种疾病发病率的提高。活性氧自由基对人体的损害实际上是一种氧化过程。因此，要降低自由基的损害，就要从抗氧化做起。 听说过抗氧化剂吗？它对人体的健康可是有着密切的关系。既然自由基不仅存在于人体内，也来自于人体外，那么，降低自由基危害的途径也有两条：一是，利用内源性自由基清除系统清除体内多余自由基；二是发掘外源性抗氧化剂——自由基清除剂，阻断自由基对人体的入侵。 大量研究已经证实，人体内本身就具有清除多余自由基的能力，这主要是靠内源性自由基清除系统，它包括超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶等一些酶和维生素C、维生素E、还原型谷胱甘肽、β-胡萝卜素和硒等一些抗氧化剂。酶类物质可以使体内的活性氧自由基变为活性较低的物质，从而削弱它们对肌体的攻击力。酶的防御作用仅限于细胞内，而抗氧化剂有些作用于细胞膜，有些则是在细胞外就可起到防御作用。这些物质就深藏于我们体内，只要保持它们的量和活力它们就会发挥清除多余自由基的能力，使我们体内的自由基保持平衡。 要降低自由基对人体的危害，除了依靠体内自由基清除系统外，还要寻找和发掘外源性自由基清除剂，利用这些物质作为替身，让它们在自由基进入人体之前就先与自由基结合，以阻断外界是自由基的攻击，使人体免受伤害。在自然界中，可以作用于自由基的抗氧化剂范围很广，种类极多。目前，国内外已陆续发现许多有价值的天然抗氧化剂。如β－胡萝卜素（维生素A）、维生素C、维生素E、番茄红素、辅酶q10、等等。此外，我国很多中草药植物中的有效成分都是天然抗氧化剂，例如，银杏黄酮、甘草黄酮等，另外还有巴西菇、灰树花、茯苓、黄芪、丹参、银杏、枸杞、灵芝、人参......。 吃什么可以减少体内自由基 在正常的生命过程中，自由基为维持生命所必需。体内自由基不断产生，也不断地被清除，两者 处于动态平衡之中，使之维持在一个正常的生理水平上。自由基在生物体内具有参与吞噬病原体，参 与前列腺素和凝血酶原的合成、解毒，参与体内部分生化反应和胶原蛋白的合成，调节细胞增殖与分化，参与机体免疫和环核苷酸的生物合成，以及生殖和胚胎发育等重要的生理功能。但是当自由基过 量时，自由基在机体内损伤蛋白质、核酸和生物膜，导致细胞凋亡，并参与许多疾病的发病过程。 由基清除剂即抗氧化剂清除机体自由基，保护机体免受氧化损害中起重要作用。因此，近年来对 自由基清除剂的研究备受关注。多吃点抗氧化剂食物有利于减少体内多余自由基。 方法/步骤 1.全面复方自由基清除剂：葡茶多酚胶囊。适当吃葡茶多酚可以全面清除体内多余自由
线粒体外NADH的氧化;非线粒体氧化;活性氧与人体疾病
第三节线粒体外NADH的氧化 述：线粒体外膜通透性较高，允许分子量1000以内的物质通过。 线粒体内膜具有选择性通透性，主要依赖内膜中不同的转运载体转运物质。 ※线粒体内NADH的氧化 NADH直接进入NADH氧化呼吸链氧化生成水。 ※胞液中NADH的氧化： ⒈胞液中3-磷酸甘油等脱氢生成的NADH+H+在细胞有氧情况 下进入线粒体氧化并产生ATP。 ⒉NADH +H+不能自由透过线粒体内膜，需经2种转运机制进 入线粒体，再通过呼吸链进行氧化磷酸化。 一、α－磷酸甘油穿梭作用 ⒈发生部位：主要存在于脑和骨骼肌。 ⒉作用过程：（课本P63图5－12）幻灯80、81 ⒊能量生成：每1 NADH +H+ 氧化产生2ATP 二、苹果酸－天冬氨酸穿梭作用 ⒈发生部位：主要存在于肝和心肌 ⒉作用过程：（课本P64图5－13）幻灯83、84 ⒊能量生成：每1 NADH +H+氧化产生3ATP
