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BD磁珠分选

MACS磁珠系统（附BD IMag介绍）

一、免疫磁珠法分离细胞原理

免疫磁珠法分离细胞是基于细胞表面抗原能与连接有磁珠的特异性单抗相结合，在外加磁场中，通过抗体与磁珠相连的细胞被吸附而滞留在磁场中，无该种表面抗原的细胞由于不能与连接着磁珠的特异性单抗结合而没有磁性，不在磁场中停留，从而使细胞得以分离。

二、免疫磁珠法分为阳性分离法和阴性分离法

1、阳性分离法

磁珠结合的细胞就是所要分离获得的细胞

2、阴性分离法

磁珠结合不需要的细胞，游离于磁场的细胞为所需细胞

一般而言，阴性分离法的磁珠用量比阳性分离法的大，阳性分离法用行更多。

三、磁分离细胞的重要指标

纯度和得率，这取决于磁珠所连接单抗的特异性和磁珠大小（磁性），然而太大的磁珠会影响细胞活性，也无法直接上流式。

四、目前市场上有2种磁性细胞分离系统

1、Small particles (≈50 nm)－ MACS

2、Large particles (1200~4500 nm) －others（如Dynal）

五、小磁珠

1、优点

（1）对细胞温和，不影响分离细胞的后续培养。

（2）可直接上流式检测，不影响散射光。

2、缺点

（1）需要很强的磁场来分离细胞。

（2）分离速度很慢，得率不高。

（3）一次性的分离柱，不能在普通试管进行。

（4）成本昂贵。

六、大磁珠

1、优点

（1）技术简单，分离可在试管中完成。

（2）易于增减细胞用量。

（3）速度快，得率高

（4）成本低

2、缺点

（1）对细胞造成机械压力，影响其生物学活性，不利于分离后培养。

（2）纯度低。

（3）容易阻塞FCM的喷嘴。

七、BD? Imag磁珠

1、大小在0.1－0.45mm。

2、包被了BD Pharmingen生产的高质量单抗。

3、磁珠已为白细胞亚群的阳性和阴性分离法所优化。

4、用于BD? IMagnet direct magnet。

将包被了特异性单抗的BD IMag磁珠加入细胞悬液，磁珠特异性地与有相应抗原的细胞亚群结合，通过BD? IMagnet direct magnet分离得到的连有BD IMag磁珠的细胞可直接用于功能试验和用流式细胞仪检测。

八、BD IMag吸收大磁珠和小磁珠分离系统的优点，开发出直径约200nm中等大小磁珠

1、技术简单，分离在普通的试管中完成。

2、易于增大细胞用量。

3、对细胞温和，不影响细胞功能及其分离后培养，可直接上流式。

4、纯度高，回收率高。

5、成本低

此外，Mouse lineage panel中biotin标记的抗体还可用于FCM分析细胞表面抗原，以及进行细胞/组织免疫荧光实验。

九、BD提供2种免疫磁珠

1、包被了针对白细胞亚群的单抗的磁珠

2、包被了链霉亲和素（streptavidin）的磁珠

此种情况下，在实验系统中加入生物素标记的单抗，磁珠通过streptavidin与生物素标记的单抗结合，单抗与细胞表面相应抗原特异性结合而使细胞被磁珠间接捕获，从而达到分离。这种磁珠使研究者可根据自己需要选择生物素标记的各种单抗去分离目的细胞，应用范围更广泛，使用更灵活。

十、不同物种磁珠分离试剂

1、人

CD3，CD4，CD8，CD14，CD19；

2、小鼠

CD4，CD8a，CD14，CD45R/B220，CD90.2（Thy1.2），CD11b，Ly-6G。

利用Streptavidin连接的磁珠，只需选配biotin标记的所需单抗，就能分离更多种类细胞。Magnetic Cell Separation (24)

Cat.#Bran

Name Contents Format Clone

Isoty

Reactivity

Con

Siz

Stat

Docs

List

Price

5580 07BD

IMag

Lymphoc

yte

Enrichm

ent Set -

CD3,

CD41a,

CD43,

CD235a

biotinylate

d antibody

cocktail

and BD

IMag?

SAvparticl

IMag?-

Hu Sep

RUO T DS

￥7,038.

5525 93BD

IMag

CD3

Magnetic

Particles

- DM

IMag?-

HIT3a

IgG2a

, κ

Hu Sep

RUO

MSDS,T

￥4,282.

5577 67BD

IMag

CD4

Magnetic

Particles

- DM

IMag?-

L200

IgG1,

Hu, Rhe,Cyno

,Bab

Sep

RUO

MSDS,T

￥4,521.

5579 39BD

IMag

CD4 T

Lymphoc

yte

Enrichm

ent Set -

CD8,

CD11b/Ma

c-1, CD16,

CD19,

CD36,

CD41a,

CD56,

CD123,

CD235a,

γδ TCR

biotinylate

d antibody

cocktail

and BD

IMag?

SAv

particles

IMag?-

RUO T DS

￥6,524.

5577 66BD

IMag

CD8

Magnetic

Particles

- DM

IMag?-

SK1

IgG1,

Hu, Rhe Sep

RUO

MSDS,T

￥4,521.

5601 08BD

IMag

CD8 T

Cell

Enrichm

ent Set -

IMag?-

HIT3a

IgG2a

, κ

Hu Sep

RUO T DS

￥8,829.

5579 41BD

IMag

CD8 T

Lymphoc

yte

Enrichm

ent Set -

CD4,

CD11b/Ma

c-1, CD16,

CD19,

CD36,

CD41a,

CD56,

IMag?-

RUO T DS

￥6,524.

CD123, CD235a, γδ TCR biotinylate d antibody cocktail and BD IMag? SAv particles

5587 05BD

IMag

CD11c

Magnetic

Particles

- DM

IMag?-

S-HCL-

IgG2b

, κ

Hu Sep

RUO T DS

￥8,077.

5577 69BD

IMag

CD14

Magnetic

Particles

- DM

IMag?-

MφP9

IgG2b

, κ

Hu, Rhe Sep

RUO

MSDS,T

￥4,521.

5584 97BD

IMag

CD19

Magnetic

Particles

- DM

IMag?-

4G7

IgG1,

RUO T DS

￥5,560.

5515 20BD

IMag

CD19

Magnetic

Particles

- DM

IMag?-

HIB19

IgG1,

Hu Sep

RUO

MSDS,T

￥7,306.

5580 05BD

IMag

CD25

Magnetic

Particles

- DM

IMag?-

2A3

IgG1,

Hu Sep

RUO

MSDS,T

￥6,263.

5579 81BD

IMag

CD45RA

Magnetic

Particles

- DM

IMag?-

HI100

IgG2b

, κ

Hu Sep

RUO T DS

￥9,093.

