醋酸液相法

1.

这是多种有机酸分析的色谱图，色谱柱C18 规格250mm×4.6mm, 5μm，流动相：0.01mol/L磷酸二氢钠溶液（用磷酸调节pH值为3.0）；流速：1.0mL/min；柱温：30℃；检测波长：210nm。

如果知道了HPLC的原理，这些方法不难的，至少乙酸太容易了。

乙酸pKa4.5左右，选用pH中性的流动相肯定没有保留，选用4.5加减2的流动相，方法肯定不稳定，那么只能选择pH2.0-2.5的流动相，并且因为乙酸吸收弱，所以建议选择0.1%磷酸做流动相，色谱柱C18就好。

2.楼主一定要用液质做么？有没有RID检测器如果有可以试试这个方法柱子：Sepax Carbomix H-NP 300*4mm，流动相:0.0025M硫酸，流速：0.6ml/min ，柱温:50度，RID检测器检测因为乙醇没有发色团所以紫外没有吸收此外要进液质的话必须要使物质电离乙醇没有电离基团可能无法电离所以不建议用MS来做

3.使用Sepax Carbomix H-NP 300*7.8mm这根柱子流速0.6ml/min 柱温60度楼主可以打赛分（Sepax）的客服电话问下能不能把流动相改为0.0025M甲酸硫酸是肯定不能进MS的因为这是一根离子交换柱所以如果硫酸可以的话甲酸应该也可以这根柱子倒是可以把乙醇和乙酸分开此外楼主有没有氨基柱能否试下这个条件柱子：氨基柱；流动相：乙腈-0.01%甲酸（70:30）；流速：1.0ml/min 柱温：40度因为氨基柱的氢键作用此外乙醇和乙酸的极性差的很大，所以应该能分开但是氨基柱在酸性条件下容易水解所以楼主可以测下这个流动相：乙腈-0.01%甲酸（70:30）的pH 如果低于氨基柱的最低pH 就不要尝试了

4.用HPLC纯缓冲（KH2PO4 ph3.0)液或者缓冲液配乙醇，210nm下可以测定，色谱柱用专用的有机酸色谱柱（GRACE品牌）

色谱法分类

一、胶囊色谱(Micellar Chromatography,MC) 又称拟相液相色谱或假相液相色谱(Pseudophase LC)，是一种新型的液相色谱技术。特点是应用含有高于临界胶囊浓度的表面活性剂溶液作为流动相。所谓“胶囊”就是表面活性剂溶液的浓度超过其临界胶囊浓度(Critical MicelleConcentration,CMC)时形成的分子聚合体。通常每只胶囊由n个（一般为25～160个）表面活性剂单体分子组成，其形状为球形或椭圆球形。在CMC值以上的一个较大浓度范围内，胶囊溶液的某些物理性质（如表面张力、电导等等）以及胶囊本身的大小是不变的。构成胶囊的分子单体与溶液中自由的表面活性剂的分子单体之间存在着迅速的动态平衡。通常有正相与反相两种胶囊溶液。前者是由表面活性剂溶于极性溶剂所形成的亲水端位于外侧而亲脂端位于内部的胶囊；后者是指表面活性剂溶于非极性溶剂所形成的亲水端位于核心而亲脂基位于外面的胶囊。被分离组分与胶囊的相互作用和被分离组分与一般溶剂的作用方式不同，并且被分离组分和两种胶囊的作用也有差别。改变胶囊的类型、浓度、电荷性质等对被分离组分的色谱行为、淋洗次序以及分离效果均有较大影响。胶囊色谱就是充分运用了被分离组分和胶囊之间存在的静电作用、疏水作用、增溶作用和空间位阻作用以及其综合性的协同作用可获得一般液相色谱所不能达到的分离效果。适用于化学结构类似、性质差别细微的组分的分离和分析，是一种安全、无毒、经济的优越技术。 （一）原理：胶囊溶液是一种微型非均相体系(Microheterogenous system)。在胶囊色谱中，分离组分在固定相与水之间、胶囊与水相之间以及固定相与胶囊之间存在着分配平衡。组分的洗脱得为取决于三相之间分配系数的综合作用；同时定量地指出分离组分的容量因子k’的倒数值与胶囊浓度成正比，一般增加胶囊浓度即可获得较佳的分离效果。 （二）方法特点：与传统液相色谱的最大区别在于胶囊色谱流动相是由胶囊及其周围溶剂介质组成的一种微型的非均相体系，而常规流动相是一种均相体系。特点：1、高度的选择性：因分离组分与胶囊之间存在着静电、疏水以及空间效应的综合作用，只要通过流动相中胶囊浓度的改变，就可使分离选择性获得改善和提高。此外，通过适当固定相以及表面活性剂的选择也可提高分离选择性。 2、便于梯度洗脱：由于表面活性剂的浓度高于CMC后再增大浓度时，溶液中仅胶囊的浓度发生改变，而表面活性剂单体分子的浓度不变，不影响流动相与固定相的平衡过程，因而比传统的梯度洗脱技术大大缩短了分析时间，并减少了流动相的消耗，适用于常规。 3、提高检测灵敏度：胶囊流动相可增加某些化合物的荧光强度，从而提高检测灵敏度。还可稳定某些化合物在室温条件下发生的液体磷光。 4、因分离组分不易分出，故缺点是柱效低且不适于制备分离。 （三）常用表面活性剂：常用的阳离子表面活性剂主要有：溴化或氯化十六烷基三甲铵(Cetyltrimethylammoniumbromideor chloride,CTMAD或CTMAC)；阴离子表面活性剂有十二烷基硫酸钠(SDS)；非离子表面活性剂有Brij-35即(聚氧乙烯)35-十二烷基醚。 二、手性分离色谱(ChiralSeparationChromatography,CSC) 是采用色谱技术(TLC、GC和HPLC)分离测定光学异构体药物的有效方法。由于许多药物的对映体(Enantiomer)之间在药理、毒理乃至临床性质方面存在着较大差异，有必要对某些手性药物进行对映体的纯度检查。 （一）原理和方法：对映体化合物之间除了对偏振光的偏转方向恰好相反外，其理化性质是完全相同的，因而难以分离。传统方法（分步结晶法、酶消化法等）有很大局限性，特别是难以进行微量分离和测定。60年代前后，TLC、GC法逐渐用于对映体化合物的拆分。但这两种方法只能拆分不多的化合物，且需要较复杂的样品处理步骤，制备分离也难以进行。80年代初HPLC法迅速成为药物对映体分离和测定最为广泛应用的方法。 HPLC用于手性分离概括起来可分为两大途径：间接(CDR)和直接(CMPA、CSP)方法。

