精子特异性乳酸脱氢酶研究进展

中国医药生物技术２００９年２月第４卷第１期ＣｈｉｎＭｅｄＢｉｏｔｅｃｈｎｏｔ，Ｆｅｂｒｕａｒｙ２００９。Ｖ０１．４，Ｎｏ．１

精子特异性乳酸脱氢酶研究进展王琦，王荣

精子特异性乳酸脱氧酶（ｓｐｃｎｎ—ｓｐｅｃｉｆｉｃｌａｃｔａｔｅ

ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ，ＬＤＨ．Ｃ４）特异地存在于鸟类和哺乳类动物

的睾丸和精子中，与体细胞乳酸脱氧酶Ａ４（ＬＤＨ—Ａ４）和Ｂ４

（ＬＤＨ．Ｂ。）同属于乳酸脱氢酶家族，它们都以烟酰胺腺嘌

呤二核苷酸（ＮＡＤ）为辅酶催化丙酮酸和乳酸的转化，在

能量代谢中发挥重要作用，但ＬＤＨ．ｃ４与体细胞ＬＤＨ相

比又具有一些独特性质。近来，在研制新型避孕药的过程中，

免疫避孕疫苗逐渐引起人们的重视…，免疫法控制生育具有

无药物的毒副作用、管理使用方便、低价、作用相对持久且

可逆等优势。但找到理想的精子特异性抗原是制备免疫避孕

疫苗的关键【２】。用不育患者血清中提取的抗精子抗体

（ＡｓＡｂ）来寻找睾丸ｃＤＮＡ文库表达的抗原候选对象，结

果发现特征性强且免疫效果可靠的免疫原为ＬＤＨ—Ｃ４１３】。

本文主要针对近年来ＬＤＨ．Ｃ４的研究进展及其应用做一

综述。

１ＬＤＨ—Ｃ４概述

１．１ＬＤＨ－Ｃ４的生化性质

在鸟类和哺乳类动物体内ＬＤＨ．Ｃ４是由４个Ｃ弧基

组成的同源四聚体，相对分子质量为１４００００，每个Ｃ哑

基由３３２个氨基酸组成，相对分子质量为３５０００。编码

ｃ亚基的基因不同于编码体细胞ＬＤＨ亚基Ａ、Ｂ的基

因，Ｃ亚基不与Ａ、Ｂ结合。ＬＤＨ．Ｃ４主要存在于牛殖细

胞内，在精母细胞、精子细胞及处于分化成熟阶段的精子尾

的主段和中段的胞质膜上也有明显分布【４】，但最近有报道，

ＬＤＨ．ｃ４也可在卵子中表达【５】。与ＬＤＨ．Ａ４、ＬＤＨ．Ｂ４相比，

ＬＤＨ．Ｃ４在动力学及酶底物卜有其不同之处，其酶活性具有

很好的热稳定性，且３２℃时活性最强【６】。

ＬＤＨ—Ｃ４具有一些独特的化学性质，在３．羟基．３．甲基

丁酸（ＨＭＢ）对酶的抑制效应上，ＬＤＨ．Ｃ４与体细胞同工

酶相比表现出明显的饱和现象，说明其活性中心与体细胞同

工酶有所不同。ＬＤＨ．Ｃ４的低转换数可能是对其生理功能的

一种适应，因为在生殖细胞中产生的乳酸不可能通过血Ｌ液循

环运输到肝脏部位进行转化，大量乳酸的产生将抑制精子的

运动，影响精子的止常生理功能‘７１。Ｍｕｋａｉ和Ｏｋｕｎｏｔ８１研究

发现糖酵解是老鼠精子鞭毛运动所需ＡＴＰ的主要来源，同

时他们结合精子细胞所处的环境中富含大量乳酸的情况，还

提出了在大量细胞外糖酵解底物存在的情况下，精子细胞首

先利用糖酵解获得ＡＴＰ，当糖酵解的底物很少时，精子细

胞即利用线粒体呼吸获得ＡＴＰ。

１，２ＬＤＨ－Ｃ４的基因调控

ＬＤＨ．Ｃ４的表达具有严格的时空调控。Ｇｏｌｄｂｅｒｇｔ９】用?综述?

Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ方法在小鼠初级精母细胞中检测到ＬＤＨ．Ｃ４

ｍＲＮＡ，而在体细胞中则未发现ＬＤＨ．Ｃ４ｍＲＮＡ，说明

ＬＤＨ．Ｃ。的表达具有组织细胞特异性的特点。ＬＤＨ．Ｃ４的合

成及活性也只表现在精子发生的特定阶段。早期的免疫组化

实验表明，小鼠最早在初级精母细胞的粗线期中期表达

ＬＤＨ．Ｃ。，检测分离获得的青春期或成年小鼠的生精细胞的

结果表明，ＬＤＨ．Ｃ４的合成起始于前细线期和细线期／偶线

期，尤其在粗线期精母细胞、圆形精了和浓缩过程的精子细

胞中比较显著，而在成熟精子中则有所下降１１０】，这说明在

由Ａ型精原细胞分化成Ｂ型精原细胞参与精子发生周期

时，ＬＤＨ—Ｃ。基因就开始活化和表达。

ＬＤＨ。ｃ４在睾丸组织的特异性表达表明了ＬＤＨ．Ｃ４基

因在生殖细胞中被激活而在体细胞中受抑制的机制。ＬＤＨ

的３种亚基分别由不同基因表达，ＬＤＨ．ｃ４基因仅在精子

（包括成熟牛精细胞）中表达，而ＬＤＨ．Ａ４、ＬＤＨ．Ｂ。基因

则在体细胞中表达活跃。如果将ＬＤＨ．ｃ４启动子区域转基

因至ＬＤＨ．Ａ４ｃＤＮＡ，结果在转基因小鼠睾丸匀浆中町发现

ＬＤＨ—Ａ４、ＬＤＨ—ｃ４这２种四聚体，提示人类ＬＤＨ—Ｃ４启

动子包含特异的调节序列，用以在精子生成中作为转基因特

殊表达ＬＤＨ．Ａ４，同时并不影响其生育能力ｆ１¨。

Ｚｈｏｕ和Ｇｏｌｄｂｅｒｇｔｌ２１研究发现，人类ＬＤＨ．Ｃｄ基因启

动子区域包括１个ＴＡＴＡ盒、１个ＧＣ盒和２个

ＣＣＡＡＴ结构，其中位于转录起始点上游大约６０ｂｐ处的

ＴＡＴＡ盒结构及１个３ｌｂｐ重叠同文结构，具有在体细胞

中抑制ＬＤＨ．Ｃ４基因表达的作用。基于此，Ｊｅｔｈａｎａｎｄａｎｉ和

Ｇｏｌｄｂｅｒｇ【ｌ３】对ＬＤＨ—Ｃ４启动予活性仅在睾丸组织被激活的

机制进行研究后发现，在含ＴＡＴＡ盒及回文结构区域有

２个重要的蛋白结合位点，其中１个位点可与ＮＦ－Ｉ／ＣＴＦ

族的ＮＦ．Ｉ蛋白成员结合，ＮＦ－Ｉ蛋白与回文结构结合后可

抑制ＬＤＨ．ｃ４基因的表达；他们还发现在快速转染的小鼠

淋巴细胞中，ＮＦ．Ｉ结合位点突变后，ＬＤＨ—Ｃ４启动子的活

性可增强４倍以上，而４种ＮＦ－Ｉ蛋白（ＮＦ－ＩＡ、ＮＦ－ＩＢ、

ＮＦ－ＩＣ、ＮＦ．ＩＸ）的过量表达可使其启动予活性下降２０％～

５０％，但在回文结构ＮＦ－Ｉ结合位点突变的情况下这种过量

表达则不会产生任何影响。这项研究成果在证实ＬＤＨ．Ｃ。

启动子调节基因表达的同时，还提供了１个在调节

ＬＤＨ—ｃ４基因表达中发挥重要作用的蛋白ＮＦ－Ｉ。

作者单位：０４６０００山西省长治学院生化系（王琦）；０４６０１１山西省长

治Ｊｉ生学校（王荣）

通讯作者：王琦，Ｅｍａｉｈｗａｎｇｑｉｗｑ＠１２６．ｃｏｒｎ

收稿日期：２００８—１０一０８

万方数据

中国医药生物技术２００９年２月第４卷第１期ＣｈｉｎＭｅｄＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ，Ｆｅｂｒｕａｒｙ２００９，Ｖ０１．４，Ｎｏ．１５５

