粉防己碱对大鼠肝星状细胞增殖及细胞周期素D1,增殖细胞核抗原表达的调控

作者：赵宏贤，陈霞*，郭勇，李昌平，陈庄，余鸿

【摘要】目的探讨粉防己碱（tet）对肝星状细胞（hsc）增殖的调控机制。方法培养大鼠hsc，mtt法测tet对hsc增殖的影响，免疫细胞化学法测tet对hsc增殖细胞核抗原（pcna）和细胞周期素d1（cyclind1）表达的影响。结果 tet在0.5～1 mg/l的范围内显著抑制大鼠肝星状细胞的增殖(p<0.05)。 0.5，1 mg/l tet浓度组pcna阳性表达细胞数与对照组有显著性差异(p<0.01)，两浓度组之间也存在显著性差异(p<0.01)。 tet 0.5，1 mg／l 浓度组cyclind1阳性表达细胞数与对照组有显著性差异(p<0.01)，两浓度组之间差异有显著性 (p<0.01)。结论tet通过抑制细胞周期素cyclind1，pcna表达，使细胞周期停滞于 g0/g1期，从而发挥抑制大鼠肝星状细胞增殖的作用。

【关键词】粉防己碱肝星状细胞增殖细胞核抗原细胞周期素d1 免疫细胞化学

1 器材与方法

1.1 材料大鼠肝星状细胞株，泸州医学院附属医院传染免疫实验中心保存。

1.2 仪器与试剂co2恒温培养箱（美国shel-lab公司）；yj-1450型医用净化工作台（苏州长春电子仪器厂）；1x71型倒置相差显微镜（日本olympus光学仪器有限公司）。粉防己碱（成都四川省药检所）；rpmi1640培养基（美国gibco公司）；小牛血清（成都哈里生物公司）； pcna单克隆抗体（neomarkers公司）； cyclind1单克隆抗体（neomarkers公司）；abc免疫组化试剂盒（深圳晶美生物有限公司）。其余试剂均为市售分析纯产品。

1.3 大鼠肝星状细胞培养用含10%小牛血清的rpmi1640培养基将肝星状细胞培养于37℃,5%co2孵箱中,换液1次/d，当细胞贴满培养瓶瓶底约80%时，用0.25%胰蛋白酶消化贴壁的细胞，进行传代培养，并细胞及时冻存备用。

1.4 mtt法测tet对细胞增殖的影响取对数生长期细胞，于加药前24 h消化后以1×104/ml接种于96孔板中,置于37℃,5%co2孵箱中培养,待细胞生长达70%融合,将细胞分为 5 组:空白对照组（正常培养基）、0.25 mg/l组（培养基含0.25 mg/l tet）、0.5 mg/l组（培养基含0.5 mg/l tet）、1 mg/l组（培养基含1 mg/l tet）、2 mg/l组(培养基含2 mg/l tet)，每组设12个复孔。加药前以无血清培养基洗细胞3次。tet处理24 h后，每孔加入 mtt 溶液(5 μg/m1)20 μl，37℃继续培养 4 h后终止反应，小心吸弃孔内培养上清液，每孔加入150 μl dmso，振荡10 min，用酶标仪测各孔波长在490 nm的od值，并以下列公式计算细胞抑制率：细胞抑制率=(空白对照组平均od值-处理组平均od值)／空白对照组平均od值×l00%。

1.5 免疫细胞化学实验取对数生长期细胞，于加药前24 h消化后以4×104/ml接种于置有经多聚赖氨酸处理的盖玻片的24孔板中，置于37℃,5%co2孵箱中培养,待细胞生长达70%融合,将细胞分为3组：空白对照组（正常培养基）、0.5 mg/l组（培养基含0.5 mg/l tet）、1 mg/l组（培养基含1 mg/l tet）。加药前以无血清培养基洗细胞3次。tet处理24 h后上，pbs洗细胞3次，4%多聚甲醛固定细胞15 min，4%tri-tonx-100通透细胞 30 min，过氧化物酶阻断剂孵育10 min，非免疫性动物血清中孵育10 min，加一抗4℃冰箱过夜后，生物素标记的二抗中孵育10 min，加sabc复合物孵育10 min，dab显色，苏木素复染，梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片，显微镜下观察，照相。以 pbs代替一抗作阴性对照。每组细胞各进行6次独立性实验。 pcna、cyclind1阳性结果判断：pcna染色：细胞核着色，染成棕黄（褐）色为阳性，浅（灰）蓝色视为阴性；cyclind1染色：细胞核着色，染成棕黄（褐）色为阳性，浅（灰）蓝色视为阴性。400倍镜下，pcna、cyclind1指数通过随机选择5个高倍视野，每视野计数100个细胞中的阳性细胞数。取平均数作为计数指标。

1.6 统计学分析结果用±s表示，数据统计分析利用spss 14.0软件完成，比较采用单因素方差分析，以 p<0.05为差异有显著性。

正常肝脏与肝脏胆管病理组织切片彩色图谱大全

正常肝脏与肝脏胆管病理组织切片彩色图谱大全

肝小叶( hepatic lobule)是肝的基本结构单位,呈多角棱柱体,长约2mm,宽约1mm, 人的肝小叶间结缔组织很少,相邻肝小叶常连成-片,分界不清(图15-7,图15-8)。肝小叶中央有一条沿其长轴走行的中央静脉( central vein) ,周園是大致呈放射状排列的肝索和肝血窦。

门管区：位相邻肝小叶间，为三角形或椭圆形结缔组织小区，内含伴行小叶间动脉、小叶间静脉和小叶间胆管。有时在肝小叶间的结缔组织中可见一条单独的静脉即小叶下静脉。小叶间胆管由单层立方或柱状上皮围成。

