puc57 图谱简图
PUC57有氨苄抗性，MCS在lacZ基因里面插入基因后可通过蓝白筛选挑选阳性克隆。
如何阅读质粒图谱
第一步：首先看Ori的位置，了解质粒的类型（原核/真核/穿梭质粒）
第二步：再看筛选标记，如抗性，决定使用什么筛选标记。
（1）Ampr 水解β－内酰胺环，解除氨苄的毒性。
（2）tetr 可以阻止四环素进入细胞。
（3）camr 生成氯霉素羟乙酰基衍生物，使之失去毒性。
（4）neor（kanr）氨基糖苷磷酸转移酶使G418（卡那霉素衍生物）失活
（5）hygr 使潮霉素β失活。
第三步：看多克隆位点（MCS）。它具有多个限制酶的单一切点。便于外源基因的插入。如果在这些位点外有外源基因的插入，会导致某种标志基因的失活，而便于筛选。决定能不能放目的基因以及如何放置目的基因。
第四步：再看外源DNA插入片段大小。质粒一般只能容纳小于10Kb的外源DNA 片段。一般来说，外源DNA片段越长，越难插入，越不稳定，转化效率越低。
第五步：是否含有表达系统元件，即启动子－核糖体结合位点－克隆位点－转录终止信号。这是用来区别克隆载体与表达载体。克隆载体中加入一些与表达调控有关
的元件即成为表达载体。选用那种载体，还是要以实验目的为准绳。
启动子－核糖体结合位点－克隆位点－转录终止信号
启动子－促进DNA转录的DNA顺序，这个DNA区域常在基因或操纵子编码顺序的上游，是DNA分子上可以与RNApol特异性结合并使之开始转录的部位，但启动子本身不被转录。λ
增强子/沉默子－为真核基因组（包括真核病毒基因组）中的一种具有增强邻近基因转录过程的调控顺序。其作用与增强子所在的位置或方向无关。即在所调控基因上游或下游均可发挥作用。/沉默子－负增强子，负调控序列。λ
核糖体结合位点/起始密码/SD序列（Rbs/AGU/SDs）：mRNA有核糖体的两个结合位点，对于原核而言是AUG（起始密码）和SD序列。λ
转录终止顺序（终止子）/翻译终止密码子：结构基因的最后一个外显子中有一个AATAAA的保守序列，此位点down－stream有一段GT或T富丰区，这2部分共同构成poly（A）加尾信号。结构基因的最后一个外显子中有一个AATAAA的保守序列，此位点down－stream有一段GT或T富丰区，这2部分共同构成poly（A）加尾信号。λ
为什么质粒图谱上有的箭头顺时针有的箭头逆时针？那其实是代表两条DNA链，即质粒是环状双链DNA，它的启动子等在其中一条链上，而它的抗性基因在另一条链上.
图下方显示的序列是多克隆酶切位点。
如何阅读分析质粒图谱
如何阅读分析质粒图谱 日期：2012-04-18来源：未知作者：xilu点击：次 如何阅读分析质粒图谱 载体主要有病毒和非病毒两大类,其中质粒DNA是一种新的非病毒转基因载体。 一个合格质粒的组成要素 1. 复制起始位点Ori即控制复制起始的位点。原核生物DNA分子中只有一个复制起始点。而真核生物DNA分子有多个复制起始位点。 2. 抗生素抗性基因可以便于加以检测，如Amp+ ,Kan+ 3. 多克隆位点MCS 克隆携带外源基因片段 4. P/E 启动子/增强子 5. Terms 终止信号 6. 加poly(A)信号可以起到稳定mRNA作用 如何阅读质粒图谱 第一步：首先看Ori的位置，了解质粒的类型(原核/真核/穿梭质粒) 所谓穿梭质粒是指一类人工构建的具有两种不同复制起点和选择标记，因而可以在两种不同类群宿主中存活和复制的质粒载体。此概念不仅用于不同的微生物菌群之间，也可以推广到真核生物表达载体的构建，如用于枯草的pBE2、酵母的pPIC9K、哺乳动物表达载体pMT2 和用于植物细胞的Ti 质粒。这些穿梭质粒不仅可以在大肠杆菌中复制扩增，也可以在相应的枯草、酵母、动物或植物细胞中扩增和表达。这样利于对质粒的分子生物学操作和大量制备。 第二步：再看筛选标记，如抗性，决定使用什么筛选标记。 1. Ampr水解β-内酰胺环，解除氨苄的毒性。 2. tetr可以阻止四环素进入细胞。 3. camr生成氯霉素羟乙酰基衍生物，使之失去毒性。
4. neor(kanr) 氨基糖苷磷酸转移酶使G418(长那霉素衍生物)失活 5. hygr使潮霉素β失活。 第三步：看多克隆位点(MCS)。它具有多个限制酶的单一切点。便于外源基因的插入。如果在这些位点外有外源基因的插入，会导致某种标志基因的失活，而便于筛选。决定能不能放目的基因以及如何放置目的基因。 第四步：再看外源DNA插入片段大小。质粒一般只能容纳小于10Kb的外源DNA片段。一般来说，外源DNA片段越长，越难插入，越不稳定，转化效率越低。 第五步：是否含有表达系统元件，即启动子-核糖体结合位点-克隆位点-转录终止信号。这是用来区别克隆载体与表达载体。克隆载体中加入一些与表达调控有关的元件即成为表达载体。选用那种载体，还是要以实验目的为准绳。 启动子-核糖体结合位点-克隆位点-转录终止信号
质粒图谱信息
质粒图谱信息 一.九种表达载体 Pllp-OmpA, pllp-STII, pMBP-P, pMBP-C, pET-GST, pET-Trx, pET-His, pET-CKS, pET-DsbA 二.