另一个值得关注的因素是，在转录肩动子区域包含一小段ＣｐＧ岛序列，此序列在体细胞呈高度甲基化状态，而在睾丸组织中呈去甲基化状态。Ｋｒｏｆｔ等１１４１发现不只一个睾丸特异性基因的表达与这一现象相关，小鼠ＬＤＨ－ｃ４（ｍＬＤＨ．Ｃ４）ＣｐＧ岛序列位于包含１个ＧＣ盒及１个串联的转录激活因子（ＡＴＦ）／ＣＲＥ结合位点的启动子区域，其在睾丸组织中呈去甲基化而在体细胞中呈高度甲基化状态，ＡＴＦ／ＣＲＥ结合位点的甲基化状态改变了蛋白质的结合方式，这种改变在小鼠肝脏、睾丸细胞核抽提物的电泳分析中也已得到证实，说明启动子区域的高度甲基化状态对抑制ＬＤＨ．Ｃ４在体细胞中的转录起重要作用。

１．３ＬＤＨ—ｃ４参与精子获能的信号途径

不管精子细胞是通过线粒体有氧呼吸还是糖酵解获得能量都和ＬＤＨ—Ｃ４密切相关。Ｏ’Ｆｌａｈｅｒｔｙ等［Ｊ５ｌ认为位于细胞质膜的ＬＤＨ—Ｃ。可以将细胞外的丙酮酸还原成乳酸，进入细胞质的乳酸再被细胞质内的ＬＤＨ—Ｃ。氧化成丙酮酸，产生还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（ＮＡＤＨ）。此外，用草氨酸盐抑制老鼠ＬＤＨ．Ｃ。的活性叮阻断老鼠精子获能，进一步说明了ＬＤＨ．Ｃ４和精子能量代谢密切相关【ｌ制。成熟精子是高度分化和被区隔的细胞，基本上没有基冈的转录和翻译，因此蛋白质翻泽后修饰（如蛋白质磷酸化）应该在成熟精子的信号传导中扮演重要角色。随着精予获能进程的推移，精子细胞内一些特殊蛋白质的酪氨酸残基被磷酸化的程度也相应加大，通过对牛和老鼠等哺乳动物的研究发现，蛋白质酪氨酸残基的磷酸化受环磷腺苷／蛋白激酶Ａ（ｃＡＭＰ／ＰＫＡ）信号途径的调控，此外促分裂原活化蛋白激酶（ＭＡＰＫ）信号途径也与精子的获能相关【１７】。

１．４ＬＤＨ－Ｃ．医学免疫学特性

在哺乳动物中，雌性动物不能合成ＬＤＨ．Ｃ４，雄性动物虽然在睾丸的生精过程巾合成ＬＤＨ．ｃ４，但在正常情况Ｆ血睾屏障可使其与免疫系统相隔离。因此对于雌性和雄性动物，无论是自身合成还是外源性的ＬＤＨ．Ｃ。都将被机体的免疫系统识别为异己成分，当免疫系统与之接触时，ＬＤＨ—Ｃ４作为一种抗原物质可激发机体免疫系统产生免疫应答反应。而用纯化ＬＤＨ．Ｃ４免疫小鼠的实验结果也证明，ＬＤＨ．Ｃ４能够引起特异性免疫应答反应，包括体液免疫和细胞免疫【Ｉ８１。

ＬＤＨ—ｃ４抗血清对大鼠有生殖抑制作用。精子表面吸附有许多抗原，该抗原可作为在女性生殖道内抗ＬＤＨ—Ｃ４抗体与ＬＤＨ．Ｃ４的相互作用位点，抗ＬＤＨ－Ｃ４抗体与该位点结合后可使精子失活，但不能使伞部精子丧失活性。抗ＬＤＨ．ｃ４抗体属凝集抗体，精子凝集实验证实精了凝集是精子膜表面抗原与抗体相瓦作用的结果，应用混合抗球蛋白实验和免疫珠检测法检测精子膜上的抗精子抗体后证实，存在于精子膜上的抗ＬＤＨ．Ｃａ抗体为ＩｇＧ抗体，可与精子膜上的ＬＤＨ．Ｃ４结合而干扰精子的正常生理活动ｌｌ３１。

２ＬＤＨ－Ｃ。的医学临床检测应用研究

ＬＤＨ．ｃ４的临床意义在于，一方面町作为临床诊断指标对不育患者进行检验，为采取适当治疗措施提供依据；另一方面从免疫角度将ＬＤＨ．ｃ４作为抗原，为开展有意义的免疫避孕研究开辟广阔前景。

２．１精液质量的评价指标

用电泳技术和高亲和性底物测定分析ＬＤＨ—Ｃ。的活性，是评价人精子正常与否以及受精能力好坏的客观指标。ｌ临床发现有０．５％的不育患者精子计数正常，但精子ＬＤＨ?Ｃ４缺如，分析可能是ＬＤＨ－ｃ４基因缺失以致精子能量代谢障碍，活力下降：而某些严重少精症患者的ＬＤＨ—Ｃ４活性很高，提示其精予发生正常；还有些精子计数正常的不育患者的ＬＤＨ．Ｃ４活性低下，提示其精子分化受损或被抑制ｉｌ引。由此可见测定ＬＤＨ．Ｃ４活性即可罄定精液质量。邓顺美等脚１对不育症患者的ＬＤＨ—Ｃ。活性进行了测定，采用ＰＡＧＥ对可生育组与不育组精子的ＬＤＨ．Ｃ。进行全谱酶染色和ＬＤＨ—Ｃ４特异性染色，结果显示生育组与不育组均只出现ＬＤＨ—Ｃ４一条区带，且生育组ＬＤＨ．Ｃ４染色条带显色明显深于不育组。上述实验均为男性不育症诊断提供了可靠依据。

２．２免疫避孕疫苗的研制与开发

用ＬＤＨ—Ｃ。免疫雄性个体也能达到避孕效果，但目前仍不完全清楚ＬＤＨ．ｃ４免疫雄性个体后其干扰精子功能的具体机制。研究发现ＬＤＨ．Ｃ４免疫雄性个体的精子在游向输卵管的途中并未受阻，但却使未用ＬＤＨ．Ｃ４免疫的雌性个体受孕率大大下降，而在此过程中出现的精子聚集现象很可能是导致牛育能力下降的原因【２１１。另据报道，ＬＤＨ．Ｃ４免疫雄性个体町引发睾丸炎和自身免疫反应，所以也不能排除抗体与补体介导的精子溶解作用所导致的生育能力下降【２２１，因此对雄性个体应用ＬＤＨ—Ｃ４免疫避孕要慎重，必须排除自身免疫反应的影响。Ｇｏｌｄｂｅｒｇ等【２３】发现，雄性狒狒在用包含ＬＤＨ—Ｃ４的Ｂ细胞表位和破伤风抗毒泰。Ｔ细胞表位的混合肽免疫后，其精子在与透明带结合能力下降的同时，并未产生睾丸炎等自身免疫性疾病。

２．３蛋白与基因疫苗的研究

ＬＤＨ．ｃ４独特的免疫学特性引起了许多科学家的兴趣，因此也被多数学者当作免疫避孕研究模型进行了大量的蛋白免疫不育研究。Ｏ’Ｈｅｍ等Ⅲｌ用ＬＤＨ．Ｃ４或其部分片段免疫注射小鼠和兔等个体后，免疫个体都产生了针对ＬＤＨ．ｃ４的特异性免疫应答，生育率降低，但免疫原性较差，免疫避孕效果并不理想；接下来他们采取对ＬＤＨ．Ｃ。残基进行化学修饰、注射弗氏佐剂、将分离或合成的ＬＤＨ—Ｃ４部分片段与白喉毒素（ＤＴ）相连等方法提高其免疫原性，虽然避孕效果有所提高，但仍存在抗原纯化工艺复杂、成本昂贵以及需多次强化注射等问题使其实际应用受到制约。但随着分子生物学的发展以及黏膜免疫研究和ＤＮＡ疫莳技术的问世等必将使基因免疫避孕成为可能，ＬＤＨ．Ｃ４免疫避孕的应用研究也将随之进入一个新阶段。

随着基因重组技术及慕因载体传递系统的迅速发展，２０世纪９０年代初基因免疫技术问世，该技术的核心是将

万方数据

编码抗原的核酸序列组装到含有必要表达调控元件的真核表达载体中构建核酸疫苗，然后将其导入动物体内，重组的核酸疫苗町以利用宿丰体内的酶系合成外源基因编码蛋白，从而诱发宿主对该外源蛋白产牛免疫应答，从而达到免疫目的。Ｓｒｉｎｉｖａｓａｎ等【２５１将人精子表面蛋白Ｓｐｌ０的基因克隆趸表达载体中并感染沙ｌ＇Ｊ氏菌，然后喂养小鼠，以沙门氏菌作为携带者，将Ｓｐｌ０基因带入小鼠体内并进入消化道上皮细胞，结果在小鼠的生殖道中检测到抗Ｓｐｌ０抗体。Ｂｉｒｄ等嘶】将狐的ＬＤＨ．Ｃ４基冈与载体连接并通过沙门氏菌感染狐后，在其唾液中也检测到抗ＬＤＨ．Ｃ４抗体，而且还降低了狐的生育率。

