Science-2015-Winter-1376-81 Brd4 Hajacking
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ACKNOWLEDGMENTS
We thank J.Whetstine for ChIP advice,A.Schier and S.von Stetina for comments,and G.Marnellos and M.Clamp for informatics.Some strains were obtained from the Caenorhabditis Genetics Center (CGC),funded by NIHP40OD010440.S.E.M.received
support from the MacArthur Foundation and grant NIHR37GM056264,E.L.received support from grant NSFMCB-1413134,and K.S.Z.
received support from grant NIHR37GM36477.Sequencing data are accessible from the National Center for Biotechnology Information Gene Expression Omnibus:GSM1666978R1.CE.8E.ChIP GSM1666979,R1.CE.8E.Input GSM1666980,R2.CE.8E.ChIP GSM1666981,R2.CE.8E.Input GSM1666982,R1.CE.BE.ChIP GSM1666983,and R1.CE.BE.Input.
SUPPLEMENTARY MATERIALS
https://www.wendangku.net/doc/e213002796.html,/content/348/6241/1372/suppl/DC1Materials and Methods Supplementary Text Figs.S1to S7Tables S1to S3References
13March 2015;accepted 12May 201510.1126/science.aab1223
1950s.Among the most notable was thalid-omide,developed initially as a sedative but infamously withdrawn from human use ow-ing to catastrophic teratogenicity (1).More recently,the phthalimides have been successfully repurposed for erythema nodosum leprosum,multiple myeloma (MM),and myelodyspasia.The efficacy of thalidomide,lenalidomide,and pomali-domide in MM (Fig.1A)has prompted investigation into the mechanism of action of phthalimide im-munomodulatory drugs (IMiDs).By ligand-affinity chromatography,cereblon (CRBN)—a component of a cullin-RING ubiquitin ligase (CRL)complex —was identified as the target of thalidomide (2).Recently,our group and others reported that phthalimides prompt CRBN-dependent protea-somal degradation of transcription factors (TFs)IKZF1and IKZF3(3,4).Crystallographic studies now establish that IMiDs bind CRBN to form a cryptic interface that promotes recruitment of IKZF1and IKZF3(5).
Ligand-induced target protein destabilization has proven to be an efficacious therapeutic strategy,in particular for cancer,as illustrated by arsenic trioxide –mediated degradation of the PML protein in acute promyelocytic leukemia (6)and estrogen receptor degradation by fulvestrant (7).Histori-cally,target-degrading compounds have emerged serendipitously or through target-specific cam-paigns in medicinal chemistry.Chemical biolo-gists have devised elegant solutions to modulate protein stability using engineered cellular systems,but these approaches have been limited to non-endogenous fusion proteins (8–11).Others have
through the recruitment of E3ligases,but these approaches have been limited by the requirement of peptidic ligands (12–14),the use of nonspecific inhibitors (15),and by low cellular potency.
RING-domain E3ubiquitin-protein ligases lack enzymatic activity and function as adaptors to E2ubiquitin-conjugating enzymes.Inspired by the retrieval of CRBN using a tethered thalidomide (2),we hypothesized that rational design of bi-functional phthalimide-conjugated ligands could confer CRBN-dependent target protein degrada-tion as chemical adapters.We selected BRD4as an exemplary target.BRD4is a transcriptional coactivator that binds to enhancer and promoter regions by recognition of acetylated lysines on his-tone proteins and TFs (16).Recently,we developed a direct-acting inhibitor of BET bromodomains (JQ1)(17)that displaces BRD4from chromatin and leads to impaired signal transduction from TFs to RNA polymerase II (18–20).Silencing of BRD4expression by RNA interference in murine and human models of MM and acute myeloid leukemia (AML)elicited rapid transcriptional down-regulation of the MYC oncogene and a po-tent antiproliferative response (19,21).These and other studies in cancer,inflammation (22),and heart disease (23,24)establish a desirable mech-anistic and translational purpose to target BRD4for selective degradation.
Having shown that the carboxyl group on JQ1(25)and the aryl ring of thalidomide (5)can tol-erate chemical substitution,we designed the bi-functional dBET1to have preserved BRD4affinity and an inactive epimeric dBET1(R)as a stereo-chemical control (Fig.1,A and B).Selectivity pro-filing confirmed potent and BET-specific target engagement among 32bromodomains (BromoScan)(Fig.1C and tables S1and S2).A high-resolution crystal structure (1.0?)of dBET1bound to BRD4(1)confirmed the mode of molecular recogni-tion,comparable to JQ1(Fig.1D,fig.S1,and
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1
Department of Medical Oncology,Dana-Farber Cancer Institute,Boston,MA 02115,USA.2Department of Cancer Biology,Dana-Farber Cancer Institute,Boston,MA 02115,USA.3Department of Medicine,Harvard Medical School,Boston,MA 02115,USA.
*These authors contributed equally to this research.?Corresponding author:E-mail:james_bradner@https://www.wendangku.net/doc/e213002796.html,
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w w w .s c i e n c e m a g .o r g D o w n l o a d e d f r o m
table S3).Using the dBET1-BRD4(1)crystal struc-ture and the recently reported structure of CRBN bound to thalidomide (5),we have modeled the feasibility of ternary complex formation in silico.An extended conformation of dBET1was capable of bridging ordered BRD4(1)and CRBN without destructive steric interactions (Fig.1E).To exper-imentally assess the chemical adaptor function of dBET1,we established a homogeneous proxim-ity assay for recombinant human CRBN –DNA damage –binding protein 1(CRBN-DDB1)and BRD4(1)(Fig.1F).Luminescence arising from prox-imity of CRBN-DDB1-and BRD4-bound acceptor-donor beads increases with low concentrations of dBET1and decreases at higher concentrations,consistent with saturation of CRBN and BRD4binding sites by excess https://www.wendangku.net/doc/e213002796.html,petitive coin-ternary complex formation in a stereo-specific manner (Fig.1G).
To assess the effect of dBET1in cells,we treated a human AML cell line (MV4;11)for 18hours with increasing concentrations of dBET1and assayed endogenous BRD4levels by immunoblot.Pro-nounced loss of BRD4(>85%)was observed with concentrations of dBET1as low as 100nM (Fig.1H).The epimeric control dBET1(R)was inactive (Fig.1B),which demonstrated that BRD4degradation requires target protein engagement (fig.S2,A and B).The kinetics of BRD4degradation were next determined using 100nM dBET1in MV4;11cells.Marked depletion of BRD4was observed at 1hour,and complete degradation was observed at 2hours of treatment (Fig.1I).A partial recovery in BRD4abundance at 24hours establishes the pos-bility of phthalimides.To quantify dose-responsive effects on BRD4protein stability,we developed a cell-count normalized,high-content assay using adherent SUM149breast cancer cells (Fig.1J).De-pletion of BRD4was observed for dBET1[half-maximal effective dose (EC 50)=430nM]without apparent activity for dBET1(R),confirmed by immunoblot (fig.S2,C and D).Additional cul-tured adherent and nonadherent human cancer cell lines showed comparable response (SUM159,MOLM13)(fig.S3).