图13-10肝门管区图示壁厚腔小的是小叶间动脉（※）、 壁薄腔大的是小叶间静脉（★），单层立方上皮构成，核深蓝色圆形的是小叶间胆管（↑）。 天马波波

胆小管( bile canaliculus) 是相邻两个肝细胞之间局部胞膜凹陷形成的微细管道,在肝板内连接成网。靠近胆小管的相邻肝细胞膜形成由紧密连接、桥粒等组成的连接复合体,可封闭胆小管周围的细胞间隙,防止胆汁外溢至细胞间或窦周隙。当肝细胞发生变性、坏死或胆道堵塞而内压增大时,胆小管的正常结构被破坏，胆汁则溢人窦周隙,继而进人肝血窦 ，导致机体出现黄疸。 相邻肝小叶之间呈三角形或椭圆形的结缔组织小区,称门管区( portal area) , 每个肝小叶周围有3 ~4个门管区。门管区内有小叶间静脉、小叶间动脉和小叶间胆管。小叶间静脉是门静脉的分支,管腔较大而不规则,管壁薄;小叶间动脉是肝动脉的分支,管腔小，管壁相对较厚。小叶间胆管管壁为单层立方上皮,它们向肝门方向汇集，最后形成左、右肝管出肝。在非门管区的小叶间结缔组织中,还有单独走行的小叶下静脉,由中央静脉汇集形成,它们在肝门部汇集为肝静脉。 胆小管

大鼠早期酒精性肝损伤诱导模型的建立及观察

大鼠早期酒精性肝损伤诱导模型的建立及观察[摘要目的探讨大鼠早期酒精性肝损伤模型的建立方法，为研究早期酒精性 肝损伤的发病分子机制提供理想动物模型。方法24只雄性SD大鼠随机分为模型组（16只）和对照组（8只）。对照组饮用自来水；模型组饮用7%～56%梯度递增的白酒12周。取材前24 h和12 h，分别以56%白酒急性灌胃后处死大鼠。每天记录大鼠食用饲料量及饮用量；每周称量大鼠体重。采用全自动生化分析仪测定大鼠血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）、三酰甘油（TG）、总胆固醇（TC）含量。观察大鼠肝脏病理学和形态学改变。结果12周后，模型组大鼠体重增长率为（61.67±1.98）% ，明显低于对照组的（160.09±3.12）% （P＜0.05），肝脏指数模型组（3.74±0.54）高于对照组（2.85±1.26）（P 32%～65%；F3：>65%～75%；F4>75%。 1.3.6.2酒精性肝炎依据炎症程度分为4级（G0～G4）：G0无炎症；G1腺泡3带呈现少数气球样肝细胞，腺泡内散在个别点灶状坏死和中央静脈周围炎；G2腺泡3带明显气球样肝细胞，腺泡内点灶状坏死增多，出现Mallory小体，门管区轻至中度炎症；G3腺泡3带广泛的气球样肝细胞，腺泡内点灶状坏死明显，出现Mallory小体和凋亡小体，门管区中度炎症伴和（或）门管区周围炎症；G4融合性坏死和（或）桥接坏死。 1.3.6.3酒精性肝纤维化依据纤维化的范围和形态分为4期（S0～S4）：S0无纤维化；S1腺泡3带局灶性或广泛的窦周/细胞周纤维化和中央静脉周围纤维化；S2纤维化扩展到门管区，中央静脉周围硬化性玻璃样坏死，局灶性或广泛的门管区星芒状纤维化；S3腺泡内广泛纤维化，局灶性或广泛的桥接纤维化；S4肝硬化。 1.4统计学方法 采用SPSS 14.0统计学软件进行数据分析，计量资料用均数±标准差（x±s）表示，两组间比较采用t检验；等级资料比较采用秩和检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。 2结果 2.1一般情况 各组大鼠均无死亡。对照组大鼠活泼，毛发光泽，食量正常。模型组食欲减退，毛色发黄，光泽度差，部分大鼠精神状态较差。模型组饮用液体量和食量均比对照组少。 2.2两组大鼠体重增长率及肝脏指数的比较 模型组与对照组体重均有上升，与对照组比较，模型组体重增长较慢，后期

酒精性肝损伤和氧化应激

诱导肝脏产生TNF-α过程是急性酒精中毒氧化应激一个关键因素 肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的生产是酒精性肝损伤的发病机制中的一个关键因素。氧化应激和内毒素在酒精诱导的肿瘤坏死因子生产过程中都有涉及。然而，这些因素之间的因果效应的关系没有得到充分的定义。目前的研究，一般使用的急性酒精肝损伤的小鼠模型用来确定急性酒精中毒诱导的TNF-α产生的关键因素。 酒精的灌胃剂量为6克/公斤剂量129/Sv，由测量蛋白质水平，免疫组化，和mRNA表达来证明能诱导肝脏Kupffer细胞产生的TNF-α。酒精中毒引起的肝损伤与血浆内毒素和肝脏脂质过氧化增加相关。用内毒素中和蛋白来治疗可以显著抑制酒精诱导血浆内毒素的高度，肝脂质过氧化和抑制TNF-α产生。治疗通过使用抗氧化剂，N -乙酰- L -半胱氨酸，或二甲基亚砜，虽然不能降低血浆内毒素的高度，但可以显著防止酒精引起的肝脂质过氧化反应，TNF-α产生和脂肪变性。这些所有的治疗可以防止酒精引起的肝脏坏死性细胞死亡。 因此，本研究将系统区分血浆内毒素升高，肝氧化应激，急性酒精中毒导致TNF-α产生之间的关系，结果表明，氧化应激在急性酒精中毒中介导了内毒素诱导的肝TNF-α产生 饮酒所致的肝脏疾病在美国的疾病和死亡中为首要原因。虽然有些药物已经用于预防和治疗酒精性肝病的实验模型或诊所试验评估，目前有没有FDA批准的治疗方案。对酒精诱导的细胞损伤的发病机制的调查可能会提供开发新疗法的基础。现已提出一些有关酒精导致细胞损伤的机制的假设中，氧化应激和促炎细胞因子的生产，被公认的首先的致病因素。 酒精代谢的主要途径存在于肝脏，位于不同的亚细胞间隔的每个细胞质，微粒体的乙醇氧化系统的内质网中的酒精脱氢酶和在线粒体中的醛氧化酶.所有三个结果会产生活性氧（ROS），包括超氧阴离子，羟基自由基和过氧化氢。当氧化应激发生在肝脏，细胞的抗氧化能力是在足以应付与活性氧的积累的。 酒精引起的肝脏氧化应激已反复检测ROS的来证明，在这病人和动物的模型中通过测量脂质过氧化反应和氧化应激标志物。积累在肝脏中的ROS被发现会导致细胞膜的功能系统障碍，蛋白质和DNA的氧化，最终导致肝细胞损伤。 炎性细胞因子如TNF-α在酒精性肝炎的启动和发展发挥了关键作用。Kupffer细胞是TNF-α当肝脏中出现酒精后的主要来源。有人曾建议，酒精介导内毒素（脂多糖，LPS）来引起的TNF-α产生，同时增加血浆内毒素水平和TNF-α表达已被反复报道于那些酗酒的患者。研究报告已经证明内毒素在Kupffer细胞上复杂的结合LPS CD14/toll样受体4引起NF-kB 激活和TNF-α的表达。 在内毒素的作用已被研究很多的时，氧化应激在酒精诱导的TNF-α表达也发挥了重要作用。肝脏灌注的研究表明，Kupffer细胞在急性酒精中毒和恢复期的早期阶段主要负责肝脏超氧化物歧释放。许多报告提出的假说认为酒精引起的活性氧不仅作为有毒物质，但也通过刺激激活氧化还原反应敏感的核转录因子NF -κB，进而导致TNF-α的信号转导，有越来越多的证据TNF -α信号在肝细胞中通过电子传递链导致线粒体ROS生成增加，.然而氧化应激是否反映了酒精诱导的TNF-α产生或作为一个内毒素诱导的TNF-α产生的重要因素仍存在争议。因此，本研究在急性酒精性肝损伤的小鼠模型之间内进行定义内毒素，氧化应激和TNF-α的关系。