高效液相色谱法简介

高效液相色谱法简介 “色谱”一词是由俄国科学家斯威特提出的。色谱法是基于补充物质在相对运动物的两相之间分布时，物理或物理化学性质的微小的差异而使混合物相互分离的一类分离或分析方法。发展与上世纪初，飞速发展于五十年代，有超过30位科学家家因为它而获得诺贝尔奖，其有自己的理论和研究方法，同时也有众多的应用领域。 色谱法常见的方法有：柱色谱法、薄层色谱法、气相色谱法、高效液相色谱法等。 柱色谱：柱色谱法是最原始的色谱方法，这种方法将固定相注入下端塞有棉花或滤纸的玻璃管中，将被样品饱和的固定相粉末摊铺在玻璃管顶端，以流动相洗脱。常见的洗脱方式有两种，一种是自上而下依靠溶剂本身的重力洗脱，一种是自下而上依靠毛细作用洗脱。收集分离后的纯净组分也有两种不同的方法，一种方法是在柱尾直接接受流出的溶液，另一种方法是烘干固定相后用机械方法分开各个色带，以合适的溶剂浸泡固定相提取组分分子。柱色谱法被广泛应用于混合物的分离，包括对有机合成产物、天然提取物以及生物大分子的分离。 薄层色谱：薄层色谱法是应用非常广泛的色谱方法，这种色谱方法将固定相图布在金属或玻璃薄板上形成薄层，用毛细管、钢笔或者其他工具将样品点染于薄板一端，之后将点样端浸入流动相中，依靠毛细作用令流动相溶剂沿薄板上行展开样品。薄层色谱法成本低廉操作简单，被用于对样品的粗测、对有机合成反应进程的检测等用途。

气相色谱：GC主要是利用物质的沸点、极性及吸附性质的差异来实现混合物的分离。待分析样品在汽化室汽化后被惰性气体（即载气，也叫流动相）带入色谱柱，柱内含有液体或固体流动相，由于样品中各组分的沸点、极性或吸附性能不同，每种组分都倾向于在流动相和固定相之间形成分配或吸附平衡。但由于载气是流动的，这种平衡实际上很难建立起来。也正是由于载气的流动，使样品组分在运动中进行反复多次的分配或吸附/解吸附，结果是在载气中浓度大的组分先流出色谱柱，而在固定相中分配浓度大的组分后流出。当组分流出色谱柱后，立即进入检测器。检测器能够将样品组分的与否转变为电信号，而电信号的大小与被测组分的量或浓度成正比。当将这些信号放大并记录下来时，就是气相色谱图了。气相色谱被广泛应用于小分子量复杂组分物质的定量分析。 高效液相色谱：高效液相色谱法是在经典色谱法的基础上，引用了气相色谱的理论，在技术上，流动相改为高压输送（最高输送压力可达4.9-107Pa）;色谱柱是以特殊的方法用小粒径的填料填充而成，从而使柱效大大高于经典液相色谱（每米塔板数可达几万或几十万）；同时柱后连有高灵敏度的检测器，可对流出物进行连续检测。高效液相色谱（HPLC）是目前应用最多的色谱分析方法，高效液相色谱系统由流动相储液体瓶、输液泵、进样器、色谱柱、检测器和记录器组成，其整体组成类似于气相色谱，但是针对其流动相为液体的特点作出很多调整。HPLC的输液泵要求输液量恒定平稳；进样系统要求进样便利切换严密；由于液体流动相粘度远远高于气体，为了减低柱压高效

高效液相色谱仪操作步骤

高效液相色谱仪操作步骤： 1)．过滤流动相，根据需要选择不同的滤膜(0.45um)。 2)．对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。 3)．打开HPLC工作站（包括计算机软件和色谱仪），连接好流动相管道，连接检测系统。 4)．进入HPLC控制界面主菜单，点击manual，进入手动菜单。 5)．有一段时间没用，或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。冲洗泵，直接在泵的出水口，用针头抽取。冲洗进样阀，需要在manual菜单下，先点击purge，再点击start，冲洗时速度不要超过10 ml/min。 6)．调节流量，初次使用新的流动相，可以先试一下压力，流速越大，压力越大，一般不要超过2000。点击injure，选用合适的流速，点击on，走基线，观察基线的情况。 7)．设计走样方法。点击file，选取select users and methods，可以选取现有的各种走样方法。若需建立一个新的方法，点击new method。选取需要的配件，包括进样阀，泵，检测器等，根据需要而不同。选完后，点击protocol。一个完整的走样方法需要包括：a.进样前的稳流，一般2-5分钟；b.基线归零；c.进样阀的loading-inject转换；d.走样时间，随不同的样品而不同。 8)．进样和进样后操作。选定走样方法，点击start。进样，所有的样品均需过滤。方法走完后，点击postrun，可记录数据和做标记等。全部样品走完后，再用上面的方法走一段基线，洗掉剩余物。 9)．关机时，先关计算机，再关液相色谱。 10)．填写登记本，由负责人签字。 注意事项： 1)．流动相均需色谱纯度，水用20M的去离子水。脱气后的流动相要小心振动尽量不引起气泡。 2)．柱子是非常脆弱的，第一次做的方法，先不要让液体过柱子。 3)．所有过柱子的液体均需严格的过滤。

Agilent 1200高效液相色谱培训材料使用说明书

Agilent 1200 LC [Agilent Chemstation B.04.02 Classic (中文)] 现场培训教材 安捷伦科技有限公司 生命科学与化学分析仪器部