To explore the mechanism of dBET1-induced BRD4degradation,we studied requirements on proteasome function,BRD4binding,and CRBN binding using chemical genetic and gene-editing approaches.First,we confirmed that treatment with either JQ1or thalidomide alone was insuf-SCIENCE https://www.wendangku.net/doc/e213002796.html,
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Fig.1.Design and characterization of dBET1.(A )Chemical structure of JQ1(S),phthalimides,and dBET1.(B )Vehicle-normalized BRD4displacement by AlphaScreen (triplicate means T SD).(C )Selective displacement of phage-displayed BET s by dBET1(BromoScan at 1m M;n =1).(D )Crystal structure of dBET1bound to BRD4bromodomain 1(E )Docking of (D)into the published DDB1-CRBN structure (F )dBET1-induced ternary complex formation of re-combinant BRD4(1)and CRBN-DDB1by AlphaScreen [quadruplicate means T SD;normalized to dimethyl sulfoxide (DMSO)].(G )Competition of 111nM dBET1-induced proximity as in (F)in the presence of vehicle (DMSO),JQ1,
thal-(–),JQ1(R),means T SD,normalized (VINC)after 18centrations of of MV4;11cells normalized BRD4cells treated with 18hours.Values cells and baseline-corrected RESEARCH |REPORTS
(fig.S4A).Degradation of BRD4by dBET1was rescued by the proteasome inhibitor carfilzomib,which established a requirement for proteasome function (Fig.2A).Pretreatment with excess JQ1or thalidomide abolished dBET1-induced BRD4degradation,consistent with a requirement for both BRD4and CRBN engagement (Fig.2A).Pretreatment with the NAE1inhibitor MLN4924(26)rescued BRD4stability and established its de-pendence on CRL activity,as expected for cullin-based ubiquitin ligases that require neddylation for processive E3ligase activity (4,27)(fig.S4B).Finally,to definitively confirm the cellular require-ment for CRBN,we used a previously published CRBN-deficient human MM cell line (MM1.S-CRBN ?/?)(4).Whereas treatment of wild-type MM1.S WT cells with dBET1promoted degrada-tion of BRD4,exposure of MM1.S-CRBN ?/?cells to dBET1was ineffectual (Fig.2B).These data pro-vide mechanistic evidence for CRBN-dependent proteasomal degradation of BRD4by dBET1.To assess the feasibility of extending this strategy to other protein targets,we designed and syn-thesized phthalimide-conjugated ligands to the cytosolic signaling protein FKBP12(FKBP1A).FKBP12has been extensively studied in the chemical biology literature,which includes studies of engineered target degradation and a growing literature on chemical dimerizers.At a known per-missive site on the FKBP12-directed ligand steel to create the conjugated phthalimides dFKBP-1and dFKBP-2(Fig.2C).Both potently decreased FKBP12abundance in MV4;11cells (Fig.2D).As with dBET1,destabilization of FKBP12by dFKBP-1was rescued by pretreatment with carfilzomib,MLN4924,free SLF,or free thalidomide (Fig.2E).We established CRBN-dependent degradation us-ing previously published isogenic 293FT cell lines that are wild type (293FT-WT)or deficient (293FT-CRBN ?/?)(4)for CRBN (Fig.2F).
An unbiased,proteome-wide approach was se-lected to assess the cellular consequences of dBET1treatment on protein abundance,in a quantitative and highly parallel format (28).We compared the immediate impact of dBET1treatment (250nM)to JQ1and vehicle controls in MV4;11cells.A 2-hour incubation was selected to capture primary,im-mediate consequences of small-molecule action and to mitigate expected,confounding effects on suppressed transactivation of BRD4target genes.We prepared three biological sample replicates for each treatment condition using isobaric tag-ging that allowed the detection of 7429proteins.After JQ1treatment,few proteomic changes were observed (Fig.3A and table S4).Only MYC was significantly depleted more than twofold after 2hours of JQ1treatment,which confirmed the reported rapid and selective effect of BET bromo-domain inhibition on MYC abundance in AML (Fig.3,A and C)(21).JQ1treatment also down-Treatment with dBET1elicited a comparable,modest effect on MYC and PIM1expression.Re-markably,only three additional proteins were identified as significantly (P <0.001)and mark-edly depleted (to one-fifth)in dBET1-treated cells:BRD2,BRD3,and BRD4(Fig.3,B and C).These findings are consistent with the anticipated,BET-specific bromodomain target spectrum of the JQ1bromodomain-biasing element on dBET1(17).The remaining BET-family member BRDT is not de-tectable in MV4;11cells.To validate these find-ings,we measured BRD2,BRD3,BRD4,MYC,and PIM1levels by immunoblot after compound treat-ment,as above.BET family members were de-graded only by dBET1,whereas MYC and PIM1abundance was decreased by both dBET1and JQ1(and to a lesser degree)(Fig.3D).No effect on Ikaros TF expression was observed in either treat-ment condition (fig.S5).MYC and PIM1are often associated with massive adjacent enhancer loci by epigenomic profiling (18,20),which suggested a transcriptional mechanism of down-regulation.We therefore measured mRNA transcript abundance for each depleted gene product (Fig.3E).Treat-ment with either JQ1or dBET1down-regulated MYC and PIM1transcription,suggestive of sec-ondary transcriptional effects.Transcription of BRD4and BRD3were unaffected,consistent with posttranscriptional effects.Note that tran-scription of BRD2was affected by JQ1and dBET1,1378
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(20m M),or thalidomide (10m M),followed by a 4-hour dFKBP-1treatment (1m M)in MV4;11cells.(F )Immunoblot for treatment of 293FT WT or 293FT CRBN ?/?cells with dFKBP12at the indicated concentrations for 18hours.
RESEARCH |REPORTS
was only influenced by dBET1,suggestive of tran-scriptional and posttranscriptional consequences.
These data establish a highly selective effect of dBET1on target protein stability,proteome-wide.We next explored the differential antiprolif-erative consequences of BET degradation with dBET1to BET bromodomain inhibition with JQ1.Degradation of BRD4by dBET1was associated with an enhanced apoptotic response in MV4;11caspase activation (Caspase-GLO)(Fig.4A),cleav-age of poly(ADP-ribose)polymerase (PARP),cleav-age of caspase-3(immunoblot)(Fig.4B),and Annexin V staining (flow cytometry)(fig.S6A).Kinetic studies revealed an apoptotic advantage for dBET1after pulsed treatment followed by washout in MV4;11cells (Fig.4,C and D).In-deed,dBET1induced a potent and superior in-hibitory effect on MV4;11cell proliferation at The rapid biochemical activity and robust apoptotic response of cultured cell lines to dBET1established the feasibility of assessing effects on primary human AML cells,where ex vivo pro-liferation is negligible in short-term cultures.Exposure of primary leukemic patient blasts to dBET1elicited dose-proportionate depletion of BRD4(Fig.4F)and improved apoptotic response compared to JQ1(Annexin V and propidium io-SCIENCE https://www.wendangku.net/doc/e213002796.html,
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these data exemplify that target degradation can elicit a more pronounced biological conse-quence than domain-specific target inhibition.To model the therapeutic opportunity of BRD4degradation in vivo,we first evaluated the tol-erability and antitumor efficacy of dBET1in a mu-rine hind-limb xenograft model of human MV4;11leukemia cells (29).As pharmacokinetic studies of dBET1indicated adequate drug exposure in vivo (fig.S7A),tumor-bearing mice were treated with dBET1administered by intraperitoneal injection (50mg/kg body weight daily,ip)or vehicle control.After 14days of therapy,a first tumor reached institutional limits for tumor size,and the study efficacy and modulation of BRD4stability and function.Administration of dBET1attenuated tu-mor progression,as determined by serial volu-metric measurement (Fig.4H),and decreased tumor weight was assessed post mortem (fig.S8A).Acute pharmacodynamic degradation of BRD4was observed by immunoblot 4hours after a first or second daily treatment with dBET1(50mg/kg ip)(Fig.4I),accompanied by down-regulation of MYC (Fig.4I).These findings were confirmed by immunohistochemistry at the conclusion of the 14-day efficacy study (Fig.4J).A statistically sig-nificant destabilization of BRD4,down-regulation of MYC,and inhibition of proliferation (Ki67with vehicle control in excised tumors (Fig.4J and fig.S8B).Notably,2weeks of dBET1was well tolerated with preservation of animal weight and normal complete blood counts (fig.S7,C and D).To compare the efficacy of BET inhibition to BET degradation,we selected an aggressive dis-seminated leukemia model (mCherry +MV4;11)and treated animals with established disease using equimolar concentrations of JQ1and dBET1for 19days.Post mortem analysis of leukemic burden in bone marrow by fluorescence-activated cell sort-ing revealed significantly decreased mCherry +dis-ease with dBET1administration (Fig.4K).