第四节 非线粒体氧化体系 一、需氧脱氢酶类和氧化酶类 二、微粒体加单氧酶系 （一）加单氧酶（混合功能氧化酶、羟化酶）： ⒈ 利用氧分子在代谢物中加入一个氧原子； ⒉ 需NADPH 提供电子，黄素蛋白（辅基FAD ）、铁氧还蛋白 （辅基Fe-S ）Cyt-P450传递电子。 ⒊ 参与类固醇激素、胆汁酸及胆色素的生成和生物转化作用 RH + NADPH + H + + O 2 → ROH + NADP + + H 2O （二）加双氧酶：利用氧分子在代谢物中加入2个氧原子。 三、过氧化物酶体中的酶类 （一）过氧化氢酶(catalase) 又称触酶，其辅基含4个血红素 受氢体 辅酶（辅基）产物不需氧脱氢酶 辅酶需氧脱氢酶 O 2 FMN 或FAD H 2O 2氧化酶 O 2 含Cu H 2O 2H 2O 2 2H 2O + O 2 过氧化氢酶
自由基、活性氧与疾病
自由基、活性氧与疾病 摘要：本文主要介绍了自由基、活性氧与疾病的关系，并简要提出了抑制自由基的办法。 关键词：自由基；活性氧；疾病 Free Radicals, Reactive Oxygen Species and Disease [Abstract] In this article, the interactions of free radicals, reactive oxygen species and disease were mainly introduced. A brief overview of the free radical scavenging capacities is introduced. [Key words] Free Radicals；Reactive Oxygen Species；Disease； 生物体内绝大多数分子是由氢原子和其它基团组成，相互之间常常可以发生解离作用，形成各带一个电子的基团与氢原子，称为自由基（free radicals）。自由基又叫游离基，其性质非常活泼，几乎可以在任何惰性条件下和任何惰性物质发生连锁反应[1]，即与其它物质反应生成新的自由基，从而导致基质的大量消耗及多种自由基产物的生成。 人体内的自由基分为氧自由基和非氧自由基。氧自由基占主导地位，大约占自由基总量的95%。氧自由基包括过氧化氢分子、羟自由基、过氧化羟基自由基、烷氧基自由基、超氧阴离子自由基等, 它们统称活性氧（reactive oxygen species，ROS），是人体内最为重要的自由基[2]。 有关氧自由基的报道和发现层出不穷，最重要的发现就是它们对人体健康的危害以及它们和许多疾病有着直接的或潜在的联系[3]。目前，自由基已经成为一个大众性的普及概念[4]，人们就像知道细菌、病毒可以通过感染人体而导致疾病一样，知道自由基可以通过对人体内细胞或组织的氧化损伤而在更基础的水平上使人体处于非健康的状态[5]。 1 自由基在机体中的作用 1.1 自由基对机体的损伤 在生理情况下，自由基有增强白细胞对细菌的吞噬和抑制细菌增殖的功能，增强机体抗感染及免疫能力；但在病理情况下，自由基又能对组织产生不可逆的损伤，使组织细胞发生破坏性的化学结构变化，直接导致许多疾病的发生。可见，自由基在机体内的生物活性具有双重性，是个“两面派”。 自由基对机体攻击的途径是多方面的, 既有来自体内的, 也有来自外界的。当机体中的自由基超过一定的量, 并失去控制时,机体就会受到各种各样的伤害, 以致产生各种各样的疑难杂病。下面，简单介绍自由基对机体的损伤作用。（1）自由基在生物体内攻击和破坏生物大分子，引起过氧化变性，产生组织损害和器官退行性变化，导致老年病和衰老的发生。