上述研究工作一方面提示将ＬＤＨ，Ｃ４基因与载体连接构建的免疫避孕疫苗可以通过口服途径免疫动物并在机体内合成ＬＤＨ．Ｃ４，同时也证实在体内合成的ＬＤＨ．Ｃ４可刺激机体黏膜免疫系统产生分泌型抗体，表明通过口服ＬＤＨ．Ｃ４基因疫苗诱导动物不育将成为叮能。

３结语

免疫避孕疫苗的前景已吸引了世界各国的科学工作者和制药公司，相信随着分子生物学技术的发展，我们必将在分子水平，尤其是基因水平对ＬＤＨ．Ｃ４基因的调节和免疫机制有更深入的认识，从而对以ＬＤＨ．Ｃ４为基础的免疫避孕疫苗的研制开发提供可靠的理论依据，以充分发挥其免疫避孕优势。

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【２４】Ｏ’Ｈｅｍ

ＰＡ，Ｂａｍｂｒａ

ＣＳ，ＩｓａｈａｋｉａＭ，ｅｔａ１．ＲｅｖｅｒｓｉｂｌｅｃｏｎＷａｃｅｐｆｉｏｎｉｎｆｅｍａｌｅｂａｂｏｏｎｓｉｍｍｕｎｉｚｅｄｗｉｔｈａｓｙｎｔｈｅｔｉｃｅｐｉｔｏｐｅｏｆｓｐｅｒｍ—ｓｐｅｃｉｆｉｃｌａｃｔａｔｅｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ．ＢｉｏｌＲｅｐｒｏｄ，１９９５，５２（２）：３３１—３３９．

【２５】ＳｒｉｎｉｖａｓａｎＪ，ＴｉｎｇｅＳ，ＷｒｉｇｉｎＲ，ｃｔａ１．ＯｒａｌｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎｗｉｔｈａｔｔｅｎｕａｔｅｄＳａｌｍｏｎｅｌｌａｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇｈｕｍａｎｓｐｅｒｍａｎｔｉｇｅｎｉｎｄｕｃｅｓａｎｔｉｂｏｄｉｅｓｉｎｓｅｒｕｍａｎｄｔｈｅｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅｔｒａｃｔ．ＢｉｏｌＲｅｐｒｏｄ，１９９５，５３（２）：４６２－４７１．

【２６】ＢｉｒｄＰ＇ＨａｙｅｓＣ，ｄｅＪｅｒｓｅｙＪ，ｅｔａ１．Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎａｎｄｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ

ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔｏｆＳａｌｍｏｎｅｌｌａｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ

ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇｆｏｘｓｐｅｒｍ

ＬＤＨ－Ｃ４．ＲｅｐｒｏｄＦｅｒｔｉｌＤｅｖ，１９９８，１０（３）：２２５—２３１．

万方数据

人类辅助生殖技术和人类精子库伦理原则人类辅助生殖技术

附件3 人类辅助生殖技术和人类精子库伦理原则 人类辅助生殖技术是治疗不育症的一种医疗手段。为安全、有效、合理地实施人类辅助生殖技术，保障个人、家庭以及后代的健康和利益，维护社会公益， (一) 1.综合考虑患者病理、生理、心理及社会因素，医务人员有义务告诉患者目前可供选择的治疗手段、利弊及其所承担的风险，在患者充分知情的情况下，提 2. 3.不育夫妇对实施人类辅助生殖技术过程中获得的配子、胚胎拥有其选择处理方式的权利，技术服务机构必须对此有详细的记录，并获得夫、妇或双方的书 4.患者的配子和胚胎在未征得其知情同意情况下，不得进行任何处理，更不得进行买卖。 (二) 1.人类辅助生殖技术必须在夫妇双方自愿同意并签署书面知情同意书后方 可实施； 2.医务人员对人类辅助生殖技术适应症的夫妇，须使其了解：实施该技术的必要性、实施程序、可能承受的风险以及为降低这些风险所采取的措施、该机构稳定的成功率、每周期大致的总费用及进口、国产药物选择等与患者作出合理选 3.接受人类辅助生殖技术的夫妇在任何时候都有权提出中止该技术的实施， 4.医务人员必须告知接受人类辅助生殖技术的夫妇及其已出生的孩子随访 5.医务人员有义务告知捐赠者对其进行健康检查的必要性，并获取书面知情

(三) 1.医务人员有义务告知受者通过人类辅助生殖技术出生的后代与自然受孕分娩的后代享有同样的法律权利和义务，包括后代的继承权、受教育权、赡养父 2.医务人员有义务告知接受人类辅助生殖技术治疗的夫妇，他们通过对该技术出生的孩子(包括对有出生缺陷的孩子)负有伦理、道德和法律上的权利和义 3.如果有证据表明实施人类辅助生殖技术将会对后代产生严重的生理、心理 4.医务人员不得对近亲间及任何不符合伦理、道德原则的精子和卵子实施人 5. 6. 7、在尚未解决人卵胞浆移植和人卵核移植技术安全性问题之前，医务人员不得实施以治疗不育为目的的 8.同一供者的精子、卵子最多只能使5 9. (四) 1.医务人员必须严格贯彻国家人口和计划生育法律法规，不得对不符合国家 2. 3. 4. 5.医务人员不得进行各种违反伦理、道德原则的配子和胚胎实验研究及临床 (五) 1.互盲原则：凡使用供精实施的人类辅助生殖技术，供方与受方夫妇应保持互盲、供方与实施人类辅助生殖技术的医务人员应保持互盲、供方与后代保持互

乳酸脱氢酶制备

乳酸脱氢酶制备 原理: 乳酸脱氢酶（LDH）（EC1.1.1.27）存在于具糖无氧代谢途径的细胞中，为水溶性酶，催化如下反应： L（+）—乳酸+NAD+ →丙酮酸 + NADH +H+ 乳酸脱氢酶最早从牛心中分离并获结晶。制备的方法为捣碎心肌组织用水抽提，磷酸钙胶吸附，硫酸铵分级盐析及有机溶剂沉淀，最后结晶出乳酸脱氢酶。 乳酸脱氢酶活力检测原理是在pH10.0的条件下，LDH催化NAD±还原生成NADH。NADH在340nm有最大吸收，摩尔消光系数为6.2×103，NADH的分子量为663.44。 LDH活力单位定义为：25℃、每分钟催化生成1微摩尔NADH的酶量为1个活力单位。用紫外分光光度计测定酶反应进程的OD340的增量，可求出制备样品中的LDH活力。 试剂： (1)CaCl2?6H2O (2)Na3PO4 (3)冰乙酸 (4)0.2mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.2） (5)0.1mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.2） (6)0.3饱和度的硫酸铵溶液（19.5g/100ml） (7)丙酮

(8)硫酸铵粉末 (9)0.5mol/L DL-乳酸钠。 (10)2mmol/L NAD+溶液：称取133mg NAD+，溶于5ml蒸馏水中，加入约0.15ml 1mol/L NaOH 调pH为6.0，定容10ml，冰箱贮存。(11) 0.1mol/L pH10.0甘氨酸-氢氧化钠缓冲液 A液0.2mol/L甘氨酸溶液：称取15.01g甘氨酸用蒸馏水溶解，定容1L。 B液0.2mol/L NaOH溶液：称取8gNaOH用蒸馏水溶解，定容1L。 取100mlA液与64.0mlB液混合，蒸馏水定容200ml。 操作： 一、磷酸钙胶制备 （1）称取19.8g CaCl2?6H2O，溶于150ml蒸馏水中，用自来水稀释成1600ml。 （2）称取22.8g Na3PO4?12H2O溶于150ml蒸馏水中。 （3）将两溶液混合，用冰乙酸调pH至7.4，室温下放置，使磷酸钙胶沉淀。 （4）吸去上清液，4000r/min离心3min，收集胶体备用。 二、 LDH制备 1、LDH水提取 （1）取100g新鲜或短期冰冻保存的牛心，去除脂肪、血管，称重，切成小块，低温下绞碎。 （2）加入400ml冰冷的蒸馏水，冰浴中搅拌，提取20min。