In summary,we present a mechanism-based 1380
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Fig.4.The kinetic and antileukemic advantage of BET bromodomain degradation.(A )Fold increase of apoptosis,assessed via Caspase-Glo assay relative to DMSO-treated controls,24hours of treatment in MV4;11or DHL4cells.Values represent quadruplicate means T SD.(B )Immunoblot for cleaved caspase 3,PARP cleavage,and vinculin after treatment with dBET1and JQ1for (Caspase-Glo)relative to or 8hours with JQ1or washed out with phosphate-drug-free medium for a quadruplicate means T and vinculin after Dose-proportional effect of approximated by primary patient cells with the indicated concentrations of (G )Annexin V –positive primary patient cells after 24hours either dBET1or JQ1at the indicated concentrations.Values average of duplicates and the range as error bars (representative in fig.S6).(H )T umor volume (means T SEM)of vehicle-treated mice treated with dBET1(50mg/kg;n =6)for 14days.BRD4,MYC,and vinculin (VINC)by using tumor lysates either once for 4hours or twice for 22hours and 4hours,vehicle-treated control.(J )Immunohistochemistry for BRD4,a representative tumor of a dBET1-treated and a control-treated (quantification of three independent areas in fig.S8).mCherry +leukemic cells (means T SEM)in flushed bone disseminated MV4;11xenografts after daily treatment with JQ1(n =8)(both at 63.8m mol/kg)or formulation control ***P =0.0001to 0.001;other P values as in Fig.3legend.
RESEARCH |REPORTS
degradation.Phthalimide conjugation to selec-tive small molecules produces CRBN-dependent posttranslational degradation with exquisite target-specific activity.Although this approach is CRBN-dependent,CRBN is ubiquitously expressed in physiologic and pathophysiologic tissues,which supports its broad utility in developmental and disease biology.The increased apoptotic response of primary AML cells to dBET1,even compared with the efficacious tool compound JQ1,highlights the potential superiority of BET degradation over BET bromodomain inhibition and prompts consid-eration of therapeutic development.Pharmacologic destabilization of BRD4in vivo also resulted in improved antitumor efficacy in a human leuke-mia xenograft compared with the effects of JQ1.The extension of this approach to new targets (here,FKBP12),low molecular mass,high cell per-meability,potent cellular activity,and synthetic simplicity addresses limitations associated with prior pioneering systems.We anticipate dFKBP1will also serve as a useful tool for the research community in control of fusion protein stability.A more general implication of this research is the feasibility of approaching intractable protein targets using phthalimide-conjugation of target-binding ligands that may or may not have target-specific inhibitory activity.
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ACKNOWLEDGMENTS
We thank W.Kaelin,S.Orkin,and R.Mazitschek for engaging discussions and W.Kaelin for cellular reagents;S.-H.Seo and S.Deangelo for assistance in the purification of BRD4;C.Ott for help with in vivo model studies;and N.Thoma for CRBN expression reagents.This research was supported by generous philanthropic gifts from Marc Cohen and Alain Cohen,the William Lawrence and Blanche Hughes Foundation,and the NIH (R01-CA176745and P01-CA066996to J.E.B.).G.E.W.is supported by an EMBO long-term fellowship.D.L.B.is a Merck Fellow of the Damon Runyon Cancer Research Foundation (DRG-2196-14).Atomic coordinates and structure factors have been deposited in the Protein Data Bank (accession code 4ZC9).Quantitative proteomics studies were performed by R.Kunz of the Thermo Fisher Scientific Center for Multiplexed Proteomics at Harvard Medical School.Dana-Farber Cancer Institute has filed patent applications (62/096,318;62/128,457;62/149,170)that include the dBET and dFKBP compositions described in this manuscript.J.E.B.is a Founder of Tensha Therapeutics,a
