FastQuant cDNA第一链合成说明书
操作步骤
使用快速反转录试剂盒合成第一链cDNA 50 ng-2 μg 总RNA 可建立20 μl 反应体系。
1. 将模板RNA 在冰上解冻；5×gDNA Buffer 、FQ-RT Primer Mix 、10×Fast RT Buffer 、
RNase-Free ddH 2O 在室温（15-25℃）解冻，解冻后迅速置于冰上。使用前将每种溶液涡旋振荡混匀，简短离心以收集残留在管壁的液体。
以下操作步骤请在冰上进行。为了保证反应液配制的准确性，进行各项反应时，应先配制成Mix ，然后再分装到每个反应管中。
2. 按照表1的基因组DNA 的去除体系配制混合液，彻底混匀。简短离心，并置于42℃，孵育
3 min 。然后置于冰上放置。
表1 gDNA 去除反应体系
3. 按照表2的反转录反应体系配制混合液。
表2 反转录反应体系
4. 将反转录反应中的Mix ，加到gDNA 去除步骤的反应液中，充分混匀。
5. 42℃，孵育15 min 。
6. 95℃，孵育3 min 之后放于冰上，得到的cDNA 可用于后续实验，或低温保存。产品简介
FastQuant cDNA 第一链合成试剂盒是一种高效、快速并可以去除基因组DNA 污染的反转录系统。本试剂盒含有高效去除基因组DNA 的gDNase ；通过42℃，3 min 即可去除gDNA ，有效避免Total RNA 中基因组DNA 的干扰。本试剂盒所含的高效反转录酶FastQuant RT Enzyme ，42℃，15 min 即可完成cDNA 第一链的合成。另外，本品还具有与RNA 模板高亲合性的特点，其能通读GC 含量高，二级结构复杂的RNA 模板。
产品特点
反转录效率高：反转录效率可达90%以上；
操作简单快速：反应体系配制简单，21 min 完成cDNA 第一链的合成；通读复杂模板：能够作用于GC 含量高，二级结构复杂的RNA 模板；后续兼容性好：后续配合荧光定量检测产品，灵敏度高、稳定性好。
适用范围
RT-PCR ；荧光定量PCR
注意事项
1. 下列操作步骤适用于模板量为50 ng-2 μg 的总RNA ，如果总RNA 量大于2 μg ，请按比例扩
大反应体系。
2. 在冰上进行操作，防止RNA 发生降解。
3. 不需分开变性和退火两个步骤。但是对于二级结构很复杂的RNA 模板，推荐使用变性步
骤，即在操作步骤之前，将模板RNA 在65℃孵育5min 后迅速转移到冰上，进行下一步操作。
4. 根据实验需求不同，也可以选用Oligo-dT Primer 或Gene Specific Primer ，引物使用量如
下：Oligo-dT Primer 50 pmol / 20 μl 反应体系，Gene Specific Primer 5 pmol /20 μl 反应体系。
5. 使用Gene Specific Primer 时，反转录反应可设置为42℃，15 min 。当PCR 反应有非特异
性扩增时，将反转录温度升到50℃会有改善。6. 反转录体系可以根据需要相应扩大。
Order: 010-********
Toll-free: 800-990-6057 /400-810-6057TIANGEN BIOTECH (BEIJING) CO., LTD
本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床治疗、食品及化妆品等用途。
版本号: KR151125
产品内容
产品组成
KR106-01 KR106-02 (25 rxn) (100 rxn) 5×gDNA Buffer 50 μl 200 μl FQ-RT Primer Mix 50 μl 200 μl RT Enzyme Mix 25 μl 100 μl 10×Fast RT Buffer 50 μl 200 μl
RNase- Free ddH 2O
1 ml
2×1 ml
储存条件
该试剂盒使用干冰运输，-20℃可保存一年。
FastQuant RT Kit (with gDNase)FastQuant cDNA 第一链合成试剂盒
（去基因组）目录号：KR106
对RNA 模板的要求
逆转录酶以RNA 为模板合成第一链cDNA ，模板RNA 的质量和数量直接影响逆转录的结果。
1. 模板的完整性：模板RNA 的完整性对逆转录非常重要，若RNA 模板中含有RNase 酶将降
解模板RNA ，最后导致cDNA 产物的量少甚至无cDNA 产物。
2. 模板的纯度：若RNA 模板中含有蛋白、盐离子、EDTA 、乙醇、酚等杂质，将影响逆转录
酶的活性，最后影响逆转录结果。
3. 模板的加量：上述操作步骤适用于模板RNA 量为50 ng-2 μg ，如果模板RNA 的量大于2 μg ，
请按比例扩大反应体系。
注意
1. 若后续实验为实时荧光定量PCR ，逆转录产物的加量应不超过PCR 体系终体积的1/10，
例如50 μl 的PCR 反应体系，逆转录产物的加量应不超过5 μl 。
2. 将逆转录产物置于冰上，再进行后续PCR 反应；如果需要长时间保存，请置于-20℃。