一、 目录 二、 培训目的 (3) 三、 培训准备 (3) 1. 仪器准备 (3) 2. 溶剂准备 (3) 四、 方法建立 (3) 1. 开机准备 (3) 2. 数据采集方法编辑 (5) 9 G1310A(单元泵) (5) 9 G1312A，G1312B XL(二元泵)/G1311A(四元泵)： (7) 9 G1313A(标准型自动进样器)，G1329A/B(自动控温自动进样器) (8) 9 G1367B/C/D(高性能自动进样器) (9) 9 G1328A(手动进样器) (11) 9 G1316A,G1316B XL(柱温箱) (11) 9 G1314A/B/D/E,G1314C XL(可变波长紫外检测器) (13) 9 G1315B/D ,G1315C XL(二极管阵列检测器)/ G1365B/D ,G1365C XL(多波长紫外检 测器) (15) 9 G1362A(示差检测器) (17) 9 G1321A(荧光检测器) (19) 9 G4218A(蒸发光散射检测器) (23) 3. 数据分析方法编辑 (25) 9 谱图优化 (25) 9 积分参数优化 (25) 9 校正 (27) 9 打印报告 (28) 9 光谱 (29) 4. 建立全新完整方法向导 (31) 9 新建完整方法： (32) 9 保存方法： (36)

9 保存即时改变的方法 (36) 9 调用方法： (36) 5. 进样 (36) 9 单针进样 (36) 9 序列进样 (37) 五、 关机 (37) 1. 关闭检测器的灯 (41) 2. 冲洗系统 (41) 3. 封存色谱柱 (41) 4. 关闭电脑 (41) 5. 关闭模块 (41) 六、 RRLC(快速液相)注意事项 (41) 七、 Agilent 1200保养维护 (43) 八、 Agilent 1200常见问题解决方法 (45)

色谱法的分类及其原理

色谱法的分类及其原理 （一）按两相状态 气相色谱法:1、气固色谱法 2、气液色谱法 液相色谱法:1、液固色谱法 2、液液色谱法 （二）按固定相的几何形式 1、柱色谱法(column chromatography) ：柱色谱法是将固定相装在一金属或玻璃柱中或是将固定相附着在毛细管内壁上做成色谱柱，试样从柱头到柱尾沿一个方向移动而进行分离的色谱法 2、纸色谱法（paper chromatography）：纸色谱法是利用滤纸作固定液的载体，把试样点在滤纸上，然后用溶剂展开，各组分在滤纸的不同位置以斑点形式显现，根据滤纸上斑点位置及大小进行定性和定量分析。 3、薄层色谱法(thin-layer chromatography, TLC) ：薄层色谱法是将适当粒度的吸附剂作为固定相涂布在平板上形成薄层，然后用与纸色谱法类似的方法操作以达到分离目的。 （三）按分离原理 按色谱法分离所依据的物理或物理化学性质的不同，又可将其分为：

1、吸附色谱法：利用吸附剂表面对不同组分物理吸附性能的差别而使之分离的色谱法称为吸附色谱法。适于分离不同种类的化合物（例如，分离醇类与芳香烃）。 2、分配色谱法：利用固定液对不同组分分配性能的差别而使之分离的色谱法称为分配色谱法。 3、离子交换色谱法：利用离子交换原理和液相色谱技术的结合来测定溶液中阳离子和阴离子的一种分离分析方法，利用被分离组分与固定相之间发生离子交换的能力差异来实现分离。离子交换色谱主要是用来分离离子或可离解的化合物。它不仅广泛地应用于无机离子的分离，而且广泛地应用于有机和生物物质，如氨基酸、核酸、蛋白质等的分离。 4、尺寸排阻色谱法：是按分子大小顺序进行分离的一种色谱方法，体积大的分子不能渗透到凝胶孔穴中去而被排阻，较早的淋洗出来；中等体积的分子部分渗透；小分子可完全渗透入内，最后洗出色谱柱。这样，样品分子基本按其分子大小先后排阻，从柱中流出。被广泛应用于大分子分级，即用来分析大分子物质相对分子质量的分布。 5、亲和色谱法：相互间具有高度特异亲和性的二种物质之一作为固定相，利用与固定相不同程度的亲和性，使成分与杂质分离的色谱法。例如利用酶与基质（或抑制剂）、抗原与抗体，激素与受体、外源凝集素与多糖类及核酸的碱基对等之间的专一的相互作用，使相互作用物质之一方与不溶性担体形成共价结合化合物，

Agilent-1100高效液相色谱工作站基本操作说明

Agilent 1100型HPLC操作规程 一、开机 1、开机前准备：流动相使用前必须过0.45um的滤膜（有机相的流动相必须为色谱纯；水相必须用新鲜注射用水，不能使用超过3天的注射用水，以防止长菌或长藻类）；把流动相放入溶剂瓶中。A瓶：为水相；B瓶：为有机相。 2、打开电脑，选Windows 2000，进入Windows 2000界面。 3、双击CAG Boodp server图标，放大CAG Boodp server小图标，出现窗口，5分钟内打开液相各部件电源开关，等待1100广播信息后，表示通讯成功连接，关闭CAG Boodp server窗口。 4、双击online图标，仪器自检，进入工作站。 该页面主要由以下几部分组成： ——最上方为命令栏，依次为File，Run Control，Instrumen…等； ——命令栏下方为快捷操作图标，如多个样品连续进行分析、单个样品进样分析、调用文件保存文件……等； ——中部为工作站各部件的工作流程示意图；依次为进样器-输液泵-柱温箱-检测器-数据处理-报告； ——中下部为动态监测信号； ——右下部为色谱工作参数：进样体积、流速、分析停止时间、流动相比例、柱温、检测波长等。 4、从“View”菜单中选择“Method and Control”画面。 二、编辑参数及方法 1、开始编辑完整方法：从“Method”菜单中选择“New method”，出现DEF-LC.M，从“Method”菜单中选择“Edit entire method”，选择方法信息、仪器参数及收集参数、数据分析参数和运行时间表等各项，单击“OK”，进入下一画面。 2、方法信息：在“Method Comments”中加入方法的信息，如方法的用途等。单击OK，进入下一画面。 3、泵参数设定：进入“Setup pump”画面，在“Flow”处输入流量，如1ml/min；在“Solvent B”处输入有机相的比例如70.0，（A=100-B），也可在Insert 一行“Timetable”，

