南开大学硕士环境分子生物学实验报告

2012年环境分子生物学实验报告

实验一：16S rRNA靶向变性梯度凝胶电泳指纹图谱分析微生物菌群一、实验原理

由于微生物体内16S核糖体RNA的基因编码区含有一定的保守序列和非保守序列，保守序列可应用与PCR引物的设计，非保守序列则可应用于不同种类微生物间的比较鉴定。双链DNA 分子在一般的聚丙烯酰胺凝胶电泳时，其迁移行为决定于其分子大小和电荷。不同长度的DNA 片段能够被区分开，但同样长度的DNA 片段在胶中的迁移行为一样，因此不能被区分。试验首先提取水样样品的DNA，用根据实验目的设计的引物进行PCR扩增，PCR产物用DGGE等方法分析，借此评估土壤微生物遗传物质多样性。

聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction，PCR）是体外酶促合成特异DNA 片段的一种方法，为最常用的分子生物学技术之一。典型的PCR 由（1）高温变性模板；（2）引物与模板退火；（3）引物沿模板延伸三步反应组成一个循环，通过多次循环反应，使目的DNA 得以迅速扩增。其主要步骤是：将待扩增的模板DNA 置高温下（通常为93℃-94℃）使其变性解成单链；人工合成的两个寡核苷酸引物在其合适的复性温度下分别与目的基因两侧的两条单链互补结合，两个引物在模板上结合的位置决定了扩增片段的长短；耐热的DNA 聚合酶（Taq酶）在72℃将单核苷酸从引物的3’端开始掺入，以目的基因为模板从5’到3’方向延伸，合成DNA 的新互补链。

DGGE可以根据序列将相同长度的DNA片段混合物分开。分离的原理是基于DNA片段在含有梯度变性化合物（通常是尿素和甲酰胺的混合物）配制的聚丙烯酰胺凝胶中的序列特异性熔点不同实现的。在5’端引入GC夹（GC-clamp）可以保护DNA片段不会完全变性。DGGE能对微生物群落进行快速的分析和比较。利用DGGE可使组成的多样性一目了然，不同序列的片段将停留在不同的位置，其中每一条带原则上代表一种细菌系群。染色后，在凝胶中DNA分子停止迁移的位置会看到条带。理论上，DGGE指纹图谱可以区分不长于500bp的PCR扩增产物上的一个碱基对的差别。该技术在快速比较不同环境中的微生物群落和监测某一特定的群落在不同时间的组成变化中非常有效。

二、设备与仪器

PCR仪，电泳仪，凝胶成像系统，高速冷冻离心机，台式离心机，移液枪及枪头，离心管等。

三、实验步骤

1、地表水细菌基因组DNA提取

1）实验试剂

①裂解液：0.05 M Tris-HCl（pH 8.0），0.1 M NaCl，0.1 M EDTA（pH 8.0），1% SDS；

②Tris饱和酚：用1M Tris-HCl（pH 8.0）饱和的新鲜苯酚，含0.1%的8-羟基喹啉，pH＞7.8；

③酚/氯仿/异戊醇：Tris饱和酚中加入氯仿和异戊醇，体积比为25:24:1；

④TE：0.01M Tris-HCl，0.001M EDTA，pH8.0;

⑤1×TAE电泳缓冲液：0.04 M Tris，0.02 M HAc，0.05 M EDTA，pH 8.0;

⑥0.5×TBE电泳缓冲液;

⑦无水乙醇，70%乙醇。

2）实验步骤

①取1.5mL地表水样4000r/min离心10min，弃上清。重复六次后，加入500 μL 裂解液充分悬浮。

②加入500μL Tris饱和酚，混匀，室温放置10min，4000r/min离心10min。

③吸取上层水相转移至新离心管，加入等体积的酚/氯仿/异戊醇，颠倒混匀后4000r/min离心10min。（若有必要，可重复操作一次。）

④吸取上层水相转移至新离心管，加入两倍体积无水乙醇，充分沉淀后10000r/min离心10min，弃去上清液。

⑤加入1mL 70%乙醇，充分悬浮后10000r/min离心10min，弃去上清液，晾干10min。加入50μL TE溶解，得到细菌基因组DNA。

⑥取10μL样品进行电泳检查（Marker为λ DNA/HindⅢ酶切），剩余样品-20℃保存。

2、细菌16S rRNA基因V3区扩增

取2.0 μL基因组DNA作为PCR模板，按照下表顺序和体积将反应液加入0.5mL 的薄壁PCR管中，总体积50μL。

引物1：

5’-CGCCCGCCGCGCGCGGCGGGCGGGGCGGGGGCACGGGGGGCCTACGGGAGGCAGCAG -3’

引物2：

5’-ATTACCGCGGCTGCTGG-3’

表：

试剂体积(μL)终浓度

模板 2.0 --

引物1 (10 μM) 1.0 0.2 μM

引物2 (10 μM) 1.0 0.2 μM

10×PCR Buffer （含Mg2+）5.0 1×

10 mM dNTPs 1.0 0.2 mM

Taq聚合酶 1.0 2 U

dd H2O 39.0 --

总体积50.0 --

轻轻混匀并瞬间离心，放入PCR仪进行扩增，共35个循环。

PCR反应条件：

94℃，5min，预变性；

94℃，1min变性；

52℃，1min退火；

72℃，3min延伸；

72℃，5min，最后一次延伸。

PCR总时间约3.5 h。

PCR完成后取5μL样品进行电泳检查（Marker为DL2000），剩余样品-20℃保存。

3、变性梯度凝胶电泳图谱分析微生物菌群

1）前期准备

①30%丙烯酰胺储备液：含30%丙烯酰胺和0.8%亚甲双丙烯酰胺，避光保存于4℃。

②1×TAE：0.04 M Tris，0.02 M HAc，0.05 M EDTA，pH 8.0。

③10%过硫酸铵（APS）：0.1g APS溶于1.0mL水，-20℃保存一周。

④含变性剂8%丙烯酰胺凝胶溶液（现用现配）：

低浓度变性剂：4.2mL 30%储备液+1.92mL去离子甲酰胺+2.016g尿素+9.9mL 1×TAE；

高浓度变性剂：4.2mL 30%储备液+3.84mL去离子甲酰胺+4.032g尿素+8.0mL 1×TAE。

⑤四甲基乙二胺（TEMED）

⑥去离子甲酰胺

2）实验步骤

（1）将丙烯酰胺储备液放置至室温，安装胶板和注射器等装置。

（2）分别配制含30%和60%的变性剂的8%胶溶液各16mL。配置低浓度和高浓度变性的胶溶液各16mL加入比色管中，各加入14.4μL的TEMED和144μL 的10%的APS，迅速混匀并吸入注射器中，终浓度0.09%。

（3）用注射器吸取凝胶溶液装胶，各吸取16mL凝胶溶液，体积设置14.5mL。

放上梳子，凝固1h。清洗吸取胶液的管子。

（4）配制7L的1×TAE并微波预热至60℃。

（5）胶凝固后，将胶板安装至电泳装置。打开搅拌器设定60℃加热。

（6）取出梳子，清洗上样孔。

（7）关闭循环泵，上样。

（8）160V电泳4h。

（9）结束电泳，用0.5 mg/mL EB染色。

（10）观察并拍照。

四、实验结果与分析

1、地表水细菌基因组DNA提取

分别是来自新开湖和马蹄湖的水样。

实验结果分析：

圈红线的两个样品是我提取水样DNA的电泳效果。中间亮条带是Marker。DNA Marker 是分子量不同的DNA片段，主要用途就是DNA 分子凝胶电泳时，加样用做对比来检测琼脂糖凝胶是否有问题。