克隆载体 pTZ19R DNA pUC57 DNA PMD18T PQE30 pUC18 pUC19 pTrcHisA pTrxFus pRSET-A pRSET-B pV AX1 PBR322 pbv220 pBluescript II KS (+) L4440 pCAMBIA-1301 pMAL-p2X pGD926 三.PET系列表达载体 Protein Expression ? Prokaryotic Expression ? pETDsb Fusion Systems 39b and 40b Protein Expression ? Prokaryotic Expression ? pET Expression System 33b Protein Expression ? Prokaryotic Expression ? pET Expression Systems Protein Expression ? Prokaryotic Expression ? pET Expression Systems plus Competent Cells Protein Expression ? Prokaryotic Expression ? pET GST Fusion Systems 41 and 42 Protein Expression ? Prokaryotic Expression ? pETNusA Fusion Systems 43.1 and 44 Protein Expression ? Prokaryotic Expression ? pET Vector DNA Protein Purification ? Purification Systems ? Strep?Tactin Resins and Purification Kits 四.PGEX系列表达载体 T EcoR pGEX-1 I/BAP pGEX-2T pGEX-2TK pGEX-3X pGEX-4T-1 pGEX-4T-2 pGEX-4T-3 pGEX-5X-1 pGEX-5X-2 pGEX-5X-3
维真生物-如何阅读基因载体图谱
如何阅读基因载体图谱 基因载体是基因工程的核心，也是基因治疗中强有力的生物工具，我们先来认识和阅读载体图谱吧。 一、载体分类及载体组成元件 载体分类 1、按属性分类：病毒载体和非病毒载体 病毒载体是一种常见的分子生物学工具，可将遗传物质带入细胞，原理是利用病毒具有传送其基因组进入目的细胞，进行感染的分子机制。可发生于完整活体或是细胞培养中。可应用于基础研究、基因疗法或疫苗。用于基因治疗和疫苗的病毒载体应具备以下基本条件： （1）携带外源基因并能包装成病毒颗粒； （2）介导外源基因的转移和表达； （3）对人体不致病； （4）在环境中不会引起增殖和传播。 非病毒载体一般是指质粒DNA。 2、按进入受体细胞的类型分类：原核载体、真核载体、穿梭载体（含原核和真核2个复制子，能在原核和真核细胞中复制，并可以在真核细胞中有效表达）。 3、按功能分类：克隆载体、表达载体 克隆载体：具有克隆载体的基本元件（Ori，Ampr，MCS等），可以携带DNA片段或外源基因进入受体细胞并克隆和大量扩增DNA片段（外源基因）的载体。 表达载体：克隆载体中加入一些与表达调控（具有转录/翻译所必需的DNA顺序）有关的元件即成为表达载体。 载体组成元件 1、复制起始位点Ori：即控制复制起始的位点。Ori的箭头指复制方向，其他元件标注的箭头多指转录方向（正向）。 2、抗生素抗性基因：可以便于加以检测，如Amp+ ，Kan+ （1）Ampr：水解β-内酰胺环，解除氨苄的毒性。
（2）tetr ：可以阻止四环素进入细胞。 （3）camr：生成氯霉素羟乙酰基衍生物，使之失去毒性。 （4）neor（kanr）：氨基糖苷磷酸转移酶，使G418（卡那霉素衍生物）失活。 （5）hygr：使潮霉素β失活。 3、多克隆位点：MCS克隆携带外源基因片段，它具有多个限制酶的单一切点，便于外源基因的插入。如果在这些位点外有外源基因的插入，会导致某种标志基因的失活，便于筛选。决定能不能放目的基因以及如何放置目的基因。还要再看外源DNA插入片段大小。质粒一般只能容纳小于10kb的外源DNA片段。一般来说，外源DNA片段越长，越难插入，越不稳定，转化效率越低。 4、P/E：启动子/增强子 5、Terms：终止信号 6、加poly（A）信号：可以起到稳定mRNA作用 示例阅读载体： pENTER载体 1）human ORF + pENTER载体 2） CMV启动子，T7启动子 3） ORF的C端融合了Flag和His tag 4) 多克隆位点，常用AsisI 和 MluI(人源基因上不常见的)
最新图谱宫颈细胞学
图谱宫颈细胞学
一、正常宫颈细胞学 图1 为一群表层鳞状上皮细胞，少部分细胞轻度重叠，但结构清晰，多为扁平多角形，核呈现固缩并有核周空晕。 图2 中表层鳞状上皮细胞，中层细胞多嗜碱性而蓝染，细胞较大，核园或椭圆形，染色质细颗粒状。
图3 子宫颈内膜细胞最常见为栅栏状排列，分泌性柱状细胞充以透明粘液，胞浆内可见微小空泡，浅嗜碱性，核园形偏心位，另见一鳞状上皮细胞。 图4 柱状上皮的鳞状上皮化生，属病理性改变，是对环境的适应性反应，但细胞形态无异形，是非恶性细胞学特征。
二、液基薄层细胞制片的质量评价 不满意制片的实例 图5 宫颈上皮细胞数量太少并可见许多细胞碎片，该片不能认为是满意的细胞制片，一般满意的制片是标本的细胞总数不少于2000个。平均40?高倍视野不少于8个细胞 (低倍10?)。 图6 传统的手工涂片，具有诊断意义的异常的上皮细胞被大量重叠的血细胞和炎症细胞遮掩。如果重叠细胞大于75%的话，将不能满意地作出准确诊断。
图7传统手工涂片常有细胞干缩人工假象，机器自动制片避免了这一麻烦，除非医师采样时，细胞未及时放入保存液中。如果整片中干缩细胞多于75%，将会影响医师的诊断结果。 图8 传统手工涂片常有细胞干缩人工假象，堆积的细胞核，染色质结构不清晰，整片着色模糊。劣质的涂片，导致无法作出准确的诊断。本例随访跟踪为上皮内中度不典型病变。
质量满意的液基薄层细胞制片 图9上皮细胞数量勉强足够，平均每个高倍视野大约10-12个细胞，整片估计大约有3000至5000 个细胞，勉强能够满足诊断分析。 图10 上皮细胞数量基本足够，平均每高倍视野大约20-30个细胞，整片估计有5000-10000个细胞，基本能够满足诊断分析。