5579 86BD

IMag

CD45RO

Magnetic

Particles

- DM

IMag?-

UCHL1

IgG2a

, κ

Hu Sep

RUO T DS

￥4,521.

5577 75BD

IMag

CD56

Magnetic

Particles

- DM

IMag?-

NCAM1

6.2

IgG2b

, κ

Hu Sep

RUO T DS

￥5,957.

5584 20BD

IMag

Dendritic

Cell

Enrichm

ent Set -

Hu RUO T DS

￥12,765

.00

5600 30BD

IMag

Human

Lineage

Cell

Depletio

n Set -

Hu Sep

RUO T DS

￥7,915.

5585 20BD

IMag

Memory

CD4+ T

Cell

Enrichm

ent Set -

Hu RUO T DS

￥9,932.

5584 54BD

IMag

Monocyt

Enrichm

ent Set -

Hu Sep

RUO T DS

￥7,532.

5585 21BD

IMag

Naive

CD4 T

Cell

Enrichm

ent Set

IMag?-

RUO T DS

￥13,632

.00

Magnetic Cell Separation (24)

Cat.#Bran

Name Contents Format

Clon

Isotyp

Reactivi

Con

App

Siz

Statu

Doc

List Price

55856 9BD

IMag

Naive

CD8 T

Cell

Enrichme

nt Set

IMag?-D

Eac

RUO TDS

￥12,400.

55798 7BD

IMag

NK Cell

Enrichme

nt Set -

CD3, CD19,

CD36,

CD41a,

CD66b,

CD123,

CD235a,

IMag?-D

Hu Sep

RUO TDS

￥7,773.0

IgEbiotinylat ed antibody cocktail and BD IMag? SAv particles

55814 2BD

IMag

Regulator

y T

Lymphocy

Separatio

n Set - DM

CD8,

CD11b/Mac-

1 (CR3),

CD16,

CD19,

CD36,

CD41a,

CD56,

CD123,

CD235a, γδ

TCR

biotinylated

antibody

cocktail,

CD25 APC,

BD IMag?

SAv

particles,

and BD

IMag

anti-APC

particles

IMag?-D

Eac

RUO TDS

￥11,237.

55787 4BD

IMag

Lymphocy

Enrichme

nt Set -

CD11b/Mac-

1, CD16,

CD19,CD36,

CD41a,

CD56,

CD235a

biotinylated

antibody

cocktail and

BD IMag?

SAv

particles

IMag?-D

Eac

RUO TDS

￥6,524.0

Pan T磁珠分选标准操作规程

1. 目的为规范磁珠分选T淋巴细胞，获取高纯度和高质量的T淋巴细胞。 2. 范围适用于T细胞分选生产的操作过程。 3. 职责 3.1 生产部负责操作和清场。 3.2 质量管理部QA负责监督。 4. 仪器、试剂和耗材 4.1 仪器：生物安全柜；移液枪；离心机；细胞计数仪；QuadroMACS Starting kit(LS) 4.2 试剂：Pan T Cell Isolation Kit（Miltenyi）；PBS；RPMI1640；台盼蓝；AB血清； 4.3 耗材：15/50mL离心管；25mL移液管；10mL移液管； 5. 标准操作程序 5.1 打开生物安全柜，紫外灯照射灭菌30min，通风10min后待用。 5.2 缓冲液配制：PBS加0.5%人AB血清和2mM EDTA，用前去气泡；缓冲液放4度冰箱预冷。全程保持低温。 5.3安装：将支撑架和分离器用酒精消毒后，放入生物安全柜。将分离器平行贴到支撑架的垂直面上，移动分离器调整高度。取出LS柱，安装到分离器的磁力槽中。 5.4 用细胞计数仪计数，计算细胞数目。 5.5 离心1000rpm，8min收集细胞，完全去掉上清。 5.6 按照每107细胞加40ul buffer的量加缓冲液重悬细胞。 5.7 每107细胞加10ul Pan T Cell Biotin-Antibody Cocktail。 5.8 混匀，4℃冰箱孵育5min。 5.9 每107细胞加30ul 缓冲液。

5.10每107细胞加20ul Pan T Cell Microbead。 5.11 混匀，4℃冰箱孵育10min。 5.12 加400 ul 缓冲液，混匀（至少500ul上柱）。 5.13 用3ml缓冲液润洗柱子。 5.14 把细胞悬液加入到柱子中。收集流出的T细胞。 5.15 用3ml缓冲液洗涤柱子，收集流出的T细胞。与5.14的合并。 5.16 从分离器上取下柱子，安放到合适的收集管中。 5.17 加入5ml 缓冲液到柱子中，立即将活塞插入柱子，用力将液体压出，即为非T细胞。 5.18 取样，台盼蓝染色后在细胞计数仪上计数。 5.19 关闭生物安全柜，进行清场操作。 5.20 填写相关记录文件。 6. 相关文件无 7. 相关记录 7.1《T细胞分选生产记录》 8. 附件清单无

磁珠提取DNA原理 (2)

磁珠纯化DNA原理 1、DNA与磁珠作用原理分选磁珠的作用原理就是基于一种固相载体可逆化固定(SPRI)的分离纯化方法。磁珠体系中一般包含:磁珠、DNA、聚乙二醇(PEG)、以及盐离子等,在一定浓度的PEG与盐离子环境中,DNA可吸附到羧基修饰的高分子磁珠表面(即固相载体),该过程就是可逆的,在适当条件下,结合的DNA分子可以被洗脱回收。纳米级别的磁珠表面性质不同,分离原理也不尽相同,但基本上固态的球状材料组成并无太大差异,基础结构一般分为3层,最内层的核心就是聚苯乙烯、第二层包裹磁性物质——四氧化三铁(Fe3O4),最外层表面就是羧基(-COOH)修饰的高分子材料所构成,其中羧基行使与核酸结合的工作。在整个体系中,PEG就是影响DNA回收的决定性因素(其她因素还包括DNA 大小与浓度、盐离子浓度、孵育时间等等)。DNA在一定浓度的PEG存在条件下,NaCl或MgCl2促进条件下,使DNA发生脱水反应,分子构象会发生急剧变化,由线状被压缩形成卷曲球状,继而聚集沉淀,同时随PEG分子量、浓度以及盐浓度的不同,不同长度的DNA可以被选择性的沉淀出来。在磁珠体系中,特定分子量的PEG的功能主要就是与盐离子共同作用,改变不同长度DNA的分子构象,同时增加体系的粘稠程度,使磁珠存在其中处于悬浮状态,不易沉降,增加磁珠在空间位置的碰撞与排斥,从而增加核酸与磁珠的聚集效率与效果,除此之外,PEG与蛋白质具有相容性,也可去除样品中的蛋白质。当处于PEG与盐离子环境中的DNA,因脱水作用而发生分子构象改变后,会暴露出磷酸骨架上大量的带负电荷的磷酸基团,与表面带负电荷的羧基磁珠结合,但如何解释负负电荷之间的作用,目前还不得而知。但普遍认为,这就是由于带正