biotechnology company that develops druglike derivatives of JQ1as investigational cancer therapies.
SUPPLEMENTARY MATERIALS
https://www.wendangku.net/doc/e213002796.html,/content/348/6241/1376/suppl/DC1Materials and Methods Figs.S1to S8Tables S1to S3References (30–36)
17March 2015;accepted 6May 2015Published online 21May 2015;10.1126/science.aab1433
SCIENCE https://www.wendangku.net/doc/e213002796.html, 19JUNE 2015?VOL 348ISSUE 6241
1381
RESEARCH |REPORTS
DOI: 10.1126/science.aab1433
, 1376 (2015);
348 Science et al.
Georg E. Winter degradation
Phthalimide conjugation as a strategy for in vivo target protein
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ROSEHA安装及配置手册.
安装配置指南 (第二版) ROSE
目录 第一章绪论 windows NT 版 ROSEHA 软件 特点 灵活的配置 ROSEHA 硬件部分 ROSEHA软件示意图 第二章准备工作 资源对象的属性 设置cluster的过程 卷标 安装应用软件 第三章安装和卸载 开始安装之前 安装 ROSEHA 获得 ROSEHA 认证号 卸载 ROSEHA 第四章 ROSEHA 管理工具 预览 私有网络管理 GUI（图形化界面） 资源对象管理 GUI 菜单条 工具条 cluster 可视面板 消息面板 状态条 第三方管理工具 控制面板 文件管理 磁盘管理 事件查看 磁盘阵列管理 私有网络管理
资源对象管理 Cluster 操作 Cluster 操作参数选择 开始 cluster 操作 停止 cluster 操作 第五章私有网络管理 私有网络下拉菜单 TCP/IP socket 私有网络 RS-232 串口私有网络 公用驱动器私有网络 工具条按钮 删除私有网络 查看私有网络 私有网络和服务器状态 第六章资源对象管理 创建资源对象 服务器属性表 配置卷对象属性表 配置IP 地址对象属性表 配置共享文件对象属性表 配置LAN 管理对象属性表 配置Microsoft SQL Server 对象属性表 配置Sybase SQL server 对象属性表 配置NT 服务对象属性表 配置用户自定义对象属性表 查看资源对象 删除资源对象 绑定到 cluster 撤消绑定到 cluster 资源切换 资源接管 服务器切换 服务器接管 资源对象分类 资源对象状态
附录1 MSSQL SERVER 实例 附录2 . WWW资源层次实例 附录3 FAQ 附录4 NT Cluster 软件维护信息
微生物发酵法生产透明质酸
微生物发酵法生产透明质酸 郭学平透明质酸（hyaluronic acid, HA）,又名玻璃酸，是一种酸性黏多糖，广泛存在于脊椎动物的各种组织细胞间质中，如皮肤、脐带、关节滑液、软骨、眼玻璃体、鸡冠、鸡胚、卵细胞、血管壁等，其中以人脐带、公鸡冠、关节滑液和眼玻璃体含量较高。透明质酸价格昂贵，在日本有“白金”之称，目前的生产方法有发酵法和提取法两种。 1 透明质酸的发展 1934年美国Meyer等首先从牛眼玻璃体中分离出该物质。20世纪70年代，Balazs等从鸡冠和人脐带提取HA，并配制成眼科手术用黏弹性辅助剂—NIF-HA,开创了HA医学应用的先河。 由于HA优良的保湿和润滑性能，20世纪80年代初开始用于高档护肤化妆品，其需求量大幅度增加。受原料限制，从人脐带和鸡冠提取的HA产量低、成本高，不能满足市场需求。为了寻找HA的新来源，降低生产成本，研究了发酵法生产HA。 工业化发酵生产HA是日本资生堂最早开始研究的，他们借鉴前人对某些链球菌产生HA这一重要发现，利用现代发酵技术和设备，以提高HA产率为目的，对发酵生产HA进行了较全面地研究。80年代中期，日本已有发酵生产的HA上市，价格大大低于从动物原料提取的产品。提取法和发酵法生产HA的比较见表1。 表1 提取法和发酵法生产HA的比较
项目提取法发酵法 存在状态在原料中与蛋白质和其它多糖 形成复合体，分离精制复杂在发酵液中游离存在，分离精制容易 分子量与保湿性小于1.0×106,保湿性差大于1.5×106，保湿性强品质与产量取决于动物原料的品质与数量品质稳定，产量大 价格（化妆品用） 2.2万元/kg 1.6万元/kg 应用价格昂贵，化妆品中的添加量 受到制约 能增加化妆品中的添加量 发酵法生产HA方面的研究主要集中在日本、英国和美国也有少量报道。国内从1980年开始研究从鸡冠和人脐带提取纯化HA，在1990年前后 化妆品用HA和医药用HA先后研制成功并生产。山东省生物药物研究院（原 山东省商业科技研究所）是国内最早从事HA研究开发的单位之一，1990 年该院郭学平等在国内首先开始HA的发酵生产研究，先后完成了小试和中 试实验。发酵法生产HA的研究成功改变了我国HA生产技术的落后局面， 使我国HA的生产进入了新的发展时期。 2 化学结构及理化性质 HA是由（1→3）-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-葡萄糖-(1→4)-O-β-D-葡糖醛 酸双糖重复单位所组成的直链多聚糖，见图1。
软件系统详细设计说明书文档模板
1概述 2约定说明 3开发环境与源程序文件结构说明（所有人） 3.1 开发环境 EJB服务器： web服务器： 数据库服务器：sql server 2000 客户端配置： 开发工具： 3.2 源代码文件结构 3.2.1源文件说明
3.2.2源程序类文件 3.2.3图片文件 3.2.4系统配置文件 4系统管理模块详细设计说明（邱亚斌）4.1 系统登陆设计 4.2 组织机构管理 4.3 初始信息维护 4.4 日志管理 5行政办公模块详细设计说明（邱亚斌）5.1 收文管理 5.2 发文管理 5.3 考勤管理 5.4 常用电话号码簿 6业务管理模块详细设计说明 6.1 通知公告（邱亚斌）
6.2.1功能设计说明 6.2.2业务及数据流程图 6.2.3Xx模块源程序设计 6.2.3.1 J AVABEAN设计 6.2.3.2 J SP页面设计 6.2.3.3 S ERVLET设计 6.2.3.4 其他设计 6.2.4Xx模块数据库功能设计6.2.4.1 数据库关系图 6.2.4.2 数据表结构的设计：
6.3.1功能设计说明 6.3.2业务及数据流程图 6.3.3Xx模块源程序设计 6.3.3.1 J AVABEAN设计 6.3.3.2 J SP页面设计 6.3.3.3 S ERVLET设计 6.3.3.4 其他设计 6.3.4Xx模块数据库功能设计6.3.4.1 数据库关系图 6.3.4.2 数据表结构的设计：
6.4.1功能设计说明 6.4.2业务及数据流程图 6.4.3Xx模块源程序设计 6.4.3.1 J AVABEAN设计 6.4.3.2 J SP页面设计 6.4.3.3 S ERVLET设计 6.4.3.4 其他设计 6.4.4Xx模块数据库功能设计6.4.4.1 数据库关系图 6.4.4.2 数据表结构的设计：
联合透明质酸修护生物膜治疗婴幼儿湿疹观察-现代临床医学
2018年4月第44卷 第2期 现 代 临 床 医 学 JOURNAL OF MODERN CLINICAL MEDICINE Apr.2018Vol.44 No.2 E?mail:990110405@https://www.wendangku.net/doc/e213002796.html, 联合透明质酸修护生物膜治疗婴幼儿湿疹观察 吕欣桐 (成都大学附属医院皮肤性病科,四川成都 610081) 【摘要】目的:研究丁酸氢化可的松乳膏联合透明质酸修护生物膜治疗婴幼儿湿疹的疗效及安全性。方法:采用临床 对照研究,将患儿分为治疗组96例,对照组96例。治疗组予以丁酸氢化可的松乳膏1次/d 外用联合透明质酸修护生物膜2次/d 外用,治疗7d 后停药;对照组予以丁酸氢化可的松乳膏1次/d 外用,治疗7d 后停药。观察治疗后第1周及第2周的湿疹变化情况,并对其进行病情评估。结果:在第1周及第2周复诊时,对照组的痊愈率及总有效率均低于治疗组(P <0.05)。结论:丁酸氢化可的松乳膏联合透明质酸修护生物膜治疗婴幼儿湿疹比单独使用丁酸氢化可的松乳膏的痊 愈率及总有效率均高。丁酸氢化可的松乳膏联合透明质酸修护生物膜在婴幼儿湿疹的治疗中可提高效果。 