一氧化氮供体对成年大鼠脑缺血后海马神经元再生的影响

人试剂盒说明书人血清一氧化氮NOELISA检测试剂盒

人试剂盒说明书人血清一氧化氮NOELISA检测试剂 盒

人试剂盒说明书,人血清一氧化氮（NO）ELISA检测试剂盒樊克生物专业供应： 使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本血清 试验原理： NO试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知NO浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将NO和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中NO的浓度呈比例关系。 试剂盒内容及其配制

自备材料 1．蒸馏水。 2．加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。3．振荡器及磁力搅拌器等。 安全性 1．避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。 2．实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。 3．不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。 操作注意事项 1．试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。 2．实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。 3．不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。 4．使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。 5．使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。

6．洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。 7．底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。 8．加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。 9．按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。 样品收集、处理及保存方法 1、血清－－－－-操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原 和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。 2、血浆－－－－-EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000 ×g离心30分钟去除颗粒。 3、细胞上清液－－-1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。 4、组织匀浆－－－－-将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g 离心10分钟，取上清液 5、保存－－－－－－如果样品不立即使用，应将其分成小部分- 70 ℃保存，避免重复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂 血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃

原代海马神经元细胞培养

原代海马神经元细胞培养 溶液的配制： (1) 4%多聚甲醛溶液：4g多聚甲醛溶于100ml pH=7.4的0.01mol/l PBS中，混匀过滤， 室温保存。 (2)磷酸盐缓冲液（PBS）（0.01mol?l-1）：KH2PO4，0.1g；Na2HPO4?12H2O，1.7g；KCl， 0.1g；NaCl，4.0g，双蒸水加至500ml，pH=7.2～7.4。用0.2μm滤膜过滤，4℃保存。 (3) 1%蛋白酶的配制：用磷酸缓冲液（pH=7.2～7.4）配制成浓度为1%的胰蛋白酶母液 冻存。使用时，用解剖液稀释至0.25%。 (4) 培养皿涂被多聚赖氨酸：配制0.01%的多聚赖氨酸，分装冻存。将上述多聚赖氨酸 放入培养皿中涂两遍，自然晾干后备用。 (5) 解剖液：葡萄糖，3.0g；蔗糖，7.5g；NaCl，8.0g；KCl，0.4g；Na2HP04?7H20，0.18g； KH2PO4，0.03g；HEPES，2.14g；加双蒸水1000ml，调pH=7.0～7.4，过滤，4℃保存。 (6) 种植液：DMEM 79%，胎牛血清，10%；马血清，10%；谷氨酰胺培养液1%。 (7) 饲养液：Neurobasal培养基，97%；谷氨酰胺培养液，1%；B-27，2%。 (8) 阿糖胞苷：用双蒸水配制成浓度为l mg?ml-1的母液储存。用0.2μm滤膜过滤，-20℃ 储存。使用时，取6μl母液加入2ml培养液中，终浓度为3μg?ml-1。（根据实验情况调整浓度） 大鼠原代海马神经元细胞的培养 (1) 新生SD大鼠（＜12h），75%酒精浸泡消毒后断头，剥离出全脑并将其放入盛有解 剖液的培养皿中。 (2) 在解剖液中解剖大脑，分离出海马，移入另一盛有解剖液的培养皿中。在分离出全 部的海马后，去除血管等组织，然后用剪刀将海马分成数小块，放入盛有0.25%胰蛋白酶的培养皿中，将培养皿放入9%CO2、37℃消化20min。 (3) 将培养皿中的海马碎片移入离心管中，去除含胰蛋白酶的液体并用种植液将海马碎 片冲洗2～3遍，终止酶的消化作用。

一氧化氮吸入治疗新生儿持续肺动脉高压的护理

一氧化氮吸入治疗新生儿持续肺动脉高压的护理 目的探讨吸入一氧化氮治疗新生儿持续肺动脉高压（PPHN）的疗效和护理。方法10例PPHN患儿在机械通气下将NO气源加入呼吸机环路中，NO浓度为（15～20）×10﹣6，疗程为24h～7d.。治疗前后动态观察患儿心率血压，动态血气，氧合指数变化，重点加强一氧化氮使用过程中的观察及气道护理，密切观察不良反应。结果通过有效的护理措施，降低患儿并发症的发生，提高一氧化氮吸入治疗新生儿持续肺动脉高压的疗效。结论机械通气配合一氧化氮治疗持续肺动脉高压有显著疗效。 标签：一氧化氮；持续肺动脉高压；机械通气；新生儿 新生儿持续肺动脉高压（PPHN）可由胎粪吸入综合征，肺透明膜病，肺炎和先天性心脏病等多种疾病所致[1]，病死率高达40%，特点是持续肺高压和右向左分流。近来吸入一氧化氮（inhaled nitric oxide INO）治疗各种原因引起的新生儿持续肺动脉高压获得良好效果，使病死率大为下降。现对我科NICU 2012年1月～2013年9月起10例由各种原因引起的PPHN应用机械通气配合使用一氧化氮吸入治疗新生儿的临床资料报道如下。 1 资料与方法 1.1一般资料本组患儿10例（男7例，女3例），胎龄33～40w，出生体重2200～3700g，均为生后1d入院。原发病分别为新生儿胎粪吸入综合症5例，肺炎合并动脉导管未闭3例，新生儿肺透明膜病2例，所有患儿均有不同程度的呼吸困难和青紫，与低氧血症的程度不相平行。入院后经常规治疗，病情无好转或进行性恶化，经心脏超声检查确诊有肺动脉高压，存在动脉导管或卵园孔水平的右向左分流。 1.2方法确诊病例采用机械通气配合NO吸入通气方式为SIMV或HFO模式，PaCO2目标值为30～35cmH2O（IcmH2O=0.098KPa）。NO气源由上海诺芬生物技术有限公司（10PMa）提供。通气质量流量控制仪调节流量，加入呼吸机输出环节路内（湿化器前）并使用NO×BO×PLUS型NO和NO2监测仪（英国）监测NO和NO2浓度患儿呼出的气体经特制管道排出室外。NO的初始浓度为20×10﹣6吸入NO 30min如SPO2升高>10%，PaO2升高>9098mmHg（1.33KPa）判定为有效，否则判定为无效。无效者增加吸入NO浓度（5～10）×10﹣6，若达到40×10﹣6仍无效，则停止NO吸入，有效者可每4h降低NO浓度5×10﹣6，直至6×10﹣6，以此低浓度维持24～72h。 2 护理 2.1清理呼吸道患儿入院后首先予以彻底清理呼吸道，予经口气管插管吸出气管内污染羊水、分泌物，再通过气管插管从气管内注入37℃无菌生理盐水0.5～1ml，加压给氧30s，用吸引器吸出冲洗液，如此反复至冲洗干净。