美天旎公司磁珠分选产品

美天旎公司磁珠分选产品标准化管理处编码[BBX968T-XBB8968-NNJ668-MM9N]

美天旎公司MACS(磁珠分选)相关产品一、MACS微珠（MicroBeads） MACS微珠是一种与高度特异性单克隆抗体相偶联的超顺磁化微粒，用于目的细胞或者去除细胞的磁性标记。微珠直径约有50nm，比细胞小200多倍，体积为细胞的百万分之一，光学显微镜下不可见。微珠由多聚糖和氧化铁组成，无毒性，对细胞无损伤，可以生物降解。MACS微珠与流式细胞仪兼容，不会影响细胞的光散射特性；磁性标记只占用2 0－30％的结合位点，不影响细胞的荧光抗体标记。此外，MACS微珠可以最大限度地避免细胞活化；无需解离磁珠，可以直接进行后续实验：如流式细胞仪分析或分选、细胞培养、分子生物学研究、回输给人或者动物。 MACS微珠主要有三种：直标微珠、间标微珠、多选微珠。其中间标微珠有抗免疫球蛋白微珠、抗生物素微珠或链霉亲和素微珠、抗荧光素微珠。多选微珠是专门为分选细胞亚群而研制的一种微珠。这种微珠通过特殊的方式与抗体偶联，在第一次阳性分选完成后，与细胞结合的多选微珠可以被解离试剂剪切下来，阳性分选的细胞可以进行再次阳性分选或者去除分选。 MACS技术分选的CD8阳性T细胞（箭头所示为磁性结合在细胞表面的微珠）二、MACS分选柱（Separation Column） MACS分选柱是一类填充有不同规格铁珠的塑料容器，铁珠表面有亲水包被，因此不会损伤细胞。在磁场外MACS分选柱不带有磁性，但是当置于一个永久性磁场—MACS分选器中时，分选柱内的铁珠可以使分选器的磁场增强1000倍，足以滞留仅标记有极少量微珠的目的细胞；磁性标记细胞从分选柱中通过时可以受到均匀的磁力作用，从而提高分选纯度和回收率。手动操作在30分钟内可完成，自动分选仅需分钟，得到的细胞可立即用于后续实验。此外，大多数MACS分选柱都是无菌包装，一次性使用，可以满足细胞培养所需的无菌条件。三、MACS分选器（MACS Separators） MACS分选器由永久性磁铁和支架构成。与分选柱一起组成高强度的梯度磁场。根据应用范围分为研究用和临床应用的MACS分选器，根据操作方式分为手动和自动分选器。

电感和磁珠的选型

电感和磁珠的选型在电子设备的PCB 板电路中会大量使用感性元件和EMI滤波器元件。这些元件包括片式电感和片式磁珠，以下就这两种器件的特点进行描述并分析他们的普通应用场合以及特殊应用场合。表面贴装元件的好处在于小的封装尺寸和能够满足实际空间的要求。除了阻抗值，载流能力以及其他类似物理特性不同外，通孔接插件和表面贴装器件的其他性能特点基本相同。片式电感在需要使用片式电感的场合，要求电感实现以下两个基本功能：电路谐振和扼流电抗。谐振电路包括谐振发生电路，振荡电路，时钟电路，脉冲电路，波形发生电路等等。谐振电路还包括高Q带通滤波器电路。要使电路产生谐振，必须有电容和电感同时存在于电路中。在电感的两端存在寄生电容，这是由于器件两个电极之间的铁氧体本体相当于电容介质而产生的。在谐振电路中，电感必须具有高Q，窄的电感偏差，稳定的温度系数，才能达到谐振电路窄带，低的频率温度漂移的要求。高Q 电路具有尖锐的谐振峰值。窄的电感偏置保证谐振频率偏差尽量小。稳定的温度系数保证谐振频率具有稳定的温度变化特性。标准的径向引出电感和轴向引出电感以及片式电感的差异仅仅在于封装不一样。电感结构包括介质材料（通常为氧化铝陶瓷材料）上绕制线圈，或者空心线圈以及铁磁性材料上绕制线圈。在功率应用场合，作为扼流圈使用时，电感的主要参数是直流电阻（DCR）,额定电流，和低Q 值。当作为滤波器使用时，希望宽带宽特性，因此，并不需要电感的高Q 特性。低的DCR 可以保证最小的电压降，DCR 定义为元件在没有交流信号下的直流电阻。片式磁珠片式磁珠的功能主要是消除存在于传输线结构（PCB 电路）中的RF噪声,RF能量是叠加在直流传输电平上的交流正弦波成分，直流成分是需要的有用信号,而射频RF能量却是无用的电磁干扰沿着线路传输和辐射（EMI）。要消除这些不需要的信号能量，使用片式磁珠扮演高频电阻的角色（衰减器），该器件允许直流信号通过，而滤除交流信号。通常高频信号为30MHz 以上，然而，低频信号也会受到片式磁珠的影响。

MACS磁珠分选

MACS 磁珠分选免疫磁珠法分离细胞原理免疫磁珠法分离细胞是基于细胞表面抗原能与连接有磁珠的特异性单抗相结合，在外加磁场中，通过抗体与磁珠相连的细胞被吸附而滞留在磁场中，无该种表面抗原的细胞由于不能与连接着磁珠的特异性单抗结合而没有磁性，不在磁场中停留，从而使细胞得以分离。一、磁性细胞标记方式应用MACS 技术进行磁性细胞分选最重要的一点是高质量的标记。要尽可能地增强阳性细胞的标记，并减弱背景染色。有两种基本的磁性标记方式：直接标记和间接标记。 1 、直接磁性细胞标记( Direct magnetic cell labeling ) ( 磁珠结合的细胞就是所要分离获得的细胞) 直接标记是最快速、最特异的磁性标记方法。目前有多种分选人、小鼠、大鼠以及非人类灵长类细胞的MACS 直标微珠可供选用。 2 、间接磁性细胞标记( Indirect magnetic cell labeling ) ( 磁珠结合不需要的细胞，游离于磁场的细胞为所需细胞) 间接磁性细胞标记需要联合使用单克隆或者多克隆抗体和MACS 间标微珠。未结合抗体、生物素化抗体或者荧光素标记抗体均可作为一抗标记细胞，再使用抗免疫球蛋白微珠、抗生物素或链霉亲和素微珠、抗荧光素微珠作为二抗磁性标记细胞。几乎针对任何种系任何细胞的任何一种单抗或多抗，均可用于间接标记。间接标记主要在如下情况时选用：当没有直标磁珠时；需要用几种抗体的混合物同时分选或去除多种类型的细胞；间接标记有放大作用，因此可在磁性分选抗原表达弱的目的细胞时使用；使用自备抗体或者配体的磁珠分选中。( 般而言，阴性分离法的磁珠用量比阳性分离法的大，阳性分离法用行更多。) 二、MACS 分选策略有两种基本的分选策略阳性分选和去除分选。复合分选策略是将两种基本分选策略相结合或者联合使用多选微珠，从而实现细胞亚群的分选。 1 、阳性分选策略( Positive selection strategy ) 阳性分选中，目的细胞被磁性标记后，作为阳性标记组分直接分选出来。分选后的细胞不必去除 MACS 微珠，可立即用于培养