血清乳酸脱氢酶同工酶测定

血清乳酸脱氢酶同工酶测定 （醋酸纤维素薄膜电泳法） [原理] 先将血清在醋酸纤维素薄膜进行电泳使乳酸脱氢酶的同工酶分离，然后在薄膜上进行酶反应，显色试剂中包括有底物（乳酸）、NAD+、吩嗪二甲酯硫酸盐（PMS）和碘硝基四唑蓝（INT），NAD+和PMS起递氢作用，INT最后接受氢被还原生成紫色的甲臜类化合物。其反应如下： LD 乳酸+NAD+丙酮酸+NADH2 NADH2+PMS NAD++PMSH2 PMSH2 +INT PMS+INTH2 [试剂] 1．PH8.6巴比妥缓冲液（离子强度0.05）：称取巴比妥钠10.3g，巴比妥1.84g，溶于热的蒸馏水中，冷后加蒸馏水至1L。 2．0.1mol/LpH7.5磷酸缓冲液：称取磷酸二氢钾2.16g，磷酸氢二钠 （Na2 HPO4.2H2O）30.13g, 溶于蒸馏水中，并稀释至1L。 3．0.5mol/L乳酸钠溶液：吸取60%DL—乳酸钠溶液9.25ml,加蒸馏水至100ml。 4．显色试剂：临用前配制下列试剂： （1）1mg/ml吩嗪二甲酯硫酸盐（PMS）水溶液； （2）辅酶Ⅰ（NAD+）10mg，溶于pH7.5磷酸缓冲液1ml； （3）碘硝基四唑蓝[氯化2-（4-碘苯基）-3-（4-硝基苯基）-5-苯基四唑]（INT）12mg，溶于pH7.5磷酸缓冲液3ml中； （4）0.5 mol/L乳酸钠溶液1ml。 其中（2）、（3）、（4）混合后为甲液，（1）为乙液；用时以甲液∶乙液=20∶1混合。应用前，将上述溶液充分混和；但PMS水溶液加入量为0.2ml，且应待其他三种溶液混和后再加。 4．洗脱液：正丙醇9份与二甲亚砜1份混匀即可。

人类精子库基本标准和技术规范1

附件2： 人类精子库基本标准和技术规范 一、人类精子库基本标准 人类精子库是以治疗不育症及预防遗传病和提供生殖保险等为目的，利用超低温冷冻技术，采集、检测、保存和提供精子。 （一）机构设置条件。 1、人类精子库必须设置在持有《医疗机构执业许可证》的综合性医院、专科医院或持有《计划生育技术服务执业许可证》的省级以上（含省级）计划生育服务机构内，其设置必须符合《人类精子库管理办法》的规定； 2、中国人民解放军医疗机构中设置人类精子库的，根据两个《办法》规定，由所在省、自治区、直辖市卫生厅局或总后卫生部科技部门组织专家论证评审、审核，报国家卫生部审批； 3、中外合资、合作医疗机构，必须同时持有卫生部批准证书和原外经贸部（现商务部）颁发的《外商投资企业批准证书》； 4、人类精子库必须具有安全、可靠、有效的精子来源；机构内如同时设有人类精子库和开展人类辅助生殖技术，必须严格分开管理； 5、设置人类精子库必须获得卫生部的批准证书。 （二）人类精子库基本任务。 1、对供精者进行严格的医学和医学遗传学筛查，并建立完整的资料库； 2、对供精者的精液进行冷冻保存，用于治疗不育症、提供生殖保险等服务； 3、向持有卫生部供精人工授精或体外受精-胚胎移植批准证书的机构提供健康合格的冷冻精液和相关服务； 4、建立一整套监控机制，以确保每位供精者的精液标本最多只能使5名妇女受孕； 5、人类精子库除上述基本任务外，还可开展精子库及其相应的生殖医学方面的研究，如：供精者的研究、冷藏技术的研究和人类精子库计算机管理系统的研究等。 （三）工作部门设置及人员要求。 1、工作部门设置 根据人类精子库的任务，下设4个工作职能部门： （1）精液采集部门：筛选献精者，采集精液； （2）精液冷冻部门：精液冷冻与保存； （3）精液供给部门：受理用精机构的申请、审核其资格并签定供精合同和供给精液；（4）档案管理部门：建立供精者及用精机构人工授精结局的反馈信息等档案管理制度和计算机管理系统。 2、工作人员要求 （1）精子库至少配备5名专职专业技术人员，人员构成如下： ①配备1名具有高级专业技术职称、从事生殖医学专业的执业医师； ②配备1名具有医学遗传学临床经验中级以上职称的技术人员； ③配备实验技师2名，要具备男科实验室操作技能并熟悉世界卫生组织精液分析标准程序、生物细胞冷冻保存有关的知识及冷冻保存技术，掌握传染病及各类感染特别是性病的检测及其它临床检验知识和技能； ④配备管理人员1名，具有计算机知识和操作技能并有一定管理能力。 （2）所有工作人员必须具备良好的职业道德。

乳酸脱氢酶LDH法操作说明

LDH法细胞毒性检测： 原理：乳酸脱氢酶在胞浆内含量丰富,正常时不能通过细胞膜,当细胞受损或死亡时可释放到细胞外,所以细胞死亡数目与细胞培养上清中LDH活性成正比,用比色法测定实验孔LDH 活性,并与靶细胞对照孔进行比较,可计算效应细胞对靶细胞的杀伤百分率 LDH（乳酸脱氢酶）是一种极为稳定的细胞质酶，存在于正常细胞的胞质中，一旦细胞膜受损，LDH 即被释放到细胞外；LDH催化乳酸形成丙酮酸盐，和INT（四唑盐类）反应转化成红色甲臢化合物，可通过酶标仪进行检测。颜色形成的量与裂解细胞的数目成正比。应用一个96-孔平板读数计收集可见光波长的吸收值数据。这个分析可用于测量在细胞介导的细胞毒性分析中细胞膜的完整性，这种情况下目标细胞被效应细胞裂解，可判断细胞受损的程度。 乳酸脱氢酶（LDH）在胞质内含量非常丰富，细胞处于正常状态下其不能通过细胞膜，但当细胞受到损伤或死亡时便可释放到细胞外，此时细胞培养液中LDH 的活性与细胞的死亡数目呈正比，通过用比色法测定并与靶细胞对照孔的LDH 活性进行比较，可计算出效应细胞对靶细胞的杀伤百分数。该实验方法操作简便、快速，可应用于CTL 和NK 细胞活性测定及药物、化学物质或放射所引起的细胞毒性，目前已有LDH 法测定CTL 活性的试剂盒。 同时设4个对照:靶细胞最大释放组、体积校正对照组、背景对照组和自然释放组 按5∶1、10∶1、20∶1（效应细胞∶靶细胞） 细胞过度生长、密度过高、离心速度过大、培养箱内外温差过大等因素会造成细胞自然释放乳酸脱氢酶

操作流程： 设立效应细胞孔（不同浓度的效应细胞设立效应细胞自发释放组）：50μl效应细胞+50μl培养基 实验组：靶细胞不变，改变效应细胞：50μl效应细胞+50μl靶细胞 设立靶细胞自发释放组：50μl靶细胞+50μl培养基 设立靶细胞最大释放组：50μl靶细胞+50μl培养基+10μl裂解液（10×） 设立体积校正对照组：100μl培养基+10μl裂解液（10×） 设立背景对照组：100μl培养基 250g离心4分钟 37℃孵育4小时 离心前45分钟添加裂解液（10×）至靶细胞最大释放组 250g离心4分钟 取上清50μl转移至另一孔板 （可选）于独立的孔中加50μl LDH阳性对照（1：5000） 于每孔中添加50μl再次稀释的底物混合物 室温避光孵育30分钟 添加50μl终止溶液 490nm测吸收值 1.靶细胞接种数目的优化 1.1.设立检测板 1.1.1.准备靶细胞：调整细胞浓度0, 5,000, 10,000, 20,000/100μl，使用与细胞毒分析相同的培养 基及孔板终体积。例如，若以50μl/孔的靶细胞及50μl/孔的效应细胞接种，则以100μl/孔梯

LDH同工酶

LDH同工酶 定义1：具有相同底物，但电泳迁移率不同的酶。可来简介 用电泳方法将LDH同工酶分离，分析其酶谱，发现脊椎动物各组织中有五条酶带。每条酶带的酶蛋白都是由四条肽链组成的四聚体，LDH有两类肽链，A（M）或B（H），各有不同同工酶 的免疫性质，按排列组合可形成符合于电泳酶带数的五种同工酶。LDH1及LDH5分别由纯粹的4条B链（B4）和4条A链（A4）形成，称为纯聚体；而LDH2、LDH3和LDH4都是由两类肽链杂交而成的，分别可写成AB3、A2B2、A3B，称为杂交体。 编辑本段分类 基因性同工酶或原级同工酶 由不同基因产生的肽链而衍生的同工酶。这里所指的不同基因可以在不同染色体或在同一染色体的不同位点上，例如LDH中A、B两条肽链的基因分别在第11及第12对染色体上，唾液淀粉酶和胰淀粉酶的基因在第1对染色体的不同位点上。这类同工酶因分子结构差异较大，彼此间无交叉免疫。但同工酶的不同基因也可以是同源染色体的等位基因，这种成对的等位基因上两个基因结构不同的情况，在遗传学上称为杂合子。杂合子在同一个体中可合成同一种酶的两种不同