新生鼠海马、皮层神经元原代培养

新生鼠海马、皮层神经元原代培养 实验材料 1. 实验动物 新生Wistar大鼠，当天出生（<12 h）的乳鼠，SPF级。 2. 试剂 Hibernate A Neurobasal A B27 serum-free supplements Papin （木瓜蛋白酶） DNAase I OptiPrep Density Gradient Medium Poly-L-lysine （多聚赖氨酸） L-glutamine （L-谷氨酰胺） Penicillin （青霉素） Streptomycin （链霉素） D-Hank’s solution dd H2O 3. 溶液配制 1. 多聚赖氨酸：取多聚赖氨酸25 mg，用双蒸水溶解并稀释浓度为50μg/ml，用0.2 μm的微孔滤膜过滤，4 °C保存备用。（可配成25×） 2. 解剖液：HA：含0.5mM L-谷氨酰胺的Hibernate A，0.22μm微孔滤膜过滤，4°C保存备用。 3．Papin：用HA配制含Papin 2mg/mL的消化液，37°C孵育20~30min，0.22μm 微孔滤膜过滤，冰上保存至实验。在使用前3h内配制。

4．DNAase I：取DNAase I粉末用D-Hank’s液配制成50μg/mL，0.22μm微孔滤膜过滤。可一次配好，-20°C保存，每次取用。 4．终止消化液：HABG：含2% B27的HA。现用现配，37°C保存备用。 5．Optiprep离心介质：Optiprep medium∶HABG为124∶876，每离心管1~1.5mL。 5．种植液和培养液：Neurobasal-A/B27：含2% B27，0.5mM L-谷氨酰胺的Neurobasal-A。现用现配，37°C保存备用。 4．实验方法 1. 包被培养皿 使用前2 d，在无菌条件下取6孔培养板，加多聚赖氨酸1 mL/孔，放置2 h，吸去多余多聚赖氨酸，自然干燥，灭菌水洗板2次，干燥备用。 2. 组织剥离 取出生12 h以内的Wistar大鼠，用75%乙醇擦拭全身消毒。无菌条件下断头，沿正中剪开皮肤和颅骨，向两边分开，小心取出全脑，浸于冰浴的解剖液。首先切除小脑和脑干部分，然后沿正中切为左右两半球，海马位于半球的腹内侧。分别在解剖显微镜下剥离出海马并置于冰浴的解剖液中，完整的海马（半侧）呈月牙形。用精细镊小心除去中脑、纹状体等非皮层结构，剥离出皮层。 3. 消化和分散 用精细剪将海马剪成1~2 mm3的组织块，在6 cm培养皿中用配好的木瓜蛋白酶在37 °C下消化30 min，4个半皮层或16个半海马/10mL消化液，并加入500 μL DNAase I。消化结束后小心吸去消化液，加入2~3mL HABG，200 μL DNAase I，

氟西汀对海马神经元生长的影响

氟西汀对海马神经元生长的影响 各位读友大家好，此文档由网络收集而来，欢迎您下载，谢谢 【关键词】氟西汀;细胞培养;海马神经元;大鼠 氟西汀是5-羟色胺（5-HT）再摄取抑制剂之一，是应用较广的抗抑郁药。氟西汀除有抗抑郁作用外，尚可治疗其他中枢神经系统疾病。有研究表明，氟西汀对海马的神经保护作用是其发挥抗抑郁效应的机制之一［1］。关于氟西汀对体外培养的海马神经元生长的影响未见报道，本研究初步探讨了氟西汀对原代培养的海马神经元生长的影响。 1材料与方法 新生大鼠海马神经元的分离和培养 技术方法在参考文献［2］基础上加以改进。取出生24h内的新生SD大鼠（东南大学医学院动物实验中心提供），无菌分离出双侧海马，用显微剪剪碎，

D-Hank#39;s液清洗2或3次，将剪碎的海马组织转移至离心管中，加入等量%的胰酶（美国Sigma公司），37℃消化30min，中间振摇1或2次，加入10%的DMEM/F12（美国Gibco公司）5ml，轻轻吹打15次，然后1000r·min-1离心5min，制成单细胞悬液，置于CO2培养箱（德国Heraeus公司产品）中，差速贴壁30min，去除成纤维细胞，吸取未贴壁的细胞，并用200目的不锈钢滤网过滤，收集过滤后的单细胞悬液于培养皿中，然后至离心管中，取一滴单细胞悬液进行计数，并用DMEM/F12将细胞密度调到1×106ml-1，然后接种于200μg·ml-1多聚赖氨酸（美国Sigma公司）包被的6孔培养板中，转移至培养箱内培养，4h后换为无血清培养基，即含2%B27的Neurobasl培养基（美国Gibco公司），以后每3天半量换液1次。使用培养6d的神经元进行染色鉴定。 大鼠海马神经元的鉴定 烯醇化酶（NSE）免疫细胞化学染