大鼠肝脏组织病理切片的制作和 HE 染色

大鼠肝脏组织病理切片的制作和HE 染色 步骤如下： （一）固定与修块 取组织块放入Bouin氏液中，组织块的直径应小于7mm。6小时左右后用双面 刀片将组织块修剪成3-5mm3大小。 （二）脱水与透明 1．75%乙醇50分钟 2．85%乙醇50分钟 3．95%乙醇（I）30分钟 4．95%乙醇（II）30分钟 5．100%乙醇（I）30分钟 6．100%乙醇（II）30分钟 7 1/2 二甲苯（乙醇与二甲苯等体积）20分钟 8．二甲苯（I）20分钟 9．二甲苯（II）10分钟（可依据透明效果而定） 若脱水不好，二甲苯溶液颜色会变混浊。在每一步骤之后，要充分滤干组织 块，一般用筒纸吸干组织块上的液体，以免影响其他液体的浓度，但也要防止组织块干燥。全过程约需要5h。 （三）浸蜡、包埋与修蜡块 1．浸蜡：将60℃恒温箱打开，使石蜡充分溶解，待脱水与透明结束后，将 组织块转入石蜡里，放置于60℃恒温箱120分钟。 2．包埋：将60℃的石蜡倒入纸盒内，然后用小镊子将各组织块按一定的顺 序排列好，使切面朝下。不同组别的同一组织包埋于一个蜡块中，以保证切片和染色条件相同。为防止倒入纸盒内的石蜡底部立刻凝固，可将纸盒置于一玻璃板上（或大培养皿内），然后将玻璃板置于80-90℃左右热水上，包埋时蜡盒底部 要放平，做蜡块的蜡要反复冻融较好。 3．修蜡块：待纸盒内蜡凝固后，用刀片将其修成梯形，组织块与蜡块边缘 之间的距离不得小于2mm。 （四）切片 在载玻片上擦少量甘油蛋白。可滴半滴甘油蛋白于载玻片上，用手指充分抹 匀，呈半干状为佳。切片厚约4-8μm，将切片在55℃左右水浴中展开，展开程度以带黄颜色的组织完全摊平为准。用涂有甘油蛋白的载玻片从水浴中捞取切片，放入37℃烘箱中过夜。每个组织块捞片2张。过夜后，将载玻片置于玻片架上，进行下面的实验。 （五）脱蜡、染色与脱水 倾斜玻片架，将玻片架和载玻片下缘的试剂用筒纸吸干，减轻对其他试剂浓 度的影响。全过程约需要60分钟。 1．脱蜡 （1）二甲苯（I）15分钟 （2）二甲苯（II）15分钟 （3）100%乙醇2分钟 （4）95%乙醇（I）1分钟 （5）95%乙醇（II）1分钟 （6）蒸馏水浸洗1分钟

细胞信号通路大全

1 PPAR信号通路：过氧化物酶体增殖物激活受体( PPARs) 是与维甲酸、类固醇 和甲状腺激素受体相关的配体激活转录因子超家族核激素受体成员。它们作为脂 肪传感器调节脂肪代谢酶的转录。PPARs由PPARα、PPARβ和PPARγ 3种亚型组成。PPARα主要在脂肪酸代谢水平高的组织，如：肝、棕色脂肪、心、肾和骨骼肌表达。他通过调控靶基因的表达而调节机体许多生理功能包括能量代谢、生 长发育等。另外，他还通过调节脂质代谢的生物感受器而调节细胞生长、分化与 凋亡。PPARa同时也是一种磷酸化蛋白，他受多种磷酸化酶的调节包括丝裂原激活蛋白激酶( ERK-和p38．M APK) ，蛋白激酶A和C( PKA，PKC) ，AM PK和糖原合成酶一3( G SK3) 等调控。调控PPARa生长信号的酶报道有M APK、PKA和G SK3。PPARβ广泛表达于各种组织，而PPAR γ主要局限表达在血和棕色脂肪，其他组织如骨骼肌和心肌有少量表达。PPAR-γ在诸如炎症、动脉粥样硬化、胰岛素抵抗和糖代谢调节，以及肿瘤和肥胖等方面均有着举足轻重的作用， 而其众多生物学效应则是通过启动或参与的复杂信号通路予以实现。鉴于目前人 们对PPAR—γ信号通路尚不甚清，PPARs通常是通过与9-cis维甲酸受体( RXR)结合实现其转录活性的。 2 MAPK信号通路:mapk简介:丝裂原激活蛋白激酶（mitogen—activated protein kinase，MAPK）是广泛存在于动植物细胞中的一类丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶。作用主要是将细胞外刺激信号转导至细胞及其核内，并引起细胞的生物化学反应（增殖、分化、凋亡、应激等）。 MAPKs家族的亚族 :ERKs（extracellular signal regulated kinase)：包括ERK1、ERK2。生长因子、细胞因子或激素激活此通路，介导细胞增殖、分化。 JNKs(c-Jun N-terminal kinase)包括JNK1、JNK2、JNK3。此亚族成员能使 Jun转录因子N末端的两个氨基酸磷酸化而失活，因此称为Jun N末端激酶(JNKs)。物理、化学的因素引起的细胞外环境变化以及致炎细胞因子调节此通路。P38 MAPKs：丝氨酸/络氨酸激酶，包括p38 α、p38β、p38γ、p38δ。p38 MAP K参与多种细胞内信息传递过程 ,能对多种细胞外刺激发生反应,可磷酸化其它细胞质蛋白,并能从胞浆移位至细胞核而调节转录因子的活性来改变基因的表达水平 ,从而介导细胞生长、发育、分化及死亡的全过程。 ERK5:是一种非典型的MAPK通路，也叫大MAPK通路，只有一个成员。它可被各种刺激因素激活。不仅可以通过磷酸化作用使底物活化，并且通过C端的物理性结合作用激活底物。 3 ERBB信号途径:ErbB 蛋白属于跨膜酪氨酸激酶的 EGF 受体家族成员。ErbB 的命名来源于在禽红白血病 B( v-Erb-B) 发现的 EGF 受体的突变体,因而 EGF 受体 亦称为“ ErbB1”。人源 ErbB2 称为HER2, 特指人的 EGF 受体。ErbB 家族的

