Bradford蛋白质浓度定量试剂盒产品说明书(中文版)

GENMED SCIENTIFICS INC. U.S.A GMS30030.1 v.A GENMED Bradford蛋白质浓度定量试剂盒产品说明书（中文版）

主要用途

GENMED Bradford蛋白质浓度定量试剂是一种旨在使用考马斯亮蓝染色剂G－250与可溶性蛋白质特异性结合产生色彩差异变化，通过比色测定其最大吸收转换来定量蛋白质浓度的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。其适用于各种蛋白质（动物、人体、植物、微生物等）的含量检测。产品即到即用，操作简捷，性能稳定，检测敏感，定量精确。

技术背景

考马斯亮蓝染料G－250（Coomassie Brilliant Blue G－250）是一种与蛋白质结合的化学染料。它的三苯甲烷（triphenylmethane）基团，主要与蛋白质的非极性结构结合。而它的阴离子磺酸盐（anion sulfonate）基团与蛋白质分子的阳离子和芳香类氨基酸，尤其是精氨酸和赖氨酸侧链的结合。在酸性环境下，其最大吸收波长从465nm转换为595nm。Bradford提出的方法的最大优点在于不受样品中各种化学成分的干扰。较之Lowry，Hartree-Lowry和 BCA技术，更为敏感。

产品内容

GENMED反应液（Reagent A）毫升

GENMED标准液（Reagent B）毫升

GENMED补充液（Reagent C）毫升

产品说明书1份

保存方式

保存GENMED标准液（Reagent B）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里，GENMED反应液（Reagent A），避免光照；有效保证6月

用户自备

48孔板：用于样品比色的容器

比色杯：用于样品比色的容器

分光光度仪或酶标仪：用于比色分析

实验步骤

一、48孔板微量测定

A．建立标准样品曲线

1．将 ℃冰箱里试剂盒中的GENMED标准液（Reagent B）置入冰槽里融化

2．准备 个 孔板，做好相应的标记

3．按下表配制标准样品反应液

1）分别移取适量的GENMED标准液（Reagent B）到48孔板里指定序号的样品孔里2）分别移取适量的GENMED补充液（Reagent C）到48孔板里指定序号的样品孔里 3）最后分别加入 微升GENMED反应液（Reagent A）