(完整word版)高效液相色谱试题

高效液相色谱试题 部门姓名得分 一、选择题 1.在液相色谱法中，按分离原理分类，液固色谱法属于（） A.分配色谱法B排阻色谱法 C.离子交换色谱法 D.吸附色谱法 2.在高效液相色谱流程中，试样混合物在（）中被分离。 A. 检测器 B. 记录器 C.色谱柱 D. 进样器 3.液相色谱流动相过滤必须使用何种粒径的过滤膜？（） A.0.5μm B.0.45μm C.0.6μm D.0.55μm 4. 在高固定液含量色谱柱的情况下，为了使柱效能提高，可选用( ) A.适当提高柱温 B.增加固定液含量 C.增大载体颗粒直径 D.增加柱 5. 在液相色谱中, 为了提高分离效率, 缩短分析时间, 应采用的装置是( ) A. 高压泵 B. 梯度淋洗 C. 贮液器 D. 加温 6. 下列用于高效液相色谱的检测器，（）检测器不能使用梯度洗脱。 A. 紫外检测器 B. 荧光检测器 C. 蒸发光散射检测器 D. 示差折光检测器 7. 在高效液相色谱中, 色谱柱的长度一般在( )范围内。 A.10-30cm B.20-50cm C.1-2cm D.2-5cm 8. 在液相色谱中, 为了获得较高柱效能, 常用的色谱柱是( ) A.直形填充柱 B.毛细管柱 C.Ｕ形柱 D.螺旋形柱 9. 纸色谱的分离原理, 与下列哪种方法相似？( ) A.毛细管扩散作用 B.萃取分离 C.液-液离子交换 D.液-固吸附 10.高效液相色谱仪与气相色谱仪比较增加了（） A.恒温箱 B.进样装置 C.程序升温 D.梯度淋洗装置 二、填空题

1. 高效液相色谱仪一般由、、、 、五部分组成。 2. 流动相使用前必须先。 3. 系统适用性试验包括、、、四个指标。 4.梯度洗脱有两种实现方式：、。 三、名词解释 1. 分离度： 2. 保留时间： 四、简答题 1.在液相色谱中，色谱柱能在室温下工作，不需恒温的原因是什么？ 2.简述提高分离度的几种途径？

高效液相色谱法(HPLC)的概述

此帖与GC版的对应，是为了让大家更好的学习和了解LC 主要内容包括： 1.高效液相色谱法（HPLC）的概述 2. 高效液相色谱基础知识介绍（1——13楼） 3. 高压液相色谱HPLC发展概况、特点与分类 4. 液相色谱的适用性 5.应用 高效液相色谱法（HPLC）的概述 以高压液体为流动相的液相色谱分析法称高效液相色谱法（HPLC）。其基本方法是用高压泵将具有一定极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂泵入装有填充剂的色谱柱，经进样阀注入的样品被流动相带入色谱柱内进行分离后依次进入检测器，由记录仪、积分仪或数据处理系统记录色信号或进行数据处理而得到分析结果。 由于高效液相色谱法具有分离效能高、选择性好、灵敏度高、分析速度快、适用范围广（样品不需气化，只需制成溶液即可）、色谱柱可反复使用的特点，在《中国药典》中有5 0种中成药的定量分析采用该法，已成为中药制剂含量测定最常用的分析方法。 高效液相色谱法按固定相不同可分为液-液色谱法和液-固色谱法；按色谱原理不同可分为分配色谱法（液-液色谱）和吸附色谱法（液-固色谱）等。 目前，化学键合相色谱应用最为广泛，它是在液－液色谱法的基础上发展起来的。将固定液的官能团键合在载体上，形成的固定相称为化学键合相，不易流失是其特点，一般认为有分配与吸附两种功能，常以分配作用为主。C18（ODS）为最常使用的化学键合相。 根据固定相与流动相极性的不同，液-液色谱法又可分为正相色谱法和反相色谱法，当流动相的极性小于固定相的极性时称正相色谱法，主要用于极性物质的分离分析；当流动相

的极性大于固定相的极性时称反相色谱法，主要用于非极性物质或中等极性物质的分离分析。 在中药制剂分析中，大多采用反相键合相色谱法。 系统组成： （一）高压输液系统 由贮液罐、脱气装置、高压输液泵、过滤器、梯度洗脱装置等组成。 1.贮液罐 由玻璃、不锈钢或氟塑料等耐腐蚀材料制成。贮液罐的放置位置要高于泵体，以保持输液静压差，使用过程应密闭，以防止因蒸发引起流动相组成改变，还可防止气体进入。2.流动相 流动相常用甲醇-水或乙腈－水为底剂的溶剂系统。 流动相在使用前必须脱气，否则很易在系统的低压部分逸出气泡，气泡的出现不仅影响柱分离效率，还会影响检测器的灵敏度甚至不能正常工作。脱气的方法有加热回流法、抽真空脱气法、超声脱气法和在线真空脱气法等。 3.高压输液泵 是高效液相色谱仪的关键部件之一，用以完成流动相的输送任务。对泵的要求是：耐腐蚀、耐高压、无脉冲、输出流量范围宽、流速恒定，且泵体易于清洗和维修。高压输液泵可分为恒压泵和恒流泵两类，常使用恒流泵（其压力随系统阻力改变而流量不变）。 （二）进样系统 常用六通阀进样器进样，进样量由定量环确定。操作时先将进样器手柄置于采样位置（L OAD），此时进样口只与定量环接通，处于常压状态，用微量注射器（体积应大于定量环体积）注入样品溶液，样品停留在定量环中。然后转动手柄至进样位置（INJECT），使定量环接入输液管路，样品由高压流动相带入色谱柱中。 （三）色谱柱 由柱管和填充剂组成。柱管多用不锈钢制成。柱内填充剂有硅胶和化学键合固定相。在化学键合固定相中有十八烷基硅烷键合硅胶（又称ODS柱或C18柱）、辛烷基硅烷键合硅

高效液相色谱习题及参考答案.