DNA 分子的大小在凝胶中，DNA 片段迁移距离（迁移率）与碱基对的对数成反比，因此通过已知大小的标准物移动的距离与未知片段的移动距离时行比较，便可测出未知片段的大小。但是当DNA 分子大小超过20kb时，普通琼脂糖凝胶就很难将它们分开。此时电泳的迁移率不再依赖于分子大小，因此，就用琼脂糖凝胶电泳分离DNA时，分子大小不宜超过此值。

不同构型DNA 的移动速度次序为：供价闭环DNA（covalently closed circular，cccDNA）>直线 DNA>开环的双链环状DNA。当琼脂糖浓度太高时，环状DNA（一般为球形）不能进入胶中，相对迁移率为0（Rm=0），而同等大小的直线双链DNA（刚性棒状）则可以长轴方向前进（Rm>0），由此可见，这三种构型的相对迁移率主要取决于凝胶浓度，但同时，也受到电流强度、缓冲液离子强度等的影响。

2、细菌16S rRNA基因V3区扩增

实验结果分析：

和上图一样，圈红线的两个条带是我提取DNA的PCR产物的检测结果。条带还算清晰，就是有轻微拖尾现象，这可能是由于电压过大，DNA跑的过快的原因。

PCR扩增产物可分为长产物片段和短产物片段两部分。短产物片段的长度严格地限定在两个引物链5’端之间，是需要扩增的特定片段。短产物片段和长产物片段是由于引物所结合的模板不一样而形成的，以一个原始模板为例，

在第一个反应周期中，以两条互补的 DNA 为模板，引物是从 3’端开始延伸，其 5’端是固定的，3’端则没有固定的止点，长短不一，这就是“长产物片段”。进入第二周期后，引物除与原始模板结合外，还要同新合成的链(即“长产物片段”)结合。引物在与新链结合时，由于新链模板的 5’端序列是固定的，这就等于这次延伸的片段 3’端被固定了止点，保证了新片段的起点和止点都限定于引物扩增序列以内、形成长短一致的“短产物片段”。不难看出“短产物片段”是按指数倍数增加，而“长产物片段”则以算术倍数增加，几乎可以忽略不计，这使得 PCR的反应产物不需要再纯化，就能保证足够纯DNA 片段供分析与检测用。而这些产物长度一致，固然在交替上的条带位置一致。

3、变性梯度凝胶电泳图谱分析微生物菌群

DGGE电泳图像

从左数第五个是我的样品。图像里的DNA条带过于密集，分的不是也别好。这可能是由于时间紧凑，电压过大的原因。

图中，每一个竖条带代表了这个基因组的一个群落组成情况，不同条带之间，条带的亮度代表量的大小，可以看出优势群众是哪些，也可以通过不同条带之间的比对，来分析同一来源基因组的群落变化，也可以用来分析不同来源基因组之间群落组成的差异。

实验二：细菌培养和菌落PCR

一、实验原理

微生物通常是肉眼看不到的微小生物，而且无处不在。在无菌条件下，用接种环挑取微生物，把它由一个培养皿转接到另外一个培养皿中进行培养，是微生物学研究中最常用的基本操作。固体培养基是用琼脂或其他凝胶物质固化的培养基。分散的微生物在适宜固体培养基表面或内部生长、繁殖到一定程度可以形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞生长群体，称为菌落。不同微生物在特定培养基上生长形成的菌落一般都具有稳定的特征，可以称为对该微生物进行分类、鉴定的重要依据。

培养平板是被用于获得微生物纯培养的最常用的固体培养形式。大多数细菌、酵母菌以及许多真菌和单细胞藻类都能方便的通过平板分离法活的纯培养，主要有涂布平板法、稀释倒平板法，平板划线法等，本实验采取平板划线法。

平板划线分离法具体操作为：先制无菌琼脂培养基平板，待充分冷却凝固后，用接种环以无菌蘸取少量待分离的含菌样品，在无菌琼脂平板表面有规则地划线。划线的方式有连续划线、平行划线、扇形划线或其他形式的划线。通过这样在平板上进行划线稀释，微生物细胞数量将随着划线次数的增加而减少，并逐步分散开来。经培养后，可在平板表面形成分散的单个菌落。但单个菌落并不一定是由单个细胞形成的，需再重复划线l～2 次，并结合显微镜检测个体形态特征，才可获得真正的纯培养物。

二、实验步骤

1、细菌培养(大肠杆菌)

1）牛肉膏蛋白胨培养基的配制

培养基配方：

2）实验步骤：

（1）称药品按实际用量计算后，按配方称取各种药品放入大烧杯中。牛肉膏可放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶解后倒入大烧杯；也可放在称量纸上称量，随后放入热水中，牛肉膏便与称量纸分离，立即取出纸片。蛋白胨极易吸潮，故称量时要迅速。

（2）加热溶解在烧杯中加入少于所需要的水量，小火加热，并用玻璃棒搅拌，待药品完全溶解后再补充水分至所需量。若配制固体培养基，则将称好的琼脂放入已溶解的药品中，再加热融化，此过程中，需不断搅拌，以防琼脂糊底或溢出，最后补足所失的水分。

（3）调pH 检测培养基的pH，若pH偏酸，可滴加1滴1mol/L NaOH，边加边搅拌，并随时用pH试纸检测，直至达到所需pH范围。若偏碱，则用1mol/L HCl进行调节。pH的调节通常放在加琼脂之前。应注意pH值不要调过头，以免回调而影响培养基内各离子的浓度。

（4）过滤液体培养基可用滤纸过滤，固体培养基可用4层纱布趁热过滤，以利结果的观察。但是供一般使用的培养基，该步可省略。

（5）分装按实验要求，可将配制的培养基分装入试管或三角瓶内。分装时可用漏斗以免使培养基沾在管口或瓶口上面造成污染。

分装量：固体培养基约为试管高度的1/5，灭菌后制成斜面。分装入三角瓶内以不超过其容积的一半为宜。半固体培养基以试管高度的1/3为宜．灭菌后垂直待凝。

（6）加塞试管口和三角瓶口塞上硅胶泡沫塞。

（7）包扎加塞后，可将若干支试管用牛皮纸扎在一起，并用绳子扎好。将

三角瓶的硅胶泡沫塞外包一层牛皮纸。

（8）培养基的灭菌时间和温度，需按照各种培养基的规定进行，以保证灭菌效果和不损培养基的必要成份。培养基经灭菌后，必须放37℃温室培养24h，无菌生长者方可使用。

2、菌落PCR扩增细菌16S rRNA基因

（1）从平板上挑取少许白色菌落，将其置于20μL 双蒸水中，95~100℃保温5~10 min。

（2）将离心管15000 r/min室温离心5 min，取上清液作为模板进行PCR检测。引物F：

5’-AGAGTTTGATCMTGGCTCAG-3’

引物R：

5’-AAGGAGGTGWTCCARCC-3’