肽链，或亚基，这两种亚基尚可杂交，形成同工酶。在生物群体的不同个体中，有时同一基因位点上的一个（对杂合子来说）或一对（对纯合子来说）基因也可发生遗传变异，从而产生变异的酶，出现群体中的遗传多态。不同个体中这些遗传变异的酶也属于基因性同工酶。其在免疫学上常有交叉反应。由同一基因转录出前体核糖核酸（前体RNA），经过不同的加工剪接过程而生成多种不同的mRNA，再转译出多种肽链，从而组成同工酶。这类同工酶因发现较晚，在国际上尚无统一命名，彼此间也有交叉免疫。 次生同工酶或转译后同工酶 由同一基因、同一mRNA转译生成原始的酶蛋白，再经过不同的化学修同工酶试剂 饰，如酰胺基水解、磷酸化、肽链断裂、糖链上的糖基增减等形成不同结构的酶蛋白，它们的免疫性往往相同。国际生化协会命名委员会（CBN）建议只将原级同工酶列为同工酶，而将次生同工酶称为共合酶，但不少生化学家还是把上述各类酶的不同结构形式都包括在广义的同工酶概念中。 编辑本段功能 在动、植物中，一种酶的同工酶在各组织、器官中的分布和含量不同，形成各组织特异的同工酶谱，叫做组织的多态性，体现各组织的特异功能。大多数基因性同工酶由于对底物亲和力不同和受不同因素的调节，常表现不同的生理功能，例如动物肝脏的碱性磷酸酯酶和肝脏的排泄功能有关，而肠粘膜的碱性磷酸酯酶却参与脂肪和钙、磷

实验室检查正常值大全

实验室检查结果及正常值 （一）血常规 红细胞（RBC）成年男性：（4.0～5.5）×1012／L 成年女性：（3.5～5.0）×1012／L 新生儿：（6.0～7.0）×1012／L 血红蛋白（Hb）成年男性：120～160g／L 成年女性：1l0～150g／L 新生儿：170～200g／L 白细胞（WBC）成人：（4.0～10.0）×109／L；新生儿：（15.0～20.0）×109／L 中性杆状核粒细胞：1％～5％ 中性分叶核粒细胞：50％～70％ 嗜酸性粒细胞：0.5％～5％ 嗜碱粒性细胞：O％～1％ 淋巴细胞：20％～40％ 单核细胞：3％～8％ 血小板（PLT）（100～300）×109／L （二）尿常规 1.酸碱度（pH）5～8 2.比重（SG）1.015～1.025 3.尿蛋白（Pro）定性定量试验 Pro定性：阴性（neg），Pro定量≤O.15g／24h 4.葡萄糖（Glu）定性：阴性（neg）、糖定量：<2.8mmol／24小时（0.5g／24小时） 5.酮体（Ket）阴性（neg） 6.胆红素（Bil）和尿胆原（Ubg）均为阴性（neg） 7.亚硝酸盐（Nit）阴性（neg） 8.白细胞（Leu）<25／μl 9.红细胞或血红蛋白（潜血试验）（Ery或OB）≤l0／μl 10.尿沉渣镜检白细胞<5／HP（每高倍镜视野）红细胞<3／HP（每高倍镜视野）（三）粪常规 1.颜色黄褐色成型便 2.镜检 （1）白细胞：正常粪便不见或偶见； （2）红细胞：正常粪便无红细胞； （3）细菌：主要为大肠杆菌和肠球菌； （4）虫卵。 3.粪便潜血试验（occult blood test，OBT）正常粪便OBT阴性。 （四）痰液检验 一般性状检查正常人痰液呈无色或灰白色。 化脓性感染时呈黄色；

酶的本质和特性

酶 一、酶的本质：酶是由活细胞产生的具有催化活性和高度选择性的特殊蛋白质。按其组成的不同，将酶分成单纯蛋白质和结合蛋白质两大类。例如，大多数水解酶属单纯由蛋白质组成的酶; 黄素单核苷酸酶则属由酶蛋白和辅助因子组成的结合蛋白酶。结合蛋白质中的酶蛋白为蛋白质部分，辅助因子为非蛋白质部分，两者结合成全酶，只有全酶才有催化活性 二、酶的形态结构 所有的酶都含有C、H、O、N四种元素。按照酶的化学组成可将酶分为单纯酶和复合酶两类。 单纯酶分子中只有氨基酸残基组成的肽链。 结合酶分子中则除了多肽链组成的蛋白质，还有非蛋白成分，如金属离子、铁卟啉或含B 族维生素的小分子有机物。结合酶的蛋白质部分称为酶蛋白，非蛋白质部分统称为辅助因子（cofactor），两者一起组成全酶；只有全酶才有催化活性，如果两者分开则酶活力消失。非蛋白质部分如铁卟啉或含B族维生素的化合物若与酶蛋白以共价键相连的称为辅基（prosthetic group），用透析或超滤等方法不能使它们与酶蛋白分开；反之两者以非共价键相连的称为辅酶（coenzyme），可用上述方法把两者分开。辅助因子有两大类，一类是金属离子，且常为辅基，起传递电子的作用；另一类是小分子有机化合物，主要起传递氢原子、电子或某些化学基团的作用。 结合酶中的金属离子有多方面功能，它们可能是酶活性中心的组成成分；有的可能在稳定酶分子的构象上起作用；有的可能作为桥梁使酶与底物相连接。辅酶与辅基在催化反应中作为氢（H+和e）或某些化学基团的载体，起传递氢或化学基团的作用。体内酶的种类很多，但酶的辅助因子种类并不多，常见到几种酶均用某种相同的金属离子作为辅助因子的例子，同样的情况亦见于辅酶与辅基，如3-磷酸甘油醛脱氢酶和乳酸脱氢酶均以NAD+作为辅酶。酶催化反应的特异性决定于酶蛋白部分，而辅酶与辅基的作用是参与具体的反应过程中氢（H+和e）及一些特殊化学基团的运载。 酶属生物大分子，分子质量至少在1万以上，大的可达百万。酶的催化作用有赖于酶分子的一级结构及空间结构的完整。若酶分子变性或亚基解聚均可导致酶活性丧失。一个值得注意的问题是酶所催化的反应物即底物（substrate），却大多为小分物质它们的分子质量比酶要小几个数量级。 酶的活性中心（active center）只是酶分子中的很小部分，酶蛋白的大部分氨基酸残基并不与底物接触。组成酶活性中心的氨基酸残基的侧链存在不同的功能基团，如-NH2。-COOH、-SH、-OH和咪唑基等，它们来自酶分子多肽链的不同部位。有的基团在与底物结合时起结合基团（binding group）的作用，有的在催化反应中起催化基团（catalytic group）的作用。但有的基团既在结合中起作用，又在催化中起作用，所以常将活性部位的功能基团统称为必需基团（essential group）。它们通过多肽链的盘曲折叠，组成一个在酶分子表面、具有三维空间结构的孔穴或裂隙，以容纳进入的底物与之结合并催化底物转变为产物，这个区域即称为酶的活性中心。 而酶活性中心以外的功能集团则在形成并维持酶的空间构象上也是必需的，故称为活性中心以外的必需基团。对需要辅助因子的酶来说，辅助因子也是活性中心的组成部分。酶催化反应的特异性实际上决定于酶活性中心的结合基团、催化基团及其空间结构。