高效液相色谱习题及参考答案 一、单项选择题 1.在液相色谱法中，按分离原理分类，液固色谱法属于（）。 A、分配色谱法 B、排阻色谱法 C、离子交换色谱法 D、吸附色谱法2.在高效液相色谱流程中，试样混合物在（）中被分离。 A、检测器 B、记录器 C、色谱柱 D、进样器 3.液相色谱流动相过滤必须使用何种粒径的过滤膜？ A、0.5μm B、0.45μm C、0.6μm D、0.55μm 4.在液相色谱中，为了改变色谱柱的选择性，可以进行如下哪些操作？ A、改变流动相的种类或柱子 B、改变固定相的种类或柱长 C、改变固定相的种类和流动相的种类 D、改变填料的粒度和柱长 5.一般评价烷基键合相色谱柱时所用的流动相为（） A、甲醇/水（83/17） B、甲醇/水（57/43） C、正庚烷/异丙醇（93/7） D、乙腈/水（1.5/98.5） 6.下列用于高效液相色谱的检测器，（）检测器不能使用梯度洗脱。 A、紫外检测器 B、荧光检测器 C、蒸发光散射检测器 D、示差折光检测器 7.在高效液相色谱中，色谱柱的长度一般在（）范围内。 A、10～30cm B、20～50m C、1～2m D、2～5m 8.在液相色谱中,某组分的保留值大小实际反映了哪些部分的分子间作用力（） A、组分与流动相 B、组分与固定相 C、组分与流动相和固定相 D、组分与组分

9.在液相色谱中，为了改变柱子的选择性，可以进行（）的操作 A、改变柱长 B、改变填料粒度 C、改变流动相或固定相种类 D、改变流动相的流速 10.液相色谱中通用型检测器是（） A、紫外吸收检测器 B、示差折光检测器 C、热导池检测器 D、氢焰检测器 11.在环保分析中，常常要监测水中多环芳烃，如用高效液相色谱分析，应选用下述哪种检波器 A、荧光检测器 B、示差折光检测器 C、电导检测器 D、紫外吸收检测器 12.在液相色谱法中，提高柱效最有效的途径是（） A、提高柱温 B、降低板高 C、降低流动相流速 D、减小填料粒度 13.在液相色谱中，不会显著影响分离效果的是（） A、改变固定相种类 B、改变流动相流速 C、改变流动相配比 D、改变流动相种类 14.不是高液相色谱仪中的检测器是（） A、紫外吸收检测器 B、红外检测器 C、差示折光检测 D、电导检测器 15.高效液相色谱仪与气相色谱仪比较增加了（） A、恒温箱 B、进样装置 C、程序升温 D、梯度淋洗装置 16.在高效液相色谱仪中保证流动相以稳定的速度流过色谱柱的部件是（） A、贮液器 B、输液泵 C、检测器 D、温控装置 17.高效液相色谱、原子吸收分析用标准溶液的配制一般使用（）水

液相色谱de使用说明

第一部分：手性柱的使用说明及注意事项 1.流动相、进行适当稀释后的待测样品，用前均需通过0.45 μm 滤膜 过滤，然后超声脱气。 2.两次实验间隔时间较长时，在使用前，系统须排气10分钟（流速设 为5ml/ min），以冲洗管路杂质，排气结束时，将流速调为0.1 ml/min。 然后接手性柱进样一端（即有保护住一端），保持另一端断开，开泵冲洗手性柱5-10分钟，流速由低住逐步升高：0.1，0.3，0.5， 1.0ml/min。冲洗完毕后，将另一端接好，流速由低住逐步升高：0.1， 0.3，0.5，1.0ml/min。 3.打开仪器后，需设置系统参数，系统主要参数如下： 检测器：SPD(紫外分光检测)-20A 柱温：30℃（如在夏天室内气温达到该温度可不开柱温箱）； 进样流速：0.7 mL/min或1 mL/min； 检测波长：254 nm； 柱压：（新柱）压力一般为13～14MPa，最大保护柱压设为25MPa； 测试时间：进样流速为 1 mL/min 时25min，进样流速为 0.7mL/min 时30min； 进样量：2 μL。 4.测试过程中，须打开柱温箱开关，保证柱子的实际温度和设定温度 相同。测样过程中，如发现同样物质的峰，两次出峰时间不一致，可能是柱子出问题了，须联系柱子厂家来解决。 5.测试过程中需更换流动相时，应先把泵流速调为0 mL/min，更换后，

流速调为0.2 mL/min，排气2次，再进样。 6.样品测试结束后，需用流动相继续冲洗柱子30至60min。取出柱子 时应保证其内部充满流动相，以便长期保存，切忌空柱子存放。7.测试范围：各种具有旋光异构体的有机酸类物质。 备注：测L、D-乳酸的流动相为2 mmol/L CuSO4溶液（溶剂为5 %的异丙醇溶液），使用前经0.45 μm滤膜过滤。溶液配制，称取CuSO4〃5H2O 0.49936 g，加50 mL双蒸水溶解，转移置1000 mL的容量瓶中，加 入50 mL的色谱纯异丙醇，再用双蒸水定容至1000 mL,用0.45 μm 孔径的合成纤维素酯膜进行真空超滤，超声波脱气。 第二部分：糖柱的使用及注意事项 1、流动相一般为选哇哈哈纯净水进行超声脱气后，备用（如有特别要求选用其他溶剂做流动相，则要考虑是否过膜）；进行适当稀释后的待测样品，用前需通过0.45 μm 滤膜过滤。 2、在使用前，系统先排气10分钟（流速设为﹤1ml/ min），以冲洗管路杂质，排气结束后，将流速调为0.4～0.5 ml/min。然后接糖柱进样一端（即有保护住一端），保持另一端断开，开泵冲洗手性柱5分钟。冲洗完毕后，将另一端接好，流速由低住逐步升高：0.1，0.3，0.5，0.6ml/min。在柱温达到设定的80℃后，冲洗半小时，如基线已平，即可进样。 打开仪器后，需设置系统参数，系统主要参数如下： 检测器：RID-10A（示差检测器） 柱温：80℃； 柱压：新柱压力一般为2～3MPa，最大保护柱压设为4MPa；