表：

试剂体积(μL)终浓度

模板 2.0 --

引物1 (10 μM) 1.0 0.2 μM

引物2 (10 μM) 1.0 0.2 μM

10×PCR Buffer （含Mg2+）5.0 1×

10 mM dNTPs 1.0 0.2 mM

Taq聚合酶 1.0 2 U

dd H2O 39.0 --

总体积50.0 --

轻轻混匀并瞬间离心，放入PCR仪进行扩增，共35个循环。

PCR反应条件：

94℃，5min，预变性；

94℃，30s变性；

56℃，40s退火；

72℃，60s延伸；

72℃，5min，最后一次延伸。

PCR总时间约1.5 h。

PCR完成后取5μL样品进行电泳检查（Marker为DL2000），剩余样品-20℃保存。（3）取适量扩增产物进行电泳分析。

三、实验结果与分析

有轻微的条带，量比较少。

实验思考题：

1、PCR-DGGE检测的基本原理是什么？

由于微生物体内16S核糖体RNA的基因编码区含有一定的保守序列和非保守序列，保守序列可应用与PCR引物的设计，非保守序列则可应用于不同种类微生物间的比较鉴定。双链DNA 分子在一般的聚丙烯酰胺凝胶电泳时，其迁移行为决定于其分子大小和电荷。不同长度的DNA 片段能够被区分开，但同样长度的DNA 片段在胶中的迁移行为一样，因此不能被区分。

2、为什么要在上游5端添加GC夹？

变性梯度凝胶电泳（DGGE）是一种根据DNA片段的熔解性质而使之分离的凝胶系统。核酸的双螺旋结构在一定条件下可以解链，称之为变性。核酸50%发生变性时的温度称为熔解温度（Tm）。Tm值主要取决于DNA分子中GC含量的多少。DGGE将凝胶设置在双重变性条件下：温度50~60 ℃，变性剂0~100%。当一双链DNA片段通过一变性剂浓度呈梯度增加的凝胶时，此片段迁移至某一点变性剂浓度恰好相当于此段DNA的低熔点区的Tm值，此区便开始熔解，而高熔点区仍为双链。这种局部解链的DNA分子迁移率发生改变，达到分离的效果。Tm的改变依赖于DNA序列，即使一个碱基的替代就可引起Tm值的升高和降低。

为了提高DGGE的突变检出率，可以人为地加入一个高熔点区——GC夹。GC夹（GC clamp）就是在一侧引物的5′端加上一个30~40bp的GC结构，这样在PCR产物的一侧可产生一个高熔点区，使相应的感兴趣的序列处于低熔点区而便于分析。

南开大学2000年环境工程考研试题

南开大学2000年环境工程试题 一、选择填空题(每小题2分，共12分) 1废水是指( )。 (1)不能用的水；(2)废弃的水；(3)使用过的水；(4) 含有对环境造成污染的物质的水；(5)工厂排放的水。 2污水是指( )。 (1)城市下水管道中的水；(2)脏水；(3)含有对环境造 成污染的物质的水；(4)生活设施或城市排放的水。 3污水处理的关键是( )。 (1)将污染物从水中分离出或去除，使水质达到排放标准； (2)采用一系列的单元操作，使水中的污染物以不同的方式 分离或去除，使水质达到排放标准；(3)采用物理的或者 化学的或者物理化学的或者生物化学的方法或者几种方法的结合，使水质达到排放标准。 4好氧生物处理是指( )。 (1)活性污泥法；(2)接触氧化法；(3)生物转盘法；(4) 通过需氧微生物的代谢作用来去除有机污染物的方法。 15城市污水处理厂的消化污泥是指( )。 (1)二沉池中所排出的污泥；(2)污泥消化池中所排出的 污泥；(3)污泥脱水机处理后的话泥。 6活性污泥暖气池的功能是去除污水中的( )。 (1)可生物降解的有机物，包括BOD和COD；(2)溶解 性的和胶体性的可生物降解的有机物。 二、名词解释(每小题3分，共15分) 1活性污泥； 2SRT； 3污泥负荷； 4污泥沉降比 5污泥回流比 三、请绘图并描述SBR法的工作过程，说明该工艺的优点及与 普通活性污泥法的不同。(15分) 四、请绘出A／O除磷的工艺流程图，并简述其磷的去除原理。(15分) 五、简述好氧生物膜法的特点。(13分) 六、简述废水厌氧生物处理法的优点。(10分) 七、简述沼气气浮他的工艺原理，说明其去除的主要对象。(10分) 八、写出电凝聚法中的电极反应式，说明其处理电镀废水时的工作原理。(10分)

南开大学 南开 2004年专业基础(微观经济学、宏观经济学、劳动经济学) 考研真题及答案解析

经济学院 南开大学2004年研究生入学考试试题 考试科目：专业基础（微观经济学、宏观经济学、劳动经济学） 专业：劳动经济学 第一部分 微观经济学、宏观经济学（共100分） 一、简答题（每题6分，共30分） 1.比较序数效用论和基数效用论在描述者均衡时的区别。 2.对于厂商来说，其产品的需求弹性大于1和小于1对其价格战略（采取降价还是涨价）将产生何种影响？ 3.什么是边际产品转换率，当它与消费者对这两种产品和边际替代率不等时，市场将怎样调整？ 4.什么是有效需求，在市场经济中，引起有效需求不足的原因通常有哪些？ 5.财政赤字对宏观经济有哪些影响？ 二、计算题：（每题10分，共20分） 1.在多马（Domar ）增长模型中，要保持国民收入的动态均衡，投资的增长路径必须符合下式要求： ()()0st I t I e ρ= （a ）请说明ρ和s 的含义。 （b ）如果在现实中投资的增长速度为r ，与动态均衡所要求的增长速度不同 （r≠ρs ），将会发生什么情况？请给出严格的数学证明。 2.假定某企业A 的生产函数为：0.50.510Q K L =；另一家企业B 的生产函数为： 0.60.410Q K L =。其中Q 为产量，K 和L 分别为资本和劳动的投入量。 （a ）如果两家企业使用同样多的资本和劳动，哪一家企业的产量大？ （b ）如果资本的投入限于9单位，而劳动的投入没有限制，哪家企业劳动的边际产 量更大？ 三、论述题（每题15分，共30分） 1.什么是信息不对称，请举例说明为什么信息不对称人导致市场失灵？ 2.在固定汇率或盯住汇率制度下，那些因素会造成本国货币升值的压力？根据你学到的经济学知识，分析人民币如果升值可能对本国经济和其它国家经济造成的影响。 四、分析题（共20分） 根据美国的在关统计，（1）2002年美国的对外贸易赤字规模为4890亿美元，占美国当年GDP 的4.7%；（2）自2000年以来，美国政府开支不断扩大，从2000年相当于GDP 总额2%的财政盈余，发展为2003年相当于GDP 总额4%的财政赤字；（3）美国的失业率居高不下，达到九年来6.1%的最高水平；（4）与此同时，美联储在最近仍然维持45年以来的最低利率水平。 运用经济学原理说明美国政府经济政策的性质以及目的，并分析应采取什么政策来缓解目前的双赤字和高失业状态？ 第二部分：劳动经济学(共50分) 一、名词解释：（15分） 1.实际工资 2.顾客歧视 3.充分就业 二、简述题：（20分）