如何阅读质粒图谱(更新版本)
如何阅读质粒图谱 最近由于实验需要,需要查阅载体图谱,到园子里搜罗一番,发现虽然有人问载体图谱阅读的问题,也有前辈回答,但都不详细,借自己也在琢磨这个问题的机会,将我学到的东西整理一下,于 大家分享。 载体主要有病毒和非病毒两大类,其中质粒DNA是一种新的非病毒转基因载体。 一个合格质粒的组成要素 #复制起始位点Oril 即控制复制起始的位点。原核生物DNA分子中只有一个复制起始点。而真核生物DNA分子有多个复制起始位点。 ＃抗生素抗性基因可以便于加以检测，如Amp+l ,Kan+ ＃多克隆位点MCS 克隆携带外源基因片段l ＃P/E 启动子/增强子l ＃Termsl 终止信号 ＃加poly（A）信号l 可以起到稳定mRNA作用 二、如何阅读质粒图谱 第一步：首先看Ori的位置，了解质粒的类型（原核/真核/穿梭质粒） 第二步：再看筛选标记，如抗性，决定使用什么筛选标记。 （1）Ampr 水解β－内酰胺环，解除氨苄的毒性。 （2）tetr 可以阻止四环素进入细胞。 （3）camr 生成氯霉素羟乙酰基衍生物，使之失去毒性。 （4）neor（kanr）氨基糖苷磷酸转移酶使G418（卡那霉素衍生物）失活 （5）hygr 使潮霉素β失活。 第三步：看多克隆位点（MCS）。它具有多个限制酶的单一切点。便于外源基因的插入。如果在这些位点外有外源基因的插入，会导致某种标志基因的失活，而便于筛选。决定能不能放目的基因以及如何放置目的基因。 第四步：再看外源DNA插入片段大小。质粒一般只能容纳小于10Kb的外源DNA片段。一般来说，外源DNA片段越长，越难插入，越不稳定，转化效率越低。 第五步：是否含有表达系统元件，即启动子－核糖体结合位点－克隆位点－转录终止信号。这是用来区别克隆载体与表达载体。克隆载体中加入一些与表达调控有关的元件即成为表达载体。选用那种载体，还是要以实验目的为准绳。 启动子－核糖体结合位点－克隆位点－转录终止信号 ＃启动子－促进DNA转录的DNA顺序，这个DNA区域常在基因或操纵子编码顺序的上游，是DNA分子上可以与RNApol特异性结合并使之开始转录的部位，但启动子本身不被转录。 ＃增强子/沉默子－为真核基因组（包括真核病毒基因组）中的一种具有增强邻近基因转录过程的调控顺序。其作用与增强子所在的位置或方向无关。即在所调控基因上游或下游均可发挥作用。/沉默子－负增强子，负调控序列。 ＃核糖体结合位点/起始密码/SD序列（Rbs/AGU/SDs）：mRNA有核糖体的两个结合位点，对于原核而言是AUG（起始密码）和SD序列。l ＃转录终止顺序（终止子）/翻译终止密码子：结构基因的最后一个外显子中有一个AATAAA的保守序列，此位点down－stream有一段GT或T富丰区，这2部分共同构成poly（A）加尾信号。
最新图谱教学法在幼儿园音乐教学活动中的有效运用
图谱教学法在幼儿园音乐教学活动中的有效运用 内容摘要： 针对有些幼儿在音乐活动中表现枯燥缺乏兴趣的现象，巧妙、充分利用图谱教学法培养幼儿对音乐活动的兴趣，换一种方式让幼儿在快乐中体验音乐、感受音乐。从而进一步领悟音乐的韵律和意义。 关键词：图谱教学法音乐教学活动运用 幼儿音乐教育是一门艺术教育。领域很广，让幼儿通过演唱歌曲、欣赏音乐、感受节奏等来丰富幼儿的想象力和创造力。图谱教学法能够有效的帮助幼儿认识歌曲、理解歌曲。《幼儿园教育指导纲要》中指出：“幼儿艺术活动的能力是在大胆表现的过程中逐渐发展起来的，教师的作用应主要在于激发幼儿感受美、表现美的情趣，丰富他们的审美经验，使之体验自由表达和创造的快乐。在此基础上，根据幼儿的发展状况和需要，对表现方式和技能技巧给予适时、适当的指导。但是在现实教学中，我们还是比较传统拘束的。幼儿园开展音乐教育活动中存在很多问题： 1、单一的老师边弹边唱，形式缺乏创新。幼儿自主表现的机会少，使幼儿逐渐对音乐活动失去兴趣。对歌词的理解不够准确，特别是句子比较长的，往往难以把握。 2、学唱歌曲多，而感受和体验歌曲少。有些幼儿总是以勉强的情绪去迎和音乐的感情。没有从内心真正去唱。 3、老师们的教学形式比较统一，没有特色。各年龄层次接受的能力不一样，不要以同样的方法运用在不同年龄阶段。时间久了，幼儿会厌倦这种音乐活动的形式。 4、音乐活动中的辅助图片不够生动形象，过于成人化，缺少童真之美。使幼儿不敢去发现、去欣赏，以至失去学唱歌曲的积极性、主动性。 音乐图谱教学法能够有利的解决以上这些问题，幼儿园音乐图谱教学法是教师根据音乐描述的内容，设计出形象生动的图片，配合节奏鲜明的语言，体现音乐故事中所讲述的情境，能够很快的吸引、感染幼儿。教师结合图片的内容用抒情优美的语言去讲述和歌唱，幼儿会跟着图片、跟着老师进入音乐情节。用图片去激发幼儿参与音乐活动的积极性，幼儿也能够简单、轻松的掌握歌曲所表达的内容。各年龄段使用的图谱要有层次性、递进性、差异性。这要从幼儿的年龄特点考虑，结合幼儿的实际，设计不同形式的图片，让幼儿感受音乐的动感旋律和体验节奏的快乐。 一、设计图谱，激发幼儿参与音乐的情趣 在幼儿园音乐教学活动中，老师教小朋友唱歌都是采用统一的教学模式，一般是老师教一句幼儿学一句，或者跟着录音机和钢琴反反复复的唱。这样可能听多了、学多了，最后会了。但是幼儿不一定真正理解歌词的意义。这些传统的方法看似幼儿已经学会了，但是对于刚进入音乐萌芽阶段的幼儿来说不是最好的方法，幼儿自己没有足够的想象空间，导致对音乐活动失去兴趣。那应该怎么去改进、怎么去体现呢？作为幼儿的支持者、引导者，当然是
质粒图谱的阅读方法