小鼠急性酒精性肝损伤动物模型造模方法优化

小鼠急性酒精性肝损伤动物模型造模方法优化 【摘要】目的：探索急性酒精性肝损伤小鼠动物模型的造模方法。方法：通过三个实验比较不同剂量、不同灌酒方法、不同灌酒时间动物醉酒率、死亡率和血清转氨酶的不同情况。结果：一次灌酒0.28ml/10g体重小鼠可达中度醉酒，醉酒率70%，死亡率40%；采用小间隔分次灌服法后小鼠醉酒率60%，死亡率降为20%；连续灌酒时，较高剂量组第三天开始出现死亡现象并逐渐加重；血清转氨酶上升的高峰在第5天，此后逐渐下降。结论：白酒灌胃法造急性酒精性肝损伤模型时，采用中等剂量、分次灌胃法可降低死亡率，实验时间以5~7天比较适宜。 【关键词】急性酒精性肝损伤；小鼠；动物模型 随着人们对酒精性肝脏损害重视的提高以及相应实验研究的广泛开展，相关动物模型尤其是急性酒精性肝损伤动物模型在实际实验应用中的问题日益突出。我们在参考文献介绍的方法[1]制造急性酒精性肝损伤动物模型的实验中，对造模实际操作时的一些具体问题和检测指标的时间选择等有所比较和认识，现报告如下，以供同仁参考，在造模上少走弯路，节省经费。 1 实验材料 1.1 实验动物昆明种小鼠84只，体重24g~27g，合格证号分别为豫医动字第410115号，均由河南省实验动物中心提供。 1.2 实验试剂ALT试剂盒，迈克公司生产，批号100122；AST试剂盒，迈克公司生产，批号100103。 1.3 实验仪器雷勃微量移液器，芬兰雷勃集团中国区总部；DZKW型电子恒温水浴锅，余姚市亚星仪器仪表有限公司；752 N型分光光度计，上海第三分析仪器厂。 2实验方法 2.1 实验1普通级昆明种小鼠50只，21g~24g，雌雄各半。将50只小鼠按随机排列表分为5组，每组10只，雌雄各半。其中4组分四个剂量级 3.2灌酒时间与醉酒率、死亡率 实验1中，随着灌酒天数的增加，各组动物醉酒率变化不很大，但M3、M4两组的死亡情况日益严重，尤其是M4组，动物死亡数目过多。 3.3 灌酒方式与醉酒率、死亡率 实验2采用分次灌服的方式，仍观察醉酒情况，计算醉酒率和死亡率。结果

大鼠肝脏组织病理切片的制作和 HE 染色

大鼠肝脏组织病理切片的制作和HE染色步骤如下： （一）固定与修块 取组织块放入Bouin氏液中，组织块的直径应小于7mm。6小时左右后用双面 刀片将组织块修剪成3-5mm3大小。 （二）脱水与透明 1．75%乙醇50分钟 2．85%乙醇50分钟 3．95%乙醇（I）30分钟 4．95%乙醇（II）30分钟 5．100%乙醇（I）30分钟 6．100%乙醇（II）30分钟 7 1/2二甲苯（乙醇与二甲苯等体积）20分钟 8．二甲苯（I）20分钟 9．二甲苯（II）10分钟（可依据透明效果而定） 若脱水不好，二甲苯溶液颜色会变混浊。在每一步骤之后，要充分滤干组织 块，一般用筒纸吸干组织块上的液体，以免影响其他液体的浓度，但也要防止组织块干燥。全过程约需要5h。 （三）浸蜡、包埋与修蜡块 1．浸蜡：

将60℃恒温箱打开，使石蜡充分溶解，待脱水与透明结束后，将 组织块转入石蜡里，放置于60℃恒温箱120分钟。 2．包埋： 将60℃的石蜡倒入纸盒内，然后用小镊子将各组织块按一定的顺 序排列好，使切面朝下。不同组别的同一组织包埋于一个蜡块中，以保证切片和染色条件相同。为防止倒入纸盒内的石蜡底部立刻凝固，可将纸盒置于一玻璃板上（或大培养皿内），然后将玻璃板置于80-90℃左右热水上，包埋时蜡盒底部 要放平，做蜡块的蜡要反复冻融较好。 3．修蜡块： 待纸盒内蜡凝固后，用刀片将其修成梯形，组织块与蜡块边缘 之间的距离不得小于2mm。 （四）切片 在载玻片上擦少量甘油蛋白。可滴半滴甘油蛋白于载玻片上，用手指充分抹 匀，呈半干状为佳。切片厚约4-8μm，将切片在55℃左右水浴中展开，展开程度以带黄颜色的组织完全摊平为准。用涂有甘油蛋白的载玻片从水浴中捞取切片，放入37℃烘箱中过夜。每个组织块捞片2张。过夜后，将载玻片置于玻片架上，进行下面的实验。 （五）脱蜡、染色与脱水 倾斜玻片架，将玻片架和载玻片下缘的试剂用筒纸吸干，减轻对其他试剂浓 度的影响。全过程约需要60分钟。