南开大学 18秋学期(1703)《电子政务》在线作业满分答案

18秋学期（1703）《电子政务》在线作业 网络协议的语法是指()。 A.所使用的数据格式 B.实体协调配合与数据管理所需的信息结构 C.时序、速度的匹配 D.对接收数据的正确排序 正确答案:A 防杀毒软件的作用是（） A.检查计算机是否感染病毒，清除已感染的病毒 B.永远杜绝病毒对计算机的侵害 C.能查出已感染的任何病毒，清除任何病毒 D.保证数据的安全传输 正确答案:A 网络结构中没有中央控制中心，网络中各节点之间的信息交流不受任何中心节点控制，这一特点称为（） A.开放性 B.虚拟性征 C.多元化 D.去中心化 正确答案:D OSI参考模型中负责在两个相邻节点间的线路上无差错地传送以帧为单位的数据的是()。 A.网络层 B.数据链路层 C.传输层 D.会话层 正确答案:B 同等功能层间的通信规约，是为了完成该功能层的特定功能双方必须遵守的规定，称之为()。 A.网络接口 B.定时标准 C.服务 D.网络协议

正确答案:D 从信息安全角度看,电子政务的安全内容包括（） A.信息传输的可靠性 B.网络设备的安全性 C.应用系统的兼容性 D.系统的开放性 正确答案:A 世界第一部保护计算机数据的法律是1973年在()通过的。 A.美国 B.英国 C.瑞典 D.新加坡 正确答案:C ()的趋同在计算机、电信和网络工业中的发展，是信息化的主要内容和重要标志之一。 A.网络服务 B.信息技术 C.通信手段 D.信息空间 正确答案:B 在欧美发达国家的竞选活动中，候选人开始有意识地利用互联网为赢得选举作出努力，这种活动称为()。 A.电子投票 B.电子竞选 C.电子论坛 D.网上办公 正确答案:B 以下不属于计算机病毒具有的共性的是()。 A.潜伏性 B.传染性 C.触发性

分子生物学实验指导(精)

分子生物学实验指导 生物技术教学室编 宁夏大学生命科学学院 2008年8月

实验一分子生物学实验技术多媒体演示 [目的要求] 通过多媒体试验录像进一步掌握分子生物学基本操作技术。 [教学方式] 多媒体光盘演示。 [实验内容] 基本的分子生物学实验操作技术包括核酸凝胶电泳技术；质粒提取；转化；重组体的筛选；PCR技术等。

实验二琼脂糖凝胶电泳检测DNA [目的要求] 通过本实验学习琼脂糖凝胶电泳检测DNA的方法和技术 [实验原理] 琼脂糖凝胶电泳是分离鉴定和纯化DNA片段的常用方法。DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时有电荷效应和分子筛效应，DNA分子在高于等电点的pH溶液中带负电荷，在电场中向正极移动。由于糖磷酸骨架在结构上的重复性质，相同数量的双链DNA几乎具有等量的净电荷，因此它们能以同样的速度向正极方向移动。不同浓度琼脂糖凝胶可以分离从200bp至50 kb的DNA片段。在琼脂糖溶液中加入低浓度的溴化乙锭（Ethidum bromide ,EB），在紫外光下可以检出 10ng的DNA条带，在电场中，pH8.0条件下，凝胶中带负电荷的DNA向阳极迁移。 琼脂糖凝胶有如下特点： (1) DNA的分子大小在凝胶基质中其迁移速率与碱基对数目的常用对数值成反比，分子越大迁移得越慢。 (2) 琼脂糖浓度一个特定大小的线形DNA分子,其迁移速度在不同浓度的琼脂糖凝胶中各不相同。DNA电泳迁移率(u)的对数与凝胶浓度(t)成线性关系。 (3) 电压低电压时，线状DNA片段迁移速率与所加电压成正比。但是随着电场强度的增加，不同分子量DNA片段的迁移率将以不同的幅度增长，随着电压的增加，琼脂糖凝胶的有效分离范围将缩小。要使大于2kb的DNA片段的分辨率达到最大，所加电压不得超过5v/cm。 (4) 电泳温度DNA在琼脂糖凝胶电泳中的电泳行为受电泳时的温度影响不明显，不同大小的DNA片段其相对迁移速率在4℃与30℃之间不发生明显改变，但浓度低于0.5%的凝胶或低熔点凝胶较为脆弱，最好在4℃条件下电泳。 (5) 嵌入染料荧光染料溴化乙锭用于检测琼脂糖凝胶中的DNA，染料嵌入到堆积的碱基对间并拉长线状和带缺口的环状DNA,使其刚性更强,还会使线状迁移率降低15%。 (6) 离子强度电泳缓冲液的组成及其离子强度影响DNA电泳迁移率。在没有离子存在时（如误用蒸馏水配制凝胶，电导率最小，DNA几乎不移动，在高离子强度的缓冲液中（如误加10×电泳缓冲液），则电导很高并明显产热，严重时会引起凝胶熔化。

分子生物学综合实验报告

分子生物学综合试验报告

综合实验Ⅰ.Southern杂交 （质粒DNA提取、PCR技术体外扩增DNA、质粒载体和外源DNA的连接反应、 地高辛标记的Southern杂交） 一.实验目的 1.学习Southern杂交的原理及操作方法。 2.学习碱裂解法提取质粒的原理。 3.学习PCR反应的基本原理和实验技术；了解引物设计的一般要求。 4.掌握DNA体外连接的基本技能，了解连接反应的注意事项。 二.实验原理 利用染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离的目的。在碱变性条件下，染色体DNA的氢键断裂，双螺旋解开而变性，质粒DNA氢键也大部分断裂，双螺旋也有部分解开，但共价闭合环状结构的两条互补链不会完全分离，当pH=的乙酸钠将其pH调到中性时，变性的质粒DNA又恢复到原来的碱裂解法提取质粒的主要原理是：利用染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而构型，而染色体DNA不能复性，形成缠绕的致密网状结构，离心后，由于浮力密度不同，染色体DNA与大分子RNA、蛋白质-SDS复合物等一起沉淀下来而被除去。 聚合酶链反应（PCR）是体外酶促合成DNA片段的一种技术，PCR 进行的基本条件：DNA模板（在RT-PCR中模板是RNA）、引物、dNTP （dATP、dTTP、dGTP、dCTP）、Taq DNA聚合酶、反应缓冲体系。 PCR循环由三个步骤组成：变性、退火、延伸。每一个循环的产物可作为下一个循环的模板，通过30个左右循环后，目的片段的扩增可达106倍。

DNA片段之间的连接是通过DNA连接酶的催化实现的。DNA连接酶催化具有平末端或互补粘性末端的DNA片段间相邻碱基通过3’,5’磷酸二酯键连接起来。最常用的来源于T4噬菌体的T4DNA连接酶。对于平末端或互补的粘性末端可直接进行连接反应。一个片段是平末端，另一片段为粘性末端或两个片段都是粘性末端但不配对，则需要通过各种方式使其可一匹配或通过平末端进行连接。通常采用末端补平、加同聚物尾、加接头等方式是目的片段之间能够匹配。 地高辛随机引物法标记的原理：在随机引物法标记的反应液中，有随机合成的六聚核苷酸作为引物，dATP、dCTP、dGTP、dTTP和D1G-11-dUTP作为合成底物，以单链DNA作为模板，在Klenow酶的作用下，合成插入地高辛的DNA链。以地高辛标记的探针与靶基因DNA链杂交后，再通过免疫反应进行检测。一般通过酶标记地高辛抗体检测，就可以肯定杂交反应的存在。免疫检验一般用碱性磷酸酶系统，BClP/NBT显色，敏感性很高。 三．实验准备 1.实验材料： 含质粒的大肠杆菌DH5α，LB液体培养基， LB平板培养基 2.实验试剂： Taq DNA聚合酶，10×反应缓冲液（含25mmol MgCl2），dNTP，引物（P1、P2），溴乙啶 (EB) ，点样缓冲液Loading buffer（10×）：%溴酚蓝，40%甘油，目的基因及载体， 2×ligation 缓冲液，T4 DNA连接酶， L CaCl2，氨苄青霉素（100mg/mL）， TBE电泳缓冲液（5×）， DIG Random Labeling Mix（高效），Anti-DIG-AP Conjugate， BCIP/NBT Stock Solution，Blocking Reagent。 20×SSC：柠檬酸钠，3M NaCl，2×SSC：柠檬酸钠， NaCl， EDTA，变性液： NaOH， NaCl，中和度： Tris-HCl、、3M NaCl，Standard buffer：5×SSC、%(w/v) N-Lauroylsarcosine, % (w/v) SDS, 1% Blocking Reagent，Standard buffer+50% formamide，Anti-DIG-AP 碱性磷酸酶标记抗地高辛单抗体，BCIP/NBT储备液，冲洗液：0. 1M