【关键词】丁酸氢化可的松乳膏;透明质酸修护生物膜;婴幼儿湿疹 【中图分类号】R758.23 【文献标识码】A DOI押10.11851/j.issn.1673?1557.2018.02.007优先数字出版地址:https://www.wendangku.net/doc/e213002796.html, /kcms /detail /51.1688.R.20180319.1606.054.html Hydrocortisone butyrate ointment combined with hyaluronic acid repair biomask for infantile eczema :a study on curative effect and safety LüXintong (Dermatology &STD Department,Affiliated Hospital of Chengdu University,Chengdu,Sichuan 610081,China) 【Abstract 】Objective :To evaluate the efficacy and safety of hydrocortisone butyrate ointment combined with hyaluronic acid repair biomask for infantile eczema.Methods :Using a clinical and comparative trial,infants with eczema were randomly divided into treatment group (96cases)and control group (96cases).Infants in the treatment group were treated with hydrocortisone butyrate ointment once a day and hyaluronic acid repair biomask twice a day.All of the therapies were discontinued after a week.Those in the control group were only treated with hydrocortisone butyrate ointment once a day,and the therapy was discontinued after a week.The changes of rash in the first and second weeks after treatment were observed and evaluated as well as the pathogenetic conditions.Results :The recovery rate and effective rate of the control group were all lower than those of the treatment group in the first and second weeks after treatment(P <0.05).Conclusion :The curative effect of hydrocortisone butyrate ointment combined with hyaluronic acid repair biomask for infantile eczema is superior to the single use of hydrocortisone butyrate ointment. 【Keywords 】hydrocortisone butyrate ointment;hyaluronic acid repair biomask;infantile eczema 湿疹是由于多种内外因素引起的表真皮浅层炎症,容易反复发作[1]。婴幼儿湿疹的临床表现主要包括面部红斑、丘疹、渗出、痂壳、鳞屑、皲裂等。婴幼儿 皮肤屏障功能较差,容易出现各种皮肤疾病,如湿疹、脂溢性皮炎等,故婴幼儿湿疹是皮肤性病科门诊比较常见的疾病之一。据研究,湿疹的发病以及预后与皮肤屏障功能密切相关,故在治疗湿疹的同时,应加强重建皮肤屏障功能[2]。我科于2014年3月至2016年2 月使用丁酸氢化可的松乳膏联合透明质酸修护生物膜治疗婴幼儿湿疹,其痊愈率及总有效率较高,可提高婴幼儿湿疹的治疗效果,现将结果报告如下。 1 资料与方法 1.1 入组标准 (1)临床表现符合婴幼儿湿疹[1]; (2)患儿性别不限,年龄≤2岁;(3)湿疹仅为面部红斑、丘疹、鳞屑或皲裂;(4)入组须征得患儿家属同意并签署知情同意书;(5)患儿能按要求进行治疗并按时复诊。 1.2 排除标准[3] (1)对丁酸氢化可的松过敏的患儿;(2)合并其他内科疾病或先天性、后天性免疫功能低下;(3)湿疹部位伴有渗出、痂壳、糜烂或毛细血管 扩张;(4)湿疹部位存在各种感染;(5)湿疹部位伴有新生儿痤疮;(6)本次治疗前1个月内使用过其他种类糖皮质激素乳膏、口服过糖皮质激素或各类抗组胺药物。 1.3 一般资料 共有192例患儿入选,其中:男91例,女101例;年龄1~24个月,平均13.6个月;病程 1 01
RoseHA 8.9 for Windows配合SQL Server 2008 R2配置文档
RoseHA 8.9 for Windows配合SQL Server 2008 R2配置文档 2013年7月27日
目录 一、文档说明 (3) 二、安装部署要求 (3) 1、集群环境拓扑结构 (3) 2、基础环境部署 (3) 三、安装配置SQL Server 2008 R2 (14) 1、安装SQL Server 2008 R2的先决条件 (14) 2、安装SQL Server 2008 R2 (16) 3、配置SQL Server的远程连接功能 (22) 4、安装SQL Server客户端 (25) 四、安装配置RoseHA (29) 五、测试 (39) 1、集群资源测试 (39) 2、集群切换测试 (40) 六、使用RoseHA工具 (42) 1、帮助文档 (42) 2、命令行管理工具 (42) 3、查看日志 (43)
一、文档说明 本文档主要介绍了在VMware8虚拟机环境中使用RoseHA8.9配合SQL Server 2008 R2的配置过程，对如何虚拟磁盘阵列以及两台虚拟机之间如何用RS232串口线连接和挂载虚拟存储也做了介绍。使用此文档，大家可以在自己的电脑上利用虚拟环境搭建RoseHA高可用集群测试系统。 二、安装部署要求 1、集群环境拓扑结构 2、基础环境部署 本实验集群拓扑实现目标如上图所示，以宿主机作为客户端，宿主机安装VMware8虚拟机，虚拟机中安装Windows server 2008 R2操作系统，并将系统的防火墙关闭；在虚拟机操作系统中安装SQL Server 2008 R2和RoseHA；按照RoseHA的配置规则，两台服务器之间至少有两条心跳线，可以使用两条以太网线作为心跳，如果条件允许，还可以使用RS232串行端口线作为心跳，以实现不同类型的心跳通信，加强心跳通信的可靠性。本实验采用以太网和RS232串行端口两种方式作为心跳；宿主机安装SQL Server 2008 R2客户端，使用此
发酵法生产透明质酸
发酵法生产透明质酸 透明质酸(Hyaluronic acid,HA)是一种大分子的粘多糖,是一种由-D-N -乙酰氨基葡萄糖和β-D-葡萄糖醛酸为结构单元,β-1，4-糖苷键连接成的一种链状高分子粘多糖。其分子量在几十万到几百万之间，又称糖醛酸，透明质酸具有特殊的保水作用，是目前发现的自然界中保湿性最好的物质，被称为理想的天然保湿因子，为目前所公认的最佳保湿成分，在化妆品工业、医学研究、临床治疗等领域有广泛的应用。 透明质酸的提炼的方法有三种：组织提取，微生物发酵和化学合成。组织提取法和化学合成法的成本高，产量低，受原料资源限制，不能满足市场需求。而微生物发酵法生产透明质酸具有不受原料资源限制、成本低、产量高、有较高的相对分子量、分离纯化工艺简便、易于大规模生产等特点成为透明质酸生产的发展方向，因此开发先进的微生物发酵法生产HA的技术十分必要。目前HA产业前景广阔，发酵法己成为HA生产的主流工艺，而发酵法生产HA的工艺仍需进一步完善。 微生物产HA的研究可以追溯到上个世纪30年代，1937年，Kendall发现链球菌可以产生HA，后来发现主要是一些A群和C群链球菌，它们具有合成与代谢以HA为主要成分的荚膜的能力。随后很多人进行了大量的研究。研究结果证明某些种属链球菌在一定的环境条件下，能同化吸收葡萄糖或其他碳源，以代谢物形式产生HA。随后经过不断地选育菌种和优化工艺，借助现代深层发酵技术与设备，HA的微生物发酵法被建立和应用起来。目前多选用链球菌、乳酸球菌类等（因此以下均以链球菌举例说明）。日本用发酵法生产了HA制剂．并对该产品做了大量的药效、毒理、药代动力学等非临床实验和临床实验。结果表明，发酵法生产的HA无局部及全身毒副作用、安全性高、疗效确切。 发酵法生产透明质酸主要包括两部分：发酵部分和下游提取工艺部分。发酵法生产HA的质量主要取决于菌种、培养基和分离提纯工艺的选择。 一.发酵部分： 经过阅读与分析文献，我个人将发酵部分划分为以下几个模块： 1.菌种的筛选 2.菌种的诱变 3.培养基配方的优化 4.菌株的最佳培养条件 首先以链球菌制备HA的过程为例简单介绍一下发酵法生产透明质酸的基本流程：链球菌复苏培养后，用诱变剂诱变，挑出不溶血、不含HA酶的高产率菌株。进行稳定传代后增菌培养，所得的菌种即可作为生产菌株。放入发酵培养液后，在通风搅拌的情况下发酵40小时，对粘稠的发酵醪进行提纯分离等处理后得到分子量高、粘度大的HA。