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看多克隆位点（MCS）。 它具有多个限制酶的单一切点。 便于外源基因的插入。 如果在这些位点外有外源基因的插入，会导致某种标志基因的失活，而便于筛选。 决定能不能放目的基因以及如何放置目的基因。 第四步： 再看外源 DNA 插入片段大小。 质粒一般只能容纳小于 10Kb 的外源 DNA 片段。 一般来说，外源DNA 片段越长，越难插入，越不稳定，转化效率越低。 第五步： 是否含有表达系统元件，即启动子－核糖体结合位点－克隆位点－转录终止信号。 这是用来区别克隆载体与表达载体。 克隆载体中加入一些与表达调控有关的元件即成为表达载体。 选用那种载体，还是要以实验目的为准绳。 启动子－核糖体结合位点－克隆位点－转录终止信号 a. 启动子－促进 DNA 转录的 DNA 顺序，这个 DNA 区域常在基因或操纵子编码顺序的上游，是 DNA 分子上可以与 RNApol 特异性结合并使之开始转录的部位，但启动子本身不被转录。 b. 增强子/沉默子－为真核基因组（包括真核病毒基因组）
质粒绘图的专业软件——Winplas 使用说明
质粒绘图的专业软件——Winplas 2.7使用说明 作者：佚名来源：生物秀时间：2008-6-27 实验仪器大全实验试剂大全 Winplas作为一个质粒绘图的专业软件，功能强大，而且极易上手，它可以绘制出具有发表质量的质粒图谱。可广范应用于论文、教程的质粒插图，它的特性包括： 1，无论是否知道质粒的原始序列都能绘制质粒图，像Vector NTI等综合软件也能绘制质粒图，但有一个前提就是首先得知道质粒得原始序列； 2，可读入各种流行得序列格式文件，能方便地导入各种序列信息； 3，可自动在识别序列中的限制性酶切位点； 4，可对序列进行各种编辑，如：从文件插入序列、置换序列、序列编辑、部分序列删除等 5，绘图功能强大，如：位点标签、任意位置文字插入、生成彩图、线性或环形质粒图谱，可输出到剪贴板或图像文件。 软件下载地址：https://www.wendangku.net/doc/e82931316.html,/Soft/2008/2571.htm 一，在不知道序列结构时绘制质粒图： 1，点击File菜单中地New命令，出现一个MapView窗口，同时工具栏中地绘图命令显亮。 2，点击“Insert”菜单中的“Blank Seqment”命令，出现一个“Create New Plasmid”对话框。 －在Title栏中填入质粒名称，如pUC18。 －在Base Pairs栏中填入质粒大小，如3000。 －在Type单选框中设制质粒图谱为线型还是环形。 3，点击OK后，在Map View窗口就会出现一个圆环，其中有质粒名称及质粒大小。 4，下面的工作就是向圆环上添加文字描述、标记及弧。 ①点击“Insert”菜单中的“Text”命令，或直接点击工具栏中的“Text”按纽，出现“Edit Text object”对话框。 －在“Text”书签中填入“Text”的内容，如：This is PUB 18’s map，选择左右对齐及居中。 －选定相应字符可以加黒、斜体等。 －在Font书签中改变字体格式、大小及颜色。 －文字就出现在Map View窗口中，使用鼠标左健，就可以随意拖动其位置。 ②点击“Insert”菜单中“Maker”命令或直接点击工具栏中的“Maker”按钮，出现”Edit Maker Object”对话框。 －此时，在Maker书签中的Base Pair填入添加Maker的位置，如800。 －在Label栏中，填入Maker的名称，如HindⅢ。同样可以改变HindⅢ的字体样式：加黑，斜体等。 －同样在Font书签中可以改变字体的样式、大小及颜色。 －点击OK，则在圆环800bp的相应位置出现HindⅢ的标记。 ③点击“Insert”菜单中“Arc”命令，弹出”Edit Arc Object”对话框。 －在Arc书签中的Base Pair栏中，填入Arc的起始位置，如1000。 －在Length栏中填入Arc的长度，如400。在Label栏中填入Arc的名称，如Amp。 －在Arc Style书签中，首先确定该Arc是否有箭头以及箭头的方向。分别对应none, 5’→3’,3’→5’,及双向。（生物秀-专心做生物！https://www.wendangku.net/doc/e82931316.html,） －通过Width来确定Arc的宽度
阅读质粒图谱的基本方法
阅读质粒图谱的基本方法.txt爱情是彩色气球，无论颜色如何严厉，经不起针尖轻轻一刺。一流的爱人，既能让女人爱一辈子，又能一辈子爱一个女人！[转帖] 阅读质粒图谱的基本方法 载体主要有病毒和非病毒两大类,其中质粒DNA是一种新的非病毒转基因载体。一、一个合格质粒的组成要素 a复制起始位点Ori 即控制复制起始的位点。原核生物DNA分子中只有一 个复制起始点。而真核生物DNA分子有多个复制起始位点。 b 抗生素抗性基因可以便于加以检测，如Amp ,Kan c 多克隆位点MCS 克隆携带外源基因片段 d P/E 启动子/增强子 e Terms 终止信号 f 加poly（A）信号可以起到稳定mRNA作用 二、如何阅读质粒图谱 第一步：首先看Ori的位置，了解质粒的类型（原核/真核/穿梭质粒） 第二步：再看筛选标记，如抗性，决定使用什么筛选标记。 （1）Ampr 水解β－内酰胺环，解除氨苄的毒性。 （2）tetr 可以阻止四环素进入细胞。 （3）camr 生成氯霉素羟乙酰基衍生物，使之失去毒性。 （4）neor（kanr）氨基糖苷磷酸转移酶使G418（长那霉素衍生物）失活 （5）hygr 使潮霉素β失活。 第三步：看多克隆位点（MCS）。它具有多个限制酶的单一切点。便于 外源基因的插入。如果在这些位点外有外源基因的插入，会导致某种标 志基因的失活，而便于筛选。