心功能检查

心功能检查 乳酸脱氢酶（LDH）测定 乳酸脱氢酶是能催化乳酸脱氢生成丙酮酸的酶，几乎存在于所有组织中，如肝脏、心脏、骨骼肌、肺、脾脏、脑、红细胞等组织细胞的胞浆和线粒体中。LD 主要存在于细胞质中。 【参考值范围】 109~245U/L乳酸法（37℃) 【临床意义】 1.乳酸脱氢酶活性增高可作为诊断心肌梗塞的一个有用指标。心肌梗塞发生后12-48小时，LDH开始升高，2-4天达到高峰，8-9天恢复正常。 2.肝炎、肺梗塞、恶性肿瘤等也可使LDH升高。肿瘤转移所致胸腹水中LDH 往往也升高。 3.降低：X线照射。 【注意事项】： 1.溶血、妊娠、剧烈运动等可导致血清LDH水平升高. 2.普卡霉素、吗啡、磺胺甲基异恶唑、磺胺甲氧嗪等药物可影响结果。 乳酸脱氢酶同工酶（LD-1）测定 人组织中的乳酸脱氢酶(LDH)用电泳法可以分离出5种同工酶区带，根据其电泳迁移率的快慢，依次命名为LDH1，LDH2，LDH3，LDH4，LDH5。不同组织的乳酸脱氢酶同工酶分布不同，存在明显的组织特异性，人心肌、肾和红细胞中以LDH1和LDH2最多，骨骼肌和肝中以LDH4和LDH5最多，而肺、脾、胰、甲状腺、肾上腺和淋巴结等组织中以LDH3最多。LDH是由H(心肌型)和M(骨骼肌型)两类亚基组成，分别形成LDH1(H4)、LDH2(H3M)、LDH3(H2M2)、LDH4(HM3)、LDH5(M4)。 【参考值范围】： 23~72U/L 【临床意义】： 心肌细胞LD活性远高于血清数百倍，尤以LDH1和LDH2含量最高。急性心肌梗塞时，血清LDH1和LDH2显著升高，约95%的病例的血清LDH1和LDH2比值大于1，且LDH1升高早于LDH总活性升高。病毒性和风湿性心肌炎及克山病心肌损害等，病人的血清LDH同工酶的改变与心肌梗塞相似。LDH1/LDH2比值>1还可见于溶血性贫血、恶性贫血、镰形细胞性贫血、肾脏损伤、肾皮质梗塞、心肌损伤性疾病、瓣膜病等。脑干含LDH1较高。颇脑损伤仅累及大脑半球时，只有血清同工酶谱的绝对值增高，而不影响同工酶的相互比值，如果累及脑干时，病人血清LDH1的含量也增高。急性心肌梗塞发病后12～24小时，血清LDH1业已升高。若同时测定LD总活性，可发现LDH1/总LDH的比值对急性心肌梗塞诊断的阳性率与可靠性优于单纯测定LDH1或CK-MB。 肌酸激酶（CK）测定 肌酸激酶（CK）主要存在于心肌、骨骼肌和脑内，在胃肠道、肺和肾内也有少量。当心肌或骨骼肌发生损伤或病变时，此酶释放入血内，使许多血清酶活力增高，故可用于心肌梗塞和骨骼肌疾病的诊断。 【参考值范围】 24~195U/L(速率法) 【临床意义】 1.心肌梗塞发病后3-4小时，CK开始上升，24-36小时达到高峰，2-4天后

揭开人类生殖奥秘 探寻人类胚胎形成全过程

揭开人类生殖奥秘探寻人类胚胎形成全过程(图) 自动播放手动播放网友评论0条来源：搜狐科学 科学家发现人类精子存在独特的“基因签名”，好似一把钥匙，能够开启卵子的受孕之锁

男性制造出的精子进入女性体内 北京时间8月4日消息，据美国每日科学网站报道，英国科学家近日发现了人类精子独特的“基因签名”，对于开启卵子的生育能力和孕育新生命起到了关键作用。这一发现将对人们更好地了解受孕的奥秘有帮助。在英国生物技术及生物科学研究理事会资助下，来自利兹大学的大卫·米勒和大卫·埃尔斯博士与来自布拉德福德大学的马丁·布林克沃思博士合作研究，发现精子会写下一种“基因签名”，只能被同物种的卵子所识别。精子的“基因签名”好似钥匙，只有被同物种的卵子识别，才能开启受孕之锁。精子的“基因签名”会促进受精活动发生，也能解释一个物种如何发育出独特的基因特征。埃尔斯博士说，“我们发现哺乳动物精子有‘基因签名’，对卵子的受孕和胚胎的发育至关重要。此前人们并没有发现精子有‘基因签名’，我们认为‘基因签名’存在的时间很久远。” 只有不到1%的精子能冲破最后的屏障抵达目的地 科研人员认为，假如没有正确的“钥匙”来开启生育能力的“锁”，要么就不能成功受精，要么即使受精，也不会正常发育。人们已经知道人类精子DNA排列组合的紊乱会导致男性不育症和受孕失败。而且这种“锁钥”机制还有更深一层的意义。它不仅能解释为什么有些其他方面健康的男性产生的精子却是不育的，也能解释不同的物种是如何进化并保持其特性的。米勒博士说：“直到现在，医学家们还在努力探究先天性男性不育

症。我们的最新研究提供了一种可能的解释，为什么有些精子会存在功能障碍或者不能正常授 如果精子细胞携带的DNA 没有受伤，而且伸展开的话，那么实际上它会有一米多长。为了适应精子细胞核的微小空间，精子DNA就必须要紧紧地卷到一起或排列在一起。利兹大学的研究显示，在人类和老鼠的精子中，并不是所有的DNA都按照同样的方式排列。大部分雄性方的DNA是非常紧凑的压缩在一起，同时有些DNA则排列得不那么紧密。 埃尔斯博士说：“精子细胞中有一种特定的DNA排列方式。而且我们发现，即使在不相关的有生育能力的男性中，这种排列方式也是一样的。这表明这种DNA排列方式与男性生育能力有着直接的关系。” 对精子DNA在空阔的、不太紧密的排列构造下的详细分析显示，这种DNA 携带着很多关键信息，这些信息能够激活导致胚胎发育的重要基因。进一步的研究表明相同的构造存在于几个不相关的捐精者的精子中，更引人注目的是，相似的排列构造存在于老鼠的精子中。

乳酸脱氢酶教案资料

乳酸脱氢酶

乳酸脱氢酶 乳酸脱氢酶是一种糖酵解酶。乳酸脱氢酶存在于机体所有组织细胞的胞质内，其中以肾脏含量较高。乳酸脱氢酶是能催化丙酮酸生成乳酸的酶，几乎存在于所有组织中。同工酶有六种种形式，即LDH-1(H4)、LDH-2(H3M)、LDH-3(H2M2)、LDH-4(HM3)、LDH-5(M4)及LDH-C4，可用电泳方法将其分离。LDH同功酶的分布有明显的组织特异性，所以可以根据其组织特异性来协用诊断疾病。正常人血清中LDH2，〉LDH1。如有心肌酶释放入血则LDH1〉LDH2，利用此指标可以观察诊断心肌疾病。 基本信息 英文名称: LDH(lactate dehydrogenase) 序列信息:1 gsgcnldsar frylmg 长度:16 aa{物种来源:Homo sapiens (human)} 正常范围:血清135.0~215.0U/L; 脑脊液含量为血清的1/10。 乳酸脱氢酶A 简介 乳酸脱氢酶(LDH)分子量为130~140KDa，由两种亚单位组成:H(表示heart)和M(表示muscle)。它们按不同的形式排列组合形成含4个亚基的5种同工酶，即:LDH1(H4)、LDH2(H3M1)、LDH3(H2M2)、LDH4(HM3)、LDH5(M4)。 LDH催化丙酮酸与乳酸之间还原与氧化反应，在碱性条件下促进lactic acid向pyruvic acid方向的反应，而在中性条件下促进pyruvic acid向lactic acid的转化(为逆反应)。LDH 是参与糖无氧酵解和糖异生的重要酶。 由于LDH几乎存在于所有体细胞中，而且在人体组织中的活性普遍很高，所以血清中LDH的增高对任何单一组织或器官都是非特异的。在AMI时升高迟、达峰晚，故对早期诊断价值不大。由于半寿期长(10~163小时)，多用于回顾性诊断，如对入院较晚的AMI病人、亚急性MI的诊断和病情监测。 LDH在组织中的分布特点是心、肾以LDH1为主，LDH2次之;肺以LDH3.LDH4为主;骨骼肌以LDH5为主;肝以LDH5为主，LDH4次之。血清中LDH含量的顺序是LDH2>LDH1>LDH3>LDH4>LDH5. 正常参考值 人组织中的乳酸脱氢酶(LDH)用电泳法可以分离出5种同工酶区带，根据其电泳迁移率的快慢，依次命名为LDH1，LDH2，LDH3，LDH4，LDH5。不同组织的乳酸脱氢酶同工酶分布不同，存在明显的组织特异性，人心肌、肾和红细胞中以LDH1和LDH2最多，骨骼肌和肝中以LDH4和LDH5最多，而肺、脾、胰、甲状腺、肾上腺和淋巴结等组织中以LDH3最多。后来从睾丸和精子中发现了LDHx，其电泳迁移率介于LDH4和LDH5之间。LDH是由H(心肌型)和M(骨骼肌型)两类亚基组成，分别形成LDH1(H4)、LDH2(H3M)、LDH3(H2M2)、LDH4(HM3)、LDH5(M4)。 正常参考值 (1)琼脂糖电泳法: LDH1(28.4±5.3)%; LDH2(41.0±5.0)%;