磁珠分选步骤

磁性标记和分选步骤： 1.制备无菌Buffers,冰上放置。细胞染色缓冲液（cell-staining buffer）：含3%热灭活胎牛血清和0.1%叠氮化钠的PBS。 1×BD IMag? buffer：按1:10稀释(10X)BD IMag? Buffer ，用无菌蒸馏水或加有 0.5% BSA，2 mM EDTA和0.1% 叠氮化钠的PBS稀释。2.无菌操作，从外周淋巴组织内制备单细胞悬浮液。然后用70μm的尼龙细胞过滤器滤除细胞簇和组织碎片。用cell-staining buffer制备细胞悬浮液。 3.细胞计数：如果细胞浓度在10 x 106和20 x 106/ml之间进行第3步，如果浓度低于10 x 106如，离心细胞，并用cell-staining buffer重悬细胞至终浓度20 x 106/ml。 4.可选：在细胞悬液内添加BD Mouse Fc Block纯化的抗小鼠CD16/CD32单克隆抗体 2.4G2（BD Mouse Fc Block? purified anti-mouse CD16/CD32 mAb 2.4G2），每1 x 106个细胞添加0.25μg，然后冰浴15min. 5.添加生物素标记的小鼠树突状细胞富集混合物（Bioinylated Mouse Dendritic Cell Enrichment Cocktail），每1 x 106个细胞添加5μl ,冰浴15min. 6.用10x过量体积的1X BD IMag? buffer洗涤标记细胞，300 ? g离心7分钟并小心吸去所有上清液。 7.彻底涡旋BD IMag? Streptavidin Particles Plus – DM后，每1 x 106个细胞添加5μl。 8.混匀，然后6?C - 12?C冷藏30min. 9.用1X BD IMag?buffer将标签量提高到20到80 x 106/ml。 10.把标记细胞转移到12 x 75 mm的圆底试管，添加的最大体积不超过1.0ml。把这个 positive-fraction 管放到BD IMagnet?(水平位置)8min。对于较大体积，可把细胞转移到17 x 100 mm圆底试管，添加的最大的体积不超过 3.0ml。把这个positive-fraction 管放到BD IMagnet?(垂直位置)8min。 11.当管在BD IMagnet?上时，用无菌巴斯德吸管轻轻的吸取上清至一个新的无菌管内。 12.从BD IMagnet?取出positive-fraction 管，添加1X BD IMag? buffer到与步骤8相同的体积。上下吹打10-15次，重悬positive fraction well，并重置于BD IMagnet?上6-8min. 对17 x 100 mm 管，重置于BD IMagnet?上8min。 13.用一个新的巴斯德吸管轻轻吸上清和步骤10中的enriched fraction。混合。 14.把含有结合enriched fraction的管再置于BD IMagnet?6-8min。对17 x 100 mm 管，重置于BD IMagnet?上8min。 15.轻轻吸出上清并置于一个新的无菌管内。两次enriched fraction不含有bound antibodies 和磁性粒子。细胞可用后续应用。 16.留在原管内的正选细胞可用适当的缓冲液或培养基重悬以备后续应用，包括流式细胞系检测。 17.未分离的细胞悬浮液样品和正选富集positive and enriched fractions的样品，应用流式细胞仪评估细胞分离效率。

(完整版)电感和磁珠区别

磁珠与电感有何区别 2006-10-07 23:44 提问者悬赏：10分|匿名|分类：单机游戏|浏览16725次我有更好的答案分享到：网友都在找：按默认排序|按时间排序 1条回答 2006-10-08 11:42点沧|四级最快回答电感是储能元件，而磁珠是能量转换（消耗）器件电感多用于电源滤波回路，磁珠多用于信号回路，用于EMC对策磁珠主要用于抑制电磁辐射干扰，而电感用于这方面则侧重于抑制传导性干扰。两者都可用于处理EMC(（Electro Magnetic Compatibility)、EMI(电磁干扰(Electromagnetic Interference 简称EMI)问题。磁珠是用来吸收超高频信号，象一些RF电路，PLL，振荡电路，含超高频存储器电路（DDR SDRAM，RAMBUS等）都需要在电源输入部分加磁珠，而电感是一种蓄能元件，用在LC振荡电路，中低频的滤波电路等，其应用频率范围很少超过错50MHZ。地的连接一般用电感，电源的连接也用电感，而对信号线则采用磁珠？但实际上磁珠应该也能达到吸收高频干扰的目的啊？而且电感在高频谐振以后都不能再起电感的作用了,先必需明白EMI的两个途径，即：辐射和传导，不同的途径采用不同的抑制方法。前者用磁珠，后者用电感。对于扳子的IO部分，是不是基于EMC的目的可以用电感将IO部分和扳子的地进行隔离，比如将USB的地和扳子的地用10uH的电感隔离可以防止插拔的噪声干扰地平面？电感一般用于电路的匹配和信号质量的控制上。在模拟地和数字地结合的地方用磁珠。在模拟地和数字地结合的地方用磁珠。数字地和模拟地之间的磁珠用多大,磁珠的大小

细说磁珠

说说磁珠(Ferrite Bead) 第一次使用磁珠还是在实习的时候，但是看原理图发现有个元件写着”Bea d”，单位是100欧姆，用万用表测，导通，电阻约为0。当时就很奇怪，是什么有什么用？后来问了师兄，才知道，这个是磁珠，相当于电感，通直流阻交流(不准确)。这就是我当初对磁珠的印象。磁珠全称为铁氧体磁珠，Ferrite Bead，简写FB。磁珠的单位是欧姆，而不是亨特，这一点要特别注意。因为磁珠的单位是按照它在某一频率产生的阻抗来标称的，阻抗的单位也是欧姆。磁珠的 DATASH EET上一般会提供频率和阻抗的特性曲线图，一般以100MHz为标准，比如60 0R@100MHz，意思就是在100MHz频率的时候磁珠的阻抗相当于600欧姆。磁珠的结构 X射线下的结构(真的活像线圈)