高效液相色谱法的分类及原理

高效液相色谱法的分类及其分离原理 高效液相色谱法分为：液-固色谱法、液-液色谱法、离子交换色谱法、凝胶色谱法。 1.液-固色谱法（液-固吸附色谱法） 固定相是固体吸附剂，它是根据物质在固定相上的吸附作用不同来进行分配的。 ①液-固色谱法的作用机制 吸附剂：一些多孔的固体颗粒物质，其表面常存在分散的吸附中心点。 流动相中的溶质分子X（液相）被流动相S带入色谱柱后，在随载液流动的过程中，发生如下交换反应： X（液相）+nS（吸附）<==>X（吸附）+nS（液相） 其作用机制是溶质分子X（液相）和溶剂分子S（液相）对吸附剂活性表面的竞争吸附。 吸附反应的平衡常数K为： K值较小：溶剂分子吸附力很强，被吸附的溶质分子很少，先流出色谱柱。 K值较大：表示该组分分子的吸附能力较强，后流出色谱柱。 发生在吸附剂表面上的吸附-解吸平衡，就是液-固色谱分离的基础。 ②液-固色谱法的吸附剂和流动相 常用的液-固色谱吸附剂：薄膜型硅胶、全多孔型硅胶、薄膜型氧化铝、全多孔型氧化铝、分子筛、聚酰胺等。 一般规律：对于固定相而言，非极性分子与极性吸附剂（如硅胶、氧化铜）之间的作用力很弱，分配比k较小，保留时间较短；但极性分子与极性吸附剂之间的作用力很强，分配比k大，保留时间长。 对流动相的基本要求： 试样要能够溶于流动相中 流动相粘度较小 流动相不能影响试样的检测 常用的流动相：甲醇、乙醚、苯、乙腈、乙酸乙酯、吡啶等。 ③液-固色谱法的应用 常用于分离极性不同的化合物、含有不同类型或不；数量官能团的有机化合物，以及有机化合物的不同的异构体；但液-固色谱法不宜用于分离同系物，因为液-固色谱对不同相对分子质量的同系物选择性不高。 2.液-液色谱法（液-液分配色谱法） 将液体固定液涂渍在担体上作为固定相。 ①液-液色谱法的作用机制 溶质在两相间进行分配时，在固定液中溶解度较小的组分较难进入固定液，在色谱柱中向前迁移速度较快；在固定液中溶解度较大的组分容易进入固定液，在色谱柱中向前迁移速度较慢，从而达到分离的目的。 液-液色谱法与液-液萃取法的基本原理相同，均服从分配定律：K=C固/C液 K值大的组分，保留时间长，后流出色谱柱。 ②正相色谱和反相色谱 正相分配色谱用极性物质作固定相，非极性溶剂（如苯、正己烷等）作流动相。 反相分配色谱用非极性物质作固定相，极性溶剂（如水、甲醇、己腈等）作流动相。

高效液相色谱法的计算方法

高效液相色谱法的计算方法 高效液相色谱法是用高压输液泵将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱,经进样阀注入供试品，由流动相带入柱内，在柱内各成分被分离后，依次进入检测器，色谱信号由记录仪或积分仪记录。 1、对仪器的一般要求 所用的仪器为高效液相色谱仪。色谱柱的填料和流动相的组分应按各品种项下的规定。常用的色谱柱填料有硅胶和化学键合硅胶。后者以十八烷基硅烷键合硅胶最为常用，辛基键合硅胶次之，氰基或氨基键合硅胶也有使用；离子交换填料，用于离子交换色谱;凝胶或玻璃微球等,用于分子排阻色谱等。注样量一般为数微升。除另有规定外,柱温为室温，检测器为紫外吸收检测器。 在用紫外吸收检测器时，所用流动相应符合紫外分光光度法(附录ⅣA)项下对溶剂的要求。 正文中各品种项下规定的条件除固定相种类、流动相组分、检测器类型不得任意改变外,其余如色谱柱内径、长度、固定相牌号、载体粒度、流动相流速、混合流动相各组分的比例、柱温、进样量、检测器的灵敏度等,均可适当改变，以适应具体品种并达到系统适用性试验的要求。一般色谱图约于20分钟内记录完毕。 2、系统适用性试验 按各品种项下要求对仪器进行适用性试验,即用规定的对照品对仪器进行试验和调整,应达到规定的要求；或规定分析状态下色谱柱的最小理论板数、分离度和拖尾因子。 (1)色谱柱的理论板数（N,用于定量表示色谱柱的分离效率，简称柱效)。 在选定的条件下,注入供试品溶液或各品种项下规定的内标物质溶液,记录色谱图,量出供试品主成分或内标物质峰的保留时间ｔR（以分钟或长度计，下同,但应取相同单位）和半高峰宽(W h/2),按n=5.5４(t R/Wｈ/2)2计算色谱柱的理论板数,如果测得理论板数低于各品种项下规定的最小理论板数,应改变色谱柱的某些条件(如柱长、载体性能、色谱柱充填的优劣等),使理论板数达到要求。 （2) 分离度（R)