软件开发文档说明(又全又详细)
在软件行业有一句话：一个软件能否顺利的完成并且功能是否完善，重要是看这个软件有多少文档，软件开发文档是一个软件的支柱，如果你的开发文档漏洞百出，那么你所开发出来的软件也不可能会好；开发文档的好坏可以直接影响到所开发出来软件的成功与否。 一、软件开发设计文档：软件开发文档包括软件需求说明书、数据要求说有书、概要设计说明书、详细设计说明书。 1.软件需求说明书：也称为软件规格说明。该说明书对所开发软件的功能、性能、用户界面及运行环境等做出详细的说明。它是用户与开发人员双方对软件需求取得共同理解基础上达成的协议，也是实施开发工作的基础。软件需求说明书的编制目的的就是为了使用户和软件开发者双方对该软件的初始规定有一个共同的理解、并使之面成为整个开发工作的基础。 其格式要求如下： 1 引言1．1 编写目的。1． 2 背景1． 3 定义 2 任务概述2．1 目标2．2 用户的特点2． 3 假定和约束 3 需求规定3．1 对功能的规定3．2 对性能的规定3．2．1 精度3．2．2 时间特性的需求3．2．3 灵活性3．3 输入输出要求3． 4 数据管理能力要求3． 5 故障处理要求3． 6 其他专门要求 4 运行环境规定4．1 设备4．2 支持软件4．3 接口4．4 控制 2.概要设计说明书：又称系统设计说明书，这里所说的系统是指程序系统。编制的目的是说明对程序系统的设计考虑，包括程序系统的基本处理。流程、程序系统的组织结构、模块划分、功能分配、接口设计。运河行设计、数据结构设计和出错处理设计等，为程序的详细设计提供基础。 其格式要求如下： 1 引言1．1 编写目的1． 2 背景1． 3 定义1． 4 参考资料 2 总体设计2．1 需求规定2．2 运行环境2． 3 基本设计概念和处理流程2． 4 结构2． 5 功能需求与程序的关系2． 6 人工处理过程2． 7 尚未解决的问题 3 接口设计3．1 用户接口3．2 外部接口3.。3 内部接口 4 运行设计4．1 运行模块的组合4．2 运行控制4．3 运行时间 5 系统数据结构设计5．1 逻辑结构设计要点5．2 物理结构设计要求5．3 数据结构与程序的关系 6 系统出错处理设计6．1 出错信息6．2 补救措施6．3 系统维护设计。 3.详细设计文档：主要是把我们每个小模块，小功能的业务逻辑处理用文字的方式表达出来，让程序员在编码的时
Rose软件的安装指南
在对系统连续运营要求较高的系统中，我们通常有RAID、hot spare来保障存储系统以及数据的安全性，但是仅仅存储系统的安全就足够了么？为了防止服务器应用程序的意外宕机，我们通常还会通过两台服务器冗余，且互为备份共同执行同一任务的架构模式来防止服务器错误的发生。这种架构也就是我们通常所说的双机热备的架构模式。 在众多对系统可靠性要求较高的业务环境中，双机热备系统都得到了广泛的应用，并发挥着重要的作用，为企业构筑高可用性系统提供了一种较为安全且成本相对较低的后台环境构架。 双机系统的基本构成通常包括了2台互为备份的服务器，后台往往公用一台存储系统，两台互为备份的服务器之间一般有心跳线连接，用以监控另一台服务器的运行状态，同时2台服务器上还需要运行双机热备的系统软件。任何导致系统当机或服务中断的故障，都会自动触发双机热备的系统软件流程来进行错误判定、故障隔离，并通过联机恢复来继续执行中断的服务。这样，预先指定的备份服务器将首先接管被中断的服务，并继续提供原有的服务。在这个过程中，用户所感受的只是需要经受一定程度可接受的时延，而能够在最短的时间内继续访问服务。 Rose HA是目前市面上应用非常广泛的一种双机HA软件，他由美国ROSE Datasystem Inc.提供，能够和windows操作平台无缝集成，因而并被多家服务器或者存储厂商以OEM 的形式销售提供给大家，被广泛用于在X86服务器基础上构架双机热备系统，拥有较大规模的市场基础和使用人群。但是双机软件的安装是比较容易出问题的环节，下面我们将以SQL Server数据库平台为例，介绍如何在win 2000，SQL Server的环境下构筑Rose HA。 安装环境： 双机环境的基本构成包括：两台服务器（以下分别称为“服务器1”和“服务器2”），一套磁盘整列柜，我们这里以SQL Server数据库软件为例，服务器采用win 2000的操作系统，采用Rose HA软件。软硬件都准备好了以后，我们先进行双机热备环境配置的准备工作。 1. 安装win 2000
透明质酸的制备
透明质酸的生产工艺 透明质酸（HA ）的生产工艺主要分为二大类,以动物组织为原料的提取法和细菌发酵法。透明质酸在动物组织中的分布较为广泛，几乎所有 的动物组织中均含有透明质酸，只是含量 不同。已从下列组织中分离出了透明质酸：结缔组织、脐带、皮肤、人血清、鸡冠、关节滑液、脑、软骨、眼玻璃体、人尿、鸡胚、兔卵细胞、动脉和静脉等，但考虑到原料透明质酸含量的高低、数量的多少和易于取得的程度等成本因素，能够用于生产的原料主要为鸡冠、人脐带和动物眼球。细菌发酵法是利用某些种属的链球菌，在生长繁殖过程中，向胞外分泌以透明质酸为主要成分的荚膜。细菌发酵法与动物组织提法相比，具有生产规模不受动物原料限制，发酵液中透明质酸以游离状态存在,易于分离纯化，成本低，易于形成规模化工业生产，无动物来源的致病病毒污染的危险等优点。透明质酸无种属差异，不同动物组织提取的及不同菌种发酵生产的透明质酸，在化学本质和分子结构上是一致的，只是相对分子质量（Ｍr ）有差别。 一、以雄鸡冠（roostercomb）为原料的生产工艺 （一）、工艺路线： （二）、工艺流程 1．提取冻鸡冠解冻后，用绞肉机绞碎，加适量水用胶体磨磨成糊状，按每1kg 鸡冠加水8L ，加氯化钠80g，搅拌加热至90℃，保温 10min ，冷却至50℃，用1mol/L 氢氧化钠液调pH8.5~9.0, 加入适量胰酶,45~50 ℃保温酶解5~7h ，酶解过程中维持 pH8.5~9.0 。 2．过滤将酶解提取液用滤布加硅藻土加压过滤，得澄清滤液3.乙醇沉淀和粗品干燥取滤液,调pH6.0~6.5, 将滤液加到3 倍体积的95%乙醇中,反复倾倒3 次,待纤维状沉淀充分上浮后,取出沉淀,用适量乙醇脱水3~5 次,放入有五氧化二磷的真空干燥器内干燥,得透明质酸中间品。 4．氯仿处理将透明质酸中间品溶于0.1mol/L 氯化钠溶液中,溶解浓度为0.3%, 溶解过程中加少量氯仿防腐。溶解后，调pH4.5~5.0,加入等体积的氯仿搅拌处理2 次,静置分出水相。5．酶解将水相用稀氢氧化钠溶液调 pH7.5, 加入适量链霉蛋白 酶,37℃酶解24h。 6．络合沉淀酶解结束后，向酶解液中加入同体积的1%氯化十 六烷基吡啶（CPC）溶液，静置，收集HA-CPC 络合沉淀。7．解离将
OA系统功能模块说明
OA系统功能模块说明 功能模块 系统一共10个模块，包括了50多个子系统，覆盖了办公中所需的所有功能。如下表所示：
文件管理 文件管理以用于处理日常工作中的单位内外部的各种公文，利用计算机网络的高速迅捷和计算机控制的严格准确性实现公文的处理。文件管理模块相对传统公文处理而言，在很大程度上提高了公文处理效率和准确性，用户操作简便易行。 基本功能包括： ◇新建文件 ◇代办文件 ◇文件查询 ◇收文管理 ◇发文管理 ◇收文查询 ◇发文查询 ◇电子签名 工作流程 工作流程中可以进行公文的审批、意见处理、等功能。基本功能包括： ◇新建申请 ◇流程列表 个人办公 个人办公管理是办公人员处理个人事务的系统，是用户开始日常办公的工作平台。在这里，员工可以及时了解需要办理的各项事务，查看最新文件、进行自己的工作日程安排。基本功能包括： ◇文档管理 ◇个人工作计划 ◇工作日志 ◇名片夹 ◇个人参数设定 部门管理 部门管理系统是处理部门以及部门之间相关事务的一个平台，有利于部门内部计划及项目的管理，同时也有利于部门之间的交流和沟通，提高协同办公效率。
基本功能包括： ◇部门交流 ◇部门计划 ◇项目管理 ◇活动安排 信息发布平台 信息发布平台是通过计算机网络进行员工之间、部门之间进行信息交流与共享的公共平台。在这里，用户可以根据本身实际情况自行定义信息栏目名称（如新闻、公告、大事记、机关介绍、规章制度、奖惩通报等），设置各个栏目的发布管理人员、修改删除人员，并可将指定栏目设置为默认栏目，即进入信息中心后的默认显示栏目；员工可以查看组织中的最新消息，各种规章制度等等；使用BBS功能，可以随时发表相关的意见或针对某一问题进行讨论； 基本功能包括： ◇信息平台 ◇BBS ◇公告板 ◇规章制度 ◇大事记 行政事务 行政事务是日常办公中需处理的一些日常事务，其基本功能包括： ◇会议管理 ◇车辆管理 ◇考勤管理 人事管理 人事管理涉及到政府的机构设置以及各部门的人员编制情况，有利于领导了解相关人员的基本情况以及对应的职位权限。 基本功能包括： ◇机构设置 ◇人事管理