序号 GENMED标准液

（Reagent B）GENMED补充液

（Reagent C）

GENMED反应液

（Reagent A）

标准样品蛋白质含量

（微克）

1 微升 微升 微升

2 微升 微升 微升

3 微升 微升 微升

4 微升 微升 微升

5 微升 微升 微升

6 微升 微升 微升

7 微升 微升

4．轻轻摇动48孔板，混匀反应物

5．室温下暗室里孵育 分钟

6．即刻放进分光光度酶标仪测定：波长为 nm

7．绘制蛋白质浓度标准曲线：纵座标（Y）为吸光值 ，横座标（X）为蛋白质含量（微克）

B．样品测定

1．将待测样品置入冰槽里融化

2．分别移取微升待测样品到48孔板里指定序号的样品孔里（注意：参见注意事项4）

3．分别移取 微升GENMED补充液（Reagent C）到 孔板里指定序号的样品孔里

4．最后分别加入微升GENMED反应液（Reagent A）

5．轻轻摇动 孔板，混匀反应物

6．室温下暗室里孵育 分钟

7．即刻放进分光光度酶标仪测定：波长为 nm

8．根据上述标准曲线，测出待测样品的检测含量，再除以微升（样品量），获得待测样品的实际浓度（微克/微升）（注意：参见注意事项5）

二、比色杯标准测定

A．建立标准样品曲线

1．将 ℃冰箱里试剂盒中的GENMED标准液（Reagent B）置入冰槽里融化

2．准备好 毫升比色杯

3．按下表配制标准样品反应液

1）分别移取适量的GENMED标准液（Reagent B）到 毫升比色杯

2）分别加入适量的GENMED补充液（Reagent C）

3）最后分别加入 微升GENMED反应液（Reagent A）

序号 GENMED标准液

（Reagent B）GENMED补充液

（Reagent C）

GENMED反应液

（Reagent A）

标准样品蛋白质含量

（微克）

1 微升 微升 微升

2 微升 微升 微升

3 微升 微升 微升

4 微升 微升 微升

5 微升 微升 微升

6 微升 微升 微升

7 微升 微升

4．轻轻上下倾倒比色杯，混匀反应物

5．室温下暗室里孵育 分钟

6．即刻放进分光光度酶标仪测定：波长为 nm

7．绘制蛋白质浓度标准曲线：纵座标（Y）为吸光值，横座标（X）为蛋白质含量（微克）

B．样品测定

1．将待测样品置入冰槽里融化

2．移取 微升待测样品到 毫升比色杯里 （注意：参见注意事项4）

3．加入 微升GENMED补充液（Reagent C）

4．加入 微升GENMED反应液（Reagent A）

5．轻轻上下倾倒比色杯，混匀反应物

6．室温下暗室里孵育 分钟

7．即刻放进分光光度酶标仪测定：波长为 nm

8．根据上述标准曲线，测出待测样品的检测含量，再除以 微升（样品量），获得待测样品的实际浓度（微克/微升）（注意：参见注意事项5）

三、玻璃管大量测定（注意：参见注意事项2）

A．建立标准样品曲线

1．将 ℃冰箱里试剂盒中的GENMED标准液（Reagent B）置入冰槽里融化

2．准备好 毫升玻璃管

3．按下表配制标准样品反应液

1）分别移取适量的GENMED标准液（Reagent B）到 毫升玻璃管

2）分别加入适量的GENMED补充液（Reagent C）

3）最后分别加入1毫升GENMED反应液（Reagent A）

序号 GENMED标准液

（Reagent B）GENMED补充液

（Reagent C）

GENMED反应液

（Reagent A）

标准样品蛋白质含量

（毫克）

1 毫升 毫升

2 毫升 毫升 毫升

3 毫升 毫升 毫升

4 毫升 毫升 毫升

5 毫升 毫升 毫升

6 毫升 毫升 毫升

7 毫升 毫升

4．涡旋震荡，混匀反应物

5．室温下暗室里孵育 分钟

6．即刻放进分光光度酶标仪测定：波长为 nm

7．绘制蛋白质浓度标准曲线：纵座标（Y）为吸光值，横座标（X）为蛋白质浓度（毫克）

B．样品测定

1．将待测样品置入冰槽里融化

2．移取 微升待测样品到 毫升玻璃管里

3．加入 毫升GENMED补充液（Reagent C）

4．加入 毫升GENMED反应液（Reagent A）

5．涡旋震荡，混匀反应物

6．室温下暗室里孵育 分钟

7．即刻放进分光光度酶标仪测定：波长为 nm

8．根据上述标准曲线，测出待测样品的检测含量，再除以 毫升（样品量），获得待测样品的实际浓度（毫克/毫升）

注意事项

1．本产品为200次（96孔板测定），次操作（48孔板测定），50次操作（比色杯测定）包括标准曲线 2．玻璃管大量测定须另购GENMED Bradford大量蛋白质浓度定量试剂盒（GMS30030.2）

3．操作时，须戴手套

4．建议用户使用48孔板微量测定时样品和试剂的用量，以及在最后浓度计算时的除数

序号 待测样品GENMED补充液

（Reagent C）GENMED反应液

（Reagent A）

蛋白浓度计算的除数

1 5微升 395微升 微升 5

2 50微升 350微升 微升 50

3 微升 300微升 微升

4 250微升 150微升 微升 250

如果是96孔板测定：待测样品、GENMED补充液（Reagent C）和GENMED反应液（Reagent A）的用量是48孔板测定的二分之一

如果是比色杯测定：待测样品、GENMED补充液（Reagent C）和GENMED反应液（Reagent A）的用量是48孔板测定的2倍

5．样品浓度计算公式：

标准曲线求得蛋白含量（微克） 样品量（微升）＝微克/微升

6．加样后即刻比色测定

7．比色测定后，比色杯须清洗彻底

8．强碱性样品将会干扰比色检测

9．下列化学成分和浓度范围不会干扰比色检测：

Acetate 0.6 M KCI 1.0 M

Acetone Malic acid 0.2 M

Adenosine

1

mM MgCl2 1.0

M Amino

Acids Mercaptoethanol

1.0

M Ammonium

sulfate 1.0

M MES

0.7

M Ampholytes Methanol

0.5％

Acid MOPS 0.2 M

ATP 1 mM NaCl 5 M

Barbital NAD 1

mM BES 2.5 M NaSCN 3 M

Boric acid Peptones

Cacodylate-Tris 0.1

M Phenol 5%

CDTA 0.05

M Phosphate

1.0

M Citrate 0.05

M PIPES 0.5

M Deoxycholate 0.1% Polyadenylic

acid 1

mM

Dithiothreitol 1

（MW<3000）

Polypeptides

M

0.2

M

mg/ml Pyrophosphate

DNA 1

M rRNA 0.25

mg/ml EDTA 0.1

mg/ml

M tRNA 0.4

EGTA, 0.05

mg/ml

0.30

RNA

Ethanol total

Eagle’s MEM SDS 0.1%

phosphate

solution Sodium

salt

Earle’s

20%

sulfate

Formic

acid 1.0

M Streptomycin

Fructose Triton X- 0.1%

Glucose Tricine

mM Glutathione Tyrosine 1

Glycerol

Thymidine 1

mM

99%

Glycine 0.1 M Tris 2.0 M

Guanidine-HCI Urea 6 M

solution Vitamins

Hank's

salt

HEPES buffer 0.1 M

10．建立微量测定的标准曲线，建议使用的蛋白质浓度范围为0至50微克

11．本公司提供系列蛋白定量检测产品

质量标准

1．本产品经鉴定性能长期稳定

2．本产品经鉴定检测敏感准确

使用承诺

杰美基因秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒

IF IT DOESN’T WORK，RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

订购信息

编号名称规格

GMS30030.1 GENMED Bradford蛋白质浓度定量试剂盒 200次

GMS30030.1A GENMED反应液（Reagent A） 50毫升

GMS30030.1B GENMED标准液（Reagent B） 10毫升

GMS30030.1C GENMED补充液（Reagent C） 500毫升

产品编号名称规格GMS30030.1 Bradford蛋白质浓度定量试剂盒 200次GMS30030.2 Bradford大量蛋白质浓度定量试剂盒 50次GMS30031 BCA蛋白质浓度定量试剂盒 500次

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