决定能不能放目的基因以及如何放置目的 基因。 第四步：再看外源DNA插入片段大小。质粒一般只能容纳小于10Kb的外 源DNA片段。一般来说，外源DNA片段越长，越难插入，越不稳定，转 化效率越低。 第五步：是否含有表达系统元件，即启动子－核糖体结合位点－克隆位 点－转录终止信号。这是用来区别克隆载体与表达载体。克隆载体中加入 一些与表达调控有关的元件即成为表达载体。选用那种载体，还是要 以实验目的为准绳。 启动子－核糖体结合位点－克隆位点－转录终止信号 a 启动子－促进DNA转录的DNA顺序，这个DNA区域常在基因或操纵子 编码顺序的上游，是DNA分子上可以与RNApol特异性结合并使之开始转 录的部位，但启动子本身不被转录。 b增强子/沉默子－为真核基因组（包括真核病毒基因组）中的一种具有 增强邻近基因转录过程的调控顺序。其作用与增强子所在的位置或方向 无关。即在所调控基因上游或下游均可发挥作用。/沉默子－负增强子， 负调控序列。 c核糖体结合位点/起始密码/SD序列（Rbs/AGU/SDs）：mRNA有核糖体
所有质粒载体汇总
酿酒酵母表达载体 pYES2,pYES2/NT,pYES2/CT,pYES3,pYES6, pYCplac22-GFP, 酵母载体pAUR123,pRS303TEF,pRS304, pRS305,pRS306,pY13TEF,pY14TEF， pY15TEF，pY16TEF, 酵母基因重组表达载体pUG6, pSH47, 酵母单杂载体pHISi,pLacZi,pHIS2, pGAD424, 酵母双杂交系统:酿酒酵母Y187, 酿酒酵母AH109；质粒pGADT7,pGBKT7；对照质粒pGBKT7-53，pGBKT7-lam，pGADT7-T，PCL1， 酿酒酵母菌株INVSc1,YM4271, AH109,Y187,Y190, 毕赤酵母表达载体 pPIC9K,pPIC9K-His,pPIC3.5K,pPICZalphaA,B,C,pPICZA,B,C,pGAPZα A,pAO815,pPIC9k-His,pHIL-S1,pPink hc， 配套毕赤酵母Pichiapink, 毕赤酵母宿主X33，KM71，KM71H，GS115， 原核表达载体pQE30,31,32,40,60,61,62,等原核表达载体,包括pET系列，pET-GST，pGEX系列（含GST标签），pMAL系列 pMAL-c2x,-c4x,-c4e,-c5x,-p5x,pBAD,pBADHis,pBADmycHis系列，pQE系 列,pTrc99a,pTrcHis系列，pBV220,221,222,pTXB系列，pLLP-ompA,pIN-III-ompA （分泌型表达系列）,pQBI63（原核表达带荧光）pET3a, pET 3d, pET 11a, pET 12a, pET 14b, pET 15b, pET 16b, pET 17b, pET 19b, pET 20b, pET 21a,b,d, pET 22b, pET 23a, pET 23b, pET 24a,b, pET 25b, pET 26b, pET 27b, pET 28a,b, pET 29a, pET
怎么查找质粒图谱
经常在坛子里看到一些人求助质粒图谱，很多时候我发现其实有些质粒图谱还是很容易找到了，刚开始帮忙查找了下，还公布了一些查找质粒图谱比较好的网站，后来看得多了，很多时候，这样的帖子直接跳过了。今天又看到几个求质粒图谱的帖子，因此决定就查找质粒图谱的方法，写个总结帖子，希望对虫子们有些帮助。这些方法，大部分是自己学习的过程中积累的，也许总结得还不够全面，望其他虫友指正。 方法一：安装软件Vector NT 做分子实验，经常和不同的质粒打交道，了解各种质粒的图谱信息是必需的，invitrogen公司的这款软件绝对是分子生物学虫子们的福音，功能强大、界面美观，使用起来很人性化。后面的很多方法都是基于在这款软件的使用之上，因此个人觉得要想对质粒图谱了解更直观，安装这款软件是非常必要的。而且，一旦安装了这款软件，你就发现这款软件的软件包里面会包括invitrogen公司的所有质粒图谱信息和其他比较常见和经典的质粒图谱（不是有虫子求pRS系列质粒吗？帖子链接https://www.wendangku.net/doc/e82931316.html,/bbs/viewthread.php?tid=3103223&fpage=1，如下图，数据库中本身就有很多）。这里就不一一细说，各位虫子可以自己体验下。（这款软件的下载和使用说明书站内很多）
方法二：查找质粒图谱的网站： 这个之前有人求助质粒图谱时，我在回应求助帖里面公布过几个我经常用的网址，估计不是专题，很多人没看到，现在在此重新总结下 1.Vector Database 地址：https://https://www.wendangku.net/doc/e82931316.html,/g?a=vdb 这个网站很页面很人性化，直入主题，也是我经常用到一个网站，比如同样这个帖子求pRS类质粒图谱（注意，是一类质粒图谱，没关系，照样能找到），直接在搜索框输入pRS，可以看到，之类质粒一共有三十多个。
世界洋流分布图——填图练习