环境工程专业考研院校排名

环境工程专业考研院校排名 环境工程是21世纪重点发展的高新科技之一。本专业培养的学生具有扎实的环境工程理论知识、专业技术和工程设计能力，特别是在（高浓度）有机废水的生物化学处理、可持续发展的垃圾填埋处置及环境污染修复的生态工程等方面的理论和技术独具特色。 主干学科与主干课程 主干学科：环境科学与工程 主干课程：物理化学、工程流体力学、环境工程微生物学、环境生态学、环境工程原理、环境影响评价、水污染控制、固体废物处理与处置、大气污染控制主要实践性教学环节：测量实习、工程制图、计算机应用及上机实习、水力学实验、微生物实验、环境监测实验、水处理实验、空气污染控制实验等，一般安排40周左右。 相近专业： 环境工程安全工程灾害防治工程水质科学与技术给水排水工程地下水科学与工程风能与动力工程环境科学与工程城市规划辐射防护与环境工程

环境工程

B+等(44个)：南昌大学、华东理工大学、中山大学、吉林大学、河海大学、厦门大学、昆明理工大学、中国农业大学、武汉理工大学、大连海事大学、西安理工大学、江苏大学、安徽理工大学、中国矿业大学、江南大学、东北大学、兰州交通大学、西南交通大学、太原理工大学、南京理工大学、长安大学、广东工业大学、合肥工业大学、华东师范大学、华北电力大学、青岛理工大学、北京航空航天大学、北京建筑工程学院、郑州大学、南京农业大学、暨南大学、苏州科技学院、浙江工业大学、南京工业大学、广西大学、中南大学、兰州理工大学、北京交通大学、江苏工业学院、复旦大学、辽宁工程技术大学、天津工业大学、南京航空航天大学、东北师范大学 B等(43个)：华南农业大学、沈阳理工大学、长江大学、北京工商大学、贵州大学、兰州大学、大连大学、福州大学、武汉科技大学、重庆工商大学、河北科技大学、辽宁石油化工大学、西安交通大学、桂林工学院、江西理工大学、吉林农业大学、吉林建筑工程学院、中国石油大学、南京林业大学、陕西科技大学、中国人民大学、上海理工大学、沈阳农业大学、西南科技大学、哈尔滨工程大学、四川农业大学、内蒙古科技大学、西北大学、西北农林科技大学、湘潭大学、湖南农业大学、天津科技大学、东华理工大学、武汉工程大学、中北大学、济南大学、安徽工业大学、河南理工大学、华南热带农业大学、天津城市建设学院、华东交通大学、山东建筑大学、南昌航空工业学院

分子生物学实验报告

分子生物学实验 院系：生命科学与技术学院 专业：生物科学（基地） 班级： 201101班 学号： 姓名： 分子生物学基础实验 分子生物学实验技术已成为生物化学及分子生物学以及相关学科院系教学科研不可缺少的一部分。为提高学生在分子生物学技术方面的动手能力，生物技术综合实验室主要开设常用而基本的分子生物学实验技术。它的内容包括质粒DNA的制备；DNA的重组；PCR基因扩增等等。 实验一质粒DNA的小量制备 一、实验原理 要把一个有用的外源基因通过基因工程手段，送进细胞中去进行繁殖和表达，需要运载工具，携带外源基因进入受体细胞的这种工具就叫载体（vector）。载体的设计和应用是DNA体外重组的重要条件。作为基因工程的载体必须具备下列条件:(1)是一个复制子，载体有复制点才能使与它结合的外源基因复制繁殖；（2）载体在受体细胞中能大量增殖，只有高复制率才能使外源基因在受体细胞中大量扩增；（3）载体DNA链上有1到几个限制性内切酶的单一识别与切割位点，便于外源基因的插入；（4）载体具有选择性的遗传标记，如有抗四环素基因（Tc r），抗新霉素基因（Ne r）等，以此知道它是否已进入受体细胞，也可根据这个标记将受体细胞从其他细胞中分离筛选出来。细菌质粒具备上述条件，它是基因工程中常用的载体之一。 质粒（plasmid）是一种染色体外的稳定遗传因子，大小在1～120kb之间，具

有双链闭合环状结构的DNA分子，主要发现于细菌、放线菌和真菌细胞中。质粒具有自主复制和转录能力，能使子代细胞保持它们恒定的拷贝数，可表达它携带的遗传信息。它可独立游离在细胞质内，也可以整合到细菌染色体中，它离开宿主的细胞就不能存活，而它控制的许多生物学功能也是对宿主细胞的补偿。 质粒在细胞内的复制，一般分为两种类型：严密控制型（stringent control）和松弛控制型（relaxed control）。前者只在细胞周期的一定阶段进行复制，染色体不复制时，它也不复制。每个细胞内只含有1个或几个质粒分子。后者的质粒在整个细胞周期中随时复制，在细胞里，它有许多拷贝，一般在20个以上。通常大的质粒如F因子等，拷贝数较少，复制受到严格控制。小的质粒，如ColE Ⅰ质粒（含有产生大肠杆菌素E1基因），拷贝数较多，复制不受严格控制。在使用蛋白质合成抑制剂－氯霉素时，染色体DNA复制受阻，而松弛型ColEⅠ质粒继续复制12－16h，由原来20多个拷贝可扩增至1000－3000个拷贝，此时质粒DNA占总DNA的含量由原来的2％增加到40％－50％。本实验分离提纯化的质粒pBR322、pUC19就是由ColE Ⅰ衍生的质粒。 所有分离质粒DNA的方法都包括三个基本步骤:培养细菌使质粒扩增；收集和裂解细菌；分离和纯化质粒DNA。采用溶菌酶可破坏菌体细胞壁，十二烷基硫酸钠（SDS）可使细胞壁解，经溶菌酶和阴离子去污剂（SDS）处理后，细菌染色体DNA 缠绕附着在细胞壁碎片上，离心时易被沉淀出来，而质粒DNA则留在清液中。用乙醇沉淀、洗涤，可得到质粒DNA。 质粒DNA的相对分子量一般在106－107范围内，如质粒pBR322的相对分子质量为2.8×106，质粒pUC19的相对分子质量为1.7×106。在细胞内，共价闭环DNA（covalently closed circular DNA，简称cccDNA）常以超螺旋形式存在。如果两条链中有一条链发生一处或多处断裂，分子就能旋转而消除链的张力，这种松弛型的分子叫做开环DNA（open circular DNA，简称ocDNA）。在电泳时，同一质粒如以cccDNA形式存在，它比其开环和线状DNA的泳动速度快，因此在本实验中，自制质粒DNA在电泳凝胶中呈现3条区带。 二、实验目的 1．掌握最常用的提取质粒DNA的方法和检测方法。 2．了解制备原理及各种试剂的作用。 三、实验材料和试剂