磁珠的等效模型 R bead是磁珠的直流电阻； L bead是磁珠的等效电感； Cpar和Rpar是并联电容和电阻。在低频的时候，Cpar开路，L bead短路，只有直流电阻R bead。当频率增加的时候，阻抗(JwL bead)随着L bead的增加线性增加，阻抗(1/jwCpar)随着Cpar的减小而相反增长。磁珠的阻抗频率曲线图上升斜率主要由电感L bead决定。在高频到达一定频率点时，Cpar的阻抗开始起主要作用。磁珠的阻抗开始减小。阻抗频率曲线的斜率下降主要由磁珠的寄生电容Cpar所决定。Rpar对抑制品质因素(Q-factor)有作用，无论如何，Rpar和Cpar的值增长过大会增加磁珠的品质因素和减小磁珠的有效带宽。高品质因素(Q)可能导致电源输送网络瞬态频率响应不想要的抬升。

磁珠纯化DNA的原理

磁珠起源磁珠目前广泛应用于NGS实验中，DNA、RNA的纯化，片段筛选……今天，我们就聊一聊磁珠。首先说一下磁珠的起源：磁珠的发明构想最初来自于挪威科技大学的化学家John Ugelstad，他在1976年以聚苯乙烯(Polystyrene)为主要材料，制造出均匀磁化的球体粒子。1979年Vogelstein等报道在高浓度碘化钠存在下玻璃粉末作为吸附剂用于从琼脂糖凝胶中提取DNA片段，而后基于硅胶和其他具有亲水性表面的载体的固相核酸纯化技术广泛发展起来（Vogelstein B,Gillespiet D. Proc https://www.wendangku.net/doc/e78019574.html,A，1979,76(2):615～619）。基于磁性微粒的核酸纯化方法就是其中的一种现代分子生物学和医学对高通量，高灵敏度，自动化操作的需求也是与日俱增，于是20世纪90年代，磁珠法DNA提取技术由此得到了大力发展。硅质膜磁珠是一类最早出现基于硅介质与核酸特异结合的原理而发展起来的的产品，它广泛应用于DNA、RNA的纯化。与离心柱法原理相同，离心柱法所采用的硅胶膜实际上就是玻璃纤维，而磁珠之所以能够结合核酸也是因为其表面包被了玻璃纤维。硅质膜二氧化硅磁珠具有超顺磁性内核和二氧化硅外壳，表面修饰大量的硅羟基。磁珠表面的硅羟基能够与溶液中的核酸通过氢键和静电作用发生特异性结合，在高盐条件下与核酸结合，而在低盐环境下被洗脱，这样就可以直接从复杂的生物体系中迅速分离核酸。到现在纳米级别的磁珠发展已经各式各样了，表面性质各不相同，分离原理也不尽相同。但基本上固态的球状材料组成并无太大差异，基础结构一般分为3层，最内层的核心是聚苯乙烯、第二层包裹磁性物质——四氧化三铁（Fe3O4），最外层表面是官能基团修饰的高分子材料所构成，其中官能基团行使与核酸结合的工作，提取、生物素捕获、片段筛选功能的不同，表面官能基团不同。当然不仅磁珠应用在核酸制备上，在化学发光、细胞分选、蛋白纯化等应用磁珠依然是大显身手，是因为不同的官能基团，或者偶联其它，如蛋白抗体等。毋庸置疑，NGS上用的最多还是我们的老熟人——贝克曼的XP磁珠。这种羧化磁珠比羟基磁珠产量更高，非特异性结合更少。XP磁珠采用SPRI（固相可逆固定化）技术：在较高浓度的PEG和NaCl导致DNA分子水化层脱去，DNA胶体热力学稳定性破坏，构象也随之改变，带负电荷的磷酸基团大量暴露在外面；带负电荷的磷酸基团通过Na+与羧基形成“电

CD4T磁珠分选

MACS CD4+ cells purification Kits: 1.Centrifuge cells at 300G×10min, Pipette off supernatant completely 2.Resuspend cell pellet in 40ul of buffer per 107 cells 3.Add 10ul of Biotin-Antibody Cocktail per 107 cells 4.Mix well and incubate for 10min at 40C 5.Add 30ul buffer per 107 cells 6.Add 20ul Anti-Biotin MicroBeads per 107 cells 7.Mix well and incubate for 15min at 40C 8.Wash the cells with buffer by adding 10-20×labeling volume and centrifuge at 300G×10min 9.Resuspend up to 108 cells in 500ul buffer. 10. Magnetic separation with LS columns 11. Place column in the magnetic field of LS MACS Saparator 12.Rinsing the column with buffer (LS: 3ML) 13.Apply cell suspension onto the column, collect effluent in a tube 14.Wash the column with 3ml buffer, 3 times,collect effluent in the same tube. 15.Count cells

MACS磁珠分选

MACS磁珠分选免疫磁珠法分离细胞原理免疫磁珠法分离细胞是基于细胞表面抗原能与连接有磁珠的特异性单抗相结合，在外加磁场中，通过抗体与磁珠相连的细胞被吸附而滞留在磁场中，无该种表面抗原的细胞由于不能与连接着磁珠的特异性单抗结合而没有磁性，不在磁场中停留，从而使细胞得以分离。一、磁性细胞标记方式应用MACS技术进行磁性细胞分选最重要的一点是高质量的标记。要尽可能地增强阳性细胞的标记，并减弱背景染色。有两种基本的磁性标记方式：直接标记和间接标记。 1、直接磁性细胞标记（Direct magnetic cell labeling）（磁珠结合的细胞就是所要分离获得的细胞）直接标记是最快速、最特异的磁性标记方法。目前有多种分选人、小鼠、大鼠以及非人类灵长类细胞的MACS直标微珠可供选用。 2、间接磁性细胞标记（Indirect magnetic cell labeling）（磁珠结合不需要的细胞，游离于磁场的细胞为所需细胞）间接磁性细胞标记需要联合使用单克隆或者多克隆抗体和MACS间标微珠。未结合抗体、生物素化抗体或者荧光素标记抗体均可作为一抗标记细胞，再使用抗免疫球蛋白微珠、抗生物素或链霉亲和素微珠、抗荧光素微珠作为二抗磁性标记细胞。几乎针对任何种系任何细胞的任何一种单抗或多抗，均可用于间接标记。间接标记主要在如下情况时选用：当没有直标磁珠时；需要用几种抗体的混合物同时分选或去除多种类型的细胞；间接标记有放大作用，因此可在磁性分选抗原表达弱的目的细胞时使用；使用自备抗体或者配体的磁珠分选中。（一般而言，阴性分离法的磁珠用量比阳性分离法的大，阳性分离法用行更多。）二、MACS分选策略有两种基本的分选策略阳性分选和去除分选。复合分选策略是将两种基本分选策略相结合或者联合使用多选微珠，从而实现细胞亚群的分选。 1、阳性分选策略（Positive selection strategy）阳性分选中，目的细胞被磁性标记后，作为阳性标记组分直接分选出来。分选后的细胞不必去除MACS微珠，可立即用于培养