干货 细胞信号通路图解之MAPK通路【值得珍藏】

干货细胞信号通路图解之MAPK通路【值得珍藏】 科研小助手原创，转载请注明来源。公众号内回复“Cell Signaling Pathway”获取全套信号通路图本文由百度贴吧nosce吧吧主黄杰投稿一、MAPK信号通路： （1）有丝分裂原激活的蛋白激酶(MAPK)是一族在真核生物中非常保守的丝/苏氨酸蛋白激酶，在许多细胞活动中起作用，如生长增殖，细胞分化，细胞运动或死亡。MAPK级联信号传导由3 个不同层次的分子所组成。MAPK被MAPK的激 酶( MAPKK)磷酸化后激活，MAPKK被MAPKK的激酶(MAPKKK )磷酸化而激活。而MAPKKK通过与小GTPase 和/或其他蛋白酶相互作用而被激活，从而将MAPK和细胞 表面的受体以及胞外的信号联系在一起。 （2）许多参与生长和分化的受体都能够激活MAPK/ERK信号通路，比如说受体酪氨酸激酶(RTK)，整合素，和离子通道。响应特定信号所涉及到的具体分子会相差很大，但通路的结构是一致的，那就是接头分子(adaptor，如Shc, GRB2, Crk等)将鸟苷酸交换因子(SOS, C3G 等)和受体连接在一起，然后把信号向小GTP 结合蛋白(Ras, Rap1)传递，后者又激活核心的级联反应，这是由一个MAPKKK( Raf) ，一个MAPKK( MEK1/2)和MAPK( Erk)所构成的。活化的ERK 二聚体能调节胞浆中的目标分子，也可以转移到细胞核中，然

后对一系列转录因子进行磷酸化以调节基因表达。SciRes（3）很多外部的刺激都能够激活G蛋白偶联受体(GPCR)。在受体活化以后，G 蛋白将GDP 转换成GTP ，然后结合了GTP的α和β/γ亚基从受体脱离开，启动信号向胞内的传导。与不同亚型的异质三聚体G 蛋白结合的受体可以采取不同 的手段激活小G 蛋白/MAPK级联反应，至少有三个不同家族的酪氨酸激酶参与其中。Src家族激酶响应活化的PI3Kγ，而后者被β/γ亚基激活。它们还能够响应受体的内化，受体酪氨酸激酶的交叉活化，以及有Pyk2 和/或FAK参与的整 合素途径信号。GPCRs同样可以通过PLCβ去激活PKC 和CaMKII ，对下游的MAPK通路可以有激活或抑制的影响。SciRes（4）压力激活的蛋白激酶(Stress-activated protein kinase, SAPK)或称Jun氨基端激酶(Jun amino-terminal kinase, JNK) 是MAPK的家族成员，能被一系列的环境压力，炎症细胞因子，生长因子和GPCR激动剂所激活。压力信号通过Rho家族的小GTP 酶(small GTPase)向这条级联通路传导，这些小GTP酶包括(Rac, Rho, cdc42) 。和其他的MAPK情况一样，靠近膜的激酶是一个MAPKKK，一般 是MEKK1-4 ，或者是一个混合激酶去磷酸化并激活 MKK4(SEK)或MKK7，它们是SAPK/JNK的激酶。另外，MKK4/7也可以被生发中心激酶(germinal center kinase, GCK)以一种GTPase 依赖的方式激活。活化后的

酒精性肝损伤实验动物模型研究进展

龙源期刊网 https://www.wendangku.net/doc/e13123102.html, 酒精性肝损伤实验动物模型研究进展 作者：陶伦 来源：《中国医学创新》2011年第05期 【关键词】酒精性肝损伤；动物模型 酒精性肝损伤即酒精性肝病（Alcoholic Liver Disease，ALD），是一种进行性发展严重危害身体健康的疾病。在世界范围内ALD发病率呈逐年上升趋势，为了深入研究其发病机制，筛选有效的防治药物，寻找理想的实验动物模型是十分必要的。本文就建立ALD动物模型研究进展作一简要综述。 1 急性酒精性肝损伤动物模型 赵静波等［1］按0.7 ml/（100 g?d）56度白酒灌胃大鼠，2次/d，酒精腹腔注射组按2 ml/（100 g?d）注射18%的乙醇溶液2次，持续10 d。结果表明白酒灌胃优于酒精腹腔注射。赵敏等［2］采用12 ml/kg 1次灌胃50%乙醇后禁食4、6、8、10、12、16、20和24 h，结果表明禁食16 h后模型组血中TG含量显著升高，HDL值显著降低，病理肝组织脂肪变性程度明显 加重。 2 慢性酒精性肝损伤动物模型 2.1 Liber-Decarli模型 Lieber-Decarli等［3］提出全营养素的酒精液体食料，研究发现酒精性脂肪肝的严重程度与食料中脂肪含量有关。此模型简便易行，形成率高及稳定性好，但动物须单独饲养，成本较高，不能保证较恒定的酒精摄入量。 2.2 Tsukamato-French模型 Tsukamato等［4］给大鼠手术置入胃管，持续注入含乙醇的液体食料。研究发现液体食料中脂肪量及种类与ALD形成有密切关系。该模型病变符合进行性ALD演变规律，造模效果好，实验重复率高，但酒精不符合正常摄入过程，技术要求高、维 护复杂、成本高，且至今尚未形成酒精性肝硬化模型［5］。朱强等［6］改进Tsukamoto-French的方法，将胃管直接经背部引出。该模型可根据实验对肝脏损伤的不同要求随时调整剂量和造模时间，造模成功率高、模型稳定、成本低。 2.3 直接饮用酒精王晓红等［7］给SD大鼠自由饮用酒精饮料，酒精浓度从5%开始逐渐递增至40%，每个浓度均持续1周，40%持续4周，造模时间共12周。此造模方式与酒精性 脂肪肝患者发病过程相似，简单易行，但不易控制酒精摄入量，难以保持血醇浓度，造模时间较长，成功率不高。