RoseHA 8.5 快速安装指南
RoseHA 8.5 快速安装指南 一第一部分RoseHA运行所需条件和环境及安装 1． RoseHA支持的系统环境（独立域，主备域，AD服务器） RoseHA支持Windows 2000 系列以及Windows 2003。RoseHA的光盘安装介质可用于Windows 2000及Windows 2003系统中HA的安装。RoseHA 支持独立域、主备域、以及Windows 2000和Windows 2003的AD服务器。两台主机的系统管理员的账号和密码必须一致。 2． RoseHA对网络配置的需求及要求 在安装RoseHA之前，系统的所有网卡应该已经全部驱动并设置了正确的IP地址等相关设置，并规划好公网和私网IP资源的分配。避免在安装了RoseHA 之后，再对系统的网络设置进行修改。 3． RoseHA心跳线需求 HA支持网卡类型和RS232类型的私网，对于配置RS232类型的心跳线，需要准备RS232串口线，配置好com口参数（通常按照系统默认值配置）。在HA中，建议配置两条以上的心跳线（Socket 类型或是RS232 类型，也可以混合使用），保证HA的正常运作。 关于RS232串口线的做法是：如果两端都是9 pin 的接头, 则pin 2 (RD), pin 3 (TD) 交叉反接, pin 5 (GND)直连, 其它pin 不连接: DB9 DB9 1 GND --------- 1 GND 2 RD --------- 3 TD 3 TD --------- 2 RD 5 GND --------- 5 GND 4． RoseHA对共享卷配置的需求及要求 共享磁盘阵列的准备，首先保证两台主机都已经正确连接并能正确访问到盘阵。其次，对于Windows 2000和Windows 2003系统，还必须确认操作系统中看到的磁盘阵列上的共享设备的类型，在磁盘管理器中将共享设备（disk）必须设置为基本卷，而不能是动态卷。两台主机系统缺省对于计划中将要使用的共享磁盘设备上的分区的设置需要保持一致。对于共享磁盘设备上各个分区的盘符的设定要保持一致性。对共享卷的文件系统推荐采用NTFS类型。另外，推荐使用有硬件锁功能的盘阵。这样确保在双机时只能有一边能访问到磁盘设备。5． RoseHA对应用程序配置的需求及要求 在安装RoseHA之前，应先安装需要由HA来监控管理的应用，并且将应用（或与应用有关）的数据创建到共享的盘阵上。然后修改需要由HA监控的服务的启动方式，在服务管理中将其改动为手动启动方式，并停止服务。
微生物发酵法生产透明质酸的研究
燕山大学 课程设计说明书微生物发酵法生产透明质酸的研究 学院（系）：环境与化学工程学院 年级专业：10生物化工 学号：100110050050 学生姓名：王伟伟 指导教师：张晓宇 教师职称：副教授
燕山大学课程设计（论文）任务书 院（系）：环境与化学工学院基层教学单位：生物工程系
燕山大学课程设计成绩评定表
2013 秋季学期 生物工程专业课程设计 结题论文 微生物发酵法生产透明质酸的研究 学院（系）：环境与化学工程 年级专业：10 生物化工 学号：100110050050 学生姓名：王伟伟 指导教师：张晓宇 教师职称：副教授
为提高微生物发酵生产透明质酸的质量，本设计选用经过突变后的高产兽疫链球菌株做为发酵用的菌种，并且在发酵前经过了严格的灭菌操作。设计内容主要分为三部分：摇瓶培养基组成对透明质酸发酵的影响；培养条件对发酵结果的影响；通过发酵过程中各种参数的变化优化发酵条件。第一部分设计拟采用正交设计法确定最合适的种子培养基；第二部分设计拟单因素分析法确定外界最适发酵条件；第三部分通过测定发酵过程的各种参数绘制参数变化曲线，为发酵条件的优化提供科学依据。通过本次设计，制定出兽疫链球菌生产透明质酸的合适工艺流程。 关键词：透明质酸；兽疫链球菌；正交设计；单因素分析
第一部分文献综述 1 透明质酸 (1) 1.1 概述 (1) 1.2 结构 (1) 1.3 HA理化性质 (2) 1.4 HA的合成和代谢 (3) 1.4.1 HA的合成 (3) 1.4.2 HA的代谢 (4) 1.5 HA的生理功能 (5) 1.5.1 构成多种基质 (5) 1.5.2 保水、润滑、渗透压调节及分子排阻效应 (6) 1.5.3 对细胞的作用 (6) 1.5.4 与蛋白质的结合及其作用 (6) 1.6 HA的应用 (7) 1.6.1 HA在化妆品领域的应用 (7) 1.6.2 HA在医学领域的应用 (8) 1.6.3 HA在食品领域的应用 (8) 2 HA的制备 (9) 2.1 从动物组织中提取 (9) 2.2 微生物发酵法 (10) 3 国内外发展概况及其市场发展前景 (11) 第二部分课程设计 1.材料 (14) 1.1 试验用的仪器 (14) 1.2 试验药品 (14) 2. 方法 (15) 2.1 细菌发酵法生产透明质酸的工艺路线 (15) 2.2 兽疫链球菌发酵生产透明质酸的工艺流程 (15) 2.2.1 摇瓶种子液的培养 (15) 2.2.2 种子罐种子液的培养 (16) 2.2.3 发酵 (16) 2.2.4 下游分离纯化 (16) 2.3 检测方法 (16) 2.3.1 HA 含量的检测方法（Bitter-Muir 咔唑法） (16) 2.3.2 还原糖的测定方法—DNS法 (17)
RoseHA6.0安装调试手册
一、安装前的准备 1、硬件环境：服务器两台(每台服务器要求两块网卡,每个服务器的两个网卡一个做心跳用，一个连接到局域网上)、磁盘阵列一台、SCSI线两条。 2、软件环境：Windows200 3、Sqlserver 2000 for Windows2003、Rose HA6.0 For Windows。 3、注意：在连接SCSI线时，必须把主机和磁盘阵列断电。连接完成后，先开启磁盘阵列，后开启主机。将两台服务器的BIOS选择中Start Option选择改为Slot 5,(Slot 5是服务器RAID卡所在的槽位) 4、两台服务器：以下分别称为“服务器1”和“服务器2”。 二、安装Rose HA的过程 (一)硬件安装 1．用Rose软件所带的RS232串口线将服务器1和服务器2的COM口连接起来。 2．用交叉双绞线（一头是568A，一头是568B）连接服务器的网卡(专门做心跳用) 3．分别通过服务器的另外一块网卡将两台服务器连接到交换机上，分配ip地址（一般是用户内网网段地址），保证相互可以ping通。 注：建议使用两根心跳线，如果要通过网卡建立第二根心跳线，可用以下方法连接： 4．将心跳线的网卡Ip设置为200.200.200.109,200.200.200.110，子网掩码255.255.255.0(不能跟局域网在同一个网段)，测试ping。 (二)安装SqlServer2000 1、关闭服务器2，在服务器1上进行安装，进入SqlServer2000安装界面 2、当选择Data路径时，程序文件存放位置可以不做修改，Data文件夹可选为 Z:\Sqlserver_data(注：Sqlserver_data是手工建在磁盘阵列上的文件夹，Z盘为磁盘阵列的逻辑盘符) 3、安装完毕后，需要打SqlServer2000 Sp3补定 4、重启服务器，在数据库管理器里将SqlServer2000的服务，改为手动；手工启动数据库， 确保工作正常。 5、在服务器1上操作：关闭SqlServer数据库，删除Z:\Sqlserver_data文件夹，关闭服 务器1 6、启动服务器2，重复上述步骤2，3，4 7、启动服务器1，关闭服务器2上的SqlServer数据库，在服务器1上启动SqlServer数 据库，要保证启动各项服务都正常 8、进行Rose HA的安装和配置。 (三)RoseHA软件安装 进入光盘上软件所在的目录，运行SETUP程序，按照默认方式安装，当出现提示输入LOCAL 和REMOTE的主机名时，将本地服务器的主机名输入LOCAL栏里，将另一台服务器的主机名输入REMOTE。 三、配置Rose HA
透明质酸的微生物发酵法生产与应用概况
