石蜡包埋步骤

石蜡包埋步骤

一、组织固定

按1：20将组织放入固定液【小块组织如卵巢可放入2ml EP管中加入2ml的bouins 固定液（4℃冰箱摇床中2~3h）或PFA固定液】；如果不进行下一步，可放于70%酒精中4℃冰箱中长期保存。

1组织脱水、渗透与包埋

○1脱水：

70% 乙醇（30min）→85%乙醇(30min) →95%乙醇(30min)→100%乙醇(30min)→100%乙醇(30min)。

注：○1若组织数量过多时，应分开脱水（20个组织左右）

○2脱水的体积至少为组织体积的4倍

○3乙醇纯度越高时，脱水的时间减少，否则引起组织过硬

○4最好能搅拌，使脱水充分

○2透明：

二甲苯I (30min)→二甲苯II(30min)。

注：在二甲苯的时间不宜过短或过长。时间过短引起透明不充分，影响后面渗透包埋；时间过长则引起组织变脆。

○3渗透：

石蜡I (60min)→石蜡II(60min),62℃烘箱中。

○4包埋：

将组织放入盛有石蜡的模具中，摆好位置，于石蜡包埋机的冷台上冷却。

注：包埋时，切忌用手按石蜡盒中间，因为冷凝后，中间仍较软。

2 切片和贴片

将包埋好的组织块于切片机中约5μm，放于漂片机中展开，再将切片捞于多聚赖氨酸附膜载玻片上，编号，70℃干烤1h，贴片后60℃烤5h。