高效液相色谱仪简介

高效液相色谱仪简介 系统组成、工作原理 高效液相色谱仪的系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。储液器中的流动相被高压泵打入系统,样品溶液经进样器进入流动相,被流动相载入色谱柱(固定相) 内, 由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数, 在两相中作相对运动时, 经过反复多次的吸附- 解吸的分配过程, 各组分在移动速度上产生较大的差别, 被分离成单个组分依次从柱内流出, 通过检测器时, 样品浓度被转换成电信号传送到记录仪,数据以图谱形式打印出来。 高效液相色谱 （high performance liquid chromatography, HPLC）也叫高压液相色谱（high pressure liquid chromatography）、高速液相色谱（high speed liquid chromatography）、高分离度液相色谱（high resolution liquid chromatography）等。是在经典液相色谱法的基础上，于60年代后期引入了气相色谱理论而迅速发展起来的。它与经典液相色谱法的区别是填料颗粒小而均匀，小颗粒具有高柱效，但会引起高阻力，需用高压输送流动相，故又称高压液相色谱。又因分析速度快而称为高速液相色谱。 高效液相色谱是目前应用最多的色谱分析方法，高效液相色谱系统由流动相储液体瓶、输液泵、进样器、色谱柱、检测器和记录器组成，其整体组成类似于气相色谱，但是针对其流动相为液体的特点作出很多调整。HPLC的输液泵要求输液量恒定平稳；进样系统要求进样便利切换严密；由于液体流动相粘度远远高于气体，为了减低柱压高效液相色谱的色谱柱一般比较粗，长度也远小于气相色谱柱。HPLC应用非常广泛，几乎遍及定量定性分析的各个领域。 使用高效液相色谱时，液体待检测物被注入色谱柱，通过压力在固定相中移动，由于被测物种不同物质与固定相的相互作用不同，不同的物质顺序离开色谱柱，通过检测器得到不同的峰信号，最后通过分析比对这些信号来判断待侧物所含有的物质。高效液相色谱作为一种重要的分析方法，广泛的应用于化学和生化分析中。高效液相色谱从原理上与经典的液相色谱没有本质的差别，它的特点是采用了高压输液泵、高灵敏度检测器和高效微粒固定相，适于分析高沸点不易挥发、分子量大、不同极性的有机化合物。 发展历史

色谱技术简介

色谱技术简介 发布者：杭州科晓化工仪器设备有限公司发布时间：2007年1月30日 Audo look6.0下载引言 色谱法是1906年俄国植物学家Michael Tswett将含有有色的植物叶子色素和溶液通过装填有白垩粒子吸附剂的柱子，企图分离它们时而发现并命名的。各种色素以不同的速率通过柱子，从而彼此分开。分离开的色素形成不同的 色带而易于区分，由此得名为色谱法（Chromatography），又称层析法。其后的一个重大进展是1941年Martin和Synge 发现了液－液（分配）色谱法[Liquid-Lipuid（partition）Chromatography，简称LIC]。他们用覆盖于吸附剂表面的并与流动相不混溶的固定液来代替以前仅有的固体吸附剂。试样组分按照其溶解在两相之间分配。Martin和Synge 因为这一工作而荣获1952 年诺贝尔化学奖。在使用柱色谱的早期年代，可靠地鉴定小量的被分离物质是困难的，所以研究发展了纸色谱法（Paper Chromatography，简称PC）。在这种“平面的”技术中，分离主要是通过滤纸上的分配来实现的。然后由于充分考虑了平面色谱法的优点而发展了薄层色谱法（Thin-Layer Chromatography，简称TLC），在这种方法中，分离系在涂布于玻璃板或某些坚硬材料上的薄层吸附剂上进行。 在Stah－l于1958年进行了经典性的工作将技术和所用材料加以标准化之后， 薄层色谱法方赢得了声誉。为了帮助提高纸色谱法或薄层色谱法对离子化合物的分离效率，可以向纸或板施加电场。这种改进了方法分别称作纸上电泳或薄层电泳。 新近发展起来的色谱法 气相色谱法是Martin和James于1952 年首先描述的，现已成为所有色谱法中最高级和最广泛使用的一种方法，它特别适用于气体混合物或挥发性液体和固体，即便对于很复杂的混合物，其分离时间也仅为几分钟左右，这已属司 空见惯。高分辩率、分析迅速和检测灵敏等几种优点之综合使气相色谱法成了几乎每个化学实验室要采用的一种常规 方法。近年来，因为新型液相色谱仪和新型柱填料的发展以及对色谱理论的更深入了解，又重新引起对密闭柱液相色 谱法的兴趣。高效液相色谱法（High-Performance Liquid Chromatography，简称HPLC）迅速成为与气相色谱法一样广泛使用的方法，对于迅速分离非挥发性的或热不稳定的试样来说，高效液相色谱法常常是更可取的。 色谱法分类 色谱法有多种类型，也有多种分类方法。 （一）按两相所处的状态分类 液体作为流动相，称为“液相色谱”（liquid chromatograp-hy）；用气体作为流动相，称为“气相色谱”（gas chromatogr-aphy）。固定相也有两种状态，以固体吸附剂作为固定相和以附载在固体上的液体作为固定相，所 以层析法按两相所处的状态可以分为： 液－固色谱（liquid-solid chromatography） 液－液色谱（liquid-liquid chromatography）

高效液相色谱操作手册

转 HP1100高效液相色谱使用说明书注意事项: 1使用前，应申明样品名称和特性以及使用的流动相。 2更换色谱柱应由中级仪器实验室完成。 3溶剂必须经微孔滤膜过滤，所有废弃物(溶液等)请带走自行处理。 4不得在计算机上进行与实验无关的操作。 5注意适时更换废液收集瓶，防止废液溢出。 6认真登记实验记录。 7相关论文发表后，应送一份复印件给中级仪器实验室。 北京大学化学学院中级仪器实验室 一、概述 HPLC1100系统构成如下： 1 流动相A B C D 2 真空脱气装置3、6、9、11 电缆 4 输液泵 5 自动进样器（无）7 柱温箱8 检测器（DAD） 10 数据接收处理控制系统（计算机）12 打印机13 手动进样器 1．指示灯状态 每个部件接通电源后，LED灯显示绿色； 黄色Not Ready 绿色Run 红色Error 2．四元泵系统的工作原理图

3．柱温箱的特征 ●可以在低于室温10℃至80℃间恒温 ●空间大，可以容纳三根30cm长的柱子 ●安装柱识别可以记录进样次数 ●两个单独的加热区 ●可以程序升温 4．检测器 HP1100高效液相色谱仪配置的单光路二极管阵列检测器的光路如下所示： 光源发出的复合光经消除色差透镜系统聚焦后，照射到流通池上，透射光经全息凹面衍射光栅色散后，投射到一个由1024个二极管组成的二极管阵列上而被检测。此光路系统中光闸是唯一的运动部件，它有三个动作位置：（1）光闸将入射光束全部遮挡，以进行暗电流补偿；（2）将氧化钬滤光片插入光路，对衍射后的波长进行精确校正；（3）打开光闸使入 射光通过样品流通池照在光栅上。