龙源期刊网 https://www.wendangku.net/doc/e213002796.html, 透明质酸的微生物发酵法生产与应用概况 作者：李萌季永甜等 来源：《湖北农业科学》2013年第13期 摘要：透明质酸是由葡萄糖醛酸和N-乙酰葡萄糖胺的二糖组成的高分子黏多糖，广泛地存在于动物组织中，具有独特的生理特性，在许多领域得到广泛的应用。目前，透明质酸的生产方法主要有提取法、微生物发酵法和人工合成法。对微生物发酵法进行了概述，对透明质酸在化妆品、保健品和医学医疗领域的应用进行了简要介绍，并对透明质酸的生产和应用前景进行了展望。 关键词：透明质酸；微生物发酵法；育种 中图分类号：Q538；TQ920 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2013）13-2980-04 透明质酸（Hyaluronic acid，HA）是1934年Meyer等从牛眼玻璃体中提取分离得到的一种大分子多糖，故又名玻璃酸[1]。透明质酸是由2 000～25 000个通过β-1，3糖苷键和β-1，4糖苷键交替地结合在一起的葡萄糖醛酸和N-乙酰葡萄糖胺的二糖组成的均匀重复的线性葡糖胺聚糖[2]。 透明质酸是胞外基质（Extracellular matrix， ECM）的重要组成部分[1]。近来的研究表明，透明质酸不仅广泛存在于细胞间的胞外基质中，还存在于细胞内，主要集中分布在新生细胞的胞浆和细胞核中[2]。除了在玻璃体中外，透明质酸在关节滑液和表皮细胞间隙中的含量 也十分丰富，从数量上看，50%以上的透明质酸存在于皮肤的真皮和表皮中，约35%存在于肌肉和骨骼中。目前认为透明质酸主要是存在于软结缔组织中的惰性空间填料中，在组建蛋白多糖复合物的过程中起着重要的作用[2]。 1 透明质酸的性质 在电子显微镜下，观察到透明质酸分子呈线性单链结构，并在水溶液中扩展成随机的线圈状结构，线圈的直径约为500 nm。透明质酸分子中每一双糖单位均含有一个羧基，在生理条 件下均可解离，形成阴离子，等空间距离阴离子之间的相互排斥使其分子在水溶液中处于松散的扩展状态，占据了大量空间，故可结合多于本身1 000倍的水[3]。 根据透明质酸的来源和提取方法的不同，其相对分子质量（Mr）为8×105～5×106[4]。透明质酸的结构及生物活性具有相对分子质量依赖性，其中低相对分子质量透明质酸在低浓度时仅生成碎片状网状结构，而高相对分子质量透明质酸却能生成整体的网状结构[3]。 由于分子内存在氢键，透明质酸分子在水溶液中呈现单螺旋结构[5]。当透明质酸在溶液 中达到一定的浓度时，透明质酸分子间便会产生相互作用，从而形成双螺旋结构，浓度更高时则会形成网状结构[3]。目前公认的透明质酸结构理论是三级结构理论，即透明质酸分子中每
Roseha的安装配置
Roseha的安装配置 1．两台服务器：whjkapp和jkcti，都使用两个网卡，其中内网卡作为心跳线连接使用，外网卡用来连接交换机。首先分别在两台服务器上配置HOSTS文件，路径为：c:\windows\system32\driver\etc 配置如下： 100.100.100.10 whjkapp 100.100.100.20 jkcti 10.64.41.115 whjkapp 10.64.41.111 jkcti 10.64.41.120 roseserver 2．把两台服务器分别连接上存储，让它们可以正常访问存储上的分区。 3．先启动其中一台服务器如whjkapp，在它上面安装SQL SERVER 2005，新建个数据库，把数据库文件放在存储的分区上，测试能否正常访问。如果不能访问，查看网络、存储的配置。确定可以访问后，把数据库关闭，并在服务里把SQLSERVER的主服务停掉，启动方式改为手动，然后关闭whjkapp服务器。 启动jkcti服务器，在其上安装SQL数据库，可以附加之前的那个数据库文件，测试能否正常访问。同样把SQLSERVER主服务改为手动。 4．接下来配置ROSEHA双机软件 4.1 登陆whjkapp服务器，点击ROSEHA安装文件，开始安装。整个安装过程，很简单，一直下一步即可。有一点要注意就是：其中有一项在Local computer name中填入本地机名称：如whjkapp。Remote computer name中输入要做双机的服务器名称，如jkcti 同样进入jkcti服务器，安装ROSEHA文件。 4.2RoseHa 安装完成后，根据两台服务器的hostid 号码来申请授权文件， 添加正确的授权文件之后才能配置双机。（此授权文件都已copy至两台 服务器里） 4.3进入whjkapp服务器，打开ROSEHA软件，点击三角形开始按钮，在弹 出的Connect Cluster界面点击OK 4.4进入Tools-License Information，根据host id，输入Serial No、Data及 License，申请许可 4.5同样进入jkcti服务器，申请许可 4.6进入whjkapp服务器roseha配置界面，配置私有网络。也可以继续在jkcti 服务器上配置，目前我们是在whjkapp上配置主节点的。 点击Private Net-TCP/IP Socket，在弹出来的界面里，输入服务器相对应 的IP，如： whjkapp对应的ip是100.100.100.10 jkcti对应的ip是100.100.100.20 配置完，点击Add，添加 同样在jkcti服务器上添加私有网络 4.7 在配置Rosource资源之前，需要在两台服务器上分别点击Tools-Get NIC Information获取NIC信息，之后点击确定。 4.8 在whjkapp服务器ROSEHA配置界面下，点击resource-create-volume建
软件模块设计说明模板.doc
软件模块设计说明模板1 软件模块设计说明书－XX模块 1.1 模块概述 说明模块具有哪些基本功能、采用的设计架构以及关键技术。 详细一一列出模块对应的浦东安管项目功能指标、性能指标。 1.2 基本设计概念和处理流程 具体说明模块的主要设计思想。 以模块结构图的方式说明子模块之间的关系。 以图文的形式一一说明模块各功能点的处理流程。 1.3 模块包结构说明 说明模块涉及到哪些Java包，主要完成什么功能（具体给出每个包与1.2中的子模块的对应关系）。 1.4 模块类结构说明 以表格的形式说明所有Java类的主要功能及设计思想。 序号包名类名功能描述设计说明 1.5 模块核心数据结构说明
模块使用的核心数据结构设计说明。 1.6 模块数据存贮设计说明 模块使用的数据存贮（包括数据表、文件）设计说明，需具体到所存贮的各字段。 1.7 模块前台（用户界面）设计说明 具体说明模块前台页面（面板）的组织结构、各页面（面板）的主要功能。 1.8 模块的加载与配置说明 具体说明模块的启动加载方式、顺序等。 具体说明模块所有配置项功能、配置方法。 1.9 模块外部环境接口说明 具体说明模块与运行容器以及其它模块之间的接口。 具体说明模块与外部环境进行数据交互的方式、数据结构。 1.10 模块现存的主要问题 具体说明模块现在未解决的主要问题。 如有可能，请给出问题的基本解决思路。
软件系统项目管理及考核办法模板4 XX系统项目管理及考核办法 为了加强XX系统项目建设的管理，提高项目管理水平，确保XX系统项目建设的顺利进行，根据XX相关文件要求，结合本项目特点，特制定本管理办法。 一、项目组织管理结构 本项目在XX的统一领导下，成立项目管理组对该项目实施建设及管理。本项目总负责人：XX；项目牵头人：XX；项目组下具体分XX个系统：权限系统负责人：XX；身份认证负责人：XX；安全设备负责人：XX；网络系统负责人：XX。 二、职责划分 1.xx：总领xx项目的建设。 2xx：具体负责：协助项目负责人进行项目的组织、协调、文档、项目进度控制、项目问题解决、例会等内容。 3xx：负责内容：xx系统的调试、测试、部署、更新以及维护。 4. xx：负责内容：xx系统的调试、测试、部署、更新及维护。 5. xx：负责内容：①xx系统的调试、测试、部署、更新及维护。
RoseHA for Windows常见问题解答
RoseHA for Windows常见问题解答 （FAQ） 一、RoseHA for Windows的安装部署 1、RoseHA的私网心跳配置 答：建议至少配置两条心跳线以上，以避免私网心跳的单点故障，对于配置的心跳类型（Socket、RS232）可以自由组合。例如：如果配置两条心跳，可以都为Socket类型、也可以都为RS232类型、也可以为一个Socket和一个RS232。 2、网络IP的配置方式 答：主机的IP必须是手动指定方式配置，不支持通过DHCP方式获取的IP。 3、主机的计算机名称 答：在安装RoseHA的过程中，本地主机和远程主机的计算机名称必须与实际的计算机名称一致，不能是自定义的名称标识或主机的IP等。 4、RoseHA双机部署的步骤 答：① 分别在两台主机上部署应用，并将应用的数据存放在共享磁盘上。 ② 分别在两台主机上手动测试应用服务是否能够正常启停和应用。 ③ 安装RoseHA，创建应用服务的高可用资源，带入资源测试。 RoseHA for Windows详细的部署安装步骤，请参阅RoseHA for Windows快速安装文档。 二、RoseHA for Windows的配置 1、创建心跳时，报告License无效 答：检查已注册的License是否输入完整。 2、创建心跳完成后，心跳无法正常通信 答：① 检查两台主机上是否安装防火墙等网络安全类软件，如有，则修改网络安全的配置，允许心跳端口通信。 ② 两台主机的心跳配置是否一致；心跳UDP端口是否与其他应用端口冲突，如有端口冲突，修改心跳UDP端口的配置。 3、创建文件共享资源时，没有显示共享目录 答：先将共享磁盘中需要共享的目录配置共享之后，才能在创建文件共享的窗口中看到共享目录资源。 4、创建NT Server资源时，无法找到应用的服务 答：检查两台主机上的应用服务名称是否完全一致，以及应用服务的启动方式是否都改成手动。 5、RoseHA中提供的6种高可用资源是否都需要配置 答：不是，配置高可用资源的种类和数量是根据实际的应用环境而定的，比如：在信息应用系统中，一般不需要配置主机别名和文件共享资源。 三、RoseHA for Windows的维护 1、双机正常运行过程中，心跳通信异常中断 答：① 检查两台主机心跳的IP通信是否正常。