磁珠分类及选用

磁珠分类及选用磁珠由软磁铁氧体材料组成，具有独石结构。目前磁珠有以下几类：普通型这是应用最广泛的一类叠层型片式磁珠/电感器，1608、2012是目前的主流规格，同时还有3216、3225等多个规格。大电流型普通型磁珠的额定电流只有几百毫安，但在某些应用场合要求额定电流达到几安培;例如：为了消除计算机卡板电源部分及大电流母线部分的噪声，要求磁珠能承受几安培的电流。为此，选择适当的铁氧体材料或者采用低烧结温度电子陶瓷材料，并采取适当的工艺措施，制成了能够承受大电流的叠层型片式磁珠，阻值比较低。尖峰型当电子线路中在某频率点存在着强烈的干扰噪声很难消除时，可以在此电子线路中加一个谐振频率恰巧在干扰噪声频点的尖峰型磁珠，从而将这一强烈的干扰噪声完全抑制;不同电子线路、不同用户对谐振频率的数值要求是不相同的。高频型各种电子元器件的频率都在提高，辐射的电子干扰的频率往往超过1GHz;如果使用普通型磁珠，那么，三次谐波信号成分将被大量衰减，致使时钟脉冲信号钝化，将会引起误操作。所以要求将磁珠的抑制EMI 的频率范围提高，如对500MHz 以下的信号频率成分几乎无衰减通过，而对1GHz 以上的干扰噪声产生大量衰减。阵列型磁珠阵列(Chip Beads Array)又称为磁珠排(如图)，即在一个0805 或1206 的片式元件内并列2～4 个片式磁珠。这样就大大缩小了在PCB 上所占据的面积，有利于高密度组装。

铁氧体磁珠(Ferrite Bead)是目前应用发展很快的一种抗干扰元件，廉价、易用，滤除高频噪声效果显著。在应用上，片式铁氧体磁珠大致可分为电源线路用和信号线路用两大类产品。作为用在信号线路中所要求的性能，最重要的是所有信号波形应与抑制噪声措施相互依存和适应。电源线路上使用的产品有低直流电阻和高耐能量型。片式磁珠的外形尺寸系列已符合片式阻容元件的标准，而且性能优良、品种规格齐全，为电路设计者提供了广阔的空间。过去未采用电子产品(如彩电、录像机、电话机等)，现在也开始大量采用片式电感器和片式磁珠。

美天旎公司磁珠分选产品

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磁珠的作用

1、磁珠，其实就是单匝的线圈，而电感是多匝的。有一匝以上的线圈习惯称为电感线圈，少于一匝（导线直通磁环）的线圈习惯称之为磁珠，其实磁珠就是单匝电感，因此电感量小，与其寄生电容的共振频率就高（在这个频率点上，阻抗最高），因而对高频的抑制作用就好。 2、磁珠，是能量消耗元件，可等效为一个电感和一个电阻串联，只是电阻和电感都随频率的增高而增大，低频时阻抗很小，信号可以通过，频率较高时，比如说外界的RF干扰，等效阻抗很大，射频干扰以热量的形式被消耗掉，达到EMC 的目的，常用于信号线和电源线入口，抑制高频干扰和尖峰干扰；而电感是储能元件，多用于电源的滤波。 3、磁珠主要对付环境中的电磁辐射干扰；电感用来对付传导性干扰。 4、两者在电路中的符号虽然相同，但是单位却不同，磁珠的单位是欧姆，因为磁珠的单位是按照它在某一频率产生的阻抗来标称的，阻抗的单位也是欧姆。磁珠的DATASHEET上一般会提供频率和阻抗的特性曲线图，一般以100MHz 为标准，比如1000R@100MHz，意思就是在100MHz频率的时候磁珠的阻抗相当于600欧姆；电感的单位是亨利(H)。不过两者贴片的封装差不多，顺便贴出贴片的公制封装与英制封装名称对比：下面主要说说磁珠：现在用的最多的是铁氧体磁珠(Ferrite Bead) 。 1、磁珠的分类：通用型、大电流型、低频高阻型及尖峰型。并分别用代号来表示：CBG的含义叠层片式通型磁珠，CBW 为大电流型，CBY为尖峰型、CBH为低频高阻型。 2、磁珠的参数：以我们选用的村田的BLM15AG102SN1为例：阻抗1000ohm@100MHz，100MHz时的等效阻抗位1000欧姆；直流电阻DC Resistance (1.0 ohm)，直流阻抗1.0欧姆，表示对直流信号的衰减，越低越好；还可以发现一个现象：阻抗越大，其直流阻抗也越大，例如，BLM15AG100SN1100MHz阻抗仅为10ohm，直流阻抗为0.05ohm。额定电流Rated Current (200 mA)，允许通过的最大电流，因为铁氧体是磁性材料，会因通过电流过大而产生磁饱和，导磁率会急剧下降。这个参数的大小与阻抗成反比，即阻抗越大，额定电流越小，BLM15AG100SN1的额定电流为1000mA。 3、说到磁珠，自然会提起单点接地，copy一段网上一些论坛博客的摘要：只要是地，最终都要接到一起，然后入大地。如果不接在一起就是"浮地"，存在压差，容易积累电荷，造成静电。地是参考0电位，所有电压都是参考地得出的，地的标准要一致，故各种地应短接在一起。人们认为大地能够吸收所有电