小鼠海马神经元细胞使用说明

小鼠海马神经元细胞 小鼠海马神经元细胞产品说明： 为使客户能尽快开展实验，派瑞金发货的原代细胞均处于对数生长期，且每次发货为汇合率达到70%的细胞，收到细胞后即可开展实验。 派瑞金提供的小鼠海马神经元细胞取自新鲜的组织，按照标准操作流程分离培养。研发的小鼠海马神经元细胞完全培养基能提供细胞最佳的生长条件，降低杂细胞污染，保证不同批次间细胞质量的稳定。 同时，派瑞金还建立了严格的细胞鉴定流程，所提供的原代细胞均需经过细胞类型特异性标记物、细胞形态学等检测，保证细胞纯度在90%以上；同时也需经过微生物检测，保证不含有HIV、HBV、HCV、支原体、真菌及其他类型的细菌。 注意事项： 1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。 2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等。 3. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。培养瓶内多余的培养基可收集备用，细胞传代时可以一定比例和客户自备的培养基混合，使细胞逐渐适应培养条件;建议使用派瑞金的完全培养基。 4. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态。 5. 该细胞只能用于科研，不得用于临床应用。 小鼠海马神经元细胞产品简介： 产品名称：小鼠海马神经元细胞(Mouse hippocampal neuron cells)组织来源：小鼠海马组织区 产品规格：5×105cells/25cm2 培养瓶 小鼠海马神经元细胞简介： 海马椎体神经元是海马区的主要成分，主要功能是参与近期记忆、情绪及内脏功能调节、是老年性痴呆、癫痫等疾病的主要病灶之一。海马神经元细胞培养是研究神经细胞生物学特性和外源干扰因素作用(细胞因子)的有效细胞模型,其在神经生物学,发育生物学体外实验研究中已被广泛应用。 本公司生产的小鼠海马神经元细胞采用胰酶消化制备而来，细胞总量约为 5×105 个/瓶，细胞纯度可达 80%以上，且不含有 HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

海马神经元细胞免疫荧光检验

海马神经元细胞免疫荧光检验 神经元鉴定： 一、烯醇化酶鉴定： 培养细胞用100%乙醇固定---10min---PBS漂洗5min×3次---3%H2O2室温孵育30min，目的用于去除内源性过氧化物酶---PBS 漂洗5min×3次---5%羊血清（0.3%TritonPBS配制），室温封闭30min 以减少排特异背景颜色------加第一抗体特异烯醇化酶（chemicon，1:1000），4℃冰箱孵育18~24小时---PBS漂洗5min×3次---加入2步法：PV9000试剂Ⅰ,37℃，30min---PBS漂洗5min×3次---PV9000试剂Ⅱ,37℃，30min---PBS漂洗5min×3次---DAB显示红棕色；70%，80%，90%，100%I，100%II 梯度酒精透水；二甲苯Ⅰ，Ⅱ透明2次，每次30min---中性树胶灯片---镜下观察。 二、β-微管蛋白Ⅲ（β-tubulinⅢ）荧光显示： 培养细胞用预冷PBS液轻柔漂洗3次，4%多聚甲醛固定，1h，4℃---吸去多余甲醛---PBS漂洗5min×3次---0.25%triton，室温，15min---3%H2O2室温孵育30min，目的用于去除内源性过氧化物酶---PBS漂洗5min×3次---5%羊血清（0.3%TritonPBS配制），室温封闭30min以减少排特异背景颜色------弃血清，加入β-tubulinⅢ抗体（1:100稀释），4℃，过夜---PBS漂洗5min×3次---滴加FITC 标记的山羊抗小鼠lgG（体积比1:200稀释），37℃，1h---DAPI复染10min---抗荧光猝灭封片液封片---荧光显微镜观察---选择10个视野，统计学处理。

一氧化氮的药用价值

一氧化氮：从普通分子到医药明星 2008-12-17 19:00:12 来源: 网易探索(广州) 网友评论 6 条点击查看 以前治疗心血管疾病的药物主要是硝酸甘油，但医学界对这药物的作用机制并不清楚，而伊格纳罗和他的同仁发现其实真正起作用的是一氧化氮。 诺贝尔在一百多年前制造安全炸药时，曾把硝酸甘油作为主要原料之一。当时他患有严重的心绞痛，医生让他服用含“硝酸甘油”的药，却遭到他的激烈反对，在弥留之际，他曾这样说：“医生给我开的药竟是硝酸甘油，这难道不是对我一生巨大的讽刺吗？” 其实这并非讽刺。科学家在后来的研究中发现：硝酸甘油能舒张血管平滑肌，从而扩张血管。他们认为，肯定有一种叫做“内皮细胞舒张因子”的东西，如果找到它，就能打开人体机理奥秘的一片新天地，从而找到更有效的方式治疗心肌梗死等病。 这个因子究竟是什么？