酒精性肝损伤造模

酒后饮绿茶对小鼠肾功能影响的实验性研究 李佳陈路军陈洁徐立思齐慧娟陆妙君 指导老师：黄品贤 （上海中医药大学03中西（七）上海201203） [摘要]目的观察给最佳酒醉状态的小白鼠灌茶对肾功能的影响。方法检测给小白鼠 0.15ml/10g白酒后20min灌入低、中、高浓度茶、解酒阳性对照药枳椇子各0.20ml/10g，连续7天后血肌酐、血尿素蛋及尿蛋白含量。结果⒈高中浓度茶组、模型组的尿蛋白与正常组相比有显著差异，P<0.05。⒉各组生存曲线比较的Log-rank检验结果：χ2=20.39， P<0.01。⒊肾脏病理改变：低浓度茶组小鼠肾小球、肾小管未见明显病变，但间质血管扩张充血明显，有较多量红细胞漏出，可见炎症反应，间质未见纤维化；中浓度茶组肾组织结构完整，肾小球、肾小管未见明显病理变化，间质未见明显充血，少量红细胞漏出，间质未见纤维化；高浓度茶组肾脏组织结构与中浓度茶组接近。阳性对照组肾组织结构基本完整，肾小球、肾小管未见明显病理变化，间质少量充血。结论根据尿蛋白、实验小鼠的生存曲线分析、肾脏的病理结果的一致性得出：⒈酒后饮茶均可导致小鼠的死亡，但是酒后高浓茶对肾脏的损害作用最小。⒉酒后饮淡茶及阳性解酒药枳椇子能起到一定解酒作用，但对肾脏有明显的损害。但本次实验由于死亡率高致样本含量不够，确切的结论有待继续研究。 [关键词]酒，茶，小白鼠，肾功能，病理学 在中国，茶能解酒是自古以来就流传的说法。日常生活中，人们通常用绿茶来帮助消食解酒，且认为茶越浓解酒效果越好。人们认为，饮茶能够使人大脑兴奋、清醒，酒后饮茶能够让被酒精冲昏了的头脑清醒一些，从而达到“醒酒”的效果。 但近年来，有越来越多的报道指出：过量饮酒后饮茶对肾脏有害无益。其理论依据为：绿茶的主要成分茶碱有利尿作用，浓茶中的大量茶碱更能迅速发挥利尿作用，促使尚未分解的酒精代谢产物——乙醛过早地进入肾脏，而乙醛对泌尿系统有很大的损害作用。 本实验采用56度白酒以最佳致醉量对小鼠灌胃后，用等量不同浓度的绿茶及阳性对照药物枳椇子对醉酒小鼠进行灌胃的方法，通过检测鼠尿中的尿蛋白、血样中血肌酐、尿素氮指标及对肾脏组织病理切片的观察，对以上两种观点的正确性作出验证。 现将实验研究结果报告如下。 1 材料与方法 1.1实验动物：昆明种小鼠120只，体重：20-35g，雌雄各半，由上海中医药大学动物实验中心提供。动物房饲养温度：20-23℃，相对湿度：50-70％，标准饮食，饮自来水。 1.2实验仪器和试剂及其制备： 1.2.1实验仪器：针筒灌胃针、天平、试剂瓶、代谢笼、离心机、气象色谱仪、生化分析

实验大鼠取材方案

实验大鼠取材方案 [取材内容] 1.取大鼠静脉血，分离血浆、血清，-80℃保存。 2.取大鼠门静脉血，分离血清，-80℃保存。 3.取大鼠甲状腺组织，制备甲状腺电镜观察标本，其余组织液氮冰冻保存备用。 4.取大鼠胸腺组织，制备胸腺组织电镜观察标本、免疫组化观察标本，其余组织液氮冰冻 保存备用。 5.取大鼠肺组织，制备肺组织电镜观察标本、免疫组化观察标本，其余组织分装液氮冰冻 保存备用。 6.取大鼠肝脏组织，制备肝脏组织电镜观察标本、免疫组化观察标本，其余组织分装液氮 冰冻保存备用。 7.取大鼠胰腺组织，制备胰腺组织电镜观察标本、免疫组化观察标本，其余组织分装液氮 冰冻保存备用。 8.取大鼠肠系膜淋巴结组织，制备肠系膜淋巴结免疫组化观察标本，其余组织液氮冰冻保 存。 9.取大鼠胃部组织，制备胃粘膜组织电镜观察标本、免疫组化观察标本，其余组织分装液 氮冰冻保存备用。 10.取大鼠空肠组织，制备肠道粘膜组织电镜观察标本、免疫组化观察标本，其余组织分装 液氮冰冻保存备用。 11.取大鼠回肠组织，制备肠道粘膜组织电镜观察标本、免疫组化观察标本，其余组织分装 液氮冰冻保存备用。 12.取大鼠肾组织，制备左肾组织电镜观察标本、免疫组化观察标本，右肾组织液氮冰冻保 存备用。 13.取大鼠肾上腺组织，左侧制备肾上腺组织免疫组化观察标本，右侧肾上腺液氮冰冻保存 备用。 14.取大鼠睾丸组织，左侧制备电镜观察标本、免疫组化观察标本，右侧睾丸液氮冰冻保存 备有。 [试剂及药品] 戊巴比妥钠或10%水合氯醛、75%酒精、生理盐水、多聚甲醛或福尔马林液、3％戊二醛磷酸盐缓冲液(PBS0.01mol/LP pH7.4)或4％戊二醛、肝素钠、器械液（器械清洗消毒液） [器材] 备皮刀、解剖台、弯盘、组织剪、眼科剪、手术刀柄、刀片、小号弯式血管钳、蚊式血管钳、眼科镊、无损伤血管夹、聚乙烯管、三通管、丝线、培养皿、天平、一次性离心管（5ml、