初级微观经济学题库(南开大学在线作业题库)

《1603在线作业》 1. 针对外部性可采用的补救办法包括() A. 赋予财产权 B. 课税和补贴 C. 政府的直接管制 D. 以上都可以 满分：2 分得分：2 D 2. 投入量增加一个单位所引起的总产量的变动量称为()。 A. 平均产量 B. 边际产量 C. 平均可变产量 D. 总产量 满分：2 分得分：2 B 3. 边际产量递减规律所研究的问题是() A. 各种生产要素同时变动对产量的影响 B. 两种生产要素同时变动对产量的影响 C. 其他生产要素不变，一种生产要素变动时对产量的影响 D. 一种生产要素不变，其他生产要素变动是对产量的影响。 满分：2 分得分：2 C 4. 如果商品A和B是替代性商品，则A 的价格下降将造成() A. B的价格上升 B. B的消费量上升 C. B的价格下降 D. B的消费量下降。 满分：2 分得分：2 D 5. 垄断厂商所面临的边际收益曲线是() A. 向下倾斜的 B. 向上倾斜的

C. 垂直的 D. 水平的 满分：2 分得分：2 A 6. 以下哪种原因不会造成需求水平的移动() A. 居民收入增加 B. 消费偏好改变 C. 价格短期调整 D. 替代产品增加。 满分：2 分得分：2 C 7. 动态博弈的核心问题是() A. 谁先行动 B. 承诺的置信性 C. 是否存在上策均衡 D. 以上都是 满分：2 分得分：2 B 8. 厂商获取最大利润的条件是() A. 边际收益大于边际成本的差额达到最大值 B. 边际收益等于边际成本 C. 价格高于平均成本的差额达到最大值 D. 平均成本等于边际成本 满分：2 分得分：2 B 9. 成本递增行业的长期供给曲线是() A. 水平曲线 B. 自左向右上倾斜 C. 垂直于横轴 D. 自左向右下倾斜 满分：2 分得分：2 B

南开大学 18秋学期(1703)《古代汉语(一)》在线作业满分答案

18秋学期（1703）《古代汉语（一）》在线作业 下列各组字,象形、指事、会意、形声四种结构类型都具备的一组是 A.口甘莫菽 B.犬下益伐 C.又及取行 D.目耳嵩嶺 正确答案:A 有形容词用如意动的是： A.今先生俨然不远千里而庭教之。 B.楚左尹项伯者，项羽季父也，素善留侯张良。 C.强本而节用，则天不能贫。 D.其达士，洁其居，美其服，饱其食。 正确答案:B “保民而王，莫之能御也”。句中的“莫”字，其詞性是 A.副词 B.名词 C.形容词 D.无定代词 正确答案:D “富润屋，德润身，心广体胖”中“胖”的含义是： A.夹脊肉 B.古代祭祀用的半边牲肉 C.安泰舒适 D.肥胖 正确答案:C 下列表示“去某地”的意义的四个词中，哪个不能带宾语？ A.之 B.如 C.适 D.往 正确答案:D

下列句子，具有动词用作使动用法的一句是 A.诸侯之币重，郑人病之。 B.上帝临女，无贰尔心。 C.若阙地及泉，隧而相见，其谁曰不然？ D.故远人不服，则修文德以来之 正确答案:D “相”的本义是 A.扶助 B.辅佐 C.仔细看 D.相貌 正确答案:C 下列句子中的“日”表示“每日”的意思的是： A.道明则国日强，道幽则国日削。 B.卒廷见相如，毕礼而归之。 C.日与北骑出没于长淮间。 D.于是与亮情好日密。 正确答案:C “今有一人，入人园圃，窃其桃李。”下列关于“园圃”的说法正确的是 A.是双声联绵词 B.是叠韵联绵词 C.是偏义复词 D.是单纯词 正确答案:C 下列句子中名词作状语表示凭借的是 A.君为我呼入，吾得兄事之 B.太祖累书呼 C.天下云集而响应 D.秦稍蚕食魏

医学分子生物学实验报告

医学分子生物学实验报告

日期：2012-04-14 医学分子生物学实验报告 一、实验名称： 1、质粒的提取 2、质粒DNA的限制性内切酶酶切 3、DNA琼脂糖凝胶电泳 二、实验目的： 1、掌握碱裂解法分离质粒DNA的基本原理和操作要点 2、了解限制性内切酶作用的原理、特点和酶切质粒DNA的试验方法 3、学习琼脂糖凝胶电泳检测DNA的方法和技术 三、实验原理： 质粒是一种染色体外能够稳定遗传的因子，具有双链共价闭环结构的DNA分子。是染色体外小型（1-200kb）的共价、闭合、环状的双链DNA分子（cccDNA），能自主复制并能稳定遗传的遗传因子。 碱裂解法利用宿主菌巨大线状染色体DNA与相对较小的闭环双链质粒DNA的结构的差异来提取质粒DNA。碱变性DNA时，线状基因组DNA变性充分而质粒DNA处于拓扑缠绕的自然状态而不能彼此分开。当去除变性条件时（酸中和），质粒DNA迅速准确配置重新形成完全天然超螺旋状分子，而难于复性的长链线状的基因组DNA则与破裂的细胞壁、细菌蛋白相互缠绕成大型复合物，被SDS包盖，当K+取代Na+时这些复合物会从溶液中沉淀下来，附在细胞碎片上一起被离心除去。 质粒检测：(1)电泳检测：质粒电泳一般有三条带，分别为质粒的超螺旋、开环、线型三种构型；（2）吸光值检测：采用分光光度计检测260nm、280nm波长吸光值，若吸光值260nm/280nm的比值介于1.7－1.9之间，说明质粒质量较好，1.8为最佳，低于1.8说明有蛋白质污染，大于1.8说明有RNA污染。 Ⅱ型酶识别的DNA序列一般含有4～6个核苷酸。有的在识别顺序的对称轴上对双链DNA 同时切割产生平末端；有的在识别顺序的双侧末端DNA双链产生粘性末端。Ⅱ型限制性内切酶需要Mg2+激活，大部分Ⅱ型酶所识别的序列具有反向对称的结构，或称为回文结构。质粒DNA通常都具有一个或多个限制性内切酶酶切识别序列，可被相应限制性内切酶切出相应数量的切口，从而产生相应数量的酶切片断。本实验采用的EcoRⅠ和Hind的识别序列和酶切位点分别为 GAATTC 和AAGCTT CTTAAG TTCGAA DNA在琼脂糖凝胶中泳动时有电荷效应和分子筛效应。 核酸为两性分子，在pH3.5时，整个分子带正电； pH8左右时，整个分子带负电。 在碱性环境下，核酸分子之糖-磷酸骨架中的磷酸基团，是呈离子化状态的，把这些核酸分