1986年，这一百年谜团终于被伊格纳罗博士和其他两位药理学家破译，它不是猜测已久的蛋白质类大分子，而是简简单单的一氧化氮！顿时，一氧化氮摇身变成了明星分子。伊格纳罗（LouisJ.Ignarro）博士和其他两位研究者共同发现的，他们因发现有关一氧化氮在心血管系统中具有独特信号分子作用而于1998年获得诺贝尔医学奖。 伊格纳罗出生于美国，并且他所有的研究工作也是在美国完成的。他在纽约长大并完成了学前教育，在纽约的哥伦比亚大学获得化学和药物学专业的学位，然后在明尼苏达大学医学专业深造。获得了药理学博士学位，随后又考取了心血管病方面的专业资格。 虽然具有医学方面的教育背景，但是伊格纳罗并没有成为一名医生。尽管许多在学校学医的人立志要成为一名医生，治病救人，伊格纳罗却与众不同，选择了做研究工作。这一决定最终使他取得了巨大的事业成就。伊格纳罗的专业是新血管领域，因此他经常在课堂上谈到治疗心血管病的药物。要对学生讲解硝酸甘油，扩张血管、促进血液流动的药物。他说，当病人出现胸痛、心绞痛的时候，就意味着心脏的供氧不足。病人舌下含服硝酸甘油片不超过五分钟，疼痛便会消失。由于这种立竿见影的功效，一个多世纪以来，硝酸甘油被普遍用于治疗胸痛。 “硝酸甘油是一种药，但是它同时也是一种烈性的爆炸物，用于制造炸药。因此在我讲课的时候，也很想在自己的脑海里弄清楚，硝酸甘油这样的爆炸品怎么就能够用来治疗心绞痛的。我去了图书馆，想查看它到底是什么样的作用机理，但是我发现根本就没有人了解。”这位科学家回忆道。 伊格纳罗决定在实验室对硝酸甘油进行研究。经过三年的研究，他发现硝酸甘油本身并不是一种药物，可是当人体摄入之后，它就转变、代谢为一氧化氮。发现这一点之后，伊格纳罗开始研究一氧化氮的其他效用。他发现一氧化氮具有的健康益处远远超出他最初的猜想：它能降低血压，预防中风和心脏病。 然而令人吃惊的是，当时人们并不知道，人体本身居然可以产生一氧化氮，伊格纳罗介绍说，一氧化氮是一种随处可见的化合物，就是在空气中也存在。 在人体中，一氧化氮是一种非常小的分子，类似于氧气，出现在动脉内膜中。换而言之，是动脉内膜的细胞在制造一氧化氮。 “一氧化氮一旦生成之后，就与动脉中的肌肉细胞接触并使之放松，它扩张了动脉。这样就使得血压降低，从而改善血流”。 更重要的是，他接着说，这种化学品还能预防血液在一些危险的部位发生凝结。如果血液在心脏或脑部发生凝结，则病人就会罹患心脏病或中风。只要人体产生足够数量的一氧化氮，那么前面谈到的问题发生的几率就会大大降低。 伊格纳罗的发现还打破了人们认为一氧化氮是有毒物品这种错误观念。

一氧化氮供体对肿瘤的作用

一氧化氮供体对肺癌的作用 一、立题依据与研究意义 一氧化氮（nitricoxide,NO）是由一氧化氮合酶（nitricoxide synthase, NOS）催化L-精氨酸脱胍基而生成，是近年来才发现的生物活性物质，参与机体的许多重要生理过程，且NO与消化系统的疾病（如肿瘤）日益受到关注。已知，活化的巨噬细胞有杀伤肿瘤细胞的作用越来越多的证据表明，NO是活化的巨噬细胞杀伤肿瘤细胞时产生的毒性效应因子之一。Hibbs首先发现，活化巨噬细胞产生的NO具有抑制生长和细胞毒性作用，能抑制与巨噬细胞共同培养的肿瘤细胞的许多代谢活动，如线粒体呼吸、DNA 复制等，导致瘤细胞内铁元素大量丧失，细胞死亡。 本实验的研究可有效控制肺癌的生长和转移。 二、实验方案 （一）实验设计的目标：专家已证明一氧化氮对癌细胞有抑制作用，通过本实验可以进一步验证这一现象，并扩大了肺癌的治疗途径。 （二）实验设计： 实验对象：小鼠 实验原理：硝酸酯类，此类药称为NO供体。该机制产生的NO称外源性NO， 常用药物有硝酸甘油、硝酸异山犁酯，此类药物需经细胞代谢才能生成NO， 连续使用数小时，或数天可出现耐受现象。活化巨噬细胞产生的NO具有抑制 生长和细胞毒性作用，能抑制与巨噬细胞共同培养的肿瘤细胞的许多代谢活动， 如线粒体呼吸、DNA复制等，导致瘤细胞内铁元素大量丧失，细胞死亡。 实验步骤：1、挑选四只体型相似、健康状态良好的雄鼠标号ABCD。2、并分 别在他们皮下接种Lewis肺癌细胞，使他们患上肺癌。3、A鼠用生理盐水(对 照组)灌胃、BCD鼠分别用硝酸甘油处理高浓度组、硝酸甘油处理中浓度组、 硝酸甘油处理低浓度组，处理组以不同浓度硝酸甘油溶液(1．6，0．5，016g ／L)灌胃0.4mL／(只·d)。4、连续10d，于21d处死，对血中硝酸盐含量和生 化指标以及各主要脏器重量进行测定，并观察原位瘤质量和肺转移情况结果。 三、可行性分析 1、小白鼠容易得到。 2、实验过程中所需药品如硝酸甘油价格便宜，易得。 3、Lewis 肺癌细胞可由中大医院提供。4、操作方法简单易行 四、创新性分析 以往的实验只研究一氧化氮大对癌细胞杀伤效果，本实验通过对硝酸甘油浓度的控制来研究其对癌细胞迁移的影响，故有一定的创新性。 五、预期进展 硝酸甘油作为一氧化氮供体胃肠道给药在一定剂量可以抑制肿瘤转移，同时对动物生理机能无明显影响，即一定含量的一氢化氧能够抑制肿瘤转移。 六、完成实验的条件 仪器设备：注射器、导管、量筒、滴管等。 实验动物：4只健康雄鼠 药品：Lewis肺癌细胞、硝酸甘油