肝组织病理活检介绍

肝组织病理活检介绍 肝组织病理活检是什么?肝组织病理活检是根据负压吸引的原理，采用快速穿刺方法，从肝内抽取少量的肝组织，直接在显微镜下观察其组织形态的改变，再结合临床资料，作出肝病的诊断。快速肝穿刺术操作简单，安全可靠，并发症少，是目前诊断肝硬化比较流行的方法。 一、诊断意义： 通过对活检组织显微镜下观察，可以明确脂肪肝病变程度、类型、有无合并脂肪性肝炎和肝纤维化，对病人的治疗以及预后判断亦有重要价值。此外，像病毒性肝炎、脂肪肝、各种类型的肝硬化等，其肝脏病变呈弥漫性，取出较小肝组织，也能比较准确地反映出病变的性质和程度。 肝活检病理组织学检查结果可为各种肝病或原因不明的肝脾肿大提供诊断依据，有助于确定、补充或纠正临床诊断，有助于肝纤维化、早期肝硬化的发现，也有助于判断治疗效果及预后，了解疾病的演变过程。另外，肝活检活组织也是一种治疗手段，肝脓肿病人可通过肝活检抽出脓液，同时还可通过穿刺针注入药物治疗。 二、主要应用： ①局灶性脂肪肝与肿瘤区别; ②为探明某些少见疾病，如胆固醇酯贮积病、糖原贮积病等; ③无症状性可疑非酒精性脂肪肝(NASH),肝活检是唯一诊断手段; ④戒酒后ALD或ALD有不能解释的临床或生化异常表现者; ⑤肥胖减少原有体重10%后肝酶学异常仍持续者，需肝活检寻找其他原因; ⑥任何怀疑不是单纯肝组织脂变或疑有多病因引起者。 三、术前准备： 术前应检查血小板数、出血时间、凝血时间、凝血酶原时间，如有异常，应肌注维生素Kllom9，每日1次，3天后复查，如仍不正常，不应强行穿刺(对于凝血酶原时间不符合穿刺条件者，术前应给予2～3u的新鲜干冻血浆;对于血小板低者应输血小板)。 (1) 穿刺前应测血压、脉搏并进行胸部x线检查，观察有无肺气肿、胸膜肥厚，验血型，以备必要时输血。术前l小时可服地西泮10mg。 (2) 术前应检查血小板数、出血时间、凝血时间、凝血酶原时间，如有异常，应肌注维生素Kllom9，每日1次，3天后复查，如仍不正常，不应强行穿刺(对于凝血酶原时间不符合

肝硬化大鼠肝脏组织病理学及血流动力学变化档

肝硬化大鼠肝脏组织病理学及血流动力学变化 作者：乔伟1,2，鲁建国1，王青1，李鹏超1 作者单位：(1. 第四军医大学唐都医院普外科，陕西西安710038;2. 西安市铁路中心医院普外科，陕西西安710054) 【摘要】目的通过建立大鼠肝硬化模型，了解肝硬化形成过程中门静脉血流动力学的变化。 方法雄性健康SD大鼠100只随机等分为5组：4个实验组(80只，每组20只)采用腹腔及皮下注射四氯化碳(CCl4)，同时饮用酒精溶液进行诱导;对照组(20只)给予普通饮水和饲料。 分别于2、4、7、10周后观察肝脏的组织病理学改变及门静脉血流动力学变化。结果肝硬化过程中肝细胞经历变性、坏死、纤维组织增生及假小叶的形成;血流动力学检测指标发生 相应变化，平均动脉压(MAP)表现为逐渐下降，门静脉压力(PVP)、下腔静脉压(IVCP)及门静脉阻力(PVR)表现为逐渐升高，门静脉血流量(PVF)表现为先升高后下降，内脏血管阻力 (SVR)表现为先下降后升高。结论本方法可建立稳定的肝硬化门脉高压症模型，且适于大批量制作;在大鼠肝硬化门脉高压形成过程中门静脉血流动力学及肝组织病理学均发生了变 化，可用于肝硬化门脉高压症方面的相关研究。 【关键词】肝硬化;门脉高压;组织病理学;血流动力学;大鼠 Histopathological and hemodynamic changes of rats with liver cirrhosisQIAO Wei1,2, LU Jian guo1, WANG Qing1, LI Peng chao1 (1. Department of General Surgery, Tangdu Hospital, Fourth Military Medical University, Xi an 710038; 2. Department of General Surgery, Xi an Railway Center Hospital, Xi an 710054, China)ABSTRACT: Objective To investigate the hemodynamic changes during the progression of portal hypertension (PHT) by establishing a model of liver cirrhosis in rats. Methods Totally 100 healthy male SD rats were assigned to 5 groups randomly (1 control group and 4 experimental groups with 20 rats in each group). Animal model of cirrhosis was established by subcutaneous injection of carbon tetrachloride (CCl4) and drinking alcohol. Rats in control group were given water and forage. The changes in the portal hemodynamics during the pathological process of liver tissues were observed after 2, 4, 7 and 10 weeks. Results During the formation of experimental cirrhosis, the hepatocytes of rats underwent 4 processes: degeneration, necrosis, fibrosis and pseudolobular proliferation. The hemodynamic changes were observed: the mean arterial pressure declined gradually after injection, but the portal venous pressure, the inferior vena cava pressure and the portal vascular resistance increased slowly. The portal venous flow reduced after ascending whereas the splanchnic vascular resistance increased after descending. Conclusion This method can establish a