HP1100系统所有控制和操作基本在计算机上完成，熟悉软件十分重要。本系统操作是基于Windows NT的多窗口多任务操作系统，要注意窗口之间可能覆盖。 根据所选色谱柱的性能，本系统可用于分子量小于2000的各种化合物的分离分析。目前中级仪器实验室仅备有ODS反相柱（可用于弱极性化合物及弱离子型化合物的分析）。一般要求自备色谱柱。自备色谱柱应使用HP系列接口，大连化物所及天津Autoscience公司可提供，一般分析柱的价格在1600－2000元之间，HP进口柱价格在4000元人民币左右。 本系统可提供多达四元体系的各种梯度淋洗，但在选择溶剂时须十分小心。流动相选择对分离分析有着重要的影响。 二、开机 打开各部分电源，脱气装置、输液泵、柱温控制、检测器的指示灯变黄。 开启计算机，若有选项，选择开启Windows NT4.0。点START－PROGRAM－HPChemStation－Instl online，计算机开始与仪器联接，并打开各控制界面，此时，各单元指示灯变绿，在工具条的View中选择界面为Runcontrol。 在第一个小窗口中利用下拉菜单，选择显示界面为Method and Run Control； 在第二个小窗口中选择已设定的使用方法（若是旧用户则有记录），新用户先编辑实验方法，然后选工具栏中Method－Save Method As（具体见后）。 第三个小窗口中显示LC操作条件。 三、样品分析 1．溶剂的处理和设置 不干净的溶剂或在溶剂瓶中长菌的溶剂会阻塞溶剂过滤器，降低泵的性能。遵从下列建议可以提高性能，延长溶剂过滤器的寿命： ●使用无菌溶剂瓶避免溶剂长菌 ●用滤膜过滤溶剂去除微生物 ●每二天更换或过滤溶剂 ●避免溶剂瓶直接日照 各洗脱液应分别过滤，注意有机相和水相应使用不同的滤膜。 避免使用下列对不锈钢有腐蚀性的溶剂： ●卤化物碱金属溶液和相应的酸溶剂 ●高浓度的无机酸例如：硝酸和硫酸 ●能够形成卤素自由基或酸的卤化物试剂及其混合物 ●含有过氧化物的色谱级醚必须用氧化铝干燥剂过滤吸收氧化物 ●在有机溶剂中的有机酸溶剂 ●含有强络合剂的溶液 ●四氯化碳和异丙醇或THF混合物 溶剂的设置： 在输液泵图标上按鼠标左键，在出现的小菜单中选Setup Pump，在Solvents栏中输入A、B、C、D溶剂名称；点溶剂瓶图标，在Solvent Bottles Filling中输入A、B、 C、D各溶剂的实际体积数。点OK确定并退出。 2．设置泵的参数 点输液泵图标，选Setup Pump，出现流速控制界面。设定流速flow rate（一般ODS

几款进口液相色谱仪介绍

几款进口液相色谱仪介绍 现在国际通用的液相色谱仪有美国沃特世（Waters）液相色谱仪、美国安捷伦（Agilent）液相色谱仪、日本岛津液相色谱仪，其中液相色谱仪做得最好的是沃特世液相色谱仪。 安捷伦1200液相色谱仪（美国） 安捷伦1200系列单元系统是针对 QA/QC 应用，以及要求经济型HPLC系统具备高性能的其它应用而设计的。安捷伦1200系列单元系统为模块式设计，是理想的启动系统。它完全可以升级，可以针对今后的需求，扩展系统性能或添加自动化和检测器组件。 技术参数： 仪器使用环境及条件： 运行环境温度：4℃-55℃ 运行环境湿度：5%-95%RH 工作电压：220+5% V 主要技术指标和规格： 四元梯度泵 串联双柱塞泵，配置主动入口阀，自动柱塞清洗装置，在线真空脱气机 具有连续自动可变冲程和自动溶剂压缩因子校正功能。 流速范围：0.001～10.0mL/min, 0.001mL/min 步进 流速精密度：<0.07%RSD 或 0.02min SD 流速准确度：±1%或10uL/min 压力脉动：< 1% 操作压力： 0～400 bar 梯度组成精密度：<0.2% RSD 梯度延迟体积： 800-1100ul 自动进样器 采用高压、阀进样技术，通过微型计量泵精确控制取样体积 具有编程进样功能，具有柱前衍生、柱前样品自动稀释、自动混合等复杂进样功能。 进样范围：0.1～100ul任意体积精确进样，无需更换定量环 进样精度：<0.25%RSD pH 范围：1.0～9.5

样品容量：100位 样品残留：<0.1% 柱温箱 控温原理：半导体加热、制冷 控温范围：室温下10℃～90℃ 控温速率：室温加热至40℃，5min；40℃降温至20℃，10min 控温精度：±0.15℃ 控温准确度：±0.5℃ 柱容量：30cm×3 可编程紫外检测器 光源：氘灯 波长范围：190～600nm 实时信号：1 个实时信号 波长精度：1nm 基线噪音：±0.75×10-5AU at 254nm（1ml/min甲醇条件下） 基线漂移：3×10-4AU at 254nm（1ml/min甲醇条件下） 线性范围：>2AU 沃特世2695液相色谱仪（美国） 美国沃特世液相色谱仪的系统由四元输液泵、流动相瓶储液槽、在线真空脱气机；120位全自动进样器、自动进样器制冷装置、液相色谱仪色谱柱、二极管阵列检测器（DAD）、色谱柱柱温箱及色谱工作站几大模块组成。 技术参数： 溶剂管理系统：相互独立控制的线性双柱塞驱动装置,双压力传感器 反馈回路, 无脉动, 无需混合器和阻尼器 溶剂数：4 流速范围：0.010～10.000ml/min, 以 0.001ml/min 为增量 流速精度：0.075% RSD 流速准确度：±1.0% 延迟体积：<650μL, independent of backpressure 操作压力：0～5000psi