2020年全国环境工程专业大学排名.doc

2020年全国环境工程专业大学排名_高考升 学网 当前位置：正文 2020年全国环境工程专业大学排名 更新：2019-12-24 09:41:43 一、教育部全国环境工程专业大学排名环境工程专业大学排名学校名称1清华大学2南开大学3哈尔滨工业大学4华中科技大学5西安交通大学6东南大学7天津大学8华南理工大学9湖南大学10重庆大学11中南大学12西北工业大学13电子科技大学14中南财经政法大学15北京交通大学16吉林大学17北京科技大学18华东理工大学19西南交通大学20华北电力大学保定校区21东北大学22福州大学23深圳大学24哈尔滨工业大学（威海）25兰州大学26东华大学27江南大学28北京化工大学29北京林业大学30中国地质大学(北京)31华中农业大学32中国石油大学（北京）33西安建筑科技大学34大连海事大学35哈尔滨工程大学36长安大学37上海理工大学38南昌大学39江苏大学40南京农业大学41太原理工大学42青岛大学43中国民航大学44东北大学秦皇岛分校45贵州大学46扬州大学47武汉科技

大学48广西大学49西安理工大学50湘潭大学51长沙理工大学52湖北大学53四川农业大学54长春理工大学55华东交通大学56青海大学57石河子大学58大连交通大学59上海工程技术大学60西南交通大学61青岛理工大学62天津工业大学63湖北工业大学64西南石油大学65湖南农业大学66三峡大学67江苏科技大学68河南工程学院69山东理工大学70安徽师范大学71湖南科技大学72南昌航空大学73兰州交通大学74江西理工大学75吉林建筑大学76江汉大学77山东建筑大学78山西大学79武汉轻工大学80大连大学81江西农业大学82长春工业大学83烟台大学84石家庄经济学院85西北民族大学86内蒙古工业大学87长江大学88兰州理工大学89琼州学院90中北大学91沈阳工业大学92河南工业大学93桂林理工大学94嘉兴学院95郑州航空工业管理学院96台州学院97东华理工大学98安徽建筑大学99安徽工程大学100河南农业大学101沈阳理工大学102华北科技学院103洛阳理工学院104东北电力大学105淮海工学院106沈阳航空航天大学107长沙学院108河北联合大学109西华大学110安徽科技学院111湖北理工学院112景德镇陶瓷学院113太原工业学院114陕西理工学院115临沂大学116莆田学院117武夷学院118湖北师范学院119井冈山大学120合肥学院121吉林化工学院122长春工程学院123齐齐哈尔大学124华中科技大学武昌分校125文华学院126河北科技大学理工学院127武昌理工学院128武汉科技大学城市学院129江汉大学文理学院130燕山大学里仁学院131苏州科技学院天平学院132贵州大学明德学院133湖北工业大学工程技术学...134武汉纺织大学外经贸学院135福州大学至诚学院136武汉工商学院137武汉生物工程学院138华北电力大学科技学院139湖北师范学院文理学院二、环

南开大学 18秋学期(1709、1803、1809)《概率论与数理统计》在线作业满分答案

18秋学期（1709、1803、1809）《概率论与数理统计》在线作业 某班级学生的年龄是右偏的，均值为20岁，标准差为4.45.如果采用重复抽样的方法从该班抽取容量为100的样本，那么样本均值的分布为 ( ) A.均值为20，标准差为0.445的正态分布 B.均值为20，标准差为4.45的正态分布 C.均值为20，标准差为0.445的右偏分布 D.均值为20，标准差为4.45的右偏分布 正确答案:A 设随机变量X~N(μ,81),Y~N(μ,16),记p1=P(X=μ-9），p2=P(Y=μ+4），则（） A.p1=p2 B.p1<p2 C.p1>p2 D.无法确定 正确答案:A . A. B. C. D. 正确答案:D 下列说法正确的是（） A.二维连续型随机变量是指两个随机变量的取值是连续变化的 B.二维连续型随机变量是指两个随机变量的取值是不连续的 C.二维离散型随机变量的取值是有限个数对或无限对 D.二维离散型随机变量的取值是无限个数对 正确答案:C

分子生物学实验报告(模板)

分子生物学 实验报告 200X级生物XX专业XX班 实验X组 组长: XX 22200731724XX 组员: XX 222007317242XX XX 222007317242XX XX 222007317242XX XX 222007317242XX XXX年X月

从基因组中获得甘薯ADK基因 XX,XX,XX,XX,XX (西南大学,生命科学学院,重庆400715) 摘要：从甘薯的新品种渝苏303中提取基因组DNA。先以此DNA片段为模板使用 PCR技术在体外扩增扩增获得 adk 基因核心片段，再扩增目的基因片段通过琼 脂糖凝胶电泳并回收，在16℃与T载体连接30min以上用于转化DH5α感受态。 -----------。 关键词：甘薯；PCR技术；基因克隆；转化 To Obtained the ADK gene from the genome of sweet potato Xiong Chun-Qing, Zhang Li, Huang Jia, Jiang Yue, Li Wen (College of Life Sciences,Southwest University,Chongqing 400715) Abstract: The new varieties of sweet potato, 303 Yusu extracted genomic DNA. Adenylate kinase gene of potato extract (ADK) and antisense expression vector construct. To make use of this DNA fragment amplified by PCR, in vitro, and then the initial or the target gene fragment was amplified by low-melting-point agarose recovery in more than 16 ℃ for 30min to connect feelings into DH5α state. State will be felt into DH5α E. coli DH5α competence, plasmid DNA in a large number of receptor cells and then choose to copy the positive transformation of body, to carry out gene extraction. Bioinformatics analysis showed that the highest level of starch synthesis in the plants, adenylate kinase and the molecular evolution of the highest genetic similarity. Access to the engineering bacteria strain can be used for genetic transformation of potato, sweet potato and cassava starch and other important crops, for the realization of starch laid the foundation for metabolic engineering. Key words: sweet potato; PCR technologies; gene cloning; transformation 1 综述： 甘薯学名：Ipomoea batatas Lam. 英文名：Sweet Morningglory旋花科 (Convolvulaceae) 属一年生或多年生蔓生草本，又名山芋、红芋、番薯、红薯、

环境化学试题库

环境化学试题库 第一章绪论 一、选择题 1、五十年代日本出现的痛痛病是由______污染水体后引起的。 ACd?????BHg?????CPb?????DAs 2 3 1 2。4 5 1 A风B 2 3 AO3???BNO2??C碳氢化合物????DSO2 4、大气逆温现象主要出现在______。 A寒冷的夜间?????????????????B多云的冬季 C寒冷而晴朗的冬天??????D寒冷而晴朗的夜间 6、大气中HO自由基的来源有的光离解。 AO3BH2CO CH2O2DHNO2

7、烷烃与大气中的HO自由基发生氢原子摘除反应，生成。 ARO BR自由基CH2ODHO2 8、大气中还原态气体（如H2S）主要被______氧化。 AO2?????BOH??????CO3????????D高价金属离子 9、根据Whittby的三模态模型，粒径小于_____um的粒子称为爱根核模。 A0.05???B0.1????C1????????D2 10、气溶胶中粒径________um的颗粒，称为飘尘。 1 3、、 4 5 6 7 和。 8 9 10 11 13 15 16、伦敦烟雾事件是由_____________和_____________引起的。 17、大气中CH4主要来自________、________、_________的排放。 18、富集因子法可以推断气溶胶污染源，如（EF）地壳＞10，则表示待查元素i________。 19、降水中主要阴离子有______、______、______、______。 20、写出下列物质的光离解反应方程式 （1）NO2+hν+