世界洋流分布图——填图练习 1 、 填出图中箭头的名称（实线为暖流，虚线为寒流） 太平洋 ①_____________ ②_____________ ③____________ ④____________ ⑤_____________ ⑥_____________ ⑦_____________ ⑧_____________ ⑨____________ ⑩_____________ 大西洋 a_____________ b_____________ c_____________ d_____________ e_____________ f_____________ g_____________ h_____________ i_____________ j_____________ 印度洋 (1)_____________ (2)_____________(3)_____________(4)_____________ 2、写出图中的甲乙丙丁四个渔场的名称和形成原因。 甲 ________渔场：___________________________________________________ 乙 ________渔场：___________________________________________________ 丙 ________渔场：___________________________________________________ 丁 ________渔场：___________________________________________________ 3、用蓝色笔描出5处风海流 4、北印度洋季风洋流（冬季实线，夏季虚线） 丁 丙 乙 甲
【Y2H操作方法-HXY整理】
实验步骤说明**： 1. 诱饵质粒pGBKT7-bait的构建 2.诱饵融合蛋白BD-bait对AH109酵母的自激活作用及毒性的检测【重要的前期准备】 3. 人胰腺cDNA文库的滴定和扩增【不用做了，直接用质粒】 4. 转化AH109酵母后转化子（阳性克隆）的筛选【顺序转化或共转化】 5. 蛋白质相互作用的验证【一对一验证】 ** 2.诱饵融合蛋白BD-bait对AH109酵母的自激活作用及毒性的检测 2.1 LacZ自激活的检测. 2.2 HIS3自激活的检测 2.3 融合蛋白对酵母菌的毒性检测 4. 文库转化AH109酵母后转化子的筛选 4.1 文库质粒转化pGBKT7-bait/AH109酵母 使用标准的PEG/LiAc转化法将文库质粒转化入已含有pGBKT7-bait质粒的AH109酵母，涂布在SD-Ade-His-Leu-Trp平板上进行重组子筛选 4.2 报告基因ADE2、HIS3和lacZ激活的验证 ADE2、HIS3的激活：酵母能够在SD-Ade-His-Leu-Trp平板生长 LacZ的激活：β-半乳糖苷酶显色反应呈蓝色 4.3 pACT2-cDNA质粒的获取： ①从酵母中抽提质粒，得到pGBKT7-bait和pACT2-cDNA的混合物
②转化E. coli，涂布在含Amp的LB平板上，由于质粒不相容性，转化子中便只含有pACT2-cDNA质粒 ③从转化成功的E. coli中抽提出pACT2-cDNA质粒 5. 蛋白质相互作用的验证【一对一验证】 5.1 由于酵母双杂交的假阳性很普遍，所以筛选得到相互作用蛋白的cDNA序列之后，还应将分离出 的各种pACT2-cDNA再次单独转化pGBKT7-bait/AH109酵母，即一对一验证，再次检测它们对报告基因的激活情况，排除假阳性 5.2 将pACT2-cDNA质粒送测序，得到cDNA片段的序列，在NCBI数据库Blast查出其对应的蛋白 质 5.3 另外，还必须分析这些pACT2-cDNA质粒的构建情况。由于商品文库构建的特殊性，要特别关注 这些插入的cDNA片段是否发生了frameshift 5.4 在上述验证都通过的情况下，仍然需要用诸如免疫共沉淀、GST-pull down、细胞共定位等实验来 对这些相互作用来进行验证 公司的这三个操作手册：
如何阅读质粒图谱
一、载体主有病毒和非病毒两大类，其中质粒DNA是一种新的非病毒转基因载体。 一、一个合格质粒的组成要素 复制起始位点Ori，即控制复制起始的位点。原核生物DNA分子中只有一个复制起始点。而真核生物DNA分子有多个复制起始位点。抗生素抗性基因：可以便于加以检测，如Amp+ ，Kan+ 多 克隆位点：MCS克隆携带外源基因片段 P/E：启动子/增强子 Terms：终止信号 加poly（A）信号：可以起到稳定mRNA作用 二、如何阅读质粒图谱 第一步：首先看Ori的位置，了解质粒的类型（原核/真核/穿梭质粒） Ori的箭头指复制方向，其他元件标注的箭头多指转录方向（正向）。 第二步：再看筛选标记，如抗性，决定使用什么筛选标记： （1）Ampr：水解β-内酰胺环，解除氨苄的毒性。 （2）tetr ：可以阻止四环素进入细胞。 （3）camr：生成氯霉素羟乙酰基衍生物，使之失去毒性。 （4）neor（kanr）：氨基糖苷磷酸转移酶，使G418（卡那霉素衍生物）失活。 （5）hygr：使潮霉素β失活。 第三步：看多克隆位点（MCS）。它具有多个限制酶的单一切点，便于外源基因的插入。如果在这些位点外有外源基因的插入，会导致某种标志基因的失活，而便于筛选。决定能不能放目的基因以及如何放置目的基因。 第四步：再看外源DNA插入片段大小。质粒一般只能容纳小于10Kb的外源DNA片段。一般来说，外源DNA片段越长，越难插入，越不稳定，转化效率越低。 第五步：是否含有表达系统元件，即启动子－核糖体结合位点－克隆位点－转录终止信号。这是用来区别克隆载体与表达载体。克隆