乳酸脱氢酶同工酶

乳酸脱氢酶同工酶 乳酸脱氧酶有5种同工酶形式，即LDH1、LDH2、LDH3、LDH4、LDH5，可用电泳法进行分离。人体心肌、肾、红细胞以LDH1和LDH2为最多。肝和横纹肌则以LDH4和LDH5为主。脾、胰、甲状腺、肾上腺中LDH3较多。乳酸脱氢酶同工酶是观察心肌疾病、肝胆疾病等的指标之一。 一、正常值 琼脂糖电泳法：LDH2＞LDH1＞LDH3＞LDH4＞LDH5 二、临床意义 (1)、乳酸脱氢酶同工酶结果要与临床症状结合才能做出准确判断。 (2)、LDH1和LDH2升高，且LDH1/LDH2>1见于：急性心肌梗死、溶血性贫血、急性镰刀型红细胞贫血、巨幼红细胞贫血等恶性贫血。急性肾皮质坏死及各种血管内外溶血症(若无LDH1升高，可排除溶血性贫血)。 (3)、LDH5升高：骨骼肌炎症、损伤及退化、肝损伤(肝硬变、肝炎、肝过度充血)、癌。 (4)、单纯LDH1升高：细菌性细胞瘤(如，畸胎瘤、睾丸细胞瘤及卵巢坏死性细胞瘤)。 (5)、总LDH升高而同工酶谱正常见于：心脏病、肝病、骨骼肌病、瘤及其他功能性失调症。对部分癌症患者LDH值越高，预后越不良。

(6)、LDH2、LDH3及LDH4均升高：大量血小板破坏(如：肺栓塞、大量输血等)、淋巴系统疾病(如：传染性单核细胞增多症、淋巴瘤及淋巴性白血病等)。 三、注意事项 (1)、溶血可使LDH1/LDH2失去意义。 (2)、LDH同工酶分布有组织差异性。 ①LDH1：心肌(占酶总量50%以上)>肾>胰腺>膈肌>红细胞。 ②LDH5：肝(占酶总量50%以上)>皮肤>骨髓>关节滑液>白细胞>血小板>胆汁。 ③LDH3：肺>脾>脑>肠>淋巴液>内分泌腺。 ④LDHX(或LD-C2)由成熟睾丸合成，为精子独有，据认为LDHX很可能是乙醇脱氢酶。 ⑤LDH的H亚基突变频度比M亚基高，黑人比白人高且有家族性。H1和M1与H、M性质不同，故电泳谱上可出现复带。

血液生化检查各指标及对应正常值列表

血液生化检查各指标及对 应正常值列表 Prepared on 22 November 2020

血液生化检查各指标及对应正常值列表 （二氧化碳结合力） 2O～30 mmol/L （一氧化碳定性）（—） （a羟丁酸脱氨酶） 90～22O IU/L （磷酸肌酶激酶） 25～170 mmol/L （乳酸脱氢酶） 40～100 mmol/L （激肌酸激酶同功酶） 0～16 （血清白/球蛋白）～2-3g （高密度脂蛋白〕～ mmol/L （低密度低蛋白）～ mmol/L （极低密度脂蛋白） 1～3 mmol/L （C反应蛋白）（—） （免疫球蛋白）～ mg/ml （免疫球蛋白） 9～23 mg/ml （免疫球蛋白）～ ml （铁蛋白） 20～200 ng/ml （蛋白电脉） 3～ % （蛋白电脉）～ % （蛋白电脉）～ % （蛋白电脉）～ % （纤维蛋白原） 2～4g/L （） 44～133 µmol/L

（肌酐清除率） 80～120 ml/分 （血糖）～ mmol/L （血淀粉酶） 40～160 U （补体）～L （抗链O） 1:400以下 （类风湿因子）（—） （肥达氏反应）（—） （外裴氏反应）（—） （癌胚抗原）＜5mg 血生化 项目结果 ----------参考值---------- 谷丙转氨酶-ALT 0 ～ 40 U 尿素～ 7 mmol/L 血肌酐 40 ～ 130 umol/L 血尿酸 180 ～ 410 umol/L 胆固醇～ mmol/L 甘油三脂～ mmol/L 葡萄糖～ mmol/L 总胆红素 3 ～ 24 umol/L 项目谷丙转氨酶-ALT 临床意义正常时，谷-丙主要存在于组织细胞内，以肝细胞含量最多，心肌细胞中含量其次，只有极少量释放血中。所以血清中此酶活力很低。当、心肌病变、

乳酸脱氢酶

乳酸脱氢酶 科技名词定义 中文名称：乳酸脱氢酶 英文名称：lactate dehydrogenase;LDH 定义：广泛存在的催化乳酸和丙酮酸相互转换的酶。L-乳酸脱氢酶(编号：EC 作用于L-乳酸； D-乳酸脱氢酶(编号：EC 作用于D-乳酸，两者均以NAD＋为氢受体。在厌氧酵解时，催化丙酮酸接受由3-磷酸甘油醛脱氢酶形成的NADH的氢，形成乳酸。 应用学科：生物化学与分子生物学（一级学科）；酶（二级学科） 本内容由全国科学技术名词审定委员会审定公布 求助编辑百科名片 催化机理 乳酸脱氢酶是一种糖酵解酶。乳酸脱氢酶存在于机体所有组织细胞的胞质内，其中以肾脏含量较高。乳酸脱氢酶是能催化乳酸脱氢生成丙酮酸的酶，几乎存在于所有组织中。同功酶有五种形式，即LDH－1（H4）、LDH-2（H3M）、LDH－3（H2M2）、LDH-4（HM3）及LDH-5（M4），可用电泳方法将其分离。LDH同功酶的分布有明显的组织特异性，所以可以根据其组织特异性来协用诊断疾病。正常人血清中LDH2，〉LDH1。如有心肌酶释放入血则LDH1〉LDH2，利用此指标可以观察诊断心肌疾病。 目录 基本信息 临床意义 乳酸脱氢酶及其同工酶的简介 血清乳酸脱氢酶（LDH）同工酶测定及意义 乳酸脱氢酶高的原因 乳酸脱氢酶偏低的原因 乳酸脱氢酶（LDH）实验 基本信息 临床意义 乳酸脱氢酶及其同工酶的简介

编辑本段基本信息 英文名称：LDH（lactate dehydrogenase） 序列信息：1 gsgcnldsar frylmg 长度:16 aa{物种来源:Homo sapiens (human)} 正常范围：血清～L； 尿560～2050U/L； 脑脊液含量为血清的1/10。 编辑本段乳酸脱氢酶及其同工酶的简介 乳酸脱氢酶[1]（LD）分子量为135～140KD，由两种亚单位组成：H（表示heart）和M（表示muscle）。它们按不同的形式排列组合形成含4个亚基的5种同工酶，即：LD1（H4）、LD2（H3M1）、LD3（H2M2）、LD4（HM3）、LD5（M4）。 LD催化丙酮酸与乳酸之间还原与氧化反应，在碱性条件下促进lactic acid向pyruvic acid方向的反应，而在中性条件下促进pyruvic acid向lactic acid的转化（为逆反应）。LD是参与糖无氧酵解和糖异生的重要酶。 由于LD几乎存在于所有体细胞中，而且在人体组织中的活性普遍很高，所以血清中LD的增高对任何单一组织或器官都是非特异的。在AMI时升高迟、达峰晚，故对早期诊断价值不大。由于半寿期长（10～163小时），多用于回顾性诊断，如对人院较晚的AMI病人、亚急性MI的诊断和病情监测医学教育`网搜集整理。 LD在组织中的分布特点是心、肾以LD1为主，LD2次之；肺以LD3．LD4为主；骨骼肌以LD5为主；肝以LD5为主，LD4次之。血清中LD含量的顺序是LD2>LD1>LD3>LD4>LD5.

第三章 酶

第三章酶 思考题： 1、什么是酶？酶与化学催化剂有哪些相同点和不同点？ 2、何谓酶作用的专一性？举例说明有哪几种类型？ 3、解释单体酶、寡聚酶和多酶复合体。 4、什么是单纯酶和结合酶？ 5、酶的辅助因子有哪些？什么是辅酶、辅基？二者是如何区分的？ 6、什么叫全酶？全酶中酶蛋白和辅酶在催化反应中各有何作用？ 7、什么是维生物？维生素与辅酶有何联系？ 8、掌握TPP+辅酶、FMN和FAD辅酶、NAD+和NADP+辅酶、辅酶A的结构与功能。 9、何谓酶的活性中心？什么是酶的必需基团？必需基团有几类？它们的功能有哪些？ 10、什么是酶原和酶原的激活？简述胰凝乳蛋白酶原的激活过程。 11、什么是过渡态和活化能？ 12、中间产物学说和诱导契合学说的基本观点如何？ 13、酶作用的高效性的机理有哪些？ 14、什么是酶活力？测定酶活力的基本过程是什么？ 15、什么是酶活力单位？什么是比活力？ 16、影响酶促反应速度的因素有哪些？ 15、底物浓度与酶促反应速度的关系如何？表示其关系的数学表达式是什么？ 16、何谓Km？有何意义？怎样进行测定？ 17、何谓抑制作用？抑制作用有几类？各有何特点？ 18、何谓可逆抑制作用？可逆抑制作用有几类？各有何特点？ 19、举例说明何谓竞争性抑制作用和非竞争性抑制作用？其动力学曲线有哪些特点？ 20、温度和pH对酶反应速度有何影响？ 21、何谓变构酶？何谓变构效应？变构酶动力学曲线有何特点？ 22、以糖原磷酸化酶为例，说明何谓共价调节酶。 23、以哺乳动物乳酸脱氢酶为例，说明何谓同工酶。 24、酶命名的方式有几种？命名的原则是什么？ 25、酶可分为几大类？分类的依据是什么？ 练习题 一、名词解释 1、酶 2、酶作用的专一性 3、全酶 4、辅酶 5、辅基 6、单体酶 7、寡聚酶 8、多酶复合体 9、激活剂10、抑制剂11、别构酶12、同工酶13、酶的活性中心14、酶原及酶原激活15、酶活力16、酶的比活力17、米氏常数(K m值) 18、酶的抑制作用19、可逆抑制作用和不可逆抑制作用20、竞争抑制作用和非竞争性抑制作用21、核酶22、共价调节酶23、维生素 二、英文缩写符号 1、NAD+ 2、NADP+ 3、FAD 4、FMN 5、CoA 6、TPP 三、填空题 1、酶是产生的，具有催化活性的。 2、酶具有和两个最重要特征。 3、影响酶促反应速度的因素有、、、、