分子生物学大实验报告

分子生物学实验 ： 专业： 学号：

目录 实验一细菌培养 实验二质粒DNA提取 实验三琼脂糖凝胶电泳 实验四质粒DNA酶切及琼脂糖电泳分析鉴定 实验五聚合酶链式反应（PCR）技术体外扩增DNA 实验六地高辛标记的Southern杂交

实验一细菌的培养 一、目的 学习细菌的培养方法及培养基的配置。 二、原理 在基因工程实验和分子生物学实验中，细菌是不可缺少的实验材料。质粒的保存、增殖和转化；基因文库的建立等都离不开细菌。特别是常用的大肠杆菌。 大肠杆菌是含有长约3000kb的环状染色体的棒状细胞。它能在仅含碳水化合物和提供氮、磷和微量元素的无机盐的培养基上快速生长。当大肠杆菌在培养基中培养时，其开始裂殖前，先进入一个滞后期。然后进入对数生长期，以20~30min复制一代的速度增殖。最后，当培养基中的营养成分和氧耗尽或当培养基中废物的含量达到抑制细菌的快速生长的浓度时，菌体密度就达到一个比较恒定的值，这一时期叫做细菌生长的饱和期。此时菌体密度可达到1×109~2×109/mL。 培养基可以是固体的培养基，也可以是液体培养基。实验室中最常用的是LB培养基。 三、实验材料、试剂与主要仪器 （一）实验材料 大肠杆菌 （二）试剂 1. 胰蛋白胨 2. 酵母提取物 3. 氯化钠 4. 1mol/L NaOH 5. 琼脂粉 6. 抗生素（氨苄青霉素、卡那霉素等） （三）仪器 1. 培养皿 2. 带帽试管 3. 涂布器 4. 灭菌锅 5. 无菌操作台（含酒精灯、接种环、灭菌牙签等） 6. 恒温摇床 四、操作步骤 （一）LB培养基的配制 配制每升培养基，应在950m1去离子水中加入： 细菌培养用胰蛋白胨10g 细菌培养用酵母提取物5g NaCl 10g 摇动容器直至溶质完全溶解，用1mol/L NaOH调节pH位至7.0。加入去离子水至总体积为lL，在15 lbf／in2 (1.034×105Pa)高压下蒸气灭菌20分钟。 这样得到是LB液体培养基。LB固体培养基是在其液体培养基的基础上另加琼脂粉15g/L。 （二）细菌的培养 （１）在液体培养基中培养

克隆绿色荧光蛋白分子生物学实验报告

南方医科大学 绿色荧光蛋白的克隆 实验报告 年级专业 2014级生物技术 姓名朱旭峰 学号 3147020042

摘要 细菌质粒是一类双链、闭环的DNA，大小范围从1kb至200kb以上不等。各种质粒都是存在于细胞质中、独立于细胞染色体之外的自主复制的遗传成份，通常情况下可持续稳定地处于染色体外的游离状态，但在一定条件下也会可逆地整合到寄主染色体上，随着染色体的复制而复制，并通过细胞分裂传递到后代。 质粒已成为目前最常用的基因克隆的载体分子，重要的条件是可获得大量纯化的质粒DNA分子。目前已有许多方法可用于质粒DNA的提取，下面主要介绍碱裂解法提取质粒DNA的方法。 Cloning of green fluorescent protein Abstract： Bacterial plasmid is a kind of double chain, closed-loop DNA, ranging from 1KB to 200kb. All plasmid is present in the cytoplasm, independently from the chromosome of autonomously replicating genetic component, usually under the condition of sustainable and stable in staining in the free state, but under certain conditions will irreversibly integrated into the host chromosome, with the replication of the chromosome replication and by cell split passed on to future generations. Plasmids have become the most commonly used gene cloning vector molecules, the important condition is to obtain a large number of purified plasmid DNA molecules. There are many methods can be used to extract plasmid DNA, the following are mainly introduced the method of extracting plasmid DNA by alkaline lysis method. 关键词 GFP 质粒提取感受态细菌细菌转化 1.前言 碱裂解法是一种应用最为广泛的制备质粒DNA的方法，纯化质粒DNA的方法通常是利用了质粒DNA相对较小及共价闭环两个性质。例如，氯化铯-溴化乙锭梯度平衡离心、离子交换层析、凝胶过滤层析、聚乙二醇分级沉淀等方法，但这些方法相对昂

南开大学13春学期《经济学原理(一)》在线作业

南开大学13春学期《经济学原理（一）》在线作业13春学期《经济学原理（一）》在线作业 一、 1.税收减少 A A. 如果税收极高，可以增加税收收入 B. 无论以前税收规模如何，总会减少税收收人 C. 对税收收入没有影响 D. 引起市场变得更无效率 正确答案：A 2.对一个竞争的、利润最大化的企业，资本的边际产量值曲线是企业的 A. 生产函数 B. 边际成本曲线 C. 资本的供给曲线 D. 资本的需求曲线 正确答案：D 3.根据教育的人力资本论，教育 A. 增加了人力资本和工人的工资 B. 只有助于企业把工人分为高能力工人与低能力工人 C. 对工人的人力资本没有影晌 D. 可以使任何一个工人成为超级明星 正确答案：B 4.以下哪一项不是垄断市场的进人壁垒 A. 政府给一家企业排他性地生产某种物品的权利 B. 生产成本使一个生产者比其他生产者更有效率 C. 一种关键资源由一家企业拥有 D. 一个企业非常大 正确答案：D 5.当一个寡头个别的选择使用利润最大的生产水平时，它收取的价格是 A. 大于垄断收取的价格，而小于竟争市场收取的价格 B. 小于垄断收取的价格，而小于竞争市场收取的价格 C. 大于垄断或竞争市场收取的价格 D. 小于垄断或竟争市场收取的价格 正确答案：A 6.科学方法要求 A. 科学家使用试管 B. 科学家是客观的 C. 科学家使用精密仪器 D. 只有不正确的理论得到检验

E. 只有 正确答案：B 7.与其他国家相比，美国的收入分配是 A. 约为中间水平 B. 比大多数国家的差距略小一点 C. 最平等 D. 最不平等 正确答案：A 8.如果边际成本等于平均总成本 A. 平均总成本增加 B. 平均总成本减少 C. 平均总成本最小 D. 平均总成本最大 正确答案：A 9.以下哪一个关于循环流向图的表述是正确的 A. 生产要素归家庭所有 B. 如果苏珊为IHM工作并得到一张工资支**，这个交易就是发生在物品和劳务市场上 C. 如果比IBM出售一台电脑，这个交易就是发生在生产要素市场上。 D. 生产要素归企业所有 E. 以上各项都不是。 正确答案：A 10.如果一个买者对一辆新本田车的支付意愿是20000美元，而她实际以18000美元买到r 这辆车，她的消费者剩余是 A. 0美元 B. 2000美元 C. 18000美元 D. 20000美元 E. 38000美元 正确答案：B 11.买者的支付意愿是买者的 A. 消费者剩余 B. 生产者剩余 C. 他们愿意为一种物品支付的最大量 D. 他们愿意为一种物品支付的最小量 E. 以上齐项都不是 正确答案：C 12.表示税收规模和政府得到的税收收入之间关系的图形被称为 C A. 凯恩斯曲线