载体中加入一些与表达调控有关的元件即成为表达载体。选用那种载体，还是要以实验目的为准绳。 相关概念： 启动子－核糖体结合位点－克隆位点－转录终止信号 启动子－促进DNA转录的DNA顺序，这个DNA区域常在基因或 操纵子编码顺序的上游，是DNA分子上可以与RNApol特异性结合并使之开始转录的部位，但启动子本身不被转录。 增强子/沉默子－为真核λ基因组（包括真核病毒基因组）中的一种具有增强邻近基因转录过程的调控顺序。其作用与增强子所在的位置或方向无关。即在所调控基因上游或下游均可发挥作用。沉默子－负增强子，负调控序列。 核糖体结合位点/起始密码/SD序列（Rbs/AGU/SDs）：mRNA有核糖体的两个结合位点，对于原核而言是AUG（起始密码）和SD序列。 λ转录终止顺序（终止子）/翻译终止密码子：结构基因的最后一个外显子中有一个AATAAA的保守序列，此位点down－stream有一段GT 或T富丰区，这2部分共同构成poly（A）加尾信号。结构基因的最后一个外显子中有一个AATAAA的保守序列，此位点down－stream有一段GT或T富丰区，这2部分共同构成poly（A）加尾信号。 三、载体及其分类 载体：即要把一个有用的基因（目的基因——研究或应用基因）通过基因工程手段送到生物细胞（受体细胞），需要运载工具（交通工具）携带外源基因进入受体细胞，这种运载工具就叫做载体（vector）。 P.S.基因工程所用的vector实际上是DNA分子，是用来携带目的 基因片段进入受体细胞的DNA。 载体的分类 按功能分成：（1）克隆载体：都有一个松弛的复制子，能带动 外源基因，在宿主细胞中复制扩增。它是用来克隆和扩增DNA片段（基因）的载体。（所以有时实验时扩增效率低下，要注意是不是使用的严谨型载体）（2）表达载体：具有克隆载体的基本元件 （ori,Ampr,Mcs等）还具有转录/翻译所必需的DNA顺序的载体。
洋流分布与影响练习题
洋流分布与影响练习题 读图，回答1～2题。 1.有关图中洋流的叙述，正确的( ) A.①为寒流，②为暖流 B.①为暖流，②为寒流 C.①②均为暖流 D.①②均为寒流 2.形成当地热带雨林气候的主要因素( ) ①纬度位置②地形因素③盛行风④洋流因素 A.①②④ B.①③④ C.①②③ D.②③④ 3．某海洋位于西半球大陆东岸呈逆时针方向流动的洋流是 A．墨西哥湾暖流 B．巴西暖流 C．秘鲁寒流 D．东澳大利亚暖流 4．下列有关洋流的叙述，正确的是 A．由南向北流的洋流是暖流B．由北向南流的洋流是寒流 C．寒流水温一定低于暖流水温D．暖流水温不一定高于寒流水温 5．当北印度洋海区洋流呈逆时针方向流动时，下列正确的是 A．开普敦地区温和多雨 B．墨西哥湾飓风活动频繁 C．中南半岛盛行西南季风D．地中海沿岸受西风控制 6．不受洋流影响的地理环境有 A．南亚东季吹北风夏季吹偏南风 B．澳大利亚西海岸荒漠景观的形成C．纽芬兰、北海道等地成为世界著名的渔场 D．俄罗斯北冰洋沿岸海港常期不冻港下图为理想大陆周围洋流分布的模式图，读图回答5～6题。 7.反映“中低纬度海区顺时针方向流动”规律的洋流 A.③④ B.④⑤ C.⑤⑥ D.⑥⑤ 8.有关洋流对地理环境的影响，正确的说法( ) A.在高低纬度海区之间进行热量的传递与交换 B.在寒暖流交汇的海区，如①、③交汇区形成重要 渔场 C.厄尔尼诺现象是⑥势力增强的结果 D.同纬度地区，冬季①沿岸气温低于② 读“某海域洋流分布图”，回答9～10题。 9.对图中④洋流形成起重要作用的风带( ) A.北半球信风带 B.南半球信风带 C.北半球西风带 D.南半球西风带 10.关于四个洋流对陆地环境影响叙述正确的( ) A.在①洋流影响下，沿岸热带沙漠气候所跨经度范围广 B.在②洋流影响下，大陆沿岸地区形成热带草原气候
如何阅读分析质粒图谱
基因酷质粒图谱https://www.wendangku.net/doc/e82931316.html,/bbs/forum-38-1.html，收藏了将近800种质粒的图谱及相关信息 特向大家推荐，介绍及使用方法见： https://www.wendangku.net/doc/e82931316.html,/bbs/thread-417-1-1.html 质粒图谱信息 一.九种表达载体 Pllp-OmpA, pllp-STII, pMBP-P, pMBP-C, pET-GST, pET-Trx, pET-His, pET-CKS, pET-DsbA 二.克隆载体 pTZ19R DNA pUC57 DNA PMD18T PQE30 pUC18 pUC19 pTrcHisA pTrxFus pRSET-A pRSET-B pVAX1 PBR322 pbv220 pBluescript II KS (+) L4440 pCAMBIA-1301 pMAL-p2X pGD926 三.PET系列表达载体 Protein Expression ? Prokaryotic Expression ? pET Dsb Fusion Systems 39b and 40b Protein Expression ? Prokaryotic Expression ? pET Expression System 33b Protein Expression ? Prokaryotic Expression ? pET Expression Systems Protein Expression ? Prokaryotic Expression ? pET Expression Systems plus Competent Cells Protein Expression ? Prokaryotic Expression ? pET GST Fusion Systems 41 and 42 Protein Expression ? Prokaryotic Expression ? pET NusA Fusion Systems 43.1 and 44 Protein Expression ? Prokaryotic Expression ? pET Vector DNA Protein Purification ? Purification Systems ? Strep?Tactin Resins and Purification Kits 四.PGEX系列表达载体