小鼠海马神经元的培养

小鼠海马神经元的培养 一、实验材料： 1、所有用于细胞培养的器械、器皿剂溶液必须灭菌消毒。 2、多聚赖氨酸铺板以磷酸盐缓冲液(PBS)或蒸馏水溶解多聚赖氨酸（分子量为30-70KD）至1mg/ml。分装储存。临用前稀释至终浓度为20-60mg/ml过滤备用。在培养板或皿中加少量多聚赖氨酸溶液，以覆盖底部为宜，在37℃、CO2孵箱中过夜。次日，用移液管吸取多聚赖氨酸，并用水洗2-3遍，晾干备用，如果培养目的适用于电生理的单细胞记录或者免疫组化和荧光染色，则在培养皿的底部加上盖玻片，多聚赖氨酸铺于盖玻片上，则更易得到强烈的荧光信号。 3解剖液（HEPES平衡盐溶液）取100ml10x平衡盐溶液（Hank’s balance salt solution,HBSS） HEPES 3.9g, NaHCO30.84g， 青霉素104U, 链霉素100mg， H2O800ml。 以1mol/LHCl调节PH至7.2，再加H2O之后总体积为1L，以0.2μm 直径的滤菌器过滤，4℃保存。 4、DMEM培养基（Dulbecco’s modified Eagle’s medium）DMEM培

养基500ml，加小牛血清和或马血清各10%（血清需经56℃，30min灭活）1%的青/链霉素. 5、无血清培养基最常用的一种无血清培养基为，Neurobasal+2% 的b27+1%抗生素 6、2.5%胰蛋白酶（typsin）溶液临用前以解剖液稀释至终浓度0.125%。 7、台盼蓝(typan blue)溶液终浓度为0.2%-0.4%。 8、阿糖胞苷终浓度为8-10μmol/L。 9、动物妊娠天数的选择通常选择出生24h之内的乳鼠。 二、实验步骤： 1、脱臼处死乳鼠，75%的酒精浸泡3-5min，将清洗完的乳鼠放入含预冷解剖液的培养皿中。 2、用两把尖镊逐个去除鼠的头部皮肤和颅骨，取出全脑，置于另一含预冷解剖液的（PBS）培养皿中，小心剥离并去除脑膜及脉络丛。 3、在中线处用尖镊分离大脑半球，在解剖显微镜下小心去除嗅球、中隔、丘脑及下丘脑，剥离脑膜及脉络丛，在大脑皮层下方小心取出海马，置于含冰冷解剖液的6cm培养皿中。 4、用弯头尖镊把海马剪成小碎片，收集全部海马碎片，置于一含有0.25%胰蛋白酶溶液的培养皿中（该溶液必须在37℃孵箱中预暖）,在孵箱中消化5-7min。 5、收集全部海马碎片，置于10ml预暖的DMEM培养基的试管中（培养基中含有10%的胎牛血清和或马血清各，1%抗生素，以及谷氨酰胺）。

一氧化氮神奇生物化学作用正在揭示doc

一氧化氮神奇生物化学作用正在揭示中 吴国庆 北京师范大学化学系 ９５年夏天在北京举行的第２７届国际化学奥林匹克有一道以ＮＯ的生物化学功能为主题的竞赛试题、反映了试题编制者们力求的先进性、趣味性和新颖性，受到广泛欢迎。下面是有关这个曾被美国某杂志选为明星分子的小小无机分子神奇功能的一些新近报道的综述，读者通过阅读本文也许还可以感受到，化学对生命的研究已经进步到什么地步。本文主要是根据Ｃ ＥＮ，ＭＡＹ６、１９９６：３８～４２上一长篇报道改写的。 你也许知道有一种叫做硝酸甘油酯的药物，已经用了１００多年了，它可以用来治疗突发的心绞痛。其实，这是利用了这种药物在生理条件下释放出的一氧化氮，它或许是一氧化氮作为药物的最老应用，尽管是不自觉的，只是到了近年，人们才认识到一氧化氮对动物有着多种重要作用。例如，已经知道，它是神经脉冲的传递介质，有调节血压的作用，能引发免癌功能等；如果人体不能及时制造出足够的一氧化氮，会导致一系列严重的疾病：高血压、血凝失常、免疫功能损伤、神经化学失衡、性功能障碍以及精神痛苦等等；使用释放ＮＯ的新药甚至可能对抑制癌症有重要作用。 对一氧化氮的认识首先要归功于微量分析技术的发展，因为一氧化氮在生命体内的浓度是极低的，仅达微摩尔级甚至更低。而且、一氧化氮在细胞间存留的寿命也很短，因为ＮＯ是单电子分子，很活泼，一旦生成,很快被反应掉。因此，测试太难，这就不难理解，这样简单的分子为什么这样晚才被人有所认识。 ＮＯ的生成一氧化氮分子在生命体中是在一氮化氮合成酶（下文用缩写ＮＯＳ）的催化作用下生成的。这种酶有多种存在形式，但其功能都是氧化精氨酸的两个胍基氮之一生成瓜氨酸和一氧化氮。反应所需的电子来自辅酶II[即烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（ＮＡＤＰＨ）］, 后者同时被氧化。分子态氧是一氧化氮的氧源。 ＮＯ在生物体里的主要反应在生物体内ＮＯ的攻击目标首先是蛋白质辅基里的金属离子，特别是血红蛋白里的铁，它与金属原子形成亚硝酰加合物。第二个去处是ＮＯ能与超氧离子（Ｏ２－）反应生成过氧亚硝酸根（ＯＮＯＯ－），第三个去处是，跟蛋白质或肽里的硫醇基反应生成Ｓ－亚硝酰加合物。 ＮＯ对ＮＯＳ的自抑制作用９６年３月在美国的一次全国会议上，有人描述了通过神经原的ＮＯＳ的作用产生的一氧化氮如何快速地与酶本身的血红素中心的亚铁离子生成络合吻的过程。该络合物生成的速度极快，在酶合成第３个一氧化氮分子之前就使反应达到平衡。据报道，与ＮＯ分子快速反应的其他生物分子对该络合反应的速率没有影响，这证明，ＮＯ脱离酶的活性中心与其他分子反应前一直是键合着的。一旦生成亚铁－亚硝酰络合物，酶便不再具有活性。研究者使用可见光谱和拉曼光谱证实。甚至ＮＯ正在继续合成时，７０～９０％的酶已经失去活性成为自抑态。研究者很惊奇：为什么酶会如此快地因自己的产