磁珠提取DNA原理

磁珠提取D N A原理 Pleasure Group Office【T985AB-B866SYT-B182C-BS682T-STT18】

磁珠纯化DNA原理与磁珠作用原理分选磁珠的作用原理是基于一种固相载体可逆化固定（SPRI）的分离纯化方法。磁珠体系中一般包含：磁珠、DNA、聚乙二醇（PEG）、以及盐离子等，在一定浓度的PEG和盐离子环境中，DNA可吸附到羧基修饰的高分子磁珠表面（即固相载体），该过程是可逆的，在适当条件下，结合的DNA分子可以被洗脱回收。纳米级别的磁珠表面性质不同，分离原理也不尽相同，但基本上固态的球状材料组成并无太大差异，基础结构一般分为3层，最内层的核心是聚苯乙烯、第二层包裹磁性物质——四氧化三铁（Fe3O4），最外层表面是羧基（-COOH）修饰的高分子材料所构成，其中羧基行使与核酸结合的工作。在整个体系中，PEG是影响DNA回收的决定性因素（其他因素还包括DNA大小和浓度、盐离子浓度、孵育时间等等）。DNA在一定浓度的PEG存在条件下，NaCl或MgCl2促进条件下，使DNA发生脱水反应，分子构象会发生急剧变化，由线状被压缩形成卷曲球状，继而聚集沉淀，同时随PEG分子量、浓度以及盐浓度的不同，不同长度的DNA可以被选择性的沉淀出来。在磁珠体系中，特定分子量的PEG的功能主要是与盐离子共同作用，改变不同长度DNA的分子构象，同时增加体系的粘稠程度，使磁珠存在其中处于悬浮状态，不易沉降，增加磁珠在空间位置的碰撞与排斥，从而增加核酸与磁珠的聚集效率与效果，除此之外，PEG与蛋白质具有相容性，也可去除样品中的蛋白质。当处于PEG和盐离子环境中的DNA，因脱水作用而发生分子构象改变后，会暴露出磷酸骨架上大量的带负电荷的磷酸基团，与表面带负电荷的羧基磁珠结合，但如何解释负负电荷之间的作用，目前还不得而知。但普遍认为，这是由于带正电荷的盐离子的作用（如Na+）。带负电的磷酸基团借由解离的盐离子（如Na+）与羧基形成离子桥，使DNA被特异性吸附到羧基磁珠表面。当PEG和盐类被去除之后，加入水性分子，会快速充分水化DNA，解除其三者之间的离子相互作用，使得吸附到磁珠的DNA被纯化出来。磁珠的出现，使得核酸制备的实验可以实现自动化，同时相较于传统的回收方式，还具有3个明显的优势：1）效率更高，以DNA为例，1μL磁珠的承载量可达7μg；2）避免使用有机溶剂，如酚类、氯仿等等，更加安全；3）操作简单，无需离心，也更有利于保留核酸的完整性。

美天旎公司磁珠分选产品

美天旎公司MACS(磁珠分选)相关产品一、MACS微珠（MicroBeads） MACS微珠是一种与高度特异性单克隆抗体相偶联的超顺磁化微粒，用于目的细胞或者去除细胞的磁性标记。微珠直径约有50nm，比细胞小200多倍，体积为细胞的百万分之一，光学显微镜下不可见。微珠由多聚糖和氧化铁组成，无毒性，对细胞无损伤，可以生物降解。MACS微珠与流式细胞仪兼容，不会影响细胞的光散射特性；磁性标记只占用20－30％的结合位点，不影响细胞的荧光抗体标记。此外，MACS微珠可以最大限度地避免细胞活化；无需解离磁珠，可以直接进行后续实验：如流式细胞仪分析或分选、细胞培养、分子生物学研究、回输给人或者动物。 MACS微珠主要有三种：直标微珠、间标微珠、多选微珠。其中间标微珠有抗免疫球蛋白微珠、抗生物素微珠或链霉亲和素微珠、抗荧光素微珠。多选微珠是专门为分选细胞亚群而研制的一种微珠。这种微珠通过特殊的方式与抗体偶联，在第一次阳性分选完成后，与细胞结合的多选微珠可以被解离试剂剪切下来，阳性分选的细胞可以进行再次阳性分选或者去除分选。 MACS技术分选的CD8阳性T细胞（箭头所示为磁性结合在细胞表面的微珠）二、MACS分选柱（Separation Column） MACS分选柱是一类填充有不同规格铁珠的塑料容器，铁珠表面有亲水包被，因此不会损伤细胞。在磁场外MACS分选柱不带有磁性，但是当置于一个永久性磁场—MACS分选器中时，分选柱内的铁珠可以使分选器的磁场增强1000倍，足以滞留仅标记有极少量微珠的目的细胞；磁性标记细胞从分选柱中通过时可以受到均匀的磁力作用，从而提高分选纯度和回收率。手动操作在30分钟内可完成，自动分选仅需2.5-10分钟，得到的细胞可立即用于后续实验。此外，大多数MACS分选柱都是无菌包装，一次性使用，可以满足细胞培养所需的无菌条件。三、MACS分选器（MACS Separators）

磁珠选型与应用知识

磁珠选型与应用知识磁珠的全称为铁氧体磁珠滤波器(另有一种是非晶合金磁性材料制作的磁珠)，是一种抗干扰元件，滤除高频噪声效果显著。磁珠的主要原料为铁氧体。铁氧体是一种立方晶格结构的亚铁磁性材料。铁氧体材料为铁镁合金或铁镍合金，它的制造工艺和机械性能与陶瓷相似，颜色为灰黑色。磁珠有很高的电阻率和磁导率，他等效于电阻和电感串联，但电阻值和电感值都随频率变化。他比普通的电感有更好的高频滤波特性，在高频时呈现阻性，所以能在相当宽的频率范围内保持较高的阻抗，从而提高调频滤波效果。磁珠的电路符号就是电感，但是型号上可以看出使用的是磁珠。在电路功能上，磁珠和电感是原理相同的，只是频率特性不同而已。一、磁珠的型号命名方法（风化高科系列磁珠为例）磁珠的型号一般由下列五部分组成: 第一部分:类别，多用字母表示. 第二部分:尺寸，用数字表示（英制）第三部分:材料，用字母表示，其中X代表小型。第四部分:阻抗，100MHz时阻抗第五部分:包装方式，用字母表示如某型号磁珠命名如下铁氧叠层片式磁珠（普通型） Ferrite chip beads 尺寸：1005 （0402）1608（0603）2012（0805）产品规格命名方法： CBG 100505/、160808/ 201209、 V 121 T ↓↓↓↓↓ 叠层片式规格尺寸材料阻抗包装方式通用型磁珠应指出的是，目前磁珠型号命名方法各生产厂有所不同，尚无统一的标准。二、磁珠的结构特点铁氧体磁珠 (Ferrite Bead) 是目前应用发展很快的一种抗干扰组件，廉价、易用，滤除高频噪声效果显着。在电路中只要导线穿过它即可（我用的都是象普通电阻模样的，导线已穿过并胶合，也有表面贴装的形式，但很少见到卖的）。当导线中电流穿过时，铁氧体对低频电流几乎没有什么阻抗，而对较高频率的电流会产生较大衰减作用。高频电流在其中以热量形式散发，其等效电路为一个电感和一个电阻串联，两个组件的值都与磁珠的长度成比例。磁珠种类很多，制造商应提供技术指标说明，特别是磁珠的阻抗与频率关系的曲线。有的磁珠上有多个孔洞，用导线穿过可增加组件阻抗（穿过磁珠次数的平方），不过在高频时所增加的抑制噪声能力不可能如预期的多，而用多串联几个磁珠的办法会好些。铁氧体是磁性材料，会因通过电流过大而产生磁饱和，导磁率急剧下降。大电流滤波应采用结构上专门设计的磁珠，还要注意其散热措施。铁氧体磁珠不仅可用于电源电路中滤除高频噪声（可用于直流和交流输出），还可广泛应用于其它电路，其体积可以做得很小。特别是在数字电路中，由于脉冲信号含有频率很高的高次谐波，也是电路高频辐射的主要根源，所以可在这种场合发挥磁珠的作用。铁氧体磁珠还广泛应用于信号电缆的噪声滤除。