消臌软坚丸对肝硬化大鼠肝组织病理学和转化生长因子_的影响_戚忠玺

第11卷 第5期 2009 年 5 月 辽宁中医药大学学报 JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCM Vol. 11No. 5 May，2009 肝硬化是临床常见的慢性进行性肝脏疾病，是由一种或多种病因长期或反复作用造成的弥散性肝脏损害，肝硬化腹水是肝硬化门脉高压征的主要临床表现。消臌软坚丸是我院治疗肝硬化腹水的制剂，临床研究显示对腹水具有良好效果[1]。为了进一步阐明其作用机理，本实验采用复合因素造模法复制肝硬化大鼠模型，然后给予药物治疗，以观察消臌软坚丸对肝硬化大鼠肝组织病理学和血清和肝组织转化生长因子-α（TGF-α）的影响，以揭示其延缓肝硬化进程，治疗肝硬化腹水的作用机理。 1 材料与方法 1.1材料 1.1.1 实验动物 健康SD大鼠60只，体重（180±20）g，雌雄各半，由河南安阳华兴实验动物养殖场提供，动物合格证号：SCXK（豫）2004-0007。 1.1.2 实验用药 消臌软坚丸由河北中医肝病医院制剂室制备（该院自拟方，由黄芪30g，车前子30g，葶苈子15g，沉香6g，鳖甲30g等组成，课题组监制）。实验时用蒸馏水将其配制成所需浓度的混悬液。1.1.3 复方鳖甲软肝片（阳性药对照组）由内蒙 古福瑞制药有限责任公司提供，国药准字（2005）Z-71号。实验时用蒸馏水将其配制成所需浓度的混悬液。 1.1.4 主要试剂 转化生长因子-α（TGF-α）试剂盒（批号：20051202），购自解放军总医院科技开发中心放免所。 1.1.5 主要仪器722型光栅分光光度计，上海第三分析仪器厂；1-15K型高速冷冻离心机，美国Sigma公司；HH-W21-600型电热恒温水箱，天津泰斯特仪器有限公司；LEICA RM2125型切片机，德国LEICA公司；TDL-5-A型离心机，上海安亭科学仪器厂。 1.2方法 1.2.1 模型制备60只大鼠均适应性喂养1周，随机分为造模组48只和正常组12只。参照文献[2]，48只造模组大鼠首次予皮下注射40% 四氯化碳（CCl4）花生油溶液0.5mL/100 g体重，以后每周2次皮下注射0.3mL/100g，共9周。造模开始前2 周均以20%猪油，0.5%胆固醇，79.5%玉米面混合饲料（由河北医科大学动物实验中心加工）喂养，第3~9 周 消臌软坚丸对肝硬化大鼠肝组织病理学和转化生长因子-α的影响 戚忠玺1，耿兰书1，耿束华1，王少贤2，魏 萱2 （1.河北中医肝病医院，河北 正定 050800；2.河北医科大学中医学院，河北 石家庄 050091）摘 要：目的：观察消臌软坚丸对肝硬化大鼠肝组织病理学和转化生长因子-α（TGF-α）的影响。方法：采用复合因素造模法复制肝硬化大鼠模型，以复方鳖甲软肝片为对照，观察消臌软坚丸对大鼠肝脏病理形态学和TGF-α的影响。结果：与正常组比较，模型组大鼠肝间质广泛纤维组织增生，将正常肝小叶分割成大小不等的肝细胞团（即假小叶形成），血清和肝组织TGF-α含量明显升高（P<0.05或P<0.01）。与模型组比较，高、低剂量组和对照组肝小叶结构亦受损，少量纤维组织增生，但未见形成间隔。血清和肝组织TGF-α含量明显下降（P<0.05或P<0.01）。结论：消臌软坚丸能显著改善肝硬化大鼠的肝脏病理组织学损害，同时可降低血清和肝组织TGF-α水平，具有显著的抗肝脏纤维化，阻断肝硬化进程的作用，对腹水的产生与消退也产生积极的影响。 关键词：消臌软坚丸；肝硬化；病理形态学；转化生长因子 中图分类号：R285.5文献标识码：A文章编号：1673-842X (2009)05- 0193- 02 Effect of Xiaoguruanjian Pill on Hepatic Pathological Histology and Blood Transforming Growth Factor of Hepatic Cirrhosis Rat QI Zhong-xi1，GENG Lan-shu1，GENG Shu-hua1，WANG Shao-xian2,WEI Xuan2 （1.HeBei Hepatopathy Hospital of TCM，Zhengding 050800，Hebei，China; 2.College of TCM,Hebei Medical University, Shijiazhuang 050091,Hebei，China） Abstract：Objective: To observe the effect of Xiaoguruanjian pill on liver Cirrhosis rats blood and liver transforming growth factor-α(TGF-α). Methods: reproduced the rats models of cirrhosis by adopting complex factors, compared with Fufangbiejiaruanganpian, the effect of Xiaoguruanjian Pill on hepatic pathology and TGF-αwere observed. Results: Compared with normal group, extensive fibrous tissue hyperplasia can be seen in hepatic mesenchyme of the model group, the liver pseudolobule formed,the contents of TGF-αin serum and liver were increased（P<0.01 or P<0.05）.Compared with model group, there were a few fibrous tissue hyperplasia in high-dosage group, low-dosage group and control group, no fibrotic septa formed. the contents of TGF-αin serum and liver were decreased（P<0.01 or P<0.05）. Conclusion: Xiaoguruanjian pill could obviously improve the cirrhosis rat pathology, decrease the contents of TGF-αin serum and liver, decrease or restrain the happening or development of ascites. Key words：Xiaoguruanjian pill;hepatic cirrhosis; pathology; transforming growth factor-α 收稿日期：2008-12-21 基金项目：河北省中医药管理局科学研究计划课题（2007150） 作者简介：戚忠玺（1972-），男，山东威海人，副主任医师，硕士，从事各种急慢性肝病的中西医研究。 193

参与细胞信号转导通路的蛋白简写及全拼

参与细胞信号转导通路的蛋白简写及全拼 4E-BP eIF4E binding protein Abl Ableson protein tyrosine kinase ACTR A histone acetyltransferase AIF Programmed cell death protein 8 ANT Adenine nucleotide translocation channel Apaf-1 Apoptotic protease activating factor 1 APP beta-Amyloid precursor protein APPs Acute phase proteins ASIP Agouti switch protein ASK Apoptosis signal-regulating kinase (e.g., ASK1) ATF-2 Activating transcription factor 2 ATM Ataxia telangiectasia?mutated protein kinase ATR ATM and Rad3?related protein kinase Bam32 B-cell adaptor molecule 32 kDa BCAP B-cell adaptor for PI3K Bcl-10 B-cell leukemia 10 protein Bfl-1 Bcl-2-related protein A1 Bid A BH3 domain?only death agonist protein Bimp1 B-lymphocyte-induced maturation protein 1 BLNK B-cell linker protein BRCA Breast cancer growth suppressor protein Btk Brutonís tyrosine kinase C3G Guanine nucleotide?releasing factor 2 CAD Caspase-activated deoxyribonuclease Cam Calmodulin CaMK Calcium/calmodulin-dependent kinase CAP c-Cbl-associated protein Cas p130CAS, Crk-associated substrate Caspase Cysteine proteases with aspartate specificity CBL Cellular homologue of the v-Cbl oncogene CBP CREB binding protein CD19 B-lymphocyte antigen CD19 CD22 B-cell receptor CD22 CD40 B-cell surface antigen CD40 CD45 Leukocyte common antigen, a phospho-tyrosine phosphatase CD5 Lymphocyte antigen CD5 cdc2 Cell division cycle protein 2, CDK1 cdc34 Cell division cycle protein 34, a ubiquitin conjugating (E2) enzyme cdc42 Cell division cycle protein 42, a G-protein CDK Cyclin-dependent kinase Chk Checkpoint kinase CHOP C/EBP homologous protein 10