乳酸脱氢酶同工酶

乳酸脱氢酶同工酶 【临床意义】 （1）心肌细胞LDH活性远高于血清数百倍，尤以LDH1和LDH2含量最高。急性心肌梗塞时，血清LDH1和LDH2显著升高，约95%的病例的血清LDH1和LDH2比值大于1，且LDH1升高早于LDH总活性升高。病毒性和风湿性心肌炎及克山病，出现心肌损害时，病人的血清LDH同工酶的改变与心肌梗塞相似。LDH1/LDH2比值>1还见于溶血性贫血、恶性贫血、镰形细胞性贫血、肾脏损伤、肾皮质梗塞、心肌损伤性疾病、瓣膜病等。 （2）脑干含LDH1较高。颇脑损伤仅累及大脑半球时，只有血清同工酶谱的绝对值增高，而不影响同工酶的相互比值，如果累及脑干时，病人血清LDH1的含量也增高。 （3）急性心肌梗塞发病后12～24小时，血清LDH1也已升高。若同时测定LDH 总活性，可发现LDH1/总LDH的比值升高。早期血清中LDH1和LDH2活性均升高，但LDH1增高更早，更明显，导致LDH1/LDH2的比值升高。对急性心肌梗塞诊断的阳性率和可靠性优于单纯测定LDH1或CK-MB。 （4）胚胎细胞瘤病人的血清LDH1活性升高。 （5）急性肝炎，肝细胞损伤或坏死后，向血流释入大量的LDH4和LDH5，致使血中LDH5/LDH4比值升高，故LDH5/LDH4>1可做为肝细胞损伤的指标。急性肝炎以LDH5明显升高，LDH4不增，LDH5/LDH4>1为特征；若血清LDH5持续升高或下降后再度升高，则可认为是慢性肝炎；肝昏迷病人的血清LDH5．LDH4活性极高时，常示预后不良；原发性肝癌以血清LDH4>LDH5较为常见。 （6）肾皮质以LDH1和LDH2含量较高，肾髓质以LDH4和LDH5活性较强。患急性肾小管坏死（ATN）、慢性肾盂肾炎、慢性肾小球肾炎以及肾移植排异时，血清LDH5均可增高。 （7）肺含LDH3较多，肺部疾患时血清LDH3常可升高。肺梗塞时LDH3和LDH4相等，LDH1明显下降；肺脓肿病人的血清LDH3．LDH4常与LDH5同时升高。煤矿、钨矿矽肺病人的血清LDH1．LDH2下降，LDH4．LDH5升高。 （8）血清LDH总活性升高而同工酶谱正常（LDH1/LDH2<1）的病例，临床出现率依次为；心肺疾病、恶性肿瘤、骨折、中枢神经系统疾患、炎症、肝硬化、传染性单核细胞增多症、甲状腺功能减退、尿毒症、组织坏死、病毒血症、肠梗阻等。 （9）肌营养不良病人肌肉中LDH1．LDH2明显增高，LDH5显著下降；而血清则相反，LDH1．LDH2明显减少，LDH4．LDH5显著，表明血清LDH同工酶主要来自肌肉组织。 （10）恶性病变时LDH3常增高。

6、常用检验正常值

6、常用检验正常值

常用检验项目正常值 临床血液检查 检验项目符号 正常参考值 法定单位换算旧制单位 血红蛋白HB 男120~160g/L 女110~150 g/L 新生儿170~200 g/L 10 12~16g/dl 11~15 g/dl 17~20 g/dl 红细胞RBC 男(4.0~5.5)×1012 /L 女(3.5~5.0)×1012 /L 新生儿(6~7)×1012 /L 100 400万~550万/mm3 350万~500万/mm3 600万~700万/mm3 白细胞WBC 成人(4~10)×109 /L 儿童(5~12)×109 /L 新生儿(15~20)×109 /L 1000 4000~10000/ mm3 5000~12000/ mm3 15000~20000/ mm3 白细胞分类中性粒细胞 杆状核 分叶核 嗜酸粒细胞嗜碱粒细胞单核细胞 淋巴细胞DC N E B M L 0.01~0.05 0.50~0.70 0.005~0.05 0~0.01 0.03~0.08 0.2~0.4 新生儿~婴儿期 0.4~0.8 1%~5% 50%~70% 0.5%~5% 0%~1% 3%~8% 20%~40% 40%~80% 血细胞比容HCT 男0.42~0.49L/L；女0.37~0.43L/L 100 42%~49%；37%~43% 平均红细胞体积MCV 82~95fL 平均红细胞血红蛋白 含量 MCH 27~31pg 平均红细胞血红蛋白 浓度MCH C 320~360g/L 网织红细胞 百分计数绝对计数RC 成人0.005~0.015 儿童0.005~0.015 新生儿0.03~0.06 (24~84) ×10 9 /L 1000 24000~84000/ mm3 红细胞沉降血沉ESR 男0~15mm/h 女0~20mm/h 出血时间测定 测定器法Duke法BT 6.88±2.08min 1~3min

乳酸含量测定

在Tris-Hcl-水合肼缓冲液中（pH＝9.2），利用乳酸在氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)存在的条件下,由乳酸脱氢酶(L-LDH)催化生成丙酮酸和还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)。，利用NADH 是一种强荧光物质,而NAD+则无荧光的性质，通过测定NADH 在340nm 处吸光度的变化率，可得出酶促反应速度，并制得标准曲线，样品中的乳酸可由标准曲线求得。 由于酶促反应的专属性,可以避免试样中众多共存组分的干扰,减少繁杂的预处理过程。L-乳酸脱氢酶催化反应为可逆反应，且反应平衡偏向于丙酮酸转化为乳酸。因此，为了保证反应平衡偏向于正方向,需加水合肼截获丙酮酸而生成丙酮酸腙,以减少丙酮酸的积累,加快酶促反应的速度。而水合肼对乳酸脱氢酶又有抑制作用，过量的水合肼反而会降低酶促反应速度。反应溶液的pH 值会影响酶的稳定性，酶活性部位中重要基团的解离状态，酶－底物复合物以及底物的解离状态，从而影响酶促反应速度。最适pH 值为9.2。最适温度为37℃。发现Ni2+、Mn2+、Cu2+、Cr3+、Co2+对酶促反应速度有抑制作用 根据米氏方程,1/v～1/c 为直线关系,因此用双倒数作图法所绘1/v～1/c 线作为测定乳酸的标准曲线, 线性范围较宽： 1.2 ×10-4～ 2.0 ×10-3mol/L 。 步骤： 1. 配制50ml的甘氨酸缓冲液：甘氨酸3.75g,硫酸肼 2.6g.,E D T A?2 N a 0.1 g，加适量去离子水用10 mol/ L N aO H 溶液调整p H 至9.3,再加去离子水至50 ml 2. 配制5ml2.1mol/l的硫酸铵溶液，吸取0.8ml置于乳酸脱氢酶中进行稀释 3. 称量NAD 0.01658g（663.4）溶于5ml蒸馏水瓶中（5mM），4℃保存至少可用2周 4.在pcr小管中加入100μl的甘氨酸缓冲液，100μlNAD+,20μl不同浓度的乳酸锂，2μl的乳酸脱氢酶溶液，置于37℃中反应1小时后，用石英比色皿在340nm处测定吸光度，以乳酸锂浓度为横坐标，A340为纵坐标绘制标准曲线 4. 在pcr小管中加入100μl的甘氨酸缓冲液，100μlNAD+,20μl不同时间段的进行适当稀释的发酵液，2μl的乳酸脱氢酶溶液，置于37℃中反应1小时后，用石英比色皿在340nm处测定吸光度，利用标准曲线得出稀释后的发酵的乳酸根含量