【CN109806403A】一种含一氧化氮供体的纳米片及其制备方法与应用【专利】

(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910126863.6 (22)申请日 2019.02.20 (71)申请人 苏州大学 地址 215104 江苏省苏州市相城区济学路8 号 (72)发明人 刘庄　田龙龙　 (74)专利代理机构 北京集佳知识产权代理有限 公司 11227 代理人 常亮 (51)Int.Cl. A61K 51/02(2006.01) A61P 35/00(2006.01) A61K 101/00(2006.01) (54)发明名称 一种含一氧化氮供体的纳米片及其制备方 法与应用 (57)摘要 本发明属于医药领域，公开了一种含一氧化 氮供体的纳米片及其制备方法与应用。本发明所 述纳米片由一氧化氮供体药物和金属离子组成。 本发明合成纳米片的方法简单，可大量制备纳米 片。本发明所合成的纳米片可以直接标记核素， 而不需要螯合剂。本发明所合成的纳米片可利用 核素的切连科夫荧光释放一氧化氮，不需要外界 刺激。本发明所述的纳米片标记放射性核素后可 以利用核素诱导的切连科夫荧光释放一氧化氮， 调节肿瘤微环境，增强肿瘤放疗、免疫治疗效果 可用于制备治疗癌症的治疗剂。权利要求书1页 说明书6页 附图14页CN 109806403 A 2019.05.28 C N 109806403 A

权　利　要　求　书1/1页CN 109806403 A 1.一种纳米片由一氧化氮供体阴离子和金属阳离子构成。 2.根据权利要求1所述的纳米片，所述一氧化氮供体为硝普钠或亚硝基铁络合物；所述金属离子为锌离子、铁离子、铜离子、锰离子、钴离子或镉离子中的一种或几种。 3.根据权利要求1所述的纳米片，其结构为Zn[Fe(CN)5NO]。 4.根据权利要求1-3任意一项所述的纳米片，其为二维纳米片结构，厚度为0.7-10纳米。 5.权利要求1所述纳米片的制备方法，由金属离子和一氧化氮供体药物通过反相微乳法合成。 6.根据权利要求5所述的制备方法，利用反相微乳法将锌离子和硝普钠混合，乙醇沉淀得到纳米片ZnNO。 7.一种标记核素的纳米片，权利要求1-4任意一项所述的纳米片上标记有医用发射高能α和β射线的放射性核素。 8.根据权利要求7所述的纳米片，所述核素为32P、90Y、177Lu、188Re、186Re或64Cu。 9.权利要求7或8所述标记核素的纳米片的制备方法，将权利要求1-3任意一项所述的纳米片分散在水溶液中，加入放射性核素充分混匀。 10.权利要求1-4任意一项所述纳米片、权利要求7或8所述标记核素的纳米片在制备用于治疗癌症的治疗剂中的应用。 2