（2）生物体在外界因素如感染、毒物、辐射等作用下，释放自由基，攻击细胞结构，诱发自身抗体，促使自身组织破坏。（3）自由基可能增加毛细血管通透性，使大量血浆渗出，而有效循环血量减少，从而使细胞屏障作用遭到损害，加重休克。（4）自由基是缺血再灌注损伤的一个重要因素，涉及各主要器官组织，因组织缺血、缺氧时细胞内能量分解大于合成，三磷酸腺苷分解产物大量产生，在酶的催化下形成自由基。诸如冠动脉硬化与中风。（5）自由基对视网膜的损伤导致晶状体组织的破坏，从而产生白内障。 值得一提的是，自由基对蛋白质的不利影响是其对生物体危害的最重要方面, 这可从两方面去理解：首先是自由基直接对蛋白质的氧化破坏和因此引起的交联变性，这是衰老形成
清除自由基研究方法汇总
电子自旋共振法（ESR）、高效液相色谱法、化学发光法、比色法、分光光度法 自由基清除剂也称为抗氧化剂，可清除体内多余的自由基，减轻它们对机体的损伤。目前常用超氧阴离子自由基体系（O2-·）、羟基自由基体系（·OH）、二苯代苦味酰基自由基体系（DPPH·）对某抗氧化剂的体外清除自由基能力进行了研究。 其中ESR法和气相色谱法、HPLC 法对自由基的检测灵敏度高，但对设备要求较高，操作复杂，无法在一般实验室普及。而其中的分光光度法、化学发光法、荧光分析法等不需要昂贵的仪器，易于被一般实验室所采用，但测定过程中的干扰因素较多，容易对测定的准确性和灵敏度造成影响。分光光度法最常用。 原理部分： 1.DPPH·法测试机理 DPPH·（二苯代苦味脐基自由基）的甲醇溶液呈深紫色，可见光区最大吸收峰为492nm。当自由基清除剂加入到DPPH·溶液中时，DPPH·的单电子被配对而使其颜色变浅，在最大吸收波长处的吸光度减少，而且颜色变浅的程度与配电子数成化学计量关系，因此，可通过吸光度减弱的程度来评价自由基被消除的情况。 2. 羟基自由基（·OH） 1）邻二氮菲法[70]
实验原理：邻二氮菲可与Fe2+形成络合物，此络合物在510nm 处有最大吸收峰，是一常用的氧化还原指示剂，其颜色变化可敏锐地反映溶液氧化还原状态的改变。H2O2/ Fe2+体系可通过Fenton 反应产生羟自由基，邻二氮菲－Fe2+水溶液被羟自由基氧化为邻二氮菲－Fe3+后，其510nm 最大吸收峰消失。如果反应体系中同时存在羟自由基清除剂，则Fenton 反应产生的羟自由基将被此清除剂全部或部分清除，邻二氮菲－Fe2+络合物受到的破坏将会随之减少。根据这一原理，可建立以A510变化反映自由基清除剂对羟自由基清除作用的比色测定法。 2）水杨酸法[71] 实验原理：羟自由基易攻击芳环化合物产生羟基化合物，因此可用水杨酸捕集Fenton 反应体系中的·OH，生成的2,3－二羟基苯甲酸用乙醚萃取，用钨酸钠和亚硝酸钠显色，然后用分光光度计测定其在510nm 处的吸光值，此吸光值可反映体系中的羟自由基浓度。 3）甲基紫-Fe2+-H2O2反应体系 测定原理：在Fenton反应的基础上加入甲基紫作显色剂，反应式如下： Fe2++H2O2→Fe3++OH-+·OH 甲基紫在酸性溶液中呈现紫色[9],在578nm 处有强吸收。反应产生的·OH 具有高的反应活性，容易进攻高电子云密度点，会与甲基紫中具有高电子云密度的-C=C-基团发生亲电加成反应，使甲基紫褪色。通过测定甲基紫在578nm 处吸光度值的变化可间接测定出·OH 的生成量。当有清除自由基的物质存在时，会阻断甲基紫与·OH 的反应，从而使得甲基紫的颜色有所加重，因此可利用抗氧化剂加入前后溶液吸光度值的变化来评价物质的抗氧化性强弱。