sanger测序法

N-末端氨基酸分析

Sanger对末端肽端的分析方法：

A:N-末端衍生物、sanger试剂（DNFB）

B:二硝基苯基肽段的全部水解酸

测定哪个氨基酸组成肽链N端是有用的，有两个原因：一是使个别的多肽碎片序列进入整条链有序化；二是因为第一次埃德曼降解经常会被杂质污染，所以不能给出精确的N端氨基酸序列。一个常用的N 端氨基酸分析方法如下：

1、用肽段和能选择性标记末端氨基酸的试剂反应

2、水解蛋白质

3、用层析法和与标准对比的方法测定氨基酸序列

有许多试剂可以用来标记末端氨基酸。它们都能和氨基反应，所以也能和氨基酸侧链上的氨基结合，比如赖氨酸-----因为这个原因在解释色谱图时有必要小心，确保选择了正确的点。两种更常用的试剂是Sanger试剂（1-氟-2,4-二硝基苯）和丹酰衍生物如丹磺酰氯。异硫

氰酸苯酯，埃德曼降解的试剂，也能用在此法中。同样的问题出现了，就像测定氨基酸混合物时一样。无需染色是一种例外，因为反应物产生了有颜色的衍生物，只需定性分析。所以氨基酸无需从层析柱上洗脱下来，仅仅和标准比较一下就行。另外一个要考虑的问题是，因为任何氨基都会和标记物反应，所以不能用离子交换色谱法，而应该用薄层色谱法或是高效液相色谱法。

（附：埃德曼降解：瑞典科学家埃德曼(P. Edman)创立的连续测定蛋白质或肽链N端氨基酸残基序列的经典方法。用异硫氰酸苯酯(PTH)等与多肽反应，逐个水解N端氨基酸残基，依次生成各种PTH-氨基酸，层析鉴定PTH-氨基酸就可从N端逐个确定被测肽段的氨基酸残

基排列顺序。）