基于海马神经元细胞研究宁神灵抗抑郁作用机制

基于海马神经元细胞研究宁神灵抗抑郁作用机制 发表时间：2019-03-07T16:26:29.280Z 来源：《心理医生》2019年第4期作者：王赫霆 [导读] 研究宁神灵对抑郁症大鼠行为学及海马神经元细胞的影响 （哈尔滨市第十一中学黑龙江哈尔滨 150000） 【摘要】目的：研究宁神灵对抑郁症大鼠行为学及海马神经元细胞的影响。方法：正常大鼠随机分为空白组、模型组。采用慢性、不可预知性温和刺激（CUMS）结合孤养模型制作抑郁症大鼠模型，分中药治疗组（高、中、低剂量），对照组，各组15只，于第0、7、14、21、28天观察行为学指标（体重、糖水消耗实验、敞箱得分、大鼠活动延迟时间）。28天取大鼠海马组织，观察CA1、CA2、CA3、CA4区形态学变化及HE染色后脑组织的病理改变(Figure)。结果：相同时间点组间比较第7、14、21、28天行为学指标空白组＞中药高剂量组＞中药中剂量组＞中药低剂量组＞对照组。组内比较行为学指标高、中、低剂量组与时间呈正相关，空白组与对照组与治疗时间无差异。抑郁大鼠海马CA1区锥体细胞偶见散在的胞体固缩,深染或胞质溶解、空泡变性。CA4区可见少量锥体细胞胞体固缩,深染。治疗组大鼠 海马区神经元排列整齐，细胞体呈椎体形，较大，核大而圆，且与中药剂量呈正相关。结论：宁神灵可能通过作用于大鼠海马神经元细胞，引起相关蛋白及递质的改变，具有抗抑郁作用。 【关键词】宁神灵；抑郁症；慢性不可预知刺激；行为学；海马神经元 【中图分类号】R749.05 【文献标识码】A 【文章编号】1007-8231（2019）04-0045-02 抑郁症是一种以显著而持久的情绪失常为特征的综合征，该病具有高患病率、高致残率、高自杀率的特点。据世界卫生组织进行的全球疾病负担调查估计，到2020年由抑郁症造成功能残疾的人数将仅次于心血管疾病，上升至所有病种的第2位，并将占到全球因精神因素致残患者的1/3，因此，抑郁症已成为亟待解决的最重要的精神障碍[1]。近年来，关于抑郁症发病机制的研究很多，大多集中在神经递质、基因和社会因素等方面，但对于抑郁症发生和发展的分子生物学机制仍尚不明确[2]。 1.材料与方法 1.1 实验材料 健康雄性大鼠75只，正常大鼠随机分为空白组、模型组，采用慢性、不可预知性温和刺激（CUMS）结合孤养模型制作抑郁症大鼠模型，模型组分中药高（宁神灵5.04g/kg）、中（宁神灵2.52g/kg）、低剂量组（宁神灵1.26g/kg）、对照组。 1.2 研究方法 1.2.1行为学指标观察 （1）体重测定 实验过程中每周称量一次体重观察各组大鼠体重变化及增长情况以判断抑郁状态与体重变化的关系。 （2）糖水消耗实验 根据文献所有大鼠首先受训饮用1%的蔗糖水在开始的48小时内将蔗糖水放入笼中以代替自来水接着禁食禁水24小时通过称饮水瓶重量测量大鼠在1小时内蔗糖水的饮用量此后每间隔一周均进行禁水禁食及1小时蔗糖水测试，此过程贯穿于整个实验。 （3）敞箱得分实验 将大鼠置于高40cm，直径80cm周壁为黑色底面被分成面积相等的25块方格组成的旷场里，60W灯泡照明观测每只大鼠3min内水平活动和垂直活动得分。7:30～12:00之间在安静的房间内进行此项试验观察将大鼠置于敞箱中间观察大鼠穿越方格数（四爪均进入的方格可记数，为水平活动得分）、后肢直立次数（两前爪腾空或攀附墙壁，为垂直运动得分）、清洁运动次数（理毛次数）、粪便次数。彻底清洁敞箱后再进行下一只大鼠的观察。每只大鼠测试3分钟。分别在造模前、给药前及给药后进行敞箱实验。 1.2.2标本采集 （1）HE染色 取大鼠脑组织，在4%甲醛溶液中固定24-48小时，用模具测量并用刀片切取海马区，石蜡包埋，进行切片和HE染色。使用光学显微镜对大鼠海马组织切片拍照，供分析使用。 （2）电镜显微结构观察 解剖获取大鼠脑组织，将脑组织迅速放入3%戊二醛固定液在4℃条件下固定过夜。用模具测量并用刀片切取海马区作为标本进行俄酸包埋，使用电子显微镜对大鼠海马组织切片拍照，供分析使用。 2.结果 本实验表明相同时间点组间比较第7、14、21、28天大鼠体重指数：空白组＞中药高剂量组＞中药中剂量组＞中药低剂量组＞对照组；糖水消耗实验：空白组＞中药高剂量组＞中药中剂量组＞中药低剂量组＞对照组；敞箱得分：空白组＞中药高剂量组＞中药中剂量组＞中药低剂量组＞对照组；大鼠活动延长时间：空白组＞中药高剂量组＞中药中剂量组＞中药低剂量组＞对照组。组内比较行为学指标、高、中、低剂量组与时间呈正相关，空白组与对照组与治疗时间无差异。脑组织HE染色后，显微镜拍照观察脑组织的病理改变（Figure）。结果显示，模型组大鼠海马CA1区锥体细胞偶见散在的胞体固缩，深染或胞质溶解、空泡变性。CA4区可见少量锥体细胞胞体固缩，深染。治疗组大鼠海马区神经元排列整齐，细胞体呈椎体形，较大，核大而圆，且与中药剂量呈正相关。 3.讨论 抑郁症患者常伴有一些生物性节律改变，如睡眠障碍、食欲不振、便秘、身体乏力、精力减退、性功能障碍等，这些生理症状应用西药抗抑郁药很难解决，甚至一些西药还会加重上述障碍，在上市销售明确用于抑郁症治疗的天然药物及中药复方制剂中，不是治疗单一，就是疗效不显著，而且用药一段时间极易出现病情反复的现象，同时症状更加严重。传统中药在复杂的抗抑郁治疗方面具有明显的优势，很多研究都表明祖国传统的经方名方对于抑郁症的治疗能够达到很好的疗效[3]。研究发现，柴胡加龙骨牡蛎汤复方具有较强的抗焦虑、抗抑郁作用，其作用机制可能与增加了脑内单胺类神经递质的含量密切相关[4]。宁神灵冲剂由二组药组成，一组舒肝郁、平肝火、清痰热，另一组扶心阳固心气。收敛神气之浮越，合之调节心、肝二脏之功能，使之趋于平衡，神志之病，脏腑辨证在于此二脏，二脏平和，消除各种精神神经症状。与西药作用迥然不同，它针对神经抑制和兴奋过程失调而组方，通过双向调节大脑皮层兴奋和抑制神经的过程，消除

一氧化氮说明

一氧化氮产品说明 一氧化氮性质 化学品中文名称：一氧化氮 化学品英文名称：nitrogen monoxide 中文名称2：氧化氮 英文名称2：nitric oxide 纯度：99.9% 规格：40L CAS No.：10102-43-9 EINECS号：233-271-0 分子式：NO 分子量：30.01 分子键长：115.08pm 键解离能：941.69kJ/mol 磁性：顺磁性 一氧化氮用途 一、化学工业 一氧化氮也可用于硝化生产工艺，它可与烯烃加成，生成二亚硝基化合物，后者可 被氧化为硝基化合物。 聚氯乙烯行业的聚合反应中止剂。 二、电子工业 一氧化氮主要用于电子工业中的硅氧化膜形成、氧化、化学气相沉积。 三、航天工业 一氧化氮可用于航天火箭和卫星的推进剂。 四、计量标准气、校正气 标准气、校正气、大气检测混合气。 环保检测。 五、生命科学和医疗 一氧化氮在疾病治疗中的应用包括两个方面： 一是直接输入气体一氧化氮（如吸入一氧化氮缓解肺动脉高压与呼吸窘迫），或利 用一氧化氮供体产生一氧化氮作用于靶器官或组织（如冠心病、心肌缺血、内毒素 性休克、肺动脉高压及阳痿等），从而起到缓解或治疗作用。 二是加入相关药物调节机体一氧化氮的生成速度，如L-精氨是合成一氧化氮的前体，对许多疾病（心血管疾病如高血压、高胆固醇血症、充血性心力衰竭等，肾脏疾病如急性肾衰、阻塞性肾病、慢性肾病及胃黏膜溃疡等）具有有益的治疗作用。 一氧化氮使用注意事项