☆如何查找质粒图谱
如何查找质粒图谱 编者小木虫论坛susizheng 经常在坛子里看到一些人求助质粒图谱，很多时候我发现其实有些质粒图谱还是很容易找到了，刚开始帮忙查找了下，还公布了一些查找质粒图谱比较好的网站，后来看得多了，很多时候，这样的帖子直接跳过了。今天又看到几个求质粒图谱的帖子，突发奇想，就查找质粒图谱的方法，写个总结帖子吧，希望对虫子们有些帮助。这些方法，大部分是自己学习的过程中偶尔发现，也许总结得还不够全面，望其他虫友指正。 方法一：安装软件Vector NT 做分子实验，经常和不同的质粒打交道，了解各种质粒的图谱信息是必需的，invitrogen公司的这款软件绝对是分子生物学虫子们的福音，功能强大、界面美观，使用起来很人性化。后面的很多方法都是基于在这款软件的使用之上，因此个人觉得要想对质粒图谱了解更直观，安装这款软件是非常必要的。而且，一旦安装了这款软件，你就发现这款软件的软件包里面会包括invitrogen公司的所有质粒图谱信息和其他比较常见和经典的质粒图谱（如下图，不是有虫子求pRS 系列质粒吗？如下图，数据库中本身就有很多）。这里就不一一细说，各位虫子可以自己体验下。（这框软件的下载和使用说明书站内很多） 方法二：查找质粒图谱的网站： 这个之前有人求助质粒图谱时，我在回应求助帖里面公布过几个我经常用的网址，估计不是专题，很多人没看到，现在在此重新总结下。 1.Vector Database 地址：https://https://www.wendangku.net/doc/e82931316.html,/g?a=vdb 这个网站很页面很人性化，直入主题，也是我经常用到一个网站，比如这个帖子https://www.wendangku.net/doc/e82931316.html,/bbs/viewthread.php?tid=3103223&fpage=1，这个虫友求pRS类质
查询质粒方法汇总
如何查找质粒图谱之我见——plasmid map, Vector Sequence方法汇总 经常在坛子里看到一些人求助质粒图谱，很多时候我发现其实有些质粒图谱还是很容易找到了，刚开始帮忙查找了下，还公布了一些查找质粒图谱比较好的网站，后来看得多了，很多时候，这样的帖子直接跳过了。今天又看到几个求质粒图谱的帖子，因此决定就查找质粒图谱的方法，写个总结帖子，希望对虫子们有些帮助。这些方法，大部分是自己学习的过程中积累的，也许总结得还不够全面，望其他虫友指正。 方法一：安装软件Vector NT 做分子实验，经常和不同的质粒打交道，了解各种质粒的图谱信息是必需的，invitrogen公司的这款软件绝对是分子生物学虫子们的福音，功能强大、界面美观，使用起来很人性化。后面的很多方法都是基于在这款软件的使用之上，因此个人觉得要想对质粒图谱了解更直观，安装这款软件是非常必要的。而且，一旦安装了这款软件，你就发现这款软件的软件包里面会包括invitrogen公司的所有质粒图谱信息和其他比较常见和经典的质粒图谱。这里就不一一细说，各位虫子可以自己体验下。（这款软件的下载和使用说明书站内很多） 方法二：查找质粒图谱的网站： 这个之前有人求助质粒图谱时，我在回应求助帖里面公布过几个我经常用的网址，估计不是专题，很多人没看到，现在在此重新总结下 1.Vector Database 地址：https://https://www.wendangku.net/doc/e82931316.html,/g?a=vdb 这个网站很页面很人性化，直入主题，也是我经常用到一个网站，比如同样这个帖子求pRS类质粒图谱（注意，是一类质粒图谱，没关系，照样能找到），直接在搜索框输入pRS，可以看到，之类质粒一共有三十多个。
世界洋流分布简图
世界洋流分布简图
那么，洋流又是怎么形成的呢？其实啊，影响洋流的因素有很多，在这些因素中，最主要的就是盛行风。 下面，让我们来回顾一下盛行风。在第二章第二节气压带风带中我们了解到，全球可分为五个气压带和六个风带，他们从赤道到两级依次为赤道低气压带信风带（东北信风/东南信风）副热带高压带盛行西风带副极地低压带极地东风带。 这些盛行风又是如何影响洋流的呢？这里老师给出了一幅世界主要大陆轮廓简图。请同学们跟随老师一起来看一看。 受信风影响，赤道地区海水随风而动，北半球向东北，南半球向东南。这种运动是沿地表进行的，是地表的水平运动。在第一章我们知道，由于地球自转，水平运动会因地转偏向力发生改变：北半球向哪儿偏？南半球呢？这样一来，就使得随风而动的表层海水偏转成自东而西流动。我们把这两股赤道地区暖热的洋流命名为北赤道暖流和南赤道暖流。 由此我们可以看出，除了受盛行风影响，对洋流产生作用的因素还有地转偏向力。 赤道洋流继续前进，在遇到大陆后，一部分海水南北分流，在北太平洋形成日本暖流；在北大西洋形成墨西哥湾暖流；在南太平洋形成东澳大利亚暖流；在南印度洋形成的洋流被马达加斯加岛分流，一支经过莫桑比克海峡，称为莫桑比克暖流，另一支则经过马达加斯加岛东岸，称为马达加斯加暖流，这两股暖流又在非洲南端厄加勒斯角汇合，形成厄加勒斯暖流；在南大西洋则形成巴西暖流。 由此我们可以看出，影响洋流的因素还有一个就是大陆轮廓。 赤道洋流一部分如上述被分流，还有一部分则由于赤道地区表层水被信风带走，所以下层以及周围海水就要补充这部分被吹走的海水，这个过程叫做补偿作用，并由此形成了赤道逆流。所以，补偿作用也是洋流的成因之一。 让我们来看一看目前这几个洋流，不难发现，它们的运动方向都是从低纬度流向高纬度，也就是从温暖的海区流向寒冷的海区，我们把这种洋流统称为暖流。暖流是洋流的一种类型，它是按照洋流的性质划分的。 再看这几个洋流的名称，其前半部分是洋流所经过的地名，后半部分是洋流的性质，所以可看出洋流的命名规则是洋流经过的地名+ 洋流 的性质。