磁珠分选

混合淋巴细胞反应（MLR）分别于0h , 24h和48h收集BMDCs，与未接触过的受试菌的native小鼠脾脏内的CD4+和CD8+T细胞进行反应，用3H-TdR掺入法检测其活化T细胞的能力。小鼠脾脏CD4+和CD8+细胞的制备（1）脾脏单细胞悬液的制备：颈椎脱臼处死小鼠，自来水冲洗后浸泡在75%酒精中5min。无菌取脾脏放人平皿，加入5ml四型胶原酶溶液，用1ml针筒给每个脾脏注射500ul四型胶原酶溶液，剪碎脾脏后37℃孵育30min。将上述脾脏细胞悬液转移至200目不锈钢筛网，用注射器针芯研磨，过滤剩余组织。加入6ml PBS混匀，4℃，1500 rpm/min ,离心5min ，弃上清后重复一次，加入6ml PBS 重悬备用。（2）密度梯度离心法分离脾脏单个核细胞（mononuclear cells,MNCs）:吸取3ml已预热的小鼠淋巴细胞分离液至华氏管，缓慢加入6ml脾脏细胞悬液，20℃，1800 rpm/min ,离心25min。吸出云雾状MNCs层液体，加入6ml PBS混匀，4℃，1500 rpm/min ,离心5min 。弃上清后重复一次，再加入5ml PBS重悬。取少量细胞适当稀释后混匀，显微镜下计数。（3）抗体标记细胞：每106 MNCs加入1ug anti-CD4或anti-CD8单抗混匀，4℃孵育10min后加入1~2 ml buffer , 4℃，1500 rpm/min ,离心洗涤10min ，弃上清后重复一次。加入90ul buffer和10ul streptavidin microbeads混匀，6~12℃孵育30min，每隔10min晃动均匀一次。用1~2ml buffer洗涤，4℃，1500 rpm/min ,离心10min，弃上清后加入500ul buffer。（4）磁珠法分离CD4+和CD8+T细胞：将LS column 固定于磁珠细胞分选磁场中，加入3ml buffer润洗柱子。细胞悬液上株，收集阴性细胞再次上柱，3ml buffer洗柱3次。将分离柱从磁场中取出，放置在合适的收集管上，加入5ml buffer，用柱塞轻柔的冲洗出细胞，再加入5ml buffer ，快速冲洗出细胞，取少量细胞适当稀释后，显微镜下计数。调整细胞浓度为2.5 * 106个/ml 备用。以上操作步骤均在冰上进行。

磁珠提取DNA原理

磁珠纯化DNA原理 1.DNA与磁珠作用原理分选磁珠的作用原理是基于一种固相载体可逆化固定（SPRI）的分离纯化方法。磁珠体系中一般包含：磁珠、DNA、聚乙二醇（PEG）、以及盐离子等，在一定浓度的PEG和盐离子环境中，DNA可吸附到羧基修饰的高分子磁珠表面（即固相载体），该过程是可逆的，在适当条件下，结合的DNA分子可以被洗脱回收。纳米级别的磁珠表面性质不同，分离原理也不尽相同，但基本上固态的球状材料组成并无太大差异，基础结构一般分为3层，最内层的核心是聚苯乙烯、第二层包裹磁性物质——四氧化三铁（Fe3O4），最外层表面是羧基（-COOH）修饰的高分子材料所构成，其中羧基行使与核酸结合的工作。在整个体系中，PEG是影响DNA回收的决定性因素（其他因素还包括DNA大小和浓度、盐离子浓度、孵育时间等等）。DNA在一定浓度的PEG存在条件下，NaCl或MgCl2促进条件下，使DNA发生脱水反应，分子构象会发生急剧变化，由线状被压缩形成卷曲球状，继而聚集沉淀，同时随PEG分子量、浓度以及盐浓度的不同，不同长度的DNA可以被选择性的沉淀出来。在磁珠体系中，特定分子量的PEG的功能主要是与盐离子共同作用，改变不同长度DNA的分子构象，同时增加体系的粘稠程度，使磁珠存在其中处于悬浮状态，不易沉降，增加磁珠在空间位置的碰撞与排斥，从而增加核酸与磁珠的聚集效率与效果，除此之外，PEG与蛋白质具有相容性，也可去除样品中的蛋白质。

当处于PEG和盐离子环境中的DNA，因脱水作用而发生分子构象改变后，会暴露出磷酸骨架上大量的带负电荷的磷酸基团，与表面带负电荷的羧基磁珠结合，但如何解释负负电荷之间的作用，目前还不得而知。但普遍认为，这是由于带正电荷的盐离子的作用（如Na+）。带负电的磷酸基团借由解离的盐离子（如Na+）与羧基形成离子桥，使DNA被特异性吸附到羧基磁珠表面。当PEG和盐类被去除之后，加入水性分子，会快速充分水化DNA，解除其三者之间的离子相互作用，使得吸附到磁珠的DNA被纯化出来。磁珠的出现，使得核酸制备的实验可以实现自动化，同时相较于传统的回收方式，还具有3个明显的优势：1）效率更高，以DNA为例，1μL磁珠的承载量可达7μg；2）避免使用有机溶剂，如酚类、氯仿等等，更加安全；3）操作简单，无需离心，也更有利于保留核酸的完整性。 2.蛋白酶K的作用蛋白酶K具有降解蛋白的功能，而细胞膜主要是由蛋白质构成的富有弹性的半透性膜，因此蛋白酶K能够裂解细胞，从而DNA能够释放出来。 3. 无水乙醇沉淀DNA 用无水乙醇沉淀DNA，这是实验中最常用的沉淀DNA的方法。乙醇的优点是可以任意比和水相混溶，乙醇与核酸不会起任何化学反应，对DNA很安全，因此是理想的沉淀剂。当加入乙醇时，乙醇会夺去DNA周围的水分子，使DNA失水而易于聚合。 4.TE缓冲液溶解DNA 采用Tris-HCl（pKa=8.0）的缓冲系统，由于缓冲液是TrisH+/Tris，不存在金属离子的干扰作用，故在提取或保存DNA时，大都采用Tris-HCl系统，并且TE缓冲液中的EDTA更能稳定DNA的活性。 5.为什么用酚与氯仿抽提DNA时，还要加少量的异戊酵？在抽提DNA时，为了混合均匀，必须剧烈振荡容器数次，这时在混合液内易产生气泡，气泡会阻止相互间的充分作用。加入异戊醇能降低分子表面张力，所以能减少抽提过程中的泡沫产生。同时异戊醇有助于分相，使离心后的上层水相，中层变性蛋白相以及下层有机溶剂相维持稳定。友情提示：本资料代表个人观点，如有帮助请下载，谢谢您的浏览！