操作注意事项：严加密闭，提供充分的局部排风和全面通风。操作人员必须经过专门培训，严格遵守操作规程。建议操作人员佩戴自吸过滤式防毒面具（半面罩），戴化学安全防护眼镜，穿透气型防毒服，戴防化学品手套。远离火种、热源，工作场所严禁吸烟。远离易燃、可燃物。防止气体泄漏到工作场所空气中。避免与卤素接触。搬运时轻装轻卸，防止钢瓶及附件破损。配备相应品种和数量的消防器材及泄漏应急处理设备。 储存注意事项：储存于阴凉、通风的库房。远离火种、热源。库温不宜超过30℃。应与易（可）燃物、卤素、食用化学品分开存放，切忌混储。储区应备有泄漏应急处理设备。 以上资料由谱源气体收集整理，欢迎广大客户学习借鉴

一氧化氮供体化合物的合成方法研究进展

Chinese Journal of Organic Chemistry REVIEW * E-mail: xiaojing6@https://www.wendangku.net/doc/e714688429.html, ; 635775299@https://www.wendangku.net/doc/e714688429.html, Received October 21, 2016; revised December 29, 2016; published online January 20, 2017. . Chin. J. Org. Chem. 2017, 37, xxxx ～xxxx ? 2017 Chinese Chemical Society & SIOC, CAS https://www.wendangku.net/doc/e714688429.html,/ 1 一氧化氮供体化合物的合成方法研究进展 王兵a,b,c,d 李娜a,b,c,d 刘腾a,b,c,d 王英爱a,b,c,d 王晓静*,a,b,c,d 孙捷 *a,b,c,d (a 济南大学山东省医学科学院医学与生命科学学院 山东济南 250200) (b 山东省医学科学院药物研究所 山东济南 250062) (c 国家卫生部生物技术药物重点实验室 山东济南 250062) (d 山东省罕少见病重点实验室 山东济南 250062) 摘要 一氧化氮(NO)作为生物信使或效应分子在体内发挥重要的生理作用，因其具有多种多样的生物活性在临 床应用方面得到广泛关注。体内NO 生成不足常与多种疾病的形成密切相关，NO 供体化合物可以通过在体内释放NO 治疗和预防多种疾病。随着NO 供体化合物的广泛应用，其合成方法引起了国内外研究人员的高度重视。本文结合国内外学者对这方面的研究，对近十年NO 供体化合物的合成方法研究进展进行综述。 关键词 一氧化氮供体；合成方法；药理活性 Research Progress on Synthesis of Nitric Oxide Donor Compounds Wang,Bing a,b,c,d Li,Na a,b,c,d Liu,Teng a,b,c,d Wang,Yingai a,b,c,d Wang,Xiaojing *,a ,b,c,d Sun,Jie *,a,b,c,d (a School of Medicine and Life Sciences University of Jinan-Shandong Academy of Medical Sciences Jinan 250062) (b Institute of Materia Medica Shandong Academy of Medical Sciences Jinan 250062) (c Key Laboratory for Biotech-Drugs Ministry of Health Jinan 250062) (d Key Lab. of Rare and Uncommon Diseases of Shandong Province, Jinan 250062) Abstract Nitric oxide as a biological messenger or effector molecule plays an important physiological role in the body. Owing to its various biological activities, it has received wide attention in clinical practice. Insuffi-cient NO production in vivo is closely related with a variety of diseases. NO donor compounds can release NO in vivo to treat and prevent many diseases. With its wide application in medicine, the methods for the synthesis of NO donor compounds have attracted much attention of researchers. In this paper, the recent advances in the past 10 years in synthetic methods for NO donor compounds were reviewed. Keywords nitric oxide donor ; synthetic methods; pharmacological activity 近几十年，NO 常被人们用以阐明许多过去未能解释的生理现象，成为近年来研究的热点。NO 是一种寿命较短的自由基,半衰期仅数秒钟,由于其分子小且具有亲脂性所以很容易透过细胞膜[1]。在体内由L-精氨酸和氧分子在一氧化氮合酶(NOS)催化下生成[2]。NO 在哺乳动物生理和病理生理中发挥着非常重要的作用[3]，如参与维持微血管和大血管的动态平衡[4]、神经信号传导[5]、免疫炎症的调节[6]、肿瘤发生与转移[7]等多种生理病理过程。体内NO 生成不足常与多种疾病的形成密切相关[8-11]，因此外源性NO 对于这些疾病的预防和治疗有着重要意义[12]。所以，NO 供体药物成为了热门的新型药物研究对象。NO 供体是指一类在体内经简单酶解或非酶作用后释放出NO 的化合物，是NO 的储运形式，可以克服NO 本身难携带，难定量，半衰期短[13]等缺点。NO 供体药物主要是指NO 供体与已知功效的药物通过某些基团链接起来形成的具有协同生物活性的新化合物 [14,15]。目前的研究趋势是利用前药原理，将已知药物或已知活性化合物的结构与各类NO 供体通过各种链接基